DK147602B - Fremgangsmaade til fremstilling af coenzym q - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af coenzym q Download PDFInfo
- Publication number
- DK147602B DK147602B DK389078AA DK389078A DK147602B DK 147602 B DK147602 B DK 147602B DK 389078A A DK389078A A DK 389078AA DK 389078 A DK389078 A DK 389078A DK 147602 B DK147602 B DK 147602B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- coenzyme
- acetate
- pseudomonas
- cells
- atcc
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 26
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims description 44
- CPJRRXSHAYUTGL-UHFFFAOYSA-N isopentenyl alcohol Chemical compound CC(=C)CCO CPJRRXSHAYUTGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 claims description 30
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 30
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 claims description 29
- GLZPCOQZEFWAFX-UHFFFAOYSA-N Geraniol Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCO GLZPCOQZEFWAFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 25
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 24
- XXIKYCPRDXIMQM-UHFFFAOYSA-N Isopentenyl acetate Chemical compound CC(C)=CCOC(C)=O XXIKYCPRDXIMQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 15
- ASUAYTHWZCLXAN-UHFFFAOYSA-N prenol Chemical compound CC(C)=CCO ASUAYTHWZCLXAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000005792 Geraniol Substances 0.000 claims description 13
- GLZPCOQZEFWAFX-YFHOEESVSA-N Geraniol Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/CO GLZPCOQZEFWAFX-YFHOEESVSA-N 0.000 claims description 13
- 229940113087 geraniol Drugs 0.000 claims description 13
- HIGQPQRQIQDZMP-UHFFFAOYSA-N geranil acetate Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCOC(C)=O HIGQPQRQIQDZMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HIGQPQRQIQDZMP-DHZHZOJOSA-N geranyl acetate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\COC(C)=O HIGQPQRQIQDZMP-DHZHZOJOSA-N 0.000 claims description 9
- ZJVWGOLNVKJRDF-UHFFFAOYSA-N dimethylallyl acetate Natural products CC(=O)OC(C)(C)C=C ZJVWGOLNVKJRDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- YYPNJNDODFVZLE-UHFFFAOYSA-N 3-methylbut-2-enoic acid Chemical compound CC(C)=CC(O)=O YYPNJNDODFVZLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 241000589539 Brevundimonas diminuta Species 0.000 claims description 4
- 241000934229 Pseudomonas sp. ATCC 13867 Species 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 65
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 isopentenyl Chemical group 0.000 description 5
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000218899 Pseudomonas fulva Species 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N Isoprene Chemical group CC(=C)C=C RRHGJUQNOFWUDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- VWFJDQUYCIWHTN-YFVJMOTDSA-N 2-trans,6-trans-farnesyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\CC\C(C)=C\CO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O VWFJDQUYCIWHTN-YFVJMOTDSA-N 0.000 description 1
- 229940090248 4-hydroxybenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- FTYKMBHMBMJVFG-UHFFFAOYSA-N 5'-Phosphate-beta-D-9-Ribofuranosyluric acid Natural products COC1=C(OC)C(=O)C(=C(C)C1=O)CC=C(/C)CCC=C(/C)CCC=C(/C)CCC=C(/C)CCC=C(/C)CCC=C(/C)CCC=C(/C)CCC=C(/C)CCC=C(/C)CCCC(C)C FTYKMBHMBMJVFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- CZXMBEXHCFIYPB-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q Natural products OC(=O)CCCC1CCC(CC(O)=O)O1 CZXMBEXHCFIYPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010011906 Death Diseases 0.000 description 1
- VWFJDQUYCIWHTN-UHFFFAOYSA-N Farnesyl pyrophosphate Natural products CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O VWFJDQUYCIWHTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVVPGTZRZFNKDS-YFHOEESVSA-N Geranyl diphosphate Natural products CC(C)=CCC\C(C)=C/COP(O)(=O)OP(O)(O)=O GVVPGTZRZFNKDS-YFHOEESVSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 description 1
- 241000863432 Shewanella putrefaciens Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical class OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 1
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 125000002350 geranyl group Chemical group [H]C([*])([H])/C([H])=C(C([H])([H])[H])/C([H])([H])C([H])([H])C([H])=C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- CBIDRCWHNCKSTO-UHFFFAOYSA-N prenyl diphosphate Chemical compound CC(C)=CCO[P@](O)(=O)OP(O)(O)=O CBIDRCWHNCKSTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 125000004151 quinonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- UIXPTCZPFCVOQF-UHFFFAOYSA-N ubiquinone-0 Chemical class COC1=C(OC)C(=O)C(C)=CC1=O UIXPTCZPFCVOQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SOECUQMRSRVZQQ-UHFFFAOYSA-N ubiquinone-1 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(CC=C(C)C)=C(C)C1=O SOECUQMRSRVZQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/66—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing the quinoid structure
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
147602
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af Coenzym Q, hvor man dyrker en mikroorganisme, der hører til slægten Pseudomonas, og som er i stand til at producere Coenzym Q, i et dyrkningssubstrat og isolerer det producerede Coenzym Q.
Ved udtrykket "Coenzym Q", anvendt i den foreliggende beskrivelse med krav, skal alment forstås 2,3-dimethoxy-5-methyl-l,4-benzoquinoner indeholdende en isopren-sidekæde i quinonkernens 6-stilling repræsenteret ved den almene formel 147602 2
O
H3COV/^V\/CH3 H,CO''A''Vw^NcH -CH=C -CH~·)- H 3 2 | 2 n O CH3 hvori n = 8, 9 og 10, dvs. Coenzym Qg, Coenzym Qg og Coenzym Q^q-
Coenzym Q findes vidt udbredt i dyr, planter og mikroorganismer osv. og spiller en vigtig rolle som et væsentligt element i det endestillede elektronoverførselssystem.
For nylig er det blevet klarlagt, at Coenzym Q udøver udmærket medicinsk og fysiologisk virkning over for forskellige sygdomme. Specielt betragtes Coenzym Q1Q som i høj grad værdifuldt som lægemiddel, da Coenzym Q hos mennesker er Coenzym
Man kan opnå Coenzym Q ved at ekstrahere det fra dyre-eller planteceller eller mikroorganismer eller ved at syntetisere det kemisk. Det er imidlertid vanskeligt at fremstille Coenzym Q ved at ekstrahere dyre- eller planteceller i stor målestok. Det er også vanskeligt at fremstille Coenzym Q ved organisk syntese, da man har en ulemper i form af dårlige udbytter. Således er disse fremgangsmåder ikke tilfredsstillende til industrielle formål. At ekstrahere Coenzym Q fra mikroorganismer er således mest attraktivt set fra et økonomisk synspunkt.
Det er velkendt, at mikroorganismer, der hører til slægten Pseudomonas, producerer Coenzym Qg, Qg og Q^q, og at p-hydroxy-benzoesyre og eddikesyre og saltene heraf er i stand til at forøge indholdet af Coenzym Q pr. celleenhed, dersom de sættes til dyrkningssubstratet (japansk patentbeskrivelse nr. 20396/1972). Det er velkendt, at isoprensidekæden i Coenzym Q fremstilles gennem geranyl- og farnesylpyrophosphat ved biosynteser, i hvilke kondensationen af isopentenyl- og dimethylallylpyrophosphat gentages.
Da disse precursorer imidlertid er vanskelige at få til at trænge gennem cellemembranen, har man ikke berettet om forsøg på at forøge indholdet af Coenzym Q ved at tilsætte sådanne precursorer til dyrkningssubstratet.
3 147602
Det har nu vist sig, at isopentenylalkohol, dimethylallylal-kohol, geraniol, isopentenylacetat, dimethylallylacetat, geranylace-tat og β-methylcrotonsyre let kan bruges af mikroorganismer hørende til slægten Pseudomonas, dersom de sættes til dyrkningssubstratet, og at de er i stand til væsentligt at forøge indholdet af Coenzym Q pr. celleenhed.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af Coenzym Q er i overensstemmelse hermed ejendommelig ved, at der er sat mindst én forbindelse valgt fra gruppen bestående af isopentenylalkohol, dimethylallylalkohol, geraniol, isopentenylacetat, dimethylallylacetat, geranylacetat og Ø-methylcrotonsyre til dyrkningssubstratet .
En vilkårlig af mikroorganismerne hørende til slægten Pseudomonas og i stand til at producere Coenzym Q kan anvendes ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse. Eksempler på mikroorganismer, der er i stand til at producere Coenzym Q^q» er Pseudomonas diminuta ATCC 11568 (IAM-1513), på dem, som er i stand til at producere Coenzym Qg, Pseudomonas schuylkilliensis ATCC 31419 (IAM-1126), Pseudomonas denitrificans ATCC 13867 (IAM-12023), Pseudomonas olevorans ATCC 8062 (IAM-1508) og Pseudomonas putre-faciens ATCC 8071 (IAM-1509), og på dem, som er i stand til at producere Coenzym Qg, Pseudomonas rubescens ATCC 12099 (IAM-1510), Pseudomonas fulva ATCC 31418 (IAM-1529) og Pseudomonas putida ATCC 4359 (IAM-1506).
I dyrkningssubstratet, der anvendes ved udførelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan sukkerarter som glucose, melasse osv., og vilkårlige andre carbonkilder, som disse mikroorganismer er i stand til at udnytte., anvendes som carbonkilder. Uorganiske nitrogenforbindelser, som f. eks. ammoniumsulfat, ammoniumchlorid og lignende, organiske nitrogenforbindelser som majsstøbevæske, ekstrakter af fiskekød, pepton, gærekstrakt og lignende kan anvendes som nitrogenkilder. Yderligere kan tilsættes uorganiske salte som kaliumsalte, natriumsalte, magnesiumsalte, salte af phosphorsyre og svovlsyre og lignende.
Dyrkningen udføres sædvanligvis under omrøring med luft ved pH 4-8, ved en tanperatur på 25-35°C og i løbet af 10-50 timer.
Tilsætningen af isopentenylalkohol, dimethylallylalkohol, geraniol, isopentenylacetat, dimethylallylacetat, geranylacetat og 4 147602 (3-methylcrotonsyre ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse kan udføres ved enhver ønsket fremgangsmåde og til enhver ønsket tid. F. eks. kan hele mængden af tilsætningsstof sættes til ved begyndelsen eller ved et bestemt vækststadie under dyrkningen, eller man kan tilsætte lidt efter lidt afhængig af forgæringens fremadskriden. Yderligere kan tilsætningsstoffet anvendes alene eller sammen med andre tilsætningsstoffer. Mængden af tilsætningsstof, -5 —3 der tilsættes, er sædvanligvis 1x10 til 5x10 mol/liter (som slut- -5 -4 koncentration), fortrinsvis 5x10 til 5x10 mol/liter.
Efter dyrkningen ekstraheres det dannede Coenzym Q fra cellerne og skilles fra det andet materiale. F. eks. ekstraheres de ved centrifugering opnåede våde celler med et hydrofilt opløsningsmiddel som f. eks. acetone og lignende; herefter overføres den Coenzym Q-holdige fraktion til et opløsningsmiddel, som f. eks. petro-, leumsether og lignende; den Coenzym Q-holdige fraktion underkastes fraktioneret rensning ved hjælp af aluminiumoxidsøjle osv., hvorved Coenzym Q kan isoleres.
Ved den foreliggende opfindelse udføres identificeringen af Coenzym Q ved at sammenligne det omhandlede produkt med en standardprøve ved hjælp af UV-spektrum, måling af smeltepunkt og omvendt fase-tyndtlagschromatografi, i hvilket en blanding af acetone:vand (95:5) anvendes som opløsningsmiddel·
De følgende eksempler er givet for nærmere at forklare fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
Eksempel 1 i en 30-liters fermentor anbragtes 15 liter af et dyrkningssubstrat (pH 7,0) indeholdende 0,05% KH2P04, 0,15% NA2HP04, 0,05% MgS04,7H20, 1% glucose, 1% pepton og 0,2% gsrekstrakt. Efter steril-lisering med damp tilsattes 645 mg isopentenylalkohol opløst i 10 ml ethanol. Pseudomonas schuylkilliensis ATCC 31419 (IAM-1126), der først var dyrket i 500 ml af dyrkningssubstratet, der havde den samme sammensætning som beskrevet ovenfor, i 24 timer, podedes i det ovenfor nævnte dyrkningssubstrat og dyrkedes i 24 timer med gennem-luftning på 15 liter/minut ved 27°C.
Efter dyrkning centrifugeredes dyrkningsbouillonen, hvorved man opnåede 418 g våde celler (87 g i form af tørre celler).
5 147602
De våde celler sattes til 2 liter acetone, og man ekstraherede under omrøring. Cellerne fraskiltes ved centrifugering. Denne fremgangsmåde gentoges to gange endnu. Acetoneekstrakterne sloges sammen, hvorefter man inddampede under reduceret tryk for at fjerne acetonen. Herefter ekstraheredes den tilbageblevne opløsning tre gange med 1 liter petroleumsether pr. gang, og de herved fremkomne petroleumsetherlag sloges sammen. De forenede petroleumsetherlag vaskedes med vand, tørredes og kondenseredes under reduceret tryk.
Den tilbageblevne olie opløstes i en ringe mængde petroleumsether, hvorefter man chromatograferede på en aluminiumoxidsøjle ved elue-ring med en blanding af petroleumsether og ethylether. Man afdestillerede opløsningsmidlet fra det ovenfor opnåede eluat indeholdende Coenzym Q. Den tilbageblevne olie opløstes i en ringe mængde ethanol, hvorefter man lod den henstå i køleskab, hvorved der udkrystalliseredes krystaller af Coenzym Qg. Disse krystaller omkrystalliseredes med ethanol tre gange, hvorved man opnåede 142,6 mg krystaller af Coenzym Qg.
På den anden side udførtes den samme dyrkning som ovenfor under anvendelse af 15 liter af et dyrkningssubstrat, til hvilke der ikke var sat isopentenylalkohol. På samme måde som ovenfor fik man 359 g våde celler (69 g i form af tørre celler). Yderligere anvendte man den samme fremgangsmåde som ovenfor, hvorved man fik 81,42 mg krystaller af Coenzym Qg.
Ud fra de ovenfor anførte data beregnedes virkningen af isopentenylalkohol på fremstillingen af Coenzym Qg. Tilsætning af isopentenylalkohol til dyrkningssubstratet forøgede udbyttet af Coenzym Qg pr. liter bouillon med 75%, og med 39% pr. g tørre celler.
Det blev således klart bekræftet, at tilsætningen af isopentenylalkohol var virksom til forøgelse af udbyttet af Coenzym Qg.
Eksempel 2
Man fulgte fremgangsmåden fra eksempel 1 bortset fra, at 1,16 g geraniol anvendtes i stedet for isopentenylalkohol, og herved opnåede man 390 mg våde celler (68 g i form af tørre celler).
De våde celler underkastedes samme procedure som beskrevet i eksempel 1, og man opnåede 104,7 mg krystaller af Coenzjty Qg.
På den anden side dyrkedes den samme mikroorganisme under anvendelse af et dyrkningssubstrat, til hvilket der ikke var sat 147602 6 geraniol. Man opnåede 327 g våde celler (63 g i form af tørre celler). Fra cellerne opnåedes 74,3 mg krystaller af Coenzym .
Ud fra de ovenfor givne data undersøgtes virkningen af geraniol på fremstillingen af Coenzym Qg. Tilsætning af geraniol til dyrkningssubstratet forøgede udbyttet af Coenzym Q_ med 41% pr. li- y ler dyrkningsbouillon og med 30% pr. g. tørre celler.
Eksempel 3
Pseudomonas rubescens ATCC 12099 (IAM-1510) dyrkedes i det samme dyrkningssubstrat og på samme måde som beskrevet i eksempel 2, hvorved man opnåede 410 g våde celler (73 gi form af tørre celler). Disse behandledes på samme måde som beskrevet i eksempel l, og man opnåede 58,4 mg Coenzym Qg.
På den anden side dyrkedes mikroorganismer i det samme dyrkningssubstrat som ovenfor, bortset fra at intet geraniol var tilsat. Man opnåede 390 g våde celler (74 g i form af tørre celler). Ud fra cellerne opnåedes 44,4 mg Coenzym Qg.
Ud fra de ovenfor nævnte data foretog man samme sammenligning som i eksempel 1. Tilsætning af geraniol til et dyrkningssubstrat forøgede udbyttet af Coenzym Qg med 32% pr. liter dyrkningsbouillon og 33% pr. g tørre celler.
Eksempel 4
Pseudomonas diminuta ATCC 11568 (IAM-1513) dyrkedes ved samme fremgangsmåde som i eksempel 1 bortset fra at natriumacetat anvendtes i stedet for glucose ved sammensætningen af substratet, og man tilsatte for sig tre 300 mg fraktioner isopentenylalkohol (totalmængde på 900 mg). På denne måde opnåede man 380 g våde celler (69 g i form af tørre celler), som herefter underkastedes samme behandling som i eksempel 1, hvorved man opnåede 30,5 mg krystaller af Coenzym .
På den anden side dyrkedes den samme mikroorganisme i dyrkningssubstratet, til hvilket intet isopentenylalkohol var tilsat.
Man opnåede 320 g våde celler (61 g i form af tørre celler), ud fra hvilke man opnåede 19,8 mg krystaller af Coenzym Q^q.
Ud fra de ovenfor angivne data foretoges samme sammenligning som i eksempel 1. Tilsætningen af isopentenylalkohol forøgede udbyttet af Coenzym med 54% pr. liter dyrkningsbouillon og med 38% pr. g tørre celler.
7 147602
Eksempel 5
Man fulgte fremgangsmåden som beskrevet i eksempel 1 bortset fra, at pseudomonas denitrificans ATCC 13867 (IAM-12023) anvendtes som mikroorganisme, og at to 1 g's portioner geraniol for sig tilsattes dyrkningssubstratet (ialt 2 g) på forskellige tidspunkter under dyrkningen. På denne måde opnåedes 395 g våde celler (76 g i form af tørre celler), som herefter underkastedes den samme behandling som beskrevet i eksempel 1, hvorved man opnåede 63,1 mg krystaller af Coenzym Qg.
På den anden side dyrkedes den samme mikroorganisme i dyrkningssubstratet, hvortil intet geraniol var sat, og man opnåede 328 g våde celler (63 g i form af tørre celler), ud fra hvilke man opnåede 37,2 mg krystaller af Coenzym Qg.
Ud fra de ovenfor givne data foretoges samme sammenligning som i eksempel 1. Tilsætningen af geraniol forøgede udbyttet af Co- enzyra Q. med 69% pr. liter dyrkningsbouillon og 41% pr. g tørre y celler.
Eksempel 6
Man anvendte samme fremgangsmåde som i eksempel 1 bortset fra, at Pseudomonas fulva ATCC 31418 (IAM-1529) anvendtes som mikroorganisme, og at tre portioner isopentenylalkohol (ialt 3 g) for sig tilsattes under dyrkningen til forskellige tidspunkter. På denne måde opnåede man 390 g våde celler (73 g i form af tørre celler), som herefter underkastedes samme behandling som i eksempel 1, hvorved man opnåede 86,4 mg krystaller af Coenzym Qg.
På den anden side dyrkede man den samme mikroorganisme i dyrkningssubstratet, til hvilket intet isopentenylalkohol var sat, og man opnåede 350 g våde celler (67 g i form af tørre celler), ud fra hvilke man opnåede 60,5 krystaller af Coenzym Qg.
Ud fra de ovenfor givne data foretoges samme sammenligning som i eksempel 1. Tilsætningen af isopentenylalkohol forøgede udbyttet af Coenzym Qg med 43% pr.liter dyrkningsbouillon og med 31% pr. g tørre celler.
147602 8.
Eksempel 7
Man anvendte samme fremgangsmåde som i eksempel 1 bortset fra, at Pseudomonas rubescens ATCC 12099 (IAM-1510) anvendtes som mikroorganisme, og at man tilsatte 645 mg dimethylallylalkohol. På denne måde opnåede man 430 g våde celler (80 g i form af tørre celler) , som underkastedes samme behandling som i eksempel 1, hvorved man opnåede 86 mg krystaller af Coenzym Qg.
På den anden side dyrkedes den samme mikroorganisme i dyrkningssubstratet, hvortil man ikke havde sat noget dimethylallylalkohol. Herved opnåede man 390 g våde celler (77 g i form af tørre celler) , ud fra hvilke man opnåede 68 mg krystaller af Coenzym Qg.
Ud fra de ovenfor givne data foretoges samme sammenligning som i eksempel 1. Ved tilsætning af dimethylallylalkohol forøgedes udbyttet af Coenzym Qg med 26% pr. liter dyrkningsbouillon og med 20% pr. g tørre celler.
Eksempel 8
Man anvendte samme fremgangsmåde som i eksempel 1 bortset fra, at Pseudomonas fulva ATCC 31418 (IAM-1529) anvendtes som mikroorganisme, og at man tilsatte 750 mg Ø-methylcrotonsyre. På denne måde opnåedes 540 g våde celler (105 g i form af tørre celler), som underkastedes samme behandling som i eksempel 1, hvorved man opnåede 102 mg krystaller af Coenzym Qg.
På den anden side dyrkedes den samme mikroorganisme i dyrkningssubstratet, hvortil man ikke havde sat noget Ø-methylcrotonsyre. Man opnåede 525 g våde celler (103 g i form af tørre celler), ud fra hvilke man opnåede 79 mg krystaller af Coenzym Qg.
Ud fra de ovenfor givne data foretoges samme sammenligning som i eksempel 1. Tilsætningen af Ø-methylcrotonsyre forøgede udbyttet af Coenzym Qg med 28% pr.· liter dyrkningsbouillon og med 26% pr. g tørre celler.
Eksempel 9
Man anvendte fremgangsmåden fra eksempel 1 bortset fra, at Pseudomonas olevorans ATCC 8062 (IAM-1508) anvendtes som mikroorganisme, og at 960 mg dimethylallylacetat tilsattes. På denne måde opnåede man 490 g våde celler (94 g i form af tørre celler), der her- 147602 9 efter underkastedes samme behandling som i eksempel 1, hvorved man opnåede 96 mg krystaller af Coenzym Qg.
På den anden side dyrkedes den samme mikroorganisme i dyrkningssubstratet, hvortil man ikke havde sat noget dimethylallylace-tat, og herved opnåede man 470 g våde celler (90 g i form af tørre celler), ud fra hvilke man opnåede 68 mg krystaller af Coenzym Qg.
Ud fra de ovenfor nævnte data foretog man samme sammenligning som i eksempel 1. Tilsætningen af dimethylallylacetat forøgede udbyttet af Coenzym Qg med 42% pr. liter dyrkningsbouillon og med 34% pr. g. tørre celler.
Eksempel 10
Fremgangsmåden fra eksempel 1 fulgtes bortset fra, at Pseudo-monas schuylkilliensis ATCC 31419 (IAM-1126) anvendtes som mikroorganisme, og at 1,47 g geranylacetat tilsattes. På denne måde opnåedes 530 g våde celler (93 g i form af tørre celler), som underkastedes samme behandling som i eksempel 1, hvorved man opnåede 120 mg krystaller af Coenzym Qg.
På den anden side dyrkedes den samme mikroorganisme i dyrkningssubstratet, hvortil man ikke havde sat noget geranylacetat. Herved opnåede man 525 g våde celler (90 g i form af tørre celler), ud fra hvilke man opnåede 98 mg krystaller af Coenzym Qg.
Ud fra de ovenfor nævnte data foretoges samme sammenligning som i eksempel 1. Tilsætningen af geranylacetat forøgede udbyttet af Coenzym Qg med 23% pr. liter dyrkningsbouillon og med 19% pr. g tørre celler.
Eksempel 11
Man fulgte fremgangsmåden som i eksempel 1 bortset fra, at Pseudomonas denitrificans ATCC 13867 (IAM-12023) anvendtes som mikroorganisme, og at blandingen af 960 mg isopentenylacetat og 1,47 g geranylacetat tilsattes. På denne måde opnåede man 480 g våde celler (96 g i forrå af tørre celler) , der underkastedes samme behandling som i eksempel 1, hvorved man opnåede 115 mg krystaller af Coenzym
V
På den anden side dyrkede man den samme mikroorganisme i dyrkningssubstratet, til hvilken blandingen ikke var sat. Herved fik man 490 g våde celler (98 g i form af tørre celler), ud fra hvilke
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af Coenzym Q, hvor man dyrker en mikroorganisme, der hører til slægten Pseudomonas, og som er i stand til at producere Coenzym Q, i et dyrkningssubstrat og isolerer det producerede Coenzym Q, kendetegnet ved, at der er sat mindst én forbindelse valgt fra gruppen bestående af isopentenylalkohol, dimethylallylalkohol, geraniol, isopentenylacetat, dimethylallylacetat, geranylacetat og β-methylcrotonsyre til dyrkningssubstratet.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af Coenzym Q1Q, kendetegnet ved, at mikroorganismen er Pseudomonas diminuta ATCC 11568.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af Coenzym Qg, kendetegnet ved, at mikroorganismen er Pseudomonas schuylkilliensis ATCC 31419, Pseudomonas denitrificans ATCC 13867 eller Pseudomonas olevorans ATCC 8062.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til fremstilling af Coenzym
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10593977A JPS5455787A (en) | 1977-09-05 | 1977-09-05 | Production of coenzyme q |
| JP10593977 | 1977-09-05 | ||
| JP4081278 | 1978-04-08 | ||
| JP4081278 | 1978-04-08 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK389078A DK389078A (da) | 1979-03-06 |
| DK147602B true DK147602B (da) | 1984-10-15 |
| DK147602C DK147602C (da) | 1985-04-22 |
Family
ID=26380323
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK389078A DK147602C (da) | 1977-09-05 | 1978-09-04 | Fremgangsmaade til fremstilling af coenzym q |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| CA (1) | CA1105860A (da) |
| CH (1) | CH645607A5 (da) |
| DE (1) | DE2838252C3 (da) |
| DK (1) | DK147602C (da) |
| ES (1) | ES473041A1 (da) |
| FR (1) | FR2401993A1 (da) |
| GB (1) | GB2005662B (da) |
| IT (1) | IT1157168B (da) |
| NL (1) | NL7808778A (da) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1223794B (de) * | 1958-12-29 | 1966-09-01 | Merck & Co Inc | Verfahren zur Gewinnung von Coenzym Q-10 aus Mikroorganismen |
-
1978
- 1978-08-25 NL NL7808778A patent/NL7808778A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-08-30 FR FR7825034A patent/FR2401993A1/fr active Granted
- 1978-08-31 CA CA310,399A patent/CA1105860A/en not_active Expired
- 1978-09-01 DE DE2838252A patent/DE2838252C3/de not_active Expired
- 1978-09-01 ES ES473041A patent/ES473041A1/es not_active Expired
- 1978-09-01 IT IT50934/78A patent/IT1157168B/it active
- 1978-09-04 GB GB7835545A patent/GB2005662B/en not_active Expired
- 1978-09-04 DK DK389078A patent/DK147602C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-09-05 CH CH930578A patent/CH645607A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK147602C (da) | 1985-04-22 |
| IT7850934A0 (it) | 1978-09-01 |
| CH645607A5 (de) | 1984-10-15 |
| GB2005662A (en) | 1979-04-25 |
| IT1157168B (it) | 1987-02-11 |
| NL7808778A (nl) | 1979-03-07 |
| DE2838252B2 (de) | 1980-07-17 |
| DE2838252C3 (de) | 1981-09-24 |
| GB2005662B (en) | 1982-03-17 |
| FR2401993B1 (da) | 1981-09-04 |
| CA1105860A (en) | 1981-07-28 |
| ES473041A1 (es) | 1979-04-01 |
| DK389078A (da) | 1979-03-06 |
| FR2401993A1 (fr) | 1979-03-30 |
| DE2838252A1 (de) | 1979-03-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3983140A (en) | Physiologically active substances | |
| US4049495A (en) | Physiologically active substances and fermentative process for producing the same | |
| KR830002801B1 (ko) | 고(高) 콜레스테롤혈증치료제, 모나콜린 k의 제조방법 | |
| JPH02288889A (ja) | Ａｂ‐０２１抗生物質およびその製造法 | |
| CA1225333A (en) | Antiviral agents | |
| US4205125A (en) | Process for the production of coenzyme Q | |
| US4220719A (en) | Process for the production of Coenzyme Q10 | |
| Kubota et al. | Piericidins C5 and C6: new 4-pyridinol compounds produced by Streptomyces sp. and Nocardioides sp. | |
| DK147602B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af coenzym q | |
| US4104282A (en) | Novel 3-(oxygenated alkyl)-1,9-dihydroxy and 1-hydroxy-9-keto dibenzo[b,d]py | |
| CN111018822B (zh) | 一种有抑菌作用的化合物及其制备方法和在卷烟中的用途 | |
| US3968122A (en) | 1-Acetyl-3-N-octanoyl-5-ethylidene tetraminic acids and metal salts thereof | |
| KR900004939A (ko) | 농화학적으로 유용한 활성 성분들의 미생물에 의한 제조 방법 | |
| JPH03141290A (ja) | 抗腫瘍抗生物質ｂｍｙ―４１３３９ | |
| US4249008A (en) | 3,4-Dihydro-4-hydroxy-5-(3-hydroxy-2-pyridinyl)-4-methyl-2H-pyrrole-2-carboxamide | |
| US3701787A (en) | Preparation of 5,6-dihydro-5-hydroxy-6-propenyl-2-pyrone by fermentation and derivatives thereof | |
| KR820000295B1 (ko) | 코엔자임 q의 제조방법 | |
| US3839558A (en) | Antibiotics a28695a and a28695b and a process for production thereof | |
| US4239690A (en) | Antibiotics produced by Cytospora sp. W.F.P.L. 13A | |
| US3093549A (en) | Preparation of methoxynovobiocin | |
| US4339535A (en) | Process for preparing antibiotic EM 4940 | |
| US4385065A (en) | Novel substances and process for their production | |
| JPS6040837B2 (ja) | 抗生物質チオストレプトンの製造法 | |
| KR0163660B1 (ko) | 방선균류인 마이크로모노스포라 속 sa-246 균주를 이용한 항균-항암활성을 갖는 saph 유도체의 제조방법 | |
| NO136981B (no) | Fremgangsm}te for fremstilling av antibiotikum a28695 a og b. |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |