DK175885B1

DK175885B1 - Anvendelse af 1,2,4-benzotriazinoxider som strålingssensibiliserende midler og selektive cytotoksiske midler

Info

Publication number: DK175885B1
Application number: DK199002230A
Authority: DK
Inventors: William W Lee; J Martin Brown; Edward W Grange; Abelardo P Martinez; Michael Tracy
Original assignee: Stanford Res Inst Int
Priority date: 1988-03-18
Filing date: 1990-09-17
Publication date: 2005-05-23
Also published as: DK223090D0; DE68928802D1; KR900700466A; AU637572B2; AU3433789A; JPH03505867A; NO904003D0; DE68928802T2; EP0413706A1; EP0413706B1; NO179005B; ES2013123A6; NO179005C; KR0140894B1; CA1339217C; NZ228323A; DK223090A; ATE170515T1; PT90039B; JP2793312B2

Description

DK 175885 B1

Teknisk område

Opfindelsen angår cytotoksiske midler og røntgenbehandling, som er effektiv mod hypoxiske celler. Opfindelsen angår navnlig selektivt drab af tumorceller 5 og sensibilisering af tumorceller over for bestråling ved anvendelse af 1,2,4-benzotriazinoxider.

Baggrundsteknik 10 Strålingssensibiliserende midler mod hypoxiske celler er forbindelser, som selektivt forøger hypoxiske cellers følsomhed over for ødelæggende bestråling. Cytotoksiner, som har forøget aktivitet under hypoxiske betingelser, tilvejebringer også et middel til selektiv ødelæggelse af celler under lavt oxygentryk. Denne specificitet over for hypoxiske celler er vigtig, fordi sådanne 15 celler typisk er karakteristiske for tumorer. Praktisk taget alle tumorer, som er til stede som faste masser, indeholer disse celler, medens normale celler generelt har tilstrækkelig oxygenforsyning. Følgelig kan anti-tumormidler gøres selektive over for tumorer i kraft af høj aktivitet under hypoxiske betingelser, og der kan mere effektivt anvendes bestråling i nærvær af disse sensibi-20 liserende midler.

Naturligvis er anvendelsen af strålebehandling til ødelæggelse af tumorceller kun praktisk, hvis beskadigelse af det omgivende normale væv kan minimeres eller undgås. Strålingsvirkningerne forøges ved tilstedeværelse af oxy-25 gen, og det fastslås, at effektiviteten af bestrålingen til ødelæggelse af målceller forøges dramatisk med stigende stråledosis, når der er oxygen til stede. Derfor er det vanskeligt at opnå selektivitet for tumorceller ved bestråling - normale celler er på grund af deres oxygenforsyning generelt mere følsomme over for bestråling end måltumorcellerne. Det er derfor ønskeligt at 30 tilvejebringe et middel til sensibilisering af tumorceller, men ikke af det omgivende væv, over for strålebehandling. Det ville være en løsning at forøge oxygenforsyningen til disse tumorceller. Dette har imidlertid vist sig at være vanskeligt at gøre.

I DK 175885 B1 I

I 2 I

I Det har været anvendt forskellige heterocycliske forbindelser, især forbindel- I

I ser med oxiderede nitrogendele, til strålingssensibilisering af hypoxiske tu- I

I morceller. Det har oven i købt været postuleret, at denne aktivitet skyldes I

I 5 den oxiderede nitrogenfunktionalitet. Nitroimidazoler, især misonidazol (MIS) I

I og metronidazol, er blevet studeret i vid udstrækning, og MIS anvendes al- I

I mindeligvis som standard i in vitro- og in vivo-tests for strålingssensibilise- I

I rende aktivitet. (Jfr. f.eks. Asquith et al., Radiation Res. (1974) 60:108-118; I

I Hall et al., Brit. J. Cancer (1978) 37:567-569; Brown et al., Radiation Res. I

I 10 (1980) 82:171-190; og US patent nr. 4.371.540. De strålingssensibiliserende I

I aktiviteter af visse 1-substituerede 3(5)-nitro-s-triazoler og forskellige quino- I

xalin-1,4-dioxidderivater har også været beskrevet. I

Derudover beskriver US patentansøgning nr. 730.761 indleveret 3. maj 1985 I

I 15 og nr. 788.762 indleveret 18. oktober 1985, overdraget til samme ansøger og I

I medtaget heri ved denne henvisning, en klasse strålingssensibiliserende I

I midler, som ikke indeholder oxideret nitrogen, nemlig de substituerede ben- I

I zamider og nicotinamider og deres thioanaloger. Disse forbindelser er ikke I

I desto mindre strålingssensibiliserende midler. Det er vigtigt at skelne evnen I

I 20 til selektivt at sensibilisere hypoxiske celler, f.eks. ved forøgelse af deres I

I oxygenforsyning, fra en anden mekanisme, som almindeligvis kendes til I

"sensibilisering” af celler: hæmning af enzymet poly(ADP-ribose)polymerase, I

I som antages at være essentielt ved reparation af bestrålede celler efter be- I

I stråling. Denne reparationsmekanisme virker i både hypoxiske tumorceller og I

I 25 i normale celler. Således opnås der ved administration af "strålingssensibili- I

I serende midler”, som virker i henhold til sidstnævnte mekanisme, ikke det I

I ønskede formål: at sensibilisere måltumorcelleme selektivt. I

I En klasse forbindelser, som ikke tidligere har været forslået til anvendelse til I

I 30 enten selektivt at dræbe hypoxiske celler eller til at strålingssensibilisere så- I

I danne celler er 3-amino-1,2,4-benzotriazin-1,4-di-N-oxid og beslægtede for- I

I bindeiser. Beslægtede US patenter nr. 3.980.779, 3.868.371 og 4.001.410 I

I omhandler fremstillingen af en klasse af disse forbindelser og deres anven- I

3 DK 175885 B1 delse som anti-mikrobielle midler, især ved tilsætning af disse materialer til husdyrfoder. US patent nr. 3.991.189 og 3.957.799 omhandler derivater af disse forbindelser, som bærer substituenter på nitrogenatomet i 3-aminogruppen. Disse forbindelser har også anti-mikrobiel aktivitet.

5

Ved den foreliggende opfindelse tilvejebringes yderligere forbindelser, som specifikt strålingssensibiliserer hypoxiske celler in vitro, og som endvidere er direkte cytotoksiske over for hypoxiske celler både in vitro og in vivo. Derfor dræber administration af disse forbindelser før eller efter strålebehandling af 10 tumorer selektivt de hypoxiske (tumor)celler, som overlever stråledosen. Både disse forbindelsers evne til at strålingssensibilisere hypoxiske celler in vitro og navnlig deres evne til selektivt at dræbe hypoxiske celler direkte er uventede egenskaber ved disse forbindelser.

15 WO-A-8802366, offentliggjort 7. april 1988, beskriver anvendelse af visse 1,2,4-benzotriazinoxider som strålingsstabiliserende midler og selektive cytotoksiske midler.

Journal of Organic Chemistry, vol. 24, No. 6, 1959, J. Jiu et al "Synthesis in 20 the 1,2,4-benzotriazine series”, side 813-814, beskriver syntese afen række 3-substituerede-1,2,4-benzotriazin-1 -oxider og nogle tilsvarende 3-substituer-ede-1,2,4-benzotriaziner til farmakologisk evaluering.

US-A-2489359 angår visse hidtil ukendte 7-halogen-3-(mono- og di-25 substitutérede amino)-1,2,4-benzotriazinforbindelser, der beskrives som anvendelige mellemprodukter ved fremstilling af komplekse organiske forbindelser, herunder antimalaria midler og farvestoffer.

US-A-2489352 angår substituerede 3-amino-1,2,4-benzotriazin-1-oxider, der 30 anses for at besidde potentiel terapeutisk værdi til anvendelse ved behandling af malaria.

I DK 175885 B1 I

i 4 I

I Journal of the American Chemical Society, Vol. 76, No. 18, 1954, F. J. Wolf I

I et al, side 4611-4618, og Vol. 76 No. 13, 1954, F. J. Wolf et al, side 3551- I

I 3553, angår begge visse 1,2,4-benzotriazinforbindelser, der anses for at ha- I

I ve antimalaria aktivitet. I

I 5 I

I FR-A-2322140 angår 3-alkoxy-benzo-1,2,4-triaziner og deres anvendelse I

I som fungicider og baktericider. I

I EP-A-0001090 angår plantebaktericidsammensætninger indeholdende 3- I

I 10 halogen-benzotriazin-1-oxider. I

I Journal of Chromatography, Vol. 131, 1977, M.S.F. Ross, side 448-452, be- I

I skriver anvendelse af et vist methylsubstitueret 3-dimethylamino-1,2,4- I

benzotriazin-1-oxid som udgangsmateriale for an anti-rheumatisk forbindelse, I

I

15 azapropazon.

I US-A-3482024 beskriver 1,2,4-benzotriaziner til anvendelse til lindring af in- I

I flammation, ødem, smerte, feber og hævelser af led. I

I 20 GB-A-1234845 angår phosphorsyre-, phosphonsyre-, thionphosphorsyre-og I

thionphosphonsyreestere af 3-hydroxybenzotriazin-1-N-oxider og deres an- I

vendelse som insekticider og acaricider. I

DE-A-2404375 beskriver 1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxider substitueret i 3- I

I 25 stillingen med -NH-CO- eller =C== grupper til anvendelse til kontrol af mikro- I

organismer, som fødevaretilsætningsstoffer til dyr med kommerciel værdi og I

I til beskyttelse af materialer. I

I Int. J. Radiation Oncology Biol. Phys., 12, (7), 1986, side 1239-1242, E.M. I

I 30 Zeman et al., er et yderligere studium af 3-amino-1,2,4-benzotriazin-1,4- I

I dioxid som et bioreduktionsmiddel med selektiv toksicitet med hypoxiske cel- I

I I

Η I

H 1 I

5 DK 175885 B1 I 35th Ann. Meeting of Radiation Res. Soc. og 7th Ann. Meeting of North Am. Hyperthermia Group, Feb. 21-26, 1987, Atlanta, US, 1986, side 114, No. FD-4; M. Brown et al., nævnes bioreduktiv cytotoksisk aktivitet hos 3-amino-substituerede 1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxider.

5

Biochemical Pharmacology, 35, No. 19, October 1, 1986, side 3417-3420, K.R. Laderoute et al., omtaler 3-amino-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid som et toksisk middel til hypoxiske celler og undersøger denne forbindelses væsentligste reduktionsprodukter.

10

Radiotherapy and Oncology, 12, (1988), side 209-218, E.M. Zeman et al., angår et yderligere studium af 3-amino-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid til selektivt drab af hypoxiske pattedyrceller in vitro.

15 Tetrahedron, 38, (12), 1982, side 1793-1796, R. H. Atallah et al., beskriver fremstilling af 3-methyl-1,2,4-benzotriazinoxider.

Beskrivelse af opfindelsen

Ved den foreliggende opfindelse tilvejebringes der et værdifuldt supplement 20 til den klasse forbindelser, som for tiden er tilgængelige som strålingssensibiliserende midler og selektive cytotoksiske midler til hypoxiske tumorceller.

Ifølge et aspekt af opfindelsen tilvejebringes der anvendelse af en forbindelse med formlen 25 f aØCol, i

On

6 I

DK 175885 B1 I

hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C) og hydrocarbylet yderligere even- I

tuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; I

ner1;og I

5 Y1 og Y2 uafhængigt er I

H; I

halogen; I

hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, I

eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup- I

10 pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, I

NH2l NHR3, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1- I

4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi- I

nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter I

valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituenter), I

15 morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, carboxy, I

alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hydrocar- I

bylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)-binding, I

herunder hydrocxarbyloxy; eller I

NHR', 0(C0)R', NH(CO)R', 0(S0)R' eller 0(P0R’)R', hvor R’ I

20 betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy- I

drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt I

blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, I

alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven- I

for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I

25 boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- I

drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- I

binding, herunder hydrocarbyloxy; eller I

når X er H, methyl eller ethyl, er den ene af Y1 og Y2 H, og den I

anden er ΝΗ2 I

30 ved fremstilling af et lægemiddel til behandling af menneske- eller I

dyrekroppen til selektivt drab af hypoxiske tumorceller. I

7 DK 175885 B1

Ifølge et andet aspekt af opfindelsen tilvejebringes der en fremgangsmåde til selektivt drab af hypoxiske tumorceller in vitro, hvilken fremgangsmåde omfatter direkte in vitro indgivelse til cellerne af en forbindelse med formlen i O« 15 hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (i-4C), og hydrocarbylet yderligere eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; n er 1; og Y1 og Y2 uafhængigt er 20 H; halogen; hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, 25 NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1- 4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi-nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituen-ter), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car-30 boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)-binding, herunder hydrocarbyloxy: eller

DK 175885 B1 I

NHR', 0(C0)R', NH(CO)R', 0(S0)R’ eller 0{P0R')R', hvor R' I

betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy- I

drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt I

blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, I

5 alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven- I

for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I

boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- I

drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- I

binding, herunder hydrocarbyloxy; eller I

10 når X er H, methyl eller ethyl, er den ene af Y1 og Y2 H, og den I

anden er NH2. I

Ifølge et yderligere aspekt af opfindelsen tilvejebringes der anvendelse af en I

forbindelse med formlen: I

15 I

20 Q I

^JL

I »©QI,

I 25 I I

I i

I hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere I

I eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; I

I 30 I

I n er 1; og I

I Y1 og Y2 uafhængigt er I

I I

DK 175885 B1 g halogen; hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, 5 NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1- 4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi-nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituen-ter), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car-10 boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-Ombinding, herunder hydrocarbyloxy; eller NHR', 0(CO)R’, NH(CO)R', 0(S0)R‘ eller 0(P0R’)R\ hvor R* betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy-15 drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret ovenfor), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car-boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy-20 drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- binding, herunder hydrocarbyloxy; eller når n er 1, og X er H, methyl eller ethyl, er den ene af Y1 og Y2 H, og den anden er NH2.

ved fremstilling af et lægemiddel til behandling af menneske-25 eller dyrekroppen til strålingssensibilisering af hypoxiske tumor celler.

30

DK 175885 B1 I

Ifølge endnu et yderligere aspekt af opfindelsen tilvejebringes der en frem-

gangsmåde til strålingssensibilisering af hypoxiske tumorceller in vitro, hvil- I

ken fremgangsmåde omfatter indgivelse af en forbindelse med formlen !

sodi I

10 N X I

i I

15 hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere I

eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; I

ner1;og I

Y1 og Y2 uafhængigt er I

20 Η; I

halogen; I

hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, I

eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup- I

pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, I

25 NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1- I

4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi- I

nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter I

valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituen- I

ter), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I

30 boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- I

drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- I

binding, herunder hydrocarbyloxy; eller I

11 DK 175885 B1 NHR', 0(C0)R’, NH(CO)R‘, 0(SO)R- eller 0(P0R’)R\ hvor R' betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy-drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, 5 alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car-boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy-drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)-binding, herunder hydrocarbyloxy; eller 10 når n er 1, og X er H, methyl eller ethyl, er den ene af V1 og Y2 H, og den anden er NH2.

De ifølge opfindelsen anvendelige forbindelser er derfor mono- eller dioxiderne af eventuelt substitueret 1,2,4-benzotriazin, der kan indeholde en hydro-15 carbyl (1-4C)-gruppe, enten substitueret eller usubstitueret, i 3-stillingen.

Mens alle disse forbindelser generelt er effektive som strålingssensibiliserende midler, er kun forbindelser, der er di-N-oxider (n=1), effektive cytotoksiske midler.

20 Visse af de af Formlen ovenfor omfattede forbindelser er allerede kendte inden for fagområdet som værende anvendelige til andre formål; andre forbindelser er hidtil ukendte. De hidtil ukendte forbindelser, som er omfattet af den foreliggende opfindelse, og som kan fremstilles ved heri beskrevne fremgangsmåder, omfatter forbindelser repræsenteret ved formlen, hvor X er 25 H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; nerO;og Y1 og Y2 uafhængigt er 30 H; halogen; hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup-

DK 175885 B1 I

pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, I

NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1-

4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi- I

nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter I

5 valgt blandt hydroxy*, alkoxy-, amino- eller halogensubstituenter),

morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, carboxy, I

alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hydrocar- I

bylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-O-)-binding,

herunder hydrocarbyloxy; eller H

10 NHR\ 0(CO)R\ NH(CO)R', 0(S0)R’ eller 0(P0R’)R', hvor R' I

betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy- I

drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt

blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, I

alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven- I

15 for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I

boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy-

drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- I

binding, herunder hydrocarbyloxy; eller med de forbehold, at når I

Y1 og Y2 er hydrogen, er X forskelligt fra methyl, og når n er 0, er I

20 mindst den ene af X, Y1 og Y2 forskellig fra hydrogen.

Opfindelsen tilvejebringer endvidere en forbindelse med formlen: I

25 ϊ I

υ1<£γλυ/-\ν

N X I

30 I I

On I

13 DK 175885 B1 hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; n er 1;og 5 Y1 og Y2 uafhængigt er H; halogen; hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup-10 pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1-4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi-nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituen-15 ter), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hydrocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-Ombinding, herunder hydrocarbyloxy; eller NHR\ 0(C0)R\ NH(CO)R\ 0(S0)R' eller OiPOR'JR·, hvor R‘ 20 betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, althio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret ovenfor), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, carboxy, 25 alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hydrocar bylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-O-)-binding, herunder hydrocarbyloxy, under den forudsætning, at når Y1 og Y2 er hydrogen, er X forskellig fra methyl til brug ved behandling af menneske- eller dyrekroppen til selektivt drab af hypoxiske 30 tumorceller.

I DK 175885 B1 I

I 14 I

I Fremgangsmåder til udøvelse af opfindelsen I

I A. Anvendelige forbindelser ifølge opfindelsen I

I 5 De heri beskrevne forbindelser, som er anvendelige til strålingssensibilisering I

I af hypoxiske tumorceller, er derivater af 1,2,4-benzotriazinoxid. I

I Hydrocarbylgruppen repræsenteret ved eller kan indeholde 1-14 car- I

I bonatomer, være mættet eller umættet, cyclisk eller acyclisk og kan eventuelt I

I 10 være afbrudt af en enkelt etherbinding. Den usubstituerede form af Y1 eller I

I Y^ kan således f.eks. være methyl, ethyl, n-propyl, sek.-butyl, n-hexyl, 2- I

I methyl-n-pentyl, 2-ethoxyethyl, 3-(n-propoxy)-n-propyl, 4-methoxybutyl, I

I cyclohexyl, tetrahydrofurfuryl, furfuryl, cyclohexenyl, 3-(n-decyloxy)-n-propyl, I

I 4-methyloctyl, 4,7-dimethyloctyl og lignende. I

I 15 I

I Hydrocarbylet kan være substitueret med én eller to substituenter som følger: I

I Halogensubstituenterne er fluor, chlor, brom eller iod. Alkoxysubstituenterne I

I repræsenteret ved OR' kan indeholde 1-4 carbonatomer og omfatter f.eks. I

I methoxy, n-propoxy og tert.-butoxy. Aminosubstituenten kan være NH2, NHR I

20 eller NR2, hvor hvert R uafhængigt af de andre er en alkyldel med 1-4 carbo- I

I natomer eller en morpholinodel. R kan eventuelt være substitueret med 1-2 I

hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituenter. I

I Acyloxygruppen og acylamidogruppen er repræsenteret ved henholdsvis I

I 25 R'COO- og R'CONH-, hvor R' indeholder 1-4 carbonatomer, og deres thioa- I

I naloger er repræsenteret ved R'CSO- og R'CSNH-. Alkylsulfonyl og al- I

I kylphosphonyl er henholdsvis R’S02 og R’P(0R')0-, hvor hvert R’ uafhøen- I

I gigt er som defineret ovenfor. Carboxy er gruppen -C(0)0H; alkoxycarbonyl I

I er -C(0)0R'; carbamyl er -C(0)NH2; og alkylcarbamyl er -C(0)NHR\ I

I 30 I

I forbindelser, som har en aminosubstituent på hydrocarbonyl-sidekæden, kan I

I omdannes til salte. I

15 DK 175885 B1 1.2.4- Benzotriazinen kan anvendes som mono- eller dioxidet. Enten kan 1-nitrogenet i triazinoringen oxideres, eller også kan både 1- og 4-nitrogenet oxideres.

5 Specifikke, særligt foretrukne forbindelser, som er anvendelige til strålingssensibilisering og cytotoksiske fremgangsmåder ifølge opfindelsen omfatter 1.2.4- benzotriazin-1 -oxid, 1.2.4- benzotriazin-1,4-dioxid, 10 3-methyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 3-ethyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 3-propyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-amino-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-amino-3-methyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 15 6(7)-amino-3-ethyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-methoxy-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-methoxy-3-methyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-(1-(2,3-dihydroxypropoxy)]-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-(1,2-dihydroxyethyl]-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 20 6(7)-(1-(3-ethylamino-2-hydroxypropoxy)]-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-[2-ethylamino-1-hydroxyethyl]-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-chlor-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-[2-hydroxyethyl]-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 6(7)-(1 -hydroxyethyl]-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, 25 og deres farmaceutisk acceptable salte og thioamidanalogeme af ovenstående liste med forbindelser. Det bemærkes, at de "Y^ eller Y2”-substituenter, der er angivet i de fleste af ovennævnte forbindelser i enten 6- eller 7-stillingen (betegnet ”6(7)") også kan være til stede i 5- og/eller 8-stillingen.

Af ovennævnte forbindelser, der kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse som selektive cytotoksiske midler eller strålings- 30

16 I

DK 175885 B1 I

sensibiliserende midler, er følgende forbindelser hidtil ukendte: forbindelser

med den ovenfor angivne formel, hvor I

X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C) og hydrocarbylet yderligere eventuelt I

5 kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; I

n er 0 eller 1; og I

Y1 og Y2 uafhængigt er I

H; I

10 halogen; I

hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, I

eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup- I

pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, I

NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1 - I

15 4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi- I

nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter I

valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituenter), I

morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, carboxy, I

alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hydrocar- I

20 bylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-O-)-binding, I

herunder hydrocxarbyloxy; eller I

NHR’, 0(C0)R\ NH(CO)R’, 0(S0)R' eller CKPOR'JR·. hvor R' I

betegner hydrocarbyl (1-14G), herunder cyklisk og umættet hy- I

drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt I

25 blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, I

alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven- I

for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I

boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor I

hydrocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- I

30 binding, herunder hydrocarbyloxy; med det forbehold at når Y1 I

og Y2 er H, så er X noget andet end methyl, og når n er 0, så er i I

det mindste en af X, Y1 og Y2 noget andet end Η. I

17 DK 175885 B1 B. Fremstilling af forbindelserne ifølge opfindelsen

Dioxidet kan fremstilles ud fra stammonoxidet eller 1,2,4-benzotriazin ved persyreoxidation (se Robbins et al., J. Chem. Soc. 3186 (1957) og Mason et 5 al. J. Chem. Soc. B 911 (1970)).

Dertil kommer, at monoxidet kan fremstilles ved: (1) cyclisering af en 1-nitro-2-aminobenzenforbindelse under anvendelse af 10 H2NCN; (2) oxidation af stamforbindelsen med strukturen 20 eller ved kontrolleret reduktion af det tilsvarende dioxid (se Mason, supra, og Wolf et al., J. Am. Chem. Soc. 76:355 (1954)).

1,2,4-Benzotriazineme kan fremstilles ved cyclisering af formazan-precursore under anvendelse af BFg/AcOH (se Skema I og Atallah og Nazer, Tetrahe-25 dron 38:1793 (1982)).

C. Formulation og indgivelse

Som påvist nedenfor kan de oxiderede benzotriaziner ifølge opfindelsen an-30 vendes til at radiosensibilisere eller selektivt dræbe hypoxiske tumorceller i varmblodede dyreværter. En måde, hvorpå de kan anvendes, er Sammen med midler, der kendes for selektivt at skabe hypoxia i tumorer. Sådanne fremgangsmåder omfatter anvendelse af antihypertensive medikamenter,

DK 175885 B1 I

såsom hydralazin, eller mider, som påvirker den mængde oxygen, der bæres I

af blodet. Skønt disse forbindelser typisk anvendes til behandling af kræft i I

mennesker, kan de anvendes til at dræbe hypoxiske tumorceller i andre I

varmblodede dyrearter, såsom andre primater, husdyr, såsom kvæg, og

5 sportsdyr og kæledyr, såsom heste, hunde og katte. I

Hypoxia menes at kunne forbindes med alle typer faste ondartede I

neoplasmer. Forbindelserne ifølge opfindelsen kan derfor anvendes til at ra-

diosensibilisere eller dræbe neoplastiske epithelceller, endothelceller, binde- I

