DK2613647T3

DK2613647T3 - Fødevaretilsætningsstof omfattende en amidase til afgiftning af ochratoksin

Info

Publication number: DK2613647T3
Application number: DK11767471.3T
Authority: DK
Inventors: Shukun Yu; Charlotte Horsmans Poulsen; Huaming Wang; Igor Nikolaev; Søren Dalsgaard
Original assignee: Dupont Nutrition Biosci Aps
Priority date: 2010-09-06
Filing date: 2011-09-06
Publication date: 2018-05-22
Also published as: WO2012032472A2; ES2664178T3; BR112013005287B1; EP2613647A2; BR112013005287A2; JP2013540430A; CN103209597B; PL2613647T3; US20130216654A1; AR087928A1; CA2807688A1; EP2613647B1; WO2012032472A3; US9113649B2; CN103209597A; AU2011300392A1

Claims

FØDEVARETILSÆTNINGSSTOF OMFATTENDE EN AMIDASE TIL AFGIFTNING AF OCHRATOKSIN

1. Isoleret amidaseenzym, der er i stand til at nedbryde ochratoksin, og som omfatter en polypeptidsekvens med sekvensen ifølge et hvilket som helst af SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 eller SEQ ID NO: 5-11, 13, 14 eller 15, eller en sekvens med mindst 70 % identitet med et hvilket som helst af SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3, eller SEQ ID NO: 5-11, 13, 14 eller 15; eller et polypeptid, der produceres ved ekspression af et polynukleotid, der omfatter sekvensen ifølge SEQ ID NO: 2 eller en sekvens med mindst 70 % identitet dermed, eller et polynukleotid, der adskiller sig fra SEQ ID NO: 2 på grund af degeneration af den genetiske kode; eller en sekvens, der hybridiserer under stringente betingelser til komplementet af SEQ ID NO: 2, eller en sekvens, der har mindst 70 % identitet dermed.
2. Amidase ifølge krav 1, hvor ochratoksinet er ochratoksin A.
3. Amidase ifølge krav 1 eller krav 2, hvor amidasen har en Tim barrel-struktur, der indbefatter et aktivt site, der omfatter 6 histidinrester, 1 lysinrest og 1 asparaginsyrerest, hvor amino syreresterne i det aktive site svarer til positionerne Hl 11, Hl 13, H191, K246, H287, H289, H307 og D378 ifølge SEQ ID NO: 1, når den tertiære struktur af amidasen og SEQ ID NO: 1 sammenlignes.
4. Amidase ifølge et hvilket som helst af de foregående krav hvor amidaseenzymet omfatter en polypeptidsekvens med sekvensen ifølge et hvilket som helst af SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 eller SEQ ID NO: 5-11, 13, 14 eller 15, eller en sekvens med mindst 75 %, 80 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % identitet med et hvilket som helst af SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 eller SEQ ID NO: 5-11, 13, 14 eller 15, eller et polypeptid, der produceres ved ekspression af et polynukleotid, der omfatter sekvensen ifølge SEQ ID NO: 2 eller en sekvens med mindst 75 %, 80 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % identitet dermed, eller et polynukleotid, der adskiller sig fra SEQ ID NO: 2 på grund af degeneration af den genetiske kode; eller en sekvens, der hybridiserer under stringente betingelser til komplementet af SEQ ID NO: 2, eller en sekvens, der har mindst 75 %, 80 %, 90 %, 95 %, 98 %, 99 % identitet dermed.
5. Amidase ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, hvor amidasen hydrolyserer ca. mindst 100, mindst 200, mindst 300, mindst 400 til 900 nanomol ochratoksin A pr. min. pr. mg protein ved pH 7,0 og 40 °C.
6. Foder- eller fødevaretilsætningsstof, der omfatter et amidaseenzym, der er i stand til at nedbryde ochratoksin ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 5.
7. Foder- eller fødevaretilsætningsstof ifølge krav 6, der endvidere omfatter mindst én fysiologisk acceptabel bærer, der eventuelt er udvalgt fra mindst ét af maltodextrin, kalksten (calciumcarbonat), cyclodextrin, hvede, hvedeklid eller en hvedekomponent, ris eller risklid, saccharose, stivelse, Na2S04, talkum, og PVA og blandinger deraf.
8. Foder- eller fødevaretilsætningsstof ifølge et hvilket som helst af kravene 6 eller 7, hvor fodertilsætningsstoffet omfatter ét eller flere yderligere enzymer, hvor fortrinsvis det ene eller flere yderligere enzymer er udvalgt fra gruppen bestående af de, der er involveret i proteinnedbrydning, herunder carboxypeptidaser, fortrinsvis carboxypeptidase A, carboxypeptidase Y, A. niger asparaginsyreproteaser af PEPAa, PEP Ab, PEP Ac og PEP Ad, elastase, aminopeptidaser, pepsin eller pepsin-lignende, trypsin eller trypsin-lignende proteaser og bakterielle proteaser, herunder subtilisin og varianter heraf, og af de, der er involveret i stivelsesmetabolisme, fibemedbrydning, lipid metabolisme, proteiner eller enzymer, der er involveret i glycogenmetabolisme, amylaser, arabinaser, arabinofuranosidaser, catalaser, cellulaser, chitinaser, chymosin, cutinase, deoxyribonukleaser, epimeraser, esteraser, galactosidaser, glucanaser, glucanlysaser, endo-glucanaser, glucoamylaser, glucoseoxidaser, glucosidaser, herunder β-glucosidase, glucuronidaser, hemicellulaser, hexoseoxidaser, hydrolaser, invertaser, isomeraser, lipolytiske enzymer, laccaser, lyaser, mannosidaser, oxidaser, oxidoreduktaser, pectatlyaser, pektinacetylesteraser, pektindepolymeraser, pektinmethylesteraser, pektinolytiske enzymer, peroxidaser, phenoloxidaser, phytaser, polygalacturonaser, proteaser, rhamno-galac turo naser, ribonukleaser, thaumatin, transferaser, transportproteiner, transglutaminaser, xylanaser, hexoseoxidase (D-hexose: 02-oxidoreduktase, EC 1.1.3.5), sure phosphataser og/eller andre eller kombinationer deraf.
9. Foder- eller fødevaremateriale, der omfatter fodertilsætningsstoffet ifølge et hvilket som helst af kravene 6 til 8.
10. Foder eller fødevare, der omfatter fødevare- eller fodermaterialet ifølge krav 9.
11. Foder ifølge krav 10, der omfatter ét eller flere fodermaterialer, der er udvalgt fra gruppen omfattende a) kornsorter, såsom små kom (f.eks. hvede, byg, mg, havre og kombinationer deraf) og/eller store kom, såsom majs eller durra; b) biprodukter fra kornsorter, såsom majsglutenmel, Distillers Dried Grain Solubles (DDGS), hvedeklid, hvedefodermel, hvedeklid og groft mel, risklid, risskaller, havreskaller, palmekeme og citruskvas; c) ensilage; d) protein, der er opnået fra kilder, såsom soja, solsikke, peanut, lupin, ærter, hestebønner, bomuld, raps, fiskemel, tørret plasmaprotein, kød-og knoglemel, kartoffelprotein, valle, copra, sesam; e) olie og fedt, der er opnået fra vegetabilske og animalske kilder; f) mineraler og vitaminer.
12. Fødevare ifølge krav 10, hvor fødevaren omfatter en kornsort, for eksempel majs, hvede, byg, durra, et komprodukt, for eksempel havregrød, nudler, brød eller kager, kaffe, kakao, vin, øl, bælgfrugter, krydderiet, tørret frugt, grapejuice, mælk, mælkeprodukter, for eksempel ost, kød eller kødprodukter.
13. Fremgangsmåde til fremstilling af en fødevare eller et foder ifølge et hvilket som helst af kravene 10 til 12, hvilken fremgangsmåde omfatter tilsætning til et fødevare- eller fodermateriale af et fødevareeller fodertilsætningsstof ifølge et hvilket som helst af kravene 6 til 8.
14. Fremgangsmåde til fremstilling af et fødevare- eller fodertilsætningsstof ifølge et hvilket som helst af kravene 7 til 9, hvilken fremgangsmåde omfatter blanding af amidasen med mindst én fysiologisk acceptabel bærer.
15. Sammensætning, der omfatter et ochratoksin-kontamineret materiale og et ochratoksinnedbrydende amidaseenzym ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 5.
16. Sammensætning ifølge krav 15, der omfatter ét eller flere yderligere enzymer, der fortrinsvis er udvalgt fra gruppen, der består af de, der er involveret i proteinnedbrydning, herunder carboxypeptidaser, fortrinsvis carboxypeptidase A, carboxypeptidase Y, Λ. niger asparaginsyreproteaser, fortrinsvis PEP Aa, PEP Ab, PEP Ac og PEP Ad, elastase, aminopeptidaser, pepsin eller pepsin-lignende, trypsin eller trypsin-lignende proteaser og bakterielle proteaser, herunder subtilisin og varianter heraf, og af de, der er involveret i stivelsesmetabolisme, fibemedbrydning, lipid metabolisme, proteiner eller enzymer, der er involveret i glycogenmetabolisme, amylaser, arabinaser, arabinofuranosidaser, catalaser, cellulaser, chitinaser, chymosin, cutinase, deoxyribonukleaser, epimeraser, esteraser, galactosidaser, glucanaser, glucanlysaser, endo-glucanaser, glucoamylaser, glucoseoxidaser, glucosidaser, herunder β-glucosidase, glucuronidaser, hemicellulaser, hexoseoxidaser, hydrolaser, invertaser, isomeraser, lipolytiske enzymer, laccaser, lyaser, mannosidaser, oxidaser, oxidoreduktaser, pectatlyaser, pektinacetylesteraser, pektindepolymeraser, pektinmethylesteraser, pektinolytiske enzymer, peroxidaser, phenoloxidaser, phytaser, polygalacturonaser, proteaser, rhamno-galacturonaser, ribonukleaser, thaumatin, transferaser, transportproteiner, transglutaminaser, xylanaser, hexoseoxidase (D-hexose: 02-oxidoreduktase, EC 1.1.3.5), sure phosphataser og/eller andre eller kombinationer deraf, og som eventuelt endvidere omfatter mindst ét af et afgiftende enzym, der er udvalgt fra gruppen, der består af et mycotoksinnedbrydende enzym, for eksempel aflatoksindetoxizym, zearalenonesteraser, zearalenon, lactonaser, fumonisincarboxylesteraser, fumonisinaminotransferaser, aminopolyolaminoxidaser, deoxynivalenolexpoxidhydrolaser, en mycotoksinnedbrydende mikroorganisme, for eksempel Bacillus subtilis, eller et absorberingsmiddel (dvs. mycotoksinbindere), herunder mindst én polymer, for eksempel mikrobielle cellevægge eller et uorganisk materiale, såsom bentonit.
17. Sammensætning ifølge et hvilket som helst af kravene 15 eller 16, hvor sammensætningen er en fodersammensætning, en gæringsbouillon eller spildevand.
18. Fremgangsmåde til reduktion af ochratoksinkontaminering af et materiale, hvilken fremgangsmåde omfatter tilsætning til materialet af et ochratoksinnedbrydende amidaseenzym ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 5.
19. Fremgangsmåde ifølge krav 18, hvor amidasen hydrolyserer ca. mindst 100, mindst 200, mindst 300, mindst, mindst 400 til 900 nanomol ochratoksin A pr. min. pr. mg protein ved inkubation ved pH 7,0 og 40 °C.
20. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 18 til 19, hvilken fremgangsmåde endvidere omfatter tilsætning af ét eller flere yderligere enzymer, hvor fortrinsvis det ene eller flere yderligere enzymer er udvalgt fra gruppen bestående af de, der er involveret i proteinnedbrydning, herunder carboxypeptidaser, fortrinsvis carboxypeptidase A, carboxypeptidase Y, A. niger asparaginsyreproteaser af PEP Aa, PEPAb, PEP Ac og PEP Ad, elastase, aminopeptidaser, pepsin eller pepsin-lignende, trypsin eller trypsin-lignende proteaser og bakterielle proteaser, herunder subtilisin og varianter heraf, og af de, der er involveret i stivelsesmetabolisme, fibemedbrydning, lipid metabolisme, proteiner eller enzymer, der er involveret i glycogenmetabolisme, acetylesteraser, aminopeptidaser, amylaser, arabinaser, arabinofuranosidaser, catalaser, cellulaser, chitinaser, chymosin, cutinase, deoxyribonukleaser, epimeraser, esteraser, galactosidaser, glucanaser, glucanlysaser, endo-glucanaser, glucoamylaser, glucoseoxidaser, glucosidaser, herunder β-glucosidase, glucuronidaser, hemicellulaser, hexoseoxidaser, hydrolaser, invertaser, isomeraser, lipolytiske enzymer, laccaser, lyaser, mannosidaser, oxidaser, oxidoreduktaser, pectatlyaser, pektinacetylesteraser, pektindepolymeraser, pektinmethylesteraser, pektinolytiske enzymer, peroxidaser, phenoloxidaser, phytaser, polygalacturonaser, proteaser, rhamno-galacturonaser, ribonukleaser, thaumatin, transferaser, transportproteiner, transglutaminaser, xylanaser, hexoseoxidase (D-hexose: 02-oxidoreduktase, EC 1.1.3.5), sure phosphataser og/eller andre eller kombinationer deraf, som eventuelt endvidere omfatter tilsætning af mindst ét af et afgiftende enzym, der er udvalgt fra gruppen, der består af et mycotoksinnedbrydende enzym, for eksempel aflatoksindetoxizym, zearalenonesteraser, zearalenonlactonaser, fumonisincarboxylesteraser, fumonisinaminotransferaser, aminopolyolaminoxidaser, deoxynivalenolexpoxidhydrolaser, en mycotoksinnedbrydende mikroorganisme, for eksempel Bacillus subtilis, eller et absorberingsmiddel (dvs. mycotoksinbindere), herunder mindst én polymer, for eksempel mikrobielle cellevægge eller et uorganisk materiale, såsom bentonit.