EA008703B1 - Фармацевтическая композиция, обладающая повышенной иммуностимулирующей активностью, способ ее получения и использования - Google Patents
Фармацевтическая композиция, обладающая повышенной иммуностимулирующей активностью, способ ее получения и использования Download PDFInfo
- Publication number
- EA008703B1 EA008703B1 EA200400592A EA200400592A EA008703B1 EA 008703 B1 EA008703 B1 EA 008703B1 EA 200400592 A EA200400592 A EA 200400592A EA 200400592 A EA200400592 A EA 200400592A EA 008703 B1 EA008703 B1 EA 008703B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- peptide
- molecular weight
- polyethylene glycol
- conjugated
- days
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Zoology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Описанные в данном патенте изобретения относятся к фармацевтической композиции, включающей физиологически активный конъюгат пептида тимозина (α(TA1), с полиэтиленгликолем, который увеличивает период полураспада пептида ТА1 в сыворотке пациента при введении упомянутого конъюгата пациенту, и к способу получения такой композиции. Композиция в соответствии с изобретением обладает иммуностимулирующим действием и ее в иммуностимулирующем эффективном количестве вводят пациенту, нуждающемуся в стимуляции иммунитета.
Description
Настоящее изобретение фармацевтической композиции, содержащей конъюгат пептида тимозина αι (ТА1) с полиэтиленгликолем.
Описание предпосылок создания изобретения
Тимозин α1 представляет собой состоящий из 28 аминокислот пептид тимуса с иммуномодулирующими свойствами, гомологичный природному продукту, исходно выделенному из тимозиновой фракции 5 вилочковой железы теленка. Его биологические эффекты включают увеличение функций Тлимфоцитов и включают модуляцию интерлейкина-2 (1Ь-2), стимуляцию продукции γ-интерферона, индукцию Т-лимфоцитов, активность природных киллеров (ΝΚ-клеток) и стимуляцию тимопоэза. Показано также, что тимозин α1 регулирует экспрессию главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса I.
Остается необходимость в данной области техники в усовершенствовании композиций, содержащих ТА1 и родственные пептиды.
Краткое содержание изобретения
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением включает физиологически активный конъюгат, содержащий пептид тимозин α1 (ТА1), конъюгированный с веществом, которое увеличивает период полусуществования пептида ТА1 в сыворотке пациента, когда упомянутый конъюгат вводят пациенту. Вещество может быть по сути неантигенным полимером. Согласно способу по изобретению по сути неантигенный полимер конъюгируют с пептидом ТА1. Иммуностимулирующее эффективное количество композиции по настоящему изобретению вводят пациентам, нуждающимся в стимуляции иммунитета.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение применимо к пептидам ТА1, включая существующий в природе ТА1, а также синтетический ТА1 и рекомбинантный ТА1, имеющий аминокислотную последовательность природного ТА1, аминокислотную последовательность, в значительной степени подобную ему, или сокращенную форму его последовательности, и их биологически активные аналоги, содержащие замещенную, удаленную, удлиненную, замененную или иным образом модифицированную последовательности, которые обладают биологической активностью, в значительной степени подобной активности ТА1, например, пептид ТА1, имеющий достаточную аминокислотную гомологию с ТА1, так что он функционирует в основном таким же способом и в значительной степени с такой же активностью, как ТА1.
Фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением включает физиологически активный конъюгат, содержащий пептид ТА1, конъюгированный с веществом, которое увеличивает период полураспада пептида ТА1 в сыворотке пациента, когда упомянутый конъюгат вводят пациенту. Вещество может быть по сути неантигенным полимером. Соответствующие полимеры будут иметь молекулярную массу в диапазоне примерно 200-300000, предпочтительно в диапазоне примерно 1000100000, более предпочтительно в диапазоне примерно 5000-35000 и наиболее предпочтительно в диапазоне примерно 10000-30000, полимеры с молекулярной массой 20000 являются особенно предпочтительными.
Включаемые полимерные вещества являются предпочтительно также водорастворимыми при комнатной температуре. Не ограничивающий изобретение перечень таких полимеров включает гомополимеры полиалкиленоксида, такие, как полиэтиленгликоль (РЕО) или полипропиленгликоли, полиоксиэтиленированные полиолы, их сополимеры и их блочные сополимеры, при условии что растворимость в воде блочных сополимеров поддерживается. Среди по сути неантигенных полимеров рассматриваются моноактивированные полиалкиленоксиды с концевым алкилом (РАОк), такие, как полиэтиленгликоли с концевым монометилом (тРЕОк). Кроме шРЕО, могут быть также полезными полимеры с концевым (С1-С4) алкилом.
В качестве альтернативы основанным на РАО полимерам могут быть использованы эффективно неантигенные вещества, такие, как декстран, поливинилпирролидоны, полиакриламиды, поливиниловые спирты, основанные на углеводах полимеры и тому подобное. Специалисты в данной области поймут, что приведенный выше перечень является всего лишь иллюстративным и что рассматриваются все полимерные вещества, обладающие свойствами, описанными в контексте. Для целей по настоящему изобретению термин «эффективно неантигенный» означает все вещества, понимаемые в данной области как нетоксичные и не проявляющие заметного иммуногенного ответа у млекопитающих.
Полимер может быть в виде линейной цепи или разветвленной. Полиэтиленгликоль (РЕО) является особенно предпочтительным полимером.
Полимер может быть конъюгирован с пептидом ТА1 любым подходящим способом. Типовые способы конъюгации полимеров с пептидами раскрыты в патентах И8 4179337, 4766106, 4917888, 5122614 и 6177074, а также в заявке АО 95/13090, все из которых включены в контекст путем цитирования. Тимозин α.1 имеет пять отдельных потенциальных сайтов для конъюгации с полимером по аминогруппе, и полимер может быть конъюгирован по одному или нескольким сайтам. В соответствии с одним вариантом воплощения изобретения РЕО с молекулярной массой 20000 конъюгируют с Ν-концом ТА1 с образованием РЕО-ТА1. Это может быть осуществлено путем твердофазного пептидного синтеза ТА1 на полимерной подложке в виде шариков, как известно в данной области, с соответствующими защитными
- 1 008703 группами в боковой цепи. После завершения синтеза ТА1 защищенный ТА1 отщепляют от шариков, оставляя на Ν-конце свободную аминогруппу, которая реагирует с РЕС с молекулярной массой 20000. Затем удаляют защитные группы боковой цепи, чтобы образовать конъюгат согласно данному варианту воплощения по изобретению.
Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут использоваться для лечения пациентов, нуждающихся в стимуляции иммунитета. Таковые могут включать пациентов со злокачественными опухолями, гепатитом, включая пациентов, инфицированных вирусом гепатита В или гепатита С, вирусом иммунодефицита человека (Ηΐν) и др. Способ включает введение пациенту иммуностимулирующего эффективного количества физиологически активного конъюгата в соответствии с настоящим изобретением.
Выделение, характеристика и применение пептидов ТА1 описано, например, в патентах И8 4079127, 4353821, 4148788 Ь 4116951. Иммуностимулирующие эффективные количества пептида ТА1 можно определить с помощью рутинных экспериментов титрования дозы. Было найдено, что ТА1 безопасен для людей при введении в таких высоких дозах, как 16 мг/кг массы тела/день. Предпочтительные дозы пептида ТА1 находятся в диапазоне от 0,001 до 10 мг/кг массы тела/день при образцовой дозе, составляющей примерно 0,02 мг/кг массы тела/день. В соответствии с одним вариантом воплощения изобретения иммуностимулирующие эффективные количества являются дозами, которые включают пептид ТА1 в количестве, находящемся в диапазоне примерно 0,1-10 мг. Предпочтительные дозы включают пептид ТА1 в количестве, находящемся в диапазоне примерно 1-5 мг. Приведенные выше дозы отражают только количество пептида ТА1, присутствующего в композиции, а не массу конъюгированного с ним полимера.
В предпочтительных вариантах воплощения изобретения пептид ТА1 присутствует в фармацевтически приемлемом жидком носителе, таком, как вода для инъекции, солевой раствор в физиологических концентрациях или что-либо подобное.
Период полураспада в плазме подкожно инъецированного ТА1 составляет только около 2 ч. Однако конъюгация полимера с пептидом ТА1 в соответствии с настоящим изобретением существенно увеличивает период полураспада пептида.
В дальнейшем изобретение иллюстрируется следующими примерами, которые не претендуют на то, чтобы быть ограничивающими.
Пример 1. Крысы получали инъекцию 5-фторурацила (5-ЕИ), чтобы вызвать угнетение иммунитета, затем были обработаны путем инъекции тимозином α! (200 мкг/кг) или модифицированным полиэтиленгликолем тимозином α1 [РЕС (молекулярная масса 2000)-тимозин α!] (молярный эквивалент 200 мкг/кг тимозина), чтобы определить воздействие на параметры иммунитета. Было найдено, что: (1) восстановление активности ΝΚ-клеток (после угнетения, вызванного 5-ЕИ) было больше у животных, получавших инъекцию РЕС-тимозин α1, чем только тимозин α1, и (2) восстановление активированных Т-клеток, СИ25+, было больше у животных, получавших инъекцию РЕС-тимозин α1, чем только тимозин α1.
В следующих примерах, которые не претендуют на ограничение изобретения, оценивали непрерывную инфузию ТА1 на модели противоопухолевой терапии с применением имплантированных хирургическим способом осмотических мининасосов, которые доставляли жидкости с постоянной скоростью потока в течение 5 дней. Крысам давали 5-фторурацил (5-ЕИ), чтобы вызвать угнетение иммунитета, и затем через 8 дней обрабатывали с помощью инъекции или инфузии ТА1 (самый низкий уровень количества лейкоцитов после введения 5-ЕИ). Группами обработки, по 8 крыс в каждой, были: контрольная (мининасосы с физиологическим раствором); получавшая низкую дозу ТА1 (0,2 мг/кг, подкожная инъекция; пустые мининасосы); получавшая высокую дозу ТА1 (3,5 мг/кг, подкожная инъекция; пустые мининасосы); и получавшая высокую дозу ТА1 путем инфузии (3,5 мг/кг, инфузированные с помощью мининасосов). Параметры иммунитета определяли относительно базисной лини и через 8 дней после обработки 5-ЕИ (день 1 обработки ТА1), а также в дни 5, 12, 20 и 27 после обработки с ТА1.
Пример 2. Крысы десятинедельного возраста, массой 250-300 г получали 100 мг/кг 5-фторурацила (5-ЕИ) для подавления иммунитета.
Через 8 дней после обработки 5-ЕИ крыс рандомизированно определяли в одну из следующих групп (п=8).
Контроль (физиологический раствор в мининасосе).
Низкая доза ТА1, инъецированная подкожно при 0,2 мг/кг (с пустыми мининасосами).
Высокая доза ТА1, инъецированная подкожно при 3,5 мг/кг (с пустыми мининасосами).
Непрерывная инфузия ТА1, обеспеченная с помощью мининасоса при 3,5 мг/кг/5 дней.
Параметры иммунитета определяли относительно базисной лини и через 8 дней после обработки 5ЕЙ (день 1 обработки ТА1), а также в дни 5, 12, 20 и 27 после обработки ТА1.
Оценки включали активность природных киллеров (ΝΚ-клеток) [лактатдегидрогеназа (БИН), высвобожденная из клеток линии УАС-1 после экспозиции в течение 4 ч с моноядерными клетками периферической крови (РВМС) человека], общее количество лейкоцитов (подтвержденное с помощью цитофлуориметрических параметров после проверки специфичности с помощью моноклонального антитела), общее количество лимфоцитов (СИ3+ с помощью проточной цитометрии) и активированные лимфо
- 2 008703 циты (ί.Ό25+/ί.Ό3+ с помощью проточной цитометрии).
Активность ΝΚ-клеток составила 42±5% относительно базисной линии и была снижена до 9±2% после 5-РИ. Обработка низкой дозой ТА1 привела к значительному восстановлению активности ΝΚклеток через 12 дней, тогда как при высокой дозе ТА1 достигалось значительное восстановление всего за 5 дней. Однако непрерывная инфузия ТА1 была способна удвоить ответ за 5 дней до 32±4% (по сравнению с 16±2% для инъецированной высокой дозы, 12±3% для инъецированной низкой дозы и 11±1% для контроля). Только у животных, обработанных ТА1 путем непрерывной инфузии, проявлялось полное восстановление активности ΝΚ-клеток до уровней базисной линии.
Общее число лейкоцитов, определенное морфологически, снижалось от 14590±2071 клеток/мм3 до 2597±582 после обработки с 5-Ри. Обработка низкой или высокой дозой ТА1 путем инъекции имела тенденцию скорее к усилению восстановления по сравнению с необработанными животными. Однако непрерывная инфузия ТА1 обеспечивала статистически значимое и полное восстановление до уровней базисной линии только через 5 дней.
Количество активированных лейкоцитов (ΟΌ3+/ΟΌ25+) снижалось незначительно при обработке 5РИ (от 65±21 клетка/мм3 до 37±10), однако их уровни резко повышались в дни 12 и 20 после обработки высокой дозой ТА1 (297±136 и 321±75 клеток/мм3 по сравнению с 166±70 и 212±77 клеток/мм3, соответственно). Непрерывная инфузия ТА1 приводила даже к большему повышению, до 422±105 и 446±73 клетки/мм3.
Пример 3. Крысы десятинедельного возраста, массой 250-300 г получали 100 мкг/кг 5-фторурацила (5-Ρϋ) для подавления иммунитета.
Через 8 дней после обработки 5-РИ крыс рандомизированно определяли в одну из следующих групп (п=15).
Контроль (физиологический раствор в мининасосе).
Высокая доза ТА1, инъецированная подкожно при 3,5 мг/кг (с пустыми мининасосами).
Непрерывная инфузия ТА1, обеспеченная с помощью мининасосов при 3,5 мг/кг/5 дней.
Параметры иммунитета определяли относительно базисной линии через 8 дней после обработки 5РИ (день 1 обработки ТА1), а также в дни 5 и 14 после обработки ТА1.
Оценки включали общее количество лейкоцитов (подтвержденное с помощью физических цитофлуориметрических параметров после проверки специфичности с помощью моноклонального антитела), гранулоциты (проточная цитометрия с использованием меченого флуоресцеинизотиоцианатом (Р1ТС) антикрысиного гранулоцита ΗΙ8-48), общее количество лимфоцитов (СЭ3+ с помощью проточной цитометрии), Т-хелперы (СЭ4+ с помощью проточной цитометрии), активированные лимфоциты (СЭ25+/ СЭ3+ с помощью проточной цитометрии) и экспрессию цитокинов в плазме [интерлейкина-2 (1Ь-2) и γинтерферона (ΙΡΝ-γ) с помощью иммуноферментного анализа ЕЫ8А].
После определения в примере 2, что ТА1, доставляемый непрерывной инфузией, по сравнению с подкожной инъекцией проявляет резкое воздействие на общее число лейкоцитов, представляло интерес определить, какой тип лейкоцитов ответствен за увеличение. По-видимому, гранулоциты являются подгруппой лейкоцитов, которая наиболее подвержена действию ТА1, доставляемого непрерывной инфузией. Количество гранулоцитов снижалось после 5-РИ от 4485±1116 до 1249±432. Обработка с ТА1 приводила к увеличению до 14652±2463 в течение 5 дней (по сравнению с 9924±3218 при инъекции ТА1 или 6954±1519 без ТА1), и данный уровень был еще выше через 14 дней.
Интересно, что в данном исследовании было одно животное, которое получало ТА1 как инъекцией (3,5 мг/кг), так и непрерывной инфузией (еще 3,5 мг/кг). Это животное было не только здоровым и бодрым, без очевидных неблагоприятных явлений, но и измеренные воздействия ТА1 на параметры иммунитета были даже больше таковых у других животных. Что касается гранулоцитов, это исследуемое животное имело значительно повышенный уровень, 19376 клеток/мм3 через 5 дней, по сравнению со средним значением 14652±2463 у других животных, подвергавшихся инфузии.
Количество общих лимфоцитов (СЭ3+) было чрезвычайно повышенным после обработки с 5-РИ (от 10904±1973 клетки/мм3 до 1740±560). Обработка с ТА1 привела к восстановлению уровней базисной линии, которое проявлялось только через 5 дней, при доставке ТА1 непрерывной инфузией, но не было заметным до 14 дней в случае инъецированного ТА1.
Животное, которое получало ТА1 как путем инъекции, так и инфузии, имело уровни лимфоцитов, не намного отличавшиеся от других животных (9765 клеток/мм по сравнению со средним значением 9644±961), но процент тех лимфоцитов, которые оставались активированными, был значительно повышен (от 428±89 клеток/мм или 4% лимфоцитов для животных, получавших инфузию ТА1, до 976 клеток/мм3 или 10% лимфоцитов для животного, которое получало ТА1 в высокой дозе инъекцией, сопровождающейся инфузией). Т-хелперы (ί.Ό3+/ί.Ό4+) были также сниженными при обработке с 5-РИ: от 5411±1084 до 1710+449 клеток/мм3. Эти пониженные уровни Т-клеток не увеличивались без обработки с ТА1 в течение 14 дней эксперимента. В противоположность результатам, полученным для гранулоцитов, при которых ТА1, доставленный непрерывной инфузией, превосходил ТА1, доставленный инъекцией для восстановления количества клеток, доставленного одним из способов ТА1 было достаточно для воз
- 3 008703 вращения уровней Т-хелперов к базисной линии.
Поскольку ТА1, доставляемый или путем инъекции, или путем непрерывной инфузии, приводит к увеличению Т-хелперов СЭ4+. представлялось интересным определить, происходит ли это увеличение из-за воздействия на подгруппу Т-хелперов - на ТЫ или Т112. Прежние данные ίη νίΐτο и ίη νίνο демонстрировали, что ТА1 увеличивает подгруппу ТЫ Т-клеток, и в данном исследовании был обнаружен тот же эффект. Доставка ТА1 непрерывной инфузией приводила даже к большему увеличению в плазме уровня цитокина интерлейкина-2 (1Ь-2) подгруппы ТЫ, чем наблюдалось после подкожной инъекции (42±7 пг/мл через 14 дней после доставки ТА1 путем непрерывной инфузии по сравнению с 21 ±16 пг/мл для инъецированного ТА1 и 10±16 пг/мл для контрольных животных).
Обработка с помощью ТА1 приводила к увеличению цитокина 1Ь-2 подгруппы ТЫ и делала возможным увеличение другого цитокина подгруппы ТЫ - γ-интерферона (ΙΤΝ-γ). И хотя уровни цитокина являлись низкими, на день 5 после обработки подкожно инъецированный ТА1 приводил к более высоким уровням ΙΤΝ-γ в плазме. На день 14 после обработки животные, получившие ТА1 путем непрерывной инфузии, имели самые высокие уровни (14±5 пг/мл по сравнению с 10±1 пг/мл при инъекции или 8±8 пг/мл в контроле).
Животные, которые получали ТА1 как инъекцией, так и непрерывной инфузией, имели даже более высокие измеренные уровни обоих цитокинов подгруппы ТЫ, особенно ΙΤΝ-γ, уровень которого составил 45 пг/мл после 14 дней, по сравнению с 14±5 пг/мл для других животных.
Выводы
Поддержание постоянного уровня ТА1 в кровеносной системе в течение некоторого количества дней повышает измеряемые иммунологические эффекты.
Этот дозовый режим приводит к неожиданным положительным воздействиям на гранулоциты, а также к положительным воздействиям на моноциты, проявляемым после инъекции ТА1.
Не наблюдалось никаких неблагоприятных явлений, даже при дозах ТА1 в 15 раз выше обычных (а у одного животного при дозах в 30 раз выше обычных).
Claims (18)
1. Фармацевтическая композиция, обладающая повышенной иммуностимулирующей активностью и включающая физиологически активный конъюгат, содержащий пептид тимозин α! (ТА1), конъюгированный с полиэтиленгликолем, который увеличивает период полураспада пептида ТА1 в сыворотке пациента при введении упомянутого конъюгата пациенту.
2. Композиция по п.1, где упомянутый полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу в интервале примерно 200-300000.
3. Композиция по п.2, где упомянутая молекулярная масса составляет примерно 5000-35000.
4. Композиция по п.3, где упомянутая молекулярная масса составляет примерно 20000.
5. Композиция по п.1, где упомянутый полиэтиленгликоль конъюгирован с Ν-концевой частью пептида ТА1.
6. Композиция по п.1, где упомянутый пептид ТА1 является природным, синтетическим или рекомбинантным ТА1.
7. Способ получения композиции по п.1, включающий конъюгацию полиэтиленгликоля с пептидом ТА1.
8. Способ по п.7, где полиэтиленгликоль конъюгируют с Ν-концевой частью пептида ТА1.
9. Способ по п.7, где упомянутый полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу в интервале примерно 200-300000.
10. Способ по п.9, где упомянутая молекулярная масса составляет примерно 5000-35000.
11. Способ по п.10, где упомянутая молекулярная масса составляет примерно 20000.
12. Способ по п.7, где упомянутый пептид ТА1 является природным, синтетическим или рекомбинантным ТА1.
13. Способ лечения пациента, нуждающегося в стимуляции иммунитета, путем введения упомянутому пациенту иммуностимулирующего эффективного количества фармацевтической композиции по п.1.
14. Способ по п.13, где полиэтиленгликоль имеет молекулярную массу в интервале примерно 200300000.
15. Способ по п.14, где упомянутая молекулярная масса составляет примерно 5000-35000.
16. Способ по п.15, где упомянутая молекулярная масса составляет примерно 20000.
17. Способ по п.13, где полиэтиленгликоль конъюгирован с Ν-концевой частью пептида ТА1.
18. Способ по п.13, где пептид ТА1 является природным, синтетическим или рекомбинантным ТА1.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US33087001P | 2001-11-01 | 2001-11-01 | |
PCT/US2002/035094 WO2003037272A2 (en) | 2001-11-01 | 2002-11-01 | Thymosin alpha 1 peptide/polymer conjugates |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200400592A1 EA200400592A1 (ru) | 2004-12-30 |
EA008703B1 true EA008703B1 (ru) | 2007-06-29 |
Family
ID=23291654
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200400592A EA008703B1 (ru) | 2001-11-01 | 2002-11-01 | Фармацевтическая композиция, обладающая повышенной иммуностимулирующей активностью, способ ее получения и использования |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7297676B2 (ru) |
EP (1) | EP1455766B1 (ru) |
JP (1) | JP2005511553A (ru) |
KR (1) | KR20050042230A (ru) |
CN (1) | CN100536910C (ru) |
AT (1) | ATE549036T1 (ru) |
AU (1) | AU2002353964B2 (ru) |
BR (1) | BR0213821A (ru) |
CA (1) | CA2465874A1 (ru) |
EA (1) | EA008703B1 (ru) |
IL (1) | IL161670A0 (ru) |
MX (1) | MXPA04004188A (ru) |
NO (1) | NO20042055L (ru) |
NZ (1) | NZ532719A (ru) |
PL (1) | PL373795A1 (ru) |
UA (1) | UA78726C2 (ru) |
WO (1) | WO2003037272A2 (ru) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NZ540847A (en) * | 2002-11-25 | 2006-07-28 | Sciclone Pharmaceuticals Inc | Methods of protecting against radiation damage using alpha thymosin |
NZ544024A (en) * | 2003-05-12 | 2009-06-26 | Affymax Inc | Novel poly(ethylene glycol) modified compounds and uses thereof |
ES2315664T3 (es) * | 2003-06-30 | 2009-04-01 | Domantis Limited | Anticuerpos de dominio unico (dab) pegilados. |
CN100355786C (zh) * | 2004-04-28 | 2007-12-19 | 江苏豪森药业股份有限公司 | 聚乙二醇修饰的胸腺肽1衍生物 |
CN1314708C (zh) * | 2004-05-24 | 2007-05-09 | 华东师范大学 | 一种人α1-胸腺肽的复合物及其制备方法 |
CN100500844C (zh) * | 2005-03-07 | 2009-06-17 | 上海普洛康裕药物研究院有限公司 | 重组胸腺素α1在大肠杆菌中的高分泌表达和分离纯化 |
CN100577685C (zh) | 2005-11-10 | 2010-01-06 | 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 | 长效胸腺素α1的聚乙二醇化修饰物 |
CN101062950B (zh) * | 2006-04-25 | 2010-04-21 | 江苏豪森药业股份有限公司 | 聚乙二醇修饰的胸腺肽1衍生物 |
US8017129B2 (en) * | 2006-06-15 | 2011-09-13 | SciClone Pharmaceuticals International Ltd | Use of thymosin alpha 1 for preparing a medicament for the treatment of stage IV malignant melanoma |
US20080300166A1 (en) * | 2007-06-01 | 2008-12-04 | Sciclone Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of Melanoma with Alpha Thymosin Peptides |
EP2341942A1 (en) | 2008-09-19 | 2011-07-13 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of therapeutic peptides |
WO2010033227A1 (en) * | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Nektar Therapeutics | Polymer conjugates of thymosin alpha 1 peptides |
US8716012B2 (en) * | 2009-05-08 | 2014-05-06 | Sciclone Pharmaceuticals, Inc. | Alpha thymosin peptides as vaccine enhancers |
US9492506B2 (en) * | 2012-05-18 | 2016-11-15 | Replicor Inc. | Oligonucleotide chelate complex—polypeptide compositions and methods |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4079127A (en) * | 1976-10-28 | 1978-03-14 | Board Of Regents Of The University Of Texas | Thymosin alpha 1 |
US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4353821A (en) * | 1979-05-15 | 1982-10-12 | Max Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Method of preparing thymosin α1 and derivatives thereof |
WO1994013314A1 (en) * | 1992-12-15 | 1994-06-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Combination for treating hiv infections containing thymosine, interleukin and hiv replication or reverse transcriptase inhibitors |
US6309633B1 (en) * | 1999-06-19 | 2001-10-30 | Nobex Corporation | Amphiphilic drug-oligomer conjugates with hydroyzable lipophile components and methods for making and using the same |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4116951A (en) | 1977-04-22 | 1978-09-26 | Hoffmann-La Roche Inc. | [Asn2 ]-thymosin α1 and analogs thereof |
US4148788A (en) | 1978-01-23 | 1979-04-10 | Hoffmann-La Roche Inc. | Synthesis of thymosin α1 |
US4766106A (en) | 1985-06-26 | 1988-08-23 | Cetus Corporation | Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
US4917888A (en) | 1985-06-26 | 1990-04-17 | Cetus Corporation | Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation |
US5122614A (en) | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
US5595732A (en) | 1991-03-25 | 1997-01-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polyethylene-protein conjugates |
WO1994004193A1 (en) * | 1992-08-21 | 1994-03-03 | Enzon, Inc. | Novel attachment of polyalkylene oxides to bio-effecting substances |
ES2174915T3 (es) | 1993-11-10 | 2002-11-16 | Enzon Inc | Productos de conjugacion mejorados de un interferon con un polimero. |
US5632983A (en) * | 1994-11-17 | 1997-05-27 | University Of South Florida | Method for treating secondary immunodeficiency |
US5908621A (en) | 1995-11-02 | 1999-06-01 | Schering Corporation | Polyethylene glycol modified interferon therapy |
AU6078899A (en) * | 1998-10-13 | 2000-05-01 | Novozymes A/S | A modified polypeptide with reduced immune response |
AU2001244602A1 (en) | 2000-03-30 | 2001-10-15 | Ajinomoto Co. Inc. | Drugs retained in target tissue over long time |
ATE537845T1 (de) * | 2000-10-31 | 2012-01-15 | Pr Pharmaceuticals Inc | Verfahren zur herstellung von formulierungen zur verbesserten abgabe von bioaktiven molekülen |
US7610156B2 (en) * | 2003-03-31 | 2009-10-27 | Xencor, Inc. | Methods for rational pegylation of proteins |
-
2002
- 2002-01-11 UA UA20040504065A patent/UA78726C2/uk unknown
- 2002-11-01 JP JP2003539618A patent/JP2005511553A/ja active Pending
- 2002-11-01 AU AU2002353964A patent/AU2002353964B2/en not_active Ceased
- 2002-11-01 EP EP02789368A patent/EP1455766B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-01 NZ NZ532719A patent/NZ532719A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-11-01 US US10/493,690 patent/US7297676B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-01 EA EA200400592A patent/EA008703B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-11-01 AT AT02789368T patent/ATE549036T1/de active
- 2002-11-01 KR KR1020047006675A patent/KR20050042230A/ko not_active Application Discontinuation
- 2002-11-01 MX MXPA04004188A patent/MXPA04004188A/es active IP Right Grant
- 2002-11-01 BR BR0213821-2A patent/BR0213821A/pt not_active IP Right Cessation
- 2002-11-01 PL PL02373795A patent/PL373795A1/xx unknown
- 2002-11-01 IL IL16167002A patent/IL161670A0/xx unknown
- 2002-11-01 CA CA002465874A patent/CA2465874A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-01 WO PCT/US2002/035094 patent/WO2003037272A2/en active IP Right Grant
- 2002-11-01 CN CNB028218728A patent/CN100536910C/zh not_active Expired - Lifetime
-
2004
- 2004-05-18 NO NO20042055A patent/NO20042055L/no not_active Application Discontinuation
-
2007
- 2007-10-02 US US11/865,816 patent/US20080152668A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4179337A (en) * | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
US4079127A (en) * | 1976-10-28 | 1978-03-14 | Board Of Regents Of The University Of Texas | Thymosin alpha 1 |
US4353821A (en) * | 1979-05-15 | 1982-10-12 | Max Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Method of preparing thymosin α1 and derivatives thereof |
WO1994013314A1 (en) * | 1992-12-15 | 1994-06-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Combination for treating hiv infections containing thymosine, interleukin and hiv replication or reverse transcriptase inhibitors |
US6309633B1 (en) * | 1999-06-19 | 2001-10-30 | Nobex Corporation | Amphiphilic drug-oligomer conjugates with hydroyzable lipophile components and methods for making and using the same |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2002353964B2 (en) | 2006-08-03 |
EP1455766A4 (en) | 2008-11-05 |
MXPA04004188A (es) | 2004-07-08 |
US20040248792A1 (en) | 2004-12-09 |
CN1582162A (zh) | 2005-02-16 |
ATE549036T1 (de) | 2012-03-15 |
BR0213821A (pt) | 2004-08-31 |
KR20050042230A (ko) | 2005-05-06 |
EP1455766B1 (en) | 2012-03-14 |
IL161670A0 (en) | 2004-09-27 |
US20080152668A1 (en) | 2008-06-26 |
CN100536910C (zh) | 2009-09-09 |
EA200400592A1 (ru) | 2004-12-30 |
NO20042055L (no) | 2004-05-18 |
US7297676B2 (en) | 2007-11-20 |
EP1455766A2 (en) | 2004-09-15 |
JP2005511553A (ja) | 2005-04-28 |
WO2003037272A3 (en) | 2003-11-20 |
UA78726C2 (en) | 2007-04-25 |
WO2003037272A2 (en) | 2003-05-08 |
CA2465874A1 (en) | 2003-05-08 |
PL373795A1 (en) | 2005-09-19 |
NZ532719A (en) | 2005-11-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20080152668A1 (en) | Thymosin Alpha 1 Peptide/Polymer Conjugates | |
SK149199A3 (en) | Polyethylene glycol-interferon alpha conjugates for therapy of infection | |
US20100221274A1 (en) | Method of administering a thymosin alpha 1 peptide | |
AU2002353964A1 (en) | Thymosin alpha 1 peptide/polymer conjugates | |
AU2002363248A1 (en) | Method of administering a Thymosin alpha 1 peptide | |
AU2004232847B2 (en) | Treatment or prevention of respiratory viral infections with alpha thymosin peptides | |
MXPA05005538A (es) | Composiciones y metodos para la proteccion contra danos por radiacion con el uso de alfa timosina. | |
AU2003248792C1 (en) | Method of up-regulating tumor antigen expression using thymalfasin | |
AU2008200190A1 (en) | Method of Administering a Thymosin Alpha 1 Peptide | |
NZ552907A (en) | Method of up-regulating tumor antigen expression using thymalfasin |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |