EA001426B1

EA001426B1 - Способы терапевтического введения анти-cd40l соединений

Info

Publication number: EA001426B1
Application number: EA199900633A
Authority: EA
Inventors: Сьюзан Л. Каллед; Дэвид В. Томас
Original assignee: Байоджен, Инк.
Priority date: 1997-01-10
Filing date: 1998-01-09
Publication date: 2001-02-26
Also published as: CN1248921A; EA199900633A1; CZ244399A3; PL334500A1; JP2001508450A; NO993275L; EP0966302A1; NO993275D0; WO1998030241A1; KR20050088494A; KR100632846B1; HK1024424A1; NZ337073A; DE69837322T2; ATE356634T1; US20050158314A1; AU5735398A; KR20000070035A; CA2277223A1; PL193966B1

Abstract

Предложены способы лечения заболеваний, связанных с нарушением функционирования иммунной системы, путем введения анти-CD40L соединений с интервалами в три недели или более.

Description

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к режимам терапевтического введения пациентам анти-СБ40Ь соединений.

Предпосылки к созданию изобретения

Одной из необходимых реакций при выработке антител является взаимодействие СБ40 на В-клетках с лигандом ΟΌ40(ΟΌ40Ε) на активированных Т-клетках, этап, который необходим для роста В-клеток и последующей выработки антител. СБ40Ь в литературе упоминается также как др39 и Т-клетка-В-клетка активирующая молекула (Т-ВАМ). Понятно, что СО40Б. др39 и Т-ВАМ - это одна и та же молекула. Как описано далее, был получен ряд анти-СО40Ь соединений и некоторые из них были испытаны на животных на предмет эффективности в отношении изменения течения заболеваний, связанных с выработкой антител. Например, патентная публикация РСТ XVО 93/09812 (27 мая 1993 г.) раскрывает мышиные моноклональные антитела, обозначаемые 5с8, которые специфично связываются с Т-ВАМ на поверхности активированных Т-клеток, ингибируя, таким образом, активацию Т-клетками В-клеток.

В опубликованных экспериментах по влиянию анти-СБ40Е соединений на животных с иммунными нарушениями применялись дозы этих соединений, которые вводились животным с интервалами в две недели или менее, обычно, с интервалами между курсами лечения в 1 -7 дней (см., например, Мойал е! а1., 1. 1ттипо1. 154: 1470-1480, 1995; Еаг1у е! а1., 1. 1ттипо1.157: 3159-3164, 1996; ЗШЬег е!: а1., 1. Ехр. Меб. 183:693-698, 1996; Сйеп е!, а1., 1. 1ттипо1. 155: 2833-2840, 1995; Оеггйке е!; а1., Ргос. ИаИ. Асаб. Зс1., 93:2499-2504, 1996; Огееп е! а1., Т. У1го1. 70:2569-2575, 1996; Бибе е! а1., Зс1епсе

261:1328-1330, 1993; Биле е!: а1., 1. С1ш. 1пуей. 94:1333-1338, 1994; Ьагаеп е! а1.. Тгап§р1ап!айоп 61:4-9, 1996; и Спщд е! а1., 1. Ехр. Меб. 183:801810, 1996). Не найдено информации, которая свидетельствовала бы о том, что менее частое введение анти-СБ40Ь соединений было бы эффективным в отношении ингибирования выработки патологических антител или улучшения течения заболеваний, связанных с иммунной системой.

Краткое описание существа изобретения

Заявители продемонстрировали, что введение анти-СБ40Ь соединения с интервалами в три недели или более является эффективным для лечения нарушений с патогенезом, обусловленным антителами.

Настоящее изобретение относится к способу лечения пациента, страдающего заболеванием, обусловленным антителами, который включает введение терапевтически эффективного количества анти-СБ40Ь соединения пациенту в первый день и вновь, на второй день, с интервалом, по меньшей мере, около 3 недель между первым и вторым днями. Такие же количества анти-СБ40Ь соединения впоследствии можно давать пациенту, с интервалом, по меньшей мере, около 3 недель между эффективными дозами. В одном варианте осуществления настоящего изобретения интервал между дозами составляет, по меньшей мере, около 4 недель.

В другом аспекте настоящего изобретения описан способ лечения пациента, страдающего заболеванием, связанным с антителами, который включает введение терапевтически эффективного количества анти-СБ40Ь соединения пациенту в первый период лечения с интервалами менее приблизительно 3 недель, затем введение терапевтически эффективного количества анти-СБ40Ь соединения пациенту во второй период лечения с интервалами, по меньшей мере, приблизительно 3 недели или, по меньшей мере, приблизительно 4 недели.

Еще одним применением вышеуказанных режимов введения является лечение пациента, страдающего хроническим расстройством иммунной системы, таким как псориаз, аллергические состояния, артрит или рассеянный склероз.

В другом варианте осуществления способы настоящего изобретения полезны для лечения хронического аутоиммунного заболевания, такого как системная красная волчанка, миастения гравис, аутоиммунная гемолитическая анемия, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура или антифосфолипидный синдром.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу ингибирования реакции отторжения трансплантированной пациенту ткани; этот способ включает введение терапевтически эффективного количества анти-СБ40Ь соединения пациенту в первый день и вновь, на второй день, с интервалом, по меньшей мере, около 3 недель между первым и вторым днями. Соединение можно давать пациенту впоследствии с различными интервалами, но в одном варианте осуществления его дают последовательно после второй дозы с интервалами, по меньшей мере, приблизительно 3 недели или, по меньшей мере, приблизительно 4 недели. Трансплантированной тканью может быть любой орган или ткань, подходящие для трансплантации. Особенно предназначаются для включения в этот перечень трансплантаты ткани кожи, почки, печени, сердца, костного мозга или глаза. Трансплантат может являться аллотрансплантатом или ксенотрансплантатом.

Способы настоящего изобретения могут также быть полезны для подавления иммунной реакции после генной терапии.

В альтернативном режиме дозирования для ингибирования реакции отторжения трансплантированной пациенту ткани анти-СБ40Ь соединение вводят пациенту в первый период лечения с интервалами менее приблизительно 3 недель, затем введение терапевтически эффективного количества анти-СБ40Ь соединения пациенту во второй период лечения с интерва лами, по меньшей мере, приблизительно 3 недели.

Соединением анти-СО40Ь может быть любое соединение, которые связывается с СО40Ь на поверхности клеток, экспрессирующих СО40Ь, таких как активированные Т-клетки. В одном варианте осуществления настоящего изобретения этим соединением является антиСО40Ь антитело, предпочтительно моноклональное антитело. Этим моноклональным антителом может быть 5с8 (по АТСС каталогу № НВ 10916).

Анти-СЭ40Ь соединение может быть изготовлено в виде терапевтической композиции, которая включает терапевтически эффективное количество анти-СО40Ь соединения и фармацевтически приемлемый носитель. Эта терапевтическая композиция может включать также второе терапевтически эффективное соединение.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет таблицу от времени изменений нескольких измеренных характеристик крови и мочи у контрольных и леченных (8^В X ΝΖΒ) Р₁ мышей в эксперименте II. Анти-СО40Ь соединение, мАТ МВ 1, в дозе 500 мкг на животное, интраперитонеально, вводили однократно, когда мышам было 4 месяца, повторно, когда мышам было 7 месяцев, повторно в возрасте 9 месяцев, а затем с месячными интервалами. Каждая из верхних пяти строк таблицы, обозначенных АВ-ΒΝ, содержит данные, полученные от одного контрольного животного, а каждая из нижних шести строк таблицы, обозначенных СЬ-СВ, содержат данные, полученные от одного леченного животного. Это исследование началось, когда животным было 4 месяца, в феврале 1996 г. Вертикальные двойные линии отделяют 4 группы данных, каждая группа данных представляет измерения для образцов мочи и крови, отобранных в дни, приведенные над данными. Уровни протеинурии (ПУ) указаны от следовых значений до уровня 4. Уровень 1 соответствует содержанию альбумина в моче 30 мг/дл, уровень 2-100 мг/дл, уровень 3-300 мг/дл и уровень 4 - свыше 2000 мг/дл. Уровни антител анти-МК1 (представленные в колонке, помеченной анти-МВ1), анти-осДНК антител и анти-дсДНК антител даны в мкг/мл крови. Там, где это адекватно, величины представлены как среднее и стандартное отклонение от нескольких образцов, в средней форме (СО). Штрих указывает, что образец не отбирался, обычно, поскольку животное погибало. НД означает не делали.

Фиг. 2 представляет таблицу измерений протеинурии у животных эксперимента II в зависимости от времени. Первая колонка представляет номера животных как на фиг. 1 . Колонки озаглавлены днями отбора образцов. НО означает не отбирались.

Фиг. 3 представляет таблицу изменений характеристик крови и мочи в зависимости от времени в эксперименте V у контрольных и нелеченных мышей, которым начали лечение в возрасте 4,5 месяцев. МВ1 вводили леченным мышам однократно в дозе 500 мкг на животное, интраперитонеально, после чего вводили в дозе 500 мкг, интраперитонеально, один раз в месяц. Каждая из верхних семи строк таблицы, обозначенных АВ-ВЬК, содержит данные, полученные от одного контрольного животного, а каждая из нижних семи строк таблицы, обозначенных СКСЬВ, содержит данные, полученные от одного леченного животного. Это исследование началось, когда животным было 4,5 месяца, в мае 1996 г. Прочие описания этой фигуры те же, что и на фиг. 1 .

Фиг. 4 представляет таблицу измерений протеинурии у животных эксперимента V в зависимости от времени. Номера животных те же, что на фиг. 3. Прочие описания этой фигуры те же, что и на фиг. 2.

Фиг. 5 представляет таблицу изменений характеристик крови и мочи в зависимости от времени в эксперименте VII у контрольных и нелеченных мышей, которые начали лечение в возрасте 5,5 месяцев. МВ1 вводили леченным мышам один раз в неделю в дозе 500 мкг на животное, интраперитонеально, в течение шести недель, после чего вводили в дозе 500 мкг, интраперитонеально, один раз в месяц. Каждая из верхних трех строк таблицы, обозначенных ΑΝВЬ, содержит данные, полученные от одного контрольного животного (как отмечается на фиг. 6, некоторые контрольные животные погибли до того, как были отобраны данные для фиг. 5), а каждая из нижних семи строк таблицы, обозначенных СВ-ΌΝ, содержит данные, полученные от одного леченного животного. Это исследование началось, когда животным было 5,5 месяцев, в июне 1996 г. Прочие описания этой фигуры те же, что и на фиг. 1 .

Фиг. 6 представляет таблицу измерений протеинурии у животных эксперимента VII в зависимости от времени. Каждая из верхних семи строк таблицы, обозначенных АВ-ΒΝ, содержит данные, полученные от одного контрольного животного, а каждая из нижних семи строк таблицы, обозначенных СВ-ΌΝ, содержит данные, полученные от одного леченного животного. Прочие описания этой фигуры те же, что и на фиг. 2.

Фиг. 7 представляет таблицу изменений характеристик крови и мочи от времени у контрольных в эксперименте Х и нелеченных мышей, которые начали лечение в возрасте 5,5 месяцев. МВ1 вводили леченным мышам один раз в неделю в дозе 500 мкг на животное интраперитонеально в течение четырех недель, после чего вводили в дозе 200 мкг интраперитонеально один раз в месяц. Каждая из верхних восьми строк таблицы, обозначенных АВ-ВЬВ, содер жит данные, полученные от одного контрольного животного, а каждая из нижних восьми строк таблицы, обозначенных СЯ-ОЬК., содержит данные, полученные от одного леченного животного. Это исследование началось, когда животным было 5,5 месяцев, в октябре 1996 г. Прочие описания этой фигуры те же, что и на фиг. 1.

Фиг. 8 представляет таблицу измерений протеинурии у животных эксперимента Х в зависимости от времени. В первой колонке представлены номера животных как на фиг. 7. Прочие описания этой фигуры те же, что и на фиг.

2.

Фиг. 9 представляет таблицу изменений характеристик крови и мочи в зависимости от времени у контрольных в эксперименте VI и нелеченых мышей, которые начали лечение в возрасте 7 месяцев. МК1 вводили 4 леченым мышам один раз в неделю в дозе 500 мкг на животное, интраперитонеально, в течение шести недель, после чего вводили в дозе 200 мкг интраперитонеально один раз в месяц. Каждая из нижних четырех строк таблицы, обозначенных ΌΝ-ΕΝ, содержит данные, полученные от одного леченого животного. Ко времени первого сбора данных для этой таблицы все контрольные животные погибли, как отмечено на фиг. 1 0. Это исследование началось, когда животным было 7 месяцев, в июне 1996 г. Прочие описания этой фигуры те же, что и на фиг. 1 .

Фиг. 1 0 представляет таблицу измерений протеинурии у животных эксперимента VI в зависимости от времени. Каждая из верхних четырех строк таблицы, обозначенных ΛΚ-ί,'Ν. содержит данные, полученные от одного контрольного животного, а каждая из нижних четырех строк таблицы, обозначенных ΌΝ-ΕΝ, содержит данные, полученные от одного леченого животного. Прочие описания этой фигуры те же, что и на фиг. 2.

Подробное описание изобретения

Способ настоящего изобретения включает лечение, предупреждение, обратное развитие или стабилизацию у пациента с заболеванием, связанным с антителами, путем лечения антиСЭ40Б соединением с интервалами более двух недель. Это соединение блокирует взаимодействие СЭ40Б на Т-клетках и СЭ40 на В-клетках, что, как полагают, ингибирует выработку патологических антител, ответственных за многие из патологических эффектов при различных аутоиммунных заболеваниях и хронических иммунных нарушениях.

Соединения

Терапевтические соединения, пригодные для способов по настоящему изобретению, включают любое соединение, которое блокирует взаимодействие СЭ40 на В-клетках и СЭ40Б, которые экспрессируются на поверхности активированных Т-клеток. Конкретно рассматриваемые анти-СЭ40Ь соединения включают по ликлональные антитела и моноклональные антитела (мАТ), а также производные антител, такие как химерные молекулы, гуманизированные молекулы, молекулы со сниженными эффекторными функциями, биспецифические молекулы и конъюгаты антител. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения антителом является 5с8, как описано в патенте США № 5 474 771, описание которого включено в настоящий документ в качестве ссылки. Другие известные антитела против антигена 5с8 включают антитела 1тхМ90, 1тхМ91 и 1тхМ92 (полученные от 1ттипех), антиСЭ40Б мАТ, коммерчески доступные от Апсе11 (клон 24-31, № в каталоге 353-020, Ваурог!, ΜΝ) и анти-СЭ40Ь мАТ, коммерчески доступные от Сепхуте СатЬгфе МА, № в каталоге 80-370301). Также коммерчески доступны анти-СЭ40Ь мАТ от РйагМшдеп (8ап П1едо, № в каталоге 33580Ό). Получены и охарактеризованы многочисленные дополнительные анти-СЭ40Ь антитела (см., например, АО 96/23071, Впх1о1-Муегх 8с.|шЬЬ, описание которого включено в настоящий документ в качестве ссылки).

Настоящее изобретение включает также анти-СЭ40Ь молекулы других типов, такие как полные фрагменты РаЬ, соединения Р(аЬ)₂, участки ν_Η, участки Ρ_ν одноцепочечные антитела (см., например, АО 96/23071), полипептиды, слитые конструкции полипептидов, слитые молекулы СЭ40 (такие как СЭ40[д, как в Но11епЬаидй е1. а1., I. 1тшипо1.-Ме1Ь. 188:1-7, 1995, включенном в настоящий документ в качестве ссылки), и низкомолекулярные соединения, такие как малые полупептидные соединения или непептидные соединения, способные блокировать взаимодействие С040-С040С Способы создания, скрининга и оптимизации малых молекул представлены в патентной заявке РСТ/ϋδ 96/10664 с датой заполнения, зарегистрированной 21 июня 1996 г. (опубликованной 9 января 1997 г. как АО 97/00895), описание которой включено в настоящий документ в качестве ссылки.

Различные формы антител могут быть получены также с помощью обычной технологии рекомбинантной ДНК (Аш!ег апб МбЧеш Νι1иге 349:293-996 1991). Например, могут быть созданы химерные антитела, в которых антигенсвязывающий домен из антитела животного присоединен к константному домену человека (антитело, полученное первоначально от млекопитающего, не являющегося человеком, после чего была применена технология рекомбинантной ДНК для замены всех или части замковых и константных участков тяжелой цепи и/или константного участка легкой цепи на соответствующие участки из легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина человека) (см., например, СаЬШу е1. а1., патент США № 4 816 567; Моткоп е! а1., Ргос. №И. Асаб. 8сг 81: 6851-55, 1984). Химерные антитела снижают иммуно001426 генный ответ, вызываемый животными антителами, когда их используют как лекарственное средство для человека.

Помимо этого, могут быть синтезированы рекомбинантные гуманизированные антитела. Гуманизированные антитела представляют из себя антитела, первоначально полученные от млекопитающего, не являющегося человеком, после чего была применена технология рекомбинантной ДНК для замены некоторых или всех аминокислот, которые не требуются для связывания антигена, на аминокислоты из соответствующих участков легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина человека (химеры, включающие преимущественно последовательности 1дО человека, в которые были вставлены участки, ответственные за специфичное связывание антигена) (см., например, патентную заявку РСТ АО 94/04679). Животные иммунизируют нужным антигеном, выделяют соответствующие антитела и часть последовательностей вариабельного участка, ответственных за специфичное связывание антигена, удаляют. Полученные от животного участки, связывающиеся с антигеном, затем клонируют в подходящую позицию генов человеческого антитела, из которых были удалены антигенсвязывающие участки. Гуманизированные антитела сводят к минимуму использование гетерологичных (межвидовых) последовательностей в человеческих антителах и с меньшей вероятностью вызывают иммунные реакции у пациента, подвергающегося лечению.

Также полезными для способов и композиций настоящего изобретения являются антитела приматов или приматизированные антитела.

Для способов и композиций настоящего изобретения также можно использовать фрагменты антител и унивалентные антитела. Унивалентные антитела включают димер тяжелой и легкой цепи, соединенный с Те (или стволовым) участком второй тяжелой цепи. ТаЬ участок относится к тем частям цепей, которые приблизительно эквивалентны или аналогичны последовательностям, которые включают части Υразветвления тяжелой цепи, а также к легкой цепи целиком, и которые, как было установлено, вместе (в агрегатах) обладают способностью усиливать активность антител. ТаЬ белок включает агрегаты одной тяжелой и одной легкой цепи (известные как ТаЬ'), а также тетрамеры, которые соответствуют двум ветвям антитела Υ (известные как Т(аЬ)₂), ковалентно или нековалентно агрегированные, если только эта агрегация способна селективно реагировать с определенным антигеном или семейством антигенов.

Помимо этого, стандартная технология рекомбинантной ДНК может применяться для изменения сродства рекомбинантных антител к связыванию с их антигенами путем изменения аминокислотных остатков вблизи участков связывания антигенов. Сродство гуманизирован ных антител к связыванию с антигеном можно повысить путем мутагенеза, основанного на молекулярном моделировании (Онссп е! а1., Ргос. Пай. Леаб. 8с1. 86:10029-33, 1989; патентная заявка РСТ АО 94/04679). Может быть желательным усиление или ослабление сродства антител к СО40Ь, в зависимости от типа тканимишени или конкретной схемы лечения, которую намереваются применить. Это может быть осуществлено с помощью технологии демонстрации фагов (рйаде б1кр1ау) (см., например, Αίη!ег е! а1., Αηη. Кеу. 1ттипо1. 12:433-455, 1994; и ксЫег е! а1., 1. Мо1. Βίο1. 255:28-43, 1996, которые включены в настоящий документ в качестве ссылок). Например, может быть выгодно лечить пациента с помощью постоянных уровней антител с ослабленным сродством к СО40Ь с целью полупрофилактического лечения. Подобно этому, антитела с усиленным сродством к СО40Ь могут быть выгодными при краткосрочном лечении.

Объекты

Термин пациент означает любое млекопитающее, которому могут вводиться антиСО40Ь соединения. Пациенты, конкретно подходящие для лечения способом настоящего изобретения, включают человека, а также других приматов кроме человека, овец, лошадей, крупный рогатый скот, коз, свиней, собак, кошек, кроликов, морских свинок, хомячков, песчанок, крыс и мышей, а также органы, опухоли и клетки, полученные или происходящие от этих хозяев.

Объекты, для которых предназначены способы настоящего изобретения, страдают заболеваниями, связанными с выработкой антител.

Пути введения

Соединения настоящего изобретения могут вводиться любым приемлемым с точки зрения медицины способом. Эти способы могут включать инъекции, с помощью парентеральных путей, таких как внутривенный, внутрисосудистый, интраартериальный, подкожный, внутримышечный, внутриопухолевый, интраперитонеальный, интравентрикулярный, интраэпидуральный или другие пути, такие как пероральный, назальный, глазной, ректальный или местный. Введение с замедленным высвобождением активного ингредиента также включается в настоящее изобретение, в виде таких средств как инъекции препаратов-депо. Некоторые формы анти-СЭ40Ь соединений могут подходить для перорального введения и изготавливаться в виде суспензий или пилюль.

Дозировки и частота лечения

Количество и частота дозирования для каждого конкретного соединения, вводимого пациенту по поводу данного иммунокомплексного заболевания определяется лечащим врачом на основе ряда факторов. Обычная дозировка установлена в ходе доклинических и клинических испытаний, которые включают обширные экс9 перименты с целью определения благоприятных и неблагоприятных воздействий на пациента различных дозировок соединения. Даже после подобных рекомендаций лечащий врач будет часто варьировать этими дозировками для различных пациентов на основе ряда соображений, таких как возраст пациента, состояние его здоровья, вес, пол и одновременное лечение другими лекарственными средствами. Определение оптимальной дозы для каждого анти-СО40Ь соединения, которым обычно лечат волчаночный нефрит, является обычной практикой специалистов в области фармацевтики и медицины.

В соответствии с настоящим изобретением для лечения волчанки и других иммунокомплексных заболеваний могут использоваться различные режимы. Обычно частоту введения определяет лечащий врач, и режим может включать периоды более частого введения, например, с суточными или недельными интервалами, чередующиеся с периодами менее частого введения, например, с месячными интервалами и более.

Для иллюстрации определения дозировок анти-СО40Ь соединения далее приводятся примеры принципа назначения анти-С.'О40Ь мАТ. Размеры дозы могут быть легко скорректированы для других типов анти-СО40Ь соединений. В целом, рассматриваются разовые дозы в пределах приблизительно от 0,05 до 50 мг/кг веса тела пациента, чаще в пределах 1-20 мг/кг. Для неотложного лечения эффективная доза антител варьирует в пределах приблизительно от 1 мг/кг веса тела до 20 мг/кг веса тела, при ежедневном введении в течение периода времени приблизительно от 1 до 5 дней, предпочтительно путем болюсного внутривенного введения. Те же дозы и схемы введения могут использоваться во время нагрузочной фазы режима нагрузкаподдержание; во время фазы поддержания осуществляется внутривенное или внутримышечное введение антител в пределах приблизительно от 0,1 до 20 мг/кг веса тела в течение периода лечения с интервалами от недели до 3 месяцев. Постоянное лечение может осуществляться в режиме поддержания, при котором антитела вводят внутривенным или внутримышечным путем в пределах приблизительно от 0,1 до 20 мг/кг веса тела с интервалами между дозами приблизительно от недели до 3 месяцев. Помимо этого, постоянное лечение может осуществляться путем прерывистого режима болюсных внутривенных инъекций, при которых вводится доза антител в пределах при от 1,0 до 1 00 мг/кг веса тела, с интервалами между успешным лечением от 1 до 6 месяцев. Для всех видов лечения, кроме прерывистого режима болюсных инъекций, введение может быть также пероральным, внутрилегочным, назальным или подкожным.

Обычно лечение начинают с малых доз антител. Например, первоначальную дозу антител вводят пациенту, например, путем инъекции или инфузии. Первоначальная доза должна содержать приблизительно от 1,0 до 30 мг антител в день для пациента весом 70 кг. Для повторных введений через несколько дней дозы могут вводиться в последовательные дни, каждые двашесть дней, один раз в неделю, каждые двечетыре недели или один раз в месяц до достижения нужного подавления симптомов заболевания. Однако могут потребоваться также и другие схемы лечения. Когда будет достигнуто облегчение симптомов до желательного уровня, лечение можно прекратить. Пациентам, однако, при возникновении рецидивов симптомов заболевания может потребоваться прерывистое лечение на долгосрочной основе.

Согласно альтернативному варианту осуществления настоящего изобретения для лечения волчанки или других заболеваний, связанных с антителами, эффективность антител может быть повышена путем серийного введения или введения в сочетании с обычными противоволчаночными лекарственными средствами и лекарствами такими как, например, салицилаты, кортикостероиды или иммунодепрессанты. Альтернативно, антитела могут быть конъюгированы с обычным лекарственным средством. Это преимущество позволяет вводить обычное лекарственное средство в количестве меньше обычных дозировок, например, менее приблизительно 50% обычной дозировки, когда это средство вводится в качестве монотерапии. Соответственно, можно избежать появления многих побочных эффектов, связанных с этим лекарственным средством.

Комбинированная терапия по настоящему изобретению для лечения волчанки включает использование анти-СО40Ь антитела в сочетании с агентами, нацеленными на В-клетки, такими как анти-СО 19, анти-СЭ28 или анти-СЭ20 антитела (неконъюгированные или радиоактивно меченные), антагонисты 11-14, ЫР394 (блокатор рецепторов Ьа1о11а Рйагтасеийсак), ΙΚ1116 (малая молекула Тасеба) и идиотипические моноклональные антитела анти-1д. Альтернативно, комбинации могут включать агенты, нацеленные на Т-клетки/В-клетки, такие как СТЬА41д, антагонисты 1Ь-2, антагонисты 1Ь-4, антагонисты 1Ь-6, антагонисты рецепторов, анти-В7 моноклональные антитела, ΤΝΡ, антагонисты ЬЕА1/1САМ, антагонисты УЬА4/УСАМ, бреквинар и конъюгаты (токсина) 1Ь-2 (например, ΌΛΒ). преднизон, циклофосфамид и другие иммунодепрессанты. Комбинации могут включать также агенты, нацеленные на Т-клетки, такие как антагонисты СЭ4, антагонисты СЭ2 и Ш-12.

Комбинированная терапия для пациента с неволчаночным иммунокомплексным заболеванием, может включать введение анти-СЭ40Ь соединения, а также агента, который обычно вводится при конкретном рассматриваемом иммунокомплексном заболевании.

После наступления улучшения состояния пациента назначается поддерживающая доза анти-СО40Ь антител, отдельно или в сочетании с обычным противоволчаночным лекарственным средством, если необходимо. Впоследствии дозу или частоту введения, или и то, и другое, можно уменьшить, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором улучшенное состояние сохраняется. Когда симптомы облегчаются до желательного уровня, лечение можно прекратить. В других случаях, по решению лечащего врача, можно назначить эпизодическое лечение, например, с интервалами в четыре недели или более. Пациентам может, однако, потребоваться прерывистое лечение на долгосрочной основе, если симптомы заболевания рецидивируют.

Композиция

Анти-СЭ40Б соединение, которое применяется в способе по настоящему изобретению, вводят в фармацевтически эффективном количестве, которое оказывает благоприятное в медицинском отношении действие на пациента, страдающего заболеванием, связанным с антителами, иммунным нарушением, или пациента с трансплантатом или трансгеном, для которого желательно подавление реакции отторжения. Благоприятные в медицинском отношении эффекты будут включать предупреждение ухудшения или улучшение состояния здоровья пациента. В качестве примера, органом, который часто повреждается патологическими антителами, является почка у пациентов с СКВ. У этих пациентов, которых лечат способами настоящего изобретения, почечную функцию и состояние здоровья можно контролировать с помощью одного или более лабораторных анализов, которые определяют концентрации соответствующих веществ в крови или моче, другие показатели мочи или скорость клиренса различных веществ из крови в мочу. Эти параметры, определенные с помощью указанных анализов, как отдельно, так и в комбинации, могут быть использованы врачом для оценки почечной функции или повреждения. Примеры таких параметров включают концентрацию в крови мочевины, креатинина или белка; концентрацию в моче белка или различных клеток крови, таких как эритроциты или лейкоциты; удельный вес мочи; количество мочи; скорости клиренса инулина, креатинина, мочевины или п-аминогиппуровой кислоты; и наличие гипертензии или отеков. Благоприятные в медицинском отношении эффекты будут также включать сокращение количества аутоантител, таких как анти-дсДНК антитела в сыворотке крови пациентов, страдающих волчанкой.

Анти-СО40Б соединение по настоящему изобретению вводят пациенту в виде фармацевтически приемлемой композиции, которая может включать фармацевтически приемлемый носитель. Такой носитель относительно нетоксичен и безразличен для пациента в концентрациях, соответствующих эффективности антиСО40Б соединения или других активных ингредиентов, так, что любые побочные эффекты, которые приписываются носителю, не искажают благоприятного действия активных ингредиентов композиции. Эта композиция может включать другие совместимые вещества; совместимые в настоящем документе означает, что компоненты фармацевтической композиции можно смешивать с анти-СЭ40Б соединением и друг с другом так, чтобы не происходило взаимодействия, которое могло бы существенно снизить терапевтическую эффективность лекарственного препарата. Композиции для назальных спреев включают очищенные водные растворы активного соединения с консервантами и агентами, обеспечивающими изотоничность раствора. Такие композиции предпочтительно доводят до рН и изотонического состояния, совместимых со слизистой оболочкой носа. Композиции настоящего изобретения, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, саше, таблетки, пилюли или пастилки, с содержанием определенного количества активного анти-СЭ40Б соединения в виде порошка или гранул; в виде липосом или суспензий в водной или неводной жидкости, таких как сироп, эликсир, эмульсия или доза жидкого лекарства.

Применение анти-СЭ40Б соединений, вводимых с широкими интервалами, для лечения волчаночного нефрита у животных.

Для демонстрации эффективности введения анти-СЭ40Б соединений авторы выбрали модель волчаночного нефрита у животных. Системная красная волчанка (СКВ) представляет из себя угрожающее жизни аутоиммунное заболевание, которое характеризуется выработкой антител против различных тканей и, часто, против ДНК. СКВ страдает приблизительно 140000 человек в Соединенных Штатах и 105000 в Западной Европе, преимущественно женщины в детском возрасте. У большинства пациентов связанные с волчанкой иммуноглобулины и иммунные комплексы откладываются в почечных клубочках, вызывая снижение почечной функции. Если дозы анти-С.'О40Б соединений, даваемые с широкими промежутками, являются эффективными в отношении селективного подавления выработки антител, то такие режимы дозирования будут оказывать благоприятное воздействие на нефрит. Это подтверждается в экспериментах с лечением животных, у которых нефрит прогрессировал медленнее, снижалась тяжесть нефрита, увеличивалась выживаемость или даже у некоторых животных улучшалась функция почек.

Авторы проверяли действие антитиСО40Б мАТ МКТ хомячков на течение неф рита у самок мышей (8\УК X ΝΖΒ) Ρι в нескольких экспериментах, как описано ниже. Контрольным животным инъецировали или поликлональные 1д сирийских хомячков или На 4/8, мАТ армянских хомячков, направленные против КЬН. Уровни протеинурии указаны от следовых до уровня 4. Уровень 1 соответствует содержанию альбумина в моче 30 мг/дл, уровень 2-100 мг/дл, уровень 3-300 мг/дл и уровень 4 - свыше 2000 мг/дл. Уровень 2 рассматривался как признак умеренного нефрита, а 2,5 и выше указывал на тяжелый нефрит.

При отсутствии лечения или при лечении неспецифическими иммуноглобулинами хомячка контрольных животных, мыши обычно погибали в возрасте до 12 месяцев. В то время как сроки начала протеинурии у нелеченых животных варьировали, большинство из них к 3месячному возрасту имело протеинурию от легкой до умеренной степени тяжести; протеинурия имела тенденцию увеличиваться с возрастом. Примерно к 5 месяцам все контрольные животные обычно имели определяемый уровень анти-дсДНК антител, и большинство имело определяемый уровень анти-осДНК антител; это контрастирует с полным отсутствием определяемых уровней этих антител у нормальных мышей, таких как родители по женской линии 8\\'К (δνΚ. X ΝΖΒ) Ρ₁ мышей.

Эксперимент II: Лечение началось в 4месячном возрасте (фиг. 1 и 2).

Лечение МК1 начали, когда мышам было 4 месяца. МК.1 вводили леченым животным однократно в дозе 500 мкг на животное интраперитонеально, когда мышам было 4 месяца, однократно в возрасте 7 месяцев и однократно в возрасте 9 месяцев, после чего вводили путем инъекций один раз в месяц. После 4 месяцев лечения 4 из 5 контрольных животных погибли, но четыре из шести леченых животных были все еще живы. Три из этих четырех ранее выживших леченых мышей погибли, в возрасте 1 2, 1 3 и 13,5 месяцев. Одна выжила и ей в настоящее время 1 5 месяцев, что является чрезвычайно большой продолжительностью жизни для мышей от этого скрещивания. Большой интерес представляет тот факт, что выжившее животное (мышь ΙΙ:ΌΝ на фиг. 2) имело умеренный нефрит (протеинурия 2+) в возрасте от 8 до 13 месяцев, при том, что в последние два месяца протеинурия снизилась до низового уровня. Это впервые продемонстрировало возможность функционального обратного развития нефрита у мыши этой линии.

Эксперимент V: Лечение началось в возрасте 4,5 месяцев (фиг. 3 и 4).

Лечение МК1 начали, когда мышам было

4,5 месяца. МК1 вводили леченым животным однократно в дозе 500 мкг на животное интраперитонеально, когда мышам было 4,5 месяца, после чего вводили путем инъекций один раз в месяц в дозе 500 мкг интраперитонеально. Через

4.5 месяца 6 из 7 контрольных животных погибли, но шесть из семи леченых животных выжили. После 8 месяцев лечения все контрольные животные погибли, но из семи леченых мышей погибли только три. Как показано на фиг. 4, у четырех из семи животных, леченых МК.1, наблюдалось обратное развитие нефрита, о чем свидетельствовали стойко сниженные уровни протеинурии. Эти четверо животных в возрасте

12.5 месяцев все еще живы.

Эксперимент VII: Лечение началось в возрасте 5,5 месяцев (фиг. 5 и 6).

Лечение МК1 начали, когда мышам было

5.5 месяцев. МК1 вводили леченым животным один раз в неделю в течение шести недель в дозе 500 мкг на животное интраперитонеально, после чего вводили путем инъекций один раз в месяц. После 5 месяцев лечения в возрасте 10,5 месяцев 6 из 7 контрольных животных погибли; все 7 леченых животных в возрасте 1 2 месяцев все еще живы. Следующие параметры оценивались у животных, которые выжили к возрасту

8.5 месяцев после 3,5 месяцев лечения:

	анти-осДНК	анти-дсДНК	ПУ
Контроль	2,4	0	4
	8,8	6,3	4
	6,3	10,1	4
Среднее (С. О.)	5,8 (2,6)	5,4 (4,1)	4 (0)
МК1	2,7	0	1
	2,0	0	1,5
	2,0	1,5	3
	0	0	2
	2,7	0	1
	0	0	2
	3,5	0	1,5
Среднее (С. О.)	1,8 (1,2)	0,2 (0,5)	1,7 (0)

Эксперимент Х: Менее интенсивное лечение начали в возрасте 5,5 месяцев (фиг. 7 и 8).

Лечение МК1 начали, когда мышам было

5,5 месяцев. МК 1 вводили леченым животным один раз в неделю в течение четырех недель в дозе 500 мкг на животное интраперитонеально, после чего вводили путем инъекций один раз в месяц в дозе 200 мкг интраперитонеально. Из 16 мышей в этом исследовании (по 8 в контрольной группе и группе лечения), которым в настоящее время по 8,5 месяцев, только одна мышь погибла, контрольное животное в возрасте 7,5 месяцев. Как показано на фиг. 8, у семи из восьми контрольных животных наблюдалась протеинурия, которая стойко повышалась до высоких уровней, в среднем +3,4 для 7 выживших контрольных мышей. У всех, кроме одной, из восьми леченных МК1 мышей, сохранялась низкая протеинурия, которая в настоящее время составляет в среднем +2 для 8 леченых мышей. Как показано на фиг. 7, у шести из леченых животных и только у одного из контрольных не наблюдалось определяемых уровней антидсДНК антител.

Эксперимент VI: Лечение началось в возрасте 7 месяцев (фиг. 9 и 10).

Лечение МК1 начали, когда мышам было семь месяцев. МК.1 вводили 4 леченым животным один раз в неделю в течение шести недель в дозе 500 мкг на животное интраперитонеально, после чего вводили путем инъекций один раз в месяц в дозе 500 мкг интраперитонеально. В возрасте 10 месяцев все 4 контрольных животных погибли. В то время как 2 из леченых мышей погибли в возрасте 11 месяцев, а третья - в возрасте 13 месяцев, одно из четырех леченых животных в настоящее время в возрасте 14 месяцев остается в живых после 7 месяцев лечения. Выжившее леченое животное (номер νΐ:ΕΚ) в настоящее время имеет уровень протеинурии 1 и определяемые уровни анти-дсДНК и анти-осДНК антител.

Эти эксперименты показали, что лечение (8^К X ΝΖΒ) Е₁ мышей анти-СЭ40Е мАТ, вводимых в течение, по меньшей мере, периода времени с интервалами более 3 недель выражено и стойко продлевает им жизнь по сравнению с контрольными животными, а также замедляет развитие нефрита, о чем свидетельствуют уровни протеинурии. У некоторых животных лечение действительно обеспечивает обратное развитие нефрита, о чем свидетельствует снижение уровней протеинурии. Из 32 леченых животных 11 имело уровни белка в моче, которые снижались в результате лечения анти-СЭ40Е мАТ; ни у одного из контрольных животных такого снижения не наблюдалось. Из 24 леченых животных, у которых определяли азот мочевины в сыворотке крови (АМК), у 3 после лечения уровни АМК понизились, что не наблюдалось ни у одного контрольного животного. Помимо этого, лечение МК1 часто приводило к снижению концентрации анти-дсДНК и анти-осДНК аутоантител в сыворотке крови, которые обычно вырабатываются у нелеченых животных этого типа.

Смягчающие заболевание или профилактические результаты этих экспериментов показывают, что анти-СЭ40Е соединения могут успешно применяться для лечения состояний, связанных с антителами, при введении с интервалами 3 недели или более. Это удивительное и непредвиденное открытие, которое имеет значительные преимущества по сравнению с ранее применявшимися режимами лечения. Уменьшение частоты введения лекарства, особенно для пациентов с хроническим заболеванием, обеспечивает снижение затрат, неудобств и дискомфорта, особенно для лечения путем внутримышечных или внутривенных инъекций. Помимо этого, можно ожидать сокращение побочных эффектов лечения при использовании меньшего количества введений лекарства с более длительными интервалами между введениями.

Несмотря на то, что настоящее изобретение было подробно описано путем приведения примеров для более простого понимания его сути, специалисту понятно, что определенные изменения и модификации могут осуществляться в рамках объема настоящего изобретения, которое ограничивается только объемом прилагаемой формулы изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ лечения пациента, страдающего аутоиммунным заболеванием или хроническим нарушением иммунной системы, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества анти-СЭ40Б соединения в течение первого терапевтического периода в дозах, разделенных между собой интервалами, составляющими примерно менее 3 недель, и далее введение пациенту терапевтически эффективного количества анти-СЭ40Б соединения в течение второго терапевтического периода в дозах, разделенных между собой интервалами, составляющими, по меньшей мере, примерно 3 недели.
2. Способ по п.1, согласно которому заболевание или нарушение выбрано из группы, включающей системную красную волчанку, миастению гравис, аутоиммунную гемолитическую анемию, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, антифосфолипидный синдром, псориаз, аллергическое состояние, артрит и рассеянный склероз.
3. Способ по любому из пп. 1 или 2, согласно которому анти-СЭ40Б соединением является антитело или фрагмент антитела.
4. Способ по п.3, согласно которому антителом является моноклональное антитело.
5. Способ по п.4, согласно которому моноклональным антителом является 5с8, продуцироемое гибридомой АТСС НВ 10916.
6. Способ по любому из пп.1 или 2, согласно которому в течение первого терапевтического периода дозы разделяются недельными интервалами.
7. Способ по любому из пп. 1 или 2, согласно которому в течение первого терапевтического периода дозы разделяются интервалами, составляющими от двух до шести дней.
8. Способ по любому из пп.1 или 2, согласно которому в течение первого терапевтического периода дозы разделяются однодневными интервалами.
9. Способ по любому из пп.1 или 2, согласно которому в течение второго терапевтического периода дозы разделяются интервалами, составляющими, по меньшей мере, примерно 4 недели.
1 0. Способ по любому из пп. 1 или 2, согласно которому терапевтически эффективным количеством анти-СЭ40Б соединения является количество, достаточное для профилактики ухудшения состояния здоровья пациента.
11. Способ по любому из пп.1 или 2, согласно которому терапевтически эффективным количеством анти-СО40Ь соединения является количество, достаточное для улучшения состояния здоровья пациента.
12. Способ лечения пациента, страдающего аутоиммунным заболеванием или хроническим нарушением иммунной системы, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества анти-СО40Ь соединения в течение первого терапевтического периода, в количестве, по меньшей мере, четырех доз, разделенных между собой недельными интервалами, и далее введение пациенту терапевтически эффективного количества анти-СВ40Ь соединения в течение второго терапевтического периода в дозах, разделенных между собой месячными интервалами.
13. Способ по п.12, согласно которому в течение первого терапевтического периода вводят шесть доз анти-СО40Ь соединения.
14. Способ ингибирования реакции отторжения трансплантированной ткани у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества анти-СВ40Ь соединения в течение первого терапевтического периода в дозах, разделенных между собой интервалами, составляющими примерно менее 3 недель, и далее введение пациенту терапевтически эффективного количества анти-СВ40Ь соединения в течение второго терапевтического периода в дозах, разделенных между собой интервалами, составляющими, по меньшей мере, примерно 3 недели.
15. Способ по п.14, согласно которому трансплантированной тканью является аллотрансплантат или ксенотрансплантат.
16. Способ по п.14, согласно которому трансплантированную ткань выбирают из ткани кожи, почки, печени, сердца, костного мозга и глаза.
17. Способ подавления иммунной реакции на трансгенный продукт после генной терапии у пациента, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антиСО40Ь соединения в течение первого терапевтического периода в дозах, разделенных между собой интервалами, составляющими примерно менее 3 недель, и далее введение пациенту терапевтически эффективного количества антиСО40Ь соединения в течение второго терапевтического периода в дозах, разделенных между собой интервалами, составляющими, по меньшей мере, примерно 3 недели.
18. Способ по любому из пп.1, 2, 12, 14 или 1 7, согласно которому пациентом является человек.
19. Способ по любому из пп.1, 2, 12, 14 или 17, согласно которому анти-СО40Ь соединением является гуманизированное анти-СО40Ь антитело.