DK167271B1 - Fremgangsmaade til fremstilling af et antithrombin iii- eller antithrombin iii-haperinoid-koncentrat - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af et antithrombin iii- eller antithrombin iii-haperinoid-koncentrat Download PDFInfo
- Publication number
- DK167271B1 DK167271B1 DK241684A DK241684A DK167271B1 DK 167271 B1 DK167271 B1 DK 167271B1 DK 241684 A DK241684 A DK 241684A DK 241684 A DK241684 A DK 241684A DK 167271 B1 DK167271 B1 DK 167271B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- antithrombin iii
- heparin
- heparinoid
- complex
- solution
- Prior art date
Links
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 title claims abstract description 52
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 title claims abstract description 52
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 10
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 39
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 39
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 36
- 229920001499 Heparinoid Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 239000002554 heparinoid Substances 0.000 claims abstract description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 14
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 8
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 239000002156 adsorbate Substances 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 claims 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 abstract description 10
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 3
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 3
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 229940025770 heparinoids Drugs 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- QUCDWLYKDRVKMI-UHFFFAOYSA-M sodium;3,4-dimethylbenzenesulfonate Chemical class [Na+].CC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1C QUCDWLYKDRVKMI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- C07K14/8121—Serpins
- C07K14/8128—Antithrombin III
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
i DK 167271 B1
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et antithrombin Ill-heparin- eller antithrombin III-heparinoid-koncentrat.
Det er kendt, at antithrombin III sammen med heparin eller heparinoider danner et kompleks, der udviser farmaceutisk værdifulde egenskaber. Især undertrykkes enzymatisk betingede proteinforandringer, der kan have uønskede sidereaktioner hos patienter til følge, ved hjælp af tilstedeværelsen af dette kompleks ved fremstillingen og lagringen af koncentrater af højvirksomme koagulationsfaktorer og andre plasmaproteiner med biologisk virkning. Koncentrater af antithrombin III har også en lignende virkning. Yderligere farmaceutisk værdifulde egenskaber ved disse produkter er deres virkning overfor thrombo-embolismus i tilfælde af medfødt mangel på antithrombin III samt hos risikopatienter, hos hvilke antithrombin IIl-formindskelse indtræder under heparinbehandling.
I østrigsk patentskrift nr. 359.646 beskrives dannelsen af et antithrombin III-heparinkompleks ved tilsætning af heparin til menneskeligt citratplasma eller til renset antithrombin III. Blandingen tilsættes faktor VIII-holdige fraktioner med henblik på stabilisering. En isolering af komplekset sker ikke herved.
I det europæiske offentliggørelsesskrift nr. 0.048.898 beskrives fremstillingen af et antithrombin III-heparinkompleks, ved hvilken forinden renset antithrombin III og heparin ad-sorberes til immobiliseret lectin, det overskydende heparin fjernes ved vaskning, og komplekset elueres med kulhydratopløsninger. Herved fremkommer et problem med leakage af liganden, da de benyttede lectiner har mitogen virkning. Derfor er den terapeutiske anvendelse af et således fremstillet produkt risikabel.
2 DK 167271 B1 I litteraturstedet "The Chemistry and Physiology of the Human Plasma Proteins" af R.D. Rosenberg, side 353, Ed.d H. Bing., Pergamon Press, 1979, beskriver Rosenberg kompleksets fremstilling ud fra renset antithrombin III og heparin, hvorved komplekset skilles fra overskydende heparin ved hjælp af gelfiltrering og isoleres. Endvidere kan komplekset ifølge Rosenberg ved hjælp af gelfiltrering i nærværelse af 3 M NaCl-op-løsning adskilles i sine bestanddele.
For så vidt antithrombin III-heparinkomplekser hidtil er blevet fremstilletson sådanne, dvs. som rene stoffer, skete dette hovedsageligt til analytiske formål. En gelfiltrering eller en affinitetskromatografi med toksiske ligander, såsom lec-tiner, er ikke egnede metoder til en produktion af terapeutisk anvendelige produkter.
Opfindelsen tager sigte på undgåelse af disse ulemper og vanskeligheder og at løse opgaven at kunne fremstille antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoid-kompleks-koncentrater i produktionsmålestok, dvs. for at opnå produkter, der er egnede til anvendelse som terapeutika.
Opfindelsen går ud fra en fremgangsmåde til fremstilling af et antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoid-koncentrat, hvorved humant plasma eller antithrombin III-holdige plasmafraktioner under dannelse af et antithrombin III-hepa-rin- eller antithrombin III-heparinoidkompleks tilsættes heparin eller heparinoid, og den er ejendommelig ved, at det dannede antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-hepa-rinoidkompleks adsorberes til en anionbytter, at adsorbatet elueres ved hjælp af en saltopløsning, at det i eluatet indeholdte antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-hepa-rinoidkompleks befries for salte og uønskede proteiner, og at det opnåede produkt bringes på holdbar form ved hjælp af lyofilisering.
I modsætning til de indledningsvis nævnte fremstillingsmeto-er foranstaltningerne ifølge opfindelsen yderst simple 3 DK 167271 B1 og kan gennemføres med godt udbytte. En delvis denaturering af antithrombin III finder ikke sted ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Man opnår en meget god heparinbindingsevne hos antithrombin III, og heparinet har høj affinitet til antithrombin III, selvom ingen af de to deltagere skal renses forinden. Som anionbytter kan eksempelvis anvendes sådanne på basis af tværbundne dextrangeler (f.eks. "DEAE-Sephadex", "QAE-Sephadex") eller DEAE-cellulose. Adsorbatet vaskes hensigtsmæssigt før elueringen.
Ifølge en fordelagtig udførelsesform behandles eluatet med proteinfældningsmidler, såsom ammoniumsulfat, i en koncentration, der er tilstrækkelig til at udfælde antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoidkomplekset, hvorpå bundfaldet opløses, opløsningen varmeinaktiveres, og produktet derpå lyofiliseres. Varmebehandlingen til inaktivering af eventuelt tilstedeværende infektionsvækkere kan foretages ved opvarmning til 60°C i et tidsrum på 10 timer.
Ved hjælp af denne arbejdsmåde kan yderligere efter varme-inak-tiveringstrinnet opløsningen indeholdende antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoidkomplekset behandles med et proteinfældningsmiddel, nemlig i en koncentration, der er tilstrækkelig til at fjerne uønskede proteiner, men lader komplekset selv forblive i opløsning.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved hjælp af følgende eksempler.
Eksempel I
Fremstilling af antithrombin III-heparinkompleks ud fra plasma g
Til 100 liter plasma sattes 8 x 10 E heparin efter fjernelse af kryopræcipitatet, og der blev omrørt i 30 min. ved +4°C. Efter indrøring af 100 g "DEAE-Sephadex A 50" blev der omrørt i yderligere 2 timer ved +4°C. Den fyldte gel fraskil 4 DK 167271 B1 tes ved hjælp af Biichner-tragt og blev til fjernelse af led-sageproteiner vasket med 2 liter af et phosphat-citratpuf-ret isotonisk kogsaltopløsning med en pH-værdi på 7,5. Den fyldte, vaskede gel blev suspenderet i 2,2 liter af den ovenfor nævnte puffer, og ved tilsætning af fast NaCl indstillede en ledningsevne på 42 mS/cm. Efter 1 times omrøring ved +4°C blev der fraskilt ved hjælp af Biichner-tragt og efter-vasket med 0,7 liter af en phosphat- og citratpufret kogsaltopløsning med en ledningsevne på 42 mS/cm.
Fra de forenede eluater blev antithrombin III-heparinkomplek-set udfældet ved tilsætning af 1,4 kg amraoniumsulfat og indstilling af pH-værdien til 5,5. Den herved benyttede ammo-niumsulfatkoncentration på 430 g/liter svarer til en 80% mætning af opløsningen. Efter 1 times omrøring ved +4°C blev bundfaldet fraskilt ved hjælp af filtrering og sammen med 13,5 NaCl og 221 g Na^-citrat · 2 H2O opløst i 1,5 liter destilleret vand.
pH-værdien blev indstillet til 7,5, og til inaktivering af eventuelt tilstedeværende hepatitisvira blev der opvarmet til 60°C i 10 timer.
Det pasteuriserede produkt blev dialyseret mod 50 liter isotonisk kogsaltopløsning, og til yderligere rensning blev 303 g ammoniumsulfat pr. liter indrørt ved en pH-værdi på 7,0.
Den herved benyttede ammoniumsulfatkoncentration på 270 g/liter svarer til en 50% mætning af opløsningen. Efter 45 min. omrøringstid ved +4°C blev bundfaldet fjernet ved centrifugering og bortkastet.
Den ovenstående væske blev dialyseret mod 100 liter af en extratpufret, isotonisk kogsaltopløsning og ved hjælp af ultrafiltrering koncentreret til et antithrombin III-indhold på 50 E/ml.
5 DK 167271 B1
Efter dialyse mod en citratpufret, isotonisk kogsaltopløsning blev der sterilfiltreret, fyldt på flasker og frysetørret .
De enzymatiske aktiviteter af antithrombin III og heparin blev afprøvet på følgende måde:
Enzymatisk aktivitet af antithrombin III:
Aktiviteten blev regnet i forhold til et standardpræparat, der var indstillet mod antithrombin III-plasma humant (1.
Int. R.P. 72/1). Med dette standardpræparat konstateredes en justeringskurve, på hvilken de til afprøvning bestemte prøver blev aflæst.
Fortyndingen af prøverne og af standarden til aktiviteter mellem 0,0125 og 0,0625 E/ml skete med en pufferopløsning med følgende sammensætning: 3.03 g Tris Λ 10,8 g NaCl l , . , „ 0 .
^ pr. liter, pH 8,4
1.4 g Na-EDTA
3000 E heparin „
Pipetteringsskema:
a) 0,1 ml prøve blev opvarmet til 37°C
b) 0,1 ml thrombin (12 IE/ml) blev tilsat, og der inkuberedes i 3 min. ved 37°C
c) 0,1 ml af en 1,2 mM opløsning af TH-1 (1 AcOH·H-D-CHG-Ala-Arg-pNA) blev tilsat d) efter nøjagtigt 1 min. ved 37°C blev reaktionen standset ved tilsætning af 1,0 ml 20% eddikesyre e) ekstinktionen ved 405 nm blev målt.
Enzymatisk aktivitet af heparin:
Aktiviteten blev regnet i forhold til et standardpræparat, der var indstillet mod det 3. Int. Stand. Heparin 65/69. Med dette standardpræparat konstateredes en justeringskurve, på hvilken de til afprøvning bestemte prøver blev aflæst.
6 DK 167271 B1
Fortyndingen af prøverne og af standarden til aktiviteter fra 0,001 til 0,5 IE/ml skete med en pufferopløsning med følgende sammensætning: 6,06 g Tris j 18,12 g NaCl ( pr. liter, pH 8,3
2,79 g Na-EDTA J
Pipetteringsskema:
a) 0,2 ml prøve og 0,2 ml heparinfrit antithrombin III (3 E/ml) blev inkuberet i 20 min. ved stuetemperatur og i 3-5 min. ved 37°C
b) 0,2 ml thrombin (20 IE/ml) blev tilsat, og der blev inkuberet i 1,5 min. ved 37°C
c) 0,2 ml af en 1,2 mM. opløsning af TH-1 blev tilsat d) efter nøjagtigt 1 min. ved 37°C blev reaktionen standset ved tilsætning af 0,2 ml 50% iseddike e) ekstinktionen blev målt ved 405 nm.
Derved opnåedes for det ifølge eksempel 1 opnåede slutprodukt et heparinindhold på 5-7 heparinenheder pr. antithrombin III.
Eksempel 2
Fremstilling af et antithrombin III-heparinoidkompleks
Til 1 liter plasma sattes 3 g af det heparinoide pentosan-polysulfat-natriumsalt (polyanion SP 54), hvorpå der blev omrørt i 30 min. ved +4°C. Efter indrøring af 2,5 g "DEAE-Sephadex A 50" blev der omrørt i yderligere 2 timer ved +4°C. Den fyldte gel blev fraskilt ved hjælp af Buchner-tragt og til fjernelse af ledsageproteiner vasket to gange, hver gang med 200 ml af en phosphat- og citratpufret isotonisk kogsaltopløsning. Den fyldte, vaskede gel blev suspenderet i 100 ml af den ovenfor nævnte puffer, og ved tilsætning af fast kogsalt indstilledes en ledningsevne på 60 mS/cm. Efter 1 times omrøring ved +4°C blev der fraskilt ved hjælp af Buchner-tragt, og antithrombin III-SP 54-komplekset blev udvundet.
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et antithrombin III-hepa-rin- eller antithrombin III-heparinoidkoncentrat, ved hvilken humant plasma eller antithrombin III-holdige plasmafraktioner under dannelse af et antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoidkompleks tilsættes heparin eller heparinoid, kendetegnet ved, at det dannede antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoidkom-pleks adsorberes til en anionbytter, at adsorbatet elueres ved hjælp af en saltopløsning, at det i eluatet indeholdte antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoid-kompleks skilles fra salte og uønskede proteiner, og at det opnåede produkt bringes på holdbar form ved hjælp af lyofili-sering.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at adsorbatet vaskes før elueringen.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at eluatet behandles med proteinfældningsmidler, såsom ammoniumsulfat, i en koncentration, der er tilstrækkelig til at udfælde antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoidkomplekset, hvorpå bundfaldet opløses, og opløsningen inaktiveres og derpå lyofiliseres. DK 167271 B1
4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, kendetegnet ved, at opløsningen indeholdende antithrombin III-heparin- eller antithrombin III-heparinoidkomplekset efter varmeinaktive-ring behandles med et proteinfældningsmiddel, såsom ammoniumsulfat, i en koncentration, der er tilstrækkelig til at fjerne uønskede proteiner, men som lader selve komplekset forblive i opløsning.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0185983A AT379310B (de) | 1983-05-20 | 1983-05-20 | Verfahren zur herstellung eines antithrombin iii-heparin- bzw. antithrombin iii-heparinoidkonzentrates |
| AT185983 | 1983-05-20 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK241684D0 DK241684D0 (da) | 1984-05-16 |
| DK241684A DK241684A (da) | 1984-11-21 |
| DK167271B1 true DK167271B1 (da) | 1993-10-04 |
Family
ID=3522546
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK241684A DK167271B1 (da) | 1983-05-20 | 1984-05-16 | Fremgangsmaade til fremstilling af et antithrombin iii- eller antithrombin iii-haperinoid-koncentrat |
| DK292090A DK168062B1 (da) | 1983-05-20 | 1990-12-07 | Fremgangsmaade til fremstilling af et antithrombin iii-koncentrat |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK292090A DK168062B1 (da) | 1983-05-20 | 1990-12-07 | Fremgangsmaade til fremstilling af et antithrombin iii-koncentrat |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4510084A (da) |
| EP (2) | EP0129534B1 (da) |
| JP (2) | JPS59222421A (da) |
| AT (3) | AT379310B (da) |
| CA (1) | CA1211371A (da) |
| DE (2) | DE3485288D1 (da) |
| DK (2) | DK167271B1 (da) |
| ES (1) | ES532641A0 (da) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58180162A (ja) * | 1982-04-19 | 1983-10-21 | 株式会社高研 | 抗血栓性医用材料 |
| US4820693A (en) * | 1986-05-22 | 1989-04-11 | Angiogenics, Ltd. | Method and composition for arresting angiogenesis and capillary, cell or membrane leakage |
| US4966890A (en) * | 1986-04-04 | 1990-10-30 | Angiogenics, Ltd. | Method and composition for arresting angiogenesis and capillary, cell or membrane leakage |
| AT391808B (de) * | 1986-11-03 | 1990-12-10 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf)-haeltigen fraktion |
| JP2678249B2 (ja) * | 1988-06-22 | 1997-11-17 | 株式会社ミドリ十字 | アンチトロンビン−▲ｉｉｉ▼製剤 |
| CA1341379C (en) * | 1988-04-28 | 2002-07-23 | Welfide Corporation | Purified antithrombin-iii and methods of producing the same |
| CA2137258A1 (en) * | 1993-04-05 | 1994-10-13 | Yoshitomi Pharmaceutical Industries Ltd. | Liquid preparation of antithrombin-iii and stabilizing method therefor |
| JPH08199580A (ja) * | 1995-01-24 | 1996-08-06 | Tetra:Kk | 斜面昇降装置 |
| US6562781B1 (en) * | 1995-11-30 | 2003-05-13 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Glycosaminoglycan-antithrombin III/heparin cofactor II conjugates |
| US6491965B1 (en) * | 1995-11-30 | 2002-12-10 | Hamilton Civic Hospitals Research Development, Inc. | Medical device comprising glycosaminoglycan-antithrombin III/heparin cofactor II conjugates |
| US7045585B2 (en) * | 1995-11-30 | 2006-05-16 | Hamilton Civic Hospital Research Development Inc. | Methods of coating a device using anti-thrombin heparin |
| AT405739B (de) * | 1997-09-19 | 1999-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur reinigung von antithrombin iii |
| US5985582A (en) * | 1997-12-09 | 1999-11-16 | Sigma-Aldrich Co. | Thrombin-based assay for antithrombin III |
| US20140206844A1 (en) | 2013-01-18 | 2014-07-24 | Prothera Biologics | Methods for isolating blood products from an inter-alpha inhibitor protein-depleted blood product material |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3099600A (en) * | 1961-01-26 | 1963-07-30 | Ormonoterapia Richter Spa | Chromatographic purification of heparin |
| SE392038B (sv) * | 1971-09-08 | 1977-03-14 | Kabi Ab | Forfarande for isolering av antitrombin ur blod eller blodprodukter |
| US3920625A (en) * | 1973-06-19 | 1975-11-18 | Kabi Ab | Isolation of coagulation factors from biological material using cross linked sulfated, sulfonated carbohydrates |
| US4119774A (en) * | 1976-03-05 | 1978-10-10 | Ab Kabi | Heparin purification method |
| US4087415A (en) * | 1976-06-09 | 1978-05-02 | William L. Wilson | Antithrombin III |
| US4175182A (en) * | 1978-07-03 | 1979-11-20 | Research Corporation | Separation of high-activity heparin by affinity chromatography on supported protamine |
| JPS6011922B2 (ja) * | 1978-09-22 | 1985-03-29 | 天野製薬株式会社 | 高活性ヘパリンの製造法 |
| AT359646B (de) * | 1979-04-19 | 1980-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von nebenwirkungs- freien plasmafraktionen |
| FR2472390A1 (fr) * | 1979-05-04 | 1981-07-03 | Merieux Inst | Procede de preparation de concentres de complexe prothrombinique hautement purifies, et concentres obtenus |
| GB2061687B (en) * | 1979-11-02 | 1983-04-13 | Kidd A W | Grass cutting machines and improved blade therefor |
| DD148297A1 (de) * | 1979-12-21 | 1981-05-20 | Bezirks Inst Fuer Blutspende U | Verfahren zur herstellung von prothrombinkomplexkonzentraten mit verminderter thrombogenizitaet |
| DE3036481A1 (de) * | 1980-09-27 | 1982-05-19 | EC Erdölchemie GmbH, 5000 Köln | Verfahren zur gemeinsamen herstellung von c 4 -oligomeren und alkyl-tert.-butylethern |
| US4446126A (en) * | 1980-09-30 | 1984-05-01 | Cutter Laboratories, Inc. | Antithrombin-heparin complex and method for its production |
-
1983
- 1983-05-20 AT AT0185983A patent/AT379310B/de not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-05-10 DE DE8888115353T patent/DE3485288D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1984-05-10 AT AT88115353T patent/ATE69552T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-05-10 AT AT84890084T patent/ATE45747T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-05-10 EP EP84890084A patent/EP0129534B1/de not_active Expired
- 1984-05-10 EP EP88115353A patent/EP0307002B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-05-10 DE DE8484890084T patent/DE3479503D1/de not_active Expired
- 1984-05-16 CA CA000454412A patent/CA1211371A/en not_active Expired
- 1984-05-16 DK DK241684A patent/DK167271B1/da not_active IP Right Cessation
- 1984-05-18 US US06/611,639 patent/US4510084A/en not_active Expired - Lifetime
- 1984-05-18 ES ES532641A patent/ES532641A0/es active Granted
- 1984-05-19 JP JP59101637A patent/JPS59222421A/ja active Granted
-
1990
- 1990-12-07 DK DK292090A patent/DK168062B1/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-07-28 JP JP4201213A patent/JPH07116235B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK292090D0 (da) | 1990-12-07 |
| DK292090A (da) | 1990-12-07 |
| DK241684D0 (da) | 1984-05-16 |
| EP0129534A2 (de) | 1984-12-27 |
| ES8602414A1 (es) | 1985-12-01 |
| JPS59222421A (ja) | 1984-12-14 |
| DE3479503D1 (en) | 1989-09-28 |
| ATE45747T1 (de) | 1989-09-15 |
| JPH05320198A (ja) | 1993-12-03 |
| ATA185983A (de) | 1985-05-15 |
| DK168062B1 (da) | 1994-01-31 |
| ES532641A0 (es) | 1985-12-01 |
| EP0129534B1 (de) | 1989-08-23 |
| DK241684A (da) | 1984-11-21 |
| AT379310B (de) | 1985-12-27 |
| DE3485288D1 (de) | 1992-01-02 |
| ATE69552T1 (de) | 1991-12-15 |
| EP0307002A1 (de) | 1989-03-15 |
| JPH053480B2 (da) | 1993-01-14 |
| CA1211371A (en) | 1986-09-16 |
| EP0129534A3 (en) | 1985-12-04 |
| JPH07116235B2 (ja) | 1995-12-13 |
| EP0307002B1 (de) | 1991-11-21 |
| US4510084A (en) | 1985-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK167271B1 (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et antithrombin iii- eller antithrombin iii-haperinoid-koncentrat | |
| US5457181A (en) | Preparation of a high-purity human factor IX concentrate and other plasmatic proteins and their therapeutic use | |
| EP0014333B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Fibrinogen, einem die Gerinnungsfaktoren II, VII, IX und X enthaltenden Prothrombinkomplex, Antithrombin III und einer Lösung von lagerstabilen Serumproteinen | |
| EP0053338B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Blutgerinnungsfaktoren | |
| DK141274B (da) | Fremgangsmåde til isolering af blodkoagulationsfaktorerne. | |
| US4470969A (en) | Process for producing a concentrate of coagulation factors VII and VIIa | |
| JPH02264799A (ja) | 低温殺菌され精製されたフオン・ビルブラント因子濃縮物およびその調製方法 | |
| US4749783A (en) | Viral inactivation and purification of active proteins | |
| JP2532535B2 (ja) | 組織タンパクｐｐ４含有医薬 | |
| US4689323A (en) | Covalently bound heparin--antithrombin-III complex | |
| US4845078A (en) | Method for treating hematopoietic diseases | |
| JPH0348888B2 (da) | ||
| US4380511A (en) | Purification of bovine thrombin | |
| US3904751A (en) | Process for isolating a fibrin stabilizing factor from human placenta | |
| JPS61189228A (ja) | 血液凝固第８因子製剤の製法 | |
| JPH03218399A (ja) | 尿由来の抗血液疑固物質、その製法およびそれを含有する医薬組成物 | |
| JPH09286797A (ja) | ヘパリンコファクターｉｉ及びその精製方法 | |
| CN114395032B (zh) | 一种从血浆中提取人抗凝血酶ⅲ的方法 | |
| RU2353386C1 (ru) | Способ получения концентрата ix фактора свертывания крови человека | |
| de Lille | llllll" 111 ill Ilill ll| l| lllll lllll|||| l lilil lllll| l|||" II" III lllll| ll| | |
| EP0230956A2 (de) | Verfahren zur Gewinnung und Herstellung eines pasteurisierten Präparates von alpha2-Antiplasmin | |
| JPH06311883A (ja) | プラスミノゲンの製造方法 | |
| JPWO2002008249A1 (ja) | カルシウムイオン結合性蛋白質の精製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AHS | Application shelved for other reasons than non-payment | ||
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |