DK153403B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 4-(2-tienylmetylamino)-benzoesyreforbindelser - Google Patents

Description

DK 153403 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte halogensubstituerede 4-(2-tienylmetylamino)-benzoesyrer, eller til-5 svarende estere eller salte deraf, hvilke forbindelser har hypolipidæmisk virkning.

4-(2-Tienylmetylamino)-benzoesyre og den tilsvarende ætylester er beskrevet i Izo. nauk SSSR, Ser. Khim.

1967 (9), 2049-2055 (C.A. 68, 104869K). Der er ikke angi-10 vet nogen anvendelse for disse forbindelser.

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede 4-(2-tienylmetylamino)-benzoesyreforbindelser har den almene formel 1 ς io Y-----x

z CH2NH-—C00R

20 hvor R er hydrogen eller alkyl og X, Y og Z uafhæn gigt af hinanden er hydrogen, klor eller brom med det forbehold at mindst et af symbolerne X, Y og Z betegner klor eller brom, eller er farmaceutisk acceptable salte med 25 baser af de af forbindelserne hvor R = H.

Farmaceutisk acceptable salte refererer til salte med sådanne baser som danner salte med karboxylsyrer, og som ikke vil fremkalde en skadelig fysiologisk virkning ved indgift til et dyr i doser svarende til god far-30 makologisk virkning. Hensigtsmæssige baser indbefatter således fx alkalimetal- og jordalkalimetal-hydroxyder, -karbonater og -bikarbonater, såsom natriumhydroxyd, kaliumhy-droxyd, kalciumhydroxyd, kaliumkarbonat, natriumbikarbonat eller magniumkarbonat, ammoniak, og primære, sekundære og 35 tertiære aminer. Aluminiumsalte kan også vindes ved behandling af det tilsvarende natriumsalt med et passende aluminiumkompleks såsom aluminiumklorid-hexahydrat.

DK 153403 B

2

De omhandlede forbindelser har vist hypolipidæmisk virkning hos forsøgsdyr og navnlig hos pattedyr. Betegnelsen hypolipidæmisk virkning, som anvendes i nærværen-5 de beskrivelse og krav, henviser til den nedsættende virkning på blodets lipidindhold og navnlig indholdet af kolesterol og triglycerid i serum. Forbindelserne er derfor velegnede til anvendelse ved behandling af serum-hyperlipidæmi hos pattedyr og de er særlig nyttige 10 til behandling af hyperkolesterolæmi og hypertriglyceri-dæmi, dvs. unormale høje niveauer af henholdsvis lipi-der, kolesterol eller triglycerider i serummet. Forbindelserne kan indgives oralt eller parenteralt ved subkutant, intravenøs eller intraperitoneal injektion eller 15 ved implantation, idet oral indgift foretrækkes. En nærmere dokumentation for virkningen findes sidst i beskrivelsen.

I denne dokumentation viser sammenligning med den i tienylgruppen usubstituerede forbindelse (kendt fra CA 20 68, 104 869K) tydeligt at de ved fremgangsmåden ifølge op findelsen fremstillede forbindelser har overlegen virkning med hensyn til serums indhold af kolesterol og triglycerider og med hensyn til virkningen på legemsvægten.

Den effektive hypolipidæmiske mængde af p-amino-25 benzoesyreforbindelser som skal indgives til et dyr, dvs. den mængde som er effektiv til på signifikant måde at sænke serum-lipidniveauet, kan variere i afhængighed af sådanne faktorer som det behandlede dyr, den specielt anvendte forbindelse, det lipidniveau som ønskes opnået 30 hvad enten dyret er hyperlipidæmisk eller ikke, indgiftsperioden og indgiftsmetoden. I almindelighed ligger en effektiv daglig dosis fra ca. 1 mg/kg legemsvægt til 200 mg/kg legemsvægt, med et foretrukket dagligt dosisområde fra ca. 10 mg/kg til 100 mg/kg legemsvægt.

35 Præparaterne kan tage form af tabletter, linguests, pulvere, kapsler, opslæmninger eller pastiller og sådanne præparater kan fremstilles ved farmaceutiske standardmetoder .

3

DK 153403 B

Forbindelserne kan inkorporeres i et næringsmiddel som fx smør, margarine, spiseolie, kasein eller kulhydrater. Sådanne næringsmiddelpræparater er tilpasset 5 til at blive indgivet som en del af eller som hele kosten eller som et supplement til kosten, sådanne præparater indeholder fortrinsvis fra ca. 0,02 til ca. 2,0 procent af den aktive bestanddel når præparatet indgives som den samlede kost. Præparaterne kan indeholder højere 10 koncentrationer af den aktive bestanddel når de indgives som et supplement til kosten.

Til parenteral anvendelse kan forbindelserne formuleres med sterile ingredienser, sammensat og emballeret aseptisk. De kan indgives intravenøst eller intramusku-15 lært.

De omhandlede forbindelser fremstilles ifølge opfindelsen på den i patentkravets kendetegnende del angivne måde, altså ved omsætning af p-aminobenzoesyre eller en ester deraf, fx i et inaktivt opløsningsmiddel, med et 20 halogensubstitueret 2-tiofenkarboxaldehyd. Den resulterende schiffske base reduceres til fremstilling af det tilsvarende p-aminobenzoesyrederivat. En hensigtsmæssig metode til at gennemføre denne sidstnævnte procedure indbefatter blanding af den schiffske base med et overskud af 25 ætanol og vand. Der kan eventuelt sættes fortyndet vandigt natriumhydroxyd til blandingen. Natriumborhydrid tilsættes ved stuetemperatur og der omrøres indtil det opløses. Derpå opvarmes blandingen, udhældes i is og syr-nes. Produktet kan filtreres fra som et bundfald og yder-30 ligere renses ved kendte metoder. Man kan desuden gå frem som beskrevet i eksempel 1.

Flere af de halogenerede aldehyder er ikke let tilgængelige, men kan fremstilles ved metoder der er kendte fra litteraturen. Fx fremstilledes 4-klor-2-tio-35 fenkarboxaldehyd ved klorinering af 2-tiofenkarboxaldehyd under anvendelse af et stort overskud af aluminiumklorid som katalysator. Se J. Org. Chem., 21, 381, 1956 og J. Heter. Chem., 393, 1976. Ved anvendelse af samme

DK 153403 B

4 metode fremstilledes også 4,5-diklor-2-tiofenkarboxal-dehyd udfra 5-klor-2-tiofenkarboxaldehyd. Se C.A. 57, 16526i.

5 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere i det følgende ved hjælp af nogle eksempler.

Eksempel 1 1 g 4-(3,5-Diklor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre

En 50%'s oliedispersion (5,8 g, 0,12 mol) af natrium-hydrid vaskedes med hexan under nitrogen. Der tilsattes 200 ml tørt dimetylformamid og 29,5 g (0,113 mol) fast ætyl-N-trifluoracetyl-4-aminobenzoat. Reaktionsmassen 15 opvarmedes eksotermt i mild grad. Blandingen afkøledes til 20°C og omrørtes i 15 minutter. Derefter tilsattes 27,7 g 3,5-diklor-2-brommetyltiofen. Reaktionsmassen opvarmedes i 18 timer til 85°C. Efter afslutningen af denne periode udhældtes blandingen i 1 liter koldt vand og 20 ekstraheredes med metylenklorid. Produktet tørredes med vandfrit natrrumsulfat og den tørrede opløsning koncentreredes til en brun olie. Den resulterende olie kogtes under tilbagesvaling i 2 timer med 50 ml ætanol og 200 ml 5N natr iumhy dr oxyd. Den afkølede, brune opløsning.

25 fortyndedes med vand og syrnedes med eddikesyre. Den rå 4-(3,5-diklor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre vandtes som en brun olie og omkrystalliseredes fra propylengly-kolmetylæter hvorved der vandtes 17 g brune krystaller med smp. 169-170,5°C.

30 Beregnet: C 47,71 H 3,00 N 4,63

Fundet: C 47,8 H 3,06 N 4,74%.

Eksempel 2 4-(5-Klor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre 35

En blanding indeholdende 46,6 g (0,34 mol) p-aminobenzoesyre, 50 g (0,34 mol) 5-klor-2-tiofenkarbox-aldehyd og 400 ml toluen opvarmedes under tilbagesvaling

DK 153403B

5 i ca. 3 1/2 time. Det dannede vand opsamledes i en Dean-Stark-fælde. Reaktionsmassen afkøledes ved slutningen af denne periode og den schiffske base opsamledes som 5 et læderbrunt fast stof. Til en blanding af den som mellemprodukt vundne schiffske base og 1,2 liter iseddikesyre sattes 21,2 g (0,35 mol) dimetylaminoboran. Reaktionsmassen opvarmedes til 40°C i ca. 30 minutter og udhældtes i 2 liter isvand. Det hvide bundfald af 4—(5— .j q klor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre vaskedes i vand, tørredes og omkrystalliseredes fra toluen. Udbytte 60 g (70%), smp. 177-178°C.

Eksempel 3 15 4-(4,5-Diklor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre Trin 1: 4,5-Diklor-2-tiofenkarboxaldehyd.

Til en mekanisk omrørt opløsning af 31,8 g (0,217 mol) 5-klor-2-tiofenkarboxaldehyd i 150 ml metylenklorid sattes i små portioner 65 g (0,487 mol) vandfrit 20 aluminiumklorid. Blandingen opvarmedes exotermt og blev purpurfarvet. Til denne blanding sattes dråbevis 20,6 g (0,29 mol) klor i 250 ml kulstoftetraklorid.

Reaktionsmassen kogtes under tilbagesvaling i ca.

15 timer og der tilsattes yderligere 15 g (0,21 mol) 25 klor i 200 ml kulstoftetraklorid. Blandingen kogtes under tilbagesvaling i yderligere 7 timer. Reaktionen standsedes brat ved udhældning af 1 liter isvand. Det vandige lag ekstraherede med kloroform. Kloroformopløsningen vaskedes med vand og natriumkarbonat. Efter tørring med 30 vandfrit natriumsulfat og koncentrering under vakuum vandtes en gulbrun olie. Det rå 4,5-diklor-2-tiofenkar-boxaldehyd krystalliserede ved henstand og omkrystalliseredes fra hexan.

Trin 2: Produktet 4-(4,5-diklor-2-tienylmetylamino)-

T C Q

benzoesyre med smp. 225-227 C fremstilledes ud fra det som mellemprodukt vundne 4,5-diklor-2-tiofenkarboxaldehyd på i det væsentlige samme måde som beskrevet i eksempel 2 ovenfor. Udbytte: 88%.

DK 153403 B

6

Beregnet: C 47,71 H 3,00 N 4,63 Fundet: C 47,6 H 3,09 N 4,80%

Foruden de forbindelser der er beskrevet i eksempler-5 ne ovenfor fremstilledes andre forbindelser under anvendelse i det væsentlige samme teknik. Disse forbindelser er vist som eksempel 4, 5 og 6:

Eksempel 4 10 __________ 4-(5-Klor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre-ætylester med smp. 108-109°C fremstilledes ud fra ætyl-p-amino-benzoat og 5-klor-2-tiofenkarboxaldehyd. Udbytte 87%. Beregnet: C 56,86 H 4,77 N 4,73 15 Fundet: C 56,7 H 4,87 N 4,85%

Eksempel 5 4-(5-Brom-2-tienylmetylamino)-benzoesyre, smp. 188-20 190°C, udbytte 61%.

Beregnet: C 46,18 H 3,23 N 4,49

Fundet: C 46,1 H 3,29 N 4,65%.

Eksempel 6 25 4-(4-Klor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre, smp. 165-168°C, udbytte 96%.

Beregnet: C 53,85 H 3,77 N 5,23

Fundet: C 53,6 H 3,80 N 5,38% 30

Eksempel 7

De omhandlede forbindelsers hypolipidæmiske virkning demonstreredes illustrativt på rotter. Ved denne procedure opløstes en forbindelse i acetone, blev optaget 35 på en silikagel og blandedes med normalt formalet foder til opnåelse af koncentrationerne på 0,125% af forbindelsen i dyrefoderet. Det behandlede foder blev indgivet til hanrotter med en vægt på 150-160 g over en 14 dages

DK 153403 B

7 periode. Efter foderperioden blev rotterne aflivet og der opsamledes blodprøver. Leveren fjernedes, vejedes og blev frosset ned til senere analyse. De relative ni-5 veauer af serumkolesterol i blodprøverne bestemtes ved Henly's metode. A.A. Henley, Analyst, 82, 286, 1957. Leverkolesterol bestemtes med Sperry-Webb-metoden. Journal og Biological Chemistry 187, 97, 1950. De relative niveauer af triglycerider i blodprøverne og leverprøverne 10 bestemtes ved Von Handel og Zilversmit's metode. J. Lab.

Clin. Med. 50, 152, 1957 og Clin. Chem. 7, 249, 1961.

Ved at tage gennemsnitlige niveauer fra kontrolrotter som standard blev middelresultaterne vundet i de behandlede grupper fastslået. De i tabel 1 opstillede data 15 sammenfatter resultaterne fra de ovennævnte studier.

I tabel 1 betegner alle resultaterne den procentuelle forandring af værdierne for de behandlede dyr sammenlignet med resultaterne for kontrolgruppen.

20 25 30 35

DK 153403 B

8 O' 3 gi Η· Μι ^ 2 "< $ Hi li o

Μ ΰ R SIDH

o i F H 3 O' 0 3 m Ul i> U W H cQ tø H- t n ro *c> ro ri- o ^ g X H· Oi S ro h ro

w c. ^ i* HH

i to en ro t n gj i · t+ ro P' s

0 I H

w · en en i i i i i i i rt- ro nj w u i» ω ω CDii

tn ui o to ω h liC

O 3

Hg·

H

ro i

Ω CO

ro ro I I I I I I Η ϋ

1 cti <_π <Τι <_n en H- C

r° o h en cd en & 3 -J ro rt

ti ϋ H cQ

H

1-3 fu en t-1 tr ti· ro ro + + + i + i ro < h (-11-1 ii ro

vi oo u >1 u Oli H

H i*

0 H

ro cQ Ir1 h ro i i i i i + o ro Η Η to h (D ii ¢. H æ cd λ to lirt· F- *i

Di F-

ro I

ii tr1 ro

+ I I I I I CQ

VO ® H U1 to U O ro 3 tn < 8

iD

r+

Ir1 ro + + + + + + + *s H to H Η H ro ej o o to Η oo σι li <!

Pi

cQ

c+

DK 153403 B

9

Resultaterne i tabel 1 viser at forbindelser fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er højeffektive som hypolipidæmiské midler til sænkning af serumkole-5 sterol og serumtriglycerider mens de kun fremkalder minimale ændringer i levervægt og den samlede legemsvægt. Forbindelserne 4-(4,5-diklor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre (eksempel 3) og 4-(5-klor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre -ætyles ter (eksempel 4) ses at være særligt nyt-10 tige tilsænkning af kolesterolniveauer hos pattedyr.

Ligeledes viste det sig at forbindelserne 4-(5-klor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre-metylester (eksempel 4) og 4-(4-klor-2-tienylmetylamino)-benzoesyre (eksempel 6) er særligt effektive til sænkning af serumtriglyceridniveau- 15 et· 20 25 30 35

Claims (2)

10 CH2NH -) COOR hvor R er et hydrogenatom eller en alkylgruppe med 1-3 kulstofatomer og X, Y og Z uafhængigt af hinanden hver 15 er et hydrogenatom, et kloratom eller et bromatom, med det forbehold at i det mindste ét af symbolerne X, Y og Z betegner klor eller brom, eller farmaceutisk acceptable salte med baser af sådanne af forbindelserne, hvor R=H, kendetegnet ved at man 20 a) omsætter en 4-aminobenzoesyreforbindelse med formlen NH2 -^-COOR XI 25 med et 2-tiofenkarboxaldehyd med formlen

3. YTTX /'oA in l fa CHO hvor R, X, Y og Z har de ovenfor angivne betydninger, hvorpå man reducerer den således dannede schiffske base, 35 eller b) til fremstilling af 4-(3,5-diklor-2-tienylmetylami- no)-benzoesyre omsætter ætyl-N-trifluoracetyl-4-aminoben-zoat med 3,5-diklor-2-brommetyltiofen, DK 153403 B hvorpå man om ønsket omdanner en vundet forbindelse hvor R = H, til et salt deraf med en base eller frigør forbindelsen fra et vundet salt med en base. 5 10 15 20 25 30 35