10 vævsceller, knogleceller, muskelceller, nerveceller og hjerneceller. Eksem- I

pier på carcinoma og sarcoma omfatter carcinoma, såsom epitelcelle-, syre-

celle-, alveolarcelle-, basalcelle-, basalpladecelle-, cervikal-, renal-, lever-, I

Hurthle-, Lucke-, mucinøs og Walker-carcinoma, samt sarcoma, såsom I

Abernathy's, alveolarbløddel-, angiolitiske, botyroide, encephaloide, endome- I

15 trisk stroma, Ewings fascicular, kæmpecelle, lymfatisk, Jensens, juxtacor- I

tikale, osteogene, Kaposis, marv- og synovialsarcoma. Specifikke eksempler I

på tumorer, der er blevet sensibiliseret med andre radio- sensibiliseringsmid- I

ler, er beskrevet i Adams, G.E., Cancer: A Comprehensive Treatise (F. I

Becker, udg.) bind 6, side 181-223, Plenum, New York, 1977. I

20 I

Forbindelserne kan indgives oralt eller parenteralt (intravenøst, subkutant, I

intramuskulært, intraspinalt, intraperitonealt eller tilsvarende) til patienten. I

Når de indgives parenteralt vil forbindelserne normalt blive formuleret i en I

enhedsdosis i injicerbar form (opløsning, suspension, emulsion) med et far-

25 maceutiske acceptabelt vehikel. Sådanne vehikler er typisk ikke-toksiske og I

ikke-terapeutiske. Eksempler på sådanne vehikler er vand, vandige vehikler, I

såsom saltopløsning, Ringers opløsning, dextroseopløsning og Hanks opløs-

ning, samt ikke-vandige vehikler, såsom fikserede olier (f.eks. majs-, bom- I

uldsfrø-, jordnødde- og sesamolie), ethyloleat og isopropylmyristat. Steril I

30 saltvandsopløsning er et foretrukket vehikel og forbindelserne er tilstrækkeligt

vandopløselige til tilvejebringelse af en opløsning til alle forudseelige behov. I

Vehiklet kan indeholde mindre mængder additiver, såsom substanser til for- I

bedring af opløselighed, isotonicitet og kemisk stabilitet, f.eks. antioxidanter, I

19 DK 175885 B1 puffere og konserveringsmidler. Når forbindelserne indgives oralt (eller rek-talt) vil de sædvanligvis blive formuleret i enhedsdosisform, såsom i tablet-, kapsel-, suppositorium- eller oblatform. Sådanne formulationer omfatter typisk et faststof, et halvfast stof eller en flydende bærer eller fortyndingsmid-5 del. Eksempler på fortyndingsmidler og vehikler omfatter laktose, dextrose, saccharose, sorbitol, mannitol, stivelse, acaciagummi, calciumphosphat, mineralsk olie, kakaosmør, theobromolie, aginater, traganth, gelatine, sirup, methylcellulose, polyoxyethylensorbitanmonolaurat, methylhydroxybenzoat, propylhydrosybenzoat, talkum og magnesiumstearat.

10

Den mængde forbindelse, der indgives til individet, er tilstrækkelig til at radiosensibilisere eller frembringe cytotoksicitet i det ondartede neoplasme, som skal behandles, men mindre end den mængde, som vil kunne fremkalde toksiske virkninger. Denne mængde vil afhænge af tumortype, arten af det indi-15 vid, der skal behandles, den tilstræbte indikationsdosering og legemsvægten eller -overfladen af individet. Stråling kan påføres mennesker i en række forskellige fraktioneringsregimener, dvs. den totale strålingsdosis gives i portioner over et tidsrum på fra adskillige dage til adskillige uger. Disse (portioner) vil sandsynligvis variere fra dagligt (dvs. 5 gange pr. uge) i op til 6 uger, til fra 20 en dosis en gang ugentligt i fra 4 til 6 uger. En individuel dosering af ben-zotriazin vil blive indgivet før eller efter hver strålebehandling og vil sandsynligvis ligge på fra 0,01 til 20 mmol/kg og sædvanligvis indenfor området på fra 0,1 til 2 mmol/kg.

25 Til anvendelse som selektive cytotoksiske midler kan forbindelserne ifølge opfindelsen blive indgivet alene, med stråling eller andre cytotoksiske cancermidler, med andre vasoaktive medikamenter (f.eks. hydralazin), eller ved fremgangsmåder, der reducerer mængden af til rådighed værende oxygen, som bæres af blodet, såsom anæmi- eller medikamenter, der forøger binding 30 af oxygen til hæmoglobin, der alle selektivt kan forbedre graden af hypoxia i tumoren. Som bemærket ovenfor og skønt alle de forbindelser, der er omfattet af formlen, generelt er egnede radiosensibiliserende midler til anvendelse heri, er det kun de forbindelser, som er 3-substitueret-1,2,4-benzotriazin-1,4-

I DK 175885 B1 I

I 20 I

I dioxider (dvs. X=H, hydrocarbyl (1-4C), NH2, NHR eller NR2, hvor R er som I

I defineret ovenfor og n betegner 1), som er egnede selektive cytotoksiske I

I midler. I

I 5 Eksempler I

I Følgende eksempler illustrerer yderligere forbindelserne ifølge opfindelsen I

I og fremgangsmåder til syntetisering og anvendelse heraf, og det er ikke hen- I

I sigten, at de på nogen måde skal begrænse opfindelsen. I

I 10 I

Eksempel 1 I

I Fremstilling af 1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid I

I 15 I

I 1

I 1 I

20 0 I

I 3 H- I

I En blanding af 1,80 g (13,73 mmol) af 3, 90% H2O2 (9 ml), trifluor- I

I 25 eddikesyreanhydrid (13,5 ml) og Is^WO^h^O (12,50 g, 38 mmol) i CHCI3 I

I (170 ml) blev omrørt ved stuetemperatur i 5 dage. Reaktionsblandingen blev I

I fortyndet med H2O (100 ml) og ekstraheret med CHCI3 (100 ml). Den orga- I

I niske fase blev vasket med H2O (50 ml) og tørret (Na2S04), og opløsnings- I

I midlet blev fjernet under vakuum. Resten blev kromatograferet på silicagel I

I 30 under anvendelse af EtOAc-CF^C^ (1:1) til opnåelse af 0,30g (13,4%) af I

I forbindelse 4 som et gult faststof, smeltepunkt 204-205 °C. I

I Beregnet analyse for C7H5N3O2 (163,13): C 51,5; H 3,09; N 25,76. I

21 DK 175885 B1

Fundet: C 51,6; H 3,36; N 26,01.

Mass.spek. M+=163 (q=100), 147 (q=50). TLC: Rf=0,27 (EtOAc-CH2CI2, 1:1, silicagelplader).

5 IR (nujol): 1600μ, 1460μ, 1300μ, 1230μ.

uvmax (η2°): 227 (Μ 22·900)252 (Μ 12-950); 392 (μ 4.080).

10 Eksempel 2

Bestemmelse af LD50 LD50 blev bestemt i BALB/c-hunmus (der vejede 20-25 g) efter intra-15 peritoneal (ip) injektion, med mindre den afprøvede forbindelse har lav lipofi-licitet og er meget opløselig, hvor der så anvendes intravenøs (iv) indgivelse. LD5ø-værdier ved 1, 2, 5 og 60 dage bestemtes ved indgivelse af graduerede doser af medikamentet, som er opløst i fysiologisk saltopløsning umiddelbart før injektion.

Claims

1. Anvendelse af en forbindelse med formlen I søOI I 10 Ή Χ I i On I I I I 15 hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere I I eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; I DK 175885 B1 ' NHR', 0(C0)R\ NH(CO)R', 0(S0)R' eller 0(P0R')R\ hvor R' betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy-drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, 5 alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car-boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy-drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-Ombinding, herunder hydrocarbyloxy; eller 10 når X er H, methyl eller ethyl, er den ene af Y1 og Y2 H, og den anden er NH2 ved fremstilling af et lægemiddel til behandling af menneskeeller dyrekroppen til selektivt drab af hypoxiske tumorceller.

2. Anvendelse af 3-ethyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, eller 3-propyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid til fremstilling af et lægemiddel til behandling af menneske- eller dyrekroppen til selektivt 20 drab af hypoxiske tumorceller.

3. Fremgangsmåde til selektivt drab af hypoxiske tumorceller in vitro, hvilken fremgangsmåde omfatter direkte in vitro indgivelse til cellerne af en forbindelse med formlen 25 i søCoX 0Λ I DK 175885 B1 I I 24 I I hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere I I eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; I I n er 1; og I I 5 Y1 og Y2 uafhængigt er I I H; I I halogen; I I hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, I I eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup- I I 10 pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, I I NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1- I I 4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi- I I nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter I I valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituen- I I 15 ter), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I I boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- I I drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-O-)- I I binding, herunder hydrocarbyloxy; eller I I NHR\ 0(C0)R', NH(CO)R’, 0(S0)R' eller 0(POR’)R’, hvor R1 I I 20 betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy- I I drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt I I blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, I I alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven- I I for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I I 25 boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- I I drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- I I binding, herunder hydrocarbyloxy; eller I I når X er H, methyl eller ethyl, er den ene af Y1 og Y2 H, og den I anden er NH2. I I 30 I

4. Fremgangsmåde til selektivt drab af hypoxiske tumorceller in vitro, hvil- I I ken fremgangsmåde omfatter direkte in vitro indgivelse til cellerne af I DK 175885 B1 3-ethyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, eller 3-propyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid.

5. Anvendelse af en forbindelse med formlen: 5 ί l 15 hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; n er 0; og Y1 og Y2 uafhængigt er 20 H; halogen; hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio,

25 NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1- 4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi-nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstittien-ter), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, 30 carboxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hydrocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)-binding, herunder hydrocarbyloxy; eller i DK 175885 B1 i ^ 26 NHR', 0(C0)R', NH(CO)R', 0(S0)R’ eller CKPOR’JR', hvor R’ betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydro-carbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, 5 alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car-boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy-drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)-I binding, herunder hydrocarbyloxy; eller I 10 når n er 1, og X er H, methyl eller ethyl, er den ene af Y1 og Y2 I I H, og den anden er NH2 I I ved fremstilling af et lægemiddel til behandling af menneske- eller I dyrekroppen til strålingssensibilisering af hypoxiske tumorceller. I I 15

6. Anvendelse af en forbindelse valgt fra gruppen bestående af: I I 3-ethyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, og I I 3-propyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid til fremstilling af et medi- I kament til behandling af menneske eller dyrekroppen til strålings- I I 20 sensibilisering af hypoxiske tumorceller. I

7. Fremgangsmåde til strålingssensibilisering af hypoxiske tumorceller in I I vitro, hvilken fremgangsmåde omfatter indgivelse af en forbindelse med form- I I len I I 25 I I » νΦφιχ I i I I °n I j i DK 175885 B1 hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; n er 0 eller 1; og i 5 Y1 og Y2 uafhængigt er i H; halogen; hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup-10 pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1-4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi-nodélene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituenter), 15 morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, carboxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hydrocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-O-)-binding, herunder hydrocarbyloxy; eller NHR', 0(C0)R\ NH(CO)R\ 0(S0)R' eller CKPOR’JR', hvor R' 20 betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt, blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret ovenfor), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car-25 boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)-binding, herunder hydrocarbyloxy; eller når n er 1, og X er H, methyl eller ethyl, er den ene af Y1 og Y2 H, og den anden er NH2.

8. Fremgangsmåde til strålingssensibilisering af hypoxiske tumor celler in vitro, hvilken fremgangsmåde omfatter indgivelse af en forbindelse valgt fra gruppen 30

28 I DK 175885 B1 3-eth yl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, og I 3-propyl-1,2,4-benzotriazin-1 ,4-dioxid. I

9. Forbindelse med formlen: I

15 I hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere I eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; I I 20 n er 0 eller 1; og I I Y1 og Y2 uafhængigt er I H: I 2 I halogen; I I hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, I I 25 eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup- I pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, I I NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1- I I 4 carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi- I I nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter I I 30 valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituen- I ter), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- I DK 175885 B1 drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)-binding, herunder hydrocarbyloxy; eller NHR\ 0(C0)R’, NH(CO)R\ 0(S0)R’ eller 0(P0R’)R’, hvor R’ betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy-5 drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret ovenfor), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car-boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy-10 drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-Om binding, herunder hydrocarbyloxy; med de forbehold, at når Y1 og Y2 er hydrogen, er X forskelligt fra methyl, og når n er 0, er mindst den ene af X, Y1 og Y2 forskellig fra hydrogen.

10. Forbindelse valgt fra gruppen bestående af 3-ethyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid, og 3-propyl-1,2,4-benzotriazin-1,4-dioxid.

11. Forbindelse med formlen: ? 25 s€Cox i

30 Oft hvor X betegner H, eller hydrocarbyl (1-4C), og hydrocarbylet yderligere eventuelt kan være substitueret med hydroxy, alkoxy, amino eller halogen; DK 175885 B1 I

30 I n er 1; og I V1 og Y2 uafhængigt er I H; I 5 halogen; I hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hydrocarbyl, I eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt fra grup- I pen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, alkylthio, I NH'2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra uafhængigt er en alkyldel med 1- I 10. carbonatomer eller en morpholinodel, hvor alkyl- og morpholi- I nodelene eventuelt er substitueret med én eller to substituenter I valgt blandt hydroxy-, alkoxy-, amino- eller halogensubstituen- I ter), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- I 15 drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- I binding, herunder hydroxarbyloxy; eller I NHR\ 0(C0)R’, NH(CO)R’, 0(S0)R‘ eller 0(P0R’)R·, hvor R* I betegner hydrocarbyl (1-14C), herunder cyklisk og umættet hy- I drocarbyl, eventuelt substitueret med 1 eller 2 substituenter valgt I 20 blandt gruppen bestående af halogen, hydroxy, epoxy, alkoxy, I alkylthio, NH2, NHRa, NRa2 (hvor hver Ra er som defineret oven- I I for), morpholino, acyloxy, acylamido og deres thioanaloger, car- I boxy, alkoxycarbonyl, carbamyl eller alkylcarbamyl, og hvor hy- I drocarbylet eventuelt kan være afbrudt af en enkelt ether (-0-)- I I 25 binding, herunder hydrocarbyloxy; eller med det forbehold, at når I I Y1 og Y2 er hydrogen, er X forskelligt fra methyl til anvendelse I I ved behandling af menneske- eller dyrekroppen til selektivt drab I I af hypoxiske tumorceller. · I

12. Forbindelse som defineret i krav 9 eller 10 til anvendelse ved behand- I 2 ling af menneske- eller dyrekroppen til strålingssensibilisering af hypoxiske I tumorceller. I