DK160616B - Fremgangsmaade til fremstilling af anthracyclinderivater eller syreadditionssalte deraf - Google Patents

Description

DK 160616 B

Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af anthracyclinderivater med den almene formel 0 OH 0 11. C-CHgR1 YVYY" 0 OH 0 OCH.

-3 __O

0 m2 R2 5 hvori R^· betyder et hydrogenatom eller en hydroxylgruppe og r2 betyder en 1-alkyloxy- eller -cycloalkyloxyethyl-gruppe, en tetrahydrofuran-2-ylgruppe, en 6-methoxytetra-hydropyran-2-ylgruppe, en 6-carbomethoxytetrahydropy-ran-2-ylgruppe eller en 6-acetoxymethyltetrahydropyran-10 2-ylgruppe, eller syreadditionssalte deraf.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at en 1-alkyloxy- eller cycloalkyloxyethylgruppe, en tetra-hydrofuran-2-ylgruppe, en 6-methoxytetrahydropyran-2-ylgruppe, en 6-carbomethoxytetrahydropyran-2-ylgruppe 15 eller en 6-acetoxymethyltetrahydropyran-2-ylgruppe indføres i hydroxylgruppen ved C-4*-stillingen i et anthra-cyclinderivat med formlen

DK 160616 B

2

O OH O

/vVW^ , , I I S0H (VIII)

VYyV

O OH 0 OOHt λ—0 0

HO

Ah2 hvor r3 betyder et hydrogenatom, en alkanoyloxygruppe med 2-7 carbonatomer eller en phenylacetyloxygruppe, eller 5 en syreadditionssalt deraf, ved omsætning med dihydro-furan, et passende dihydropyranderivat eller en alkyl-eller cycloalkylvinylether, som indeholder den tilsvarende gruppe, som skal indføres, og som kan reagere med en hydroxylgruppe, i et indifferent organisk opløsningsmid-10 del og i nærværelse af en syrekatalysator til dannelse af et anthracyclinderivat med den almene formel 0 OH f 14 aIVy"·''1 I I V0H (IX)

yYYY

O OH 0 °°Η3 c,

0 I

hh2 H2

DK 160616B

3 hvor r3 betyder et hydrogenatom, en alkanoyloxygruppe med 2-7 carbonatomer eller en phenylacetyloxygruppe, R2 har den ovenfor angivne betydning, eller et syreadditionssalt 5 deraf, hvorefter en eventuelt tilstedeværende alkanoyl-gruppe eller phenylacetylgruppe ved C-14-stillingen i derivatet med den almene formel IX fjernes ved hydroly-tisk deacylering til dannelse af et anthracyclinderivat med den almene formel

0 OH

Il coch2oh I I 0H (ni) vvw 0 OH 0 och3 0 nh2 R2 hvor R2 har den ovenfor i forbindelse med formel IX angivne bydning, eller et syreadditionssalt deraf.

Daunomycin er kendt fra beskrivelsen til britisk patent nr. 1.003.383 og beskrivelsen til amerikansk patent nr.

15 3.616.242, og adriamycin er kendt fra beskrivelsen til amerikansk patent nr. 3.590.028 og nr. 3.803.124. Disse udvindes fra streptomyceskulturer, og de har et bredt antitumorspektrum mod forskellige eksperimentelle tumorer og er blevet anvendt klinisk som potentielle kemoterapeu-20 tiske midler mod cancer. Det er imidlertid kendt, at de har alvorlige bivirkninger, såsom alopecia, leukeopenia, cardiotoksicitet osv.

DK 160616B

4 % I forbindelse med den foreliggende opfindelse er der foretaget omfattende undersøgelser over den kemiske modifikation af daunomycin og adriamycin med henblik på 5 fremstilling af mere anvendelige derivater méd kraftigere anticancervirkning og lavere toksicitet end udgangs-forbindelserne, og det har vist sig, at daunomycin- og adriamycinderivater, hvor den reaktive hydroxylgruppe ved C-4'-stillingen er substitueret med en 1-alkyloxy- eller 10 cycloalkoxyethylgruppe, tetrahydrofuran-2-ylgruppe, en 6-methoxytetrahydropyran-2-ylgruppe, en carbomethoxy-tetrahydropyranyl-2-ylgruppe eller en 6-acetoxymethyl-tetrahydropyran-2-ylgruppe har kraftig anticancervirkning samt lav toksicitet.

15 Tilsvarende derivater af daunomycin og adriamycin, hvor hydroxylgruppen ved C-4'-stillingen er substitueret med en tetrahydropyran-2-ylgruppe, er kendt fra belgisk patentskrift nr. 869.395.

Blandt de hidtil ukendte derivater med den almene formel 20 I kan der som eksempler på farmaceutisk nyttige derivater anføres følgende.

Som eksempler på de hidtil ukendte 4'-0-pyranylerede, -furanylerede og -alkoxyethylerede derivater af adriamycin kan nævnes følgende: 25 4’-O-tetrahydrofuranyl-adriamycin, 4r-O-tetrahydrofuranyl-adriamycin a og b, 4'-O-(l-ethyloxyethyl)-adriamycin a og b, 4'-0-(l-butyloxyethyl)-adriamycin a og b, 4'-O-(1-isobutyloxyethyl)-adriamycin a og b, 30 4'-0-j· 1-(6-methylheptyloxy)ethyl ]-adriamycin a og b, 4’-O-(1-cyclohexyloxyethyl)-adriamycin a og b, 4’-O-(6-methoxytetrahydropyranyl)-adriamycin a og b, 4’-0-(6-carbomethoxytetrahydropyranyl)-adriamycin a og b, 4’-O-(6-acetoxytetrahydropyranyl)-adriamycin a og b.

5

DK 16 O 616 B

Som eksempel på hidtil ukendte daunomycinderivater kan nævnes følgende: 4'-O-tetrahydrofuranyl-daunomycin a og b, 5 4'-0-(l-ethyloxyethyl)-daunomycin a og b, 4’“0-(l-butyloxyethyl)-daunomycin a og b, 4'-0-(l-isobutyloxyethyl)-daunomycin a og b, 4’-0-[ 1-(6-methylheptyloxy)ethyl ]-daunomycin a og b, 4,-0-(l-cyclohexyloxyethyl)-daunomycin a og b, 10 4'-0-(6-methoxytetrahydropyranyl)-daunomycin a og b, 4,-0-(6-carbomethoxytetrahydropyranyl)-daunomycin a og b, 4?-0-(6-acetoxytetrahydropyranyl)-daunomycin a og b.

Ved en udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af 04’-etherifierede 15 derivater af 14-0-acyl-anthracyclinderivaterne med den almene formel I eller syreadditionssalte deraf indføres en 1-alkoxyethylgruppe, såsom 1-methoxyethyl, 1-ethoxy-ethyl, 1-butyloxyethyl, 1-isobutyloxyethyl, l-(6-methyl-heptyloxy)ethyl eller cyclohexyloxyethyl, tetrahydro-20 furan-2-yl, 6-methoxytetrahydropyran-2-yl, 6-carbo- methoxytetrahydropyran-2-yl eller 6-acetoxymethyltetra-hydropyran-2-yl i hydroxylgruppen ved C-4’-stillingen i et anthracyclinderivat med formlen 0 OH 0 aMa!V (II'a) I noh VSVy 0 OH 0 0CH3 J I i II 1·0 0 H0 m2 6

DK 160616 B

hvor r3 betyder en alkanoyloxygruppe med 2-7 carbon-atomer, såsom acetyloxy eller isobutyryloxy, eller en phenylacetyloxygruppe, eller et syreadditionssalt deraf 5 ved omsætning med en dihydrofuran, et dihydrofuranderivat, en dihydropyran, et dihydropyranderivat eller en alkyl- eller cycloalkylvinylether, som indeholder den tilsvarende gruppe, som skal indføres, og som er i stand til at reagere med en hydroxylgruppe, i et indifferent 10 organisk opløsningsmiddel og i nærværelse af en syrekatalysator til dannelse af et C-4’-etherificeret derivat med den almene formel 0 OH 0 14 A A A A C-CH2H3 (II) 0 0H 0 och3 hh2 R2 hvor r3 betyder en alkanoyloxygruppe med 2-7 carbonatomer 15 eller en phenylacetyloxygruppe, og r2 betyder en 1-alkyloxy- eller -cycloalkyloxyethylgruppe, en tetrahydrofuran-2-ylgruppe, en 6-methoxytetrahydropy-ran-2-ylgruppe, en 6-carbomethoxytetrahydropyran-2-ylgruppe eller en 6-acetoxymethyltetrahydropyran-2-20 ylgruppe, eller et syreadditionssalt deraf, hvorefter en eventuelt tilstedeværende alkanoylgruppe eller phenyl-acetylgruppe i C-14-stillingen i derivatet med den almene formel II fjernes ved hydrolytisk deacylering til dannelse af et anthracyclinderivat med den almene formel

DK 160616 B

7

O OH

aUa,'”20” I I X0H (III)

VyW

0 OH 0 och3 nh2 R2 hvor r2 har den ovenfor angivne betydning, eller et syreadditionssalt deraf.

5 Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes forbindelserne (de samme forbindelser som med formlen Il-a) afledt af daunomycin ved anvendelse af fremgangsmåden beskrevet i Compt. Rend. Acad. de Science t.286, Serie D-443, 1978, og den almene formel

0 OH

/yU/v^V0'4 I II S°H (vi)

YYYY

O OH 0 0CH3 0 \CH3 /

HO J

NH2 hvor R4 betyder en alkylgruppe med 1-6 carbonatomer eller en benzylgruppe, som udgangsmateriale.

DK 160616B

8 14-0-acylderivaterne og 14-0-phenylacetylderivaterne svarer til forbindelsen dannet ved acylering af en hydroxylgruppe i C-14-stillingen i adriamycin med 5 alkansyre eller phenyleddikesyre med formlen R^COOH.

Hidtil ukendte derivater med den almene formel VII (de samme forbindelser som formel II)

0 OH

I I ^ OH

O OH O

OCH3 A—° \CH3 / O [-' IH2 R2 hvor har den ovenfor angivne betydning, og r2 betyder 10 en 6-methoxytetrahydropyran-2-ylgruppe, en 6-carbometh-oxytetrahydropyran-2-ylgruppe, en 6-acetoxytetrahydro-pyran-2-ylgruppe, en tetrahydrofuran-2-ylgruppe eller en 1-alkyloxy- eller -cycloalkyloxyethylgruppe, såsom 1-methoxyethyl, 1-ethoxyethyl, 1-butyloxyethyl, 1-isobu-15 tyloxyethyl, l-(6-methylheptyloxy)ethyl eller cyclohexyl-oxyethylgruppe, kan fremstilles ved indføring af den tilsvarende gruppe i hydroxylgruppen i C-41-stillingen i forbindelsen VI ved omsætning med dihydrofuran eller et passende dihydropyranderivat deraf eller alkylvinylethere 20 med 3-10 carbonatomer, som indeholder den tilsvarende reaktive gruppe.

Når i dette tilfølge den frie base af forbindelsen VI eller dens syreadditionssalte, såsom hydrochloridet,

DK 160616 B

9 suspenderes eller opløses i de nedenfor anførte organiske opløsningsmidler og omsættes med dihydrofuran, dihydro-pyranderivater eller C3_io“alkylvinyletherderivater i 5 nærværelse af en sur katalysator, kan den reaktive hydroxylgruppe i C-4*-stillingen i forbindelsen VI substitueres med tetrahydrofuran-2-ylgruppe, en 6-sub-stitueret tetrahydropyran-2-ylgruppe, en 1-alkyloxy-eller -cyclohexyloxyethylgruppe, såsom 1-methoxyethyl, 10 1-ethoxyethyl, 1-butyloxyethyl, 1-isobutyloxyethyl, 1- (6-methylheptyloxy)ethyl eller cyclohexyloxyethyl.

Dihydropyranderivater, såsom 2-acetøxyethyl-3,4-dihydro-2H-pyran, 2-methoxy-3,4-dihydro-2H-pyran og 2- carbomethoxy-3,4-dihydro-2H-pyran, kan fortrinsvis 15 anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Fortrinsvis anvendes dihydrofuran selv samt vinylethere, såsom methylvinylether, ethylvinylether, butylvinylether, isobutylvinylether, 6-methylheptylvinylether eller cyclohexylvinylether.

20 Vandfri organiske opløsningsmidler, såsom benzen, toluen, dimethylformamid (i det følgende forkortet DMF), tetra-hydrofuran (i det følgende forkortet THF), dimethylsulf-oxid (i det følgende forkortet DMSO), dioxan og acetoni-tril etc. eller blandinger deraf kan fortrinsvis anven-25 des til omsætningen. Som syrekatalysator kan anvendes organiske sulfonsyrer, og især foretrækkes aromatiske sulfonsyrer, såsom p-toluensulfonsyre og benzensulfon-syre.

Ved en foretrukken udførelsesform kan omsætningen 30 eksempelvis gennemføres med vandfrit DMF som opløsningsmiddel og p-toluensulfonsyre som syrekatalysator i fra 20 minutter til 50 timer ved stuetemperatur. Eventuelt kan ved anvendelse af en opløsningsmiddelblanding af vandfrit DMSO og vandfrit THF eller vandfrit DMSO og vandfrit 35 dioxan og p-toluensulfonsyre som katalysator reaktionen

DK 160616 B

10 gennemføres i løbet af fra 20 minutter til 50 timer ved stuetemperatur.

Til eliminering af acylgruppen eller phenylacylgruppen i 5 C-14-stillingen i forbindelserne med den almene formel VII (den samme som formel II), kan anvendes den kendte hydrolysefremgangsmåde til dannelse af forbindelserne med den almene formel III. Hydrolyse til fjernelse af R^CO-gruppen i C-14-stillingen i forbindelsen med formlen VII 10 kan gennemføres ved at opløse eller suspendere forbindelsen med formlen VII i et med vand blandbart organisk opløsningsmiddel, f.eks. en lavere alkohol, såsom methanol, ethanol osv. og vandig acetone og at foretage \ omsætningen ved stuetemperatur eller lidt højere tempels· ratur i nærværelse af base, fortrinsvis kaliumcarbonat, i den rigtige koncentration, f.eks. ca. 10% (vægt/rum-fang). Afslutningen af hydrolysen kan bekræftes ved tyndtlagskromatografering.

Ved. en anden udførelsesform for fremgangsmåden ifølge 20 opfindelsen fremstilles et anthracyclinglycosid med den almene formel

0 OH

|| OH (v)

VyW

0 OH 0 OCHo λ-°v nh2 R2

DK 160616 B

11 hvor R2 betyder en tetrahydrofuranyl-2-ylgruppe, en 6-methoxytetrahydropyran-2-ylgruppe, en 6-carboxymethyl-tetrahydropyran-2-ylgruppe, en 6-acetoxytetrahydropyran-5 2-ylgruppe eller en 1-alkyloxy- eller -cycloalkyloxy-ethylgruppe, såsom 1-ethyloxyethyl, 1-butyloxyethyl, 1- isobutyloxyethyl, 1-(6-methylheptyloxy)ethyl eller cyclohexyloxyethyl, eller syreadditionssalte deraf, ved hvilken en tetrahydrofuran-2-ylgruppe, en 6-methoxytetra- 10 hydropyran-2-ylgruppe, en 6-carbomethoxytetrahydropyr an- 2-ylgruppe, en 6-acetoxymethyltetrahydropyran- 2- ylgruppe eller en 1-alkyloxyethylgruppe, såsom 1-methoxyethyl, 1-ethyloxyethyl, 1-butyloxyethyl, 1-isobutyloxyethyl, 1-(6-methylheptyloxy)ethyl eller en 15 cyclohexyloxyethylgruppe, indføres ved omsætning med dihydropyranderivater, såsom 2-acetoxyethyl-3,4-dihydro-2H-pyran, 2-methoxy-3,4-dihydro-2H-pyran, 2-carbo-methoxy-3,4-dihhydro-2H-pyran, dihydrofuranderivater eller alkyl- eller cycloalkylvinylethere med 3-10 20 carbonatomer, såsom methylvinylether, ethylvinylether, butylvinylether, isobutylvinylether, isobutylvinylether, 6-methylheptylvinylether eller cyclohexylvinylether, som kan omsættes med en hydroxylgruppe, indføres i hydroxyl-gruppen i 04'-stillingen i daunomycin med den almene 25 formel

0 OH

^Å/W”3 I I 0H (IV)

VyYy 0 OH 0 OCHt 3___0 (Sy

HO

nh2

DK 160616 B

12 eller syreadditionssalte deraf.

Ved denne fremgangsmåde opløses eller suspenderes som udgangsmateriale den fri base med formlen IV (daunomycin) 5 eller syreadditionssalte deraf, såsom hydrochlorides i et organisk opløsningsmiddel, og der omsættes med de rigtigt valgte dihydropyranderivater (dog ikke dihydro-pyran selv), dihydrofuranderivater eller alkylvinyl-ethere med 3-10 carbonatomer i nærværelse af en sur 10 katalysator under anvendelse af den ovenfor beskrevne fremgangsmåde. Den reaktive hydroxylgruppe i C-4’-stillingen i udgangsmaterialet substitueret således med en 6-substitueret tetrahydropyranylgruppe, en tetrahydro-furanylgruppe eller en alkyloxyethylgruppe til dannelse 15 af de ovenfor anførte derivater med den almene formel V.

I dette tilfælde kan der som reaktionsopløsningsmiddel anvendes organiske opløsningsmidler, såsom benzen, toluen, dimethylformamid (DMF), tetrahydrofuran (THF), dioxan eller acetonitril eller blandinger deraf.

20 Organiske sulfonsyrer kan anvendes som syrekatalysatoren, og især foretrækkes aromatiske sulfonsyrer, såsom p-toluensulfonsyre og benzensulfonsyre. Ved en fore-trukken udførelsesform gennemføres reaktionen med vandfrit DMF som opløsningsmiddel og med p-toluensulfon-25 syre som syrekatalysator i fra 20 minutter til 50 timer ved stuetemperatur.

Eventuelt kan der anvendes en blanding af fortrinsvis vandfrit DMSO og vandfrit THF eller vandfrit DMSO og vandfrit dioxan til gennemførelse af omsætningen ved 30 stuetemperatur i fra 20 minutter til 3 timer som beskrevet ovenfor.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser foreligger i reaktionsblandingén i form af en diastereomerblånding a og b. Om nødvendigt kan de 35 diastereomere a og b adskilles under anvendelse af i og

DK 160616 B

13 for sig kendte fremgangsmåder og udvindes i ren form fra reaktionsblandingen ved anvendelse af konventionelle fremgangsmåder, som anvendes til rensning af forskellige 5 anthracyclin-glycosider. Således kan eksempelvis reaktionsblandingen filtreres til fjernelse af faste stoffer, hvorefter filtratet koncentreres til tørhed, og det fremkomne rå pulver renses ved søjlekromatografering eller tyndtlagskromatografering under anvendelse af 10 aluminiumoxid, silicagel etc.

Strukturforskellen på forbindelserne a og b antages at være forskellen i den absolutte konfiguration R og S for chiralitetscentret for de 4'-0-substituerede ethergrup-per, da de to forbindelser har forskellige kemiske 15 forskydninger for methinprotonen i chiralitetscentret.

De omhandlede forbindelser har udtalt antitumorvirkning mod forskellige eksperimentelle dyretumorer. Især har anthracyclinderivaterne med den almene formel I kraftig antitumorvirkning og lavere toksicitet end adriamycin og 20 kan med fordel anvendes som antitumormidler. Blandt de omhandlede derivater er de i den efterfølgende tabel I anførte forbindelser med den almene formel I farmaceutisk anvendelige forbindelser.

0 OH 0 11. d-CHgR1 I i T^OH (I) 0 OH 0 OCHo ip*

NH

2 R2

DK 160616 B

14

Tabel I

*-1--1-1 1 2

Forbindelse nr. R w ' R

4'-0-(tetrahydro- ’

furanyl)-ADM 2 -OH

4'-O-(tetrahydro-5 furanyl)-ADM (a) 2 a (b) 2-b "

4'-O-(6-acetoxy- O

methyltetrahydro- 3 " -^^^X-CHg-O-C-CHg

py rany 1) -ADM

10 41-O-(1-ethoxy- 4_a „ -CH-O-CH-CH- ethyl)-ADM (a) S ^3 t

DK 160616 B

15

Tabel I fortsat______________

4'-0-(l-ethoxy- 4_b -0H -CH-O-CH CH

ethyl)-ADM (b) CH

3 « 4'-O-(1-butyloxy- 5_a „ -CH-0-CH2(CH2)2CH3 5 ethyl)-ADM (a) 3 " (b) 5-b

4'-0-(l-iso- CH

butyloxyethyl)- 6-a " -CH-0-CH9CH^

I z XCH

ADM (a) CH3 3 10 π (b) 6-b "

4'-0-(l-(6-methyl- CH

heptyloxy)ethyl)- 7-a " -CH-0-CH2(CH2)4CH^ 3 ADM (a) lCE CH3 3 " (b) 7-b i 15 41-O-(1-cyclo- — j hexyloxyethyl)- 8-a " -CH-O-^Hy | ADM (a) ! CH i ! J i

! ! I

: I :

" (b) j 8-b I

i i

DK 160616 B

16

Tabel I fortsat 4'-0-(tetra- hydrofuranyl)- 9 -H \ / DAM '-' 5 4»-0-(6-methoxy- .n „ „ -f/UVsrOCH„ tetrahydro- 10-a II 3

pyranyl)-DAM

» (b) 10-b " "

O

4'-0-(6-acetoxy- η II

10 methyltetra- 11 H -£^CH2-0-C-CH3

hydropyranyl)-DAM

4'-0-(6-carbo- Q O

methoxytetra- 12 " ~Y 'VC-OCHg

hydropyranyl) -DAM

15 4'-O-(1-ethoxy- -CH-0-CH„CH„ 1?-a " i z o

ethyl)-DAM (a) qH

3 " (b) 13-b " " 4'-O-(1-butyloxy- -CH-O-CHg(CE^)gCHg

14—a " I

ethyl)-DAM (a) CH^

17 DK 160616 B

Tabel I fortsat__ 41-O-(1-butyloxy- -CH-0-CHo(CH0)0CH0 14_h τι I 2V 2'2 3

ethyl)-DAM (b) D H CH

3 4'-0-(l-iso- _ /CH„ 5 butyloxyethyl)- 15-a " -CH-0-CH2CH\ 0 DAM (a) CH CH3 ό " (b) 15-b !

-----I

I det følgende beskrives de omhandlede forbindelsers nyttige farmakologiske virkninger.

10 (l) Antitumorvirkning mod forskellige eksperimentelle dyre- tumorer.

CDF-i-mus inokuleres intraperitonealt (i.p.) med L1210-celler i en mængde på en mængde på 1 x 10 celler pr. mus.

24 timer efter inokuleringen indgives de omhandlede forbindelser musene intraperitonealt en gang dagligt i 10 på hin-15 anden følgende dage, og de holdes under observation i 45 dage.

Antitumorvirkningen påvises ved den forlængede overlevelsestid for de mus, der har fået indgivet de her anhandlede forbindelser, i forhold til kontrolmus, som er injiceret med fysiologisk saltopløsning (τ/C, fo). Resultaterne opnået med de i tabel 20 I anførte forbindelser og sammenligningsforbindelser anføres i den efterfølgende tabel II,

DK 160616 B

18

Tabel II.

Antitumorvirkning (τ/C, fo) af de omhandlede anthracyclin-derivater

Forbindelse nr. Dosis (mg/kg/dag) 5 2,5 1,25 0,625 0,31 0,15 DAM Tox. 138* 191 145 132 118 (-sammenlignings -forb.)

ADM

(sammenlignings— 189* 351 272 239 147 130 forb.) i 2 314 360 179 136 111 105 2-a 212 288 189 135 115 115 2-b 256 230 154 141 128 122 3 141 118 118 106 88 100 4-a 108 277 145 127 101 96 4- b 211 151 157 127 108 108 5- a 163 138 125 119 100 100 5- b 288 138 119 106 100 100 6- a 257 151 125 112 105 105 6-b 303 158 118 105 118 99 _____1______

DK 160616 B

19

Forbindelse nr. Dosis (mg/kg/dag)_ 5 2,5 1,25 0,625 | 0,31 0,15 « 7-a 125 125 118 99 92 105 7- b 118 105 112 112 105 105 8- a 184 125 118 105 99 105 8-b 145 125 105 105 105 105 i 9 346 160 111 111 105 99 lO-a 232 125 106 100 100 100 10-b 463 131 113 106 100 94 12 131 106 100 100 100 100 13-a 217 157 102 104 96 96 13- b 247 133 112 108 96 90 14- a 144 116 116 110 j 103 110 14- b 188 151 110 i 110 : 96 103 | : i ! 1 i i 15- a 156 119 100 ; 100 i 100 100 t ; 15-b 188 113 106 100 100 100

Note: DAM=daunomycin, ADM=adriamycin *: toksisk

DK 160616 B

20

Ud fra de i tabel II og III anførte resultater for toksisk død og tab i legemsvægt antages det, at de omhandlede forbindelser fra en toksicitet pi en halv til eh trediedel af toksiciteten for adriamycin og daunomycin, som er stamfor-5 bindeiser og udgangsmaterialer ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

(2) Inhiberende virkning på væksten og nucleinsyrebiosynte- ' sen i dyrkede L1210 leukemia-celler.

L1210-celler (5 x 10^ celler/ml) inokuleres i et RPMI 10 1640-medium (Rosewell Park Memorial Institute 1640) indeholdende 20$ kalveserum, og cellerne dyrkes ved 37°C i nærværelse af henholdsvis 0,1 og 0,5 \ig/ml af de omhandlede forbindelser i en C00-inkubator. Antallet af celler optæl-0 . ^ les periodisk,og 50$'s vækstinhiberingskoncentrationen for 15 kontrølforbindelser bestemmes og anføres i tabel III.

Endvidere bestemmes 50$'s inhiberingskoncentrationen for de omhandlede forbindelser på nucleinsyrebiosyntesen på følgende måde: 11210-celler (5 x 10^ celler/ml) suspenderes i RPMI-medium 20 indeholdende 10$ kalveserum, hvorefter der fordyrkes ved 37°C i 1-2 timer i en C02_iiikubator, hvorefter forsøgs- forbindelserne sættes til mediet i forskellige koncentra- 14 tioner. Efter inkubering i 15 minutter tilsættes C-uridin (0,05 μΟΐ/ιηΐ) eller ^C-thymidin (0,05 μθί/ml), og 25 der inkuberes ved 37°C i 60 minutter. Til inkuberingsmediet sættes 10$'s trichloreddikesyre (TCA) til afbrydelse af reaktionen og udfældning af de syreuopløselige materialer, hvorefter bundfaldet vaskes tre gange med 5-10$’s TCA, opløselig i myresyre. Radioaktiviteten i de syreuopløselige 30 materialer måles og udtrykkes som 50$'s inhiberingskoncentration for inkorporering. Resultaterne er ligeledes anført i tabel III.

Tabel III

21

DK 160616 B

Inbiberende virkning nå væksten og nucleinsyrebiosyntesen i dyrkede L1210-celler ID ( g/ml) mod L1210-celler

Forbindelse nr___

5 vækst DNA RNA

(efter 2 dage) DAM 0,036 0,3 1,7 ADM 0,018 1,25 0,49 2-a 0,015 0,5 0,19 10 2-b 0,015 0,54 0,19 3 0,04 0,56 0,29 4-a 0,015 0,36 0,13 4- b 0,01 0,43 0,18 5- a 0,04 1,9 0,52 15 5-b 0,05 1,5 0,37 6- a 0,025 0,85 0,32 6- b 0,03 0,5 0,15 7- a 0,38 >10,0 2,5 7- b 0,52 >10,0 2,8 20 8-a 0,04 1,3 0,43 8- b 0,06 1,3 0,32

22 DK 160616 B

ID_0 ( g/ml) mod L1210-eeller

Forbindelse nr.---1---

vækst [ DNA RNA

('efter 2 dage)j 9 0,017 0,41 0,17 5 10-a 0,04 0,62 0,3 10-b 0,025 0,8 : 0,33 : i 12 0,095 0t93 0,44 13-a 0,025 0,34 0,13 13- b 0,03 0,65 0,29 10 14-a 0,08 0,93 0,37 14- b 0,075 1,4 0,6 i 15- a 0,08 1,4 j 0,5 r 15-b 0,06 0,8 I 0,28 i ___I___

Note: DAM=daunomycin, ADM=adriamycin

DK 160616 B

23 (3) Inhiberende virkning på væksten af forskellige mikroorganismer.

Forbindelserne med formlen I og deres syreadditionssalte har bemærkelsesværdig bakteriostatisk virkning, som svarer til 5 virkningen af adriamycin, mod forskellige mikroorganismer, såsom Staph, aureus, Bacillus subtilis, B. cereus, B. mega-terium, Sarcina lutea, Micrococcus flavus, Corynebacterium bovis, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Mycobacterium smegmatis og Candida albicans.

10 Som anført ovenfor er forbindelserne med formlen I og deres ugiftige syreadditionssalte hidtil ukendte antibiotika, som kan anvendes i såval human- som veterinærmedicinen, og de har endvidere udtalt inhiberende virkning mod maligne pattedyrstumorer, herunder mod såvel den faste type som ascites-15 typen.

En pattedyrvært inficeret med en mikrobiel infektion, især en grampositiv bakterieinfektion, eller med en malign tumor, dvs. en tumor af den faste type eller ascites-typen, såsom L1210-leukemia, kan behandles 20 terapeutisk ved indgift af en effektiv antimikrobiel eller tumorinhiberende mængde af forbindelsen med formlen I eller et ugiftigt syreadditionssalt deraf eller blandinger deraf.

Der kan fremstilles farmaceutiske præparater, som 25 indeholder en terapeutisk virksom antimikrobiel eller tumorinhiberende mngde af en forbindelse med formlen I eller blandinger deraf eller et ugiftigt syreadditions-salt deraf i kombination med et farmaceutisk bærestof eller fortyndingsmiddel. Sådanne præparater kan formu-30 leres på en vilkårlig farmaceutisk form, som er hensigtsmæssig til parenteral indgivelse.

DK 160616B

24

Præparater til parenteral indgift indbefatter sterile vandige eller ikke-vandige opløsninger, suspensioner eller emulsioner. De kan også fremstilles i form af sterile faste præparater, som kan opløses i sterilt vand, fysiologisk 5 saltopløsning eller andre sterile injektionsmedier umiddelbart før anvendelse.

Det er klart, at den aktuelle foretrukne dosisstørrelse vil variere afhængigt af den specifikke anvendte forbindelse, den specifikke præparatformulering, indgiftsmåden og det 10 pågældende sted, værten og sygdommen, som skal behandles. Sædvanligvis injiceres forbindelserne intraperitonealt, intravenøst,subkutant eller lokalt i ikke-humane pattedyr og intravenøst eller lokalt i mennesker. Mange faktorer, som har indflydelse på lægemidlets virkning, skal tages i 15 betragtning af fagfolk, f.eks. alder,legemsvægt, køn, føde, indgiftstidspunkt, indgiftsvej, udskillelseshastighed, patientens tilstand, lægemiddelkombinationer, reaktionsfølsomhed og sygdomsangrebets styrke. Indgivelsen kan foretages kontinuert eller periodisk indenfor den maksimalt acceptable 20 dosis. Optimale indgiveIsesmængder i en given situation kan fastlægges af fagfolk ved anvendelse af konventionelle dosisbestemmelsesprøver under hensyntagen til det ovenfor anførte.

I det følgende illustreres fremstillingen af 14-0-acyleret adriamycin, som anvendes som udgangsmateriale ved fremstil-25 lingen af 14-0-acyl-4'-O-etherificeret adriamycin, og som eksempel anvendes fremstillingen af 14-0-acetyl-adriamycin.

Indre 14-0-acylerede adriamyciner, der skal anvendes som udgangsmaterialer ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan fremstilles på samme måde.

30 Eksempel A.

(1) 14-Bromdaunomycin-dimethylketal-hydrochlorid.

230 mg (0,41 mmol) daunomycin-hydroejhlorid opløses i 10 ml absolut methanol, og der tilsættes 20 ml dioxan. Blandin-

DK 160616 B

25 gen henstilles i 2-3 timer ved 22-23°C, hvorefter der under omrøring dråhevis tilsættes 0,88 ml (0,55 mmol) 10^'s chloroformholdig vandig bromopløsning. Reaktionsblandingen koncentreres til ca. 5 ml under formindsket tryk, 5 hvorefter der tilsættes 15 ml tør ether, og ved filtrering isoleres et orangerødt bundfald. Bundfaldet vaskes tre gange med 3 ml ether og tørres. Der fås 277 mg 14-0-bromdauno-mycin-dimethylketal-hydrochlorid med smp. 175-178°C i et udbytte pi 98$.

10 (2) p-Toluensulfonatet eller hydrochloridet af 14-0-acetyl- adriamycin.

207 mg (0,3 mmol) 14-bromdaunomycin-dimethylketal-hydro-chlorid suspenderes i 100 ml tør acetone, hvorefter der tilsættes 0,4 g tørt natriumacetat og tilbagesvales i 1 time 15 under omrøring. Reaktionsblandingen filtreres til fjernelse af urenheder, og filtratet koncentreres under formindsket tryk. Remanensen fordeles i en blanding indeholdende 30 ml chloroform og 20 ml 0,05 ΪΓ saltsyre. Det sure vandige lag neutraliseres med natriumhydrogencarbonat, hvorpå det re-20 ekstraheres med chloroform. Det rødlige chloroformlag tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til ca.

5 ml under formindsket tryk, og der udfældes et orangefarvet bundfald i form af et salt ved tilsætning 40 ml p-toluensulfonsyre eller en ækvivalent mængde saltsyre i 25 overensstemmelse med saltdannelsesfremgangsmåden for det tilsvarende syreadditionssalt. Det dannede bundfald frafil-treres og vaskes med ether, og der fås 160 mg af p-toluen-sulfonatsaltet af 14-0-acetyl-adriamycin med et smeltepunkt på 165-168°C. I tilfælde af hydrochloridsaltet kan 30 der fremstilles omtrentlig den samme mængde forbindelse.

De følgende eksempler tjener til illustration af fremgangsmåden ifølge opfindelsen. I eksemplerne er forholdet mellem opløsningsmidleme i en blanding angivet ved forholdet mellem rumfangene, og det procentvise indhold af en væske i 35 forhold til en væske angives ved forholdet V/v og forholdet 26

DK 160616 B

mellem faststof og væske angives ved forholdet W/v, med mindre andet er anført. -

Por at lette aflæsningen og lokaliseringen af UMR-signa-leme anføres konfigurationen for adriamycin med angivel-5 se af de enkelte carbonatomers stilling.

0 OH O u C -ch2oh

|| 9 S0H

3 /\/\/8 4| 5j| 6| |7 O OH O Adriamycin OCHo J 51 4'φ~/r

HO ]-/2I

nh2

Eksempel 1,

Fremgangsmåde til fremstilling af 4'-O-tetrahydrofuranyl-adriamycin.

(a) 190 mg (0,25 mmol) 14-0-acetyl-adriamycin-p-toluensulf-10 onat opløses i 10 ml tørret dimethylformamid, der tilsættes 0,4 ml dihydrofuran og p-toluensulfonsyre som katalysator, hvorefter blandingen henstilles i 3,5 timer ved stuetemperatur (4*-O-tetrahydrofuranylering). Ved hjælp af tyndtlags-kromatografering på silicagel under anvendelse af et opløs-15 ningsmiddelsystem bestående af chloroform og methanol (9:1) konstateres det, at der er dannet et reaktionsprodukt med en Hf-værdi på 0,24-0,27, og at udgangsmaterialet er forsvundet. Reaktionsblandingen hældes i 100 ml vand, neutraliseres med natriumhydrogencarbonat og ekstraheres med 20 60 ml chloroform. Chloroformlaget tørres over vandfrit

DK 160616 B

27 'natriumsulfat, koncentreres til tørhed under formindsket tryk og fremkaldes ved hjælp af præparativ tyndtlagskro-matografering under anvendelse af to silicagelplader på 20 x 20 cm og med en tykkelse på 2 mm samt et opløsnings-5 middelsystem bestående af chloroform og methanol (9:1) .

Båndet med Rf-værdien 0,24-0,27 skrabes bort fra silica-geltyndtlagskromatogrammet, og materialet ekstraheres med en blanding af chloroform og methanol (1:1), og der koncentreres til tørhed. Der fås 66,8 mg 14-0-acetyl-4'-0-tetra-10 hydrofuranyl-adriamycin i form af et rødt fast stof.

Udbytte 40%.

PMR (CDC13, ppm): 1,23-1,34(6'-H), 1,70-2,12 (furan), 2,20, 2,22(acetyl), 4,06(4-0Me), 5,20(14-H), 5,36 15 (furan, anomer), 5,51(7-H), 7,27-8,06 (1-H - 3-H).

(b) 41,0 mg 14-0-acetyl-4'-O-tetrahydrofuranyl-adriamycin opløses i 10 ml methanol og 3 ml vand under omrøring, der tilsættes 10%'s kaliumcarbonatopløsning, til opløsningens 20 farve ændres til blåviolet (pH-værdi 10-11), hvorefter blandingen henstilles i 30 minutter (hydrolyse). Ved hjælp af silicageltyndtlagskromatografering under anvendelse af et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (1:1) konstateres en formindskelse 25 af Rf-værdien. Reaktionsblandingen neutraliseres ved tilsætning af et lille stykke fast carbondioxid, hvorefter den ekstraheres med chloroform. Chloroformlaget vaskes med vand, tørres og koncentreres til tørhed. Den fremkomne remanens renses ved præparativ tyndtlagskromatografering 30 som beskrevet ovenfor i forbindelse med fremgangsmåde (a).

Der fås 16,3 mg 4'-O-tetrahydrofuranyl-adriamycin i form af et rødt pulver.

Udbytte 43%, smeltepunkt: 189-194°C.

DK 160616B

: 28 PMR (CDC13/ ppm): 1,25-1,27(6'-H), 1,67-2,30 (furan), 4,07-4,08(4-H), 5,17 og 5,38(furan, anomer), 5,30(1'-H), 5,51(7-H), 7,30-5 8,07(1-H - 3-H).

Eksempel 2.

Fremgangsmåde til fremstilling af 4'-O-tetrahydrofuranyl- j

adriamycin a og b. I

i 40 mg af det i ifølge eksempel 1 fremstillede 4*-0-tetra- j i 10 hydrofuranyl-adriamycin underkastes præparativ rekromato- j grafering under anvendelse af silicagel (Merck Co.) og et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (15:1)* Der anbringes mindre end 1 mg pr. plade på en silicagelplade på 20 x 20 cm og med en tykkelse 15 på 0,25 mm, og der fremkaldes tre gange for at opnå god adskillelse. Båndet svarende til Rf-værdien 0,20 skrabes ud af silicagelpladen, materialet elueres med en blanding af chloroform og methanol (1:1), og der koncentreres til tørhed. Der fås 11,0 mg af forbindelse a med følgende egen-20 skaber:

Smeltepunkt: 189-191°C, [a]D +175° (CHCl^/ C = 0,2).

PMR (CDC13, ppm): 1,25(6'-H), 1,67-2,37(furan), 4,07(4-H), 5,17(furan, anomer), 25 5,30.( 11 -H) , 5,51 (7-H) , 7,30- 8,06 (1-H - 3-H).

Ud fra materialet med Rf-værdien 0,22 fås 12,1 mg af forbindelse b med følgende egenskaber:

Smeltepunkt: 190-192°C, [α]β +150° (CHC13, 30 C = 0,2) .

PMR (CDC13, ppm): 1,27(6'-H), 1,67-2,30(furan), 4,08(4-H), 5,30(1'-H), 5,38

DK 160616 B

29 (furan, anomer), 5,51(7-H), 7,30-8,07(1-H - 3-H).

Eksempel 3.

Fremgangsmåde til fremstilling af 4'-0-(6-acetoxymethyl-5 tetrahydropyranyl)-adriamycin.

(a) 150 mg (0,18 mmol) af p-toluensulfonatet af 14-0-phenylacetyl-adriamycin opløses i 2,0 ml tør dimethyl-formamid, der tilsættes 0,2 ml 2-acetoxymethyl-3,4-dihydro-2H-pyran og 15 mg (0,09 mmol) p-toluensulfonsyre, hvor-10 efter blandingen henstilles i 24 timer ved stuetemperatur [41-0-(6-acetoxymethyltetrahydropyranylering)]. Pletter af udgangsmaterialet og produktet med en Rf-værdi på 0,51 påvises i reaktionsblandingen ved hjælp af silicagel-tyndtlagskromatografering under anvendelse af et opløs-15 ningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1). Reaktionsblandingen hældes i 20 ml vand, neutraliseres med natriumhydrogencarbonat og ekstraheres to gange med 30 ml chloroform. Chloroformlaget tørres over vandfrit natriumsulfat og kromatograferes på en 20 søjle af 10 g silicagel (Merck Co. kiselgel nr. 100), og søjlen vaskes med 100 ml chloroform. Produktet elueres successivt med en blanding af chloroform og methanol (10:1) og påvises ved hjælp af tyndtlagskromatografering. Fraktionen med en Rf-værdi på 0,51 opsamles, koncentreres til 25 tørhed, og der fås 100,2 mg 14-0-phenylacetyl-4'-0-(6-acetoxymethyltetrahydropyranyl)-adriamycin i form af et rødt fast stof.

Udbytte 68%.

PMR (CDC13, ppm): 1,24-1,34(6'-H), 2,08(acetyl), 3,83, 7,40(phenylacetyl), 4,08 30 (4'-H), 4,95(pyran, anomer), 5,25(14-H), 5,54(7-H), 7,30-8,08(1-H - 3-H).

DK 160616 B .

i 30 (b) Det ovenfor fremstillede stof opløses derpå i 20 ml acetone under omrøring, der tilsættes 10 ml vand og 0,5 ml 10%1 s kaliumcarbonatopløsning, hvorpå der hydrolyseres i 30 minutter. Ved tyndtlagskromatografering påvises et pro- j 5 dukt med Rf-værdien 0,41. Til reaktionsblandingen sættes et stykke fast carbondioxid til neutralisering, og der fo- j retages destillation til fjernelse af acetonen under formindsket tryk. Det dannede vandige lag ekstraheres tre gange med 10 ml chloroform pr. gang. Chloroformlagene 10 hældes sammen, vaskes med vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed, hvorved der fås et rødt fast stof. Det faste stof renses yderligere ved præparativ tyndtlagskromatografering under anvendelse af silicagelplader fra firmaet Merck Co. på 20 x 20 cm og med 15 en tykkelse på 2 mm. Der anvendes et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1), og der foretages reekstraktion fra fraktionen svarende til Rf-værdien 0,41. Der fås 26,9 mg 4'-0-(6-acetoxy-methyltetrahydropyranyl)-adriamycin i form af et rødt pul-20 ver.

Udbytte 31%, smeltepunkt: 174-178°C.

PMR (CDC13, ppm): 1,19-1,40(6'-H), 2,06, 2,10 (OAc), 4,11(4-0Me), 4,78(14-H), 5,55(7-H), 7,35-8,10(1-H -25 3-H).

Eksempel 4.

Fremgangsmåde til fremstilling af 41-0-(1-ethyloxyethyl)-adriamycin a og b.

(a) 200 mg af p-toluensulfonatet af 14-0-phenylacetyl-30 adriamycin opløses i 4,0 ml tørtdimethylformamid, der tilsættes 0,2 ml et-hylvinylether og p-toluensulfonsyre som katalysator, hvorpå blandingen henstilles i 1,5 timer ved stuetemperatur (4'-0-ethyloxyethylering). Ved tyndtlagskromatografering af reaktionsblandingen på silicagel under

DK 160616 B

31 anvendelse af et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1), bekræftes det, at udgangsmaterialet er forsvundet, og at der er dannet forbindelser med Rf-værdierne 0,36 og 0,39. Reaktionsblandin-5 gen hældes i 20 ml vand, der tilsættes natriumhydrogen-carbonat til regulering af blandingens pH-værdi til 8, hvorefter der ekstraheres med 60 ml chloroform. Chloroformlaget tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres under formindsket tryk, hvorved der fås et rødt materiale, lo Efter rensning af materialet ved præparativ tyndtlagskro-matografering under anvendelse af to silicagelplader på 20 x 20 cm og med en tykkelse på 2 mm samt under anvendelse af et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1) fås der 134 mg 14-0-phenyl-15 acetyl-4'-0-(1-ethyloxyethyl)-adriamycin fra båndet med Rf-værdien 0,36-0,39 i form af et rødt pulver.

Udbytte 76%.

PMR (CDClg, ppm): 1/21, 3,62(1'-0-ethyl), 1,40 (2'-H), 3,81, 7,38(phenyl-20 acetyl), 4,02(4-0-methyl), 5,64, 5,94(1'-H), 5,24(14-H), 5,50(7-H),7,25-8,02(1-H - 3-H) .

(b) Den ovenfor fremstillede forbindelse opløses derpå i 25 40 ml acetone, der tilsættes 20 ml vand og 150 g vandfrit kaliumcarbonat, idet der omrøres grundigt (hydrolyse).

Ved hjælp af silicageltyndtlagskromatografering under anvendelse af et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1) bekræftes det, at 30 stofferne med en Rf-værdi på 0,36 og 0,39 gradvis forsvinder, og der dannes produkter med Rf-værdier på 0,28 og 0,21. Efter en reaktionstid på 20 minutter neutraliseres reaktionsblandingen med et stykke fast carbondioxid, og blandingen destilleres til fjernelse af acetonen. Det 35 fremkomne vandige lag ekstraheres to gange med 30 ml chloro-

DK 160616 B

32 : 'form, og chlorofomlaget vaskes med vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til en rød remanens.

Under anvendelse af samme fremgangsmåde som beskrevet oven- - for renses remanensen ved præparativ silicageltyndtlags- j 5 kromatografi under anvendelse af en blanding af chloroform i og methanol (15:1 første gang og 9:1 anden gang til op-' nåelse af god adskillelse). Båndet med Rf-værdien 0,21 afskrabes fra silicageltyndtlagspladen og ekstraheres med en blanding af chloroform og methanol (1:1), og ekstrakten 10 koncentreres, hvorved fås 13,0 mg 41-O-(1-ethyloxyethyl)-adriamycin a i form af et rødt pulver.

Udbytte 13%, smeltepunkt: 205-215°C.

PMR (CDC13, ppm): 1,15, 3,58(l-OEt), 1,40(2'-H), 3,58(2'-H), 4,06(4-OMe), 15 4,65(1'-H), 4,76(14-H), 5,25 (l'-H), 5,51(7-H), 7,25-8,07 (1-H - 3-H).

Fra båndet med Rf-værdien 0,28 fås 11,2 mg 4'-0-(1-ethyloxyethyl) -adriamycin b med de nedenfor anførte data: 20 Udbytte 11%, smeltepunkt: 190-200°C.

PMR (CDC13, ppm): 1,22, 3,63(l'-OEt), 4,08(4-H), 4,76(14-H), 4,93(l'-H), 5,27 (l'-H), 5,50(7-H), 7,22-8,88 (1-H - 3-H).

25 Eksempel 5.

Fremgangsmåde' til fremstilling af 4' -0- (1-butyloxyethyl) -adriamycin a og b.

(a) 145,6 mg af p-toluensulfonatet af 14-acetyl-adriamycin opløses i en blanding af 2 ml absolut DMS0 og 4 ml absolut 30 dioxan, og der tilsættes yderligere 1,6 ml n-butylvinyl- ether og derpå 0,396 ml 0,1 N p-toluensulfonsyre-dioxanopløs-ning under isafkøling. Efter omrøring i 35 minutter ved

DK 160616 B

33 stuetemperatur hældes reaktionsblandingen i 50 ml ethyl-acetat, hvorpå den vaskes to gange med 30 ml 1%'s natrinm-hydrogencarbonatopløsning og tre gange med 30 ml 5%'s vandig natriumchloridopløsning. Det vandige lag ekstraheres med 5 50 ml ethylacetat, og opløsningsmiddelekstrakterne kombi neres og tørres over vandfrit natriumsulfat, hvorefter der koncentreres under formindsket tryk til dannelse af et olieagtigt stof.

Det olieagtige stof kromatograferes på en silicagelsøjle 10 (Merck Art. 7734, 4 g, opløsningsmiddel: (1) CHCl^ 60 ml, (2) CHClgJ methanol = 10:1, 30 ml), og der fås 141 mg fra eluatet fra chloroform-methanol-blandingen. Dette produkt renses yderligere ved præparativ tyndtlagskromatografe-ring (Merck Art. 5744, opløsningsmiddelsystem CHC13: 15 methanol = 10:1) og der fås 4'-0-(1-butyloxyethyl)-adriamycin a og b.

Forbindelse a: 33,5 mg.

Forbindelse b: 40,5 mg.

(b) Deacetylering.

20 40,5 mg 4'-0-(1-butyloxyethyl)-adriamycin b opløses i 4 ml methanol og 1 ml vand, og der tilsættes 0,23 ml 1 N vandig kaliumcarbonatopløsning til ændring af opløsningen til en blåviolet farve. Efter 8 minutters reaktionstid neutraliseres reaktionsblandingen med et stykke fast carbondioxid, 25 der tilsættes 60 ml vand, ekstraheres med 30 ml og 20 ml x 3 chloroform·,· tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres under formindsket tryk. Ved præparativ tyndtlags-kromatografering (Merck Art. 5744, opløsningsmiddelsystem CHC1,: methanol = 10:1) fås 14,2 mg 4!-0-(1-butyloxyethyl)-

O

30 adriamycin b og 10,7mg af forbindelse a.

i

Forbindelse a.

Smeltepunkt: 168-175°C.

DK 160616 B

34

Specifik drejning (C = 0,1 i chloroform) , [α]ρ5 : +157°.

UV- og synligt absorp- i 5 tionsspektrum i/ \ methanol λ : 234(585), 251(405) max 1 'cm ^ 288(155), 480(187) 495(190), 530(116) i 575(19).

10 PMR (CDC13, ppm): 0,92 (t, 3H) -CH2CH3 i 1,31 (d, 3H) C5'-CH3 1 1,38 (d, 3H) C4'-OCHCH3 2,91 (d, IH)1) ' 3.21 (d, IH)J 2 15 4,03 (s, 3H) C4-OCH3 4,74 (s, 2H) C14-CH2 4,89 (q, IH) C4'-0CHCH3

5.22 (bs, IH) C7-H

5,48 (bs, IH) Cl'-H

20 7,25-7,98 (m, 3H) aromatisk proton.

Forbindelse b.

Smeltepunkt: 155-160°C.

Specifik drejning (C = 0,1 i chloroform) 25 [α]£5 : +188°.

UV- og synligt absorptionsspektrum i x >v methanol lmax : 234 (533), 251(371) h™ 288(140), 480(153) 30 495(172), 530(106) 575(19).

DK 160616 B

35 PMR (CDC13, ppm): 0,91 (t, 3H) -CH2CH3 1.27 (d, 3H) C5'-CH3

1,40 (d, 3H) C4'-OCHCH3 2,95 (d, ΙηΛ C10_CH

5 3,26 (d, IH)] 4,06 (s, 3H) C4-OCH3 4,61 (q, IH) C4'-OCHCH3 4,74 (s, 2H) C14-CH2

5.27 (bs, IH) C7-H

10 5,50 (bs, IH) Cl'-H

7,31-8,02 (m, 3H) aromatisk proton.

Eksempel 6.

Fremgangsmåde til fremstilling af 4'-0-(1-isobutyloxy)-15 adriamycin a og b.

(a) 150 mg af p-toluensulfonatet af 14-O-acetyl-adria-mycin opløses i 3 ml vandfrit dioxan og 1,5 ml vandfrit dimethylsulfoxid, der tilsættes 0,7 ml isobutylvinylether og 0,3 ml af en 0,1 N p-toluensulfonsyre-dioxanopløsning, 20 hvorefter der omrøres i 40 minutter ved stuetemperatur (23°C). Reaktionsblandingen fortyndes med 50 ml ethylacetat, vaskes med to gange 30 ml 1%'s vandig natriumhydrogen-carbonatopløsning og derpå med to gange 30 ml vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres under for-25 mindsket tryk. Den fremkomne olieagtige remanens kromato-graferes på en silicagelsøjle (Merck Art. 7734, 4 g, CHC13—> CHC13: methanol = 10:1), og fraktionerne indeholdende hovedproduktet opsamles og koncentreres til tørhed, hvorved fås 125,5 mg af et orangefarvet pulver. Pulveret [ 30 underkastes præparativ tyndtlagskromatografering (Merck !

Art. 5744, 12 plader, CHC13: methanol = 10:1) til adskil- j lelse og rensning, og 14-0-acetyl-4'-0-(1-isobutyloxyethyl)- 36

DK 16 O 616 B

adriamycin a og b fås i følgende mængder:

Forbindelse a: 40,4 mg.

Forbindelse b: 51,7 mg.

(b) Deacetylering ved C-14-stillingen.

5 40,4 mg 14-0-acetyl-4'-0-(1-isobutyloxyethyl)-adriamycin a fremstillet ovenfor under (a) opløses i 4 ml methanol, der tilsættes 2 ml vand og 0,36 ml 1 N vandig kaliumcarbonat-opløsning og omrøres i 20 minutter ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen neutraliseres med fast carbondioxid, 10 ekstraheres med 60 ml chloroform og vaskes derpå med 50 ml 5%'s vandig natriumchloridopløsning. Det vandige lag ekstraheres yderligere to gange med 20 ml chloroform, og de kombinerede chloroformekstrakter tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed. 35,8 mg af den 15 dannede faste remanens kromatograferes ved hjælp af præparativ tyndtlagskromatografi (Merck Art. 5744, 4 plader, CHClg:methanol = 10:1), og der fås 12,5 mg 4'-0-(l-iso-butyloxyethy1)-adriamycin a.

Smeltepunkt: 180-185°C(sønderdeling).

20 Specifik drejning (C = 0,1 i chloroform) [α3^5 : +157°.

PMR (CDC13, ppm): 0,93 (d, 6H) CH(CH3)2 1,32 (d, 3H) C5'-CH3 25 1,38 (d, 3H) C4'-OCHCH3

2,86 (d, IH)} C10_CH

3,16 (d, 1H)J 2

3,66 (bs, IH) C4'-H

4,02 (s, 3H) C4-OCH3 37

DK 160616 B

4.74 (s, 2H) C14-CH2 4,88 (q, IH) C4'-OCHCH3

5.18 (bs, IH) C7-H

5.48 (bs, IH) Cl'-H

5 7,25-7,92 (m-3H) aromatisk proton.

51,7 mg 14-0-acetyl-41-O-(1-butyloxyethyl)-adriamycin b fremstillet som beskrevet ovenfor under (a) opløses i 5 ml methanol, der tilsættes 1,5 ml vand og 0,39 ml 1 N van-10 dig natriumcarbonatopløsning og omrøres i 15 minutter ved stuetemperatur. Ved anvendelse af den ovenfor i forbindelse med forbindelse a beskrevne fremgangsmåde fås 18,1 mg 4'-0-(1-butyloxyethyl)-adriamycin b.

Smeltepunkt: 175-180°C (sønderdeling).

15 Specifik drejning (C = 0,1 i chloroform) [<x]p5 : +191°.

PMR (CDC13, ppm): 0,90 (d, 6H) CH(CH3)2 1,27 (d, 3H) C5'-CH3 20 1,40 (d, 3H) C4'-OCHCH3 2,84 (d, 1ΗΠ c10-cho 3,16 (d, 1H)J 1

3,26 (t, 2H) 0CH2CH

3,58 (bs, IH) C4'-H

25 4,01 (s, 3H) C4-OCH3 4,60 (q, IH) 4'-OCHCH3 4.74 (s, 2H) C14-CH2

5.18 (bs, IH) C7-H

5.48 (bs, IH) Cl'-H

aromatisk proton.

30 7,25-7,90 (m, 3H) 38

DK 160616 B

Eksempel 7.

Fremgangsmåde til fremstilling af 4'-O-[1-(6-methylheptyl-oxy)-ethyl]-adriamycin a og b.

(a) 150 mg 14-O-acetyl-adriamycin—p-toluensulfonat op- 5 løses i 2 ml absolut DMSO og 4 ml absolut dioxan, der tilsættes 1,6 ml 6-methylheptylvinylether og 0,396 ml 0,1 N p-toluensulfonsyreopløsning i dioxan under isafkøling, og der omrøres i 45 minutter ved stuetemperatur. Under anvendelse af den i eksempel 8 (a) beskrevne fremgangsmåde iso-10 leres 14-0-acetyl-4,-0-(6-methylheptyioxyethyl)-adriamycin a og b.

Forbindelse a: 32,7 mg.

Forbindelse b: 57,4 mg.

(b) Deacetylering.

15 44,2 mg 14-0-acetyl-41-0-[1-(6-methylheptyloxy)-ethyl]- adriamycin b opløses i 5,8 ml methanol og 1,3 ml vand, der tilsættes 0,39 ml 1 N kaliumcarbonatopløsning til dannelse af en blåviolet farve, hvorefter der henstilles i 6 minutter ved stuetemperatur. Under anvendelse af 20 den i eksempel 8 (b) beskrevne fremgangsmåde isoleres 20,1 mg 41-0-(6-methylheptyloxy)-ethyl-adriamycin b.

13 mg af forbindelse a fremstilles på samme måde som beskrevet ovenfor.

Forbindelse a.

25 Smeltepunkt: 143-147°C.

Specifik drejning (C = 0,1 i chloroform) [α]£5 : +178°.

PMR (CDC13, ppm): 1,32 (d, 3H) C5'-CH3 30 1,38 (d, 3H) C4'-OCHCH3

DK 160616 B

39 2,96 (d, 1H)“) C1 3,26 (d, IH)) 4.06 (s, 3H) C4-OCH3

4.75 (s, 2H) C14-2H

5 4,90 (q, IH) C4'-OCHCH3

5,28 (bs, IH) C7-H

5.51 (bs, IH) Cl'-H

7,31-8,03 (m, 3H) aromatisk proton.

10 Forbindelse b.

Smeltepunkt: 145-150°C.

Specifik drejning ((C = 0,1 i chloroform) [α]^5 : +183°.

15 PMR (CDC13, ppm): 1,27 (d, 3H) C5'-CH3 1,40 (d, 3H) C4'-OCHCH3 2,93 (d, 1ΗΠ C1 3.25 (d, 1H)| 4.06 (s, 3H) C4-OCH3 20 4,61 (q, IH) C4'-OCHCH3 4.75 (s, 2H) C14-CH2

5.25 (bs, IH) C7-H

5.52 (bs, IH) Cl'-H 7,30-8,00 (m, 3H) 25 aromatisk proton. j

Eksempel 8. j

Fremgangsmåde til fremstilling af 41-0-(1-cyclohexyloxy- j

ethyl)-adriamycin a og b. I

(a) 210 mg af p-toluensulfonatet af 14-0-acetyl-adriamycin 1 30 opløses i 4,2 ml vandfrit dioxan og 2,1 ml vandfrit di- 40

DK 160616 B

'methylsulfoxid, der tilsættes 0,84 ml cyclohexylvinylether -og 0,417 ml 0,1 N p-toluensulfonsyreopløsning i dioxan, hvorefter reaktionen forløber under omrøring i 20 minutter ved stuetemperatur. Derpå oparbejdes reaktionsblandingen ana-5 logt med den i eksempel 5 (a) beskrevne fremgangsmåde, og der fås 56,9 mg 14-0-acetyl-4'-O-cyclohexyloxyethyl-adria-mycin a og 60,7 mg 14-0-acetyl-41-0-cyclohexyloxyethyl-adriamycin b.

(b) Deacetylering ved C-14-stillingen.

10 56,9 mg 14-0-acetyl-4'-0-cyclohexyloxyethyl-adriamycin a og 60,7 mg 14-0-acetyl-41-O-cyclohexyloxyethyl-adriamycin b fremstillet ovenfor under (a) underkastes samme behandling som beskrevet i eksempel 5 (b), og der fås 20,7 mg 41-O-cyclohexyloxyethyl-adriamycin a i form af et orange-15 farvet pulver og 24,2 mg 41-O-cyclohexyloxyethyl-adria-mycin b i form af et orangefarvet pulver.

Forbindelse a.

Smeltepunkt: 175-182°C (sønderdeling).

Specifik drejning 20 (C = 0,1 i chloroform) [α]£5 : +178°.

PMR (CDC13, ppm): 1,32 (d, 3H) C5'-CH3 1,38 (d, 3H) C4'-OCHCH3 2,92 (d, IHrt C1 25 3,23 (d, IH)) 4,05 (s, 3H) 4-OCH3 4,76 (s, 2H) C14-CH2 4,97 (q, IH) C4'-OCHCH3

5,23 (bs, IH) C7-H

7,30-8,00 (m, 3H)

30 5,49 (bs, IH) Cl'-H

DK 160616 B

41 aromatisk proton.

Forbindelse b.

Smeltepunkt: 177-181°C

(sønderdeling).

5 Specifik drejning (C = 0,1 i chloroform) [α]25 : +172°.

PMR (CDC13, ppm): 1,26 (d, 3H) C5'-CH3 1,40 (d, 3H) C4'-OCHCH3 10 2'87 (d' 1H)] ClO-CH, ” 3,18 (d, IH)) 2 4,02 (s, 3H) 4-OCH3 4,68 (q, IH) C4'-OCHCH3 4,74 (s, 2H) C14-CH2

15 5,19 (bs, IH) C7-H

5,49 (bs, IH) Cl'-H 7,26-7,94 (m, 3H) aromatisk proton. ,

Eksempel 9.

20 Fremgangsmåde til fremstilling af 41-0-(tetrahydro- furanyl)-daunomycin. j i 56 mg (0,1 mmol) daunomycin-hydrochlorid opløses i tør di-methylformamid, der tilsættes 0,1 ml dihydrofuran og en lille mængde p-toluensulfonsyre som katalysator, hvoref-25 ter blandingen henstilles i 8 timer ved stuetemperatur (4'-O-tetrahydrofuranylering). Reaktionsblandingen hældes i 20 ml vand, blandingen neutraliseres med natriumhydrogen-carbonat og ekstraheres med chloroform. Chloroformlaget tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til 30 tørhed, hvorved fås en rød remanens. Ved præparativ tyndt- • i

DK 160616B

42 .

lagskromatografering under anvendelse af silicagel (Merck Co.) og et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1) giver produk- i tet to bånd med Rf-værdi 0,29 og 0,31, men disse bånd j 5 kunne ikke adskilles fuldstændigt fra hinanden.

Båndene svarende til produktet skrabes ud af silica-gelpladen og elueres med en blanding af chloroform og methanol (1:1), og eluatet koncentreres under formindsket tryk, hvorved der fås 12,4 mg 4'-O-(tetrahydrofuran-10 yl)-daunomycin i form af et rødt pulver.

Udbytte 21%, smeltepunkt: 20l-204°C

(sønderdeling).

PMR (CDC13, ppm): 1,29(6'-H), l,70-2,30(furan- 3,4-H), 2,44(14-H), 4,11(4-H), 15 5,28(l'-H), 5,43(furan, anomer), 5,54(7-H), 7,33-8,11 (l-H - 3-H).

Eksempel 10.

Fremgangsmåde til fremstilling af 41-O-(6-acetoxymethyl-20 tetrahydropyrany1)-daunomycin.

112 mg (0,2 mmol) daunomycin-hydrochlorid opløses i 2 ml tør dimethylformamid, der tilsættes 15 mg p-toluensulfon-syre og 0,3 ml 2-acetoxymethyl-3,4-dihydro-2H-pyran, hvorefter blandingen henstilles natten over ved stuetempera-25 tur (4'-O-6-acetoxymethyltetrahydropyranylering) . Reaktionsblandingen hældes i 20 ml 1%'s vandig natriumhydro-gencarbonatopløsning, og der ekstraheres med 30 ml chloroform.

Det vandige lag ekstraheres med to gange 10 ml chloro-30 form. De kombinerede chloroformlag vaskes fire gange med 10 ml vand, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres under formindsket tryk, hvorved råproduktet fås.

DK 160616B

43

Produktet fremkaldes på et præparativt tyndtlagskromatogram (én plade, 20 x 20 cm, tykkelse 2 mm) under anvendelse af et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1), og båndet svarende til pro-5 duktet med Rf-værdien 0,47 skrabes ud af silicageltyndt-lagskromatogrampladen og reekstraheres med en blanding af chloroform og methanol (1:1). Den fremkomne røde ekstrakt koncentreres til tørhed, og der fås 55,3 mg 4'-0-(6-acet-oxymethyltetrahydropyranyl)-daunomycin i form af et rødt 10 pulver.

Udbytte 40%, smeltepunkt: 198-201°c.

PMR (CDC13, ppm): 1,21-1,42(6'-H), 2,07-2,11 (OAc), 2,43(14-H), 4,10(4-0Me), 5,53(7—-H), 7,29-8,06(IH - 3-H).

15 Eksempel 11

Fremgangsmåde til fremstilling af 41-0-(6-methoxytetra-hydropyranyl)-daunomycin a og b.

j 112 mg (0,2 mmol) daunomycin-hydrochlorid opløses i 3 ml tørtdimethylformamid, der tilsættes 0,15 ml 2-methoxy-20 3,4-dihydro-2H-pyran og 10 mg p-toluensulfonsyre, hvor efter blandingen henstilles natten over ved stuetemperatur (41-0-(6-methoxytetrahydropyranylering). Reaktionsblandingen hældes i 20 ml vand, blandingen indstilles på pH-værdien 8,0 med natriumhydrogencarbonat og ekstraheres 25 fire gange med 10 ml chloroform pr. gang. Chloroformekstrakterne hældes sammen, tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres til tørhed, hvorved der fås en rød remanens. Remanensen renses yderligere ved præparativ tyndt-lagskromatografi under anvendelse af silicagel (Merck Co., 30 én plade, 20 x 20 cm, tykkelse 2 mm) og et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1). Et bånd med Rf-værdien 0,38 skrabes ud af silicagelpladen og reekstraheres med en blanding af chloroform og methanol (1:1). Den fremkomne røde ekstrakt koncen-

DK 160616 B

44 treres under formindsket tryk/ og der fås 23/1 mg af forbindelse a i form af et rødt pulver.

O I

Udbytte 18%, smeltepunkt: 189-191 C. j PMR (CDC13/ ppm): 1,29(6'-H), 2/40(3-H)r j 5 3/45(5'-OMe)/ 4/09(4-0Me), 4/83(1*-H)/ 5,30(1'-H), 5,58(7—H), 7,28-8,08(1-H - 3-H) .

10 Under anvendelse af samme fremgangsmåde som beskrevet ovenfor i forbindelse med forbindelse a fås 19,4 mg af forbindelse b i form af et rødt pulver.

Udbytte 15%, smeltepunkt: 198-199°C.

PMR (CDC13, ppm): 1,39(6'-H), 2,44(14-H), 3,46 15 (pyran-OMe), 4,11(4-H), 4,89 (pyran,anomer), 5,22(1'-H), 5,53(7-H), 7,28-8,14(1-H - 3-H).

Eksempel 12

Fremgangsmåde til fremstilling af 4'-O-(6-carbomethoxy-20 tetrahydropyranyl)-daunomycin.

112 mg (0,2 mmol) daunomycin-hydrochlorid opløses i 3,0 ml tør dimethylformamid, der tilsættes 0,1 ml 2-carbomethoxy- 3,4-dihydro-2H-pyran og 34 mg (0,2 mmol) p-toluensulfon-syre, og blandingen henstilles i- 10 timer ved stuetem-25 peratur i mørke (4'-0-6-carbomethoxytetrahydropyranylering). Reaktionsblandingen hældes i 20 ml vand, blandingen indstilles på pH-værdien 8 med natriumhydrogencarbonat og ekstraheres fire gange med 10 ml chloroform pr. gang.

Chloroformekstrakterne hældes sammen, vaskes to gange med 30 vand og tørres over vandfrit natriumsulfat. Chloroformekstrakten koncentreres under formindsket tryk, og den fremkomne remanensen renses ved præparativ tyndtlagskro-matografering under anvendelse af en silicagelplade (Merck

DK 160616 B

45

Co.) og et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (9:1). Der påvises nye produkter mellem Rf-værdierne 0,35 og 0,37 på tyndtlagskroma-togrammet, og disse er en blanding af fire komponenter, som 5 ikke kan adskilles fuldstændigt. De tilsvarende bånd i tyndtlagskromatogrammet skrabes ud af silicagelpladen og ekstraheres med en blanding af chloroform og methanol (1:1). Ekstrakten koncentreres til tørhed, og der fås 25,9mg af et rødt pulver.

10 Udbytte 19%, smeltepunkt: 190-193°C.

PMR (CDC13, ppm): 1,23-1,40(6'-H), 2,43(14-H), 3,78(COOCH3), 4,09(4-OMe), 4,74, 5,07(pyran, anomer), 5,31(1'-H), 5,54(7-H), 7,30-15 8,06(1-H - 3-H).

Eksempel 13.

Fremgangsmåde til fremstilling af 4'-0-(1-ethyloxyethyl)-daunomycin a og b.

112 mg (0,02 mmol) daunomycin-hydrochlorid opløses i 3 ml 20 tørtdimethylformamid, 0,1 ml ethylvinylether og 2 mg p-toluensulfonsyre, og blandingen henstilles i 10 timer ved stuetemperatur (1-ethyloxyethylering). Ved tyndtlags-kromatografering konstateres nye pletter af produktet ved Rf-værdierne 0,31 og 0,34 på silicagelpladen. Som opløs-25 ningsmiddelsystem anvendes en blanding af chloroform og methanol (9:1). Reaktionsblandingen hældes i 20 ml vand, blandingen indstilles på pH-værdien 8 med natriumhydrogen-carbonat og ekstraheres med 30 ml chloroform. Chloroformlaget tørres og koncentreres under formindsket tryk. Den 30 fremkomne røde remanens renses ved præparativ tyndtlags-kromatografering under anvendelse af silicagel (Merck Co., én plade, 20 x 20 cm, tykkelse 2 mm) og et opløsningsmiddelsystem bestående af en blanding af chloroform og methanol (15:1). Båndet svarende til Rf-værdien 0,31 udskrabes

DK 160616 B

: 46 og ekstraheres med en blanding af chloroform og methanol (1:1) . Den røde ekstrakt koncentreres til tørhed, og der fås 33,0 mg af forbindelse a i form af et rødt stof.

Udbytte 27%, smeltepunkt: 208-210°C.

5 PMR (CDC13, ppm): 1,76, 3,59(1'-OEt), 1,39(2'-H), 1,79(8-H), 2,41(14-H), 4,07 (4-0Me), 4,64(1'-H), 5,25(1'-H), 5,51(7-H), 7,25-8,07(1-H - 3-H).

Båndet svarende til Rf-værdien 0,34 underkastes samme be-10 handling som beskrevet ovenfor, og der fås 31,8 mg af forbindelse b i form af et rødt pulver.

Udbytte 26%, smeltepunkt: 200-204°C.

PMR (CDC13, ppm): 1,20, 3,64(1*-OEt), 1,40(2'-H), 2,41(14-H), 4,09(4-H), 4,94 15 (l'-H), 5,26(1'-H), 5,50(7-H), 7,26-8,07(1-H - 3-H).

Eksempel 14

Fremgangsmåde til fremstilling af 4'-0-(1-isobutyloxyethyl)-daunomycin a og b.

20 60 mg (0,106 mmol) daunomycin-hydrochlorid opløses i 12 ml absolut THP og 1,5 ml absolut DMSO, der tilsættes 1,2 ml 2-isobutylvinylether og 0,21 ml 0,1 N p-toluensulfonsyre-opløsning i THF, hvorefter der omrøres i 3 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen opløses i 100 ml ethyl-25 acetat, vaskes med 100 ml 5%'s vandig natriumchloridop-løsning indeholdende 0,1 N natriumhydrogencarbonat, hvorefter blandingen vaskes to gange med 100 ml 5%'s vandig natriumchloridopløsning. Opløsningsmiddellaget tørres over vandfrit natriumsulfat og koncentreres under formindsket 30 tryk. Det fremkomne olieagtige stof behandles på samme måde som beskrevet i eksempel 16, og der fås 16,0 mg 4'- 0-(1-isobutyloxyethyl)-daunomycin a og 19,1 mg 4'-0-(1-

DK 160616 B

47 isobutyloxyethyl)-daunomycin b.

Forbindelse a.

Smeltepunkt: 143-148°C.

Specifik drejning 5 (C = 0,1 i chloroform) [α]^5 : +190° PMR (CDC13, ppm): 0,92 (d, 6H) CH(CH3)2 1,33 (d, 3H) C5'-CH3 1,37 (d, 3H) C4'-OCHCH3 10 2,41 (s, 3H) C13-CH3

2,90 (d, 1H)J cl0_c 3,22 (d, 1H)J

3.27 (t, 2H) 0CH2CH

3,62 (bs, IH) C4'-H

15 4,07 (S, 3H) C4-OCH3 4,89 (q, IH) C4'-OCHCH3

5.28 (bs, IH) C7-H

5,52 (bs, IH) Cl'-H

7,31-8,06 (m, 3H) 20 aromatisk proton.

Forbindelse b.

Smeltepunkt: 141-146°C.

Specifik drejning (C = 0,1 i chloroform) 25 [α]ρ5 : +185°.

ΡΠΗ (CDC13, ppm): 0,90 (d, 6H) CH(CH3)2 1,25 (d, 3H) C5'-CH3 j 1.39 (d, 3H) C4'-OCHCH3 2.40 (s, 3H) C13-CH3

DK 160616 B

48 2'89 (d' 1H>] C10-CH, 3,22 (d, IH)J 2

3.26 (t, 2H) OCH2CH

3,54 (bs, IH) C41 —H , j 5 4,06 (s, 3H) C4-OCH3 i 4,61 (g, IH) C4'-OCHCH-

— J I

5.27 (bs, IH) C7-H |

5,52 (bs, IH) Cl'-H

7,31-8,04 (m, 3H) \ 10 aromatisk proton.

Eksempel 15. !

Fremgangsmåde til fremstilling af 41-0-(1-butyloxyethyl)- I

daunomycin a og b.

100 mg (0,177 mmol) daunomycin-hydrochlorid opløses i en 15 blanding af 10 ml absolut THF og 2 ml absolut DMSO, der tilsættes 3 ml n-butylvinylether og 0,88 ml (0,088 mmol) 0,1 N p-toluensulfonsyreopløsning i THF, hvorefter der omrøres i to timer ved stuetemperatur. Under anvendelse af den i eksempel 14 beskrevne fremgangsmåde adskilles 20 27,1 mg 4'-0-(1-butyloxyethyl)-daunomycin a og 34,8 mg 4'-0-(1-butyloxyethyl)-daunomycin b.

Forbindelse a.

Smeltepunkt: 141-145°C.

Specifik drejning 25 (C = 0,1 i chloroform) [α]25 : +167°.

PMR (CDCl^, ppm): 0,91 (t, 3H) -CH2CH3 1,32 (d, 3H) C5'-CH3 1,37 (d, 3H) C4'-OCHCH3 30 2,41 (S, 3H) C13-CH3

DK 160616 B

49 2,92 (d, ΙηΛ c10_ch 3,24 (d, IH)) 3,54 (m, 3H) C4'-H, OCH2~ 4,07 (S, 3H) C4-OCH3 5 4,91 (q, IH) C4'-OCHCH3

5.27 (bs, IH) C7-H

5.52 (bs, IH) Cl'-H

7,31-8,06 (m, 3H) aromatisk proton.

10 Forbindelse b.

Smeltepunkt: 138-142°

Specifik drejning (C = 0,1 i chloroform) [α]25 : +207°.

15 PMR (CDC13, ppm): 0,89 (t, 3H) -CH2CH3 1.27 (d, 3H) C5'-CH3 1.39 (d, 3H) C4'-OCHCH3 2.40 (s, 3H) C13-CH3 20 2,89 1H^ cio-ch«

3,20 (d, IH)J

3.52 (m, 3H) C4'-H, 0CH2- 4,06 (s, 3H) C4-OCH3 4,61 (q, IH) C4’-OCHCH3

25 5,25 (bs, IH) C7-H

5,51 (bs, IH) Cl'-H

7,30-8,01 (m, 3H) |

aromatisk proton. I

Claims (1)

1. DK 160616 B Fremgangsmåde til fremstilling af anthracyclin-derivater med den almene formel ' O OH O XYT j f°H ti.) VVtV OCH3° oh 0 .--o ÆJ o nh2 R2 5 hvori R-*- betyder et hydrogenatom eller en hydroxylgruppe og R^ betyder en 1-alkyloxy- eller -cycloalkyloxyethyl-gruppe, en tetrahydrofuran-2-ylgruppe, en 6-methoxytetra-hydropyran-2-ylgruppe, en 6-carbomethoxytetrahydropy-ran-2-ylgruppe eller en 6-acetoxymethyltetrahydropyran-10 2-ylgruppe, eller syreadditionssalte deraf, kendetegnet ved, at en 1-alkyloxy- eller -cycloalkyloxyethylgruppe, en tetrahydrofuran-2-ylgruppe, en 6-methoxytetrahydro-pyran-2-ylgruppe, en 6-carbomethoxytetrahydropyran-2-ylgruppe eller en 6-acetoxymethyltetrahydropyran-15 2-ylgruppe indføres i hydroxylgruppen ved C-4*-stillingen i et anthracyclinderivat med formlen DK16C616B O OH O A I 1 . c-ch2r3 ^ Y Vy y (vin) I i noh γγγγ och3° oh 0 d HO nh2 ! hvor r3 betyder et hydrogenatom, en alkanoyloxygruppe med 2-7 carbonatomer eller en phenylacetyloxygruppe, eller | 5 en syreadditionssalt deraf, ved omsætning med dihydro-furan, et passende dihydropyranderivat eller en alkyl- i eller cycloalkylvinylether, som indeholder den tilsvarende gruppe, som skal indføres, og som kan reagere med en hydroxylgruppe, i et indifferent organisk opløsningsmid-10 del og i nærværelse af en syrekatalysator til dannelse af et anthracyclinderivat med den almene formel DK 160616 B 0 0H O „ II 14 , I I X°H (IX) VYfV O OH O OCH3 4' f£) o nh2 R2 hvor r3 betyder et hydrogenatora, en alkanoyloxygruppe med 2-7 carbonatomer eller en phenylacetyloxygruppe, har 5 den ovenfor angivne betydning, eller et syreadditionssalt deraf, hvorefter en eventuelt tilstedeværende alkanoyl-gruppe eller phenylacetylgruppe ved C-14-stillingen i derivatet med den almene formel IX fjernes ved hydroly-tisk deacylering til dannelse af et anthracyclinderivat 10 med den almene formel