EA000088B1 - Ингибиторы тромбина, основанные на аминокислотной последовательности гирудина - Google Patents
Ингибиторы тромбина, основанные на аминокислотной последовательности гирудина Download PDFInfo
- Publication number
- EA000088B1 EA000088B1 EA199700239A EA199700239A EA000088B1 EA 000088 B1 EA000088 B1 EA 000088B1 EA 199700239 A EA199700239 A EA 199700239A EA 199700239 A EA199700239 A EA 199700239A EA 000088 B1 EA000088 B1 EA 000088B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- thrombin
- hirudin
- peptide
- pro
- derivative
- Prior art date
Links
- 229940006607 hirudin Drugs 0.000 title abstract description 35
- 108010007267 Hirudins Proteins 0.000 title abstract description 34
- 102000007625 Hirudins Human genes 0.000 title abstract description 33
- WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N hirudin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(OS(O)(=O)=O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N2)=O)CSSC1)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)CSSC1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 WQPDUTSPKFMPDP-OUMQNGNKSA-N 0.000 title abstract description 33
- 229940122388 Thrombin inhibitor Drugs 0.000 title abstract description 20
- 239000003868 thrombin inhibitor Substances 0.000 title abstract description 20
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 title 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 17
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims abstract description 14
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 62
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 10
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 abstract description 47
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 abstract description 37
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 20
- 101000712605 Theromyzon tessulatum Theromin Proteins 0.000 abstract description 11
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 abstract description 10
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 abstract description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 abstract 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 abstract 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 27
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 25
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 21
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 14
- -1 (1989) Proteins 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 9
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 7
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 6
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 6
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 5
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 5
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 4
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 4
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 4
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 4
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 3
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 230000003024 amidolytic effect Effects 0.000 description 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 3
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000014508 negative regulation of coagulation Effects 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 3
- 229920005990 polystyrene resin Polymers 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- YBCAZPLXEGKKFM-UHFFFAOYSA-K ruthenium(iii) chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Cl-].[Ru+3] YBCAZPLXEGKKFM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 3
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DMAYBPBPEUFIHJ-UHFFFAOYSA-N 4-bromobut-1-ene Chemical compound BrCCC=C DMAYBPBPEUFIHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 206010051055 Deep vein thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 description 2
- YNPNZTXNASCQKK-UHFFFAOYSA-N Phenanthrene Natural products C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=CC2=C1 YNPNZTXNASCQKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N Tert-Butanol Chemical compound CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 2
- DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N [1,10]phenanthroline Chemical compound C1=CN=C2C3=NC=CC=C3C=CC2=C1 DGEZNRSVGBDHLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 2
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M iron chloride Chemical compound [Cl-].[Fe] FBAFATDZDUQKNH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N oxalyl chloride Chemical compound ClC(=O)C(Cl)=O CTSLXHKWHWQRSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229960000103 thrombolytic agent Drugs 0.000 description 2
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- YHGNXQAFNHCBTK-OWOJBTEDSA-N trans-3-hexenedioic acid Chemical compound OC(=O)C\C=C\CC(O)=O YHGNXQAFNHCBTK-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- VJZRBVVLWLEXBB-VROPFNGYSA-N (2s)-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 VJZRBVVLWLEXBB-VROPFNGYSA-N 0.000 description 1
- JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N (4s)-4-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]acetyl]amino]-5-[[2-[[(2s)-3-carboxy-1-[[(2s)-1-[[1-[[(2s)-1-[[(2s)-4-carboxy-1-[[2-[[2-[[2-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-4-(diaminomethylideneamino Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)CC1=CC=CC=C1 JWICNZAGYSIBAR-LEEGLKINSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDSLUVIUYZTOOM-UHFFFAOYSA-N 2-(diaminomethylideneamino)-10-(4-methylphenyl)sulfonyl-7-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]-6-oxodecanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)CCCC(C(=O)CCCC(N=C(N)N)C(O)=O)C(=O)OC(C)(C)C)C=C1 KDSLUVIUYZTOOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OMWCMESDAKEUQV-UHFFFAOYSA-N 2-(diaminomethylideneamino)-8-(4-methylphenyl)sulfonyl-5-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]-4-oxooctanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)CCCC(C(=O)CC(N=C(N)N)C(O)=O)C(=O)OC(C)(C)C)C=C1 OMWCMESDAKEUQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRBYYCQHHVUQHX-UHFFFAOYSA-N 2-(diaminomethylideneamino)-9-(4-methylphenyl)sulfonyl-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]-5-oxononanoic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)CCCC(C(=O)CCC(N=C(N)N)C(O)=O)C(=O)OC(C)(C)C)C=C1 BRBYYCQHHVUQHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanoic acid Chemical group CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LPNANKDXVBMDKE-UHFFFAOYSA-N 5-bromopent-1-ene Chemical compound BrCCCC=C LPNANKDXVBMDKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RIMXEJYJXDBLIE-UHFFFAOYSA-N 6-bromohex-1-ene Chemical compound BrCCCCC=C RIMXEJYJXDBLIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000024188 Andala Species 0.000 description 1
- 102000007347 Apyrase Human genes 0.000 description 1
- 108010007730 Apyrase Proteins 0.000 description 1
- 206010003178 Arterial thrombosis Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 208000010667 Carcinoma of liver and intrahepatic biliary tract Diseases 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N D-Asparagine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014522 Embolism venous Diseases 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 101800000974 Fibrinopeptide A Proteins 0.000 description 1
- 102400000525 Fibrinopeptide A Human genes 0.000 description 1
- 239000007818 Grignard reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010073069 Hepatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000545744 Hirudinea Species 0.000 description 1
- 241000237902 Hirudo medicinalis Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007832 Na2SO4 Substances 0.000 description 1
- 206010061876 Obstruction Diseases 0.000 description 1
- 101150112132 PAP4 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002582 Polyethylene Glycol 600 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- APTGPWJUOYMUCE-UHFFFAOYSA-N S-Ethyl thioacetate Chemical compound CCSC(C)=O APTGPWJUOYMUCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- 102400000827 Saposin-D Human genes 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010023197 Streptokinase Proteins 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N [azido(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(=O)(N=[N+]=[N-])OC1=CC=CC=C1 SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000000266 alpha-aminoacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012964 benzotriazole Substances 0.000 description 1
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 1
- 238000011955 best available control technology Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006278 bromobenzyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000012754 cardiac puncture Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 229910052729 chemical element Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 108010018472 chromozym TH Proteins 0.000 description 1
- 108010055222 clotting enzyme Proteins 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000009146 cooperative binding Effects 0.000 description 1
- GBRBMTNGQBKBQE-UHFFFAOYSA-L copper;diiodide Chemical compound I[Cu]I GBRBMTNGQBKBQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 1
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N dimethylformamide dmf Chemical compound CN(C)C=O.CN(C)C=O UXGNZZKBCMGWAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N diphenylphosphoryl azide Chemical compound C=1C=CC=CC=1P(=O)(N=[N+]=[N-])C1=CC=CC=C1 MKRTXPORKIRPDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000002224 dissection Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000012259 ether extract Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N etoac etoac Chemical compound CCOC(C)=O.CCOC(C)=O OJCSPXHYDFONPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 150000004795 grignard reagents Chemical class 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 229910052738 indium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002250 liver carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 1
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- OTCKOJUMXQWKQG-UHFFFAOYSA-L magnesium bromide Chemical compound [Mg+2].[Br-].[Br-] OTCKOJUMXQWKQG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001623 magnesium bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000006510 metastatic growth Effects 0.000 description 1
- OJURWUUOVGOHJZ-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(2-acetyloxyphenyl)methyl-[2-[(2-acetyloxyphenyl)methyl-(2-methoxy-2-oxoethyl)amino]ethyl]amino]acetate Chemical compound C=1C=CC=C(OC(C)=O)C=1CN(CC(=O)OC)CCN(CC(=O)OC)CC1=CC=CC=C1OC(C)=O OJURWUUOVGOHJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOPLHGOSNCJOOO-UHFFFAOYSA-N methyl 3,4-diaminobenzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(N)C(N)=C1 IOPLHGOSNCJOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N phosphamidon Chemical compound CCN(CC)C(=O)C(\Cl)=C(/C)OP(=O)(OC)OC RGCLLPNLLBQHPF-HJWRWDBZSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 230000010118 platelet activation Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229960005202 streptokinase Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- ZERULLAPCVRMCO-UHFFFAOYSA-N sulfure de di n-propyle Natural products CCCSCCC ZERULLAPCVRMCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- VBZOLPGESFIFCE-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 7-(diaminomethylideneamino)-2-[3-(4-methylphenyl)sulfonylpropyl]-3-oxohept-6-enoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)CCCC(C(=O)CCC=CN=C(N)N)C(=O)OC(C)(C)C)C=C1 VBZOLPGESFIFCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran thf Chemical compound C1CCOC1.C1CCOC1 WHRNULOCNSKMGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- RZWIIPASKMUIAC-VQTJNVASSA-N thromboxane Chemical compound CCCCCCCC[C@H]1OCCC[C@@H]1CCCCCCC RZWIIPASKMUIAC-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000004043 venous thromboembolism Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Настоящее изобретение относится к производным пептидов, используемых в качестве ингибиторов тромбина и, в частности к производному пептида, основанному на последовательности сегмента гирудина, содержащего с 45 по 65 аминокислоты.
Тромбин является важным компонентом сериновой протеазы в каскаде свертывания крови. Помимо инициации свертывания крови путем расщепления фибриногена, тромбин активирует другие факторы гемоагглютинации, включающие факторы V, VIII и XIII, и противосвертывающий фермент белок С. Тромбин также является мощным активатором тромбоцитов, который in vivo ослабляет лизис тромбов, опосредованный тканевым активатором плазминогена. Таким образом, позитивная обратная регуляция тромбина служит для усиления гемостатических процессов, но приводит к образованию опасных для жизни тромбов в ответ на отклонения в кровеносных сосудах и артериях головного мозга.
Определяющие различные функции этого фермента, его ингибирование мощными и специфическими компонентами могли бы обеспечить неоценимое дополнение к лечению заболеваний, относящихся к тромбозу. Они включают: заболевания коронарных сосудов, заболевания сосудов головного мозга, закупорку периферических артерий, глубокий венозный тромбоз и эмболию легочных артерий.
Наиболее мощным ингибитором тромбина, известным в настоящее время, является гирудин, семейство изо-белков, выделенных из секретов желез пиявок Hirudo Medicinalis. Противосвертывающие свойства гирудина известны в течение длительного времени. Однако до последнего времени это имело небольшое терапевтическое значение, т. к. формулирование этого белка в достаточно эффективную и легко вводимую форму представляется трудным из-за крайне низкой подкожной абсорбции и абсорбции в тонком кишечнике, что делало невозможным обеспечить достаточный уровень белка в кровяном русле.
Далее, клиническое использование гирудина, изолированного из экстрактов пиявок, маловероятно из-за его ограниченного количества, затрат и аллергических реакций, которые обычно могут иметь место при введении чужеродных белков, имеющих размер гирудина.
В своей публикации, названной Фармакология селективных ингибиторов тромбина (Pharmacology of selective thrombin inhibitors, (1988), Nouv.Rev.Fr.HematoL, 30, с. 161-165), Макуорд (Markwardt) представил дополнительные клинические данные о гирудине, основанные на результатах фармакологических исследований, проведенных и для природных, и для синтетических ингибиторов тромбина.
Автор делает общие выводы относительно гирудина, упоминая о том, что пептид, который содержит высококислотную С-терминальную часть, является высокоспецифичным к αтромбину. Далее он заключает, что Стерминальная часть гирудина, вероятно, способна связываться с анионной областью сайта связывания фермента, в то время как компактная N-терминальная часть, представляется, способна связываться с активной областью сайта фермента.
Было обнаружено, что нативный десульфогирудин45-65 ингибирует свертывание фибриногена и бычьим, и человеческим α-тромбином дозозависимым образом. Значение IC50 при 940200 нм для бычьего α-тромбина находится в хорошем соответствии с описанным значением формирования сгустка фибрина в плазме для того же фрагмента, и в три раза ниже, чем гирудин45-65, который представлялся как минимальный кор, необходимый для противосвертывающей активности. Также было продемонстрировано, что те же пептиды последовательно являлись более мощными против человеческого αтромбина, чем против бычьего α-тромбина.
