DK157049B - Fremgangsmaade til podning af agrikulturelle froe med frysetoerrede mikroorganismer samt froe fremstillet herved - Google Patents

Description

DK 157049B

Det omrâde, som opfindelsen omhandler, er behandlingen af agrikulturelle og hortikulturelle fro med mikroorga-nismer for at forbedre produktiviteten.

I et antal âr har man podet plantefre med mikroorganis-5 mer for at forbedre de planter, der vokser op af froene.

F.eks. har man anvendt nitrogenfixerende bakterier til at behandle fre af bælgplanter, sâledes at de resulterende planter vil være mindre afhængige af nitrater i jorden med henblik pâ vækst.

10 Podningsteknikken kræver, at man bringer freene i kon- takt med mikroorganismer. Hyppigt anvender man en pode-væske, sasom en bakteriekultur, der er dispergeret i vand, til en sâdan kontakt. Udover mikroorganismerne har man ofte i det flydende podemiddel inkorporeret fordelagtige 15 hjælpematerialer, sasom overfladespændingsnedsættende og vækstfremmende materialer. Organismer pâ bærere, sasom terv, trækul og lignende, er blevet dispergeret i en for-tyndet, vandig sirup til tilvejebringelse af podevæsker. Materialer, der er kendt som skadelige og destruktive for 20 mikroorganismerne, freene og planterne, har være exclu- deret fra podevæskerne.

Man har pâfert podevæsker under anvendelse af mange for-skellige teknikker, herunder behandling med en opslem-ning, en pâsprejtning eller en neddykning. Man har podet 25 fre, der i en tromle er bragt i en omtumlende bevægelse, eller ved at bringe en blanding af fro og podevæsken i opslemning.

Ved frepodeprocesser er det sædvanligt at prove at frem-stille ensartet podede fro, der har en minimalt effektiv 30 dosis af organismer per fro. Denne minimale effektive dosis er det mindste antal mikroorganismer, der vil frem-bringe den onskede virkning i hver eneste vækstplante.

Denne frepopulation afhænger af de særlige fre og den særlige organisme, der anvendes-

DK 157049 B

2 I USA patent nr. 2 954 643 anvender man en fluidiseret masse for at pode fra. Podevæsken, der indeholder mikro-organismerne, indfares i en masse af fra, der holdes i en fluidiseret tilstand wed hjælp af en indifferent gas.

5 USA patent nr. 3 054 219 beskriver, hvorledes man poder fra med et overskud af mikroorganismer for at være sik-ker pâ, at der foreligger en minimal, effektiv dosis pâ fraene.

USA patent nr. 2 313 057, USA patent nr. 2 995 867 og -LO USA patent nr. 4 149 869 beskriver, hvorledes man tablet- terer fraet, d.v.s. man overtrækker fraet med materialer, der omfatter de materialer, der er gavnlige for planten.

En derfra afvigende teknik er beskrevet i USA patent nr.

3 499 748. Granulater af gips behandles med kulturer af 15 Azotobacter eller Rhizobium bakterier. Disse granulater bliver derpâ blandet med fra, og blandingen sâs pâ jorden.

I USA patent nr. 4 155 737 beskrives det, hvorledes mikroorganismer inkorporeres i en polymergel. Gelen knuses til smâ partikler og sâs med fraene.

20 Kommercialisering af pâ fra pâfarte mikroorganismer har været besværliggjort ved vanskeligheden ved at opretholde mikrobiel levedygtighed pâ terre fra, især udtarringsfal-somme bakterier af slægterne Achromobacter, Arthrobacter, Azotobacter og Pseudomonas (Bro\i/n, Ann. Rev. Phytopath, 25 12:181-97 (1974); Kloepper og Schroth, Phytopath, 71:590- 92 (1981)).

Det er opfindelsens formâl at tilvejebringe en fremgangs-mâde, der er af den i indledningen til krav 1 angivne art, og som skal tilvejebringe etffre, hvor mikroorganismerne 50 adhærerer bedre til fraet end for de produkters vedkommen- de, der hidtil har været fremstillet, samt at tilvejebringe sâledes fremstillede fra.

3

i DK 157049 B

Fremgangsmâden ifalge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 1 angivne. Det har overraskende vist sig, at fremgangsmâden ifalge opfindelsen opfylder opfindelsens formai.

5 Fraet ifalge opfindelsen, der er af den i indledningen til krav 7 angivne art, er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 7 angivne.

Opfindelsen angâr sâledes en fremgangsmâde til at pode agrikulturelle fra med frysetarrede mikroorganismer og 10 de podede fra, der fremkommer som résultat af fremgangs mâden .

Fra EP 64 720 kendes ganske vist en fremgangsmâde til at pode fra med frysetarrede mikroorganismer. Imidler-tid omfatter dette EP patentskrift ingen overtrækning 15 af fraet, sâdan som det er tilfældet ved fremgangsmâden ifalge opfindelsen.

Fra US patentskrift nr. 3 168 796 kendes ganske vist en fremgangsmâde til at pode fra med frysetarrede mikroorganismer. Imidlertid gar man i dette US patetnskrift 20 brug af en findelt uorganisk inert bærer til at bringe mikroorganismerne til adhæsion. Ved fremgangsmâden ifalge opfindelsen gar man brug af et derfra afvigende bin-demiddel, der frembringer en betydeligt bedre adhæsion mellem fraet og mikroorganismerne.

25 FR patentskrift nr. 1 350 860 og FR patentskrift nr.

1 482 817 beskriver fremgangsmâder til frysetarring af mikroorganismer. En sâdan frysetarring er dog ikke no-gen del af opfindelsen.

4

DK 157049B

Ved udavelsen af opfindelsen bliver mikroorganismer med fordelagtige egenskaber frysetûrret, dernæst pâfert pâ agrikulturelle fr0 med et bindemiddel og torret til et fugtighedsindhold pâ 3-8 vægt-?i, i afhængighed af plante-arten, ved en temperatur under ca. 45°C. Ved en anden pro-5 ces kan de fryseterrede mikroorganismer pâfares pâ de agri kulturelle fre sammen med et bindemiddel og et fyldstof.

Ved en anden variation af fremgangsmâden kan de agrikulturelle fre efter at være overtrukket eller tabletteret med bindemiddel og fyldstof podes med de frysetorrede mikroorganismer og yderligere bindemiddel.

10

Mikroorganismer, der er anvendelige i forbindelse med opfindelsen, er sâdanne, som er blevet beskrevet som tel-luriske mikroorganismer, der har en favorabel rhizosphæ-risk effekt pâ planterne. Mikroorganismer af denne type og deres virkninger pâ planter er beskrevet i USA patent 15 nr. 4 155 737.

Eksempler pâ mikroorganismer med fordelagtige virkninger omfatter, men er ikke begrænset til, Rhizobium, Entero-bacter, Spirillum, Bacillus, Pseudonomas, Azotobacter, Arthrobacter, Achromobacter og Actimomyceter. Eksempler pâ fungi omfatter Pénicillium, Trichoderma, Chaetamium 20 og dem, der danner ectomycorrhizae og vesicular-arbuscu- lar mycorrhizae. Yderligere mikroorganismer er mycopa-ratiske fungi, nematode-fangende fungi samt avirulente isolater af pathogène fungi eller bakterier, som kan kon-trollere sygdomme, der forârsages.af dermed beslægtede 25 plantepatogener.

Fre, der kan overtrækkes under anvendelse af fremgangsmâden ifolge opfindelsen, omfatter aile agrikulturelle 30 5

DK 157G49B

eller hortikulturelle fr0. Udtrykket "agrikulturelle fra" anvendes i denne sammenhæng generisk for at includere bâde agrikulturelle og hortikulturelle fra. Eksempler pâ sâdanne fra er fra af salat, broccoli, blomkâl, kâl, sel-5 leri, gulerod, lag, radise, tomat, majs, havre, græsser og prydblomster.

Frysetarring af mikroorganismerne kan gennemfares pâ en-hver af de forskellige frysetarrere, der kan fâr i hande-len. Et eksempel pâ en frysetarrer er Freeze-Dryer 5 10 (Labconco, Kansas City, Mo. 64132).

Frysetarringsprocessen kan gennemfares ved en kondensa-tortemperatur pâ under ca. -40°C, fortrinsvis ca. -76°C til ca. -65°C. Anvendelige trykintervaller er under ca.

0,25 Torr, fortrinsvis under ca. 0,025 Torr.

15 Under udavelsen af frysetarringsoperationen kan den kul- tur, der indeholder mikrorgansmerne, frysetarres direkte.

Det foretrækkes dog at fjerne overskydende medium fra cellerne, f.eks. ved centrifugering eller filtrering, og derpâ at suspendere cellerne i en væske. Man kan anvende 20 vand som den suspenderende væske. Det foretrækkes dog at suspendere cellerne i en cryoprotectant. Eksempler pâ cryoprotectanter omfatter glycerol, skummetmælk, saccharose og dimethylsulfoxid. En foretrukket cryoprotectant er en sâdan, der er fremstillet pâ basis af en vandig, 25 0,1 molær (M) saccharose, 0,05 M glycerol, 0,07 M natrium- benzoat og 0,01 M magnesiumsulfat. Cellerne suspenderes i cryoprotectanten i et forhold mellem cryoprotectant og celler pâ ca. 3:1 til ca. 1:1 pâ volumenbasis, fortrinsvis ca. 2:1. Efter at mikroorganismerne er frysetarret, 30 udvindes de som et tart pulver. Det frysetarrede produkt indeholder generelt et antal kolonidannende enheder per g (cfu/g) af starrelsesordenen 10 . Frysetarring af mi- kroorganismer og cryoprotectanter anvendt til frysetarringsprocessen er detaljeret beskrevet i "American Type

DK 157049 B

6

Culture Collection Methods" fra American Type Culture Collection, Rockville, Md.

De frysetarrede mikrorganismer pâfares ensartet pâ fraene, generelt med en lille mængde bindemiddel og fortrinsvis 5 med bindemiddel og fyldstof. Pâfaringen kan gennemfares i en roterende skâl eller cementblander eller i fluidi-seret masse. Nâr mikroorganismerne skal pâfares direkte pâ fraet, bliver fraene og mikrorganismerne sammen udsat for en omtumlende bevægelse, sâledes at mikroorganisme-10 pulveret overtrækker fraene pâ ensartet mâde. En lille mængde bindemiddel sprajtes derpâ pâ de under den omtumlende bevægelse stâende fra, hvorved mikroorganismerne bringes til at adhærere til fraene. De podede fra bliver derpâ tarret med forceret luft ved en temperatur pâ ca.

15 20°C til ca. 45°C til et fugtighedsindhold pâ ca. 3 til ca. 8 vægt-%, baseret pâ vægten af de podede fra.

Fortrinsvis pâfares de frysetarrede mikroorganismer pâ tabletterede fra, d.v.s. fra, der er overtrukket med bindemiddel og fyldstof. Ved en tabletteringsproces bliver 20 fraene bragt i en omtumlende bevægelse i et rotations- apparat, mens bindemiddel og fyldstof skiftevis tilsættes, indtil den passende starrelse af tabletteret fra opnâs.

De tabletterede fra bliver derpâ tarret med forceret luft ved en temperatur pâ ca. 30 til ca. 45°C til et fugtig-25 hedsindhold pâ ca. 3 til ca. 8 vægt-%, baseret pâ vægten af det tabletterede fra. Under denne procès kan mikroorganismerne tilsættes til frablandingen pâ ethvert tids-punkt under processen. Fortrinsvis tilsættes mikroorganismerne sâledes, at de foreligger omtrent i midten af 30 overtrækket.

Mikroorganismerne kan ogsâ pâfares pâ tidligere tabletterede fra. Dette gares ved at bringe de tabletterede fra i en omtumlende bevægelse, ved at tilfare de fryse-tarrede mikroorganismer sammen med en let besprajtning 7 af bindemiddel og ved derpâ at terre de podede, tablet-terede fre, son ovenfor beskrevet.

Den mængde podemateriale, der pâfores pâ froet, vil vari- ere med typen af organisme, FΓ0 og jord. Generelt vil 5 denne mængde podemateriale være af storrelsesordenen ca.

2 8 10 til ca. 10 cfu/fro. For at relatere cfu/fro til vægt kan det anfores, at 10^ cfu/fro svarer til ca. 1-5 mikro-gram podemateriale per fro. Dette svarer til 0,56-1,12 g podemateriale per kg salatfro eller 0,06-0,11 g podema-10 teriale per kg radisefro.

Bindemidler, der kan anvendes ved podnings- og overtræk-ningsprocesserne, er fortyndede oplosninger af vandoplo-selige eller vanddispergerbare, syntetiske polymère eller naturlige gummiprodukter. Eksempler pâ sâdanne bindemid-15 1er er methylcellulose, methylethylcellulose, gummiara- bicium, guargummi, casein, hydrolyseret gélatine, poly-vinylalkohol, polyoxyethylenglycoler, stivelse, hydroxy-ethylcellulose, karaya, tragantgummi, polyvinylacetat og lignende.

20 André bestanddele, sâsom gedningsmidler og fugtigheds- bevarende midler, kan om onsket tilfores til overtrækspro-cessen.

I nogle forste forsog pâ at pâfore mikroorganismer pâ tabletterede fro blev en vandig suspension af en Pseudo-25 monas-stamme pâsprojtet under tablettering af vegetabilske fro med et bindemiddel af polyvinylalkohol og et fyld-stof af diatomejord. Mikroorganismerne overlevede tablet-teringsoperationen, men blev dræbt under torreprocessen, uafhængigt af torretiden eller -temperaturen, der blev 30 varieret mellem 20 og 45°C. Man kunne ikke udvinde nogen levedygtige bakterier fra tabletterede fro indeholdende under 30?ô fugtighed. Fugtighedsindholdet af tabletterede fro holdes sædvanligvis indenfor omrâdet ca. 3-8 vægt-?i,

DK 157049B

8 fortrinsvis ca. 4 - 6 %.

Nâr bakterierne blev dyrket pâ et substrat af methyl-cellulose/diatomejord, kunne ingen overlevelse konstateres, nâr de tabletterede fra blev tarret ved 43°C. En Pseudo-5 monas spp. kunne i et podemateriale fremstillet af Μ. N.

Schroth's Laboratory (Phytopath 71:590-92 (1981)), ikke overleve tablettering og tarring.

Et podemateriale af xanthangummi/diatomejord fremstille- des i henhold til Kloepper og Schroth (Phytopath 71:590- 10 92 (1981)), hvorved der fremkom ca. 3 x 10® cfu/g. Dette podemateriale blev pâfart pâ radisefra under tablettering i en mængde, der skulle kunne være mâlt som 2 x 10^ cfu/- fra. Imidlertid aftog populationen pâ fraene dog til 4 3 x 10 cfu/fra efter tarring af de tabletterede fra ved 15 20 °C i en terrer med forceret luft. Desuden revnede overtrækkene pâ fraene ved denne lave temperatur.

EKSEMPEL 1

En to dage gammel rystekolbekultur med King's 8 substrat med Pseudomonas stammen MCB-1A blev centrifugeret, og cel-20 lerne blev vasket to gange med destilleret vand. Uaskede celler fra 2 liter kultursubstrater blev suspenderet i 100 ml destilleret vand og blev frysetarret ved -76°C og 0,25 Torr i 8 timer. Det resulterende pulver blev analy- g seret, og det viste sig at indeholde 5 x 10 cfu/g. 2 g 25 af dette pulver blev pâfart pâ 28 g broccoli-fra (9750 fra) under tablettering med polyvinylalkohol og diatome-jord. En prave af de tabletterede fra blev analyseret far tarring, og det viste sig, at de havde en population af 1 x 10^ cfu/fra, dvs. den teoretisk beregnede mængde. Ef-30 ter tarring ved 20 GC i en terrer med forceret luft til et fugtighedsindhold pâ 5-6 vægt-?i blev bakteriepopulationen pâ de terre fra bestemt til at være 5 x 10^ cfu/fra. Nâr pâ lignende mâde overtrukne fra blev tarret ved en tempe-

, DK 157049 B

9 ratur pâ 43°C, uiste det sig, at der forelâ den samme mængde af bakterier pâ fr0ene.

EKSEMPEL 2

En 150 ml kultur af Pseudomonas-stammen MCB-170 (mere 5 udterringsfelsom end MCB-1A) bleu centrifugeret, og cel- lerne bleu uasket to gange med destilleret uand. De uas- 12 kede celler (5 x 10 celler) bleu suspenderet i 6 ml af en uandig oplesning indeholdende 0,1 M saccharose, 0,05 M glycerol, 0,01 M MgSO^ og 0,07 M natriumbenzoat.

10 Efter at det terrede puluer uar bleuet fryseterret ued -76°C og 0,25 Torr i 8 timer uiste det sig at indeholde 3 x 10 cfu/g. 0,77 g af dette pulver bleu pâfert pâ 7 g salatfre under tablettering med polyuinylalkohol og diatomejord. Efter terring ued 43°C i en terrer med force-15 ret luft til et fugtighedsindhold af 5-6 uægt-?i bleu po- pulationen pâ de terre fre bestemt til at uære 4,7 x 10^ cfu/fre.

EKSEMPEL 3

En fryseterret Pseudomonas-stamme MCB-170, fremstillet 20 som beskreuet i eksempel 2, og suspenderet i en uandig oplesning af cryoprotectant som beskreuet i eksempel 2, bleu pâfert pâ salatfre under tablettering med polyuinylalkohol og diatomejord i en mængde, der uar tilstrækkelig til tiluejebringelse af 3 x 10^ cfu/fre. Man udferte tre 25 forseg, sâledes at podematerialet bleu pâfert umiddelbart op til freene i et forseg, i midten af ouertrækket i et andet forseg, og i nærheden af ouerfladen af ouertrækket i det tredie forseg. Den sluttelige diameter af tabletten uar 3-3,5 mm. Efter terring ued 43°C med forceret luft 30 til et fugtighedsindhold af 6-7 uægt% uiste freanalyserne, 4 at frepopülationen uar 1,4-2,0 x 10 cfu/fre for huert forseg. De podede fre bleu plantet bâde i markjord og i en steril urtepottejordblanding. Forskelle ,i rodpopula-

DK 157049B

10 tioner war meget smâ, idet man kunne notere en ganske lidt sterre population i de fra, der war podet i midten af over-trækket.

EK5EMPEL 4 5

En 14 liter kultur af Pseudomonas-stammen MCB-170 (meget falsom overfor udtarring) blev centrifugeret, og de ud- vundne celler blev suspenderet i 560 ml cryoprotectant som beskrevet i eksempel 2 og frysetarret ved en konden- sertemperatur pâ -65°C og et tryk pâ 0,025 Torr i 20 ti- mer. Det frysetarrede podemateriale blev tilfart til gule- rodsfra under tablettering med polyvinylalkohol og diato- mejord i en mængde, der er tilstrækkelig til at tilveje- bringe 1,5 x 10^ cfu/fra. Man udfarte tre forsag, hvor- ved podematerialet blev pâfart i umiddelbar nærhed af fraet i et forsag, i midten af overtrækket i et andet forsag, og i nærheden af overfladen af overtrækket i det tredie forsag. Den sluttelige diameter af tabletten var ca. 2,0 til 2,4 mm. Efter tarring ved 43°C med forceret luft til et fugtighedsindhold pâ 4-5¾ viste en analyse af fraene altid en frapopulation af 3,6 x 10χ cfu/fra (lige op til fraet), 1,3 x 10 cfu/fra (i midten af over- 2 ù trækket) og 1,9 x 10 cfu/fra (pâ ydersiden af overtræk- _ _ ket ).

20 EKSEMPEL 5

Frysetarret podemateriale af Pseudomonas-stammen MCB-172, fremstillet som beskrevet i det foregâende, blev pâfart pâ salatfra under tablettering. Podematerialet blev ogsâ pâfart pâ tidligere tabletterede og tarrede salatfra ved at pâfare det frysetarrede pulver pâ tabletterne, besprajte tabletterne med som bindemiddel tjenende polyvinylalkohol og terre tabletterne ved 43°C. Der iagttoges ingen ^ forskelle hvad angâr overlevelse under processen eller rodpopulation.

DK 157049 B

11 EKSEMPEL 6

Salatfr0 blev behandlet med frysetarret podemateriale af Pseudomonas-stammen MCB-114 ved at pâfere podemate-rialet sammen med en let besprajtning af som bindemid-5 del tjenende poly(vinylalkohol) efterfulgt af en kort période af tarring ved 43°C. Overlevelse af mikroorga-nismerne var lige sâ god som, eller bedre end, den samme stamme pâfart pâ salatfra under tablettering. En sammen-ligning mellem rodpopulation fra fra, der var podet ved 10 tablettering, versus râ frabehandling afslarede ingen forskelle.

EKSEMPEL 7

Man undersagte dadeligheden af frysetarrede bakterier pâ tabletterede fra. Broccoli- og radisefra blev tablet-15 teret med frysetarret Pseudomonas-stamme MBC-1A. Tablet terede fra blev opbevaret i forseglede formstofbeholdere ved 4DC, 14°C eller 22°C, og de blev analyseret perio-disk over en période af 34 uger. Initiale frapopulationer pâ 107 cfu/fra aftog til 10^ cfu/fra i labet af 2,5 til . 20 3 uger ved 22°C, 4 til 5 uger ved 14°C og 34 uger ved 4°C.

For stammen MCB-1A pâ enten broccoli- eller radisefra opbevaret ved 4°C aftager frapopulationen til ca. 10¾ af den oprindelige i labet af 18 uger og til ca. 1¾ af det oprindelige i labet af 34 uger.

25 EKSEMPEL 8

Stamme MCF-6 af svampen Pénicillium oxalicum blev fryse-tarret i en suspension af 20¾ skummetmælk, som beskrevet i American Type Culture Collection Methods. Man podede med godt résultat salatfratabletter med denne svamp. En 30 stamme af Trichoderma spp (MCF-20) blev ogsâ med godt résultat behandlet og tabletteret som ovenfor angivet.

12

DK 157Q49B

EKSEMPEL 9

En liter King's substrat (indeholdende i g/1: Difco proteosepepton nr. 3, 20,· glycerol, 12,6; MgSO^· 7^0, 1,5 og ^HPO, 1,5) blev podet med Pseudomonas-stammen 5 MCB-121 og inkuberet i en roterende rystekolbe ved 200 rpm ved 20-22°C i 3 dage. Cellerne blev separeret fra mediummet ved centrifugering (10 000 X g i 20 minutter ved 5°C). Cellerne blev derpâ suspenderet i 40 ml cry-oprotectant (0,1 M saccharose og 0,05 M glycerol) og 10 frysetarret i et vacuum pâ 0,05 Torr og en kondenser- temperatur pâ -76°C i 6 timer. Det terrede pulver blev udvundet, og det viste sig, at det vejede 4,54 g. For at bestemme den bakterielle population i podematerialet blev 0,01 g rehydreret i 9,9 ml sterilt, destilleret 15 vand i 30 minutter i et under rystning stâende reagens- glas. Fortyndinger blev udpladet pâ halvfast King's B agar (King's B substrat forsynet med 15 g agar/1). Den pâ denne mâde bestemte population var 6,4 x 10^ cfu/g.

Det resterende podemateriale (4,53 g) blev tilsat til 20 freene under tablettering. Forsegsportioner pâ 0,91 kg af radisefre af varieteten Cherry Belle (spiring 90?ô, 173,666 fre/kg) blev tabletteret under anvendelse af et bindemiddel af 15Gelvatol 40-20 poly ( vinylalkohol ) (Monsanto Corp.) og 1% glycerol og en som fyldstof tjen-25 ende blanding af diatomejord/cellulosefiber (Fibracel 8A,

Johns-Manville Corp.). Man torrede i 1,5 timer ved 43°C i en terret med forceret luft.

Den teoretiske frepopulation blev bestemt som felger: 4,53 g x 6,4 x 1011 cfu/g cfu/fro =---—-----= 1,8 x 10 cfu/fre 3q 0,907 kg fro x 173.670 fro/kg

DK 157049 B

13

Den faktiske frepopulation bleu bestemt til at være 5 x 10^ cfu/fr0 ued at ryste 10 fre i 9,9 ml sterilt, destilleret uand i 30 minutter, efterfulgt af udplad-ning pâ King's B agar.

5 De tabletterede fro bleu plantet i 3 forskellige mark- jorder fra Salinas Valley i urtepotter i et driuhus.

Planter bleu fremdreuet i 30-35 dage ued 12-17°C (nat-temperatur) og 18-22°C (dagtemperatur). Vægte af radise-redder fra de podede fr0 fremdreuet i de tre typer af 10 jordbund uar 119%, 119% og 151% af ikke podede, tablet terede fro, der uar fremdreuet under de samme betingel-ser.

Selvom opfindelsen er beskreuet under henuisning til de foregâende, specifikke eksempler, skal disse ikke opfat-15 tes i begrænsende forstand, idet opfindelsen kun skal begrænses ued de falgende krau.

Claims (8)

1. Fremgangsmâde til podning af agrikulturelle fre med fryseterrede mikroorganismer, kendetegnet ved, at man pâferer fryseterrede mikroorganismer pâ et fre som et tort pulver sammen med en vandig oplesning 5 eiler dispersion af et som bindemiddel tjenende v a n d o p - leseligt eller vanddispergerbart overtræk af en synte-tisk polymer eller en naturlig gummi, og at man terrer freet.

2. Fremgangsmâde ifelge krav 1, kendetegnet 10 ved, at overtrækket yderligere indeholder et fyldstof.

3. Fremgangsmâde ifelge krav 1, kendetegnet - ved, at det overtrukne fre ved en temperatur mellem ca. 20 og ca. 45 DC terres til et fugtighedsindhold af ca. 3 til ca. 8 vægt-?ô, baseret pâ vægten af det overtrukne 15 fre.

4. Fremgangsmâde ifelge krav 3, kendetegnet ved, at det overtrukne fre ved en temperatur af ca. 30 til ca. 45 °C terres til et fugtighedsindhold af ca. 4 til ca. 6 vægt-%.

5. Fremgangsmâde ifelge krav 1, kendetegnet ved, at de mikroorganismer, der er overtrukket pâ freet, er fryseterret ved en temperatur under -45 °C og ved et tryk af under 0,25 Torr.

6. Fremgangsmâde ifelge krav 5, kendetegnet 25 ved, at fryseterringstemperaturen er ca. -76 til ca. -65 °C, og at trykket er under 0,0,25 Torr. . DK 157049B ’

7. Agrikulturelt fro, der er overtrukket med en fryse-torret, gavnlig mikroorganisme, der^er pâfort som et tort pulver, og et vandoploseligt eller vanddisperger-bart bindemiddel, der er pâfort som en vandig oplasning 5 eller dispersion, kendetegnet ved, at binde- midlet er en syntetisk polymer eller en naturgummi samt eventuelt et fyldstof, og at froet har et fugtighedsind-hold af ca. 3 til ca. 8 vægt-%, baseret pâ vægten af det overtrukne fro.

8. Fro ifolge krav 7, kendetegnet ved, at det har et fugtighedsindhold af ca. 4 til ca. 6 vægt-%.