KR20000036025A

KR20000036025A - 바이러스성 질환을 치료하기 위한 약제 조성물

Info

Publication number: KR20000036025A
Application number: KR1019997002003A
Authority: KR
Inventors: 브리기테 쾨니히; 장-삐에르 리호욱스; 볼프강 쾨니히
Original assignee: 지. 카파트; 유씨비 소시에떼아노님
Priority date: 1996-09-11
Filing date: 1997-09-08
Publication date: 2000-06-26
Also published as: AU4621397A; PE107598A1; CA2265542A1; AP9901474A0; AU717354B2; NO991164L; US6413970B1; WO1998010764A1; EA199900226A1; JP2001500143A; HUP9904173A3; TR199900523T2; IL128351A0; OA10993A; BR9712033A; AR009756A1; NO991164D0; ID21369A; NZ334571A; PL332316A1

Abstract

본 발명은 호흡 합포체 바이러스에 의해 야기된 질환을 치료하기 위한 약제 조성물을 제조하기 위한 활성 성분으로서 2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산, 이들의 개개의 광학이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염을 사용하는 방법에 관한 것이다.

Description

바이러스성 질환을 치료하기 위한 약제 조성물 {PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATING VIRAL DISEASES}

재발성 호흡관 바이러스 감염 후에 면역글로불린 E의 수준이 증가되면서 하나 또는 수개의 항원이 빠르게 감작된다는 것은 널리 공지되어 있다[참고문헌: Oscar L. FRICK in J.Allergy Clin. Immunol.(November 1986), pp. 1013-1018]. 추가로, 사람 및 보다 특히 아이들에게 천명을 야기시키는 하나의 유력한 바이러스는 호흡 합포체 바이러스이다. 세기관지염 및 폐렴을 야기시키는 이러한 바이러스는 특히 2살 미만의 아이들에게서 관찰된다.

문헌 [T. CHONMAITREE et al. In Journal of Infections Diseases, vol. 164 (3), pp. 592-594 (1991)]에는 정상적인 개인으로부터의 단핵 백혈구가 호흡성 바이러스에 대한 노출에 반응하는 히스타민 유리 인자(HRF)를 생성시키는 방법이 기술되어 있으며, 이러한 세포질이 바이러스 유도 기관지경련의 메카니즘에 중요한 역할을 할 수 있다는 것이 제시되어 있다.

문헌 [R. C. WELLIVER et al. In New England Journal of Medicine vol. 305 (15), pp. 841-846 (1981)]에는 히스타민과 함께 호흡 합포체 바이러스(RSV) 특이적 면역글로불린 E가 천명을 일으키며 RSV로 인한 다양한 형태의 호흡병을 앓는 대다수의 유아에게서 검출될 수 있음이 기술되어 있다. 그러나, 유리된 히스타민의 양과 RSV-IgE의 농도의 직접적인 상관관계는 결정될 수 없었다.

바이러스가 하부 기도에 염증을 일으키거나 악화시킬 수 있는 이론적인 메카니즘은 많이 있다. 폐포 대식세포 이외에, 호흡 합포체 바이러스 감염 후에 호중성 과립세포에 의한 세기관지주위의 침윤이 관찰된다. 호중구는 식작용 및 저분자량의 소염성 매개체를 유리할 수 있는 세포일 뿐만 아니라, 이들은 다중의 소염전 시토킨을 분비하는 능력을 갖는다. 최근에, 케모킨이라 명명된 신규한 시토킨이 소염성 세포를 활성화시킨다는 것이 기술되었다[참고문헌: Piotr KUNA in Pharmacia Allergy Research Foundation Award Book (1995) pp. 23-31]. 이러한 종류의 케모킨에서, 인터루킨-8 (IL-8)은 다형핵성 세포에 대하여 매우 효능이 있는 화학주성 인자이다. 문헌 [B. KONIG et al. in Journal of Leukocyte Biology (July 1996)]에 따르면, 이러한 케모킨은 호흡 합포체 바이러스에의 노출 동안 사람의 다형핵성 세포에 의해 대량으로 생성된다. 문헌 [R. ARNOLD et al. in Immunology, 85, 364-372 (1995)]에 기술된 또 다른 연구에서, 심지어 저용량으로 호흡 합포체 바이러스(RSV)에 감염된 후에 말초 혈액 단핵 세포가 소염전 시토킨 IL-8을 합성하고 분비한다는 증거가 제시되어 있다. 이 연구의 저자는 말초 혈액 단구 세포로부터의 효능성 케모톡신 IL-8의 유리가 RSV 유도된 세기관지염 동안 폐포 공간에서 다형핵 과립세포의 현저한 축적에 의해 수행될 수 있다는 것을 제안하고 있다.

