DK164512B - Fremgangsmaade til simultan bestemmelse af prokallikrein og den partielle thromboplastintid - Google Patents
Fremgangsmaade til simultan bestemmelse af prokallikrein og den partielle thromboplastintid Download PDFInfo
- Publication number
- DK164512B DK164512B DK062186A DK62186A DK164512B DK 164512 B DK164512 B DK 164512B DK 062186 A DK062186 A DK 062186A DK 62186 A DK62186 A DK 62186A DK 164512 B DK164512 B DK 164512B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- pna
- arg
- extinction
- process according
- added
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims abstract description 16
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims abstract description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims abstract description 3
- AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N Ellagic acid Chemical compound OC1=C(O)C(OC2=O)=C3C4=C2C=C(O)C(O)=C4OC(=O)C3=C1 AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N Ellagic acid Natural products OC1=C(O)[C@H]2OC(=O)c3cc(O)c(O)c4OC(=O)C(=C1)[C@H]2c34 ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N 0.000 claims description 7
- 229920002079 Ellagic acid Polymers 0.000 claims description 7
- 229960002852 ellagic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 235000004132 ellagic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N methylellagic acid Natural products O1C(=O)C2=CC(O)=C(O)C3=C2C2=C1C(OC)=C(O)C=C2C(=O)O3 FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 5
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 4
- IDSFNACJZVHKIB-KCHLEUMXSA-N (2s)-1-benzoyl-n-[(2s)-1-[[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 IDSFNACJZVHKIB-KCHLEUMXSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 3
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 claims description 2
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 claims 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 claims 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 claims 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 claims 1
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 5
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 abstract description 4
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 abstract 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Natural products CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 description 3
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 description 3
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 3
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 2
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 2
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 2
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 2
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 2
- VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N (2s)-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DMKDRSIXSDKEFQ-KDXMTYKHSA-N Cephaline Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)C[C@@H](COP(=O)(O)CCN)C(=O)OCCCCCCCC=CCCCCCCCC DMKDRSIXSDKEFQ-KDXMTYKHSA-N 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- -1 X 5 Chemical compound 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- WTFOKLBMGCZCIY-UHFFFAOYSA-N acetic acid;phosphoric acid Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O.OP(O)(O)=O WTFOKLBMGCZCIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 108010018472 chromozym TH Proteins 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N procaine Chemical compound CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MFDFERRIHVXMIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004919 procaine Drugs 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/10—Anilides
- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96455—Kallikrein (3.4.21.34; 3.4.21.35)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
Description
i
DK 164512 B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til simultan bestemmelse af proka11 ikrein og den partielle thrombopla-stintid (PTT). Ud fra bestemmelsen af prokallikrein kan der uddrages oplysninger vedrørende blodkoaguleringssytemet. Man-5 gel på proka11ikrein ytrer sig i en forlænget koaguleringstid.
Ved forlængede koaguleringstider, kan prokal1ikreinbestemmel-sen give oplysning, om denne forlængelse er forårsaget af mangel af faktor VIII, IX eller af en prokal1ikreinmangel. Viser prokal1ikreinbestemmelsen, at det drejer sig om en mangel på faktor VIII eller IX, tyder dette på alvorlige sygdomme. Des-uden fastslås der også ved bestemte andre sygdomstilstande, som f.eks. chok, en forandring af prokal1ikreinmængden.
Kai 1ikreindannelsen ud fra prokallikrein i plasma forløber efter følgende reaktionsskema: 15 faktor XII dextransul f at.» faktor Xlla prokallikrein faktor XII^ kallikrein.
20
De kendte metoder til bestemmelse af prokallikrein er beskrevet i H. U. Bergmeyer, Methods of Enzymatic Analysis, 3. udgave, bind V, side 412/413. Ved siden af nogle meget komplicerede og tidsrøvende metoder, der ikke kan komme i betragtning som en rutinebestemmelse i koaguleringslaboratorium, er det 25 herfra kendt at bestemme det efter aktivering af faktor XII med dextransulfat dannede kallikrein via et kromogent substrat. Denne fremgangsmåde har imidlertid den ulempe, at der må gennemføres inkubering til overvågning af prokallikrein til kallikrein ved 0°C for at forhindre indflydelse af plasmainhi-30 bitorer, som f.eks. a^-antitrypsin og C^-inaktivator, på måleresultatet. Inkuberingen ved 0°C forhindrer igen på tungtvejende måde denne fremgangsmådes automat iserbarhed.
Det er således formålet med den foreliggende opfindelse at 3 5 tilvejebringe en enkel og hurtig fremgangsmåde til simultan bestemmelse af prokallikrein og PTT, som ikke har de nævnte ulemper, og som især kan gennemføres ved normal temperatur.
2
DK 164512 B
Denne opgave løses ifølge opfindelsen ved hjælp af en fremgangsmåde til simultan fotometrisk bestemmelse af prokallikre-in og PTT i plasma, der er ejendommelig ved, at man inkuberer plasma med en overf 1adeaktivator valgt blandt ellagsyre, sul-5 fatider og findelt si 1 iciumdioxid, derefter tilsætter et kro-mogent thrombi nsubstrat, måler den vundne ekstinktion, og dernæst måler den derfra frigjorte optiske bestemmelige gruppe i korte tidsintervaller eller kontinuerligt og som mål for pro-kal1ikreinindholdet bestemmer stigningen af den lineære del af den kurve, der opnås ved opstilling af tiden i forhold til ekstinktionen og som mål for PTT bestemmer tiden indtil en forud fastlagt ekstinktion.
Overfladeaktivatoren vælges blandt ellagsyre, sulfatider (fortrinsvis fra hjernemateriale) og findelt si 1iciumdioxid, som X 5 det f.eks. er tilgængeligt i handelen under betegnelsen "Aerosi1"®, Degussa, Tyskland. Dextransu1fat er ikke egnet. Særligt foretrækkes ellagsyre i en koncentration fra 0,08 til 2,1 pg/ml prøveopløsning. De bedste resultater opnås med en koncentration fra 0,40 til 0,45 pg ellagsyre pr. ml. Disse og 20 alle de følgende koncentrationsangivelser i nærværende beskrivelse er beregnet på slutkoncentrationerne ved prøven.
Det er på overraskende måde ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen muligt at inkubere ved normale temperaturer, navnlig 25 ved 20 til 40° C og fortrinsvis ved 30 til 37*0.
Som kromogene thrombi nsubstrater kan der hertil anvendes i handelen almindeligt tilgængelige peptider, som indeholder en kromogen gruppe, navnlig en paranitroani1 i ngruppe eller et de-30 rivat deraf, som spaltes fra substratet under enzymindvirkning, og da kan bestemmes optisk. Foretrukne kromogene thrombi nsubstrater til anvendelse inden for den foreliggende opfindelses rammer er Tos-Gly-Pro-Arg-pNA, H-D-CHA-Ala-Arg-pNA, H- D-CHG-Gly-Arg-pNA, H-D-CHG-Ala-Arg-pNA, H-D-CHG-but-Arg-pNA, iso-Buco-Gly-Arg-pNA, naphthyl-S02-Gly-Pro-Arg-pNA, H-D-Phe-Pip-Arg-pNA og Bz-Pro-Phe-Arg-pNA.
35
DK 164512B
3
Koncentrationen af det kromogene thrombi nsubstrat udgør hensigtsmæssigt 0,01 til 2 mmol/liter i afhængighed af det pågældende substrats Michael is-konstant. Særligt foretrækkes som substrat Tos-Gly-Pro-Arg-p-nitroanilin i en koncentration på 5' ca. 0,2 mmol/liter og Bz-Pro-Phe-Arg-pNA i en koncentration på 0,7 til 0,8 mmol/liter.
Fortrinsvis gennemføres fremgangsmåden ifølge opfindelsen i nærværelse af animalske, vegetabilske eller syntetiske phos-pholipider. Eksempler på egnede phospholipider er cephalin, sojabønne-phospholipid, phosphati dy1 ethano 1 am in og phosphati-dylcholin. Talrige andre phospholipider er imidlertid ligeledes egnede, men kan på grund af deres store antal ikke angives specielt her. Særligt foretrækkes cephalin. Dets mængde ligger hensigtsmæssigt mellem 4 og 200 Mg/ml. I tilfælde af en simul-15 tanbestemme1 se af PTT er en tilsætning af et phospholipid nødvendig.
Det er endvidere hensigtsmæssigt at gennemføre fremgangsmåden ifølge opfindelsen i nærværelse af ca1ciumioner, da calciumtilsætning bevirker en følsomhedsstigning for fremgangsmåden ved forøgelse af ekstinktionsdifferensen pr. tidsenhed. Der foretrækkes en koncentration fra 25 til 40 pmol/ml Ca++-ioner.
I tilfælde af simultanbestemmelse af PTT er calciumiontiIsætningen nødvendig. Ved tilsætning af Ca++-ioner og phospholipid 2 5 opnås en S-formet kurve, hvis grundlinie anvendes til prokal-1 ikrei nbestemmeIsen.
Inkuberingstiden ligger ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen mellem 1 og 10 minutter, idet 4 til 6 minutter foretrækkes.
30
Ved for lang eller for kort inkuberingstid fås lavere prokal-1 ikrei nværdi.
Som plasma anvendes inden for den foreliggende opfindelses 3 5 rammer f.eks. citratplasma, oxalatplasma eller EDTA-plasma.
4
DK 164512 B
Når fremgangsmåden ifølge opfindelsen gennemføres i nærværelse af calciumioner, sker målingen i de første knap 30 sekunder efter tilsætningen af plasma, da ekstinktionen derefter stiger stejlt. Uden calciumiontiIsætning sker denne stejle stigning 5 ikke, og målingen kan også gennemføres i længere tidsinterval ler.
Dannelsen af kromofor ud fra det kromogene substrat følges fotometrisk. Dette kan ske både kinetisk ved bestemmelse af eks-^ tinktionsændringer pr. tidsenhed eller ved topunktskinetik og også ved slutpunktsmåling. I tilfælde af en slutpunktsmåling må farvedannelsesreaktionen afbrydes, hvilket fortrinsvis sker ved syretilsætning. Særligt egnet til afbrydelse er f.eks. eddikesyre eller citronsyre. I tilfælde af eddikesyre anvendes denne fortrinsvis i en koncentration fra 20 til 100 rumfangs-15 procent, i tilfælde af citronsyre i en koncentration fra 5 til 20 rumfangsprocent.
Følgende eksempel belyser opfindelsen nærmere i forbindelse med tegningen. På denne viser: 20 fig. 1 en grafisk afbilding af ekstinktionsdifferensen pr.
tidsenhed ved forskellige prokallikreinindhold i plasma , 25 fig. 2 en grafisk afbildning af ekstinktionen i forhold til reaktionstiden, hvor man kan se det S-formede kurveforløb, og fig. 3 en grafisk afbildning, der viser korrelationen for PTT-30 bestemmelsen ved en simultanbestemmelse i forbindelse med den foreliggende opfindelse og en kendt PTT-prøve-metode.
35
DK 164512B
5
Eksempel
Simultanbestemmelse af prokal1 ikrein og PTT.
5 Reagens 1: puffer (Tris/HCl) 100 μιηοΐ/ml, pH 7,6 ellagsyre 0,5 Mg/ml cephalin fra kaninhjerne 0,04 mg/ml merthiolat 0,01 vægt%.
10
Reagens 2:
Tos-Gly-Pro-Arg-p-NA 0,376 pmol/ml
Ca++-ioner 40 μιηοΐ/ml.
15
Til 2,0 ml reagens 1 sættes 0,2 ml prøve {citratplasma), og der inkuberes ved 37eC i 5 minutter. Derefter tilsættes 0,2 ml reagens 2, der blandes og gennemføres straks fotometrisk bestemmelse ved 37°C og 405 nm, idet ΔΕ/min bestemmes inden for 20 25 sekunder til bestemmelse af prokal1ikrein. Derefter lader man reaktionen forløbe videre og gennemfører en "fixed absor-bance-måling". Herved måles tiden indtil opnåelse af en bestemt ekstinktionsdifferens i forhold til blindværdien (ΔΕ = 0. 2) . Denne tid er PTT-tiden. Ved forskellige prokal1 ikrein- 2 5 indhold i plasma opnås som resultater måleværdier ifølge fig.
1. Her betyder 100% prokallikrein i plasma prokallikrei nindholdet for et normal piasmaforråd.
3Q Fig. 2 viser det med en skriver aftegnede ekstinktionsforløb. (PTT-tid: 46,3 sekunder; prokallikrei n-reakt i on: 0,042 ΔΕ/min).
Fig. 3 viser korrelationen mellem PTT-bestemmelsen ifølge eksemplet og en konventionel PTT-prøve. (Clotting-metode, "Ac- 3 5 tin-Test"®, Merz und Dade). Herved ses det, at PTT-bestemmel-sen ikke forstyrres af prokal1ikreinprøven.
Claims (10)
1. Fremgangsmåde til simultan fotometrisk bestemmelse af pro-5 kallikrein og den partielle thromboplastintid (PTT) i plasma, kendetegnet ved, at man inkuberer plasma med en overfladeaktivator valgt blandt ellagsyre, sulfatider og findelt siliciumoxid, derefter tilsætter et kromogent thrombin-substrat, måler den vundne ekstinktion, og dernæst måler den derfra frigjorte optisk bestemmelige gruppe i korte tidsinter-valler eller kontinuerligt og som mål for prokallikreinindholdet bestemmer stigningen af den lineære del af den kurve, der opnås ved opstilling af tiden i forhold til ekstinktionen og som mål for PTT bestemmer tiden indtil en forud fastlagt ekstinktion. 15
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man til prøveopløsningen også sætter Ca++-ioner.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at 20 man tilsætter 1 til 100 pmol pr. ml Ca++-ioner.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man tilsætter 0,08 til 2,1 pg ellagsyre pr. ml prøveopløsning.
5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, kendetegnet ved, at man tilsætter et phospholipid.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at 30 man som phospholipid tilsætter cephalin, sojabønnephospho1 i- pid, phosphatidylethanolamin eller phophatidylcholin.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendetegnet ved, at man tilsætter 4 til 200 pg cephalin pr. ml prøveopløsning. 35
8. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, kendetegnet ved, at man anvender et kromogent 7 DK 164512 B thrombinsubstrat fra gruppen Tos-Gly-pro"Ar9-PNA' H-D-CHA-Ala-Arg-pNA, H-D-CHG-G1y-Arg-pNA, h-D-CHG-AIa-Arg-pNA, H-D-CHG-but-Arg-pNA, i so-Bueo-GIy-Arg-pNA, naphthyl-SO2-Gly-Pro-Arg-pNA, H-D-Phe-Pip-Arg-pNA og Bz-Pro-Phe-Arg-pNA. 5
9. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, kendetegnet ved, at man inkuberer ved 20 til 400C, navnlig 30 til 37°C. 1Q
10. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, kendetegnet ved, at man inkuberer i 1 til 10 minutter. 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3504405 | 1985-02-08 | ||
| DE19853504405 DE3504405A1 (de) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | Bestimmung von prokallikrein |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK62186D0 DK62186D0 (da) | 1986-02-07 |
| DK62186A DK62186A (da) | 1986-08-09 |
| DK164512B true DK164512B (da) | 1992-07-06 |
| DK164512C DK164512C (da) | 1992-11-23 |
Family
ID=6262060
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK062186A DK164512C (da) | 1985-02-08 | 1986-02-07 | Fremgangsmaade til simultan bestemmelse af prokallikrein og den partielle thromboplastintid |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4732860A (da) |
| EP (1) | EP0190766B1 (da) |
| JP (1) | JPH0675518B2 (da) |
| AT (1) | ATE43641T1 (da) |
| CA (1) | CA1267598A (da) |
| DE (2) | DE3504405A1 (da) |
| DK (1) | DK164512C (da) |
| ES (1) | ES8701842A1 (da) |
| NO (1) | NO169022C (da) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5055412A (en) * | 1989-03-21 | 1991-10-08 | Proksch Gary J | Factor sensitive reagent for testing of blood coagulation containing ellagic acid and divalent metal ions and method of making the same |
| ATE140034T1 (de) * | 1990-04-17 | 1996-07-15 | Analytical Control Syst Inc | Koagulationsassays und reagenzien |
| US5569590A (en) * | 1990-04-17 | 1996-10-29 | Analytical Control Systems, Inc. | Initial screen for abnormal platelet condition |
| US5637452A (en) * | 1992-10-02 | 1997-06-10 | Analytical Control Systems, Inc. | Kit for an initial screen for abnormal platelet condition comprising propyl gallate or tannin and a metal ion |
| JP3213831B2 (ja) * | 1993-08-06 | 2001-10-02 | 日本臓器製薬株式会社 | 被検物質の活性測定方法 |
| JP3213832B2 (ja) * | 1993-08-06 | 2001-10-02 | 日本臓器製薬株式会社 | 被検物質の活性測定法 |
| JPH07109610A (ja) * | 1993-08-16 | 1995-04-25 | Tokai Kensetsu:Kk | ヘルメット |
| CA2382143C (en) * | 1999-09-03 | 2005-10-18 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent and test cartridge for determining clotting time |
| US6448024B1 (en) | 2000-10-03 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen |
| EP1367135A1 (en) * | 2002-05-29 | 2003-12-03 | Pentapharm AG | Improved method for the assessment of thrombin formation in blood or plasma |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2527932C2 (de) * | 1974-07-02 | 1983-04-21 | Pentapharm AG, 4052 Basel | Säureadditionssalze von Tripeptidderivaten und deren Verwendung als Substrate zur Bestimmung von Plasmakallikrein |
| DE2915310A1 (de) * | 1979-04-14 | 1980-10-30 | Behringwerke Ag | Neues partielles thromboplastin und dessen verwendung |
| CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
| JPS5848567B2 (ja) * | 1980-06-04 | 1983-10-29 | 三菱化学株式会社 | イソシアヌレ−ト基を含有するウレタンプレポリマ−の製造法 |
| US4335203A (en) * | 1980-07-10 | 1982-06-15 | The Regents Of The University Of California | Method for identifying potential contrast media reactors |
