DE3856309T2 - DNS KODIEREND FÜR DIE IgE REZEPTOR A-UNTEREINHEIT ODER EIN FRAGMENT DAVON - Google Patents
DNS KODIEREND FÜR DIE IgE REZEPTOR A-UNTEREINHEIT ODER EIN FRAGMENT DAVONInfo
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Description
- Die vorliegende Erfindung betrifft die α-Subeinheit von menschlichem Mastzellen-IgE und deren Verwendung zur Therapie und Diagnose.
- Mastzellen, die sich im Bindegewebe höherer Wirbeltiere befinden, speichern Histamin. Prostaglandine (lokale chemische Mediatoren) und Proteasen innerhalb zytoplasmatischer Granula. Bei Stimulation (beispielsweise durch immunologische Reaktion) wird der Inhalt dieser Granula aus der Mastzelle freigesetzt. Histamin wirkt nur auf Zellen in seiner unmittelbaren Nähe und bewirkt bei Freisetzung die Erweiterung von Blutgefäßen, wodurch ihre Durchlässigkeit für Serumproteine (z.B. Antikörper) und andere Immunsystemkomponenten (z.B. Leukozyten) erhöht wird. Histamin ist weitgehend verantwortlich für die klinischen Symptome "allergischer Reaktionen", wie z.B. Heuschnupfen (Metzger et al., 1986, Ann. Rev. Immunol. 4.419).
- Immunologische Stimulierung wird durch IgE-Moleküle vermittelt, wobei IgE eine der fünf Klassen von Antikörpern ist, die bei höheren Wirbeltieren zu finden sind. IgE-Moleküle binden sich mit hoher Affinität an einen reichlich vorhandenen spezifischen Mast- zellen-Oberflächenrezeptor. Gebundene IgE-Moleküle wiederum binden sich an spezifische Allergenmoleküle, und es gibt beträchtliche Hinweise darauf, daß der Auslöser für die Freisetzung des zytoplasmatischen Mastzellen-Granula-Inhalts die allergenvermittelte Vernetzung zweier oder mehrerer gebundener IgE-Moleküle ist (Metzger et al., Ann. Rev. Immunol. 4, 419 [1986]; Ishizaka et al., J. Immunol. 119, 1589 [1977]; Isersky et Ä al.,). Immunol. 121. 549; Froese, Prog. Allergy 34, 142 [1984]; Lewis und Austen, Nature 293, 103 [1981]). Der Mastzellen-Oberflächenrezeptor besteht aus drei Subeinheiten, einer stark glykosylierten α-Subeinheit mit 50 bis 60 kd, die zur Außenfläche der Zelle hin freiliegt und die IgE-Bindungsstelle trägt, und zwei nichtglykosylierten Intramembran-Komponenten, den β- und γ-Subeinheiten mit etwa 30 bzw. 20 kd (Metzger et al., Ann. Rev. Immunol. 4, 419 [1986]; Froese, Prog. Allergy 34, 142 [1984]).
- Kinet et al., Biochemistry 26, 4605-4610 (1987), beschreiben das Isolieren von cDNA, von der angenommen wird, daß sie für die α-Subeinheit eines Ratten-IgE-Rezeptors ko diert. Hempstead et al., Journal of Immunology 123(5), 2283-2291 (1979), beschreiben die Charakterisierung eines IgE-Rezeptors, der aus einer menschlichen Zellpopulation isoliert wurde, die an Basophilen angereichert ist, Metzer et al., Federation Proceedings 41 (1) (1982), erörtern die Struktur eines Ratten-IgE-Rezeptors.
- Im allgemeinen betrifft die Erfindung in einem ihrer Aspekte eine cDNA-Sequenz, die für die α-Subeinheit von menschlichem Mastzellen-IgE-Oberflächenrezeptor oder ein IgE-Bindungsfragment davon kodiert, wobei der α-Subeinheit-IgE-Oberflächenrezeptor zumindest 75%-ige Homologie mit der in den Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen Aminosäuresequenz aufweist und das IgE-Bindungsfragment eine Länge von zumindest 10 Aminosäuren aufweist und zumindest 75%-ige Homologie mit einem Teil der in den Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen Aminosäuresequenz aufweist.
- Die Erfindung betrifft in einem zweiten und alternativen Aspekt auch einen (Plasmid- oder viralen) Vektor, der DNA umfaßt, die für die α-Subeinheit des menschlichen Mastzellen-IgE-Oberflächenrezeptors oder ein IgE-Bindungsfragment davon kodiert, wobei der α-Subeinheit-IgE-Oberflächenrezeptor zumindest 75%-ige Homologie mit der in den Fig. 4a und 4d dargestellten menschlichen Aminosäuresequenz aufweist und das IgE- Bindungsfragment eine Länge von zumindest 10 Aminosäuren aufweist und zumindest 75%-ige Homologie mit einem Teil der in den Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen. Aminosäuresequenz aufweist.
- Gemäß einem dritten alternativen Aspekt der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren zur Herstellung von menschlicher Mastzellen-IgE-Rezeptor-α-Subeinheit oder eines IgE- Bindungsfragments davon bereitgestellt, umfassend das Einfügen einer cDNA, die für die α-Subeinheit von menschlichem IgE-Rezeptor oder ein Fragment davon kodiert, in einen geeigneten Expressionsvektor, wobei der α-Subeinheit-IgE-Rezeptor zumindest 75%-ige Homologie mit der in den Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen Aminosäuresequenz aufweist, und das IgE-Bindungsfragment zumindest eine Länge von 10 Aminosäuren aufweist und zumindest 75%-ige Homologie mit einem Teil der in den Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen Aminosäuresequenz aufweist; das Transformieren einer Wirtszelle mit dem Vektor; und das Isolieren der α-Subeinheit von IgE- Rezeptor oder eines vom Wirt exprimierten Fragments davon.
- Die Erfindung erstreckt sich auch auf menschliche Mastzellen-IgE-Rezeptor-α-Subeinheit oder ein IgE-Bindungsfragment davon, wie nach dem genannten Verfahren erhältlich, zur Verwendung in der Therapie.
- Die vorliegende Erfindung beschreibt die Verwendung der α-Subeinheit von menschlichem Mastzellen-IgE-Oberflächenrezeptor oder eines IgE-Bindungsfragments davon zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Allergien; oder zur Herstellung eines Diagnosemittels zum Messen der allergischen Reaktion eines Patienten auf eine Substanz, welcher der Patient ausgesetzt wurde, um die Effizienz einer Anti-Allergie- Therapie zu bestimmen oder um den allergischen Status eines Patienten im Zeitverlauf zu überwachen.
- Die menschliche IgE-Rezeptor-α-Subeinheit oder gemäß vorliegender Erfindung erhaltene Fragmente davon können für eine Vielzahl diagnostischer und therapeutischer Anwendungen eingesetzt werden, wie nachstehend detaillierter erklärt.
- Andere Merkmale und Vorteile gehen aus der folgenden Beschreibung bevorzugter Ausführungsformen hervor.
- In den Zeichnungen:
- ist Fig. 1 das HPLC-Elutionsprofil von Ratten-IgE-Oberflächenrezeptor-α- Subeinheit-Fragmenten nach Trypsinspaltung.
- zeigt Fig. 2 ein Paar Restriktionskarten zweier Ratten-IgE-Rezeptor-α-Subeinheit- Klonen.
- ist Fig. 3 eine Restriktionskarte eines menschlichen IgE-Rezeptor-α-Subeinheit- Klons.
- ist Fig. 4 ein schematischer Vergleich der DNA-Sequenzen von Ratten- und menschlichen IgE-Rezeptor-α-Subeinheit-cDNA-Klonen.
- Die cDNA-Sequenz, die für menschliche Mastzellen-IgE-Oberflächenrezeptor-α-Subeinheit kodiert, wurde nach der folgenden allgemeinen Stufenfolge hergestellt. Zunächst wurde Ratten-IgE-Oberflächenrezeptor-α-Subeinheit gereinigt, fragmentiert und tryptische Peptide hergestellt. Ein Ratten-cDNA-Klon wurde dann unter Verwendung von Oligonukleotiden isoliert, die auf Basis der Aminosäuresequenz eines der tryptischen Peptide konstruiert worden waren. Dann wurde eine menschliche cDNA-Bibliothek hergestellt, und die Ratten-cDNA-Fragmente wurden verwendet, um die menschliche Bibliothek zu screenen. Genauer gesagt werden diese Verfahren wie folgt durchgeführt.
- Zellen von Ratten mit basophiler Leukämie (RBL-2H3) wurden solubilisiert und über Nacht bei 4ºC mit an Sepharose 4B-Perlen gebundenem monoklonalem Anti-Ratten- Mastzellen-IgE-Rezeptorantikörper (mAb BC4) inkubiert (Basciano et al., J.B. C. 261, 11823 [1986]). Die Perlen wurden gewaschen, und die gebundenen Proteine wurden reit 5%-iger Essigsäure eluiert und dann lyophilisiert. Aliquote wurden mittels NaDod- SO&sub4;-PAGE analysiert (Laemmli, Nature 227, 680 [1970]), gefolgt von Silberfärbung (Oakley et al., Anal. Biochem. 105, 361 [1980]). Wie erwartet gab es Banden, die den α-, β- und γ-Ketten des Rezeptors entsprachen. Die verschiedenen Rezeptorkomponenten wurden durch Elution mittels NaDodSO&sub4;-PAGE weiter gereinigt.
- Aminosäuresequenzbestimmung durch N-terminale Analyse war unangemessen, weil das N-terminale Ende der eluierten α-Subeiriheitproben blockiert zu sein schien. Die Proben wurden daher mit 2 mM Dithiothreitol in 6 M Guanidin-HCl, 100 mM Tris (pH 8,3) und 1,0 mM EDTA bei 37ºC unter N&sub2; reduziert und dann mit 10 mM Iodessigsäure S-carboxymethyliert. Salze wurden mittels HPLC auf einer Vydac C&sub4;-Säule entfernt. Entsalzte Proben wurden mit mit TPCK (L-1-Tosylamido-2-phenylethylchlormethylketon) versetztem Trypsin in 100 mM Tris (pH 7,2) behandelt. Die resultierenden tryptischen Peptide wurden mittels HPLC auf einer Vydac C&sub4;-Säule abgetrennt; das Elutionsprofil wird in Fig. 1 gezeigt. Durch Pfeile angezeigte Peaks wurden Aminosäuresequenzierung unter Verwendung eines Dampfphasen-Aminosäuresequenzers von Applied Biosystems unterzogen. Die aus diesen Peaks erhaltenen Peptidsequenzen werden in nachstehender Tabelle 1 gezeigt.
- WIHNDSISNXK und (Peak 1)
- YSYDSNXISIR
- ILTGDKVTLIXNG (Peak 2)
- VIYYK (Peak 3)
- SVVSLDPPWIR (Peak 4)
- Die Strategie zum Isolieren von Ratten-IgE-Rezeptor-α-Subeinheit-cDNA bestand darin, Oligonukleotide zu synthetisieren, von denen vorhergesagt wurde, daß sie zum Ratten- α-Subeinheit-Gen komplementär seien, und diese Oligonukleotide dann dazu zu verwenden, eine Ratten-cDNA-Bibliothek zu screenen.
- Computerunterstützte Analyse der tryptischen Fragmente wurde unter Verwendung der Software-Versionen 4 und 5 von der Genetics Computer Group der Universität of Wisconsin (Devereux et al., Nucl. Acids Res. 12, 7035) durchgeführt. Von den Peptidsequenzen wies Peptid 4 (Fig. 1, Peak 4) beträchtliche Homologie mit einer Sequenz nahe des NH&sub2;-Terminus des Mäuse-Fcy-(IgG-)Rezeptors auf (Ravetech et al., Science 234, 718 [1986]), was auf eine analoge Sequenz in der IgE-Rezeptor-Subeinheit hinweist. Aus der Sequenz von Peptid 4 wurde der Abschnitt mit geringerer Codonredundanz, Asp-Pro-Pro-Trp-Ile, ausgewählt, um unter Verwendung eines automatischen DNA-Synthesizers (Modelle 380A und B, Applied Biosystems) ein 32-Gemisch des 14- mer-Oligonukleotids, 5'-ATCCA(A/G/C/T)GG(A/G/C/T) GG(A/G)TC-3' herzustellen. Die Oligonukleotide wurden unter Verwendung von 32P markiert, wie von Maniatis et al., "Molecular Cloning" (1982), beschrieben.
- RNAs wurden von Ratten-RBL-2H3-Zellen durch Homogenisieren in 6M Guanidiniumisothiocyanat, gefolgt von Ultrazentrifugation über einem CsCI-Polster, wie von Maniatis et al., Molecular Cloning (1982), beschrieben, gefolgt von Extraktion mit Phenol-Chloroform-Isoamylalkohol (25:24:1), extrahiert. Poly(A)+ RNAs wurden unter Verwendung von Oligo(dT)-Cellulose-Säulen (Aviv und Leder, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 69, 1408 [1972]) hergestellt; und cDNA-Bibliotheken wurden, wie von Okayama und Berg, Molec. Cell. Biol. 3, 280 (1983), beschrieben, unter Verwendung leicht modifizierter Vektor- und Linkerfragmente konstruiert (Noma et al., Nature 319, 640 [1986]). Aus 5 ug Poly(A)+ RNA wurden 9 · 10&sup5; unabhängige Kolonien erhalten.
- Etwa 7 · 10&sup4; unabhängige Kolonien wurden nach dem in Hahahan und Meselson, Gene 10, 63 (1980), beschriebenen Verfahren mit markierter Oligonukleotidsonde gescreent, und es wurden drei positive Klone identifiziert. Die Nukleotidsequenzen zweier der drei Klone, die ähnliche Restriktionsenzym-Spaltmuster aufwiesen, wurden nach dem Didesoxy-Kettenterminationsverfahren, das von Sanger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 74, 5463 (1977), beschrieben wird, unter Verwendung von alkalidenaturierter Plasmid-DNA bestimmt.
- Auf Fig. 2 bzw. 4 Bezug nehmend weisen diese Klone mit Ausnahme einer Löschung (bp 21) in pAS-r-IgER-5A (cl 5A) und zwei Löschungen (bp 163 und 8) in pAS-r-IgER-2A (cl 2A) genau die gleiche Sequenz auf. Ein cDNA-Klon voller Länge (cl 2A/5A) wurde durch Kombinieren des linken Drittels der cl 2A-cDNA mit den rechten beiden Dritteln der cl 5A-cDNA konstruiert. Bei RNase-Schutzversuchen (Melton et al., Nucl. Acids Res. 12, 7035 [1984]) unter Verwendung einer von der cDNA des Klons 2A/5A in pGEM3 transkribierten markierten RNA, einem Plasmid, das die Promotorsequenz für T7 RNA- Polymerase enthält, wurde gezeigt, daß die Mehrzahl der IgE-Rezeptor-mRNA keine Löschungen aufwies. Diese Beobachtung ermöglichte es, die primäre Struktur von Ratten- IgE-Rezeptor-α-Subeinheit vom offenen Leserahmen mit 735 bp der ungelöschten Sequenz (Fig. 4) abzuleiten. Es wurde festgestellt, daß dieser offene Leserahmen für ein Peptid mit 245 Aminosäuren kodiert, das perfekte Übereinstimmungen mit den Peptidsequenzen enthält, die durch Aminosäuresequenzierung bestimmt worden waren.
- Um die menschliche α-Ketten-cDNA zu klonieren, wurde eine cDNA-Bibliothek, wie allgemein oben dargelegt, aus einer menschlichen Mastzellen-Linie hergestellt, von der bekannt ist, daß sie IgE-Rezeptoren erzeugt (KU812). Etwa 9 · 10&sup4; Kolonien wurden mit nick-translatiertem Hpall(46)-Pvull(970)-Fragment von Ratten-cDNA-Klon 2A/5A gescreent. Hybridisierung erfolgte in 6X SSC -50% Formamid -10% Dextransulfat bei 42ºC über 15 h, und die Filter wurden dann zweimal in 0,1X SSC und 0,1% NADod- SO&sub4; bei 55ºC 15 min lang gewaschen. Drei positive Kolonien wurden identifiziert, und jene, welche die größte Einfügung aufwies (pAS-h-IgER-110B) wurde weiter charakterisiert. Sowohl die Nukleotid- als auch die abgeleiteten Aminosäuresequenzen wurden mit der Rattensequenz verglichen (Fig. 4).
- Die menschliche cDNA-Sequenz kann durch herkömmliche Techniken in einen einer Vielzahl von Expressionsvektoren eingefügt werden, um rekombinante menschliche Mastzellen-IgE-Rezeptor-α-Subeinheit herzustellen. Verkürzte Sequenzen können zur Herstellung löslicher Fragmente verwendet werden.
- Die cDNA, die für die menschliche Mastzellen-IgE-Oberflächenrezeptor-α-Subeinheit kodiert, kann beispielsweise in den von Ringold, US-A-4.656.134, beschriebenen Expressionsvektor eingefügt werden.
- Dieses Plasmid kann dann dazu verwendet werden, um Säugetier-Wirtszellen zu transformieren, und die menschliche Mastzellen-IgE-Rezeptor-α-Subeinheit kann nach herkömmlichen Verfahren isoliert und gereinigt werden.
- In seiner unglykosylierten Form kann das Polypeptid in einem bakteriellen Wirt, z.B. E.coli, produziert werden. Die cDNA, die für die menschliche Mastzellen-IgE-Oberflächenrezeptor-α-Subeinheit kodiert, kann beispielsweise in den von DeBoer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 80, 21 (1983), beschriebenen Expressionsvektor eingefügt werden. Das Plasmid, das den Hybrid-tac-Promotor trägt, kann zum Transformieren von E.coli verwendet werden, und die α-Subeinheit kann nach herkömmlichen Verfahren isoliert und gereinigt werden.
- Die menschliche Mastzellen-IgE-Oberflächenrezeptor-α-Subeinheit oder ein Fragment davon kann verwendet werden, um unter Einsatz herkömmlicher Verfahren polyklonale oder monoklonale Anti-IgE-Oberflächenrezeptor-Antikörper herzustellen. Diese Antikörper können in einem in vitro Diagnoseassay oder in jedem Standardformat, z.B. ELISA, verwendet werden, um die Menge an IgE-Rezeptor in einer biologischen Probe zu bestimmen, die von einem menschlichen Patienten erhalten wurde, z.B. Blut- oder Gewebsprobe, insbesondere in Basophilen. Die in der Probe vorhandene Menge an IgE- Rezeptor-α-Subeinheit kann als Maß für die allergische Reaktion des Patienten auf eine Substanz dienen, welcher der Patient ausgesetzt wurde. Die Mengen an IgE-Rezeptor-α- Subeinheit können ebenfalls gemessen werden, um die Effizienz von Anti-Allergie-Therapien zu messen und den allergischen Status eines Patienten im Zeitverlauf zu überwachen. Die Antikörper können auch für die immunochromatographische Reinigung von IgE-Rezeptor-α-Subeinheit aus Kulturmedien verwendet werden.
- Die IgE-Rezeptor-α-Subeinheit oder lösliche Fragmente davon kann/können auch therapeutisch angewandt werden, um menschliche Patienten zu behandeln, die an Allergien leiden. Die IgE-Rezeptor-α-Subeinheit oder ein Fragment davon konkurriert mit dem auf Mastzellen natürlich vorhandenen Rezeptor um IgE, so daß IgE an das verabreichte Peptid gebunden wird und nicht fähig ist, sich an Mastzellen zu binden, um die allergische Reaktion zu vermitteln. Als Alternative zur Verwendung des Peptids selbst bei kompetitiver Inhibitionstherapie kann das Peptid verwendet werden, um Nicht-Peptid-Arzneimittel zu bilden, die sich therapeutisch wie die Peptide verhalten. Im allgemeinen wird Röntgen-Kristallographie eingesetzt, um die dreidimensionale Struktur des Peptids, insbesondere seine IgE-Bindungsstellen, zu erhellen, und eine Nicht-Peptid-Verbindung wird mit Hilfe von Computermodellierung synthetisiert, um die funktionell wichtigen Bereiche des Peptids nachzuahmen.
- Das Peptid oder die auf Basis der Struktur des Peptids synthetisierte Verbindung wird als unmodifiziertes Peptid oder in Form eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes, vermischt mit einem physiologisch annehmbaren Träger, z.B. Salzlösung, verabreicht. Beispiele für bevorzugte Salze sind jene therapeutisch annehmbarer organischer Säuren, z.B. Essig-, Milch-, Malein-, Zitronen-, Apfel-, Ascorbin-, Bernstein-, Benzoe-, Salicyl-, Methansulfon-, Toluolsulfon- oder Embonsäure, sowie polymere Säuren, wie z.B. Gerbsäure oder Carboxymethylcellulose, und Salze mit anorganischen Säuren, wie z.B. Halogenwasserstoffsäuren, wie z.B. Salzsäure, Schwefelsäure oder Phosphorsäure. Die Zusammensetzung kann in Form einer Flüssigkeit zur intravenösen, subkutanen, parenteralen oder intraperitonealen Verabreichung oder als Spray zur bronchialen oder nasalen Verabreichung vorliegen.
- Die IgE-Rezeptor-α-Subeinheit kann auch verwendet werden, um Substanzen zu screenen, die potentiell die Fähigkeit haben, sich an die IgE-Rezeptor-α-Subeinheit zu binden; solche Substanzen können, wenn sie therapeutisch an einen Menschen verabreicht werden, der an einer Allergie leidet, die allergische Reaktion mildern, indem sie sich an die IgE-Rezeptor-α-Subeinheit an den Mastzellen des Patienten binden, wodurch die Bindung von IgE verhindert wird und dadurch die IgE-vermittelte allergische Reaktion unterbrochen wird. Screenen nach einer solchen IgE-Rezeptor-α-Subeinheit bindenden Substanz kann durch Immobilisieren der α-Subeinheit, In-Kontakt-Bringen der zu scree nenden Substanz in markierter Form (z.B. radiomarkiert) mit der immobilisierten Subeinheit, Abtrennen der löslichen von immobilisierten Phasen und Detektieren von gebundener Markierung als Hinweis auf die Bindung durchgeführt werden.
- Es sind auch andere Ausführungsformen möglich. Beispielsweise muß das lösliche α- Subeinheit-Fragment keine perfekte Homologie mit dem entsprechenden Bereich des natürlich vorkommenden Moleküls haben, sondern nur ausreichende Homologie (im allgemeinen zumindest 75%) aufweisen, um menschlichen IgE zu binden. Das Fragment muß auch groß genug (im allgemeinen zumindest etwa 10 Aminosäuren lang) sein, um IgE zu binden. Wenn Löslichkeit gewünscht wird, sollte das Fragment vorzugsweise keinen Teil des hydrophoben Transmembranabschnitts des natürlich vorkommenden Moleküls enthalten. Fragmente der α-Subeinheit sowie das gesamte Molekül können verwendet werden, um Antikörper zu züchten, die wie oben beschrieben für Diagnose- und Reinigungszwecke dienen.
Claims (5)
1. cDNA-Sequenz, die für die α-Subeinheit von menschlichem Mastzellen-IgE-
Oberflächenrezeptor oder ein IgE-Bindungsfragment davon kodiert, wobei der
α-Subeinheit-IgE-Oberflächenrezeptor zumindest 75%-ige Homologie mit der in den Fig. 4a bis
4d dargestellten menschlichen Aminosäuresequenz aufweist, das IgE-Bindungsfragment
eine Länge von zumindest 10 Aminosäuren aufweist und zumindest 75%-ige
Homologie mit einem Teil der in den Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen
Aminosäuresequenz aufweist.
2. Vektor, der DNA umfaßt, die für die α-Subeinheit des menschlichen Mastzellen-
IgE-Oberflächenrezeptors oder ein IgE-Bindungsfragment davon kodiert, wobei der α-
Subeinheit-IgE-Oberflächenrezeptor zumindest 75%-ige Homologie mit der in den Fig.
4a bis 4d dargestellten menschlichen Aminosäuresequenz aufweist, das
IgE-Bindungsfragment eine Länge von zumindest 10 Aminosäuren aufweist und zumindest 75%-ige
Homologie mit einem Teil der in den Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen
Aminosäuresequenz aufweist.
3. Verfahren zur Herstellung von menschlicher
Mastzellen-IgE-Bezeptor-α-Subeinheit oder eines IgE-Bindungsfragments davon, umfassend das Einfügen einer cDNA, die
für die α-Subeinheit von menschlichem IgE-Rezeptor oder ein Fragment davon kodiert,
in einen geeigneten Expressionsvektor, wobei der α-Subeinheit-IgE-Rezeptor zumindest
75%-ige Homologie mit der in den Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen
Aminosäuresequenz aufweist, und das IgE-Bindungsfragment zumindest eine Länge von 10
Aminosäuren aufweist und zumindest 75%-ige Homologie mit einem Teil der in den
Fig. 4a bis 4d dargestellten menschlichen Aminosäuresequenz aufweist; das
Transformieren einer Wirtszelle mit dem Vektor; und das Isolieren der α-Subeinheit von IgE-
Rezeptor oder eines vom Wirt exprimierten Fragments davon.
4. Für das IgE-Bindungsfragment kodierende cDNA-Sequenz nach Anspruch 1,
worin die Sequenz wie in den Fig. 4a bis 4d dargestellt oder ein Teil davon ist.
5. Nach dem Verfahren nach Anspruch 3 erhältliche menschliche Mastzellen-IgE-
Rezeptor-α-Subeinheit oder ein IgE-Bindungsfragment davon zur Verwendung in der
Therapie.
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