EA001262B1

EA001262B1 - Фармацевтическая композиция для лечения вирусных заболеваний

Info

Publication number: EA001262B1
Application number: EA199900226A
Authority: EA
Inventors: Бригитт Кёниг; Жан-Пьер Риху; Вольфганг Кёниг
Original assignee: ЮСиБи С.А.
Priority date: 1996-09-11
Filing date: 1997-09-08
Publication date: 2000-12-25
Also published as: BR9712033A; AU717354B2; EA199900226A1; NZ334571A; AU4621397A; AR009756A1; IL128351A0; AP9901474A0; TR199900523T2; US6413970B1; CA2265542A1; PL332316A1; ZA977874B; NO991164L; ID21369A; CN1230116A; EP0936909A1; NO991164D0; KR20000036025A; HUP9904173A3

Abstract

Заявляется применение 2-[2-[4-[(4-хлорфенил)фенилметил]-1-пиперазинил]этокси]-уксусной кислоты, индивидуального оптического изомера или фармацевтически приемлемой соли её в качестве активного ингредиента для получения фармацевтической композиции для лечения заболеваний, вызванных респираторно-синцитиальным вирусом.

Description

Данное изобретение относится к области фармацевтических композиций и методов лечения вирусных заболеваний человека. Более конкретно, данное изобретение относится к фармацевтическим композициям для лечения заболеваний, вызванных респираторно-синцитиальным вирусом (КБУ).

Хорошо известно, что рецидивирующие вирусные инфекции дыхательных путей увеличивают чувствительность по отношению к одному или нескольким антигенам с повышенными уровнями иммуноглобулинов Е, см., например, Озсаг Ь. РК1СК в 1. А11егду Сйп. 1ттипо1. (ШеетЬег 1986), рр. 1013-1018. Кроме того, основным вирусом, вызывающим стридор у человека, и особенно у детей, является респираторно-синцитиальный вирус. Последний особенно часто наблюдается у детей в возрасте до 2 лет, у которых он вызывает бронхит и пневмонию.

Т. СНОХМА1ТКЕЕ е! а1. в 1оигпа1 о! 1пГесΐΐοηδ П18еазе8, уо1. 164 (3), рр. 592-594 (1991) показывает, что мононуклеарные лейкоциты нормальных индивидуумов вырабатывают гистаминоген, гистамин-рилизинг фактор (НКР), (в ответ) при попадании в организм респираторных вирусов, полагая, что этот цитокин может играть роль в механизме вызванного вирусом бронхоспазма. Однако эти авторы также показали, что этот НКР, по-видимому, отличается от большинства других цитокинов, таких как интерлейкины-1-6, 8 и 9 или факторы роста гранулоцитов.

К. С. АЕЬЫУЕК е! а1. в Ыете Епд1апб 1оигпа1 оГ МеШсте уо1. 305 (15), рр. 841-846 (1981) показывает, что специфичные относительно респираторно-синцитиального вируса (КБУ) иммуноглобулины Е наряду с гистамином обнаружены у большинства младенцев с различными формами вызванного КБУ респираторного заболевания и со стридором (затрудненным шумным дыханием). Однако прямой корреляции между титрами КБУ-1дЕ и количеством образовавшегося (выделяемого) гистамина нельзя было провести.

Существует много теоретических механизмов, по которым вирусы могли бы вызывать или обострять воспаление нижних дыхательных (воздухоносных) путей. Помимо альвеолярных макрофагов, при респираторно-синцитиальной вирусной инфекции наблюдается перибронхиальная инфильтрация нейтрофилов. Нейтрофилы представляют собой не только клетки, способные фагоцитировать и высвобождать низкомолекулярный медиатор воспаления, они также обладают способностью (потенциалом) секретировать множественные провоспалительные (предшествующие воспалению) цитокины. Недавно были описаны новые цитокины, названные хемокинами, как активирующие воспалительные клетки, см., например, Рю1г ΚυΝΑ в Рйагтааа А11егду Кезеагсй Роипбайоп А\\агб

Воок (1995) рр. 23-31. В этом семействе хемокинов интерлейкин-8 (1Ь-8) является мощным хемотактическим фактором полиморфоядерных клеток. Этот хемокин, согласно В. ΚΌΝΙΟ е! а1. в 1оигпа1 оГ Ьеикосу!е Вю1оду (1и1у 1996), в больших количествах вырабатывается человеческими полиморфонуклеарными клетками при респираторно-синцитиальной вирусной инфекции. В другом исследовании, опубликованном К. ΑΚΝΟΕΌ е! а1. в 1ттцпо1о§у, 85, 364-372 (1995), приводится доказательство того, что в мононуклеарных клетках периферической крови синтезируется и секретируется провоспалительный цитокин 1Ь-8 с последующим инфицированием респираторно-синцитиальным вирусом (КБУ) даже в малых дозах. Авторы этого исследования полагают, что высвобождение мощного хемотоксина 1Ь-8 мононуклеарными клетками периферической крови может быть ответственным за явно выраженное аккумулирование полиморфоядерных гранулоцитов в альвеолярном пространстве при вызванном К8У бронхите.

Н.Р. НЕСКЕКТ е! а1. в ВегИпег Мйпсйпег Пегага Азсйг. Уо1. 106 (7), рр. 230-235 (1993) обсуждает способ лечения бычьей КБУинфекции. Помимо антибиотиков изучалось действие антигистаминного препарата дифенилгидрамина путем измерения внутренней температуры тела. В случае ежедневного применения антигистаминного препарата в качестве дополнения к антибиотикам температура тела животных снижалась значительно быстрее. Однако эта работа строго ограничивается лишь бычьим КБУ и, с другой стороны, в ней нет удовлетворительного объяснения механизмов действия каждого составляющего приведенной комбинации.

Относительно терапии нужно сказать, что нет специфического способа лечения респираторно-синцитиальных вирусных инфекций. Более того, хорошо известно, что некоторые лекарства, применяемые при терапии аллергии и астмы (кортикостероиды, теофиллин, кетотифен), оказывают ингибирующее воздействие на клетки, непосредственно участвующие в механизмах иммунной защиты, повышая таким образом риск бактериальной и вирусной инфекции.

Таким образом, целью данного изобретения является создание фармацевтических композиций для лечения заболеваний, вызванных респираторно-синцитиальным вирусом у человека.

В основе данного изобретения лежит неожиданное обнаружение того факта, что известное вещество 2-[2-[4-[(4-хлорфенил)фенилметил]-1 -пиперазинил] этокси]-уксусная кислота, индивидуальный оптический изомер или его фармацевтически приемлемая соль, проявляет заметный ингибирующий эффект в отношении вирусной репликации одновременно с ингибирующим эффектом вызванной КБУ модифика ции клеток (образование 1Ь-8). Более того, этот фармакологический эффект имеет место без ослабления иммунной системы больного.

Было обнаружено наличие неожиданного защитного эффекта при терапии заболеваний, таких как острый бронхит или вирусная пневмония, вызванных у человека респираторносинцитиальным вирусом, по методу, который включает введение индивидууму при необходимости такой терапии, фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного ингредиента эффективное количество, по меньшей мере, одного соединения, выбранного из 2-[2-[4[(4-хлорфенил)фенилметил]-1 -пиперазинил] этокси]-уксусной кислоты, индивидуального оптического изомера или его фармацевтически приемлемой соли.

Термин фармацевтически приемлемая соль, употребляемый в данном описании по отношению к 2-[2-[4-[(4-хлорфенил)фенилметил]-1-пиперазинил]этокси]-уксусной кислоте, означает не только соли присоединения нетоксических органических или неорганических кислот, таких как уксусная, лимонная, янтарная, аскорбиновая, соляная, бромисто-водородная, серная и фосфорная кислоты и тому подобное, но также соли металлов (например, калиевая или натриевая соли), аммониевые соли, включая соли четвертичных аммониевых оснований и соли аминокислот.

Термин индивидуальный оптический изомер, применяемый в данном описании означает её левовращающий и правовращающий энантиомеры (оптические изомеры). Как хорошо известно в технике, очистка таких энантиомеров является достаточно трудным процессом, зависящим от выбранного способа получения соединения и от чистоты исходного вещества. Следовательно, термин индивидуальный оптический изомер, применяемый в данном смысле означает, что указанное соединение содержит, по меньшей мере, 90%, предпочтительно, по меньшей мере, 95 вес.% указанного индивидуального (право- или левовращающего) оптического изомера и, самое большее, 10%, предпочтительно, не более 5 вес.% другого индивидуального (соответственно, лево- или правовращающего) оптического изомера. Каждый индивидуальный оптический изомер может быть получен (выделен) из смеси рацематов с применением известных методов, например, таких, которые раскрываются в патентной заявке Великобритании № 2,225,321. Кроме того, каждый индивидуальный оптический изомер может быть приготовлен из смеси рацематов путем ферментативного биокаталитического расщепления, как например, раскрывается в патентах США № 4,800,162 и 5,057,427.

Наиболее предпочтительными активными ингредиентами по данному изобретению являются рацемат 2-[2-[4-[(4-хлорфенил)фенилметил]-1-пиперазинил]этокси]-уксусная кислота и её соль дигидрохлорид, которая представляет собой антагонист гистаминовых Н1-рецепторов, хорошо известный под названием цетиризиндигидрохлорид, и его левовращающий и правовращающий энантиомеры.

Для воплощения данного изобретения описанная выше композиция (состав) должна содержать эффективное количество 2-[2-[4-[(4хлорфенил)фенилметил] -1 -пиперазинил] этокси]-уксусной кислоты, её фармацевтически приемлемой соли или её индивидуального оптического изомера. Эффективное количество может быть легко определено с помощью соответствующих методов и наблюдений за результатами, полученными в аналогичных обстоятельствах. При определении эффективного количества принимается во внимание ряд факторов, включая следующие, но не ограничивается только ими: вид больного; его размеры, возраст и общее состояние здоровья; его специфические заболевания; степень заболевания или тяжести болезни; реакция конкретного больного; конкретное вводимое соединение; выбранная дозировка; и применение сопутствующего лечения.

Эффективное количество 2-[2-[4-[(4хлорфенил)фенилметил]-1-пиперазинил]этокси]-уксусной кислоты, её фармацевтически приемлемой соли или их индивидуального оптического изомера в композиции по данному изобретению обычно меняется от, примерно, 0,1 миллиграмма на килограмм веса тела в день (мг/кг/день) до примерно 0,5 мг/кг/день. Предпочтительный прием (доза) составляет от около 5 мг до примерно 50 мг, предпочтительно один или два раза в день.

Состав по данному изобретению может назначаться больному в любой форме и любым способом, который делает композицию биодоступной в эффективных количествах, а именно, путем орального введения. Например, её можно вводить перорально, через нос, ректально. Обычно предпочитают вводить перорально. Специалисты в области приготовления рецептур могут легко выбрать соответствующую форму и способ введения в зависимости от конкретных характеристик болезненного состояния, которое должно подвергаться лечению, стадии заболевания и других релевантных обстоятельств.

Композиции по данному изобретению могут содержать 2-[2-[4-[(4-хлорфенил)фенилметил]-1-пиперазинил]этокси]-уксусную кислоту, её фармацевтически приемлемую соль или их индивидуальный оптический изомер - отдельно или в сочетании, по меньшей мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем или наполнителем, соотношение и природа которого определяется растворимостью и химическими свойствами выбранной композиции, выбранным путем введения и стандартной фармацевтической практикой.

Материал носителя может быть твердым, полутвердым или жидким, могущим служить в качестве носителя или среды для активного ингредиента. Соответствующие материалы для носителей хорошо известны в технике. Фармацевтические композиции по данному изобретению можно применять для перорального введения и назначать больным в форме таблеток, капсул, порошков, эликсиров, сиропов, растворов, суспензий и тому подобное. Фармацевтическая композиция по данному изобретению может быть адаптирована для ректального применения, и тогда она назначается больному в форме суппозиториев.

Материал носителя выбирают так, чтобы он соответствовал предполагаемой форме введения и согласовывался с обычной фармацевтической практикой. Например, для орального введения в форме таблеток или капсул терапевтически активные лекарственные компоненты могут объединяться с любым оральным нетоксическим фармацевтически приемлемым инертным носителем, таким как лактоза или крахмал. Фармацевтическая композиция по данному изобретению может, но не обязательно, содержать также связующее, например микрокристаллическую целлюлозу, смолу трагаканта или желатин; разрыхлитель, например альгиновая кислота; смазки, например стеарат магния; вещества, облегчающие проглатывание, например коллоидный диоксид кремния; подсластители, например сахароза или сахарин; красители или вкусовые добавки, например мята перечная или метилсалицилат.

Из-за простоты введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее предпочтительную форму стандартной дозы для орального применения. По желанию таблетки могут быть покрыты, с помощью водных и неводных методов, сахаром, шеллаком или другими подходящими для желудочно-кишечного тракта агентами, образующими оболочку. Желательно, чтобы каждая таблетка или капсула содержала от примерно 5 мг до примерно 50 мг активного ингредиента.

Для орального введения с целью терапии композиции по данному изобретению могут быть в виде раствора или суспензии. Эти препараты должны содержать, по меньшей мере, 0,1% весовых активного ингредиента композиции по данному изобретению.

Такие растворы или суспензии могут также содержать один или более следующих адъювантов: стерильный разбавитель, например такой как вода для инъекций, физиологический солевой раствор, масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, например, бензиловый спирт; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, например диаминтетрауксусная кислота; буферы, например ацетаты, цитраты или фосфаты; и агенты для повышения тонуса, например хлористый натрий или декстроза. Препарат можно поместить в ампулы или флаконы для многократных доз из стекла или пластика.

Далее изобретение поясняется ссылками на следующие примеры, подробно описывающие композиции по данному изобретению, а также их полезность.

Хотя данное изобретение описано и проиллюстрировано несколькими предпочтительными формами его воплощения, специалисты в данной области поймут, что различные изменения, модификации и замены могут в них быть произведены без утраты сущности изобретения. Например, могут применяться эффективные дозы активных ингредиентов иные, нежели предпочтительные интервалы, представленные выше в данном описании, в соответствии с изменениями чувствительности индивидуума, лечение которого проводится, тяжести симптомов, вызываемых дозой побочных эффектов, если таковые наблюдаются, и другие подобные соображения. Соответственно, такие ожидаемые вариации или различия в применении данного изобретения и полученные при этом результаты также находятся в соответствии (входят в объём) с целями и практикой данного изобретения.

Материалы и методы

Буфер

Буфер, применяемый для отмывания полиморфоядерных клеток, содержал 137 мМ ЫаС1, 8 мМ №₂НРО₄, 3 мМ КС1 и 3 мМ КН₂РО₄, рН 7,4 (модифицированный по Дульбекко физиологический раствор, буферизованный фосфатом). Для получения стимуляции (раздражения) клетки суспендировали в среде КРМ1 1640 (С1Ьсо ВВБ, Еддеп81еш, Сетшапу).

Получение полиморфоядерных (ΡΜΝ) нейтрофильных гранулоцитов

Человеческие гранулоциты выделяли из 200 мл гепаринизированной крови (15 Ед/мл) здоровых доноров, фракционированной градиентным центрифугированием в Фиколлметризоате с последующим осаждением декстраном и двукратным отмыванием (накопленного) количества 300 г. Этот метод дал ΡΜΝ с чистотой более 95%. Клетки разводили до конечной плотности 1 х 10⁶ ΡΜΝ.

Жизнеспособность клеток

Жизнеспособность клеток изучали методом исключения трипанового синего, анализом лактатдегидрогеназы (Воейтшдет, Маппйет, Сетшапу), а также определением митохондриальной активности с помощью ^8Т-1 (Воейттдет, Маппйе1ш, Сетшапу) у стимулированных и нестимулированных клеток. Анализы проводили так, как описано производителем (Воейппдег, Маппйет, Сетшапу). Все эксперименты проводили в условиях, при которых жизнеспособность видов клеток во всех трёх аналитических системах было выше 80%.

Культура клеток

Эпителиальные клетки Нер-2, эпителиальная опухолевая клеточная линия - АТСС ССБ23 - были получены из Американской Коллекции Культур Клеток и культивировались при 37°С в 5%-ной двуокиси углерода в модифицированной по Дульбекко среде Игла, содержащей 5% термоинактивированной эмбриональной телячьей сыворотки, 4 мМ Ь-глутамина и 80 мкг/мл гентамицина. Клетки пересевали дважды в неделю.

Получение вируса

Получение вируса осуществляли, как описано В. ΑΒΝΘΕΌ е! а1. в 1ттипо1оду, 82. 126133 (1994). Для исходного препарата выращивали респираторно-синцитиальный вирус (ВЗУ), Ьопд З1гат (АТСС), и титровали в клетках НЕР-

2. Титр ВЗУ определяли анализом (бляшкообразования-подсчётом) бляшкообразующих единиц (РЕИ). Титр исходного раствора вирусного пула (для разведения), используемого в исследовании, составлял 5 х 10⁶ РЕИ/мл. Исходный раствор до момента использования хранили при 70°С. Содержание интерлейкина-8 (1Ь-8) в исходном растворе было ниже предела обнаружения при анализе методом твердофазного иммунноферментного анализа (ЕЫЗА). Отсутствие микоплазмы определяли с помощью микоплазма-специфичного РСВ.

Эксперименты по стимуляции

Если не указано иначе, человеческие ΡΜΝ (1 х 10⁶/мл) обрабатывали различными количествами ВЗУ (10³-10⁷) бляшкообразующих единиц [РЕИ], соответствующими множественности инфекции [т.о.1.] от 0,001 до 10 в объеме 1 мл среды ΒΡΜΙ-1640 для указанных временных интервалов. Термостатирование осуществляли в отсутствие или в присутствии дигидрохлорида цетиризина в указанных концентрациях. Надосадочные жидкости клеток в экспериментах по стимуляции отделяли центрифугированием и хранили при -70°С до момента использования в анализе. Надосадочные жидкости (супернатант) клеток использовали для обнаружения 1Ь-8; клеточный осадок применяли для определения геномной рибонуклеиновой кислоты (РНК) В8У₃н.

Анализ 1Ь-8

ΡΜΝ суспендировали в среде ΒΡΜΙ с концентрацией 1 х 10⁶/мл. Клетки культивировали в присутствии соответствующего стимулятора до 24 ч. Супернатанты культур собирали и анализировали содержание 1Ь-8. Секрецию 1Ь-8 определяли, применяя сэндвич-ЕЫ8А согласно методу, указанному в данном описании выше. Коротко говоря, в каждой лунке 96-луночного планшета (Νππο Μαχί^Α, ВоккПбе, Иептагк) в течение ночи адсорбировали при 4°С 100 мкл буфера/полиоксиэтилен-сорбит монолаурат (продукт, продаваемый под торговым названием Τ\νΕΕΝ 20) (0,1%), содержащего антитела против 1Ь-8 с концентрацией 5 мкг/мл. Плашки от мывали трижды системой буфер/Т\гссп. добавляли соответствующие образцы стандарта 1Ь-8 (рекомбинантный человеческий 1Ь-8; Са1Ыоейет, Баб Зобеп, Сегтапу) и термостатировали 2 ч при 37°С. Затем добавляли конъюгированные со щелочной фосфатазой антитела против 1Ь-8. После добавления р-нитрофенил-фосфата (15 мг/мл) были использованы для количественного определения (планшет)-ридер ЕЫЗА, а для расчетов программное обеспечение Μ6<ιόΕ1< (8ЬТ ЬаЫп51гитеп15. СгаЙ5Йе1т. Сегтапу).

Анализ геномной РНК ВЗУ

Анализ В8У-специфичной геномной РНК проводился путем определения с помощью обратной транскрипции, сопряжённой с полимеразной цепной реакцией РСВ, геномной РНК В8У, кодирующей гидрофобный белок малого размера (8Н) ВЗУ, как ранее описано В. ΑΒΝΘΕΌ е! а1. в 1ттипо1оду, 82, 126-133 (1994). Тотальную РНК как неинфицированных, так и В8У-инфицированных ΡΜΝ (1 х 10⁶) экстрагировали Тризолом (С1Ьсо, Мебегеддепйет, Сегтапу). Тотальную РНК растворяли в 30 мкл Н₂О. Экспрессию геномной РНК ВЗУ_ЗН анализировали после обратной транскрипции с помощью смысловых праймеров и РСВамплификации транскриптов кДНК. На стадии обратной транскрипции реакционная смесь (конечный объем 20 мкл) содержала 10 мМ ТрисНС1 (рН 8,3), 50 мМ КС1, 5 мМ Μ§Ο1₂, 1 мМ дезоксинуклеотидов, 100 пМ смысловых праймеров для В8У_ЗН, 10 Ед ингибитора РНК-азы, 10 мкл образца РНК и 200 Ед обратной транскриптазы вируса лейкемии Μо1оηеу-Μи^^ηе (С1Ьсо, Еддеп81е1п, Сегтапу). Реакции обратной транскрипции проводили в течение 60 мин при 37°С. С целью РСВ-амплификации продуктов кДНК реакционные смеси смешивали с 50 пМ смысловых и антисмысловых праймеров и 2 Ед полимеразы Тад (С1Ьсо, Еддеп81е1п, Сегтапу). Продукты 20, 25 и 30 циклов (1 мин 94°С; 2 мин 53°С; 3 мин 72°С) анализировали на агарозном геле и проявляли, окрашивая этидиумбромидом. Соответствующие праймеры для ВЗУ_ЗН представляли собой: смысловой 5'-АССААТССА АААТАСАТСС-3'; антисмысловой 5'-ТИААТС СТАТСТСТТС-3'. Предсказанный размер продукта амплификации был 204 пар оснований для ВЗУ_ЗН в соответствии с ранее цитированной В. АВХОРЭ е! а1.

Статистический анализ

Если не указано иначе, все приведённые данные представляют собой средние значения, по меньшей мере, трёх отдельных экспериментов с клетками трёх различных доноров.

Влияние цетиризина на синтез ВЗУспецифичной РНК

Недавно мы показали, что ВЗУспецифичная геномная РНК находится внутри ΡΜN до 24 ч. Мы проанализировали влияние цетиризина на экспрессию В8У-специфичной мРНК после стимуляции человеческих ΡΜN с помощью Κ8Υ. С этой целью в первой серии экспериментов человеческие ΡΜΝ (1 х 10⁶/мл) были обработаны Р8У с т.о.1. 1-, 0,5-, 0,050,005- в течение 2 ч, а также в течение 16 ч. Результаты этих экспериментов изображены на фиг. 1. Человеческие ΡΜΝ (1 х 10⁶/мл) были оставлены необработанными (дорожки 1,2 и 7,8) или были обработаны с помощью К8У (1 т.о.1.: дорожки 3,9; 0,5 т.о.1: дорожки 4,10; 0,05 т.о.1: дорожки 5,11; 0,005 т.о.1: дорожки 6,12) в течение 2 часов (дорожки 1-6), а также в течение 16 ч (дорожки 7-12) при 37°С. Клеточные осадки после центрифугирования были проанализированы на КБУ-специфичную мРНК-экспрессию гена 8Н. Стрелки указывают амплифицированный РСВ-продукт. М:лэддер из 123 пар оснований (С1Ьсо ВВБ, Еддеийеш, Ссгтапу). На фиг.1 показано, что количество Р8У-специфичной мРНК увеличивается в ΡΜΝ при продолжительном времени термостатирования.

Далее, человеческие ΡΜΝ (1 х 10⁶/мл) обрабатывали Р8У (10³-10⁷) при т.о.1. 1 в отсутствие и в присутствии цетиризина. Результаты этих экспериментов приведены на фиг. 2: человеческие ΡΜΝ, необработанные (дорожка 1) или обработанные Р8У (1 т.о.1.) в отсутствие (дорожка 2) или в присутствии цетиризина (дорожки 3-7; 100-, 10-, 1-, 0,1-, 0,01 мкг/10⁶ ΡΜΝ). Термостатирование проводили в течение 2 ч (фиг. 2А) и в течение 16 ч (фиг. 2В) при 37°С. Клеточные осадки анализировали на Р8Успецифичную мРНК Р8У-8Н-гена с помощью ΚΤ-ΡΟΚ. Стрелкой показан амплифицированный продукт соответствующего размера М:лэддер из 123 пары оснований (С1Ьсо ВВБ, Еддеийеш, Ссгтапу). Фигура 2 показывает, что добавление цетиризина ингибирует К8Успецифичную мРНК-экспрессию (малого) гидрофобного (8Н) гена малого размера. Уменьшение Р8У-специфичной мРНК-экспрессии наблюдали во всём интервале концентраций цетиризина. Более того, уменьшение К8Успецифичной мРНК является показателем уменьшения репликационного вируса. Надо заметить, что такое ингибирование вирусной репликации антигистамином ранее никогда не наблюдалось.

Влияние цетиризиндихлорида на К8Уиндуцированную секрецию 1Б-8 человеческими ΡΜΝ

Человеческие ΡΜΝ (1 х 10⁶/мл) обрабатывали К8У с множественностью инфекции (т.о.1.) 1 в отсутствие и в присутствии цетиризиндихлорида (100-, 10-, 1-, 0,1-, 0,01 мкг/мл) в течение общего времени термостатирования 2 ч при 37°С. В качестве контроля клетки обрабатывали с цетиризином (100-, 10-, 1-, 0,1-, 0,01 мкг/мл) или без цетиризина, в отсутствие К8У (буферный контроль). Надосадочные жидкости после центрифугирования клеток анализировали на секрецию 1Б-8 методом ЕБ18А. Результаты этих экспериментов показаны на фигуре 3: дан ные представляют значения среднего и стандартного отклонения из 8 независимых экспериментов. На фиг. 3 видно, что цетиризиндихлорид (далее в этом описании называемый цетиризин) регулирует в сторону снижения К8Уиндуцированную секрецию 1Б-8. Однако, действие цетиризина не зависит от дозы. То есть, цетиризин в концентрациях >0,01 мкг/мл, но <100 мкг/мл приводит к значительному снижению КБУ-индуцированной секреции 1Б-8. Сходные результаты были получены после термостатирования в течение 24 ч, а также при концентрациях К8У вплоть до 5 т.о.1. Следует заметить, что такая взаимозависимость между антигистамином и индукцией 1Б-8 вирусом К8У ранее никогда не наблюдалась.

Влияние цетиризиндихлорида на процесс секреции 1Б-8 индуцированной вирусом К8У

Дальнейшие эксперименты осуществлялись с целью проанализировать влияние цетиризина на процесс секреции 1Б-8, индуцированной вирусом К8У. С этой целью человеческие ΡΜΝ (1 х 10⁶/мл) обрабатывали Р8У (1 т.о.1.) и цетиризином (100 мкг, 10 мкг, 1 мкг, 0,1 мкг, 0,01 мкг). Цетиризин или добавляли сразу (фиг. 4А) или спустя 30 мин (фиг. 4В), 60 мин (фиг. 4С) или 90 мин (фиг. 4Ό) после обработки Κ8Υ; было выбрано общее время 2 ч термостатирования при 37°С. Клеточные надосадочные жидкости анализировались на секрецию 1Б-8 методом ЕБ18А. Наши данные показывают, что цетиризин регулирует протекание индуцированной К8У секреции 1Б-8, понижая её. Однако наиболее (чётко) определённо это влияние наблюдалось, когда цетиризин прибавляли одновременно с обработкой Р8У. Снижение секреции 1Б-8, индуцированной К8У. было наиболее отчетливо заметно при концентрациях цетиризина >0,01 мкг/мл и <1 0 мкг/мл.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение 2-[2-[4-[(4-хлорфенил)фенилметил] -1 -пиперазинил] этокси]-уксусной кислоты, индивидуального оптического изомера или фармацевтически приемлемой соли её в качестве активного ингредиента для получения фармацевтической композиции для ингибирования репликации респираторно-синцитиального вируса у человека.
2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция находится в виде дозы, содержащей от 5 до 50 мг активного ингредиента.
3. Применение по п. 1, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция предназначена для лечения острого бронхита или вирусной пневмонии.
4. Применение по п. 1, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция дополнительно содержит, по меньшей мере, один фар11 мацевтически приемлемый носитель или наполнитель.
5. Применение по любому из пп.1 - 4, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция находится в форме, пригодной для орального применения.
6. Применение по п.5, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция находится в виде таблеток, капсул, порошков, эликсиров, сиропов, растворов или суспензий.
7. Применение по любому из пп.1 - 4, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция находится в форме, пригодной для ректального применения.
8. Применение по п.7, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция находится в форме суппозиториев.
9. Применение по п.6, отличающееся тем, что фармацевтическая композиция находится в виде раствора или суспензии, содержащей, по меньшей мере, 0,1 вес.% активного ингредиента.
10. Применение фармацевтической композиции, содержащей 2-[2-[4-[(4-хлорфенил)фенилметил] -1 -пиперазинил] этокси]-уксусную кислоту, индивидуальный оптический изомер или фармацевтически приемлемую соль её в качестве активного ингредиента в терапевтически эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель, для ингибирования репликации респираторно-синцитиального вируса у человека.