| JPS5750923A (en) * | 1980-09-12 | 1982-03-25 | Ono Pharmaceut Co Ltd | Preparation of blood-plasma kallikrein and determination of blood-plasma prekallikrein |
| DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE3311287A1 (de) * | 1983-03-28 | 1984-10-04 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur fotometrischen bestimmung der aktivierten partiellen thromboplastinzeit und reagenz dazu |
-
1985
- 1985-02-08 DE DE19853504405 patent/DE3504405A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-01-21 NO NO860200A patent/NO169022C/no unknown
- 1986-01-24 US US06/822,364 patent/US4732860A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-02-04 CA CA000501043A patent/CA1267598A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-02-07 AT AT86101608T patent/ATE43641T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-02-07 EP EP86101608A patent/EP0190766B1/de not_active Expired
- 1986-02-07 JP JP61024263A patent/JPH0675518B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-02-07 ES ES551764A patent/ES8701842A1/es not_active Expired
- 1986-02-07 DK DK062186A patent/DK164512C/da not_active IP Right Cessation
- 1986-02-07 DE DE8686101608T patent/DE3663684D1/de not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61185199A (ja) | 1986-08-18 |
| ES551764A0 (es) | 1986-12-16 |
| EP0190766A3 (en) | 1986-12-10 |
| NO860200L (no) | 1986-08-11 |
| CA1267598A (en) | 1990-04-10 |
| DK62186D0 (da) | 1986-02-07 |
| ATE43641T1 (de) | 1989-06-15 |
| ES8701842A1 (es) | 1986-12-16 |
| EP0190766B1 (de) | 1989-05-31 |
| DE3663684D1 (de) | 1989-07-06 |
| US4732860A (en) | 1988-03-22 |
| DK164512C (da) | 1992-11-23 |
| DE3504405A1 (de) | 1986-08-14 |
| NO169022C (no) | 1992-04-29 |
| NO169022B (no) | 1992-01-20 |
| DK62186A (da) | 1986-08-09 |
| EP0190766A2 (de) | 1986-08-13 |
| JPH0675518B2 (ja) | 1994-09-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20090087870A1 (en) | Hematological assay and kit | |
| US4234682A (en) | Method and reagent for determining biologically active heparin in plasma | |
| US20030199014A1 (en) | In vitro methods for screening for blood coagulation disorders using metal ions | |
| JP5640189B2 (ja) | ループスアンチコアグラント検出用血液凝固時間の測定方法 | |
| JP3533012B2 (ja) | プロテインｃ／プロテインｓ系の障害を検出する方法 | |
| NL8201987A (nl) | Werkwijze voor het bepalen van de activiteit van plasminogeenactivator van het weefseltype, alsmede voor gebruik bij deze werkwijze geschikte combinatie van het "kit"-type. | |
| DK156668B (da) | Fremgangsmaade til kvantitativ bestemmelse af blodkoagulationsfaktor xii i humant plasma | |
| DK164512B (da) | Fremgangsmaade til simultan bestemmelse af prokallikrein og den partielle thromboplastintid | |
| NO164443B (no) | Reagens for bestemmelse av den aktiverte partielle tromboplastintid. | |
| US5308756A (en) | Protein S chromogenic assay | |
| NO138183B (no) | Diagnosemiddel for bestemmelse av gammaglutamyl-transpeptidase i biologiske vaesker | |
| US7727736B2 (en) | Soluble phospholipids for use in clotting factor assays | |
| EP0440775B1 (en) | Factor ix chromogenic assay | |
| US5753510A (en) | Calibrator for use in test methods for detecting a defective coagulation factor V | |
| AU652737B2 (en) | Functional assay for determining the protein S activity | |
| Becker et al. | Development of a photometric assay for activated partial thromboplastin time and its application to the cobas (R) biocentrifugal analyzer | |
| EP0260707B1 (en) | Method for assaying plasma protein and measuring kit for the same | |
| Orfanos et al. | Screening test for alpha 1-antitrypsin in dried-blood specimens. | |
| Francis | A new chromogenic assay for the specific determination of prothrombin. | |
| Bartl et al. | Application of several chromogenic substrate assays to automated instrumentation for coagulation analysis | |
| Sarji et al. | Determination of plasminogen in human serum or plasma by a fibrometric method |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |