DK164071B - Fremgangsmaade til fremstilling af en forbindelse indeholdende en cis-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-ring - Google Patents

Fremgangsmaade til fremstilling af en forbindelse indeholdende en cis-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-ring Download PDF

Info

Publication number
DK164071B
DK164071B DK443282A DK443282A DK164071B DK 164071 B DK164071 B DK 164071B DK 443282 A DK443282 A DK 443282A DK 443282 A DK443282 A DK 443282A DK 164071 B DK164071 B DK 164071B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
medium
cells
cis
benzene
mutant strain
Prior art date
Application number
DK443282A
Other languages
English (en)
Other versions
DK164071C (da
DK443282A (da
Inventor
Stephen Colin Taylor
Original Assignee
Ici Plc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ici Plc filed Critical Ici Plc
Publication of DK443282A publication Critical patent/DK443282A/da
Publication of DK164071B publication Critical patent/DK164071B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK164071C publication Critical patent/DK164071C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C255/00—Carboxylic acid nitriles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C35/00—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C07C35/02—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring monocyclic
    • C07C35/08—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring monocyclic containing a six-membered rings
    • C07C35/14—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring monocyclic containing a six-membered rings with more than one hydroxy group bound to the ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C35/00—Compounds having at least one hydroxy or O-metal group bound to a carbon atom of a ring other than a six-membered aromatic ring
    • C07C35/48—Halogenated derivatives
    • C07C35/50—Alcohols with at least two rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F32/00—Homopolymers and copolymers of cyclic compounds having no unsaturated aliphatic radicals in a side chain, and having one or more carbon-to-carbon double bonds in a carbocyclic ring system
    • C08F32/02—Homopolymers and copolymers of cyclic compounds having no unsaturated aliphatic radicals in a side chain, and having one or more carbon-to-carbon double bonds in a carbocyclic ring system having no condensed rings
    • C08F32/06—Homopolymers and copolymers of cyclic compounds having no unsaturated aliphatic radicals in a side chain, and having one or more carbon-to-carbon double bonds in a carbocyclic ring system having no condensed rings having two or more carbon-to-carbon double bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L45/00—Compositions of homopolymers or copolymers of compounds having no unsaturated aliphatic radicals in side chain, and having one or more carbon-to-carbon double bonds in a carbocyclic or in a heterocyclic ring system; Compositions of derivatives of such polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38—Pseudomonas
    • C12R2001/40—Pseudomonas putida
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/874—Pseudomonas
    • Y10S435/877—Pseudomonas putida

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

DK 164071 B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse indeholdende en cis-l,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-r ing.
5 Fremstillingen af cykliske dihydroxyforbindelser ved at tilføre aromatiske forbindelser til mutantstammer af Pseudomonas arter, Alkali genes arter og Beirjerinchkia arter, som i deres naturlige form kan udnytte visse aromatiske forbindelser som carbonkilder til vækst, kendes. Koncentrationerne af cykliske 10 dihydroxyforbindelser dannet ved hjælp af sådanne mikroorganismer er lave, typisk under 2 g pr. liter gæringsvæske. Enzymerne til dannelsen af cykliske dihydroxyforbindelser skal desuden induceres i cellerne før deres anvendelse ved at de udsættes for aromatiske forbindelser.
15
Der kendes fra D.T. Gibson og W.K. Yeh, Microbial Degradation of Oil Pollutants Workshop (1973), side 33-38, oxidation af aromatiske hydrocarboner til 1,2-dihydroxy-cyklo-hexa-3,5-di-enderivater under vækstbetingelser med stammen P. putida 39/D.
20 Mutantstammen P. putida 39/D, som ikke kan udnytte toluen, benzen og ethylbenzen som vækstsubstrater, er dannet ved mutation af en stamme af P. putida, der godt kan udnytte benzen, toluen og ethyl-benzen som vækstsubstrat.
25 Det er formålet med den foreliggende opfindelse at muliggøre syntesen af cis-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-diener ud fra tilsvarende aromatiske forstadier ved højere udbytter (baseret på den aromatiske forbindelse), ved højere produktionshastigheder og/eller at give højere produktkoncentrationer end det hidtil 30 har været muligt.
Det har nu vist sig, at man ved at adskille væksten af en mutantstamme af Pseudomonas putida med de i krav 1 punkt (1) angivne egenskaber fra dens brug til omdannelse af de i krav 1 35 nævnte aromatiske forbindelser til cykliske dihydroxyforbindelser opnår højere koncentrationer af cykliske dihydroxyforbindelser end hidtil. De ved hjælp af de førnævnte mutanter
DK 164071B
2 dannede cykliske dihydroxyforbindel ser er nyttige mellemprodukter ved fremstillingen af ringholdige polymere, således som det nærmere er beskrevet i den britiske patentansøgning nr. 8130114.
5
Repræsentative kulturer af Pseudomonas putida, som er velegnede til mutation til dannelse af mutantstammer, der er nyttige i forbindelse med den foreliggende opfindelse, er blevet deponeret hos National Collection of Industrial Bacteria, 10 Torrey Research Station, Aberdeen, Scotland, UK, hvor de har fået betegnelsen NCIB 11680 og NCIB 11767. Begge disse kulturer er offentligt tilgængelige fra den nævnte samling, der nu har ændret navn til National Collection of Industrial and Marine Bacteria (NCIMB).
15
Der blev først fremstillet mutantstammer af Pseudomonas putida NCIB 11680 og Pseudomonas putida NCIB 11767, som ikke længere er i stand til at vokse på benzen eller toluen, og som danner cykliske dihydroxyforbindelser ud fra bestemte aromatiske for-20 bindeiser. Der er også af den første mutantstamme af Pseudomonas putida NCIB 11767 dannet yderligere mutantstammer, som er konstitutive for et enzym, der omdanner visse aromatiske forbindelser til cykliske dihydroxyforbindelser (af nemhedsgrunde i det følgende benævnt som "konstitutiv stamme"). Den konsti-25 tutive stamme giver den fordel, at et enzym-induktionstrin ikke behøves, før der kan ske dannelse af cykliske dihydroxyforbindelser ved hjælp af mikroorganismen.
Den foreliggende opfindelse tilvejebringer følgelig en frem-30 gangsmåde til fremstillingen af en forbindelse, som omfatter en cis-l,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-ring, hvilken fremgangsmåde omfatter, at man (1) dyrker en mutantstamme i et vækstmedium, der indeholder en 35 egnet carbonkilde, hvilken mutantstamme a) omfatter et enzym til dannelse af en cyklisk dihydroxy-forbindelse ud fra benzen eller toluen,
DK 164071 B
3 b) ikke er i stand til at vokse på benzen eller toluen, og c) hidrører fra en stamme af Pseudomonas putida, som er i stand til at vokse på benzen eller toluen, 5 (2) efter vækstperioden tilfører en aromatisk forbindelse, som er en benzenforbindelse, naphthalen eller biphenyl og en energikilde til mutantstammen i et medium, som kun i ringe grad eller slet ikke understøtter mutantstammens vækst, og 10 (3) lader mutantstammen omdanne den aromatiske forbindelse til den tilsvarende cis-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-ring-forbindelse.
15 Selv om den aromatiske forbindelse, som anvendes ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, fortrinsvis er monocyklisk, kan den også være bicyklisk, nemlig naphthalen og b i phenyl.
20 Hvor der ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse anvendes en benzenforbindelse, kan den have én eller flere substituenter, hvilke substituenter kan være hydrocarbylgrupper med 1-4 carbonatomer, f.eks. methyl-, ethyl- eller vinyl- og/eller heteroatomer eller heterogrupper, f.eks. halo-25 gen.
De førnævnte mutantstammer af Pseudomonas putida, der kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, og hvori et enzym, som omdanner aromatiske forbindelser til cykliske dihy-30 droxyforbindelser, kan induceres, kan fremstilles ved at behandle Pseudomonas putida NCIB 11680 eller fortrinsvis Pseudomonas putida NCIB 11767 under muterende betingelser for at give mutantstammer, der ikke længere er i stand til at udnytte toluen eller benzen som eneste carbonkilde for vækst, og som, 35 når de dyrkes i et flydende medium indeholdende pyrodruesyre som eneste carbonkilde i nærværelse af toluen, udskiller et stof, som har en ultraviolet absorptionsspids ved 265 nanome-
DK 164071B
4 ter. Den førnævnte mutation kan fremkaldes ad kemisk og/eller fysisk vej. Kemisk mutation kan ske f.eks. ved behandling af mikroorganismen med N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin, hvilken behandling hensigtsmæssigt kan gennemføres som beskrevet 5 af Ornston, Journal of Biological Chemistry, 1966, bind 241, side 3800 - 3810. Fysisk mutation kan ske ved hjælp af elektromagnetisk stråling, f.eks. med ultraviolet lys.
Den førnævnte konstitutive stamme, der kan anvendes ved frem-10 gangsmåden, ifølge den foreliggende opfindelse, kan fremstilles ved at behandle den første mutantstamme af Pseudomonas putida NCIB 11767 under muterende betingelser, som tidligere beskrevet, til dannelse af stammer, som efter dyrkning uden nærværelse af en aromatisk forbindelse er i stand til at danne cyk-15 liske dihydroxyforbindelser af aromatiske forbindelser. Valg af egnede konstitutive stammer fra produktet fra mutationsbehandlingen kan lettes ved, at cellerne efter mutation dyrkes på et fast agarmedium indeholdende pyrodruesyre eller glucose som carbonkilde. Efter vækst kan kolonierne på agarpladerne 20 sprøjtes med en opløsning af catechol i vand. Kolonier af celler, som hurtigt bliver gul/grønne, er konstitutive for et enzym, som omdanner catechol til 2-hydroxymuconsyresemialdehyd (Nozaki, Topics in Current Chemistry (English Review) 1979, bind 78, side 145 - 186)). Dette enzym katalyserer et af tri-25 nene i den oxidative nedbrydning af benzen i Pseudomonas putida NCIB 11680 og Pseudomonas putida NCIB 11767, og det har vist sig, at det i dets ekspression er bundet til enzymet, som omdanner benzen til den cykliske dihydroxyforbindelse. De celler, der bliver grønne, når de udsættes for catechol, er der-30 for den ønskede konstitutive stamme.
Den konstitutive stamme kan være tilbøjelig til katabolitre-pression ved hjælp af carbonkilder såsom glucose- og casamino-syrer. Forbedrede konstitutive stammer, som ikke er tilbøje-35 lige til en sådan katabolitrepression, kan opnås ved mutation af de konstitutive stammer ved behandlinger som tidligere beskrevet. De forbedrede konstitutive stammer kan påvises ved at
DK 164071 B
5 dyrke kolonier af de konstitutive stammer, som har været udsat for en mutationsbehandling på et agarmedium, der indeholder en blanding af glucose- og casamonosyrer som carbonkiIder. Kolonierne, der bliver gul/grønne, når de udsættes for cate-5 chol, omfatter den forbedrede konstitutive stamme.
Celler af mutantstammerne til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, kan dyrkes i konventionelle dyrkningsmedier ved en kontinuerlig metode, batchmetode 10 eller batchmetode med tilfødning . Når de førnævnte første mutantstammer anvendes ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, dyrkes de fortrinsvis ved hjælp af en batchmetode med tilfødning, hvor en aromatisk forbindelse ledes til kulturen, medens der fødes frisk medium dertil.
15
Dyrkningsmediet, hvori mutantstammerne i forbindelse med den forliggende opfindelse kan dyrkes, omfatter en vandig opløsning af mineralsalte og en egnet carbonkiIde. CarbonkiIden kan f.eks. være eddikesyre, glucose eller ethanol. Koncentrationen 20 af carbonkilden kan variere over et bredt område, men er almindeligvis mellem 1% (vægt/volumen) og 5% (vægt/volumen). Oxygen eller en oxygenholdig gas skal være til stede i vækstperioden. Temperaturen af mediet i vækstperioden kan variere meget, men vil normalt ligge i intervallet fra 25 til 35eC.
25 Mediets pH-værdi holdes inden for intervallet fra 5,5 til 8,0 i vækstperioden og fortrinsvis ved 6,5 - 7,5. Kulturens størrelse kan variere betydeligt, f.eks. mellem 1,5 og 500 liter.
Efter vækstperioden anvendes cellerne til omdannelse af en 30 aromatisk forbindelse. Cellerne kan høstes, f.eks. ved centrifugering eller flokkulation, eller de kan anvendes direkte.
Hvor cellerne høstes, resuspenderes de i en opløsning af mineralsalte, som ikke understøtter væsentlig cellevækst, f.eks. phosphat- eller tris(hydroxymethyl)aminomethanpufferopløsnin-35 ger eller konventionelle dyrkningsmedier, men som mangler eller kun indeholder lidt af én eller flere essentielle betand-dele. Typisk er koncentrationen af resuspenderede celler 1 -
DK 164071B
6 30 g tørvægt pr. liter. Cellerne holdes ved en temperatur på 20 - 40°C, og pH-værdien holdes mellem 7,5 og 8,5. Oxygen eller en oxygenholdig gas sættes til cellesuspensionen, således at oxygenspændingen holdes over 1¾ mætning. Der tilvejebringes 5 en egnet energikilde, fortrinsvis som en kontinuerlig tilførsel til cellesuspensionen, således at koncentrationen af energikilden holdes på et passende niveau, fortrinsvis mellem 0,05% (vægt/volumen) og 0,5% (vægt/volumen). Eksempler på egnede energikilder omfatter bl.a. alkoholer, f.eks. ethanol, 10 carboxylsyrer, f.eks. eddikesyre, og carbohydrater, f.eks. glucose. Energikilden er fortrinsvis ethanol eller eddikesyre.
Den aromatiske hydrocarbon, f.eks. benzen, chlorbenzen, toluen, kan tilsættes til cellesuspensionen som en damp i strøm-15 men af oxygen eller oxygenholdig gas, men, hvor det er en væske, sker tilsætningen fortrinsvis som en væske.
Hastigheden af tilsætningen af den aromatiske hydrocarbon til kulturen af en mutantstamme ved fremgangsmåden ifølge den fo-20 religgende opfindelse er typisk ca. 0,5 - 10 g pr. g tørvægt af celler pr. time. Tilsætningshastigheden af energikilden kan variere under omdannelsen, men er typisk i intervallet 0,1 - 2,0 g pr. g tørvægt af celler pr. time. Den produktive levetid af cellesuspensionen er typisk mellem 5 og 20 timer. Efter 25 denne periode fjernes cellerne ved centrifugering og/eller flokkulation. Friske celler kan sættes til den overliggende væske, og fremgangsmåden gentages. Efter processens afslutning indeholder den overliggende væske typisk mellem 10 og 50 g pr. liter af en cis-l,2-dihydroxycyklohexa-2,5-dien eller en homo-30 log eller analog deraf.
De cykliske dihydroxyprodukter fra fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse ekstraheres fortrinsvis fra den vandige reaktionsblanding ved opløsningsmiddelekstraktion med et 35 egnet polært opløsningsmiddel. Eksempler på polære opløsningsmidler, der kan anvendes, omfatter bl.a. ethylacetat, diethyl-ether og methylenchlorid. Der anvendes mere hensigtsmæssigt
DK 164071 B
7 kontinuerte ekstraktionsmetoder. Man udelukker imidlertid ikke den mulighed, at f.eks. det vandige medium efter separering af cellerne inddampes, og resten opløses i et egnet opløsningsmiddel, f.eks. methanol, ethanol eller methylenchlorid.
5
Dihydroxyforbindelserne, der fremstilles ved hjælp af fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse, kan omdannes til derivater deraf, f.eks. acetat, benzoat, pivalat, carbo-nat, hvilke derivater ofte kan omdannes til polymere og copo-10 lymere deraf, således som det mere fuldstændigt er beskrevet i den britiske patentansøgning nr. 8130114.
Forskellige træk ved den foreliggende opfindelse vil nu blive beskrevet under henvisning til de efterfølgende eksempler, som 15 belyser opfindelsen.
Dyrkningsmedier.
Medium A: 20
Koncentreret phosphorsyre (0,7 g/1), MgS04,7H20 (1,6 g/1), K2HP04,3H20 (0,9 g/1), ammoniumsulfat (1,5 g/1), ferrosulfat (0,025 g/1), CuS04,5H20 (0,001 g/1), MnS04,4H20 (0,005 g/1),
ZnS04,7H20 (0,005 g/1) og calciumcarbonat (0,065 g/1). pH-vær-25 dien blev indstillet på 7 med natriumhydroxid.
Medium B;
Medium A indeholdende 1% vægt/volumen pyrodruesyre og 0,5% 30 vægt/volumen eddikesyre.
Medium C;
Medium A uden ammoniumsulfatet.
35
DK 164071B
8
Medium D;
Medium A indeholdende 1% vægt/volumen pyrodruesyre.
5 Medium E;
Koncentreret phosphorsyre (2,2 g/1), MgS04,7H20 (0,8 g/1), K2SO4 (0,45 g/1), (NH4)2S04 (5 g/1), FeS04/7H20 (0,04 g/1), CuS04,5H20 (1 mg/1), MnS04,4H20 (5 mg/1), CaC03 (65 mg/1), og 10 glucose (15 g/1). pH-værdien blev indstillet på 7,5 med natri-umhydroxidopløsning.
Medium F; 15 Bauschop og Elsdon's medium som beskrevet i Journal of General Microbiology, i960, bind 23, side 457 - 469.
Medium G; 20 Luria væskemedium som beskrevet i "Experiments of Molecular Genetics" af J. H. Miller, publiceret af Cold Spring Harbor Laboratories, New York, 1972.
Fremstilling af en mutantstamme af Pseudomonas putida 25 NCIB til anvendelse i den foreliggende opfindelse.
Pseudomonas putida NCIB 11680 blev dyrket til tidlig eksponentiel vækst i et medium af mineralsalte indeholdende 0,2% vægt/ volumen natriumcacetat som carbonkilde. Cellerne blev høstet 30 ved centrifugering og resuspenderet ved en koncentration på 0,2 g tør cellevægt pr. liter i 20 ml 25 millimolær citronsy-re-natriumcitratpuffer ved pH-værdi 5,5, indeholdende 1 mg N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin. Suspensionen blev inkuberet i 40 minutter ved 30°C, hvorefter cellerne blev høstet ved 35 centrifugering og vasket tre gange med 25 millimolær citratpuffer ved pH-værdi 5,5. Cellerne blev dyrket natten over i 0,2% (vægt/volumen) natriumacetatmineralsaltmedium, og efter 9 seriefortynding anbragt i overfladen på en 0,4 millimolær natri umacetatmineralsalte-agar. Pladekulturerne (100) blev inkuberet i mal ingsdåser (kapacitet 2,5 liter), som hver indeholdt et prøveglas med 10 ml 10% (vægt/volumen) toluen i vand. Efter 5 tre dages inkubation ved 30°C blev 30 prospektive mutanter, dvs. kolonier med en diameter mindre end 0,5 mm, udstukket og gendyrket på en 0,2% (vægt/volumen) natriumpyruvatmineralsal-te-agar.
10 Hver mutant blev dyrket i en 250 ml Erlenmeyer kolbe, rystet i et vandbad ved 30°C indeholdende 50 ml 0,2% (vægt/volumen) na-triumpyruvatmineralsalte-opløsning med toluen i gasfasen som ved den fremgangsmåde, der er beskrevet af Gibson, Hensley, Yoshioka & Mabry i Biochemistry, 1970, bind 9, side 1626 -15 1630. Efter 20 timers vækst blev 1 ml prøver centrifugeret, og UV-spektret af de klare overliggende fraktioner blev undersøgt mellem 300 og 220 nanometer. To mutanter dannede overliggende væsker indeholdende en forbindelse med en maksimum-absorptionsevne ved 265 namometer på henholdsvis 72 og 65. Mutanten, 20 som havde absorptionsevnemaksimum på 72, betegnes af nemheds-grunde i det følgende som mutantstamme A.
Fremstilling af mutantstammer af Pseudomonas putida NCIB
11767 til anvendelse i den foreliggende opfindelse._ 25
Pseudomonas putida NCIB 11767 blev dyrket til tidlig eksponentiel fase i medium G. Cellerne blev høstet ved centrifugering og resuspenderet ved en koncentration på 0,2 g tør cellevægt pr. liter i 20 ml 25 millimolær citronsyre-natriumcitratpuf-30 fer, pH-værdi 5,5, indeholdende 1 mg N-methy1-N'-nitro-N-ni-trosoguanidin (NTG). Efter 45 minutter ved 30°C blev cellerne høstet ved centrifugering, vasket to gange med medium F og derpå dyrket natten over i medium F indeholdende 0,3% (vægt/ volumen) natriumpyruvat ved 30°C. Efter seriefortynding blev 35 celler anbragt i overfladen på en medium F-agar indeholdende 0,3 millimolær natriumpyruvat og inkuberet i 1 liter malingsdåser, der hver indeholdt 0,5 ml benzen, i et prøveglas. Efter
DK 164071 B
10 tre dage ved 30°C blev 144 prospekt!ve mutanter, dvs. kolonier på under 0,5 mm i diameter, udstukket og gendyrket på et 0,2% vægt/volumen natriumpyruvat, medium F-agar.
5 90 af disse mutanter blev undersøgt for produktionen ud fra benzen af en forbindelse, der absorberer ved 260 namometer, som tidligere beskrevet. En mutant, som gav en overliggende væske med en maksimum-absorptionsevne ved 260 nanometer på 37 betegnes af nemhedsgrunde i det følgende som mutantstamme B.
10
Fremstilling af konstitutive stammer ud fra mutant B.
Fremgangsmåden, der blev anvendt til mutagenisis, var som beskrevet tidligere. Efter behandling med NTG blev de vaskede 15 fortyndede celler anbragt i overfladen på medium F-agar + 10 millimolær natriumpyruvat. Efter to dage ved 30eC blev kolonier sprøjtet med en opløsning af catechol i vand (0,5 molær), og de, der blev gul/grønne efter 5 minutter, blev udvalgt. Ud fra i alt 1,8 x 10^ kolonier blev der udvalgt 35 gul/grønne 20 kolonier. Hver af disse blev dyrket natten over i 16 ml medium F + 0,3% (vægt/volumen) natriumpyruvat. Cellerne blev høstet og resuspenderet i 10 ml 25 mM kaliumphosphatpuffer, pH-værdi 7,8, indeholdende 0,4% (volumen/volumen) ethanol. Disse kulturer blev i 250 ml koniske kolber inkuberet natten over, hver i 25 nærværelse af 0,5 ml toluen som tidligere beskrevet. De over liggende fraktioner blev undersøgt efter dette tidsrum for forbindelser, der absorberer ved 265 nanometer. En konstitutiv mutant, der gav en absorptionsevne ved 265 nanometer på 250, blev udvalgt og betegnes af nemhedsgrunde i det følgende som 30 mutantstamme C.
Mutantstamme C blev dyrket ved 30°C i 20 ml medium G til tidlig eksponentiel-fase, og efter høstning blev cellerne resuspenderet i 40 ml 0,1 molær MgS04,7H20. En 5 ml prøve blev be-35 strålet med ultraviolet lys i en glas-Petriskål i 45 sekunder med en dosis på 1,6 pW/cm2 x 100. Cellerne blev derpå dyrket i mørke i fem 20 ml prøver af medium F + 10 millimolær natrium-pyruvat.
11
Efter to dage ved 30°C blev kulturer ser iefortyndet og anbragt i overfladen på medium F + 75 millimolær glucose og 1% (vægt/ volumen) vitaminfrie casaminosyrer (ex Difco Inc., Detroit, Michigan, USA) og inkuberet i yderligere to dage ved 30eC. Ko-5 lonier blev derpå sprøjtet med catechol som tidligere beskrevet, og der blev udvalgt gul/grønne kolonier. Af i alt 4 x 10^ fraskilte kolonier blev 10 udvalgt og dyrket natten over i 10 ml medium' F + 75 millimolær glucose og 1% (vægt/volumen) cas-aminosyrer ved 30eC. Celler blev høstet og resuspenderet som 10 ovenfor i phosphatpuffer + ethanol og bestrålet ved 70°C i nærværelse af 0,5 ml toluen som tidligere beskrevet. Der blev udvalgt en konstitutiv mutant, der var mindre påvirket end mutant C ved katabolitrepression, som gav en absorptionsevne ved 265 nanometer på 61,2. (Mutantstamme C gav under identiske be-15 tingelser en absorptionsevne på 15,6). Denne mutant betegnes i det følgende af nemhedsgrunde som mutantstamme D.
EKSEMPEL 1 20 Dette eksempel belyser fremstillingen af cis-1,2-dihydroxycyk-lohexa-3,5-dien ved hjælp af fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse.
40 liter medium B blev inoculeret i en omrørt forgæringsbehol-25 der med mutantstamme A til dannelse af en begyndelses-cel ledensitet på ca. 0,2 g celletørvægt pr. liter af mediet. Efter otte timers vækst blev der til kulturen sat en yderligere portion medium B med en hastighed på 2 liter pr. time i 4 timer. Toluen blev derpå ved en tilsætningshastighed på 16,5 g pr. 30 time sat til kulturen i 10¾ time. Cellerne blev derpå høstet ved en celledensitet på 5,5 g celletørvægt pr. liter.
En portion af cellerne blev resuspenderet i 5,0 liter medium C til opnåelse af en celledensitet på 25 g celletørvægt pr. li-35 ter. Ethanol blev kontinuerligt sat til cellesuspensionen med en hastighed på 6 g pr. time. Benzen blev sat til cellesuspensionen som en damp i luftstrømmen med en hastighed på 20 g pr.
DK 164071 B
12 time. Temperaturen blev holdt ved 30°C og en pH-værdi på 7,5.
Luft blev sat til den omrørte cellesuspension med en hastighed på 1,5 liter pr. minut. Efter 18 timers forløb blev forsøget afsluttet, da koncentrationen af cis-1,2-dihydroxycyklo-5 hexa-3,5-dien i den overliggende opløsning var 13 g pr. liter.
Den overliggende opløsing blev koncentreret ved rotationsind-dampning ved 60°C til et voluem på 1 liter. Den cykliske dihy-droxyforbindelse blev kontinuerligt ekstraheret med 500 ml me-10 thylenchlorid i 24 timer. Methylenchloridopløsningen blev koncentreret ved roterende afdampning ved 30eC. Tilsætning af pentan til koncentratet gav krystaller (30 g), som ved hjælp af smeltepunkt, kernemagnetisk resonans og massespektroskopi og UV viste sig at være cis-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien.
15 EKSEMPEL 2
Fremgangsmåden fra eksempel 1 blev gentaget bortset fra, at efter resuspendering af cellerne i medium C blev der tilsat 20 ethanol dertil til en koncentration på 0,3¾ vægt/volumen, og benzen og ethanol blev tilsat som en blanding (70:30) i stedet for særskilt ved en hastighed på 23 g blanding pr. time.
EKSEMPEL 3 25
Dette eksempel belyser fremstillingen af cis-1,2-dihydroxy-3-chlorcyklohexa-2,5-dien ved hjælp af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
30 Mutantstamme A blev dyrket som en port ionskul utur i medium A med 1¾ (vægt/volumen) pyrodruesyre som carbonkilde. Ved en celledensitet på 1 g celletørvægt pr. liter (efter 4 timers vækst) blev der sat toluen til kulturen i luftstrømmen (toluen-tilsætningshastighed på 3 g pr. time), og fermentationen 35 blev fortsat i yderligere 16 timer. Celler blev høstet ved en tørvægt på 1,5 g pr. liter.
13
Celler blev resuspenderet i 3,0 liter medium C til opnåelse af en celledensitet på 10 g celletørvægt pr. liter. Ethanol (15 g) blev sat til cellesuspensionen. Chlorbenzen blev sat til cellesuspensionen som en damp i luftstrømmen (1,2 liter pr.
5 minut) ved en hastighed på 4 g pr. time. Suspensionens pH-vær-di blev holdt på 7,5, og suspensionens temperatur blev holdt ved 30°C. Efter 24 timers forløb blev cellerne fjernet, og reaktionsblandingen blev koncentreret ved rotationsfordampning ved 60°C under reduceret tryk til et volumen på ca. 400 ml. 10 Koncentratet blev kontinuerligt ekstraheret med ether (250 ml) i 16 timer, og etheropløsningen blev derpå tørret over vandfri MgS04· Afdampning af opløsningsmidlet fra en filtreret prøve (50 ml) af denne opløsning gav et råt, fast stof (1,92 g), som blev omkrystalliseret fra toluen/pentan til opnåelse af cis-15 1,2-dihydroxy-3-chlorcyklohexa-3,5-dien som farveløse krystal ler (1,70 g), smeltepunkt 95 - 96°C. Proton-magnetisk reso-nanssepktrum (100 MHz) i deuteriumchloroform ved 29*C gav signaler ved 52,5 (2H, singlet, forsvinder ved rystning af opløsningen med D2O), 54,2 (IH, Jj.2 6,4 Hz, J1.6 11,4 Hz, H-l), 20 54,5 (IH, dublet, J2,6 6,4 Hz, H-2), 55,8-6,2 (3H, multiplet, H-4, H-5 og H-6); infrarødt spektrum (KBr skive) havde spidser ved 3280, 1640, 1580, 1380, 1340, 1310, 1280, 1170, 1090, 1040, 1000, 990, 930, 880, 835, 795, 670, 590 og 390 cm'1.
25 EKSEMPEL 4
Dette eksempel belyser fremstillingen af cis-l,2-dihydroxy-3-methylcyklohexa-3,5-dien ved hjælp af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
30
Fremgangsmåden fra eksempel 3 blev gentaget bortset fra, at toluen blev anvendt i stedet for chlorbenzen.
Koncentrationen af cis-1,2-di hydroxy-3-methyl cyklohexa-3,5-di-35 en i den fermenterende væske var 16 g pr. liter. Der blev ekstraheret kontinuerligt med diethylether. Til sætni ng af pentan til etheropløsningen gav krystaller (28 g), som ved hjælp af
DK 164071 B
14 smeltepunkt, kernemagnetisk resonans, I.R. og massespektrosko-pi viste sig at være cis-1,2-dihydroxy-3-methy1 cyklohexa-3,5-dien.
5 EKSEMPEL 5
Dette eksempel belyser anvendelsen af en konstitutiv mutant ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse.
10 Mutantstamme D blev inoculeret i 20 liter medium E til opnåelse af en begyndelsescelledensitet på 0,2 g tørvægt af celler/ liter. Temperaturen blev holdt ved 30°C og pH-værdien på 7,2. Forgæringsbeholderen blev omrørt med 500 omdrejningner pr. minut, og luft blev tilsat med en hastighed på 6 liter pr. mi-15 nut. Efter 16 timers forløb blev cellerne høstet ved centrifugering ved en celledensitet på 4 g celletørvægt/1iter.
En del af cellerne blev resuspenderet i 3 liter 25 mM kalium-phosphatpuffer, pH-værdi 7,6, indeholdende 1 g FeS04,7H20 og 20 12 ml ethanol. Celledensiteten var 9 g tørvægt/1i ter. Tempera turen blev holdt på 30°C og pH-værdien på 7,6 med natriumhydroxidopløsning. En 1 uft/oxygenblanding blev tilsat (1,0 li-ter/minut) til dannelse af en oxygenspænding på 10% mætning. Reaktoren blev omrørt ved 1400 omdrejninger pr. minut. Benzen 25 blev tilsat som en væske til reaktoren med en hastighed på 20 g/time, og yderligere 18 ml ethanol blev tilsat i 3 prøver med 2 timers mellemrum. Efter 7 timers forløb blev cellerne fjernet ved centrifugering for at efterlade 3 liter overliggende fraktion indeholdende 29 g/1 af cis-l,2-dihydroxycyklohexa- 30 3,5-dien.
EKSEMPEL 6
Dette eksempel belyser anvendelsen af en konstitutiv mutant 3® til fremstillingen af høje koncentrationer af cis-1,2-dihydro-cyklohexa-3,5-dien ved hjælp af fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse.
15
Mutantstamme C blev dyrket i 16 timer som en 20 liter portionskultur ved 30eC, pH-værdi 7,0, i medium D. Cellerne blev høstet ved en tørvægt på 3 g pr. liter og resuspenderet i 5 liter 25 mM kaliumphosphatpuffer, pH-værdi 7,8, indeholdende 5 0,5 FeS04,7H20. Luft blev tilsat med en hastighed på 1 liter pr. minut, reaktionsblandingen blev omrørt med 800 omdrejninger pr. minut, og temperaturen blev holdt ved 30°C. Benzen blev tilsat som en damp i luftstrømmen med en hastighed på 20 g pr. time i 20 timer, og i alt 40 g ethanol blev tilsat som 10 fire prøver. Efter 20 timers forløb indeholdt den overliggende væske i alt 123 g cis-l,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien i en koncentration på 24,6 g pr. liter.
EKSEMPEL 7 15
Mutantstamme D blev dyrket i 16 timer som en 20 liter portionskultur i medium E ved 30°C, pH-værdi 7,0. Efter høstning blev en portion af cellerne resuspenderet i 4 liter af det i eksempel 6 beskrevne medium til en celledensitet på 5 g tør-20 vægt pr. liter. Benzen, som en væske (12 g pr. time), og en kontinuerlig ethanoltilførsel (2,5 g pr. time) blev sat til kulturen. Efter 8 timers forløb blev cellerne fjernet og efterlod en overliggende væske indeholdende ci s-1,2-d ihydroxy-hexa-3,5-dien ved en koncentration baseret på den kendte eks-25 tinktionskoefficient for denne forbindelse (Nakajima et al., Chemische Berichte, 1959, bind 92, side 163) på 15 g pr. liter.
Til den overliggende væske blev der sat en yderligere portion 30 af celler til en celledensitet på 8 g celler pr. liter og forsøget fortsat. Efter yderligere 16 timers forløb indeholdt den overliggende væske cis-l,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien i en koncentration på 40 g pr. liter.
35

Claims (4)

1. Fremgangsmåde til fremstilling af en forbindelse, som omfatter en cis-l,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-ring, kendetegnet ved, at man 25 (1) dyrker en mutantstamme i et vækstmedium, der indeholder en egnet carbonkilde, hvilken mutantstamme a) omfatter et enzym til dannelse af en cyklisk dihydroxy- 30 forbindelse ud fra benzen eller toluen, b) ikke er i stand til at vokse på benzen eller toluen, og c) hidrører fra en stamme af Pseudomonas putida, som er i 35 stand til at vokse på benzen eller toluen, (2) efter vækstperioden tilfører en aromatisk forbindelse, som er en benzenforbindelse, naphthalen eller biphenyl og en energikilde til mutantstammen i et medium, som kun i ringe grad eller slet ikke understøtter mutantstammens vækst, og (3) lader mutantstammen omdanne den aromatiske forbindelse til 5 den tilsvarende c is-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-d ien-ring- forbi ndel se.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at nævnte stamme af Pseudomonas putida er Pseudomonas putida
10 NCIB 11767.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at enzymet, der katalyserer omdannelsen, er et konstitutivt enzym. 15
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at energikilden er ethanol. 20 25 30 35
DK443282A 1981-10-06 1982-10-06 Fremgangsmaade til fremstilling af en forbindelse indeholdende en cis-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-ring DK164071C (da)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB8130116 1981-10-06
GB8130116 1981-10-06

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK443282A DK443282A (da) 1983-04-07
DK164071B true DK164071B (da) 1992-05-04
DK164071C DK164071C (da) 1992-09-28

Family

ID=10524977

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK443282A DK164071C (da) 1981-10-06 1982-10-06 Fremgangsmaade til fremstilling af en forbindelse indeholdende en cis-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-ring

Country Status (14)

Country Link
US (2) US4508822A (da)
EP (1) EP0076606B1 (da)
JP (1) JPS5871891A (da)
AU (2) AU562987B2 (da)
CA (1) CA1193991A (da)
DE (1) DE3268971D1 (da)
DK (1) DK164071C (da)
ES (1) ES8400143A1 (da)
GR (1) GR76993B (da)
IE (1) IE53912B1 (da)
IL (1) IL67003A (da)
NO (1) NO160526C (da)
NZ (1) NZ202075A (da)
ZA (1) ZA827333B (da)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8408953D0 (en) * 1984-04-06 1984-05-16 Ici Plc Polymer coatings
GB8614925D0 (en) * 1986-06-19 1986-07-23 Ici Plc Cyclic dihydroxy compounds
US4876200A (en) * 1986-07-08 1989-10-24 Shell Oil Company New strains of pseudomonas putida
EP0253438B1 (en) * 1986-07-08 1992-12-23 Shell Internationale Researchmaatschappij B.V. New strains of pseudomonas putida and their use
EP0252568B1 (en) * 1986-07-08 1993-01-27 Shell Internationale Researchmaatschappij B.V. New organofluorine compounds and a biochemical process for their preparation
US4863861A (en) * 1986-07-08 1989-09-05 Shell Oil Company Biochemical process to produce catechol or 1,2-dihydroxycyclohexa-3,5-diene compound(s)
GB8616614D0 (en) * 1986-07-08 1986-08-13 Shell Int Research Organofluorine compounds
GB8627711D0 (en) * 1986-11-20 1986-12-17 Shell Int Research Microbial preparation of catechols
GB8700462D0 (en) * 1987-01-09 1987-02-11 Shell Int Research Alkene derivatives
JP2562139B2 (ja) * 1987-03-30 1996-12-11 新技術事業団 微生物の培養法
GB8708517D0 (en) * 1987-04-09 1987-05-13 Shell Int Research Preparation of fluorophenols
GB8823977D0 (en) * 1988-10-13 1988-11-23 Ici Plc Cyclic dihydroxy compounds
HU208421B (en) * 1988-10-18 1993-10-28 Pfizer Process for producing starting materials for producing 3-acyl-2-oxindol-carboxamides ofantiphlogistic activity
GB8900854D0 (en) * 1989-01-16 1989-03-08 Ici Plc Separation of a compound comprising a 1,2-dihydroxy-cyclohexa-3,5-diene ring
US4894337A (en) * 1989-01-17 1990-01-16 Board Of Trustees Operating Michigan State University Process for the bioproduction of cyclic hydroxides
JPH07503234A (ja) * 1991-10-31 1995-04-06 バイオ−テクニカル・リソーシズ ベンゾシクロブテンのシス−ジヒドロジオールおよびフェノール誘導体の微生物による生産
WO1993009240A1 (en) * 1991-10-31 1993-05-13 Bio-Technical Resources Microbial production of cis-dihydrodiol and phenol derivatives of benzocyclobutene
US5420361A (en) * 1992-02-05 1995-05-30 Bio-Technical Resources Formulation of and dehydration of hydroxylated diphenyl acetylenes
WO1995030764A1 (en) * 1994-05-10 1995-11-16 Bio-Technical Resources Lp Formation of and dehydraton of hydroxylated diphenylacetylenes
US5551560A (en) * 1994-06-30 1996-09-03 Alpha Enterprises, Inc. Container for compact disc and jewel box
US5858737A (en) * 1995-06-20 1999-01-12 Merck & Co., Inc. Conversion of indene to (1S)-amino-(2R)-indanol free of any stereoisomer, by combination of dioxygenase bioconversion and chemical steps
US5824540A (en) * 1995-06-20 1998-10-20 Merck & Co., Inc. Pseudomonas putida strain with dioxygenase activity
WO2000037480A1 (en) 1998-10-26 2000-06-29 University Of Iowa Research Foundation Novel naphthalene dioxygenase and methods for their use
US7407195B2 (en) * 2004-04-14 2008-08-05 William Berson Label for receiving indicia having variable spectral emissivity values

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3326770A (en) * 1963-12-03 1967-06-20 Mobil Oil Corp Growing microorganisms on volatile hydrocarbons
US4259444A (en) * 1972-06-07 1981-03-31 General Electric Company Microorganisms having multiple compatible degradative energy-generating plasmids and preparation thereof

Also Published As

Publication number Publication date
GR76993B (da) 1984-09-04
NZ202075A (en) 1986-04-11
IE53912B1 (en) 1989-04-12
DK164071C (da) 1992-09-28
NO160526C (no) 1989-04-26
ZA827333B (en) 1984-02-29
US4508822A (en) 1985-04-02
JPH0542417B2 (da) 1993-06-28
CA1193991A (en) 1985-09-24
NO823326L (no) 1983-04-07
DE3268971D1 (en) 1986-03-20
EP0076606A1 (en) 1983-04-13
AU591936B2 (en) 1989-12-21
ES516275A0 (es) 1983-10-16
EP0076606B1 (en) 1986-02-05
AU6411086A (en) 1987-02-12
AU562987B2 (en) 1987-06-25
DK443282A (da) 1983-04-07
IE822345L (en) 1983-04-06
NO160526B (no) 1989-01-16
AU8913182A (en) 1983-04-14
ES8400143A1 (es) 1983-10-16
IL67003A (en) 1987-03-31
IL67003A0 (en) 1983-02-23
US5036009A (en) 1991-07-30
JPS5871891A (ja) 1983-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK164071B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af en forbindelse indeholdende en cis-1,2-dihydroxycyklohexa-3,5-dien-ring
DK171869B1 (da) Fremgangsmåde til fremstilling af 2-keto-L-gulonsyre samt biologisk ren mikroorganismekultur til anvendelse ved fremgangsmåden
CN113430151B (zh) 一株谷氨酸棒杆菌及其在发酵生产l-缬氨酸中的应用
NO159668B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av butanol ved fermentering av karbohydrater.
DK168490B1 (da) Aureobasidium sp.-mikroorganismer, fremgangsmåde til opnåelse af disse og fremgangsmåde til fremstilling af erythritol ved anvendelse af disse
US4740638A (en) Cyclic hydroxy compounds
CN109266578B (zh) 大肠埃希氏菌ACThr1032及其在发酵生产L-苏氨酸中的应用
US4927759A (en) New strains of Pseudomonas putida and their use
US4863861A (en) Biochemical process to produce catechol or 1,2-dihydroxycyclohexa-3,5-diene compound(s)
US4048013A (en) Process for producing single-cell protein from methanol using methylomonas sp. DSM 580
JPS58158189A (ja) β−ヒドロキシプロピオン酸の製造法
EP0364152B1 (en) Cyclic dihydroxy compounds
Trudgill et al. D-glucarate catabolism by pseudomonadaceae and enterobacteriaceae
SU671738A3 (ru) Способ получени биомассы микроорганизмов
KR102197825B1 (ko) 그라미시딘 s의 생산 및 정제방법
EP0253438B1 (en) New strains of pseudomonas putida and their use
US3676299A (en) Microbial production of novel hydroxyphenyl ketobutyric acids
US3847747A (en) Process for producing chloramphenicol analogs
US2938835A (en) Production of mutants of the genus penicillium
JPH03247272A (ja) 新規微生物
JPH0380091A (ja) 新規微生物及び該微生物を用いた２，６―ナフタレンジカルボン酸の製造法
JPH0378104B2 (da)
JPS63216473A (ja) 新規微生物
GB2355270A (en) Rhodococcus opacus mutant and its use in the preparation of cis-dihydrodiols
JPH02163090A (ja) 芳香族化合物シス−ジヒドロキシ誘導体の製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
PBP Patent lapsed