В различных источниках в этой области также продемонстрировано, что активный фрагмент аминокислотной последовательности гирудина является аминокислотной последовательностью, включающей аминокислоты с 45 по 65. С тех пор были сделаны попытки увеличить ингибиторные активности пептида путем замены некоторых из аминокислот, присутствующих в этой последовательности.
Крстенанский с соавторами (Krstenansky et al., Antithombin properties of C-terminus of hirudin using synthetic unsulfated Na-acetyl-hirudin, (1987), Febs Letters, Vol. 211, No. I, pages 10-16) описывают синтез С-терминального фрагмента несульфинированного Nα-ацетил-гирудина45-65. Авторы ссылаются на предыдущую работу (Chang, J.-V., FEBS Letters, 164, 307 (1983)) и упоминают, что этот фрагмент потенциально может содержать два специфических связывающих домена, один, связывающийся с каталитическим сайтом тромбина, и другой, связывающийся с другим сайтом распознавания тромбина. Другие авторы заключают, что это не так.
Тем не менее, авторы продемонстрировали, что последовательность гирудина45-65 способна ингибировать свертывающую активность, как и высвобождение фибринопептида А тромбином. Они также предположили, что та же последовательность гирудина45-65 не может быть непосредственно вовлечена в связывание с каталитическим сайтом тромбина, так как амидолитические свойства тромбина не проявляются по отношению к синтетическим субстратам.
В статье Крстенанского с соавторами (Krstenansky et al., Anticoagulant peptides: nature of the interaction of the C-terminal region of hirudin with a noncatalic site on thrombin, (1987), J.
Med. Chem., 30, p. 1688-1691) авторы показывают, что минимальной активной последовательностью в некаталитическом сайте связывания тромбина является гирудин56-64. Основываясь на этом заключении, авторы сообщают о синтезе нескольких аналогов С-терминального гирудина56-64 и их способности ингибировать формирование индуцированного тромбином фибринового сгустка для того, чтобы установить природу взаимодействия между гирудином56-64 и некаталитическим сайтом связывания тромбина.
В своем заключении авторы высказывают мысль, что С-терминальная область гирудина может связываться с областью фибриногена, связывающейся с тромбином, что не является той областью, которая до сих пор предполагается в литературе.
В статьях (Dodt et al., Interaction of site specific hirudin variants with α-thrombin, (1988), Febs Letters, Vol.229, No. I, pages 87-90; Degryse et al., Point mutations modifying the thrombin inhibition kinetics and antithrombin activity in vivo ofrecombinant hirudin, (1989), Protein Engineering, Vol.2, No.6, pages 459-465, и Braun et al., Use of site-directed mutagenesis to investigate the basis for the specificity of hirudin, (1988), Biochemistry, 27, pages 6517-6522) авторы сообщают результаты сайт-направленного мутагенеза на гене гирудина. Исследовалось ингибирование тромбина мутированными пептидами гирудина.
В этих публикациях авторы исследовали мутации, действовавшие на полный белок, и не ограничивались сегментом гирудина 45-65. Далее, модификации сегмента 45-65 ограничили до единственной модификации, обычно в положении 47, для демонстрации того, что этот остаток не взаимодействует с активным сайтом, хотя эти публикации показывают также мутации в положениях 51,57,58,61 и 62.
Сходным образом в статье Додта с соавторами (Dodt et al., Distinct binding sites of Ala48Hirudin1-47 and Ala48-Hirudin48-65 on α-thrombin, (1990), The Journal of Biological Chemistry, Vol.265, No.2, pp. 713-718) описываются эксперименты по проведению сайт-направленного мутагенеза гирудина в положении последовательности 48. В этом случае представляется, что проделанная Додт с соавторами работа была ограничена до замены аланина на пролин в этом положении с целью облегчить необходимый протеолиз, требуемый для их эксперимента.
Наконец, Мараганор с соавторами (Maraganore et al., Anticoagulant activity of synthetic hirudin peptides, (1989), The Journal of Biological Chemistry, Vol.264, No. 15, pages 8692-8698), Дэннис с соавторами (Dennis et al., Use of fragment of hirudin to investigate thrombin-hirudin interaction, (1990), Eur.J.Biochem. 188, pages 6166) и Чанг с соавторами (Chang et al., The structural elements of hirudin which bind to the fibrinogen recognition site of thrombin are exclusively located within its acidic C-terminal tail, (1990), Febs., Vol.261, No.2, pages 287-290) описывают синтез и противосвертывающие свойства числа пептидов, чьи последовательности основаны на последовательности различных фрагментов природного гирудина.
Соединения, имеющие противосвертывающие свойства, являются ценными терапевтическими средствами, которые могут быть использованы in vivo в лечении различных патологических состояний. Среди наиболее важных состояний, при которых может быть использовано противосвертывающее лечение, могут быть упомянуты инфаркт миокарда, эмболия легочных артерий и заболевания сосудов головного мозга, глубокий венозный тромбоз и другие проявления тромботических заболеваний.
Доступные в настоящее время антикоагулянты во многих отношениях являются неудовлетворительными. Например, гепарин использовался для ингибирования активности тромбина и, вследствие этого, при лечении таких состояний, как венозный тромбоз и тромбоэмболия. Однако гепарин проявляет множество нежелательных побочных эффектов, что указывает на необходимость в наличии антикоагулянтов, проявляющих более подходящие уровни токсичности.
Дизайн низкомолекулярных и специфических ингибиторов тромбина, который использует добавочный локус связывания, отстоящий от, или соединенный с каталитическим центром, сходный с тем, как фибриноген или гирудин связывются с тромбином, представляет собой сложную задачу в белковой химии. Предположительно, такой мультифункциональный ингибитор объединяет два или более разделенных подходящим спейсером элемента распознавания, которые способствуют множественным одновременным взаимодействиям и которые могли бы проявить увеличенную эффективность и специфичность. Введение чужеродных химических элементов, воплощенных в структуре с низким молекулярным весом, могло бы придать сопротивление протеолизу и желательную биопригодность. Также, из-за меньшего, чем гирудин, размера, эти соединения, возможно, менее способны вызывать нежелательный иммунный ответ у получивших ими лечение пациентов.
Заявка РСТ WO 91/02750 указывает, что определенные ингибиторы тромбина обладают CSDMs, которые могут разрезаться медленно или не разрезаться вообще. Однако, все, что они раскрыли, это модифицированные связи между аргинином и глицином или пролином, такие как ЛрЦф/дюймАЩ-ИЩ-Гли; β-ГомоАрг-Гли; βГомоАрг-Про; β-ГомоАрг-Вал; или Арг-[ТСОСН2]-СН2-(СОИН)-Гли. Не существует указания, что аминокислоты глицин или пролин могут быть полностью удалены и заменены на синтетический линкер, который полностью устойчив к разрезанию тромбина.
Составом настоящего изобретения является производное пептида (I) формулы (Р)-ФенПро-Арг-(СН2)4(СО)-[МН-(СН2)4СО]2-ПРЕР1РЕ, которое имитирует карбоксильную область гирудина, состоящую из остатков 45-65. Буквы D,F,E,P,I и L обозначают аминокислоты в соответствии с известным однобуквенным кодом. (Примечание: в номенклатуре аминокислот, принятой в русскоязычной литературе, не существует однобуквенных обозначений. Вышеуказанные аминокислоты далее обозначены и соответствуют: D - аспарагину (Асп), F - фенилаланину (Фен), Е - глутамину (Глу), Р - пролину (Про), I - изолейцину (Иле), L - лейцину (Лей).)
В другом аспекте изобретения обеспечивается фармацевтический состав для лечения тромботических заболеваний, содержащий эффективное количество производного пептида (I) ^)-Фен-Про-Арг-(СН2)4(СО)-[ИН-(СН2)4СО]2Асп-Фен-Глу-Про-Иле-Про-Лей и его фармацевтически приемлемые соли.
В другом аспекте изобретения обеспечивается способ лечения или профилактики сосудистых заболеваний, относящихся к тромбозам, состоящий из введения пациенту эффективного количества производного пептида (I) ф)-ФенПро-Арг-(СН2)4(СО)-[ИН-(СН2)4СО]2-Асп-ФенГлу-Про-Иле-Про-Лей.
В дальнейшем, состав изобретения также может быть использован в композициях и способах для визуальной диагностики in vivo, для хранения экстракорпоральной крови in vitro и покрытия инвазивных приспособлений, и для обработки крови ex vivo.
Настоящее изобретение относится к производному пептида, подходящему к использованию в качестве ингибитора тромбина. Было обнаружено, что природный фрагмент гирудина, содержащий остатки 45-65, может одновременно взаимодействовать с двумя независимыми и удаленными сайтами тромбина, одним сайтом, являющимся мнимым анионным экзосайтом, в то время как другой - каталитическим сайтом, ответственным за протеолиз. Этот тип связывания имитирует, но является отличным от механизма природной молекулы гирудина, которая, как было показано, взаимодействует с активным центром тромбина через свои три Nтерминальные остатка. Таким образом, очевидно, что остатки 45, 46 и 47 не служат для связывающей функции в природном белке, но, в отсутствие N-терминального кора, пространственно правильно предрасположены для взаимодействия, хотя и слабого.
Основываясь на этом наблюдении, мы синтезировали производное пептида, которое несет модификации в обоих ингибиторных компонентах молекулы и которое проявляет антитромбиновую активность выше того уровня, который проявлялся бы каждым из компонентов в отдельности. Далее, химическая модификация вновь сформированной химической связи приводит к образованию более активного соединения, которое имеет преимущество быть протеолитически стабильным к тромбину. Производное пептида полезно в качестве антикоагулянта и как ингибитор аггрегации тромбоцитов, понижая таким образом фактор риска в показаниях при артериальном тромбозе и при других относящихся сюда сердечно-сосудистых заболеваниях. Состав изобретения также может быть использован в лечении метастазов опухоли, как в случае карцином.
Термин остаток, будучи примененным к α-аминокислоте, означает радикал, полученный из соответствующей α-аминокислоты путем удаления гидроксильной или карбоксильной группы и одного водорода из α-аминогруппы.
Использованные здесь обозначения для определенных индивидуальных остатков базируются на рекомендациях IUPAC-IUB Комиссии по Биохимической Номенклатуре [Biochemistry, II, 1726-1732, (1972)]. Термин аминокислота, использованный здесь, включает находящиеся в природе аминокислоты, также как и неприродные аналоги, как те, которые широко используются работающими в области химического синтеза и химии пептидов. Перечень неприродных аминокислот может быть найден в The Peptides, vol.5, 1983, Academic Press, Chapter 6, авторы D.C.Roberts, F.Vellaccio.
Также, в рамках настоящего изобретения находится способ для лечения или профилактики сосудистых заболеваний, имеющих отношение к тромбозу. Способ содержит введение пациенту эффективного количества состава, состоящего из производного пептида в смеси с фармацевтически приемлемым носителем.
Изобретение также относится к способу понижения времени реперфузии или увеличению времени повторной закупорки у пациента, подвергающегося лечению тромболитическим агентом. Способ состоит из введения пациенту эффективного количества состава, содержащего производное пептида в соответствии с изобретением, и тромболитического агента в смеси с фармацевтически приемлемым носителем.
В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения производное пептида в соответствии с изобретением может быть использовано в лечении метастазов опухоли. Эффективность производного для лечения метастазов опухоли проявляется путем ингибирования метастатического роста. Это основано на присутствии просвертывающего фермента в определенных раковых клетках. Этот фермент активирует превращения Фактора Х и Фактора Ха в каскаде свертывания, приводя к накоплению фибрина, который, в свою очередь, служит в качестве субстрата для роста опухоли. Ингибируя накопление фибрина через ингибирование тромбина, молекулы настоящего изобретения служат как эффективные агенты против метастатических опухолей. Примеры метастатических опухолей, при лечении которых могут быть использованы ингибиторы тромбина этого изобретения, включают, но не ограничиваются, карциному мозга, карциному печени, карциному легких, остеокарциному и карциному клеток неопластической плазмы.
В соответствии с другим аспектом ингибитор тромбина может быть использован в составах и способах для покрытия поверхностей инвазивных приспособлений, снижая риск образования сгустков или активации тромбоцитов у пациентов, получающих такие приспособления. Поверхности, которые могут быть покрыты составами этого изобретения, включают, например, протезы, искусственные клапаны, сосудистые имплантанты, анастамозы и катетеры. Способы и составы для покрытия этих приспособлений известны экспертам в области. Они включают химическую кросс-реакцию или физическую адсорбцию составов, содержащих ингибитор тромбина, на поверхность приспособлений.
В соответствии с дальнейшим воплощением настоящего изобретения ингибитор тромбина может быть использован для визуальной диагностики тромбов у пациента. В этом воплощении ингибитор тромбина помечают радиоизотопом. Выбор радиоизотопа основан на числе хорошо известных факторов, например токсичности, биологической полужизни и детектируемости. Предпочтительные изотопы включают, но не ограничиваются, I, I и In. Методики мечения ингибитора тромбина хорошо известны в области. Наиболее предпочтительно, если радиоизотопом является 123I и мечение достигается с использованием реагента 123I-Bolton-Hunter. Помеченный ингибитор тромбина вводится пациенту и предоставляется для связывания с тромбином, содержащимся в сгустке. Затем сгусток исследуют, используя хорошо известные средства определения, такие как камера для определения радиоактивности, соединенная с компьютерной визуальной системой. Эта техника также обеспечивает изображение связанного с тромбоцитами тромбина и мейзотромбина.
Иным образом описанный выше ингибитор тромбина или составы на его основе могут быть использованы как антикоагулянты для обработки крови ex vivo или для обработки экстракорпоральной крови (in vitro). Будучи использованным здесь термин обработка ех vivo включает удаление крови пациента по трубкам, экстракорпоральную обработку крови и далее возвращение ее пациенту, как при процедурах диализа, фильтрации крови или при отведении крови во время операции. Будучи использованным здесь термин экстракорпоральная кровь относится к продуктам крови, которые хранятся экстракорпорально для возможного введения пациенту, и к крови, собранной у пациента для использования при различных анализах. Такие продукты включают полную кровь, плазму или любую фракцию крови, в которой желательно ингибирование свертывания.
Производное пептида настоящего изобретения может быть синтезировано с использованием различных методов, хорошо известных экспертам в области. Например, пептиды могут быть синтезированы твердофазным методом, таким как описано Стьювартом с соавторами (Stewart et al., Solid phase peptide synthesis, Freeman & Co., San Francisco, 1969), на подходящем пептидном синтезаторе. Неаминокислотные области производного пептида требуют химического синтеза перед связыванием этой доли с другими аминокислотами для получения требуемого пептида через подходящий твердофазный синтез. Работающим в области будет удобно, если опытный химик-органик сможет подготовить синтетические области производного пептида.
Синтез производного пептида.
Производное пептида может быть синтезировано на пептидном синтезаторе Applied Biosystems 430А с использованием смолы BOCGlnPAM (Applied Biosystems; 0,64 ммоль/гр) в качестве поддержки твердой фазы. Связывание аминокислот проводят с использованием дициклогексилкарбодиимида/Ы-гидроксибензолтриазола и снятие защиты проводят 50% трифторуксусной кислотой (TFA) в метиленхлориде в течение 3 мин с последующим дополнительным 20-минутным циклом. Защищенными группами боковых цепей были следующие: Асп (Chx), Арг (Tos). Полностью защищенная пептидная смола может далее быть обработана жидким фторводородом, содержащим анизол и диметилсульфид (10% по объему), при -5°С в течение 60 мин. Избыток фторводорода далее может быть удален под струей азота, и оставшийся осадок проэкстрагирован эфиром и отфильтрован. Смола может далее быть экстрагирована ледяной уксусной кислотой и водой с последующей лиофилизацией.
Очистка и анализ производного пептида.
Полученный лиофилизированный грубый пептид может быть очищен до гомогенности с использованием широко принятых методов очистки пептидов. Одним из подходящих методов является хроматография на обращенной фазе на колонке Vydac octadecyl silica glass (15 A, 1,5 x 30 см, 40 ф/дюйм2) с использованием линейного градиента системы растворителей: А, 500 мл 500 мл 0,1% TFA/фО и Б, 1 л 60% ацетонитрит/Н2О, содержащий 0,1% TFA. Фракции могут быть анализированы обратнофазной жидкостной хроматографией под высоким давлением на Varian LC с использованием аналитической колонки Vydac С 18 и определены при 215 нм. Фракции, относящиеся к степени чистоты более
99%, могут быть объединены и лиофилизированы. Содержание пептида может быть определено анализом аминокислот на аминокислотном анализаторе модели Beckman 6300. Далее пробы высушивают в Water Pico-Tag Work Station. К виале добавляют постоянно кипящую НО (200μ), содержащую 1% фенол, и попеременно очищают (сухим азотом), и отводят после трех очисток. Наконец, виалу, содержащую пробу, нагревают до 150°С в течение 1 ч в вакууме. Масс-спектральные анализы могут быть проведены на спектрометре SCIEX API III, оборудованном источником входа ионного распылителя.
Таким образом, структура и последовательность синтезированного пептида могут быть подтверждены правильностью аминокислотного состава и масс-спектра для демонстрации совпадения с подсчитанными молекулярными весами.
Фармацевтические композиции.
Производное пептида настоящего изобретения может быть получено в форме терапевтически приемлемых солей. Так как производное пептида имеет остатки, которые функционируют и в кислой, и/или в щелочной средах, значит далее могут быть образованы соли органических кислот (например, уксусной, трифторуксусной, молочной, янтарной или яблочной) или оснований (например, натриевой, калиевой или кальциевой). Эти соли производных пептидов являются полностью биологически активными. Терапевтически приемлемые соли могут быть переведены из одной соли в другую путем использования подходящей ион-обменной смолы способом, описанным Бойсонассом с соавторами (Boissonas et al., Helv.Chim.Acta. 43, 1849 (1960)).
Производное пептида или его терапевтически приемлемые соли могут быть использованы исключительно или в комбинациях для лечения или профилактики сосудистых заболеваний как следствие тромбозов. Вводится систематично теплокровным животным, например лошадям или собакам, а так же людям, с фармацевтически приемлемыми переносчиками, пропорция и состав которых зависит от растворимости и избранного способа введения. Производное пептида настоящего изобретения вводится либо внутривенно или подкожно, либо путем внутримышечной инъекции в комбинации с фармацевтически приемлемыми переносчиками. Примеры подходящих переносчиков можно найти в стандартных фармацевтических текстах, например Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Mack Publishing Company, Easton, Penn., 1980.
Дозировка производного пептида будет варьировать в зависимости от типа введения и, возможно, от определенной соли. В случае инъекции терапевтически эффективная доза производного пептида находится в дозировке диапазона от, примерно, 0,05 до 10 мг/кг веса тела. В добавление к активному ингредиенту состав, обычно, также содержит подходящие буфера, например фосфатный буфер, для поддержания подходящего значения рН, и хлорид натрия, глюкозу или маннитол для того, чтобы сделать раствор изотоническим.
Производное пептида настоящего изобретения может вводиться исключительно или в комбинации с другими фармацевтическими препаратами. Например, производное пептида может вводиться в комбинации с фибринолитиками, такими как тканевой активатор плазминогена, стрептокиназа или урокиназа, для предотвращения повторной закупорки коронарных артерий. Альтернативно, производное пептида можно вводить с гепарином или низкомолекулярным гепарином. Другие соединения, которые могут вводиться с производным пептида, включают тромбоксан и ЕРПЬЗа.
Сокращения, использованные в следующих примерах, включают: ВОС - тертбутоксикарбонил; Tos - р-толуенсульфонил; CH2Cl2 - метиленхлорид; TEA - триэтиламин; ВОР - бензотриазол N-окситрисдиметиламинофосфониумгексафлуорофосфат; DMF - диметилформамид; EtOAc - этилацетат; DCC - Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид; DPPA дифенилфосфорилазид; THF - тетрагидрофуран; HF - фтороводород, CBZ - бензилоксикарбонил.
Пример 1. Синтез ДО)-2-(ВОС)-№ метокси-^метил-5-тосилгуанадинопентанамида.
К раствору Να-BOC-NG-Tosyl аргинина (428 мг, 1 ммоль) в 30 мл DMF, при 0°С в ледяной бане, содержащей TEA (0,4 мл, 3 ммоль) и ^О-диметилгидроксиламин гидрохлорид (146 мг, 1,5 ммоль), добавляли реагент ВОР (500 мг, 1,1 ммоль) (B.Castro, J.R.Dormoy, G.Elvin, C.Selve, Tetrahedron Letters # 14, pp. 1219-1222, 1975). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 ч при 4°С, после чего растворитель выпаривали под высоким вакуумом. Осадок растворяли в 50 мл EtOAc и промывали Н2О. Органическую фазу далее экстрагировали 5% NaHC.O3 (3 раза), 1N НО (3 раза) и высушивали над №-1ДО4. Растворитель фильтровали через селит и концентрировали in vacuo. Добавление небольшого количества гексана к концентрату приводит к накоплению белого твердого тела, соответствующего названному соединению. Масс-спектральный анализ: M/Z=472 (М+Н)+.
Пример 2. Синтез 6-ВОС-9-тосилгуанидино-1-нонен-5-он.
К раствору продукта из примера 1 (600 мг, 1 ,3 ммоль) в 25 мл THF добавляли 1 0 эквивалентов реагента Гринарда (Grignard), приготовленного из 4-бромо-1-бутена (примечание по приготовлению: 312 мг магниевых стружек (13 ммоль) в 50 мл безводного эфира обрабатывали 1 ,75 г 4-бромо-1 -бутена капельным образом для поддержания мягкого слива). После полного расхода металла раствор Гринарда переносили шприцем под аргоном в смесь THF. Полную смесь THF охлаждали водным NH4Cl после того, как TCL показывал исчезновение исходных материалов (TCL был приготовлен на Kieselgel® 60F 254, Merck, стеклянные подложки). Фазы разделяли и далее органическую фазу промывали 1N НО и Н2О, высушивали (Na2SG4) и выпаривали под вакуумом. Хроматографией на силикагеле (элюция смесью EtOAc/гексан в соотношении 4:1 ) получали чистое масло, соответствующее названному соединению. Массспектральный анализ M/Z = 469 (М+Н)+.
Пример 3. Синтез 5-ВОС-4-оксо-8-тосилгуанидинооктаноиковой кислоты.
Продукт из примера 2 (2,5 г, 5,3 ммоль) растворяли в 50 мл ацетонитрила с последующим добавлением периодата натрия (8 г, 37,5 ммоль), растворенного в 50 мл воды. Полную смесь обрабатывали 1 00 мг хлорида рутения. После интенсивного перемешивания в течение одного часа при комнатной температуре не было обнаружено исходных компонентов по TLC. Смесь разводили 100 мл H2O и 100 мл эфира. Разделяли фазы и далее экстрагировали водную фазу эфиром. Собранные органические экстракты промывали H2O, высушивали (Na2SO4) и выпаривали досуха, получая 1,5 г пены, соответствующей названному соединению. M/Z = 485 (М+Н)+.
Пример 4. Синтез 6-ВОС-5-оксо-9-тосилгуанидинононаноиковой кислоты.
Названное соединение этого примера синтезировали способом, аналогичным примерам с 1 по 3. Кратко, продукт из примера 1 подвергали реакции с реагентом Гринарда, приготовленного из магния и 5-бромо-1-пентена. Конечный продукт, изолированный как масло, аналогично примеру 3 последовательно обрабатывали комбинацией периодата натрия и хлорида рутения для получения гомолога названного соединения этого примера. M/Z = 499 (М+Н)+.
Пример 5. Синтез 7-ВОС-6-оксо-10-тосилгуанидинодеканоиковой кислоты.
Названное соединение этого примера было приготовлено способом, аналогичным примерам с 1 по 4. В этом примере продукт из примера 1 подвергали реакции с реагентом Гринарда, приготовленным из магния и 6-бромо-1 -гексена.
После отделения продукта путем хроматографии на силикагеле, как описано в примере 2, продукт подвергали реакции с периодатом натрия и хлоридом рутения. Отделение продукта приводило к получению названного соединения в виде масла. M/Z = 513 (М+Н)+.
Этил; 4^КВОС-3 -оксо-7 -тосилгуанидин тиогептаноат (смешанный безводный способ).
Формирование смешанного ангидрида: к перемешиваемому раствору 1г (2,4 ммоль) (L)Na-BOC-ApT(Nw)TOS)OH и 0,66 мл (0,48 ммоль) триэтиламина в 1 5 мл безводного тетрагидрофурана при -20°С добавляли 0,40 мл (0,3 ммоль) изо-бутилхлороформата капельным способом в течение 1 5 мин. После 1 ч смесь разбавляли 1 5 мл эфира и фильтровали выпавший осадок. Фильтрат, содержащий смешанный ангидрид, хранили при 0°С.
Тем временем, перемешиваемый раствор ди-изо-пропиламина (3,4 мл, 24 ммоль) в 25 мл безводного эфира под аргоном обрабатывали при 0°С одним эквивалентом N-But Li в THF капельным способом в течение 30 мин. После этого реакционную смесь охлаждали до -60°С и обрабатывали 2,5 мл этилтиоацетата. После перемешивания при -60°С в течение 30 мин смесь подвергали реакции с 6 г этерата MgBr2 и перемешивали в течение дополнительных 30 мин. Наконец, эту смесь подвергали реакции со сформированным ранее смешанным ангидридом и продолжали перемешивание в течение 5 ч до момента, когда реакция была закончена с использованием жидкостной хроматографии под высоким давлением.
Реакционную смесь обрабатывали капельным способом 6М NH4Cl и разделяли фазы. Органическую фазу разводили 50 мл EtOAc и экстрагировали 1 N НС1 (3 х), H2O (3 х), высушивали Na2SO4 и выпаривали под высоким вакуумом, получая названное соединение в виде масла M/Z = 515(М+Н)+.
Пример 7. Образование связи тиоэфира из примера 6 с эфирами α-аминокислот и с незащищенными аминоацилполистиреновыми смолами.
Защищенный аргинил статон из примера 6 (2 эквивалента) растворяли в СИ2С12 и добавляли к смеси эфира α-аминокислоты (1 эквивалент) или полистиреновой смолы, содержащей растущую полипептидную цепь. К этой смеси добавляли йодистую медь (2 эквивалента) и триэтиламин (2 эквивалента). Реакцию контролировали жидкостной хроматографией под высоким давлением в случае эфира аминокислоты или подходящим нингидриновым тестом в случае полистирен-связанных пептидов.
Пример 8. Приготовление субъединицы синтетического спейсера формулы II: -^Н-СН2СН=СН-СН2-(СО)]3-.
Синтез был смоделирован по Сох М.Т., Heston D.W и Horbury J., J. Chem. Soc. Chem.Comm., 1980, 799-800, с большими модификациями. Полный процесс выглядит следующим образом.
а) Синтез диметилового эфира транс-βгидромукониковой кислоты.
г (153 ммоль) транс-β-гидромукониковой кислоты растворяли в 200 мл бензола, содержащего 500 мг р-толуенсульфониковой кислоты и 100 мл метанола. Раствор сливали в течение 6 ч и обрабатывали 100 мл воды. Фазы отделяли и далее экстрагировали органический слой 5% NaHCO3 и Н2О. После высушивания (Na2SO4) растворитель выпаривали под вакуумом и остаток возгоняли (83-85°С, 0,5 мм Hg), получая 19 г названного соединения.
б) Синтез монометилового эфира транс-βгидромукониковой кислоты.
г (27,5 ммоль) продукта из шага а) суспендировали в 100 мл раствора 0,1 М КН2РO4 с последующим добавлением 20 мг эстеразы свиной печени. рН раствора поддерживали при значении 7 добавлением капельно раствора 1М NaOH. После добавления 1М NaOH, соответствующего одномолярному эквиваленту диэфира, раствор обрабатывали древесным углем, перемешивали в течение 5 мин и фильтровали через селит. Фильтрат экстрагировали эфиром и объединенные органические экстракты отбрасывали. Водную фазу закисляли при помощи 3N НО и снова экстрагировали эфиром. Объединенные эфирные экстракты высушивали (Na2SO4) и выпаривали в вакууме. Остаток возгоняли под пониженным давлением (105-110°С, 0,5 mm Hg), оставляя 4 г масла, соответствующего названному соединению.
в) Синтез 4-метоксикарбонил-2-дегидробутил изо-цианата.
1,22 г (7,3 ммоль) моноэфира из шага б) растворяли в 25 мл бензола. 0,76 мл (8,7 ммоль) оксалил хлорида добавляли капельно в течение 1 5 мин и интенсивно перемешивали раствор в течение 3 ч. Раствор выпаривали под вакуумом. Остаток, растворенный в 1 0 мл ацетона, добавляли к предварительно охлажденному раствору (0°С) азида натрия, 1 г в 20 мл 50% раствора вода/ацетон. После 30 мин смесь разводили водой (50 мл) и экстрагировали 3 раза порциями бензола по 20 мл. Объединенные органические экстракты высушивали (Na2SO4) и фильтровали. Фильтрат нагревали в масляной бане при 80°С до того, пока более не наблюдалось выделение азота. Растворитель выпаривали под вакуумом и остаток возгоняли под пониженным давлением (80-85°С, 0,5 mm Hg), получая 700 мг названного соединения.
г) Синтез 4-Л-бутилоксикарбонилпентотриеноиковой кислоты
890 мг терт-бутанола (12,2 ммоль) добавляли к раствору, содержащему продукт из шага в) (1 г, 6,1 ммоль) в 25 мл бензола. Полный раствор сливали в течение 1 0 ч, после чего его высушивали под вакуумом. Остаток обрабатывали эстеразой свиной печени, как описано на шаге б), и продолжали, как описано, получая 700 мг названного соединения.
Продукт из шага г) далее использовали как единицу при приготовлении синтетического спейсера II. Эти единицы собирают вместе для формирования спейсера (II), используя методики, которые хорошо известны работающим в области.
Пример 9. Приготовление Р79 Ас-Щ)ФенПро45-Арг-(СОСН2)СН2-(СО)-Глн-Сер50-ГисАсн-Асп-Г ли-Асп55-Фен-Г лу-Г лу-Иле-Про60Глу-Г лу-Тир-Лей-Г лнОН.
г терт-бутилоксикарбонил-Глн фенилацетамидометиловой смолы (Applied Biosystems; 0,64 ммоль/г) проводили через 16 циклов синтеза, включающих снятие защиты с Набоковой цепи (50% TFA в СН2С12) и образование связи с использованием 2,5 мэкв комплекса защищенная аминокислота/DDC и Nгидроксибензотриазола. Группы защиты боковых цепей стандартных аминокислот были следующими: Асп (циклогексил), Глу (бензил), Гис (бензилоксиметил), Тир (бромобензил), Сер (бензил).
Синтетические защищенные аминокислоты из примера 3 соединяли с Глн49, также используя DCC/N-гидроксибензотриазол. Для оптимальных результатов Н-ВОС’-(Л)-Фен-ПроОН мог быть добавлен к одиночной единице вместо индивидуальных аминокислот.
Полностью защищенную пептидную смолу (500 мг) обрабатывали фтороводородом в тефлоновом сосуде, содержащем анизол и диметилсульфид (10% по объему) при -5°С в течение 60 мин. Избыток HF удаляли под струей N2 и оставшуюся массу экстрагировали эфиром, и фильтровали. Смолу экстрагировали трижды ледяной уксусной кислотой и водой с последующей лиофилизацией.
Лиофилизированный грубый белок очищали до гомогенности хроматографией на обращенной фазе на стеклянной колонке с octadecyl silica (15А, Vydac) (1,5х30 см), 40 ф/дюйм2, используя линейный градиент системы растворителей, состоящий из (а) 500 мл 0,1% TFA/H2O и (б) 1 л 60% ацетонитрила в воде, содержащей 0,1% TFA. Фракции, соответствующие 98% или выше чистоте, объединяли и лиофилизировали.
Аминокислотный анализ показал: Асп (3), Сер (1), Глу (6), Гли (1), Иле (1), Лей (1), Тир (1), Фен (2), Гис (1), Про (2).
Полученный пептид демонстрировал псевдо-молекулярный ион, соответствующий 2548.6.
Пример 10. Приготовление Р183.
Ас-Щ)-Фен-Про-Арг-[(СО)-СН2] СН2СН2СН2-(СО)-[КН-СН2-СН=СН-СН2-(СО)]Асп-Фен-Глу-Про-Иле-Про-Лей-ОН.
Названное производное пептида синтезировали и очищали в точности, как описано для Р79 и его гомологов с небольшими модификациями. Например, твердофазный синтез начинали с терт-бутилоксикарбонил-Лей-фенилацета15 мидометил полистиреновой смолы (Applied Biosystems, 0,64 ммоль/г). Для снятия защиты tBOC группы, следующей за остатком Асп, использовали 50% раствор TFA в СН2С12, содержащий 10% этилметилсульфида. При таком способе выход названного пептида был оптимизирован до более, чем 60%, по жидкостной хроматографии под высоким давлением (УФ абсорбция при 215 нм).
Р184 и Р185 приготавливали сходным с Р183 образом.
Р184
Ас-Щ)-Фен-Про-Арг[(СО)СН2]СН2СН2СН2(СО)-[]Ж-СН2-СН=СНСН2-(СО)]2-Асп-Фен-Глу-Про-Иле-Про-ЛейОН.
Аминокислотный анализ показал: Асп (1,00), Глу (1,08), Иле (0,96), Лей (1,01), Фен (1,91), Про (3,48). Псевдомолекулярный ион: 1553.
P185
Ас-Щ)-Фен-Про-Арг[(СО)СН2] СН2СН2СН2-(СО)-[МН-СН2СН=СН=СН2-(СО)]3-Асп-Фен-Глу-Про-ИлеПро-Лей-ОН.
Аминокислотный анализ показал: Асп (1,00), Глу (1,06), Иле (0,93), Лей (0,98), Фен (1,88), Про (3,6). Псевдомолекулярный ион: 1647.
Производное пептида (I) Щ)-Фен-ПроАрг-(СН2)4(СО)-[НН(СН2)4СО]4-Асп-Фен-ГлуПро-Иле-Про-Лей было приготовлено сходным с Р183, Р184 и P185 образом, за тем исключением, что вместо [NH-CH2-CH=CH-CH2-(CO)] был использован синтетический остаток аминовалериановой кислоты.
Аминокислотный анализ показал: Асп (0,97), Глу (1,00), Иле (1,04), Лей (1,02), Фен (1,96), Про (2,86).
Пример 11. Амидолитический анализ активности тромбина.
Катализируемый тромбином гидролиз ТозГли-Про-Арг-рЫА оценивали при 405 нм на двулучевом спектрофотометре Varian Сагу 2000, используя концентрации 2,5, 3,5, 5 и 10 рМ в конечном объеме 1 мл. Гидролитические реакции проводили при 25°С в 0,1М буфере трис-HCl, рН 7,8, содержащем 0,1М NaCl и 0,1% ПЭГ 6000. Реакции инициировали добавлением субстрата, растворенного в 0,1 М буфере трисHCl, рН 7,8, к предварительно проинкубированному раствору фермента (0,4 или 0,04 нМ) и различным концентрациям ингибитора, растворенном в том же буфере. В случае конкурентного ингибирования записывали первоначальные скорости, и значения Ki определяли графически весовой регрессией плотов Диксона или, для гиперболического ингибирования, методом Байси (Baici, 1981). Флюорогенные анализы проводили, используя те же условия и инструменты, что и выше, используя способы флюоресценции и пропорций (Хех=383 нм, Xem =455 нм). Интенсивности флюоресценции подсчитывали по раствору 7-амино-4-метил кумарина известной концентрации. Специфичность производного синтетического пептида настоящего изобретения к человеческому α-тромбину также может быть определена путем сравнения его относительных ингибиторных активностей по отношению и к человеческому и бычьему αтромбинам, и к трипсину путем сравнения значений Ki, полученных при амидолитическом анализе активности тромбина.
Следовательно, ингибиторная активность производного пептида настоящего изобретения по отношению к тромбину может также быть анализирована путем определения времени протромбина (ВП, внешний путь синтеза) или времени активированного частичного тромбопластина (ВАЧТ, внутренний путь синтеза) объединенной рекомпанованной нормальной человеческой плазмы, используя прибор Coag-AMate 2001 (General Diagnostics, Inc., Morris Planes, New Jersey) или другой подходящий спектрофотометр.
Таким образом, для определения времени протромбина смешивают 50 рл рекомпанованной цитрованной нормальной человеческой плазмы (Sigma, St-Louis, МО.) с 50 рл раствора тромбопластина при 37°С в кювете объемом 400 рл. Далее смесь обрабатывают либо 200 рл буфера трис-HCl, рН 7,8, (содержащего 0,1M NaCl, 0,1% ПЭГ 6000), либо различными концентрациями ингибитора в том же буфере. Время образования сгустка оценивали после рекальцинирования со 100 рл 25 mM СаСР. Время образования сгустка в отсутствие ингибитора было между 19-22 с.
Ту же процедуру адаптировали для определения времени активированного частичного тромбопластина за исключением того, что рекомпанованную плазму активировали цефалином в течение 3 мин (Sigma, St-Louis, МО).
На ингибиторной активности производного пептида по отношению к тромбину отражается его способность ингибировать опосредованное тромбином слипание тромбоцитов, которое определяется по увеличению передачи света, что измеряется на аггрегометре Bio Data PAP-4.
Анализ образования сгустка фибриногена.
Ингибирование образования сгустка фибриногена измеряли спектрофотометрически при 405 нм на Varian DMS 90 при 37°C. В полистиреновой кювете смешивали 300 рл 0,1 % фибриногена (Sigma) в 0,1 М трис-HCl, рН 7,8, содержащем 0,1М NaCl, 0,1% ПЭГ 600 и различные концентрации ингибитора в том же буфере, и инициировали реакцию в общем объеме 1 мл добавлением фермента (человеческого или бычьего α-тромбина, 0,4 нМ). Определяли время от смешивания до флексии вследствие формирования сгустка для различных концентраций ингибитора и подсчитывали значения IC50 анализом log probit. Концентрации ингибиторов в анализе были основаны на содержании пептида.
Многие другие анализы могут быть использованы для определения противосвертывающей активности производного пептида настоящего изобретения. Так, ингибиторная активность производного пептида по отношению к тромбину также может быть проанализирована ингибированием времени активированного частичного тромбопластина (ВАЧТ, внутренний путь синтеза или времени протромбина, ВП, внешний путь синтеза). Таким образом, противосвертывающая активность может быть определена анализированием ВАЧТ объединенной нормальной человеческой плазмы с использованием прибора Coag-A-Mate 2001 (General Diagnostics Inc., Morris Planes, New Jersey).
Кроме того, производное пептида настоящего изобретения может быть протестировано для ингибирования катализируемого тромбином гидролиза трипептидил Р-нитроанилида на субстрате tosyl-Г ли-Про-Арг-Р-нитроанилид (Chromozym ТН, Boehringer-Mannheim, Indianapolis, In.) спектрофотометрически при 420 нм на двулучевом спектрофотометре Сагу 219. Реакции могут быть приготовлены путем смешивания раствора тромбина с буфером трис-HCl, рН 7,4, NaCl.
Эти анализы, будучи проведенными с использованием производного пептида настоящего изобретения, демонстрируют, что оно действует как бифункциональный ингибитор тромбина. Действительно, было продемонстрировано, что введение двух критических областей пептида, разделенных подходящими спейсерами, обеспечивало мощные ингибиторы тромбина. Результаты показаны в таблице.
| Соеди- нение | Ki (рМ) | IC50 dTT(nM) * | IC50 время свер- тыван. плазмы (nM)** | Доза для удвое- ния раскрытого с остоя- ния (мг/кг) | IC50 инду- циров. тром- бином аггрега- ция тромбоцит, пМ |
| Гирулог | 230 | 1,8 | 12 | 2 | 8 |
| Р184 | 1500 | 10,5 | 52 | 1-2 | 6 |
| Р183 | 300000 | - | - | - | - |
| Р185 | 3200 | - | - | - | - |
| (I) | 100 | 1,3 | 3,1 | 1 | 0,7 |
доза гепарина, необходимая для вызывания удвоения раскрытого состояния, равна 200 U/кг;
- значения не определены;
значения являются средними из 3-5 наблюдений; время раскрытия в контрольной группе крыс (обработанных соляным раствором) равно 19±1 мин (n= 11);
* - концентрация соединения, необходимая для увеличения в два раза времени тромбина в буфере, содержащем фибриноген;
** - концентрация соединения, необходимая для ингибирования времени образования сгустка в человеческой плазме на 50%.
Очевидно, что введение двух сайтов связывания, разделенных подходящим линкером, в единственную молекулу существенно увеличивает сродство соединений к тромбину. В действительности, комбинирование отдельных IC50 доз двух независимых областей приводит к точному удвоению времени образования сгустка, в то время как большую активность получают, если две области соединены линкером. Следовательно, получается, что двойное кооперативное связывание бифункциональных ингибиторов настоящего изобретения имеет место, когда они находятся в контакте с тромбином. Линкер служит как подходящий спейсер для образования связи вспомогательного сайта (область (ii)) и каталитического сайта (область (i)), как и аполярный связывающий сайт, примыкающий к каталитическому сайту.
Модель тромбоза, индуцированного повреждением с хлоридом железа.
Виды: крысы, мужской пол, SpragueDawley, вес 375-450 г.
Анализы модели артериального повреждения, индуцированного FeCl3, проводили в соответствии с Куртц с соавторами (Kurz, K..D., Main, R.W., Sandusky, G.E., Thrombosis research, 60; 269-280, 1990) и Шумахер с соавторами (Schumacher, W.A. et al., J.Pharmacology and Experimental Therapeutics, 267; 1237-1242,1993).
Мужские особи, Sprague-Dawley (375-450 г) получали анестезию с использованием Urethane (1500 мг/кг IP). Животных укладывали на подогревающийся коврик с поддержанием температуры при 37°C. Сонную артерию достигали через срединный затылочный надрез. Использовали осторожное тупое вскрытие для достижения и изолирования сосуда из оболочки сонной артерии. Используя хирургические щипцы, приподнимали артерию для обеспечения зоны видимости, чтобы ввести под нее две небольшие полиэтиленовые трубки (РЕ-205). Температурный зонд (Physitemp МТ23/3)™ помещают между РЕ-205 и артерией. Температура сосуда контролируется в течение 60 мин после приложения FeCl3. Изменения температуры сосуда учитываются на термистере (Cole-Palmer Model 08533-41). Повреждение индуцируют путем приложения небольшого диска (3 мм в диаметре) фильтровальной бумаги Whatman™ No.1, предварительно смоченной в 35% растворе FeCl3, на сонную артерию выше температурного зонда. Область эксперимента закрыта алюминиевой фольгой для защиты FeCl3 от деградации светом.
Время между приложением хлорида железа и временем, в которое температура сосуда резко падает (> 2,4°С), зачитывается как время закупорки сосуда (ВЗС).
Перед началом эксперимента забирают одну пробу крови (1 мл) в пробирку с буферным раствором 0,105М цитрата (из глазной пазухи) и полностью обескровливают животное. Все пробы хранят на льду и центрифугируют как можно быстрее при 2000 rpm в течение 10 мин при 4°С. Плазму анализируют в дублях по времени активированного частичного тромбопластина на гемостатическом анализаторе (STAGO ST4™).
В группе из четырех животных две артерии сохранили при -80°С для дальнейших анализов. Другие просматривали под световым микроскопом при 40х (Leica™) для подсчета сгустков (полные, частичные, нет сгустков).
Анализ аггрегации тромбоцитов.
Человеческие тромбоциты были отделены из донорской крови, и приготовлены дважды промытые суспензии в соответствии со способом, описанным Пакманом с соавторами (Packman et а1). Кровь крыс собирали в ACD (6:1, о/о) сердечной пункцией. Суспензии промытых тромбоцитов готовили, как описано Эрдлай с соатворами (Ardlie et al., Br. J. Haematol. 1970, 19:7, Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 1971, 136:1021). Конечной средой для суспензии был модифицированный раствор Tyrode (NaCl 138 mM, KCl 2,9 mM, HEPES 20 mM, NaH2PO4 0,42 mM, CaCl2 1M, MgCl2 2 mM, 0,1% глюкоза, 0,35% альбумин, апираза (lul/мл) рН 7,4). Подсчеты тромбоцитов были приведены к 5000,000/ul. Для обеспечения измерения продолжительности высвобождения содержимого плотных гранул тромбоциты метили 1 4С-серотонином в первом растворе для промывки (luCi/1 0 мл промывающей жидкости) и определяли высвобождение
14С-серотонина. Для предотвращения обратного связывания высвобожденного серотонина добавляли импрамин (в конечной концентрации 5 uM). Для анализа использовали аггрегометр тромбоцитов (4-канальный BioData РАР4, Hatboro, PA, USA). Процент аггрегации определяли спустя 3 мин после добавления стимулирующего агента (человеческого, в конечной концентрации 0,1 U/мл). Ингибиторы преинкубировали перед добавлением стимулирующего агента в течение 1 мин при 37°C. Значениями 1С'50 являлись концентрации, необходимые для ингибирования аггрегации тромбоцитов или секреции до 50% контроля.
Claims (3)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Производное пептида (I): Ю)-Фен-Про-Арг-(СН2)4(СО)-[ИН(СН2)4СО]2Асп-Фен-Глу-Про-Иле-Про-Лей и его фармацевтически приемлемые соли.
- 2. Состав для лечения тромботических заболеваний, содержащий эффективное количество производного пептида (I)Ю)-Фен-Про-Арг-(СН2)4(СО)-[КН(СН2)4СО]2Асп-Фен-Глу-Про-Иле-Про-Лей и его фармацевтически приемлемые соли.
- 3. Способ лечения или профилактики сосудистых заболеваний, относящихся к тромбозу, который состоит из введения пациенту эффективного количества состава по п.2.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/406,142 US6060451A (en) | 1990-06-15 | 1995-03-20 | Thrombin inhibitors based on the amino acid sequence of hirudin |
| PCT/CA1996/000164 WO1996029347A1 (en) | 1995-03-20 | 1996-03-18 | Thrombin inhibitors based on the amino acid sequence of hirudin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA199700239A1 EA199700239A1 (ru) | 1998-02-26 |
| EA000088B1 true EA000088B1 (ru) | 1998-06-25 |
Family
ID=23606707
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA199700239A EA000088B1 (ru) | 1995-03-20 | 1996-03-18 | Ингибиторы тромбина, основанные на аминокислотной последовательности гирудина |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6060451A (ru) |
| EP (1) | EP0815139B1 (ru) |
| JP (1) | JPH11502203A (ru) |
| KR (1) | KR19980703173A (ru) |
| CN (1) | CN1182436A (ru) |
| AT (1) | ATE208401T1 (ru) |
| AU (1) | AU695920B2 (ru) |
| BR (1) | BR9607839A (ru) |
| CA (1) | CA2215702A1 (ru) |
| DE (1) | DE69616770T2 (ru) |
| EA (1) | EA000088B1 (ru) |
| ES (1) | ES2168461T3 (ru) |
| HK (1) | HK1005511A1 (ru) |
| HU (1) | HUP9800727A3 (ru) |
| IL (1) | IL117526A (ru) |
| NO (1) | NO974342L (ru) |
| WO (1) | WO1996029347A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA962267B (ru) |
Families Citing this family (223)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9613718D0 (en) * | 1996-06-29 | 1996-08-28 | Thrombosis Res Inst | Thrombin inhibitors |
| US8172897B2 (en) | 1997-04-15 | 2012-05-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymer and metal composite implantable medical devices |
| US10028851B2 (en) | 1997-04-15 | 2018-07-24 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for controlling erosion of a substrate of an implantable medical device |
| US6240616B1 (en) | 1997-04-15 | 2001-06-05 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method of manufacturing a medicated porous metal prosthesis |
| US6759054B2 (en) | 1999-09-03 | 2004-07-06 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Ethylene vinyl alcohol composition and coating |
| US6790228B2 (en) * | 1999-12-23 | 2004-09-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coating for implantable devices and a method of forming the same |
| US7807211B2 (en) | 1999-09-03 | 2010-10-05 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Thermal treatment of an implantable medical device |
| US7682647B2 (en) * | 1999-09-03 | 2010-03-23 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Thermal treatment of a drug eluting implantable medical device |
| US20040029952A1 (en) * | 1999-09-03 | 2004-02-12 | Yung-Ming Chen | Ethylene vinyl alcohol composition and coating |
| US20070032853A1 (en) | 2002-03-27 | 2007-02-08 | Hossainy Syed F | 40-O-(2-hydroxy)ethyl-rapamycin coated stent |
| US6908624B2 (en) * | 1999-12-23 | 2005-06-21 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coating for implantable devices and a method of forming the same |
| US8109994B2 (en) | 2003-01-10 | 2012-02-07 | Abbott Cardiovascular Systems, Inc. | Biodegradable drug delivery material for stent |
| US7875283B2 (en) * | 2000-04-13 | 2011-01-25 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biodegradable polymers for use with implantable medical devices |
| US6527801B1 (en) * | 2000-04-13 | 2003-03-04 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biodegradable drug delivery material for stent |
| US7682648B1 (en) | 2000-05-31 | 2010-03-23 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods for forming polymeric coatings on stents |
| US6451373B1 (en) | 2000-08-04 | 2002-09-17 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method of forming a therapeutic coating onto a surface of an implantable prosthesis |
| GB0021497D0 (en) * | 2000-09-01 | 2000-10-18 | Novartis Res Foundation | Compounds and their use |
| US6953560B1 (en) | 2000-09-28 | 2005-10-11 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Barriers for polymer-coated implantable medical devices and methods for making the same |
| US7807210B1 (en) | 2000-10-31 | 2010-10-05 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Hemocompatible polymers on hydrophobic porous polymers |
| US6824559B2 (en) * | 2000-12-22 | 2004-11-30 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Ethylene-carboxyl copolymers as drug delivery matrices |
| US7504125B1 (en) | 2001-04-27 | 2009-03-17 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | System and method for coating implantable devices |
| US6663662B2 (en) * | 2000-12-28 | 2003-12-16 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Diffusion barrier layer for implantable devices |
| US6712845B2 (en) | 2001-04-24 | 2004-03-30 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coating for a stent and a method of forming the same |
| US6656506B1 (en) * | 2001-05-09 | 2003-12-02 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Microparticle coated medical device |
| US20030166197A1 (en) * | 2001-05-10 | 2003-09-04 | Ecker Joseph R. | Ethylene insensitive plants |
| US6743462B1 (en) * | 2001-05-31 | 2004-06-01 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Apparatus and method for coating implantable devices |
| US7247313B2 (en) * | 2001-06-27 | 2007-07-24 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polyacrylates coatings for implantable medical devices |
| US6695920B1 (en) | 2001-06-27 | 2004-02-24 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Mandrel for supporting a stent and a method of using the mandrel to coat a stent |
| US8741378B1 (en) | 2001-06-27 | 2014-06-03 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods of coating an implantable device |
| US7175873B1 (en) | 2001-06-27 | 2007-02-13 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Rate limiting barriers for implantable devices and methods for fabrication thereof |
| US7246321B2 (en) * | 2001-07-13 | 2007-07-17 | Anoto Ab | Editing data |
| US7682669B1 (en) | 2001-07-30 | 2010-03-23 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods for covalently immobilizing anti-thrombogenic material into a coating on a medical device |
| US8303651B1 (en) | 2001-09-07 | 2012-11-06 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymeric coating for reducing the rate of release of a therapeutic substance from a stent |
| US7285304B1 (en) | 2003-06-25 | 2007-10-23 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Fluid treatment of a polymeric coating on an implantable medical device |
| US7989018B2 (en) | 2001-09-17 | 2011-08-02 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Fluid treatment of a polymeric coating on an implantable medical device |
| US6863683B2 (en) | 2001-09-19 | 2005-03-08 | Abbott Laboratoris Vascular Entities Limited | Cold-molding process for loading a stent onto a stent delivery system |
| US7223282B1 (en) * | 2001-09-27 | 2007-05-29 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Remote activation of an implantable device |
| US6753071B1 (en) | 2001-09-27 | 2004-06-22 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Rate-reducing membrane for release of an agent |
| US7585516B2 (en) * | 2001-11-12 | 2009-09-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for drug delivery devices |
| US6709514B1 (en) | 2001-12-28 | 2004-03-23 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Rotary coating apparatus for coating implantable medical devices |
| US7022334B1 (en) | 2002-03-20 | 2006-04-04 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Therapeutic composition and a method of coating implantable medical devices |
| US7919075B1 (en) | 2002-03-20 | 2011-04-05 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for implantable medical devices |
| US8506617B1 (en) | 2002-06-21 | 2013-08-13 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Micronized peptide coated stent |
| US7794743B2 (en) | 2002-06-21 | 2010-09-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polycationic peptide coatings and methods of making the same |
| US7217426B1 (en) | 2002-06-21 | 2007-05-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings containing polycationic peptides for cardiovascular therapy |
| US7056523B1 (en) | 2002-06-21 | 2006-06-06 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Implantable medical devices incorporating chemically conjugated polymers and oligomers of L-arginine |
| US7033602B1 (en) | 2002-06-21 | 2006-04-25 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polycationic peptide coatings and methods of coating implantable medical devices |
| US7396539B1 (en) * | 2002-06-21 | 2008-07-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coatings with engineered drug release rate |
| US7294329B1 (en) * | 2002-07-18 | 2007-11-13 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Poly(vinyl acetal) coatings for implantable medical devices |
| US7622146B2 (en) * | 2002-07-18 | 2009-11-24 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Rate limiting barriers for implantable devices and methods for fabrication thereof |
| US7363074B1 (en) | 2002-08-20 | 2008-04-22 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings comprising self-assembled molecular structures and a method of delivering a drug using the same |
| US7732535B2 (en) * | 2002-09-05 | 2010-06-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coating for controlled release of drugs from implantable medical devices |
| US20040054104A1 (en) * | 2002-09-05 | 2004-03-18 | Pacetti Stephen D. | Coatings for drug delivery devices comprising modified poly(ethylene-co-vinyl alcohol) |
| US7201935B1 (en) | 2002-09-17 | 2007-04-10 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Plasma-generated coatings for medical devices and methods for fabricating thereof |
| US20040063805A1 (en) * | 2002-09-19 | 2004-04-01 | Pacetti Stephen D. | Coatings for implantable medical devices and methods for fabrication thereof |
| US7438722B1 (en) | 2002-09-20 | 2008-10-21 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method for treatment of restenosis |
| US7232573B1 (en) * | 2002-09-26 | 2007-06-19 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coatings containing self-assembled monolayers |
| US8202530B2 (en) * | 2002-09-27 | 2012-06-19 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biocompatible coatings for stents |
| US7404979B1 (en) * | 2002-09-30 | 2008-07-29 | Advanced Cardiovascular Systems Inc. | Spin coating apparatus and a method for coating implantable devices |
| US8337937B2 (en) * | 2002-09-30 | 2012-12-25 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Stent spin coating method |
| US7087263B2 (en) * | 2002-10-09 | 2006-08-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Rare limiting barriers for implantable medical devices |
| US7022372B1 (en) | 2002-11-12 | 2006-04-04 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Compositions for coating implantable medical devices |
| US8034361B2 (en) * | 2002-11-12 | 2011-10-11 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coatings incorporating nanoparticles |
| US6896965B1 (en) | 2002-11-12 | 2005-05-24 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Rate limiting barriers for implantable devices |
| US6982004B1 (en) * | 2002-11-26 | 2006-01-03 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Electrostatic loading of drugs on implantable medical devices |
| US7211150B1 (en) | 2002-12-09 | 2007-05-01 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Apparatus and method for coating and drying multiple stents |
| US7776926B1 (en) | 2002-12-11 | 2010-08-17 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biocompatible coating for implantable medical devices |
| US7758880B2 (en) | 2002-12-11 | 2010-07-20 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biocompatible polyacrylate compositions for medical applications |
| US7074276B1 (en) | 2002-12-12 | 2006-07-11 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Clamp mandrel fixture and a method of using the same to minimize coating defects |
| US20060002968A1 (en) * | 2004-06-30 | 2006-01-05 | Gordon Stewart | Anti-proliferative and anti-inflammatory agent combination for treatment of vascular disorders |
| US8435550B2 (en) | 2002-12-16 | 2013-05-07 | Abbot Cardiovascular Systems Inc. | Anti-proliferative and anti-inflammatory agent combination for treatment of vascular disorders with an implantable medical device |
| US7758881B2 (en) | 2004-06-30 | 2010-07-20 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Anti-proliferative and anti-inflammatory agent combination for treatment of vascular disorders with an implantable medical device |
| US7563483B2 (en) * | 2003-02-26 | 2009-07-21 | Advanced Cardiovascular Systems Inc. | Methods for fabricating a coating for implantable medical devices |
| US8715771B2 (en) * | 2003-02-26 | 2014-05-06 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Coated stent and method of making the same |
| US7255891B1 (en) | 2003-02-26 | 2007-08-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method for coating implantable medical devices |
| US6926919B1 (en) | 2003-02-26 | 2005-08-09 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method for fabricating a coating for a medical device |
| US7288609B1 (en) | 2003-03-04 | 2007-10-30 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for drug delivery devices based on poly (orthoesters) |
| US8791171B2 (en) * | 2003-05-01 | 2014-07-29 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Biodegradable coatings for implantable medical devices |
| US7563454B1 (en) * | 2003-05-01 | 2009-07-21 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for implantable medical devices |
| US7279174B2 (en) * | 2003-05-08 | 2007-10-09 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coatings comprising hydrophilic additives |
| US7323209B1 (en) | 2003-05-15 | 2008-01-29 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Apparatus and method for coating stents |
| US7186789B2 (en) * | 2003-06-11 | 2007-03-06 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Bioabsorbable, biobeneficial polyester polymers for use in drug eluting stent coatings |
| US20050118344A1 (en) | 2003-12-01 | 2005-06-02 | Pacetti Stephen D. | Temperature controlled crimping |
| US7645504B1 (en) | 2003-06-26 | 2010-01-12 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for implantable medical devices comprising hydrophobic and hydrophilic polymers |
| US7875285B1 (en) | 2003-07-15 | 2011-01-25 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Medicated coatings for implantable medical devices having controlled rate of release |
| US7169404B2 (en) | 2003-07-30 | 2007-01-30 | Advanced Cardiovasular Systems, Inc. | Biologically absorbable coatings for implantable devices and methods for fabricating the same |
| US7056591B1 (en) * | 2003-07-30 | 2006-06-06 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Hydrophobic biologically absorbable coatings for drug delivery devices and methods for fabricating the same |
| US7645474B1 (en) | 2003-07-31 | 2010-01-12 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method and system of purifying polymers for use with implantable medical devices |
| US7431959B1 (en) * | 2003-07-31 | 2008-10-07 | Advanced Cardiovascular Systems Inc. | Method and system for irradiation of a drug eluting implantable medical device |
| US7785512B1 (en) | 2003-07-31 | 2010-08-31 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method and system of controlled temperature mixing and molding of polymers with active agents for implantable medical devices |
| US7441513B1 (en) | 2003-09-26 | 2008-10-28 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Plasma-generated coating apparatus for medical devices and a method of coating deposition |
| US7198675B2 (en) | 2003-09-30 | 2007-04-03 | Advanced Cardiovascular Systems | Stent mandrel fixture and method for selectively coating surfaces of a stent |
| US7318932B2 (en) * | 2003-09-30 | 2008-01-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for drug delivery devices comprising hydrolitically stable adducts of poly(ethylene-co-vinyl alcohol) and methods for fabricating the same |
| US7704544B2 (en) * | 2003-10-07 | 2010-04-27 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | System and method for coating a tubular implantable medical device |
| US7329413B1 (en) * | 2003-11-06 | 2008-02-12 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for drug delivery devices having gradient of hydration and methods for fabricating thereof |
| US7261946B2 (en) * | 2003-11-14 | 2007-08-28 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Block copolymers of acrylates and methacrylates with fluoroalkenes |
| US9114198B2 (en) | 2003-11-19 | 2015-08-25 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biologically beneficial coatings for implantable devices containing fluorinated polymers and methods for fabricating the same |
| US8192752B2 (en) | 2003-11-21 | 2012-06-05 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for implantable devices including biologically erodable polyesters and methods for fabricating the same |
| US7560492B1 (en) * | 2003-11-25 | 2009-07-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polysulfone block copolymers as drug-eluting coating material |
| US7807722B2 (en) * | 2003-11-26 | 2010-10-05 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biobeneficial coating compositions and methods of making and using thereof |
| US7435788B2 (en) | 2003-12-19 | 2008-10-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biobeneficial polyamide/polyethylene glycol polymers for use with drug eluting stents |
| US8309112B2 (en) * | 2003-12-24 | 2012-11-13 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for implantable medical devices comprising hydrophilic substances and methods for fabricating the same |
| US8685431B2 (en) | 2004-03-16 | 2014-04-01 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biologically absorbable coatings for implantable devices based on copolymers having ester bonds and methods for fabricating the same |
| US20050208093A1 (en) * | 2004-03-22 | 2005-09-22 | Thierry Glauser | Phosphoryl choline coating compositions |
| US8551512B2 (en) | 2004-03-22 | 2013-10-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polyethylene glycol/poly(butylene terephthalate) copolymer coated devices including EVEROLIMUS |
| US20050214339A1 (en) * | 2004-03-29 | 2005-09-29 | Yiwen Tang | Biologically degradable compositions for medical applications |
| US8778014B1 (en) | 2004-03-31 | 2014-07-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for preventing balloon damage to polymer coated stents |
| US8293890B2 (en) | 2004-04-30 | 2012-10-23 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Hyaluronic acid based copolymers |
| US7820732B2 (en) * | 2004-04-30 | 2010-10-26 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods for modulating thermal and mechanical properties of coatings on implantable devices |
| US9561309B2 (en) | 2004-05-27 | 2017-02-07 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Antifouling heparin coatings |
| US7563780B1 (en) | 2004-06-18 | 2009-07-21 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Heparin prodrugs and drug delivery stents formed therefrom |
| US8568469B1 (en) | 2004-06-28 | 2013-10-29 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent locking element and a method of securing a stent on a delivery system |
| US20050287184A1 (en) | 2004-06-29 | 2005-12-29 | Hossainy Syed F A | Drug-delivery stent formulations for restenosis and vulnerable plaque |
| US8241554B1 (en) | 2004-06-29 | 2012-08-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method of forming a stent pattern on a tube |
| US8778256B1 (en) | 2004-09-30 | 2014-07-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Deformation of a polymer tube in the fabrication of a medical article |
| US7971333B2 (en) | 2006-05-30 | 2011-07-05 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Manufacturing process for polymetric stents |
| US8747878B2 (en) | 2006-04-28 | 2014-06-10 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method of fabricating an implantable medical device by controlling crystalline structure |
| US8747879B2 (en) | 2006-04-28 | 2014-06-10 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method of fabricating an implantable medical device to reduce chance of late inflammatory response |
| US7731890B2 (en) | 2006-06-15 | 2010-06-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods of fabricating stents with enhanced fracture toughness |
| US8357391B2 (en) | 2004-07-30 | 2013-01-22 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for implantable devices comprising poly (hydroxy-alkanoates) and diacid linkages |
| US7494665B1 (en) | 2004-07-30 | 2009-02-24 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymers containing siloxane monomers |
| US9283099B2 (en) | 2004-08-25 | 2016-03-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent-catheter assembly with a releasable connection for stent retention |
| US7648727B2 (en) | 2004-08-26 | 2010-01-19 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods for manufacturing a coated stent-balloon assembly |
| US7244443B2 (en) | 2004-08-31 | 2007-07-17 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymers of fluorinated monomers and hydrophilic monomers |
| US7229471B2 (en) | 2004-09-10 | 2007-06-12 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Compositions containing fast-leaching plasticizers for improved performance of medical devices |
| US8110211B2 (en) | 2004-09-22 | 2012-02-07 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Medicated coatings for implantable medical devices including polyacrylates |
| US7875233B2 (en) | 2004-09-30 | 2011-01-25 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method of fabricating a biaxially oriented implantable medical device |
| US8173062B1 (en) | 2004-09-30 | 2012-05-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Controlled deformation of a polymer tube in fabricating a medical article |
| US8043553B1 (en) | 2004-09-30 | 2011-10-25 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Controlled deformation of a polymer tube with a restraining surface in fabricating a medical article |
| DE602005023429D1 (de) | 2004-10-19 | 2010-10-21 | Lonza Ag | Verfahren zur festphasen-peptidsynthese |
| US8603634B2 (en) | 2004-10-27 | 2013-12-10 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | End-capped poly(ester amide) copolymers |
| US7390497B2 (en) | 2004-10-29 | 2008-06-24 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Poly(ester amide) filler blends for modulation of coating properties |
| US7214759B2 (en) * | 2004-11-24 | 2007-05-08 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Biologically absorbable coatings for implantable devices based on polyesters and methods for fabricating the same |
| US7588642B1 (en) | 2004-11-29 | 2009-09-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Abluminal stent coating apparatus and method using a brush assembly |
| US8609123B2 (en) | 2004-11-29 | 2013-12-17 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Derivatized poly(ester amide) as a biobeneficial coating |
| US7892592B1 (en) | 2004-11-30 | 2011-02-22 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coating abluminal surfaces of stents and other implantable medical devices |
| US7604818B2 (en) | 2004-12-22 | 2009-10-20 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymers of fluorinated monomers and hydrocarbon monomers |
| US7419504B2 (en) * | 2004-12-27 | 2008-09-02 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Poly(ester amide) block copolymers |
| US8007775B2 (en) | 2004-12-30 | 2011-08-30 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymers containing poly(hydroxyalkanoates) and agents for use with medical articles and methods of fabricating the same |
| US7381048B2 (en) | 2005-04-12 | 2008-06-03 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stents with profiles for gripping a balloon catheter and molds for fabricating stents |
| GB0507577D0 (en) | 2005-04-14 | 2005-05-18 | Novartis Ag | Organic compounds |
| US7795467B1 (en) | 2005-04-26 | 2010-09-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Bioabsorbable, biobeneficial polyurethanes for use in medical devices |
| US8778375B2 (en) | 2005-04-29 | 2014-07-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Amorphous poly(D,L-lactide) coating |
| US7823533B2 (en) | 2005-06-30 | 2010-11-02 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent fixture and method for reducing coating defects |
| US8021676B2 (en) | 2005-07-08 | 2011-09-20 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Functionalized chemically inert polymers for coatings |
| US7785647B2 (en) | 2005-07-25 | 2010-08-31 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods of providing antioxidants to a drug containing product |
| US7735449B1 (en) | 2005-07-28 | 2010-06-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent fixture having rounded support structures and method for use thereof |
| US7658880B2 (en) | 2005-07-29 | 2010-02-09 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymeric stent polishing method and apparatus |
| US9248034B2 (en) | 2005-08-23 | 2016-02-02 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Controlled disintegrating implantable medical devices |
| US7976891B1 (en) | 2005-12-16 | 2011-07-12 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Abluminal stent coating apparatus and method of using focused acoustic energy |
| US7867547B2 (en) | 2005-12-19 | 2011-01-11 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Selectively coating luminal surfaces of stents |
| US20070156230A1 (en) | 2006-01-04 | 2007-07-05 | Dugan Stephen R | Stents with radiopaque markers |
| US7951185B1 (en) | 2006-01-06 | 2011-05-31 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Delivery of a stent at an elevated temperature |
| US20070196428A1 (en) | 2006-02-17 | 2007-08-23 | Thierry Glauser | Nitric oxide generating medical devices |
| US7713637B2 (en) | 2006-03-03 | 2010-05-11 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coating containing PEGylated hyaluronic acid and a PEGylated non-hyaluronic acid polymer |
| US7964210B2 (en) | 2006-03-31 | 2011-06-21 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Degradable polymeric implantable medical devices with a continuous phase and discrete phase |
| US8003156B2 (en) | 2006-05-04 | 2011-08-23 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Rotatable support elements for stents |
| US8304012B2 (en) | 2006-05-04 | 2012-11-06 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method for drying a stent |
| US7985441B1 (en) | 2006-05-04 | 2011-07-26 | Yiwen Tang | Purification of polymers for coating applications |
| US7761968B2 (en) | 2006-05-25 | 2010-07-27 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method of crimping a polymeric stent |
| US7775178B2 (en) | 2006-05-26 | 2010-08-17 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent coating apparatus and method |
| US7951194B2 (en) | 2006-05-26 | 2011-05-31 | Abbott Cardiovascular Sysetms Inc. | Bioabsorbable stent with radiopaque coating |
| US8752267B2 (en) | 2006-05-26 | 2014-06-17 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Method of making stents with radiopaque markers |
| US7842737B2 (en) | 2006-09-29 | 2010-11-30 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Polymer blend-bioceramic composite implantable medical devices |
| US7959940B2 (en) | 2006-05-30 | 2011-06-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymer-bioceramic composite implantable medical devices |
| US8343530B2 (en) | 2006-05-30 | 2013-01-01 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Polymer-and polymer blend-bioceramic composite implantable medical devices |
| US8568764B2 (en) * | 2006-05-31 | 2013-10-29 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods of forming coating layers for medical devices utilizing flash vaporization |
| US9561351B2 (en) | 2006-05-31 | 2017-02-07 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Drug delivery spiral coil construct |
| US8034287B2 (en) | 2006-06-01 | 2011-10-11 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Radiation sterilization of medical devices |
| US8486135B2 (en) | 2006-06-01 | 2013-07-16 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Implantable medical devices fabricated from branched polymers |
| US8697387B2 (en) * | 2006-06-02 | 2014-04-15 | DiscoverRx Corporation | Methods for identifying agents and their use for the prevention of restenosis |
| US8703167B2 (en) | 2006-06-05 | 2014-04-22 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coatings for implantable medical devices for controlled release of a hydrophilic drug and a hydrophobic drug |
| US8778376B2 (en) | 2006-06-09 | 2014-07-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Copolymer comprising elastin pentapeptide block and hydrophilic block, and medical device and method of treating |
| US8114150B2 (en) | 2006-06-14 | 2012-02-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | RGD peptide attached to bioabsorbable stents |
| US8603530B2 (en) | 2006-06-14 | 2013-12-10 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Nanoshell therapy |
| US8048448B2 (en) | 2006-06-15 | 2011-11-01 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Nanoshells for drug delivery |
| US8535372B1 (en) | 2006-06-16 | 2013-09-17 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Bioabsorbable stent with prohealing layer |
| US8333000B2 (en) | 2006-06-19 | 2012-12-18 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Methods for improving stent retention on a balloon catheter |
| US8017237B2 (en) | 2006-06-23 | 2011-09-13 | Abbott Cardiovascular Systems, Inc. | Nanoshells on polymers |
| US9072820B2 (en) | 2006-06-26 | 2015-07-07 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymer composite stent with polymer particles |
| US8128688B2 (en) | 2006-06-27 | 2012-03-06 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Carbon coating on an implantable device |
| US7794776B1 (en) | 2006-06-29 | 2010-09-14 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Modification of polymer stents with radiation |
| US7740791B2 (en) | 2006-06-30 | 2010-06-22 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Method of fabricating a stent with features by blow molding |
| US9028859B2 (en) | 2006-07-07 | 2015-05-12 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Phase-separated block copolymer coatings for implantable medical devices |
| US7823263B2 (en) | 2006-07-11 | 2010-11-02 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Method of removing stent islands from a stent |
| US7998404B2 (en) | 2006-07-13 | 2011-08-16 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Reduced temperature sterilization of stents |
| US7757543B2 (en) | 2006-07-13 | 2010-07-20 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Radio frequency identification monitoring of stents |
| US8685430B1 (en) | 2006-07-14 | 2014-04-01 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Tailored aliphatic polyesters for stent coatings |
| US7794495B2 (en) | 2006-07-17 | 2010-09-14 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Controlled degradation of stents |
| US7886419B2 (en) | 2006-07-18 | 2011-02-15 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Stent crimping apparatus and method |
| US8016879B2 (en) | 2006-08-01 | 2011-09-13 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Drug delivery after biodegradation of the stent scaffolding |
| US8703169B1 (en) | 2006-08-15 | 2014-04-22 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Implantable device having a coating comprising carrageenan and a biostable polymer |
| US9173733B1 (en) | 2006-08-21 | 2015-11-03 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Tracheobronchial implantable medical device and methods of use |
| US7923022B2 (en) | 2006-09-13 | 2011-04-12 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Degradable polymeric implantable medical devices with continuous phase and discrete phase |
| US8597673B2 (en) | 2006-12-13 | 2013-12-03 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Coating of fast absorption or dissolution |
| US8099849B2 (en) | 2006-12-13 | 2012-01-24 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Optimizing fracture toughness of polymeric stent |
| US8262723B2 (en) | 2007-04-09 | 2012-09-11 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Implantable medical devices fabricated from polymer blends with star-block copolymers |
| US8147769B1 (en) | 2007-05-16 | 2012-04-03 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Stent and delivery system with reduced chemical degradation |
| US9056155B1 (en) | 2007-05-29 | 2015-06-16 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Coatings having an elastic primer layer |
| US7829008B2 (en) | 2007-05-30 | 2010-11-09 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Fabricating a stent from a blow molded tube |
| US7959857B2 (en) | 2007-06-01 | 2011-06-14 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Radiation sterilization of medical devices |
| US8202528B2 (en) | 2007-06-05 | 2012-06-19 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Implantable medical devices with elastomeric block copolymer coatings |
| US8293260B2 (en) | 2007-06-05 | 2012-10-23 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Elastomeric copolymer coatings containing poly (tetramethyl carbonate) for implantable medical devices |
| US8425591B1 (en) | 2007-06-11 | 2013-04-23 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Methods of forming polymer-bioceramic composite medical devices with bioceramic particles |
| GB0711779D0 (en) | 2007-06-18 | 2007-07-25 | Univ Singapore | Thrombin inhibitor |
| US8048441B2 (en) | 2007-06-25 | 2011-11-01 | Abbott Cardiovascular Systems, Inc. | Nanobead releasing medical devices |
| US8109904B1 (en) | 2007-06-25 | 2012-02-07 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Drug delivery medical devices |
| US7901452B2 (en) | 2007-06-27 | 2011-03-08 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Method to fabricate a stent having selected morphology to reduce restenosis |
| US7955381B1 (en) | 2007-06-29 | 2011-06-07 | Advanced Cardiovascular Systems, Inc. | Polymer-bioceramic composite implantable medical device with different types of bioceramic particles |
| US8211489B2 (en) * | 2007-12-19 | 2012-07-03 | Abbott Cardiovascular Systems, Inc. | Methods for applying an application material to an implantable device |
| US8361538B2 (en) | 2007-12-19 | 2013-01-29 | Abbott Laboratories | Methods for applying an application material to an implantable device |
| BRPI0803089A2 (pt) | 2008-05-22 | 2011-08-30 | Ethicon Inc | ensaio de proteìnas |
| US8808353B2 (en) | 2010-01-30 | 2014-08-19 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Crush recoverable polymer scaffolds having a low crossing profile |
| US8568471B2 (en) | 2010-01-30 | 2013-10-29 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Crush recoverable polymer scaffolds |
| US8685433B2 (en) | 2010-03-31 | 2014-04-01 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Absorbable coating for implantable device |
| EP2471945A1 (de) * | 2010-12-30 | 2012-07-04 | Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH | Verfahren zur Bestimmung von Inhibitoren der Gerinnung |
| CN102603881A (zh) * | 2011-01-20 | 2012-07-25 | 中国中医科学院中药研究所 | 一种抗凝血活性寡肽及宽体金线蛭中抗凝血活性寡肽类化合物的提取纯化 |
| US9267134B2 (en) | 2011-05-09 | 2016-02-23 | The University Court Of The University Of Glasgow | Methods of modulating MicroRNAs in the treatment of pulmonary arterial hypertension |
| US8726483B2 (en) | 2011-07-29 | 2014-05-20 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Methods for uniform crimping and deployment of a polymer scaffold |
| US9999527B2 (en) | 2015-02-11 | 2018-06-19 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Scaffolds having radiopaque markers |
| US9700443B2 (en) | 2015-06-12 | 2017-07-11 | Abbott Cardiovascular Systems Inc. | Methods for attaching a radiopaque marker to a scaffold |
| FI129958B (en) | 2018-02-09 | 2022-11-30 | Teknologian Tutkimuskeskus Vtt Oy | Synthesis and purification of muconic acid ester from aldaric acid esters |
| CN109762908A (zh) * | 2018-11-30 | 2019-05-17 | 岛津企业管理（中国）有限公司 | 鉴别菲牛蛭的特异性引物对和方法、应用 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS606647A (ja) * | 1983-06-17 | 1985-01-14 | Microbial Chem Res Found | アルフアメニン及びその関連化合物と合成法 |
| ATE64956T1 (de) * | 1984-06-14 | 1991-07-15 | Ciba Geigy Ag | Verfahren zur herstellung von thrombininhibitoren. |
| CA1341032C (en) * | 1987-01-23 | 2000-06-20 | John L. Krstenansky | Anticoagulant peptides |
| ZA883443B (en) * | 1987-05-21 | 1988-11-16 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Cyclic anticoagulant peptides |
| AU3098289A (en) * | 1988-03-04 | 1989-09-07 | Biogen, Inc. | Hirudin peptides |
| NZ228995A (en) * | 1988-05-10 | 1992-03-26 | Merrell Dow Pharma | Hirudin peptide derivatives and pharmaceutical compositions |
| GB8817161D0 (en) * | 1988-07-19 | 1988-08-24 | Ciba Geigy Ag | Modified proteins |
| GB8817160D0 (en) * | 1988-07-19 | 1988-08-24 | Ciba Geigy Ag | Novel proteins |
| WO1991001142A1 (en) * | 1989-07-20 | 1991-02-07 | Biogen, Inc. | Combinations and methods for treating or preventing thrombotic diseases |
| WO1991001328A1 (en) * | 1989-07-20 | 1991-02-07 | Biogen, Inc. | Hirudin peptide derivatives |
| US5240913A (en) * | 1989-08-18 | 1993-08-31 | Biogen, Inc. | Inhibitors of thrombin |
| US5196404B1 (en) * | 1989-08-18 | 1996-09-10 | Biogen Inc | Inhibitors of thrombin |
| ES2111567T3 (es) * | 1990-06-15 | 1998-03-16 | Ca Nat Research Council | Inhibidores de la trombina basados en la secuencia de aminoacidos de la hirudina. |
-
1995
- 1995-03-20 US US08/406,142 patent/US6060451A/en not_active Expired - Fee Related
-
1996
- 1996-03-18 HU HU9800727A patent/HUP9800727A3/hu unknown
- 1996-03-18 CA CA002215702A patent/CA2215702A1/en not_active Abandoned
- 1996-03-18 DE DE69616770T patent/DE69616770T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1996-03-18 CN CN96193457A patent/CN1182436A/zh active Pending
- 1996-03-18 BR BR9607839A patent/BR9607839A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-03-18 EA EA199700239A patent/EA000088B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1996-03-18 IL IL11752696A patent/IL117526A/xx not_active IP Right Cessation
- 1996-03-18 KR KR1019970706576A patent/KR19980703173A/ko not_active Application Discontinuation
- 1996-03-18 JP JP8527932A patent/JPH11502203A/ja not_active Ceased
- 1996-03-18 AU AU49349/96A patent/AU695920B2/en not_active Ceased
- 1996-03-18 WO PCT/CA1996/000164 patent/WO1996029347A1/en not_active Application Discontinuation
- 1996-03-18 AT AT96905636T patent/ATE208401T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-03-18 ES ES96905636T patent/ES2168461T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-03-18 EP EP96905636A patent/EP0815139B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-03-20 ZA ZA962267A patent/ZA962267B/xx unknown
-
1997
- 1997-09-19 NO NO974342A patent/NO974342L/no not_active Application Discontinuation
-
1998
- 1998-06-03 HK HK98104773A patent/HK1005511A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0815139A1 (en) | 1998-01-07 |
| HUP9800727A3 (en) | 1998-09-28 |
| NO974342D0 (no) | 1997-09-19 |
| HK1005511A1 (en) | 1999-01-15 |
| EP0815139B1 (en) | 2001-11-07 |
| ZA962267B (en) | 1996-09-27 |
| AU695920B2 (en) | 1998-08-27 |
| WO1996029347A1 (en) | 1996-09-26 |
| JPH11502203A (ja) | 1999-02-23 |
| CA2215702A1 (en) | 1996-09-26 |
| IL117526A (en) | 1999-12-31 |
| DE69616770D1 (de) | 2001-12-13 |
| KR19980703173A (ko) | 1998-10-15 |
| ES2168461T3 (es) | 2002-06-16 |
| HUP9800727A2 (hu) | 1998-07-28 |
| US6060451A (en) | 2000-05-09 |
| CN1182436A (zh) | 1998-05-20 |
| IL117526A0 (en) | 1996-07-23 |
| EA199700239A1 (ru) | 1998-02-26 |
| ATE208401T1 (de) | 2001-11-15 |
| DE69616770T2 (de) | 2002-08-01 |
| NO974342L (no) | 1997-11-19 |
| AU4934996A (en) | 1996-10-08 |
| BR9607839A (pt) | 1998-06-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0815139B1 (en) | Thrombin inhibitors based on the amino acid sequence of hirudin | |
| KR100259759B1 (ko) | 개선된 트롬빈 저해제 | |
| FI102183B (fi) | Menetelmä uusien trombiini-inhibiittoreiden valmistamiseksi | |
| Krstenansky et al. | Antithrombin properties of C-terminus of hirudin using synthetic unsulfated Nα-acetyl-hirudin45–65 | |
| CA1311583C (en) | Peptide derivatives and their application, in particular in therapy | |
| Maraganore et al. | Anticoagulant activity of synthetic hirudin peptides | |
| WO1991011458A1 (en) | CYCLIC PEPTIDES CONTAINING Arg-Gly-Asp FLANKED BY PROLINE | |
| HUT55799A (en) | Process for producing hirudine-like peptides | |
| EP0536177B1 (en) | Thrombin inhibitors based on the amino acid sequence of hirudin | |
| RU2138275C1 (ru) | Ингибиторы тромбина, способы их получения и фармацевтическая композиция на их основе | |
| JPS63159396A (ja) | 新規なポリペプチド | |
| US5858972A (en) | Antithrombotic agents and methods of use | |
| US5723576A (en) | Thrombin inhibitors, the preparation thereof and the use thereof for therapeutical, prophylactic and diagnostic applications | |
| WO1996030407A1 (en) | Bifunctional thrombin inhibitors bearing highly truncated fibrinogen recognition exosite binding component | |
| US5371071A (en) | Peptide and pseudopeptide compounds which are therapeutically active in the blood coagulation cascade | |
| BG60759B2 (bg) | инхибитори на тромбин |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |