NO159668B - Fremgangsmaate for fremstilling av butanol ved fermentering av karbohydrater. - Google Patents

Fremgangsmaate for fremstilling av butanol ved fermentering av karbohydrater. Download PDF

Info

Publication number
NO159668B
NO159668B NO834221A NO834221A NO159668B NO 159668 B NO159668 B NO 159668B NO 834221 A NO834221 A NO 834221A NO 834221 A NO834221 A NO 834221A NO 159668 B NO159668 B NO 159668B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
fermentation
butanol
continuous
inoculum
stage
Prior art date
Application number
NO834221A
Other languages
English (en)
Other versions
NO834221L (no
NO159668C (no
Inventor
Robert E Heady
Jeffrey R Frankiewicz
Original Assignee
Michigan Biotech Inst
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Michigan Biotech Inst filed Critical Michigan Biotech Inst
Publication of NO834221L publication Critical patent/NO834221L/no
Publication of NO159668B publication Critical patent/NO159668B/no
Publication of NO159668C publication Critical patent/NO159668C/no

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/02Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
    • C12P7/04Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
    • C12P7/16Butanols
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02EREDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10Biofuels, e.g. bio-diesel
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10STECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215Microorganisms
    • Y10S435/822Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/842Clostridium

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Fremgangsmåte for kontinuerlig fremstilling av butanol ved fermentering av karbohydrater med C. acetobutylicum. Denne fremgangsmåte kombinerer kontinuerlig inokulumfremstilling ved en høy fortynningshastighet og til-bakeføring av fermenteringsvæsken gjennom et materiale som adsorberer butanol, hvorved det bibeholdes en kraftig celle-populasjon i fermenteringsreaktoren i utstrakte tidsperioder.

