DK175974B1 - DNA, der koder IgE receptor alfa-subenhed eller fragment heraf - Google Patents

DNA, der koder IgE receptor alfa-subenhed eller fragment heraf Download PDF

Info

Publication number
DK175974B1
DK175974B1 DK199001347A DK134790A DK175974B1 DK 175974 B1 DK175974 B1 DK 175974B1 DK 199001347 A DK199001347 A DK 199001347A DK 134790 A DK134790 A DK 134790A DK 175974 B1 DK175974 B1 DK 175974B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
ige
subunit
receptor
human
fragment
Prior art date
Application number
DK199001347A
Other languages
English (en)
Other versions
DK134790A (da
DK134790D0 (da
Inventor
Reuben Siraganian
Akira Shimizu
Philip Benfey
Philip Leder
Original Assignee
Harvard College
Reuben Siraganian
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22428905&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DK175974(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Harvard College, Reuben Siraganian filed Critical Harvard College
Publication of DK134790D0 publication Critical patent/DK134790D0/da
Publication of DK134790A publication Critical patent/DK134790A/da
Priority to DK200500682A priority Critical patent/DK176181B1/da
Application granted granted Critical
Publication of DK175974B1 publication Critical patent/DK175974B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70535—Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64 (CD2314/705F)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

DK 175974 B1
Den foreliggende opfindelse angår α-subenheden af humane mastceller og dens anvendelse i behandling og diagnose.
Mastceller, der er beliggende i bindevæv fra højere hvirveldyr, oplagre hista-. 5 min, prostaglandiner (lokale kemiske mediatorer) og proteaser inden i cyto- plastiske granuler. Når de stimuleres (f.eks. ved immunologiske reaktioner) frigøres disse granulere indhold fra mastcellen. Histamin virker kun på celler i dens umiddelbare nærhed og forårsager ved frigørelse at blodkar dilaterer, hvorved deres permeabilitet stiger over for serumproteiner (f.eks. antistoffer) 10 og andre immunsystemkomponenter (f.eks. leukocyter). Histamin er i udstrakt grad ansvarlig for de kliniske symptomer ved "allergiske reaktioner" som f.eks. høfeber (Metzger et al., 1986, Ann. Rev. Immunol. 4:419).
Immunologisk stimulering formidles af IgE molekyler, idet IgE er en af de fem 15 grupper antistoffer, der findes i højere hvirveldyr. IgE molekyler binder med høj affinitet til en rigelig forekommende, specifik mastcelleoverfladereceptor. Bundne IgE molekyler binder for deres vedkommende specifikke allergene molekyler, og der er adskillige tegn på, at triggermekanismen for frigørelse af det mastcellecytoplasmisk granulindhold er den allegenformidlede tværbin-20 ding af to eller flere IgE molekyler (Metzger et al., 1986, Ann. Rev. Immunol.
4:419; Ishizaka et al., 1977, J. Immunol. 119: 1589; Isersky et al., 1978, J. Immunol. 121:549: Froese, 1984, Prog. Allergy, 34:142; Lewis og Austen, 1981, Nature 293:103).
25 Mastcelleoverfladereceptoren består af tre subenheder, en kraftig glycosyle-ret α-subenhed på 50-60 kd, der findes på den ydre overflade af cellen og som bærer IgE-bindingsstedet, og to ikke-glycosylerede intramembrankom-ponenter, β og γ subenhedeme, på omtrent henholdsvis 30 og 20 kd (Metzer et al., 1986, Ann. Rev. Immunol. 4:419; Froese, 1984, Prog. Allergy, 34:142).
Kinet et al, Biochemistry, 1987, 26, side 4605-4610 beskriver isolering af et 30 DK 175974 B1 2 cDNA, som sandsynligvis koder for α-subenheden af en IgE-receptor fra rotte. Hempstead et al, Journal of Immunology, 1979, Vol. 123, Nr. 5, side 2283-2291, beskriver karakteriseringen af en IgE-receptor isoleret fra en human cellebestand beriget for basofiler, Metzer et al, Federation Proceedings, 5 Vol. 41, Nr. 1, 1982 omtaler strukturen af en IgE-receptor fra rotte.
Opfindelsen angår generelt i et aspekt en cDNA sekvens, der koder a-subenheden af human mastcelle IgE overfladereceptor eller et IgE bindende fragment deraf, hvilken α-subenhed af IgE overfladereceptor har mindst 10 75 % homologi med den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d, og hvilket IgE-bindende fragment har en længde på mindst 10 aminosyrer og med mindst 75 % homologi med en del af den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d.
15 Opfindelsen angår også i et andet alternativt aspekt en vektor (plasmid eller viral) indeholdende DNA, der koder α-subenheden af human mastcelle IgE overfladereceptor, eller et IgE bindende fragment deraf, hvilken a-subenhed af IgE overfladereceptor har mindst 75 % homologi med den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d, og hvilket IgE-bindende fragment har en 20 længde på mindst 10 aminosyrer og med mindst 75 % homologi med en del af den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d.
Ifølge et tredje alternativt aspekt af den foreliggende opfindelse tilvejebringes en fremgangsmåde til fremstilling af α-subenhed af human mastcelle IgE 25 overfladereceptor eller et IgE-bindende fragment deraf, omfattende indføjelse af et cDNA, der koder for α-subenheden af human IgE-receptor eller fragment deraf i en egnet udtrykkelsesvektor, hvilken α-subenhed IgE-receptor har mindst 75 % homologi med den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d, og hvilket IgE-bindende fragment har en længde på mindst 10 amino-30 syrer og med mindst 75 % homologi med en del af den humane aminosyre- i DK 175974 B1 3 sekvens vist i figur 4a til 4d, transformering af værtsceller med vektoren og isolering af α-subenheden af IgE-receptor eller fragment deraf udtrykket af værten.
5 Opfindelsen angår endvidere α-subenheden af human mastcelle IgE-receptor eller et IgE-bindende fragment deraf, som er opnåeligt ved ovennævnte fremgangsmåde, til anvendelse i terapi.
Vi beskriver heri anvendelsen af α-subenheden af human mastcelle IgE 10 overfladereceptor og et IgE bindende fragment deraf til fremstilling af et lægemiddel til behandling af allergier, eller til fremstilling af et diagnostisk middel for at måle en patients allergiske respons for et stof, som patienten har været udsat for, for at bestemme effektiviteten af en anti-allergisk behandling, eller til monitoring af en patients allergiske status over tid.
15
Den humane IgE receptor α-subenhed, eller fragmenter heraf, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan anvendes til en hel række diagnostiske og terapeutiske formål, der nærmere beskrives nedenfor.
20 Idet det henvises til tegningen viser fig. 1 HPLC elueringsprofilen af rotte IgE overfladereceptor α-subenhed tryp-tiske nedbrydningsfragmenter, 25 fig. 2 er et par restriktionskort over to rotte IgE receptor a-subenhedskloner, fig. 3 er et restriktionskort over en human IgE receptor α-subenhedsklon, og fig. 4 er en skematisk sammenligning af DNA sekvenserne af rotte og huma-30 ne IgE receptor α-subenhed cDNA kloner.
DK 175974 B1 4 cDNA sekvensen, der koder for human mastcelle IgE overfladereceptor a-subenhed, blev fremstillet ved følgende almindelige række af trin. Først blev rotte IgE overfladereceptor α-subenhed renset, fragmenteret, og tryptiske 5 peptider frembragt. En rotte cDNA klon blev herefter isoleret under anvendelse af oligonucleotider, der var opbygget på basis af aminosyresekvensen af en af de tryptiske peptider. Dernæst blev et humant cDNA bibliotek fremstillet, og rotte cDNA fragmenterne blev anvendt til at afsøge det humane bibliotek. Mere detaljeret blev disse procedurer udført på følgende måde.
10
Rotte IgE receptorproteinrensninq, tryptisk peptidfremstilling oq sekvensbe- stemmelse.
Rotte basofile leukæmi (RBL-2H3) celler blev solubiliseret og inkuberet nat-15 ten over ved 4 °C med monoklonalt anti-rotte mastcelle IgE receptor antistof (mAb BC4) koblet til Sepharose 4B kugler (Basciano et al., 1986, J.B.C., Vol.
261, side 11823). Kuglerne blev vasket, og de bundne proteiner blev elueret med 5 % eddikesyre og dernæst lyofiliseret. Prøver blev analyseret ved hjælp af NaDodS04-PAGE (Laemmli, 1970, Nature 227:680) efterfulgt af 20 sølvfarvning (Oakley et al., 1980, Anal. Biochem. 105:361). Som forventet var der bånd svarende til α, β og γ kæderne af receptoren. De forskellige receptorkomponenter blev yderligere renset ved eluering fra NaDodS04-PAGE.
Aminosyresekvensbestemmelse ved N-endestillet analyse var ikke tilstræk-25 kelig, fordi den N-endestillede del af de eluerede α-subenhedsprøver synes at være blokerede. Prøverne blev derfor reduceret med 2 mM dithiothreitol i 6 M guanidin HCI, 100 mM Tris (pH 8,3) og 1,0 mM EDTA ved 37 °C under N2 og blev derefter S-carboxymethyleret med 10 mM iodeddikesyre. Salte blev fjernet ved HPLC på en Vydac C4 søjle. Afsaltede prøver blev behandlet med 30 TPCK (L-1-tosylamido-2-phenylethylchlormethylketon) behandlet trypsin i 100 mM Tris (pH 7,2). De fremstillede tryptiske peptider blev adskilt ved DK 175974 B1 5 HPLC på en Vydac C4 søjle; elueringsprofilen er angivet i fig. 1. Toppe vist med pile blev underkastet aminosyresekvensering under anvendelse af en Applied Biosystems dampfase aminosyresekvenser. Peptidsekvenser opnået fra disse toppe er angivet i tabel 1 nedenfor.
5 TABEL 1 WIHNDSISNXK og YSYDSNXISIR (Top1) ILTGDKVTLIXNG (Top 2) 10 VIYYK (Top 3) SWSLDPPWIR (Top 4)
Isolering af rotte mastcelle IqE receptor q-subenhed cDNA kloner og nucleo-tidsekvensbestemmelse 15
Strategien for isolering af rotte IgE receptor α-subenhed cDNA var at syntetisere oligonucleotider, der kunne forudsiges at være komplementære med rotte α-subenhedsgenet, og derefter anvende disse oligonucleotider til at afsøge et rotte cDNA bibliotek.
20
Oliqonucleotidprober
Computeranvendt analyse af de tryptiske fragmenter blev udført under anvendelse af software version 4 og 5 fra Genetics Computer Group fra the 25 University of Wisconsin (Devereus et al,. Nucl. Acids Res. .12:7035). Blandt peptidsekvenseme udviste peptid 4 (fig. 1, top 4) signifikant homologi med en sekvens nær NH2-endestillingen af muse Fey (IgG) receptoren (Ravetch et al., 1986, Science 234:718). hvilket antyder, at der er en analog sekvens i IgE receptorsubenheden. Fra sekvensen af peptid 4 blev den sidste codon-30 rige del Asp-Pro-Pro-Trp-lle udvalgt til fremstilling af en 32-blanding af det Urner oligonucleotid 5’-ATCCA(A/G/C/T)GG(A/G/C/T) GG(A/G)TC-3’ under DK 175974 B1 6 anvendelse af en automatiseret DNA syntesemaskine (Model 380A og B, Applied Biosystems). Oligonucleotiderne blev mærket under anvendelse af 32P således som beskrevet af Maniatis et al., (1982), Molecular Cloning.
5 Konstruktion οα afsøgning af cDNA biblioteker RNA’er blev ekstraheret fra rotte RBL-2H3 celler ved homogenisering i 6 M guanidiniumisothiocyanat efterfulgt af ultracentrifugering over en CsCI pude således som beskrevet af Maniatis et al., (1982) Molecular Cloning, efterfulgt 10 af phenol-chloroform-isoamylalkohol (25:24:1) ekstraktion. Poly(A)+ RNA'er blev fremstillet under anvendelse af oligo(dT) cellulosesøjler (Aviv og Leder, 1972, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 69:1408), og cDNA biblioteker blev opbygget således som beskrevet af Okayama og Berg, 1983, Molec. Cell. Biol.
3:280 under anvendelse af en let modificeret vektor og linker fragmenter 15 (Noma et al., 1986, Nature 319-640). Ud fra 5 pg poly(A)+RNA blev opnået 9 x 105 uafhængige kolonier.
Ca. 7 x 104 uafhængige kolonier blev afsøgt med mærket oligonucleotidpro-be således som beskrevet af Hahahan og Meselson, 1980, Gene 10:63, og 20 tre positive kloner blev identificeret. Nucleotidsekvenseme af to af de tre kloner, der viste ens restriktionsenzym nedbrydningsmønster, blev bestemt ved hjælp af dideoxykædeafslutningsmetoden beskrevet af Sanger et al., 1977,
Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 74:5463 under anvendelse af alkali-denatureret plasmid DNA.
25
Idet der henvises til henholdsvis fig. 2 og 4, har disse kloner nøjagtig den samme sekvens bortset fra en deletion (bp 21) i pAS-R-lgER-5A (cl 5A) og to deletioner (bp 163 og 8) i pAS-R-lgER-2A (cl 2A). En fuldlængdet cDNA klon (cl 2A/5A) blev konstrueret ved at kombinere den venstre tredjedel af cl 2A 30 cDNA med de højre to trediedele af cl 5A cDNA'et. Ved RNase beskyttelsesforsøg (Melton et al,. 1984, Nucl. Acids Res. 12:7035) under anvendelse af et DK 175974 B1 7 mærket RNA transskriberet fra klonen 2A/5A cDNA i pGEM3, viste et plasmid indeholdende promotorsekvensen for T7 RNA polymerase, at hoveddelen af IgE receptor mRNA’et ikke havde nogen deletioner. Denne observation muliggjorde, at den primære struktur af rotte IgE receptor a-, 5 subenhed kunne afledes ud fra den 735 bp åbne læseramme af den ikke- deleterede sekvens (fig. 4). Denne åbne læseramme viste sig at kode et 245 aminosyrepeptid indeholdende fuldstændige tilpasninger med peptidsekvensen, der var blevet bestemt ved aminosyresekvensering.
10 Isolering af den humane mastcelle IgE receptor g-subenhed s cDNA klon
For at klone det humane α-kæde cDNA blev et cDNA bibliotek fremstillet generelt som beskrevet ovenfor ud fra en human mastcellelinie, der var velkendt for at frembringe IgE receptorer (KU812). Ca. 9 x 104 kolonier blev af- 15 søgt med nick-translateret Hpall(46)-Pvull(970) fragment af rotte cDNA klon 2A/5A. Hybridiseringen blev udført i 6 x SSC -50 % formamid -10 % dextran-sulfat ved 42 °C, 15 timer, og filtrene blev derefter vasket to gange i 0.1 x SSC og 0,1 % NaDodS04 ved 55 °C i 15 minutter. Tre positive kloner blev identificeret, og den ene, der indeholdt det største indskud (pAS-h-lgER- 20 110B) blev yderligere karakteriseret. Både nucleotid og afledte aminosyrese- kvenser blev sammenlignet med rottesekvensen (fig. 4).
Indførsel i en udtrykkelsesvektor 25 Den humane cDNA sekvens ifølge opfindelsen kan indføres på almindelig måde i en hel række udtrykkelsesvektorer til frembringelse af den rekombi-nante humane mastcelle IgE receptor α-subenhed ifølge opfindelsen. Afkortede sekvenser kan anvendes til fremstilling af opløselige fragmenter.
30 cDNA'et, der koder den humane mastcelle IgE overfladereceptor a-subenhed DK 175974 B1 8 kan f.eks. indføres i udtrykkelsesvektoren beskrevet i USA patentskrift nr.
4 656 134. Dette plasmid kan derefter anvendes til at transformere pattedyr værtsceller, og den humane mastcelle IgE receptor α-subenhed kan isoleres og renses på almindelig måde.
5 I dets uglycosylerede form kan polypeptidet frembringes i en bakteriel vært som f.eks. E. coli. cDNA'et, der koder den humane mastcelle IgE overfladereceptor α-subenhed kan f.eks. indføres, i udtrykkelsesvektoren beskrevet af DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. 80:21. Plasmidet, der bærer hy-10 brid tac-promotoren, kan anvendes til at transformere E. coli, og a-subenhed en kan isoleres og renses på almindeligt kendte måder.
Anvendelse 15 Den humane mastcelle IgE overfladereceptor α-subenhed eller et fragment heraf kan anvendes til at frembringe anti-lgE overfladereceptor polyklonale eller monoklonale antistoffer under anvendelse af velkendte metoder. Disse antistoffer kan anvendes ved en in vitro diagnostisk undersøgelsesmetode af en hvilken som helst af de kendte f.eks. ELISA til bestemmelse af mængden 20 af IgE receptor i en biologisk prøve udtaget fra en patient f.eks. blod eller vævsprøver, specielt i basofiler. Mængden af tilstedeværende IgE receptor α-subenhed i prøven kan tjene som et mål for det allergiske respons fra en patient overfor en forbindelse, som patienten har været udsat for. IgE receptor α-subenhedsniveauerne kan også måles for at bestemme effektiviteten af 25 anti-allergiterapier og for at kontrollere en patients allergiske status gennem et vist tidsforløb. Antistofferne kan også anvendes ved immunokromatogra-fisk rensning af IgE receptor α-subenhed fra dyrkningsmedier.
IgE receptor α-subenhed en eller opløselige fragmenter heraf kan også an-30 vendes terapeutisk til behandling af patienter, der lider af allergier. IgE recep- Λ DK 175974 B1 9 tor α-subenhed en eller fragmenter heraf konkurrerer med hensyn til IgE med receptoren, der naturligt forekommer på mastceller, således at IgE bindes til det administrerede peptid og er ude af stande til at binde til mastceller til formidling af det allergiske respons. Som et alternativ til at anvende selve pepti-5 det ved kompetitiv hæmningsterapi kan peptidet anvendes til at opbygge ik-ke-peptid lægemidler, der opfører sig terapeutisk ligesom peptiderne. Generelt anvendes røntgenkrystallografi til at fastlægge peptidets tredimensionale opbygning, specielt dens IgE bindingssteder, og en ikke-peptidforbindelse syntetiseres under anvendelse af computeropbygning for funktionelt at efter-10 ligne de vigtige regioner i peptidet.
Peptidet eller den syntetiserede forbindelse på basis af peptidets opbygning kan administreres som et ikke-modificeret peptid eller i form af et farmaceutisk acceptabelt salt blandet med et fysiologisk acceptabelt bærestof som 15 f.eks. saltvand. Eksempler på foretrukne salte er sådanne med terapeutisk acceptable organiske syrer som eddikesyre, mælkesyre, maleinsyre, citronsyre, æblesyre, ascorbinsyre, ravsyre, benzoesyre, salicylsyre, methansul-fonsyre, toluensulfonsyre eller pamsyre såvel som polymere syrer som f.eks. garvesyre eller carboxymethylcellulose, og salte med uorganiske syrer som 20 f.eks. hydrogenhalogenidsyrer som saltsyre, svovlsyre eller phosphorsyre.
Præparatet kan foreligge i form af en væske til intravenøs, subkutan, parenteral eller intraperitoneal administrering eller som en spray til administrering gennem bronchier eller næsen.
25 IgE receptor α-subenhed en kan også anvendes til at afsøge forbindelser, der potentielt har evnen til at binde til IgE receptor α-subenhed en; sådanne forbindelser kan, når de administreres terapeutisk til et menneske, der lider af allergi, lette det allergiske respons ved at binde til IgE receptor α-subenhed ! en på patientens mastceller, hvorved IgE forhindres i at binde og derved af-30 bryde det IgE-medierede allergiske respons. Afsøgning af sådanne IgE receptor α-subenhedsbindingsforbindelser kan udføres ved at immobilisere a- DK 175974 B1 10 subenhed en, bringe den forbindelse, der skal undersøges i mærket form (f.eks. radiomærket) i kontakt med den immobiliserede subenhed, adskille opløselige dele immobiliserede faser og detektere bundet mærke som en indikation på bindingen.
5
Andre udførelsesformer
Andre udførelsesformer er mulige. F.eks. behøver det opløselige a-subenhedsfragment ikke at have perfekt homologi med den tilsvarende regi-10 on af det naturligt forekommende molekyle, men behøver kun at have tilstrækkelig homologi (sædvanligvis mindst 75 %) for at binde til humant IgE.
Fragmentet skal også være stort nok (sædvanligvis mindst 10 aminosyrer) for at binde IgE. Dersom der ønskes opløselighed bør fragmentet sædvanligvis ikke indeholde nogen af de hydrofobe transmembrane dele af det naturligt 15 forekommende molekyle. Fragmenter af α-subenhed en såvel som hele molekylet kan anvendes til at frembringe antistoffer, der kan anvendes til de ovenfor beskrevne diagnostiske formål og til oprensning.
i

Claims (2)

  1. 2. Vektor, omfattende DNA, der koder α-subenheden af den humane mast celle IgE overfladereceptor eller et IgE bindende fragment heraf, hvilken a-subenhed af IgE overfladereceptor har mindst 75 % homologi med den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d, og hvilket IgE bindende fragment har en længde på mindst ti aminosyrer og har mindst 75 % homologi 15 med en del af den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d.
  2. 3. Fremgangsmåde til fremstilling af α-subenhed af human mastcelle IgE receptor eller et IgE bindende fragment heraf omfattende indføjelse af et cDNA, der koder for α-subenheden af human IgE receptor eller fragment deraf i en 20 egnet udtrykkelsesvektor, hvilken α-subenhed IgE receptor har mindst 75 % homologi med den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d, og hvilket IgE bindende fragment har en længde på mindst ti aminosyrer og med mindst 75 % homologi med en del af den humane aminosyresekvens vist i figur 4a til 4d, transformering af værtscellen med vektoren, og isolering af a-25 subenheden af IgE receptor eller fragment deraf udtrykt af værten. 4. cDNA sekvens ifølge krav 1, hvilken sekvensen er som vist i figur 4a til 4d, eller en del deraf, som koder for det IgE bindende fragment. DK 175974 B1 12 5. α-subenhed af human mastcelle IgE receptor eller et IgE bindende fragment deraf som kan opnås ved fremgangsmåden ifølge krav 3 til anvendelse i terapi.
DK199001347A 1987-12-01 1990-05-31 DNA, der koder IgE receptor alfa-subenhed eller fragment heraf DK175974B1 (da)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK200500682A DK176181B1 (da) 1987-12-01 2005-05-11 Et rekombinant oplöseligt fragment af alfa-subenhedpolypeptidet af human mastcelle IgE overfladereceptor samt anvendelse af samme

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12721487 1987-12-01
US07/127,214 US4962035A (en) 1987-12-01 1987-12-01 DNA encoding IgE receptor alpha-subunit or fragment thereof
US8804255 1988-11-29
PCT/US1988/004255 WO1989005352A1 (en) 1987-12-01 1988-11-29 DNA ENCODING IgE RECEPTOR alpha-SUBUNIT OR FRAGMENT THEREOF

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK134790D0 DK134790D0 (da) 1990-05-31
DK134790A DK134790A (da) 1990-07-25
DK175974B1 true DK175974B1 (da) 2005-10-10

Family

ID=22428905

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK199001347A DK175974B1 (da) 1987-12-01 1990-05-31 DNA, der koder IgE receptor alfa-subenhed eller fragment heraf
DK200500682A DK176181B1 (da) 1987-12-01 2005-05-11 Et rekombinant oplöseligt fragment af alfa-subenhedpolypeptidet af human mastcelle IgE overfladereceptor samt anvendelse af samme

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK200500682A DK176181B1 (da) 1987-12-01 2005-05-11 Et rekombinant oplöseligt fragment af alfa-subenhedpolypeptidet af human mastcelle IgE overfladereceptor samt anvendelse af samme

Country Status (11)

Country Link
US (2) US4962035A (da)
EP (1) EP0394302B1 (da)
JP (1) JP3117206B2 (da)
KR (1) KR970009936B1 (da)
AT (1) ATE177148T1 (da)
AU (1) AU625434B2 (da)
CA (1) CA1341538C (da)
DE (1) DE3856309T2 (da)
DK (2) DK175974B1 (da)
NO (1) NO310424B1 (da)
WO (1) WO1989005352A1 (da)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5451669A (en) * 1986-05-29 1995-09-19 The University Of Melbourne DNA encoding for an Fc receptor for immunoglobulin
US5985599A (en) * 1986-05-29 1999-11-16 The Austin Research Institute FC receptor for immunoglobulin
US5639660A (en) 1988-02-24 1997-06-17 Hoffmann-La Roche Inc. Polypeptide and DNA sequence corresponding to the human receptor with high affinity for IgE
CA2059842A1 (en) * 1991-02-11 1992-08-12 Richard A. Chizzonite Ige-receptor-antibodies
US5516651A (en) * 1991-11-15 1996-05-14 The General Hospital Corporation Nucleic acids encoding calcitonin receptor and uses thereof
US5770396A (en) * 1992-04-16 1998-06-23 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Isolation characterization, and use of the human beta subunit of the high affinity receptor for immunoglobulin E
US5874404A (en) * 1992-08-04 1999-02-23 Chisei Ra Immunoglobulin E receptor α-chain inhibits IgE production and secondary allergic responses
CA2141685A1 (en) * 1992-08-04 1994-02-17 Koji Naito Antiallergic composition
WO1995016203A2 (en) * 1993-12-10 1995-06-15 Genentech, Inc. Methods for diagnosis of allergy and screening of anti-allergy therapeutics
DE69501817T2 (de) * 1994-01-18 1998-09-10 Genentech Inc Verfahren zur behandlung von parasitären infektionen unter verwendung von ige-antagonisten
US20040197326A1 (en) * 1995-07-27 2004-10-07 Genentech, Inc. Method for treatment of allergic asthma
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6685940B2 (en) * 1995-07-27 2004-02-03 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9526599D0 (en) 1995-12-28 1996-02-28 Sandoz Ltd Elisa test system
US6423512B1 (en) 1996-07-26 2002-07-23 Novartis Ag Fusion polypeptides
MY120425A (en) * 1996-07-26 2005-10-31 Novartis Ag Fusion polypeptides
US6391569B1 (en) 1996-09-18 2002-05-21 Heska Corporation Method to detect Dirofilaria immitis infection
AU769954B2 (en) * 1996-11-26 2004-02-12 Heska Corporation Method to detect IgE
US5945294A (en) * 1996-11-26 1999-08-31 Heska Corporation Method to detect IgE
US5958880A (en) 1996-12-19 1999-09-28 Heska Corporation Feline Fc epsilon receptor alpha chain proteins and therapeutic uses thereof
US6060326A (en) * 1997-04-07 2000-05-09 Heska Corporation Method to detect canine IgE and kit therefor
US6057127A (en) 1998-01-29 2000-05-02 Heska Corporation Equine Fc epsilon receptor alpha chain nucleic acid molecules and uses thereof
JP2002533060A (ja) * 1998-11-05 2002-10-08 ヘスカ コーポレイション 結晶化型のＦｃイプシロンレセプタアルファ鎖、その３−Ｄモデル、及びそれらの利用法
US6889145B1 (en) 2000-03-15 2005-05-03 Northwestern University Three-dimensional model of a Fc region of an IgE antibody and uses thereof
WO2001069253A2 (en) * 2000-03-15 2001-09-20 Heska Corporation 3d model of an fc epsilon receptor alpha chain-ige fc region complex
US20030022250A1 (en) * 2001-05-29 2003-01-30 Dreskin Stephen C. Functional IgE test methods and compositions
EP2284192A3 (en) 2002-11-08 2011-07-20 Ablynx N.V. Camelidae antibodies for sublingual administration
WO2004041867A2 (en) 2002-11-08 2004-05-21 Ablynx N.V. Camelidae antibodies against imminoglobulin e and use thereof for the treatment of allergic disorders
EP3192806A1 (en) 2016-01-13 2017-07-19 Affiris AG Alpha chain of the high-affinity ige receptor (fceria)
CN110716054A (zh) * 2019-09-11 2020-01-21 天津医科大学 一种血清亲细胞性免疫球蛋白e的定量检测试剂盒

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU6385886A (en) * 1986-10-10 1988-04-14 Medical Biology Institute Production of ige-binding protein by recombinant methods

Also Published As

Publication number Publication date
US4962035A (en) 1990-10-09
US7202333B1 (en) 2007-04-10
DK134790A (da) 1990-07-25
AU2610588A (en) 1989-07-05
DK176181B1 (da) 2006-12-11
KR900700600A (ko) 1990-08-16
AU625434B2 (en) 1992-07-09
DE3856309D1 (de) 1999-04-08
NO902393L (no) 1990-05-30
WO1989005352A1 (en) 1989-06-15
JP3117206B2 (ja) 2000-12-11
DE3856309T2 (de) 1999-07-15
DK134790D0 (da) 1990-05-31
JPH03502878A (ja) 1991-07-04
EP0394302A1 (en) 1990-10-31
KR970009936B1 (ko) 1997-06-19
NO902393D0 (no) 1990-05-30
CA1341538C (en) 2007-08-28
EP0394302B1 (en) 1999-03-03
EP0394302A4 (en) 1991-09-11
NO310424B1 (no) 2001-07-02
DK200500682A (da) 2005-05-11
ATE177148T1 (de) 1999-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK175974B1 (da) DNA, der koder IgE receptor alfa-subenhed eller fragment heraf
EP0413908B2 (en) Soluble extracellular fragment of the human IFN-beta 2/IL-6 receptor, its preparation and pharmaceutical compositions containing it
Morgan et al. Anti-C5a receptor antibodies. Characterization of neutralizing antibodies specific for a peptide, C5aR-(9-29), derived from the predicted amino-terminal sequence of the human C5a receptor.
CA2073045C (en) A human t cell reactive feline protein (trfp) isolated from house dust and uses therefor
EP0406367A1 (en) Scavenger receptor protein and antibody thereto
JPH01502879A (ja) Ｌｆａ―１のクローニング
NZ227059A (en) Mammalian interleukin-1 receptors (il-1r), dna sequences encoding them and cdna clones therefor
JP2002502600A (ja) ヒトセリンプロテアーゼおよびセルピンポリペプチド
JPH04505009A (ja) クローニングｌｆａ―１
JP2002537796A (ja) ヒトグリコシル化酵素
JP4212651B2 (ja) サソリ由来神経ペプチド
JP2004527242A (ja) ヒスチジンリッチ糖タンパク質
JP2718827B2 (ja) 分泌Ｍａｃ−２結合糖タンパク質
WO1990002207A1 (en) Cloned nephritis antigen
US7001595B2 (en) Chemokine β-7 variants
CA2209227A1 (en) New chemokines expressed in pancreas
JP2003507011A (ja) Ｉｌ−１６拮抗剤
US20090258024A1 (en) Compositions and methods for diagnosis and treatment of chronic inflammatory diseases
US20030004101A1 (en) Peptides derived from the human amyloid precursor protein
US7128906B2 (en) T1 receptor-like ligand II and uses thereof
EP0358977A1 (en) Cloned nephritis antigen
CN118027168A (zh) 基于真核表达的msl重组植物蛋白的制备方法及用途
JPH06100595A (ja) Ｉｌ−８受容体
IL90488A (en) Ifn-beta2/il-6 receptor its preparation and pharmaceutical compositions containing it
JP2003519162A (ja) Ｐｐ１４融合蛋白質並びに該蛋白質の製造及び使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
PUP Patent expired