문헌 [H.P. HECKERT et al. In Berliner Munchner Tierarzl Wschr. Vol. 106 (7), pp. 230-235 (1993)]에는 소의 RSV 감염을 치료하는 방법이 기술되어 있다. 항생 치료 이외에, 항히스타민 디페닐히드라민에 의한 치료 효과는 내부 체온의 측정에 의해 평가되었다. 항생 치료에 항히스타민을 추가적으로 매일 적용함에 있어서, 동물은 열이 올라가면서 상당히 빨라졌다. 그러나, 이러한 문헌의 학설은 소에만 국한되며, 한편, 지정된 조합의 각각의 구성요소의 각각의 작용 메카니즘을 설명하지는 못한다.

치료적 관점에서 볼 때, 호흡 합포체 바이러스 감염을 치유하기 위한 어떠한 특정 치료법도 없음이 지적되었을 것이다. 더욱이, 알레르기 및 천식을 치료하기 위해 사용되는 수가지 약제(코르티코스테로이드, 테오필린, 케토티펜)가 면역 방어 메카니즘에 직접적으로 수반된 세포에 대한 억제 효과를 나타내, 세균 및 바이러스 감염의 위험성을 증가시킨다는 것은 널리 공지되어 있다.

따라서, 본 발명의 목적은 사람에게 있어 호흡 합포체 바이러스에 의해 야기된 질환을 치료하는데 유용한 약제 조성물을 제공하는 데에 있다.

본 발명은 2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산, 이들의 개개의 광학이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염이 RSV 유도된 세포 개질(IL-8의 생성)의 억제 효과와 함께 바이러스 복제에 대해 상당한 억제 효과를 나타낸다는 예기치 않은 인지에 기초를 두고 있다. 더욱이, 이러한 약리 효과는 환자의 면역계를 저하시키지 않으면서 일어난다.

이러한 인지는 활성 성분으로서 2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산, 이들의 개개의 광학이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염으로부터 선택된 유효량의 1종 이상의 화합물을 포함하는 약제 조성물을 이러한 치료를 필요로 하는 사람에게 투여하는 것을 포함하는 방법에 의해, 사람에게 있어 호흡 합포체 바이러스에 의해 야기된, 급성 세기관지염 또는 바이러스성 폐렴과 같은 질환을 치료할 때 얻어진 예기치 않은 보호 효과의 존재를 나타낸다.

2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산과 관련하여 본원에서 사용되는 표현 "약제학적으로 허용되는 염"은 아세트산, 숙신산, 아스코르브산, 염화수소산, 브롬화수소산, 황산 및 인산 등과 같은 비독성의 유기 및 무기산을 갖는 이의 부가염 뿐만 아니라 이의 금속염(예, 나트륨염 또는 칼륨염), 4차 암모늄염을 포함하는 암모늄염 및 아미노산염을 의미한다.

본원에서 사용되는 표현 "개개의 광학이성질체"는 이들의 좌선성 및 우선성 에난티오머를 의미한다. 당해기술분야에 널리 공지되어 있는 바와 같이, 이러한 에난티오머의 정제는 화합물을 제조하는 선택된 방식 및 출발 물질의 광학적 순도에 의존하는 보다 어려운 방법이다. 그러므로, 본원에서 사용되는 표현 "개개의 광학이성질체"는 상기 화합물이 90중량% 이상, 바람직하게는 95중량% 이상의 상기 개개의(좌선성 또는 우선성) 광학이성질체 및 10중량% 이하, 바람직하게는 5중량% 이하의 나머지 개개의(각각 우선성 또는 좌선성) 광학이성질체를 포함함을 의미한다. 각각의 개개의 광학이성질체는 영국특허출원 제 2,225,321호에 기술된 바와 같은 통상적인 수단을 사용하여 이의 라세미 혼합물로부터 수득될 수 있다. 추가로, 각각의 개개의 광학이성질체는 미국특허 제 4,800,162호 및 제 5,057,427호에 기술된 바와 같은 효소적 생촉매 분해에 의해 라세미 혼합물로부터 제조될 수 있다.

본 발명의 가장 바람직한 활성 성분은 2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산의 라세미체 및 세티리진 디하이드로클로라이드와 같은 히스타민 H₁수용체 길항제인 이의 디하이드로클로라이드염, 및 이의 좌선성 및 우선성 에난티오머이다.

본 발명을 충족시키기 위해서는, 상기된 조성물은 유효량의 2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산, 이들의 약제학적으로 허용되는 염 또는 개개의 광학이성질체를 함유해야 한다. 유효량은 공지된 기술을 사용하고 유사한 환경하에서 얻은 결과를 관찰함으로써 용이하게 결정될 수 있다. 유효량을 결정함에 있어, 다수의 인자는 환자의 종; 사이즈, 연령 및 일반적인 건강 상태; 수반된 특정 질환; 질환의 수반 또는 정도; 개개 환자의 반응; 투여되는 특정 화합물; 투여 방식; 투여되는 제제의 생체 이용률 특성; 선택된 용량 섭생; 및 부수적인 약제의 사용을 포함하여 고려되지만 이에 국한되지는 않는다.

본 발명의 조성물에서 2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 이들의 개개의 광학이성질체의 유효량은 일반적으로 하루당 체중 1 킬로그램 당 약 0.1 밀리그램(mg/kg/day) 내지 약 0.5 mg/kg/day 범위일 것이다. 바람직하게는 하루에 한번 또는 두 번에 약 5mg 내지 약 50mg의 용량이 바람직하다.

본 발명에 따른 조성물은 조성물이 유효량으로 생체에서 이용될 수 있게하는 어떠한 형태 또는 방식으로든, 즉 경구 경로로 투여될 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물은 경구로, 비강내로 또는 직장으로 투여될 수 있다. 경구적 투여가 일반적으로 바람직하다. 제형을 제조하는 당업자라면 치료하고자 하는 질환의 특정 특성, 질환의 상태, 그 밖의 관련된 정황에 따라서 적합한 투여 형태 또는 방식을 용이하게 선택할 수 있다.

본 발명의 조성물은 2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산, 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 이들의 개개의 광학이성질체 또는 1종 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하며, 이의 비율 및 성질은 선택된 조성물의 용해도 및 화학특성, 선택된 투여 경로 및 표준 약제학적 실시에 의해 결정된다.

담체 물질은 활성 성분에 대한 비히클 또는 배지로서 역할을 할 수 있는 고형 물질, 반고형 물질 또는 액체 물질일 수 있다. 적합한 담체 물질은 당해기술분야에 널리 공지되어 있다. 본 발명의 약제 조성물은 경구용으로 적합할 수 있으며, 정제, 캡슐, 분말, 엘릭시르, 시럽, 용액, 현탁액 등과 같은 형태로도 환자에게 투여될 수 있다. 본 발명의 약제 조성물은 직장 투여용으로도 적합하여 좌약 형태로도 환자에게 투여될 수 있다.

담체 물질은 의도된 투여 형태와 관련하여, 그리고 통상적인 약제학적 실시와 일치하도록 적합하게 선택되어야 한다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐 형태의 경구 투여를 위해, 치료 활성 약제 성분이 락토오스 또는 전분과 같은 경구적 비독성의 약제학적으로 허용되는 불활성 담체와 조합될 수 있다. 임의로, 본 발명의 약제 조성물은 또한 미소결정질의 셀룰로오스, 고무질의 트래거캔스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 알긴산과 같은 분해제, 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제. 콜로이드성 이산화실리콘과 같은 활택제, 수크로오스 또는 사카린과 같은 감미제, 착색제, 페퍼민트 또는 메틸살리실레이트와 같은 착향제를 함유한다.

이들의 용이한 투여방법 때문에, 정제 및 캡슐은 가장 유리한 경구적 용량 단위 형태를 나타낸다. 원한다면, 정제는 표준 수성 및 비수성 기술에 의해 설탕, 셸랙 또는 그 밖의 유입되는 피복제로 코팅될 수도 있다. 바람직하게는, 각각의 정제 또는 캡슐은 약 5mg 내지 약 50mg의 활성 성분을 함유한다.

치료적 경구 투여 방법의 목적을 위해, 본 발명의 조성물은 액체 또는 현탁액내에 혼입될 수 있다. 이들 제제는 본 발명의 조성물을 기준으로 하여 0.1중량% 이상의 활성 성분을 함유해야 한다.

이러한 용액 또는 현탁액은, 주입용 물, 생리학적인 염수 용액, 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 그 밖의 합성 용제와 같은 살균 희석제; 벤질 알코올과 같은 항균제; 아스코르브산 또는 중아황산나트륨과 같은 산화방지제; 에틸렌 디아민테트라아세트산과 같은 킬레이트화제; 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트와 같은 완충액; 및 염화나트륨 또는 덱스트로오스와 같은 탄력성을 조절하기 위한 제제로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 보조제를 포함할 수 있다. 제제는 암폴, 또는 유리 또는 플라스틱 재질의 다중 용량 병에 밀봉될 수 있다.

본 발명은 이들의 용도 뿐만 아니라 본 발명의 조성물을 상세하게 설명하는 하기 실시예를 참조하여 추가로 정의된다.

본 발명은 이들의 특정의 바람직한 구체예를 참조로 기술되고 설명되었지만, 당업자라면 다양한 변화, 변형 및 대체가 본 발명의 사상으로부터 벗어나지 않으면서 본원에 만들어질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 예를 들어, 활성 성분과 관련하여 상기에 설정된 바람직한 범위 이외에 효과적인 용량이 치료되는 사람의 반응성의 변화, 증상의 심각도, 여하튼 관찰된, 용량과 관련된 역효과 및 유사한 고려사항의 결과로서 적용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 실시에서 이러한 예기된 변화 또는 차이 및 얻어진 결과는 본 발명의 목적 및 실시에 따라서 예상된다.

물질 및 방법

다형핵성 세포를 세척하기 위해 사용된 완충액(개질된 둘베코의 인산염 완충화된 염수)은 pH 7.4에서 137mM NaCl, 8mM Na₂HPO₄, 3mM KCl 및 3mM KH₂PO₄로 구성되었다. 자극 검정을 위해, RPMI 1640 배지(독일 에겐스테인에 소재하는 기브코 비알엘(Gibco BRL)에서 시판)중에 세포를 현탁시켰다.

다형핵성(PMN)의 호중성 과립세포의 제조

피콜-메트리조에이트 구배로 건장한 공여체로부터의 헤파린화된 혈액(15U/ml) 200ml로부터 사람의 과립세포를 단리시킨 후, 덱스트란 침강을 수행하고, 300g에서 두 번 세척하였다. 이러한 방법에 의해 95% 이상의 순수한 PMN이 되게 하였다. 세포를 희석하여 최종 밀도가 1×10⁶PMN이 되게 하였다.

세포 생육력

자극된 및 자극되지않은 세포에서 WST-1(독일 만하임에 소재하는 뵈링거에서 시판)을 사용하는 미토콘드리아 활성의 결정법, 트리판청 배제법, 락테이트 데히드로게나아제(독일 만하임에 소재하는 뵈링거에서 시판)의 분석법에 의해 세포 생육력을 연구하였다. 검정은 제조업자(독일 만하임에 소재하는 뵈링거에서 시판)에 의해 기술된 바와 같이 수행하였다. 모든 실험은 세가지 모두의 검정법에서 세포 유형의 생육력이 80% 보다 큰 조건하에서 수행하였다.

세포 배양

ATCC CCL 23으로서 아메리칸 타입 배양 수집물로부터 Hep-2 상피 세포, 상피 종양 세포주를 수득하고, 5% 열 비활성화된 우태아 혈청, 4mM L-글루타민 및 80㎍/ml 젠타마이신을 함유하는 둘베코 개질화 독수리의 5% 이산화탄소하, 37℃에서 배양시켰다. 세포를 일주일에 두 번 계대배양시켰다.

바이러스 제조

문헌 [R. ARNOLD et al. in Immunology 82, 126-133 (1994)]에 기술된 바와 같이 바이러스를 제조하였다. 미정제 제조물에 대해, 호흡 합포체 바이러스(RSV), 롱 스트레인 (ATCC)을 성장시키고 HEP-2 세포중에서 적정하였다. 플라크 형성 유니트(PFU) 검정법으로 RSV 적정농도를 결정하였다. 연구에서 사용된 바이러스 푸울의 원액 적정농도는 5×10⁶PFU/ml이었다. 원액을 사용하기 전까지 -70℃에서 저장하였다. 인터루킨-8 (IL-8) 수준은 효소결합면역흡착검사(ELISA)에 의해 분석한 바, 원액에서 검출한계 이하였다. 미코플라스마 감염의 부재는 미코플라스마 특이적 PCR에 의해 증명하였다.

자극 실험

달리 명시되지 않으면, 사람의 PMN (1×10⁶/ml)은 지시된 시간 간격 동안 1ml RPMI-1640 배지의 용적으로 10까지 0.001의 감염 다중도[m.o.i]에 상응하는 다양한 양의 RSV(10³-10⁷) 플라크 형성 유니트[PFU]로 처리된다. 지시된 농도에서 세티리진 디하이드로클로라이드의 존재 또는 부재하에 인큐베이션을 수행하였다. 자극 실험의 세포 상청액을 원심분리에 의해 수집한 후, 분석을 위해 사용할 때까지 -70℃에서 저장하였다. 세포 상청액은 IL-8 결정을 위해 사용하였고; 세포 펠릿은 RSV_SH게놈 리보핵산(RNA) 검출을 위해 사용하였다.

IL-8 검정법

PMN을 1×10⁶/ml의 농도에서 RPMI 배지에서 현탁시켰다. 세포를 24 시간 이하의 시간 동안 적합하게 자극시키면서 배양하였다. 세포 상청액을 수집하고 이들의 IL-8 함량을 분석하였다. IL-8 릴리이스를 앞서 지시된 방법에 따라서 샌드위치 ELISA를 사용하여 결정하였다. 간략하게, 96웰 플레이트(덴마크 로스킬데에 소재하는 눈크 맥시소르브(Nunc Maxisorb)) 중의 각 웰 플레이트를 5㎍/ml의 농도로 안티 IL-8 항체를 함유하는 완충액/폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(등록상표: TWEEN 20) 100㎕로 4℃에서 밤새 코팅시켰다. 플레이트를 완충액/트윈으로 세 번 세척하고, IL-8 표준(재조합 사람 IL-8: 독일 바드 소덴에 소재하는 칼바이오켐(Calbiochem)에서 시판)의 적합한 샘플을 첨가하고, 37℃에서 2시간 동안 인큐베이션을 지속시켰다. 그런 다음, 알칼리성 포스파타아제 결합 안티 IL-8 항체를 첨가하였다. 정량을 위해 p-니트로페닐포스페이트(15mg/ml)을 첨가한 다음, ELISA 판독기 및 계산을 위한 미크로테크(Mikrotek) 소프트웨어(독일 크라일셰임에 소재하는 에스엘티 래브인스트루멘츠(SLT Labinstruments)에서 시판)를 사용하였다.

게놈 RSV-RNA의 분석

문헌 [R. ARNOLD et al., in Immunology 82, 126-133 (1944)]에 이전에 기술된 바와 같이 RSV의 작은 소수성 단백질을 위해 코딩시키는 RSV-게놈-RNA의 폴리머라아제 연쇄 반응(PCR) 검출 및 역전사를 커플링시켜서 RSV 특이적 게놈 RNA를 분석하였다. RSV 감염된 및 비감염된 PMN (1×10⁶/ml)로부터의 전체 RNA를 트리졸(독일 니에데레켄스테인에 소재하는 기브코(Gibco)에서 시판)을 사용하여 추출하였다. 센스 프라이머에 의한 역전사, 및 cDNA 복사물의 PCR 증폭 후, 게놈 RSV_SHRNA의 발현을 분석하였다. 역전사 단계는 10mM 트리스-HCl(pH 8.3), 5nM KCl, 5mM MgCl₂, 1mM 데스옥시누클레오티드, RSV_SH에 대한 100pM 센스 프라이머, 10U RNAse 억제제, 10㎕ RNA 샘플 및 몰로니 뮤린 루케미아 바이러스(독일 에켄스테인에 소재하는 기브코(Gibco)에서 시판)로부터의 200U 역전사 효소를 함유하는 반응 혼합물(최종 용적 20㎕)을 포함하였다. 60분 동안 37℃에서 역전사 반응을 수행하였다. cDNA 생성물의 PCR 증폭을 위해, 반응 혼합물을 50pM의 센스 및 안티센스 프라이머 및 2U Taq 폴리머라아제(독일 에켄스테인에 소재하는 키브코에서 시판)와 혼합시켰다. 20, 25 및 30 사이클의 생성물(94℃에서 1분; 53℃에서 2분; 72℃에서 3분)을 아가로오스겔상에서 분석하고, 에티듐 브롬화물 착색에 의해 가시화시켰다. RSV_SH에 대한 각각의 프라이머는 센스: 5'-ACCAATGGAAAATACATCC-3'; 안티센스: 5'-TGAATGCTATGTGTTG-3'이었다. 증폭 생성물의 예견된 크기는 앞서 인용된 알. 아르놀드(R. ARNOLD) 등에 따라서 RSV_SH에 대한 204 염기쌍이었다.

통계학적인 분석

달리 명시되지 않으면, 모든 데이터는 상이한 공여체로부터의 세포로 3개의 개별적인 실험값의 평균값을 나타낸다. 본 발명자들은 RSV로 사람의 PMN을 자극시킨 후 RSV 특이적 mRNA 발현에 대한 세티리진의 효과를 분석하였다. 따라서, 제 1 세트의 실험에서, 사람의 PMN (1×10⁶/ml)를 2시간 및 16시간 동안 1-, 0.5-, 0.05-, 0.005-의 m.o.i.에서 RSV로 처리하였다. 세 실험의 결과는 도 1에 도시되어 있으며; 사람의 PMN(1×10⁶/ml)를 처리하지 않은 상태로(레인 1,2 및 7,8) 남겨두거나 37℃에서 2시간(레인 1-6) 및 16시간(레인7-12) 동안 RSV (1 m.o.i.: 레인 3,9; 0.5 m.o.i.: 레인 4,10; 0.05 m.o.i.:레인 5,11; 0.005 m.o.i.: 레인 6,12)으로 처리하였다. 세포 펠릿을 SH 유전자의 RSV 특이적 mRNA 발현에 대해 분석하였다. 화살표는 증폭된 PCR 생성물. M: 123 염기쌍 사다리(독일 에케스테인에 소재하는 키브코 비알엘에서 시판)를 나타낸다. 도 1은 RSV 특이적 mRNA가 연장된 인큐베이션 시간에 따라서 내부에서 PMN을 증가시키는 것을 보여준다.

다음으로, 사람의 PMN (1×10⁶/ml)를 세티리진의 존재 또는 부재하에서 1의 감염 다중도에서 RSV로 처리하였다. 이들 실험의 결과는 도 2에 도시되어 있으며; 사람의 PMN을 처리하지 않은 상태로 남기거나(레인 1) 세티리진의 존재(레인 3-7; 100-, 10-, 1-, 0.1-, 0.01 ㎍/10⁶PMN) 또는 부재(레인 2)하에서 RSV (1의 감염 다중도)로 처리하였다. 인큐베이션을 37℃에서 2시간 동안(도 2a) 및 16시간 동안(도 2b) 지속시켰다. RT-PCR에 의해 RSV-SH-유전자의 RSV 특이적 mRNA에 대한 세포 펠릿을 분석하였다. 화살표는 적합한 크기 M:123 염기쌍 사다리의 증폭된 생성물(독일 에켄스테인에 소재하는 기브코 비알엘에서 시판)을 나타낸다. 도 2는 세티리진의 첨가로 인해 작은 소수성 (SH) 유전자의 RSV 특이적 mRNA 발현이 억제되는 것을 도시한다. RSV 특이적 mRNA 발현의 증가는 세티리진의 전체 농도 범위에서 관찰되었다. 더욱이, RSV 특이적 mRNA의 감소는 증식성 바이러스의 감소를 나타낸다. 항히스타민에 의한 이러한 바이러스성 복제의 억제가 이전에는 결코 관찰되지 않았음에 주목해야 한다.

사람의 PMN으로부터 유리된 RSV 유도된 IL-8에 대한 세티리진 디하이드로클로라이드의 효과

사람의 PMN (1×10⁶/ml)을 37℃에서 2시간의 전체 인큐베이션 시간 동안 세티리진 디하이드로클로라이드의 존재(100-, 10-, 1-, 0.1-, 0.01 ㎍/ml) 또는 부재하에서 1의 감염 다중도(m.o.i.)에서 RSV로 처리하였다. 대조로서, RSV의 부재하에 세티리진(레인 3-7; 100-, 10-, 1-, 0.1-, 0.01 ㎍/10⁶ml)으로 또는 세티리진 없이 세포를 처리하였다(완충액 대조군). 세포 상청액을 ELISA에 의한 IL-8 릴리이스에 대하여 분석하였다. 이들 실험의 결과는 도 3에 도시되어 있으며: 데이터는 평균치를 나타내며 표준 편차는 8개의 독립적인 실험으로부터의 값이다. 도 3은 세티리진 디하이드로클로라이드(이하 "세티리진"이라 칭함)이 RSV 유도 IL-8 릴리이스를 다운조절함을 도시한다. 그러나, 세티리진의 효과는 용량 의존적이었다. 이 점에 있어서, 0.01㎍/ml 보다 높으며 100㎍/ml 보다 낮은 농도에서 세티리진은 RSV 유도된 IL-8 릴리이스를 상당히 감소시킨다. 5 m.o.i. 이하의 RSV 농도에서 뿐만 아니라 24시간 이하의 인큐베이션 시간 후에 유사한 결과를 얻었다. RSV에 의한 IL-8 유도와 항히스타민 사이의 이러한 간섭이 이전에는 결코 관찰되지 않았음에 주목해야 한다.

RSV에 의해 유도된 진행중인 IL-8 릴리이스에 대한 세티리진의 효과

추가의 실험을 수행하여 RSV에 의해 진행중인 IL-8 릴리이스에 대한 세티리진의 효과를 분석하였다. 따라서, 사람의 PMN (1×10⁶/ml)를 RSV (1 m.o.i.) 및 세티리진(100㎍, 10㎍, 1㎍, 0.1㎍, 0.01㎍/ml)으로 처리하였다. RSV 처리의 개시 후 곧바로(도 4a), 30분(도 4b), 60분(도 4c) 또는 90분(도 4d)에 세티리진을 첨가하고; 37℃에서 2시간의 인큐베이션 시간을 선택하였다. 세포 상청액을 ELISA에 의해 IL-8 릴리이스에 대하여 분석하였다. 본 발명자들이 얻은 데이터는 세티리진이 RSV에 의해 진행중인 IL-8 릴리이스를 다운조절한다는 것을 보여준다. 그러나, 가장 현저한 효과는 세티리진이 RSV 처리의 개시시에 첨가될 때 관찰되었다. RSV 유도된 IL-8 릴리이스의 다운 조절은 0.01㎍/ml 보다 크며 10㎍/ml 보다 낮은 세티리진 농도에서 가장 현저하였다.

본 발명은 사람의 바이러스성 질환을 치료하기 위한 약제 조성물 및 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 호흡 합포체 바이러스(RSV)에 의해 야기되는 질환을 치료하기 위한 약제 조성물에 관한 것이다.

Claims

사람에게 있어 호흡 합포체 바이러스의 복제를 억제하기 위한 약제 조성물의 제조를 위한 활성 성분으로서 2-[2-[4-[(4-클로로페닐)페닐메틸]-1-피페라지닐]에톡시]-아세트산, 이들의 개개의 광학이성질체 또는 약제학적으로 허용되는 염을 사용하는 방법.
제 1항에 있어서, 약제 조성물이 활성 성분을 5mg 내지 50mg 함유하는 투여 형태를 가짐을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 치료 대상 질환이 급성 세기관지염 및 바이러스성 폐렴으로부터 선택됨을 특징으로 하는 방법.
제 1항에 있어서, 약제 조성물이 1종 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 추가로 포함함을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 4항 중의 어느 한 항에 있어서, 약제 조성물이 경구용으로 적합한 형태를 가짐을 특징으로 하는 방법.
제 5항에 있어서, 약제 조성물이 정제, 캡슐, 분말, 일렉시르, 시럽, 용액 또는 현탁액의 형태를 가짐을 특징으로 하는 방법.
제 1항 내지 제 4항 중의 어느 한 항에 있어서, 약제 조성물이 직장용으로 적합한 형태를 가짐을 특징으로 하는 방법.
제 7항에 있어서, 약제 조성물이 좌약의 형태를 가짐을 특징으로 하는 방법.
제 6항에 있어서, 약제 조성물이 0.1중량% 이상의 활성 성분을 함유하는 용액 또는 현탁액 형태를 가짐을 특징으로 하는 방법.