Description

Foreliggende oppfinnelse gjelder en fremgangsmåte for fremstilling av butanol ved hjelp av en kontinuerlig fermente-ringsfremgangsmåte.
Fermenteringen av karbohydrater for å danne butanol og
aceton ved hjelp av Clostridium acetobutylicum (heretter forkortet C. acetobutylicum) er beskrevet i US-patentskrift nr. 1 315 585. I mange år ble denne fremgangsmåte brukt for fremstilling av aceton og butanol, og en viss mengde etylalkohol ble oppnådd som et biprodukt.
Senere ble den mikrobielle fremgangsmåten erstattet av kjemiske fremgangsmåter som gir samme produkter ved bruk av billige fossile brensel-råmaterialer. Den gradvise uttømming av fossile petroleum-brensler med den resulterende økning i prisen på petrokjemiske råvarer, har imidlertid gjenopplivet interessen for fermenteringsreaksjonen som anvender seg av karbohydrater,
som er råmateriale som kan fornyes.
Et problem som oppstod i den tidligere kommersielle fremstillingen av butanol ved hjelp av fermenteringsfremgangs-måten var den lange tiden som forløp før mikro-organismen begynte å produsere vesentlige mengder butanol. Disse fremgangsmåter anvendte typisk en utgangskultur som ble lagret som sporer. For å starte fermentering ble sporene plassert i et vandig medium inneholdende forskjellige nsringsstoffer, underkastet et varmesjokk og så ført gjennom tre vekststadier i kar av økende størrelse før de ble brukt til å inokulere fermenteringstanken. Denne fremgangsmåte krevde ca. 3 dager for utvikling av inokulat pluss ytterligere 2 til 3 dager for å fullføre fermenteringen.
Et annet problem med satsfermenteringer var ustabiliteten
til mikro-organismen i butanol-konsentrasjoner over ca. 1
vekt%. Cellene har tendens til å dø raskt etter at konsentra-sjonene av produktet når dette nivå. Således kunne det bare oppnås lave konsentrasjoner av produkt i fenttenteringsvæsken. En slik fremgangsmåte krever en stor fermenteringskapasitet for å fremstille tilstrekkelig store menger løsningsmiddel, og det er kostbart å utvinne løsningsmidlene fra fermenteringsvæsken på grunn av deres lave konsentrasjoner.
Forskjellige forskere har foreslått at dersom butanol-fermenteringen ble gjennomført i en kontinuerlig fremgangsmåte, kunne noen av vanskelighetene som er forbundet med satsfremgangs-måten overvinnes. En slik fremgangsmåte ville gjøre mer effektiv bruk av fermenteringskarene ved å eliminere den uproduktive tiden mellom satsene når fermenteringskaret måtte tømmes, renses, fylles, steriliseres og avkjøles. Tidligere har slike fremgangsmåter vært av liten brukbarhet på grunn av ustabile kulturer, forurensningsproblemer eller lav volumetrisk produktivitet av butanol.
Uttrykket "volumetrisk produktivitet" slik det brukes i denne beskrivelse, refererer til mengde produkt som fremstilles i en kontinuerlig fermentering pr. volumenhet fermenteringsvæske pr. tids-enhet. Den angis vanligvis i gram pr. liter-time, forkortet g/1-time.
En rapport om kontinuerlige butanol-fermenteringsforsøk er angitt av Dyr, et al, i: Continuous Culture bf Microorganisms (Praha symposium), sider 210-227, Prague, Czechoslovakia Academy of Sciences (1958). Ved hjelp, av et flertrinns-fermenteringssystem, og ved justering av fortynningshastigheten, var han i stand til å overvinne noen av problemene'med kultur-ustabilitet, men den høyeste konsentrasjon'av butanol. som. er angitt, indikerte en volumetrisk produktivitet på bare ca...0,24 -g/l-time for syste-met.
En annen fremgangsmåte som er foreslått for å unngå proble-met med ustabile kulturer i forbindelse med kontinuerlige fermen-teringer er bruk av sporer eller ikke-voksende celler av mikro-organismen immobilisert i en gel. Haggstrom, et al, internasjonal søknad PCT/SE80/00231. Selvom denne teknikken tilveiebringer en fremgangsmåte for gjennomføring av en kontinuerlig fermentering i forholdsvis lang tid, bruker den et kostbart materiale og fremgangsmåte for immobilisering av mikroorganismen. Den rapporterte volumetriske produktiviteten av butanol ved hjelp av denne fremgangsmåten er ca. 0,33 g/l-time.
Det er nå oppdaget en fremgangsmåte som unngår problemene
som forekommer i sats-fremgangsmåten og som tillater at fermenteringen kan utføres i en kontinuerlig fremgangsmåte i et antall dager uten ødeleggelse av kulturen. I tillegg kan denne fremgangs-
måte utføres ved bruk av råmaterialer som er lett tilgjengelige fra mais-våtmalingsindustrien, og den danner butanol med en meget større volumetrisk produktivitet. Videre tilveiebringer den som en intergrert del av fremgangsmåten et økonomisk middel for konsentrering og gjenvinning av butanolen som fremstilles ved fermenteringen.
Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes en fremgangsmåte for fremstilling av butanol ved kontinuerlig fermentering av karbohydrater med stammen C. acetobutylicum ATCC 4259. Fremgangsmåten utføres ved pH 4,5-5,5 og ved en temperatur på 34-40°C, idet inokulat fra mikroorganismestammen fremstilles kontinuerlig i en separat reaktor; inokulatet tilføres kontinuerlig til fermenteringsmediet; butanol adsorberes på granulært karbon; og butanolen isoleres ved desorbering av den fra det aktiverte karbon.
Fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen er karakterisert ved at inokulatet blir kontinuerlig fremstilt ved en fortynningshastighet på fra 0,2 pr. time til 0,5 pr. time og fermenteringsmediet føres gjennom det granulære aktiverte karbon i en hastighet som er tilstrekkelig til å opprettholde en konsentrasjon av butanol i fermenteringsmediet som er mindre enn ca. 1 vekt%.
Stammen C. acetobutylicum, ATCC 4259 er tilgjengelig fra American Type Culture Colleetion, Rockville, Maryland. En foretrukken stamme for anvendelse i oppfinnelsen er den asporogene stammen C. acetobutylicum, ATCC 39236, som er beskrevet i detalj i den samtidig innleverte norske patentsøknad nr. 83.4220, hvis beskrivelse i sin helhet her inntas som referanse.
