NO169022B - Fremgangsmaate for simultanfotometrisk bestemmelse av prokallikrein og den partielle tromboplastintiden i plasma - Google Patents
Fremgangsmaate for simultanfotometrisk bestemmelse av prokallikrein og den partielle tromboplastintiden i plasma Download PDFInfo
- Publication number
- NO169022B NO169022B NO860200A NO860200A NO169022B NO 169022 B NO169022 B NO 169022B NO 860200 A NO860200 A NO 860200A NO 860200 A NO860200 A NO 860200A NO 169022 B NO169022 B NO 169022B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- arg
- pna
- plasma
- time
- prokallikrein
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 10
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims abstract description 7
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims abstract description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 10
- AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N Ellagic acid Chemical compound OC1=C(O)C(OC2=O)=C3C4=C2C=C(O)C(O)=C4OC(=O)C3=C1 AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N Ellagic acid Natural products OC1=C(O)[C@H]2OC(=O)c3cc(O)c(O)c4OC(=O)C(=C1)[C@H]2c34 ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N 0.000 claims description 7
- 229920002079 Ellagic acid Polymers 0.000 claims description 7
- 229960002852 ellagic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 235000004132 ellagic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N methylellagic acid Natural products O1C(=O)C2=CC(O)=C(O)C3=C2C2=C1C(OC)=C(O)C=C2C(=O)O3 FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 4
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 3
- YDMBNDUHUNWWRP-VJBWXMMDSA-N (2s)-1-[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]piperidine-2-carboxamide Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)C1=CC=CC=C1 YDMBNDUHUNWWRP-VJBWXMMDSA-N 0.000 claims description 2
- VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N (2s)-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]-1-[2-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]acetyl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)NCC(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)CCC1 VYLJFJGMPYBPMN-VXKWHMMOSA-N 0.000 claims description 2
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 claims description 2
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108010039286 S 2238 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010018472 chromozym TH Proteins 0.000 claims description 2
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 2
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 abstract description 5
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 abstract 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 3
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 2
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 2
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 2
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 2
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 description 2
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 2-azaniumylethyl [(2r)-2,3-diacetyloxypropyl] phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](OC(C)=O)COP(O)(=O)OCCN CFWRDBDJAOHXSH-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical group NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002016 Aerosil® 200 Inorganic materials 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 description 1
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/10—Anilides
- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96455—Kallikrein (3.4.21.34; 3.4.21.35)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for simultanfotometrisk bestemmelse av prokallikrein og den partielle tromboplastintiden i plasma. Fra bestmmelsen av prokallikrein kan man treffe slutninger vedrørende blod-koaguleringssystemet. Mangel på prokallikrein ytrer seg som en forlenget koaguleringstid. Ved forlengede koagulerings-tider kan prokallikrein-bestemmelsen avgjøre om denne forlengelsen er forårsaket av en mangel på faktor VIII, IX eller en prokallikrein-mangel. Viser prokallikrein-bestemmelsen at det dreier seg om en mangel på faktor VIII eller IX kan dette tyde på alvorlige sykdomstilstander. Videre finnes også ved bestemte andre sykdomstilstander som f.eks. sjokk, en forandring av prokallikrein-mengden.
Kallikrein-dannelsen fra prokallikrein i plasma forløper etter følgende reaksjonsskjema:
De kjente fremgangsmåtene til bestemmelse av prokallikrein er beskrevet i H.U. Bergmeyer, "Methods of Enzymatic Analysis", 3. opplag, bind V, side 412/413. Ved siden av enkelte meget kompliserte og tidkrevende fremgangsmåter som er utelukkede for rutinebestemmelser i et koagulerIngslaboratorium, er det herfra kjent å bestemme dannet kallikrein over et kromogent substrat etter aktivering av faktor XII med dekstransulfat. Denne fremgangsmåten har likevel den ulempen at inkuberingen til overføring av prokallikrein til kallikrein må gjennom-føres ved 0°C for å forhindre innvirkningen av plasma-inhibitorer som f.eks. ot^-antitrypsin og C^-inaktivator på måleresultatet. Inkuberingen ved 0'C står videre i høy grad i veien for automatiserbarheten av fremgangsmåten.
Til grunn for oppfinnelsen ligger følgelig den oppgaven å tilveiebringe en enkel og rask fremgangsmåte til bestemmelse av prokallikrein, som ikke oppviser de nevnte ulempene og som spesielt kan gjennomføres ved normal temperatur og som samtidig gir den partielle tromboplastintiden.
Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte for simultanfotometrisk bestemmelse av prokallikrein og den partielle tromboplastintiden (PTT) i plasma, kjennetegnet ved at man inkuberer plasma med en overflateaktivator fra gruppen ellagsyre, sulfatider og finfordelt silisiumdioksyd, deretter tilsetter et kromogent trombinsubstrat og forsøksoppløsningen tilsettes Ca^<+->ioner og et fosfolipid, man måler de derav frigitte optisk bestembare gruppene i korte tidsavstander eller kontinuerlig og bestemmer stigningen i den lineære delen av kurven, som oppnås ved avsetning av tiden som funksjon av ekstinksjonen som mål for prokallikrein-innholdet og tiden inntil det oppnås en på forhånd bestemt ekstinksJon som PTT.
Overflateaktivatoren velges hensiktsmessig blandt ellagsyre, sulfatider (fortrinnsvis fra hjernemateriale) og finfordelt silisiumdioksyd, som er tilgjengelig f.eks. under betegnelsen "Aerosil", Degussa, Tyskland. Dekstransulfat er ikke egnet. Spesielt foretrukket er ellagsyre i en konsentrasjon på 0,08 til 2,1 pg/mm prøveoppløsning. De beste resultatene oppnås med en konsentrasjon på 0,40 til 0,45 jjg ellagsyre pr. ml. Disse og alle andre konsentrasjonsangivelser i foreliggende beskrivelse vedrører sluttkonsentrasjonen ved forsøket.
Overraskende er det mulig ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen å inkubere ved normale temperaturer, spesielt ved 20 til 40°C, og fortrinnsvis ved 30 til 37'C.
Som kromogene trombinsubstrater kan de for dette formål handelsvanlige peptidene anvendes som Inneholder en kromogen gruppe, spesielt en paranitro-anilingruppe eller et derivat derav, som under enzympåvirkning avspaltes fra substratet og deretter kan bestemmes optisk. Foretrukne kromogene trombinsubstrater for anvendelse innenfor rammen av foreliggende oppfinnelse er Tos-Gly-Pro-Arg-pNA, H-D-CHA-Ala-Arg-pNA, H-D-CHG-Gly-Arg-pNA, H-D-CHG-Ala-Arg-pNA, H-D-CEG-but-Arg-pNA, Iso-Buco-Gly-Arg-pNA, naftyl-S02-Gly-Pro-Arg-pNA og H-D-Phe-Pip-Arg-pNA.
Konsentrasjonen av det kromogene trombinsubstratet utgjør 0,01 til 2 mmol/1, fortrinsvis 0,02 til 0,04 mmol/1, avhengig av Michaelis-konstanten for det aktuelle substratet. Spesielt foretrekkes som substrat Tos-Gly-Pro-Arg-p-nitroanilin i en konsentrasjon på ca. 0,2 mmol/1.
Ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen anvendes animalske, vegatabilske eller syntetiske fosfolipider. Eksempler på egnede fosfolipider er kefalin, soyabønne-fosfolipid, fosfatidyletanolamin og fosfatidylkolin. Tallrike andre fosfolipider er imidlertid også egnede, men kan på grunn av det store antallet ikke angis spesielt her. Spesielt foretrukket er kefalin. Mengden ligger hensiktsmessig mellom 4 og 200 pg/ml.
Videre gjennomføres fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen i nærvær av kalsiumioner. Kalsiumtilsats bevirker en økning av følsomheten for fremgangsmåten ved at ekstinksjonsdifferansen pr. tidsenhet forhøyes. Foretrukket er en konsentrasjon på 25 til 40 pmol/ml Ca<2+->ioner. Tilsatsen av Ca<2+->ioner og fosfolipid gir en S-formet kurve, hvis grunnlinje anvendes for prokallikreinbestemmelsen.
Inkuberingstiden ligger ved fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen mellom 1 og 10 minutter, 4 til 6 minutter er foretrukket. Ved for lang eller for kort inkubasjonstid får man lavere prokallikreinverdier.
Som plasma anvender man Innfor rammen av foreliggende oppfinnelse f.eks. citratplasma, oksalatplasma eller EDTA-plasma.
Dannelsen av kromoforen fra det kromogene substratet følges fotometrisk. Dette kan både foregå kinetisk ved bestemmelse av ekstinksjonsendringen pr. tidsenhet eller ved topunkt-kinetikk og også ved endepunktsmåling. I tilfellet med endepunktsmåling må fargedannelsesreaksjonen stoppes, dette foregår fortrinnsvis ved syretilsats. Spesielt egnet til stopping er eksempelvis eddiksyre eller sitronsyre. I tilfellet eddiksyre anvendes denne fortrinnsvis i en konsentrasjon fra 20 til 100 vol.-St, i tilfellet sitronsyre i en konsentrasjon fra 5 til 20 vol.-#.
De følgende eksemplene belyser oppfinnelsen ytteligere I forbindelse med den vedlagte tegningen. I denne er: Fig. 1 en grafisk fremstilling av ekstinksjonsdifferansen pr. tidsenhet ved forskjellige prokallikrein-innhold i plasma. Fig. 2 er en grafisk fremstilling av ekstinksjonen som funksjon av reaksjonstiden, herav fremgår det S-formede kurveforløpet. Fig. 3 er en grafisk fremstilling som viser korrelasjonen for PTT-bestemmelsen i simultanforsøk Ifølge oppfinnelsen med en kjent PTT-forsøksfremgangsmåte.
Eksempel 1
Bestemmelse av prokallikrein.
Reagens 1:
Reagens 2:
Til 2,0 ml av reagens 1 tilsettes 0,2 ml prøve (citratplasma) og det inkuberes ved 37°C i 5 min. Deretter tilsettes 0,2 ml reagens, det blandes og den fotometriske bestemmelsen gjennomføres ved 37° C og 405 nm. Ved forskjellige prokallikrein-innhold i plasma, får man som resultat måleverdier ifølge fig. 1. Her betyr 10056 prokallikrein i plasma prokallikrein-innholdet i en normal plasmaprøve.
Eksempel 2
Tilsats av Ca<2+->ioner.
Til 2,0 ml av reagens 1 (eksempel 1, ± kefalin), tilsettes 0,2 ml prøve (sitratplasma) og det inkuberes ved 37°C i 5 min. Deretter tilsettes 0,2 ml reagens (Tos-Gly-Pro-Arg-p-NA 0,376 pmol/ml, med/uten Ca<2+>, 40 pmol/ml).
Bestemmelsen gjennomføres som beskrevet i eksempel 1. Ved tilsatsen av Ca<2+->ioner må A E/min. måles i løpet av de første 25 sekundene.
Tabell I viser innflydelsen av Ca<2+->ioner, henholdsvis kefalin, på følsomheten av forsøket.
Eksempel 3
Bestemmelse av prokallikrein i nærvær av silisiumdioksyd.
I reagens 1 (eksempel 1) tilsettes istedenfor ellagsyre "Aerosil 200" (1 mg/ml). I nærvær av 40 jjmol/ml Ca<2+->ioner får man A E/min. = 0,04.
Eksempel 4
Samtidig bestemmelse av prokallikrein og PTT.
Forsøket gjennomføres analogt eksempel 1, hvorved for bestemmelse av prokallikrein A E/min. må bestemmes i løpet av 25 sekunder. Deretter lar man reaksjonen forløpe videre og gjennomfører en "fixed absorbance"-måling. Herved måles tiden inntil man oppnår en bestemt ekstinksjonsdifferanse som 0-verdi (A E = 0,2). Denne tiden er PTT-tiden. Fig. 2 viser det med en skriver registrerte ekstinksjonsforløpet. (PTT-tid: 46,3 sek.; prokallikrein-reaksjon: 0,042 A E/min.).
Fig. 3 viser korrelasjonen for PTT-bestemmelsen ifølge eksempel 4 med en vanlig PTT-test (Clotting-metoden, "Actin-Test", Merz og Dade). Herav fremgår at PTT-bestemmelsen ikke forstyrres av prokallikrein-forsøket.
Claims (8)
1.
Fremgangsmåte for sinmltanfotometrisk bestemmelse av prokallikrein og den partielle tromboplastintiden (PTT) i plasma,karakterisert vedat man inkuberer plasma med en overflateaktivator fra gruppen ellagsyre, sulfatider og finfordelt silisiumdioksyd, deretter tilsetter et kromogent trombinsubstrat og forsøksoppløsningen tilsettes Ca<2+->ioner og et fosfolipid, man måler de derav frigitte optisk bestembare gruppene i korte tidsavstander eller kontinuerlig og bestemmer stigningen i den lineære delen av kurven som oppnås ved avsetning av tiden, som funksjon av ekstinksjonen som mål for prokallikrein-innholdet og tiden inntil det oppnås en på forhånd bestemt ekstinksjon som PTT.
2.
Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisertved at man tilsetter 1 til 100 jimol pr. ml Ca<2+->ioner.
3.
Fremgangsmåte ifølge krav 2,karakterisertved at man tilsetter 0,08 til 2,1 >jg ellagsyre pr. ml forsøksoppløsning.
4.
Fremgangsmåte ifølge krav 1,karakterisertved at man som fosfolipid tilsetter kefalin, soyabønne-fosfolipid, fosfatidyletanolamin eller fosfatidylkolin.
5.
Fremgangsmåte ifølge krav 4,karakterisertved at man tilsetter 4 til 200 jjg kefalin pr. ml f orsøks-oppløsning.
6.
Fremgangsmåte ifølge et av de foregående krav, k a r a k- t erisert ved at man anvender et kromogent trombinsubstrat fra gruppen Tos-Gly-Pro-Arg-pNA, H-D-CHA-Ala-Arg-pNA, H-D-CHG-Gly-Arg-pNA, E-D-CEG-Ala-Arg-pNA, E-D-CEG-but-Arg-pNA, Iso-Buco-Gly-Arg-pNA, naftyl-S02~Gly-Pro-Arg-pNA og H-D-Phe-Pip-Arg-pNA.
7.
Fremgangsmåte ifølge et av de foregående krav,karakterisert vedat man inkuberer ved 20 til 40"C, spesielt 30 til 37°C.
8.
Fremgangsmåte ifølge et av de foregående krav,karakterisert vedat man inkuberer I 1 til 10 minutter.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853504405 DE3504405A1 (de) | 1985-02-08 | 1985-02-08 | Bestimmung von prokallikrein |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO860200L NO860200L (no) | 1986-08-11 |
| NO169022B true NO169022B (no) | 1992-01-20 |
| NO169022C NO169022C (no) | 1992-04-29 |
Family
ID=6262060
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO860200A NO169022C (no) | 1985-02-08 | 1986-01-21 | Fremgangsmaate for simultanfotometrisk bestemmelse av prokallikrein og den partielle tromboplastintiden i plasma |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4732860A (no) |
| EP (1) | EP0190766B1 (no) |
| JP (1) | JPH0675518B2 (no) |
| AT (1) | ATE43641T1 (no) |
| CA (1) | CA1267598A (no) |
| DE (2) | DE3504405A1 (no) |
| DK (1) | DK164512C (no) |
| ES (1) | ES8701842A1 (no) |
| NO (1) | NO169022C (no) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5055412A (en) * | 1989-03-21 | 1991-10-08 | Proksch Gary J | Factor sensitive reagent for testing of blood coagulation containing ellagic acid and divalent metal ions and method of making the same |
| AU663683B2 (en) * | 1990-04-17 | 1995-10-19 | Analytical Control Systems, Inc. | Coagulation assays and reagents |
| US5569590A (en) * | 1990-04-17 | 1996-10-29 | Analytical Control Systems, Inc. | Initial screen for abnormal platelet condition |
| US5637452A (en) * | 1992-10-02 | 1997-06-10 | Analytical Control Systems, Inc. | Kit for an initial screen for abnormal platelet condition comprising propyl gallate or tannin and a metal ion |
| JP3213831B2 (ja) * | 1993-08-06 | 2001-10-02 | 日本臓器製薬株式会社 | 被検物質の活性測定方法 |
| JP3213832B2 (ja) * | 1993-08-06 | 2001-10-02 | 日本臓器製薬株式会社 | 被検物質の活性測定法 |
| JPH07109610A (ja) * | 1993-08-16 | 1995-04-25 | Tokai Kensetsu:Kk | ヘルメット |
| WO2001018551A1 (en) * | 1999-09-03 | 2001-03-15 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent and test cartridge for determining clotting time |
| US6448024B1 (en) | 2000-10-03 | 2002-09-10 | Roche Diagnostics Corporation | Method, reagent, cartridge, and device for determining fibrinogen |
| EP1367135A1 (en) * | 2002-05-29 | 2003-12-03 | Pentapharm AG | Improved method for the assessment of thrombin formation in blood or plasma |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2527932C2 (de) * | 1974-07-02 | 1983-04-21 | Pentapharm AG, 4052 Basel | Säureadditionssalze von Tripeptidderivaten und deren Verwendung als Substrate zur Bestimmung von Plasmakallikrein |
| DE2915310A1 (de) * | 1979-04-14 | 1980-10-30 | Behringwerke Ag | Neues partielles thromboplastin und dessen verwendung |
| CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
| JPS5848567B2 (ja) * | 1980-06-04 | 1983-10-29 | 三菱化学株式会社 | イソシアヌレ−ト基を含有するウレタンプレポリマ−の製造法 |
| US4335203A (en) * | 1980-07-10 | 1982-06-15 | The Regents Of The University Of California | Method for identifying potential contrast media reactors |
| JPS5750923A (en) * | 1980-09-12 | 1982-03-25 | Ono Pharmaceut Co Ltd | Preparation of blood-plasma kallikrein and determination of blood-plasma prekallikrein |
| DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| DE3311287A1 (de) * | 1983-03-28 | 1984-10-04 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur fotometrischen bestimmung der aktivierten partiellen thromboplastinzeit und reagenz dazu |
-
1985
- 1985-02-08 DE DE19853504405 patent/DE3504405A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-01-21 NO NO860200A patent/NO169022C/no unknown
- 1986-01-24 US US06/822,364 patent/US4732860A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-02-04 CA CA000501043A patent/CA1267598A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-02-07 DK DK062186A patent/DK164512C/da not_active IP Right Cessation
- 1986-02-07 ES ES551764A patent/ES8701842A1/es not_active Expired
- 1986-02-07 JP JP61024263A patent/JPH0675518B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-02-07 EP EP86101608A patent/EP0190766B1/de not_active Expired
- 1986-02-07 DE DE8686101608T patent/DE3663684D1/de not_active Expired
- 1986-02-07 AT AT86101608T patent/ATE43641T1/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0190766B1 (de) | 1989-05-31 |
| DK164512C (da) | 1992-11-23 |
| ES551764A0 (es) | 1986-12-16 |
| ATE43641T1 (de) | 1989-06-15 |
| DE3663684D1 (de) | 1989-07-06 |
| NO860200L (no) | 1986-08-11 |
| EP0190766A3 (en) | 1986-12-10 |
| DE3504405A1 (de) | 1986-08-14 |
| DK62186A (da) | 1986-08-09 |
| ES8701842A1 (es) | 1986-12-16 |
| DK164512B (da) | 1992-07-06 |
| EP0190766A2 (de) | 1986-08-13 |
| US4732860A (en) | 1988-03-22 |
| NO169022C (no) | 1992-04-29 |
| JPH0675518B2 (ja) | 1994-09-28 |
| JPS61185199A (ja) | 1986-08-18 |
| CA1267598A (en) | 1990-04-10 |
| DK62186D0 (da) | 1986-02-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4234682A (en) | Method and reagent for determining biologically active heparin in plasma | |
| Muszbek et al. | Kinetic determination of blood coagulation Factor XIII in plasma. | |
| US20090087870A1 (en) | Hematological assay and kit | |
| EP0608235B1 (en) | Method for the diagnosis of blood coagulation disorders | |
| JP5640189B2 (ja) | ループスアンチコアグラント検出用血液凝固時間の測定方法 | |
| US20110020850A1 (en) | Method of determining enzymatic activity in biological media | |
| JP4999613B2 (ja) | 血液凝固測定用試薬及び血液凝固時間測定方法 | |
| EP0094720B1 (en) | Process for assaying the activity of tissue plasminogen activator, and kit suitable for use in said process | |
| JP3533012B2 (ja) | プロテインｃ／プロテインｓ系の障害を検出する方法 | |
| NO169022B (no) | Fremgangsmaate for simultanfotometrisk bestemmelse av prokallikrein og den partielle tromboplastintiden i plasma | |
| DK156668B (da) | Fremgangsmaade til kvantitativ bestemmelse af blodkoagulationsfaktor xii i humant plasma | |
| JPH0365958B2 (no) | ||
| AU3142393A (en) | Protein s chromogenic assay | |
| US7727736B2 (en) | Soluble phospholipids for use in clotting factor assays | |
| EP0440775B1 (en) | Factor ix chromogenic assay | |
| AU652737B2 (en) | Functional assay for determining the protein S activity | |
| Becker et al. | Development of a photometric assay for activated partial thromboplastin time and its application to the cobas (R) biocentrifugal analyzer | |
| Bertina | Specificity of protein C and protein S assays | |
| CA1202869A (en) | Method for the quantitative measurement of the phosphatidyl glycerol | |
| Kappel et al. | Coagulation assays based on the Luminescent Oxygen Channeling Immunoassay technology | |
| Rutkowski | Human plasma and serum trypsin-like esterase activity | |
| Hutton | Chromogenic substrates in haemostasis | |
| Tripodi et al. | A chromogenic assay of prothrombin compared with coagulation tests during anticoagulant therapy and liver disease | |
| Sarji et al. | Determination of plasminogen in human serum or plasma by a fibrometric method | |
| GB1563517A (en) | Method for the determination of acid phosphatase |