Karbohydratet som anvendes ved utførelsen av foreliggende oppfinnelse kan være et hvilket som helst karbohydrat som fermenteres av den stamme av C. acetobutylicum som brukes.
Disse karbohydratkilder omfatter solubiliserte stivelser og sukkersiruper såvel som glukose eller sukrose i ren eller rå form. Fermenteringsmediet skal også inneholde næringsstoffer og andre vekstfaktorer som kreves for vekst og reproduksjon av den anvendte mikroorganismen.
Når de anvendte stammer av C. acetobutylicum er ATCC 4259 eller ATCC 39236, omfatter et passende medium for utførelse av den kontinuerlige fremgangsmåten ifølge oppfinnelsen en vandig løsning av et stivelsehydrolysat med lav D.E. (dekstrose-ekvivalent) til hvilket er tilsatt en liten mengde (fra ca. 0,5 til ca. 2 vekt%, på tørrstoffbasis) maisstøpevæske. Stivelsehydrolysater med lav D.E. (ca. 5 til ca. 20 D.E.) fremstilt ved den delvise hydrolyse av stivelse, er lett tilgjengelig fra industrien for maling av mais. Likeledes er maisstøpevæske, som fremstilles når mais støpes i en fortynnet løsning av svoveldioksyd, tilgjengelig fra industrien for våtmaling av mais. Når mediet som anvendes for utførelse av den kontinuerlige fermenteringen omfatter bare et stivelsehydrolysat med lav D.E. og maisstøpevæske, økes veksten av mikroorganismen ved periodisk tilsetning av mais-gluten-oppslemming til fermenteringskaret. Denne oppslemming såvel som de to andre ingredienser er lett tilgjengelige råmaterialer, som oppnåes fra våtmaling av mais og således utgjør en kilde for karbohydrat og alle andre næringsstoffer som behøves for vekst av mikroorganismen, som er økonomisk og kan fornyes.
Fermeriteringsfremgangsmåten ifølge oppfinnelsen startes ved
å inokulere et sterilt medium i en inokulumproduserende reaktor med en startkultur av en stamme av C. acetobutylicum. Fermenteringen får fortsette inntil det er utviklet en god vekst av cellene. Reaktoren virker så som en kontinuerlig reaktor idet sterilt medium strømmer inn i reaktoren og medium pluss celler strømmer ut ,av reaktoren i en fermenteringsreaktor,. På denne måten produseres et in<->Vulum som mates kontinuerlig til fermenteringsreaktoren hvor butanolfrearstillingen finner sted.
Den kontinuerlige inokulum-produserende reaktoren fungerer ved en fortynningshastighet som hindrer oppsamling av løsnings-midler i mediet og produserer kraftige friske celler av.kulturen med liten eksponering for butanol. I beskrivelsen i denne oppfinnelsen betegner uttrykket "fortynningshastighet" den verdi som oppnås ved å dividere strømningshastigheten for mediet gjennom reaktoren i volumenheter pr. time med arbeidsvolumet for reaktoren målt i de samme volumenheter. Den har dimensjonen pr. time.
Ved å bruke en fortynningshastighet i den inokulum-produserende reaktor på fra ca. 0,2 til ca. 0,5 pr. time dannes det kontinuerlig friske celler med liten eksponering for butanol som føres fra reaksjonskaret til fermenteringsreaktoren hvor løsnings-middelproduksjonen foregår. Omsetningen i fermenteringsreaktoren foregår også kontinuerlig; men med en meget lavere fortynningshastighet enn i det karet der det produseres inokulum.
Den riktige fortynningshastigheten i fermenteringsreaktoren avhenger av konsentrasjonen av karbohydrat i fermenteringsmediet og den hastighet med hvilken mediet føres gjennom det butanol-absorberende materialet. For å oppnå en effektiv fermentering justeres fortynnings- og tilbakeførings-hastighetene slik at i det vesentlige alt karbohydrat forbrukes. I eksemplene ble fortynningshastigheten holdt konstant på 0,03 pr. time og tilb?.kef ørings-hastigheten ble variert med konsentrasjonen av karbohydrat i mediet.
Det er mulig å gjennomføre den kontinuerlige inokulumfren-stillingen i to eller flere kontinuerlige reaksjonskar som arbeider i serie. Den avgjørende betingelse er at hvert av disse inokulum-produserende kar må arbeide ved en fortynningshastighet slik at det fremstilles friske, kraftig voksende celler på kontinuerlig måte med liten sksponering for butanol.
Inokulumdannelse og løsningsmiddelfremstilling utføres ved
en temperatur på fra 34 til 40°C og ved en pH-verdi på
fra 4,5 til 5,5. Reaksjonene utføres under anaerobiske betingelser ved bruk av medium som er sterilisert ved hjelp av varme eller andre fremgangsmåter som er kjente på fermenterings-området.
Den kontinuerlige fermenteringsreaktoren forbindes til en anordning, som for eksempel en kolonne som inneholder materiale som absorberer butanol. Væske fra fermenteringsreaktoren føres gjennom denne anordning og tilbake til reaktoren på en kontinuerlig basis for å fjerne en stor del av butanolen fra fermenteringsmediet. Fermenteringsvæsken føres gjennom det absorberende materiale med en slik hastighet at butanolkonsentrasjonen i fermenteringsreaktoren holdes på et nivå som er under ca. 1 vekt%, fortrinnsvis under ca. 0,8 vekt%.
Det absorberende materiale som anvendes i anordningen som forbindes med fermenteringsreaktoren, kan være et hvilket som helst materiale som absorberer butanol uten å innvirke på fermenteringsreaksjonen. Tidligere forskere har bemerket at aktivert karbon absorberer butanol. I US-patentskrift nr. 2 474 170 ble dette materiale brukt for å fjerne løsningsmidler fra en filtrert væske etter fermentering. Yamazaki. et al, Nippon Nogei Kagaku Kaishi, 32, 758 - 770 (1958), angav at innføring a<y> en pose med aktivert karbon i en satsfermentering kunne anvendes for å øke omdannelsen av sukker til butanol. En ny rapport fra Massachusetts Institute of Technology (Alcohol Fuels Process R/D Newsletter, sider 38 - 39, vinter 1980) konstaterer imidlertid at karbon innvirker på fermenteringen og er uønsket for dette formål.
Det er funnet at granulært, aktivert karbon er et passende butanol-adsorberingsmiddel i foreliggende fremgangsmåte. Andre mulige adsorberingsmidler er molekylsikter og adsorberende harpik-ser. Et spesielt egnet adsorberingsmiddel er det aktiverte karbon "PCB Pittsburgh" med størrelse fra 0,59 til 1,68 mm, tilgjengelig fra Calgon Corporation, Pittsburgh, Pennsylvania.
En periodisk omsnuing av strømningsretningen for fermenteringsvæsken gjennom anordningen som inneholder det adsorberende materiale, medvirker til å bibeholde en god strømning gjennom anordningen. På denne måte tilbakeføres de fleste av de celler som er oppsamlet i det adsorberende materialet, til fermenteringsreaktoren.
Ved å føre fermenteringsvæsken gjennom det adsorberende materialet fjernes butanol og andre substanser som er toksiske for C. acetobutylicum. På denne måten fremmes kraftig fermentering med nesten fullstendig fermentering av karbohydrat selv når det er tilstede i konsentrasjoner så høye som 15% i mediet.
Bruken av et adsorberende materiale, som for eksempel aktivert karbon, for å fjerne butanol og andre løsningsmidler fra fermenteringsvæsken innebærer også en økonomisk metode for gjenvinning av butanolen. Når karbonet mettes med butanol, kan butanolen desorberes fra karbonet ved hjelp av aceton eller andre damper slik det er beskrevet i US-søknad nr. 327 849, innlevert 7. desember 1981, hvis beskrivelse i sin helhet inntas her som referanse.
Utløp fra den kontinuerlige fermenteringsreaktoren, som inneholder små mengder butanol og andre løsningsmidler, kan behand-les ved hjelp av konvensjonelle midler for gjenvinning av disse forbindelser.
De eksempler som følger beskriver utførelsesformene av foreliggende oppfinnelse ytterligere. Alle deler er angitt i vekt og alle prosenter er i vekt om ikke annet spesielt angis.
Løsningsmiddelkonsentrasjoner ble bestemt ved bruk av væske-kromatografi med høy ytelse (HPLC). Bestanddelene ble analysert kromatografisk ved eluering med 0,006 N H2S04 fra en kationveksler-harpiks i hydrogenformen. De eluerte bestanddelene ble påvist ved hjelp av et differentialrefraktometer, avsatt på et registre-ringsapparat og bestemt kvantitativt ved hjelp av en elektronisk integrator. Arealet under kurven som representerer konsentrasjonen av hver bestanddel, angis som prosent av totalarealet. Den generelle fremgangsmåte er den som er angitt i "Analysis of Carbohydrate Mixtures by Liquid Chromatography", Am. Soc. Brew. Chem. Proe, 1973, sider 43 - 46. Separeringene ble utført på en 30 centimeters HPX-87-kolonne i hydrogenformen, tilgjengelig fra Bio-Rad Laboratories, Richmond, California.
Gjenværende totalt karbohydrat (RTC) i fermenteringsmediet ble målt ved hjelp av fenol/svovelsyre-metoden. Denne er beskrevet i detalj av Dubois, et al, "Colorimetric Method Determination of Sugars and Related Substances", Anal. Chem., 28, 350 - 356
(1956).
Eksempel 1
En kultur av C. acetobutylicum, ATCC 4259, ble oppnådd fra American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, og holdt
i sporetilstand på en blanding av jord, sand og kalsiumkarbonat. Inokulum for start av en kontinuerlig dyrking ble utviklet i en 125 ml's Erlenmeyer kimkolbe inneholdende 75 ml av et vandig medium bestående av 6% tørrbasis av et stivelsehydrolysat på 10 D.E. (tilgjengelig fra Grain Processing Company, Muscatine, Iowa, som "Maltrin M-100") og 0,75% på tørrbasis av maisstøpevæske tilgjengelig fra Corn Products Unit of CPC International Inc., Englewood Cliffs, New Jersey, som "Code E801". Mediets pH ble justert til 6,6 med 4 N NaOH-løsning før det ble sterilisert ved oppvarming i en autoklav ved 121°C i 20 minutter. Det avkjølte, sterile medium i kimkolben ble inokulert med 5 ml av en varmebe-handlet suspensjon av sporer av kulturen inneholdt i det samme medium. Varmebehandlingen ble gjennomført ved først å suspen-dere ca. 0,5 g av en jord-sporesuspensjon i 10 ml av kimmediet. Suspensjonen ble så plassert i kokende vann i 90 sekunder og raskt avkjølt til romstemperatur. Kimkolben med det inokulerte medium ble inkubert i et anaerobisk kammer i 21 timer ved 35°C.
En kontinuerlig fermentering ble gjennomført i et tre-trinns fermenteringssystem under anaerobe betingelser. Fermenteringskarene i det første og det andre trinnet var standard 2-liters kar av typen New Brunswick Bioflow, Model C-30 med magnetrørere i bunnen. Fermenteringskaret for det tredje trinnet var et 14-liters kar med en magnetisk rører i bunnen. Arbeidsvolumene var henholdsvis 725 ml, 1450 ml og 9,5 liter i de tre fermenteringskarene. Hvert fermenteringskar ble omrørt med en hastighet på 200 omdreininger pr. minutt. Det vandige medium som ble brukt for fermenteringene inneholdt 7,5 vekt% på tørr basis av 10 D.E. stivelsehydrolysat og 0,75 vekt% på tørr basis av maisstøpevæske justert til en pH-verdi på 5,0 - 5,1 med4 N NaOH. Fermenteringen ble startet ved å inokulere fermenteringskaret for det første trinnet med 75 ml av startkulturen etter først å fylle det med vekstmedium gjennomblåst med CC^ (anaerobisk grad) i 30 minutter og justert til pH på 6,1 til 6,2 med konsentrert ammoniumhydroksyd. Fermenteringskaret for det første trinnet ble holdt ved 37°C i 4 timer etter inokulering før mediestrømmen inn i og ut av fermen-teringskaret ble begynt. Hele blandingen som strømmet fra fermenteringskaret i det første trinnet ble ført inn i fermenteringskaret for det andre trinnet som på forhånd var fylt med 850 ml sterilt medium av samme sammensetning som det som ble tilsatt til det første fermenteringskaret. Nytt sterilt medium ble også tilsatt til fermenteringskaret i det andre trinnet med samme hastighet som utløpet fra fermenteringskaret for det første trinnet ble ført inn i det. Utløpet fra fermenteringskaret for det andre trinnet ble ført inn i fermenteringskarene for det tredje trinnet. Temperaturen i alle fermenteringskarene ble regulert til 37 +1 C. pH i fermenteringskaret for det første trinnet ble regulert ved tilsetning av ammoniumhydroksyd slik at pH ikke kom under 5,0 og pH i fermenteringskaret for det andre trinnet ble regulert ved tilsetning av 4 N NaOH slik at dets pH ikke kom under 5,0. pH ble ikke regulert i fermenteringskarene for det tredje trinnet. Når fermenteringskarene i det tredje trinnet ble fylt til det ønskede nivå (9,5 liter) med utløp fra fermenteringskaret for det andre trinnet, fikk dyrkningsvæsken lov å strømme fra dem med samme hastighet som den kom inn i det fra fermenteringskaret for det andre trinnet. Strømningshastighetene ble justert slik at fortynningshastighetene i fermenteringskarene for det første og det andre trinnet (som fremstilte inokulum) var ca. 0,45 pr. time, og i fermenteringskarene for det tredje trinnet var ca. 0,031 pr. time. Disse strømningshastigheter gjorde det mulig for fermenteringskaret i det andre trinnet å mate to fermenteringskar i det tredje trinnet.
Mediet i et fermenteringskar i det tredje trinnet ble supplert én gang hver 24. time ved tilsetning av en 10%-ig vandig oppslemming inneholdende 25 g på tørr basis av maisgluten. Denne oppslemming ble justert til pH 5,2 med 4 N NaOH og sterilisert før tilsetningen.
Ved periodiske intervaller ble prøver av væske fra begge fermenteringskarene i det tredje trinnet sentrifugert for å fjerne faststoffer og de overstående væsker ble analysert. De resultater som er angitt i tabell I, viser at butanol fremstilles i begge fermenteringskar og at fermenteringskaret som inneholder tilsatt gluten inneholder noe mindre gjenværende totalkarbohydrat.
Da den kontinuerlige fermenteringen hadde foregått i 146 timer, ble en del av fermenteringsvæsken fra fermenteringskaret i det tredje trinnet inneholdende tilsatt gluten ført oppover gjennom ca. 2,1 kg aktivert karbon som ble inneholdt i en sylind-risk kolonne av rustfritt stål som var 122 cm lang og hadde en indre diameter på 7,29 cm. Passeringen foregikk med en hastighet på ca. 720 ml pr. time gjennom kolonnen, idet utløpet fra toppen av kolonnen ble tilbakeført til fermenteringskaret med samme hastighet. Det karbon som ble brukt i kolonnen var aktivert "PCB Pittsburgh"-karbon, med størrelse fra 0,59 til 1,68 mm, tilgjengelig fra Calgon Corporation, Pittsburgh, Pennsylvania. Hver andre time ble strømretningen til fermenteringsvæsken gjennom karbonkolonnen omsnudd i 12 minutter og kjørt med en hastighet på 50 ml pr. minutt for å tilbakeføre til fermenteringskaret alle celler som var oppsamlet på bunnen av kolonnen. Da karbonet i kolonnen ble mettet med butanol, ble kolonnen erstattet med en kolonne som inneholdt nytt karbon. Det andre fermenteringskaret for det tredje trinnet arbeidet uten en karbonkolonne. Test-resultatene er vist i tabell II, og den tiden som er angitt er den tid som er forløpet fra starten av den opprinnelige fermenteringen.
Disse resultater viser at tilbakeføring av fermenteringsvæsken gjennom en karbonkolonne er effektiv når det gjelder å redusere butanol-konsentrasjonen i væsken. De viser videre at fermenteringen i fermenteringskaret hvor væsken føres gjennom karbonkolonnen, utnytter karbohydratet mere fullstendig enn fermenteringen i fermenteringskaret uten karbonkolonne, selv om begge fermenteringskarene arbeider ved samme'fortynningshastighet.
Den kontinuerlige fermenteringen ble gjennomført med hell i 40 dager. Da karbohydratkonsentrasjonen i mediet som ble matet til fermenteringskarene, ble øket til 10 og 15% ble strømnings-hastigheten gjennom karbon-kolonnen øket til henholdsvis 840 og 1500 ml/time. Ved en konsentrasjon av karbohydrat på 15% forbrukte fermenteringen som var forbundet med karbon-kolonnen over 90% av karbohydratet, hvilket indikerer en volumetrisk produktivitet på ca. 0,9 g/l-time, mens fermentering uten denne kolonne forbrukte bare ca. 30% av karbohydratet med en volumetrisk produktivitet på 0,3 g/l-time.
Eksempel 2
Den generelle fremgangsmåten fra eksempel 1 ble gjentatt bortsett fra at den kontinuerlige fermenteringen ble gjennomført
i et to-trinns fermenteringssystem og konsentrasjonen av stivelsehydrolysat i mediet ble øket til 10%. Fermenteringskaret for det første trinnet var et standard 2-liters kar av typen New Brunswick Bioflow, Model C-30 som hadde et arbeidsvolum på 1450 ml og fermenteringskaret i det andre trinnet var et 14-liters kar med et
arbeidsvolum på 9,5 liter. Fortynningshastigheten i fermenteringskaret for det første trinnet ble holdt ved 0,23 pr. time, mens fortynningshastigheten i det andre trinnet var 0,031 pr. time.
En 10%-ig mais-gluten-oppslemming ble tilsatt til fermenteringskaret for det andre trinnet med en hastighet på ca. 20 ml/time. Fermenteringsvæsken i fermenteringskaret for det første trinnet ble ført gjennom en karbonkolonne lik den som er beskrevet i eksempel 1. Ca. 900 ml/time ble ført inn i kolonnen, 600 ml/time fra kolonnen ble tilbakeført til fermenteringskaret og resten ble kastet. Butanolkonsentrasjonen i fermenteringskaret for det første trinnet oversteg aldri 0,05 g/100 ml. Det var meget lite butanol i utløpet fra karbonkolonnen. Analyser av den filtrerte væsken fra fermenteringskaret for det andre trinnet er angitt i tabell III og viser at den kontinuerlige fremgangsmåten kan foregå ved bruk av bare ett trinn for utvikling av inokulum.
Det er således tydelig at det ifølge oppfinnelsen er til-veiebrakt en forbedret kontinuerlig fremgangsmåte for fremstilling av butanol ved en fermenteringsreaksjon. Mens oppfinnelsen er beskrevet i forbindelse med spesielle utførelsesformer derav, er det klart at mange alternativer, modifikasjoner og variasjoner vil være selvklare for fagmannen i lys av den foranstående beskrivelse. Den er således ment å omfatte alle slike alternativer, modifikasjoner og variasjoner som angitt innenfor ånd og område av de medfølgende krav.

Claims (2)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av butanol ved kontinuerlig fermentering av karbohydrater med stammen C. acetobutylicum ATCC 4259 ved en pH på fra 4,5 til 5,5 og ved en temperatur på fra 34°C til 40°C ved kontinuerlig fremstilling av inokulat fra mikroorganismestammen i en separat reaktor; kontinuerlig tilførsel av inokulatet til fermenteringsmediet; adsorbering av butanol på granulaert karbon; og isolering av butanolen ved desorbering av den fra det aktiverte karbon, karakterisert ved at inokulatet blir kontinuerlig fremstilt ved en fortynningshastighet på fra 0,2 pr. time til 0,5 pr. time og fermenteringsmediet føres gjennom det granulære aktiverte karbon i en hastighet som er tilstrekkelig til å opprettholde en konsentrasjon av butanol i fermenteringsmediet som er mindre enn ca. 1 vekt%.
2. Fremgangsmåte som angitt i krav 1, karakterisert ved at inokulatfremstillingstrinnet utføres i to kontinuerlige reaksjonskar som opereres i serie.
NO834221A 1982-11-18 1983-11-17 Fremgangsm te for fremstilling av butanol ved ferme av karbohydrater. NO159668C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/442,806 US4520104A (en) 1982-11-18 1982-11-18 Production of butanol by a continuous fermentation process

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO834221L NO834221L (no) 1984-05-21
NO159668B true NO159668B (no) 1988-10-17
NO159668C NO159668C (no) 1989-01-25

Family

ID=23758221

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO834221A NO159668C (no) 1982-11-18 1983-11-17 Fremgangsm te for fremstilling av butanol ved ferme av karbohydrater.

Country Status (10)

Country Link
US (1) US4520104A (no)
EP (1) EP0112459A1 (no)
JP (1) JPS59109184A (no)
BR (1) BR8306205A (no)
CA (1) CA1202922A (no)
DK (1) DK159326C (no)
ES (1) ES527097A0 (no)
FI (1) FI72141C (no)
GR (1) GR78708B (no)
NO (1) NO159668C (no)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4900669A (en) * 1984-04-30 1990-02-13 Biotechnica International, Inc. Dual-stage fermentation
AT388174B (de) * 1987-03-10 1989-05-10 Vogelbusch Gmbh Verfahren zur vergaerung von kohlenhydrathaeltigen medien mit hilfe von bakterien
US5063156A (en) * 1990-04-30 1991-11-05 Glassner David A Process for the fermentative production of acetone, butanol and ethanol
US5192673A (en) * 1990-04-30 1993-03-09 Michigan Biotechnology Institute Mutant strain of C. acetobutylicum and process for making butanol
US5710030A (en) * 1995-09-13 1998-01-20 Henkel Corporation Process for preparing fuels, fuel substitutes, and fuel supplements from renewable resources
US20050089979A1 (en) * 2003-09-18 2005-04-28 Ezeji Thaddeus C. Process for continuous solvent production
AR047658A1 (es) 2004-02-03 2006-02-01 Cargill Inc Concentrado de proteinas y corriente acuosa con carbohidratos hidrosolubles
US9297028B2 (en) * 2005-09-29 2016-03-29 Butamax Advanced Biofuels Llc Fermentive production of four carbon alcohols
US20080274526A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Bramucci Michael G Method for the production of isobutanol
NZ593809A (en) 2005-10-26 2013-01-25 Butamax Tm Advanced Biofuels Fermentive production of four carbon alcohols
US9303225B2 (en) 2005-10-26 2016-04-05 Butamax Advanced Biofuels Llc Method for the production of isobutanol by recombinant yeast
US8273558B2 (en) 2005-10-26 2012-09-25 Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc Fermentive production of four carbon alcohols
US8828704B2 (en) 2006-05-02 2014-09-09 Butamax Advanced Biofuels Llc Fermentive production of four carbon alcohols
US8206970B2 (en) 2006-05-02 2012-06-26 Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc Production of 2-butanol and 2-butanone employing aminobutanol phosphate phospholyase
US7659104B2 (en) 2006-05-05 2010-02-09 E.I. Du Pont De Nemours And Company Solvent tolerant microorganisms and methods of isolation
US7541173B2 (en) 2006-06-15 2009-06-02 E.I. Du Pont De Nemours And Company Solvent tolerant microorganisms and methods of isolation
US20080103337A1 (en) * 2006-06-16 2008-05-01 D Amore Michael B Process for making dibutyl ethers from aqueous isobutanol
US20080132733A1 (en) * 2006-12-01 2008-06-05 Leo Ernest Manzer Process for making dibutyl ethers from aqueous 2-butanol
US20080132734A1 (en) * 2006-12-01 2008-06-05 Leo Ernest Manzer Process for making dibutyl ethers from dry 2-butanol
CA2678261A1 (en) 2007-02-09 2008-08-14 The Regents Of The University Of California Biofuel production by recombinant microorganisms
US8426173B2 (en) * 2007-05-02 2013-04-23 Butamax (Tm) Advanced Biofuels Llc Method for the production of 1-butanol
US20080274522A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Bramucci Michael G Method for the production of 2-butanone
US20090081715A1 (en) * 2007-09-07 2009-03-26 Cobalt Technologies, Inc., A Delaware Corporation Engineered Light-Emitting Reporter Genes
WO2009036076A1 (en) * 2007-09-11 2009-03-19 Tetravitae Bioscience, Inc. Process for solvent production utilizing liquid phase adsorption
US8580038B2 (en) * 2007-09-24 2013-11-12 Asher Vitner Ltd. Process for the recovery of a fermentation product
KR20100107480A (ko) * 2007-12-27 2010-10-05 게보 인코포레이티드 묽은 수용액으로부터 고급 알콜들의 회수
CL2009000879A1 (es) 2008-04-09 2010-05-07 Talfryn S A Metodo para fabricar un producto en un biorreactor que comprende cultivar microorganismos que son adaptados o mutagenizados para que exhiban por lo menos un 150% de tolerancia al producto; sistema para fabricar un producto; biorreactor.
WO2010046928A2 (en) * 2008-10-16 2010-04-29 Praj Industries Limited High energy biofuel composition and fermentation process for the production thereof
US8497105B2 (en) 2009-06-26 2013-07-30 Cobalt Technologies, Inc. Integrated system and process for bioproduct production
WO2011008516A2 (en) 2009-06-30 2011-01-20 Donald Mattsson Methods and compositions for affecting the differentiation of clostridia in culture
WO2011044243A1 (en) * 2009-10-06 2011-04-14 Gevo, Inc. Integrated process to selectively convert renewable isobutanol to p-xylene
MY180565A (en) 2011-04-14 2020-12-02 Gs Caltex Corp Apparatus and method for separating and refining product manufactured by microbial fermentation by using adsorbent
US9260731B2 (en) 2011-08-01 2016-02-16 Reliance Industries Limited Butanol fermentation using acid pretreated biomass
US20150031102A1 (en) 2012-01-19 2015-01-29 Butrolix Llc Methods and compositions for enhanced production of butanol by clostridia
WO2015002913A1 (en) 2013-07-03 2015-01-08 Butamax Advanced Biofuels Llc Partial adaptation for butanol production

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US1315585A (en) * 1919-09-09 Charles weizmann
GB306138A (en) * 1928-02-17 1930-08-11 Commercial Solvents Corp Continuous process for preparing normal butyl alcohol and acetone by fermentation
US1908945A (en) * 1931-03-28 1933-05-16 Deutsche Hydrierwerke Ag Biochemical fermentation process
US2474170A (en) * 1943-07-27 1949-06-21 Butacet Ltd Separation of acetone and butyl alcohol from fermented mash by activated charcoal
JPS51148088A (en) * 1975-06-16 1976-12-18 Mitsubishi Rayon Co Ltd Process for obtaining substances produced by organisms
AU509548B2 (en) * 1975-12-24 1980-05-15 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Composite magnetic adsorbent
JPS52136985A (en) * 1976-05-07 1977-11-16 Ajinomoto Co Inc Fermentation and dialysis
US4424275A (en) * 1979-09-17 1984-01-03 Sidney Levy Continuous process for producing N-butanol employing anaerobic fermentation

Also Published As

Publication number Publication date
EP0112459A1 (en) 1984-07-04
CA1202922A (en) 1986-04-08
US4520104A (en) 1985-05-28
DK526883A (da) 1984-05-19
FI72141B (fi) 1986-12-31
ES8504931A1 (es) 1985-05-01
ES527097A0 (es) 1985-05-01
FI72141C (fi) 1987-04-13
NO834221L (no) 1984-05-21
DK159326C (da) 1991-02-25
NO159668C (no) 1989-01-25
GR78708B (no) 1984-09-27
FI833854A (fi) 1984-05-19
DK159326B (da) 1990-10-01
BR8306205A (pt) 1984-06-19
FI833854A0 (fi) 1983-10-21
DK526883D0 (da) 1983-11-17
JPS59109184A (ja) 1984-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO159668B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av butanol ved fermentering av karbohydrater.
Levy et al. Biorefining of biomass to liquid fuels and organic chemicals
EP0125983B1 (en) Production of butanol by fermentation in the presence of cocultures of clostridium
Häggström et al. Calcium alginate immobilized cells of Clostridium acetobutylicum for solvent production
NO155628B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av d-fruktose fra d-glukose
EP0120369B1 (en) Production of acetic acid by a continuous fermentation process
Silva et al. Maximizing the xylitol production from sugar cane bagasse hydrolysate by controlling the aeration rate
EP0146075B1 (en) Production of butanol by an improved fermentation process
Qureshi et al. High-productivity continuous biofilm reactor for butanol production: effect of acetate, butyrate, and corn steep liquor on bioreactor performance
Ghosh et al. Optimization of the Sistrom culture medium for large-scale batch cultivation of Rhodospirillum rubrum under semiaerobic conditions with maximal yield of photosynthetic membranes
US20100291649A1 (en) Control of contaminant yeast in fermentation processes
JP4365862B2 (ja) カンジダトロピカリスcj−fid菌株(kctc10457bp)およびそれを利用したキシリトールの生産方法
EP0111684B1 (en) Novel process for making n-butyl butyrate
NO159290B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av eddiksyre ved fermentering av mutantstammen clostridium thermoaceticum c 5-2.
JP3711296B2 (ja) L−プシコースの製造方法
Parekh et al. Continuous hydrolysis of fructans in Jerusalem artichoke extracts using immobilized nonviable cells of Kluyveromyces marxianus
JPH03228687A (ja) D―プシコースの製造方法
JPH03266996A (ja) D―ソルボースの製造方法
NO802863L (no) Fremgangsmaate for fremstilling av 2,5-diketoglukonsyre
JPH05184376A (ja) 5−アミノレブリン酸の生産方法
JP3082104B2 (ja) L−キシルロースの製造方法
JP4989947B2 (ja) パラチノース、トレハルロースまたはその混合物の製造方法
Weaver Photoconversion of organic substrates into hydrogen using photosynthetic bacteria
Nojima et al. [35] Large-scale production of photo-cross-linkable resin-immobilized yeast and its application to industrial ethanol production
Zaborsky Patent reports