DE69913351T2

DE69913351T2 - Metallkomplexe von Chlorinderivaten zum Abschirmen von Röntgenstrahlen

Info

Publication number: DE69913351T2
Application number: DE69913351T
Authority: DE
Inventors: Katsuo Aizawa; Shinjiro Odawara-shi SUMI; Hirotada Odawara-shi TAKAHASHI; Noriaki Odawara-shi AMAN; Yoshihiko Odawaraa-shi TERAYAMA; Shuichi Yokohama-shi GOMI
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1998-07-10
Filing date: 1999-07-12
Publication date: 2004-09-16
Anticipated expiration: 2019-07-13
Also published as: EP1097935A4; EP1097935B1; ES2212577T3; WO2000002882A1; CA2336582C; US6413495B1; EP1097935A1; AU748625B2; DE69913351D1; ATE255583T1; CA2336582A1; JP3692298B2; AU4651099A

Description

FACHGEBIET
Diese Erfindung betrifft einen neuen, Röntgenstrahlen-auffangenden Metallkomplex von einem Chlorin e6-Derivat, der zur Detektion, Diagnose und/oder Therapie eines Tumors oder soliden Krebses oder Arterioskleroseläsionen mit Röntgenstrahlenradiographie oder Bestrahlung mit Röntgenstrahlen verwendbar ist. Genauer gesagt betrifft diese Erfindung einen neuen Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplex oder Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6, der zum Verabreichen an einen Wirtssäuger zwecks Durchführen von Detektion, Diagnose und/oder Therapie mit Röntgenstrahlenradiographie oder Bestrahlung mit Röntgenstrahlen eines in dem Wirtssäuger gebildeten Tumors oder soliden Krebses oder von Arterioskleroseläsionen (zum Beispiel Atheroskleroseschicht in einer Arterieninnenwand) geeignet ist und der imstande ist, selektiv innerhalb des Tumors, soliden Krebses oder der Arterioskleroseläsionen zu akkumulieren und sich zu verteilen, und nicht nur als ein Kontrastmittel fungieren kann, das geeignet ist, ein scharfes Röntgenbild des Tumors, soliden Krebses und der Arterioskleroseläsionen zu liefern, sondern auch bei therapeutischer Behandlung des Tumors, soliden Krebses oder der Arterioskleroseläsionen wirksam ist.
Diese Erfindung betrifft auch ein Arzneimittel, umfassend als Wirkstoff den vorstehenderwähnten neuen Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplex oder Platinkomplex des Chlorin e6-Derivats. Diese Erfindung schließt ferner Verfahren zur Detektion, Diagnose und/oder Therapie eines in dem Wirtssäugetier gebildeten Tumors, soliden Krebses oder von Arterioskleroseläsionen unter Verwendung des vorstehend erwähnten neuen Röntgenstrahlenauffangenden Goldkomplexes oder Platinkomplexes des Chlorin e6-Derivats ein.
STAND DER TECHNIK
Photochemotherapie oder so genannte photodynamische Therapie ist ein Verfahren zur therapeutischen Behandlung eines Krebses oder Tumors und von Arteriosklerose oder anderen Krankheiten, die das Verabreichung einer photosensitiven Substanz umfasst, die geeignet ist, durch Bestrahlung mit Ultraviolettstrahlen oder Laserlicht angeregt zu werden. Das heißt, es ist die Chemotherapie, wobei das Krebs- oder Tumorgewebe oder Arterioskleroseläsionen, in denen die zuvor verabreichte photosensitive Substanz vorhanden und akkumuliert war, mit Ultraviolettstrahlen oder Laserlicht bestrahlt werden, oder extrakorporal zirkulierendes Blut, das die photosensitive Substanz enthält, mit Ultraviolettstrahlen oder Laserlicht bestrahlt wird, so dass die photosensitive Substanz angeregt werden kann, um die therapeutische Behandlung wie beabsichtigt zu bewirken.
Als photosensitive Substanzen, die in einer solchen Photochemotherapie oder photodynamischen Therapie verwendet werden sollen, sind Hämatoporphyrinderivate und Chlorinderivate bekannt (siehe zum Beispiel die Japanische Patentanmeldung, Veröffentlichung Kokai Hei 2-138280 (patentiert unter der Japanischen Patent-Nr. 2520735), die korrespondierende Europäische Patentanmeldung, Veröffentlichungs-Nr. 350948 A1 und die Japanischen Offenlegungsschriften Hei 6-88902 und Hei 6-89000, ebenso wie die Beschreibungen der USP-Nrn. 4,656,186, 4,675,338, 4,693,885 und 4,997,639). Ferner berichtet ein Artikel ein Ergebnis einer klinischen Studie über Photochemotherapie, angewandt bei oberflächlichen Krebsen im Frühstadium, wobei ein Hämatoporphyrinderivat verabreicht wird (siehe Journal of the Society of Cancer Therapy of Japan, Bd. 29, S. 1757– 1766 (1994)). Insbesondere offenbaren die vorstehend erwähnten Japanischen Offenlegungsschriften Hei 6-88902 und Hei 6-89000 und die Beschreibungen der USP-Nrn. 4,656,186, 4,675,338 und 4,693,885 die Verwendung eines geeigneten Chlorinderivats, besonders von mono-L-Aspartylchlorin e6 und mono-L-Glutamylchlorin e6, als Photochemotherapeutikum in der Diagnose und therapeutischen Behandlung eines Tumors oder soliden Krebses, das durch die folgende allgemeine Formel (A) wiedergegeben ist
wobei n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet, oder eines Salzes davon. Die Literaturstellen offenbaren ferner, dass mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 oder ein Salz davon bevorzugt innerhalb des Tumorgewebes oder soliden Krebses aufgenommen und darin akkumuliert wird.
Die Beschreibung des US-Patents Nr. 4,997,639 offenbart, dass mono-L-Aspartylchlorin e6 oder ein anderes geeignetes Chlorinderivat oder ein Salz davon, falls es an einen Wirtssäuger verabreicht wird, in einen solchen Teil oder Teile des Wirtskörpers, worin sich Cholesterol abgelagert und akkumuliert hat, bevorzugt aufgenommen werden kann und es ist folglich wirksam, den Teil, in dem sich Cholesterol akkumuliert hat, mit einem solchen photodynamischen Diagnoseverfahren zu detektieren. Ferner offenbaren die Japanische Patentanmeldung, Veröffentlichung Kokai Hei 4-330013 und die Beschreibung des US-Patents Nr. 5,308,861, dass mono-L-Aspartylchlorin e6 oder ein anderes geeignetes Chlorinderivat oder ein Salz davon selektiv in den in der Arterieninnenwand gebildeten Arterioskleroseläsionen, die begleitend bei zu Herzinfarkt oder Angina pectoris führender Koronarsklerose, bei in peripheren Schlagadern der Extremitäten oder der Bauchschlagader hervorgerufener Arteriosklerose obliterans und bei zu vorübergehender zerebraler Ischämie oder Hirninfarkt führender Zerebralarteriensklerose auftreten, akkumuliert werden können und dass sie zur Diagnose solcher Arterioskleroseläsionen mit einem photodynamischen Diagnoseverfahren verwendbar sein können, und auch dass die Bestrahlung mit Laserlicht von solchen Läsionen, die das so akkumulierte Chlorinderivat enthalten, gewisse helfende und heilende Wirkungen auf die Arterioskleroseläsionen mit sich bringen kann. Die Japanische Patentanmeldung, Veröffentlichung Kokai Hei 4-330013 und die Beschreibung des US-Patents Nr. 5,308,861 berichten ferner, dass das Chlorinderivat dem Hämatoporphyrinderivat in Bezug auf die Akkumulationsfähigkeit und in Bezug auf die heilende Wirkung auf die Arterioskleroseläsionen überlegen ist, den Ergebnissen der Tests des Chlorinderivats im Vergleich zu dem Hämatoporphyrinderivat nach zu urteilen.
Darüber hinaus offenbaren die vorstehend erwähnten Japanischen Offenlegungsschriften Hei 6-88902 und Hei 6-89000 und die US-Patente Nr. 4,675,338 und Nr. 4,693,885, dass das darin beschriebene Chlorinderivat mit Magnesium, Eisen, Zink, Nickel, Cobalt oder Kupfer einen Metallkomplex bilden kann. Ferner offenbaren die Beschreibung des vorstehend erwähnten Japanischen Patents Nr. 2520735 (ausgestellt am 31. Juli 1996) und die vorstehend erwähnte Europäische Patentanmeldung, Veröffentlichungs-Nr. 350948A, dass Metallporphyrine, die Zink, Eisen, Kupfer, Mangan, Kalium, Indium oder andere Metalle als das Koordinationsmetall enthalten, bei der photodynamischen Diagnose oder photodynamischen Therapie von Krebsen oder Tumoren verwendbar sind.
Ferner berichtet eine Japanische Zeitschrift, YAKUGAKU ZASSHI Bd. 84, Nr. 12, S. 1152– 1157 (1964), dass von Chlorophyll abgeleitetes Chlorophyllin mit Magnesium, Cobalt, Mangan, Vanadium, Silber oder Gold eine Metallchelatverbindung bilden kann.
Soweit die Erfinder wissen, ist jedoch bis jetzt kein Metallkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit Gold oder Platin bekannt.
Andererseits sind in der Photochemotherapie und photodynamischen Diagnose, mit Hämatoporphyrinderivaten oder Chlorinderivaten als photosensitive Substanz, in den meisten Fällen Ultraviolettstrahlen oder Laserlicht einer Wellenlänge in einem Bereich von 300–800 nm als die Strahlung zur Anregung der photosensitiven Substanz verwendet worden, um die Fluoreszenz davon zu emittieren.
Jedoch beträgt die Tiefe in die ein Laserlicht in die inneren Gewebe des Wirtskörpers einstrahlen kann, unter den bei der üblichen Photochemotherapie verwendeten Betriebsbedingungen, 5 mm bis 8 mm und beträgt bestenfalls 10 mm bis 20 mm, sogar in solchen Fällen, in denen die Spitzenleistung des Laserlichts stark erhöht wird (siehe Biotherapy, Bd. 7, S. 673–680 (1993)). Bei einer solchen Photochemotherapie, wie sie auf Gewebe von Krebs oder Tumoren abzielt, die in den tiefen Teilen des Wirtskörpers vorkommen, ist es notwendig, einen operativen Eingriff mit Gefahr oder Risiko für die Patienten durchzuführen, zum Beispiel ein chirurgischer Einschnitt, um den Krebs oder Tumor zu erreichen, Gießen einer photosensitiven Substanz in den Bereich solchen Krebses oder Tumorgewebes oder operatives Einbringen einer Vorrichtung zur Laserbestrahlung in den Körper und dergleichen. In solchen Fällen, in denen die Photochemotherapie auf die Behandlung der Arteriosklerose gerichtet ist, wird es notwendig, einen speziellen und mühevollen operativen Eingriff durchzuführen, wie ein Einbringen einer Vorrichtung zur Laserbestrahlung in die Blutgefäße. Da jedoch ein solcher operativer Eingriff in ein Gewebe oder Organ, das in dem inneren, tiefen Teil des Wirtskörpers vorkommt, eine komplizierte Operation ist und immer eine nicht zu erwartende Gefahr oder Risiko bergen kann, ist es eine Operation, die als Mittel für die ärztliche Behandlung wenn möglich vermieden werden soll.
Wir, die Erfinder, haben nun umfangreiche Forschungsarbeiten angestellt, mit unserem Vorsatz, ein neues photochemotherapeutisches Verfahren und ein neues photodynamisches Diagnoseverfahren zu entwickeln, die ohne die Notwendigkeit arbeiten können, einen operativen Eingriff in einer gefährlichen und komplizierten Weise durchzuführen, sogar in solchen Fällen, wenn ein Tumor oder solider Krebs oder Arterioskleroseläsionen, die diagnostiziert oder behandelt werden sollen, in dem tiefen Bereich des Patientenkörpers vorhanden sind, die das in den photochemotherapeutischen Behandlungen, die auf dem Stand der Technik sind, verwendete Laserlicht nicht erreichen kann.
Bei der Untersuchung dieses Problems haben wir die Tatsache berücksichtigt, dass eine bekannte Verbindung, mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Gultamylchlorin e6 oder ein wasserlösliches Alkalimetallsalz davon, wenn sie an den Patienten verabreicht worden ist, eine solche charakteristische Eigenschaft an den Tag legt, dass sie selektiv innerhalb des im Körper des Patienten vorhandenen Tumor- oder soliden Krebsgewebes oder der Arterioskleroseläsionen akkumulieren kann und sie kann auch nach einer bestimmten Zeitspanne rasch aus dem Körper ausgeschieden werden. Wir haben auch die Tatsache berücksichtigt, dass Röntgenstrahlen eine spezielle Eigenschaft aufweisen, dass sie welche Tiefe auch immer innerhalb des Körpers des Patienten erreichen können und auch durch den Körper durchgehen können, falls die Wellenlänge und Intensität der Röntgenstrahlen geeignet gewählt sind, im Gegensatz zu den Ultraviolettstrahlen und dem Laserlicht, die als die Anregungsstrahlung für die photosensitive Substanz bei der Photochemotherapie, die auf dem Stand der Technik ist, verwendet worden sind.
Auf Basis dieser Berücksichtigungen und Ideen haben wir nun umfangreiche Forschungsarbeiten ausgeführt, um solche neuen Chlorin e6-Derivate zu erschaffen, die von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 abgeleitet sind und die mit solchen zusätzlichen Eigenschaften ausgestattet worden sind, dass die hergestellten neuen Chlorin e6-Derivate zum Auffangen der Röntgenstrahlen geeignet sind und auch geeignet sind, bei Bestrahlung mit Röntgenstrahlen angeregt zu werden.
Als ein Ergebnis unserer verschiedenen Forschungsarbeiten haben wir nun erfolgreich solch einen neuen, Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 oder ein Salz davon synthetisiert und erhalten, der durch Verbinden eines weniger giftigen Goldatoms, das eine ausgezeichnete Fähigkeit, Röntgenstrahlen aufzufangen, gegenüber Röntgenstrahlen an den Tag legt, die einen Bereich von Wellenlängen aufweisen, die ohne weiteres durch den lebenden Tierkörper hindurchgehen, über eine Koordinationsbindung oder Chelatbindung mit dem Chlorinring des mono-L-Aspartylchlorin e6- oder mono-L-Glutamylchlorin e6-Moleküls hergestellt wird.
Wir haben nun ferner festgestellt, dass, wenn der so erhaltene neue Röntgenstrahlenauffangende Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 oder ein Natriumsalz davon, entweder an einen ein solides Asziteskarzinom im Bauchbereich aufweisenden Wirt verabreicht wird oder an einen Arterioskleroseläsionen aufweisenden Wirt, der Röntgenstrahlen-auffangende Goldkomplex selektiv innerhalb des Tumorgewebes oder der Arterioskleroseläsionen in 1 bis 3 Stunden nach der Verabreichung des Goldkomplexes akkumulieren kann und dass, wenn der so akkumulierte Röntgenstrahlenauffangende Goldkomplex mit einem Röntgenstrahlenbündel, das darin Röntgenstrahlen der Wellenlänge 0,153 Å enthält, mit einer Technik der Röntgentomographie bestrahlt wird, er ein scharfes Röntgenbild des Tumorgewebes oder der Arterioskleroseläsionen liefern kann und dass, falls die Bestrahlungszeit des Röntgenstrahlenbündels eingestellt wird, der so akkumulierte Röntgenstrahlen-auffangende Goldkomplex angeregt wird und eine zellabtötende Wirkung gegen die Asziteskarzinomzellen oder eine zerstörende Wirkung gegen das in den Arterioskleroseläsionen akkumulierte Cholesterol ausüben kann. Wir haben ferner festgestellt, dass die vorstehend-erwähnten neuen Goldkomplexe von mono-L-Aspartyl (oder mono-L-Glutamyl)chlorin e6 oder deren Salze, wenn sie verabreicht werden, generell bevorzugt innerhalb des Tumors, soliden Krebses oder der Arterioskleroseläsionen, wie in einem Säugerwirt (einschließlich Mensch und Haustieren wie Pferd, Rind und Schaf und Gesellschaftstieren wie Hunde und Katzen) entwickelt, akkumulieren können und sie können dazu dienen, mit der Röntgenstrahlenradiographie, auf Bestrahlung mit einem Röntgenstrahlenbündel hin, das darin Röntgenstrahlen der Wellenlänge 0,153 Å enthält, davon ein scharfes Röntgenbild zu liefern und sie können ferner als ein Mittel zur Heilung des Tumors oder soliden Krebses und auch als ein Mittel zur Heilung der Arterioskleroseläsionen dienen. Diese Erfindung ist auf Basis dieser vorstehenden Entdeckungen vervollständigt worden.
Gemäß einer ersten Ausführungsform dieser Erfindung als weitest gefasstes Konzept, wird deshalb als eine neue Verbindung ein Röntgenstrahlen-auffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 bereitgestellt, der durch koordinative Bindung oder Chelatbildung eines Goldkations mit dem Chlorinring von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 oder einem pharmakologisch verträglichen Salz davon hergestellt wird.
Der Röntgenstrahlen-auffangende Goldkomplex gemäß der ersten Ausführungsform dieser Erfindung kann, im Allgemeinen, als ein Röntgenstrahlen-auffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem mono-, di- oder trivalenten Goldatom ausgedrückt werden, der durch die folgende allgemeine Formel (I) wiedergegeben ist
wobei Au ein Goldatom bedeutet, m eine ganze Zahl 1, 2 oder 3 bedeutet und n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet. Das in dem Goldkomplex vorhandene Goldatom, wie durch die allgemeine Formel (I) wiedergegeben, kann ein mono-, di- oder trivalentes Kation sein.
Unter den Goldkomplexen, die durch die vorstehende allgemeine Formel (I) wiedergegeben werden können, ist ein solcher Goldkomplex, in dem n gleich 1 ist, ein Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6, in dem L-Asparaginsäure über eine Amidbindung an die Seitenkette -CH₂COOH in Position 20 des Chlorinrings, gezeigt in der vorstehenden Formel (I), gebunden wurde. Unter den Goldkomplexen, die durch die vorstehende allgemeine Formel (I) wiedergegeben werden können, ist ein solcher Goldkomplex, in dem n gleich 2 ist, ein Goldkomplex von mono-L-Glutamylchlorin e6, in dem L-Glutaminsäure an Stelle von L-Asparaginsäure über eine Amidbindung gebunden wurde.
Der erfindungsgemäße Goldkomplex des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (I) kann an der freien Carboxylgruppe mit einer Base ein Salz bilden. Als Beispiel für die durch Umsetzung mit Basen gebildeten Salze, werden Natrium-, Kalium-, Calcium-, Magnesium- oder Ammoniumsalze und auch Triethylammonium-, Trimethylammonium-, Morpholin- und Piperidin-Salze genannt. Ferner kann der Goldkomplex des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (I) durch Binden seines basischen Rests mit einer anorganischen Säure oder einer organischen Säure ein Salz bilden. Als Beispiel für das durch Umsetzung mit einer Säure gebildete Salz, werden das Hydrochlorid, Sulfat, Nitrat, Phosphat, Acetat, Formiat und dergleichen genannt.
In einer bevorzugten Ausführungsform der ersten Ausführungsform dieser Erfindung, ist der Goldkomplex des Chlorin e6-Derivats mit der vorstehenden allgemeinen Formel (I) ein Röntgenstrahlen-auffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem trivalenten Goldatom, der durch die folgende allgemeine Formel (Ia) wiedergegeben ist
wobei Au ein Goldatom bedeutet und n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet.
Ein besonders bevorzugtes Beispiel für den Goldkomplex der allgemeinen Formel (Ia) ist der Röntgenstrahlen-auffangende Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 mit einem trivalenten Goldatom, der durch die folgende Formel (Ia-1) wiedergegeben ist
Der mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex, wiedergegeben durch die Formel (Ia-1), wurde in nachstehend angegebenem Beispiel 1 in Form einer dunkelgrün gefärbten, amorphen, pulvrigen Substanz, die keinen definierten Schmelzpunkt zeigt, sich aber bei oder nahe bei 270°C zersetzt und durch die Molekülformel (Summenformel): C₃₈H₃₈AuN₅O₉ wiedergegeben ist, mit einem Verfahren erhalten, umfassend Umsetzen von mono-L- Aspartylchlorin e6-tetranatriumsalz mit 1 bis 2 Moläquivalenten von Hydrogentetrachloroaurat (HAuCl₄) in einer 1/15 M Phosphatpufferlösung (pH-Wert 7,5), gefolgt von Reinigen des daraus resultierenden Reaktionsprodukts in geeigneter Weise. Es wurde auch ein Trinatriumsalz des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes der Formel (Ia-1) erhalten.
Mono-L-Aspartylchlorin e6 und mono-L-Glutamylchlorin e6, die als die Ausgangsmaterialien für die Synthese des Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (I), gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der ersten Ausführungsform dieser Erfindung, verwendet werden können, sind solche Verbindungen, wie mit dem zum Beispiel in Beispiel 19, beziehungsweise Beispiel 21 der Japanischen Offenlegungsschrift Hei 6-88902 oder dem U.S.-Patent Nr. 4,675,338 beschriebenen Syntheseverfahren erhalten.
Um den Goldkomplex des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (I) gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der ersten Ausführungsform dieser Erfindung herzustellen, kann generell ein Verfahren praktiziert werden, das Lösen von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 oder des Tetranatriumsalzes davon und eines Chlorids oder Fluorids eines mono-, di- oder trivalenten Goldatoms, vorzugsweise Hydrogentetrachloroaurat (HAuCl₄), verwendet in einem geeigneten Moläquivalent in einem geeigneten Lösungsmittel, vorzugsweise einer Phosphatpufferlösung mit pH-Wert 7,0 bis 8,0, und Umsetzen beider Reaktanten bei einer Temperatur von 0 bis 50°C, Ansäuern der so erhaltenen Reaktionslösung mit Salzsäure nach der Vollendung der Umsetzung, wodurch das Goldkomplexprodukt aus der Reaktionslösung ausgefällt wird, und Reinigen des so ausgefällten Goldkomplexprodukts durch Verwenden einer Kolonne mit umgekehrten Phasen umfasst.
Um den mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex der vorstehenden Formel (Ia-1) herzustellen und ihn als reines Produkt zu isolieren, ist es bequem, ein solches Verfahren zu verwenden, das die folgenden Schritte umfasst: Umsetzen von mono-L-Aspartylchlorin e6-tetranatriumsalz mit 1 bis 2 Moläquivalenten von Hydrogen-tetrachloroaurat (HAuCl₄) in einer Phosphatpufferlösung, welche eine Molkonzentration von 1/10 bis 1/20 aufweist, bei einer Temperatur von 0 bis 50°C bis die Umsetzung vollständig ist, danach Einstellen des pH-Werts der resultierenden Reaktionslösung durch Hinzufügen von verdünnter Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 bis 3,5, wodurch ein den Goldkomplex von mono-L- Aspartylchlorin e6 umfassender Niederschlag ausgefällt wird, Sammeln des Niederschlags, danach Lösen des so gesammelten Niederschlags in einer Phosphatpufferlösung, welche eine Molkonzentration von 1/10 bis 1/20 (pH-Wert 7,0 bis 8,0) aufweist, um eine Reinigung des Goldkomplexes zu bewirken, Hindurchleiten der resultierenden Lösung durch eine Säule mit umgekehrter Phase, wobei Octadecylsilicagel (ODS) als feste Phase verwendet wird und 5 bis 15% (Vol.-%) Methanol enthaltendes Wasser als mobile Phase verwendet wird, danach fraktioniertes Sammeln des aus der Säule mit umgekehrter Phase ausfließenden Mediums, Konzentrieren der Fraktionen des ausfließenden Mediums, welche einzig den mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex enthalten, unter reduziertem Druck, Einstellen des pH-Werts der resultierenden konzentrierten Lösung mit einer verdünnten Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 bis 3,5, wodurch ein Niederschlag von dunkelgrüner Farbe ausgefällt wird, Sammeln des Niederschlags, Waschen des so erhaltenen Niederschlags mit 40 bis 50% (Vol.-%) Aceton enthaltendem Wasser, Abtrennen des Niederschlags aus dem wässrigen Aceton durch Zentrifugation und ferner Trocknen des aus dem Goldkomplex gebildeten Niederschlags unter reduziertem Druck.
Es ist bereits bekannt, dass die durch orale Verabreichung von mono-L-Aspartylchlorin e6-tetranatriumsalz an CD-1 Mäuse (männlich) getestete akute Toxizität solcherart ist, dass seine letale Dosis 50% 164 mg/kg beträgt, und somit weist die Verbindung eine niedrige Toxizität auf (siehe Japanische Patentanmeldung, Veröffentlichung Kokai Hei 9-71531). Es wird festgestellt, dass die akute Toxizität eines Natriumsalzes des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes mit der vorstehend-erwähnten Formel (Ia-1) nach oraler Verabreichung im wesentlichen gleich ist wie die des mono-L-Aspartylchlorin e6-tetranatriumsalzes und somit wird keine Steigerung der Toxizität durch die Komplexierung der letzteren Salz-Verbindung mit einem Goldatom beobachtet.
Das Goldatom kann die Fähigkeit, Röntgenstrahlen aufzufangen, besitzen und weist auch eine solche spezielle Eigenschaft auf, dass das Goldatom Röntgenstrahlen einer spezifischen Wellenlänge (0,153 Å) absorbiert und in einen angeregten Zustand übergeht und dass das Goldatom, wenn es aus dem angeregten Zustand in den Grund- oder Normalzustand zurückfällt, nicht die Emission eines Photons nach sich zieht, sondern stattdessen die Emission eines Elektrons nach sich ziehen kann (nämlich der Auger-Effekt), auf Grund dessen, dass Energie auf ein anderes Elektron innerhalb des Goldatoms übertragen werden kann.
Das in dem erfindungsgemäßen Chlorin e6-Derivat-Goldkomplex vorhandene Goldatom weist auch die gleichen Eigenschaften wie vorstehend auf, so dass der erfindungsgemäße Goldkomplex eine Fähigkeit, Röntgenstrahlen aufzufangen, aufweist und deshalb geeignet ist, ein Röntgenbild durch Röntgenstrahlenradiographie zu liefern. Ferner ist der erfindungsgemäße Goldkomplex imstande, Röntgenstrahlen von 0,153 Å Wellenlänge zu absorbieren und in den angeregten Zustand überzugehen und auf das Zurückfallen in den Grundzustand hin das Elektron zu emittieren, so dass, bedingt durch die Wirkung des emittierten Elektrons, der erfindungsgemäße Goldkomplex die Zellen des Tumors oder Krebses, in denen der Goldkomplex spezifisch akkumuliert ist, schädigen kann oder dass der erfindungsgemäße Goldkomplex die Zersetzung des in den Arterioskleroseläsionen vorhandenen Cholesterols auf die Bestrahlung mit Röntgenstrahlen hin fördern kann.
Somit ist gemäß dieser Erfindung der erfindungsgemäße Goldkomplex nicht nur mit der Fähigkeit, selektiv in dem Tumor- oder Krebsgewebe oder in den arteriosklerotischen Läsionen zu akkumulieren, ausgestattet, wie sie charakteristisch von dem mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 an den Tag gelegt wird, sondern ist auch mit dem komplexbildenden Goldatom mit der Fähigkeit, Röntgenstrahlen aufzufangen, ebenso wie der Aktivität, unter Bestrahlung mit Röntgenstrahlen ein Elektron zu emittieren, ausgestattet, wodurch der erfindungsgemäße Goldkomplex die Eignung zur Diagnosestellung mit Röntgenstrahlenradiographie gewonnen haben kann, ebenso wie die Funktion, unter Bestrahlung mit Röntgenstrahlen, die Tumor- oder Krebszellen zu schädigen und die arteriosklerotischen Läsionen zu zerstören.
Gemäß einer zweiten Ausführungsform dieser Erfindung wird ein Arzneimittel, umfassend als Wirkstoff einen Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6, der durch koordinative Bindung oder Chelatbildung des Chlorinrings von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem Goldkation hergestellt wurde, oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen festen oder flüssigen Träger bereitgestellt.
Der vorstehend-erwähnte Röntgenstrahlen-auffangende Goldkomplex, der als der Wirkstoff in dem Arzneimittel gemäß der zweiten Ausführungsform dieser Erfindung enthalten ist, kann im Allgemeinen ein Röntgenstrahlen-auffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem mono-, di- oder trivalenten Goldatom sein, der durch die folgende Formel (I) wiedergegeben ist
wobei Au ein Goldatom bedeutet, m eine ganze Zahl 1, 2 oder 3 bedeutet und n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet. Der Goldkomplex kann vorzugsweise ein Röntgenstrahlenauffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem trivalenten Goldatom sein, der durch die folgende Formel (Ia) wiedergegeben ist
wobei Au ein Goldatom bedeutet und n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet.
Das Arzneimittel gemäß der zweiten Ausführungsform dieser Erfindung kann verabreicht werden zwecks Detektion und Diagnose des in dem Säugerwirt gebildeten Tumorgewebes oder soliden Krebses mit Röntgenstrahlenradiographie und es kann auch verabreicht werden zwecks Detektion des in dem Säugerwirt gebildeten Tumorgewebes oder soliden Krebses mit Röntgenstrahlenradiographie und ferner zwecks therapeutischer Behandlung oder Heilung des so detektierten Tumors oder soliden Krebses durch nachfolgende Bestrahlung mit Röntgenstrahlen.
Das Arzneimittel gemäß der zweiten Ausführungsform dieser Erfindung kann auch verabreicht werden zwecks Detektion und Diagnose der Arterioskleroseläsionen oder der Arterienbereiche, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, in dem Säugerwirt mit Röntgenstrahlenradiographie und es kann auch verabreicht werden zwecks Detektion der Arterioskleroseläsionen oder der Arterienbereiche, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, in dem Säugerwirt mit Röntgenstrahlenradiographie und ferner zwecks Behandlung oder Heilung der detektierten Arterioskleroseläsionen oder der detektierten Arterienbereiche, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, durch nachfolgende Bestrahlung mit Röntgenstrahlen.
Konkret ist das Arzneimittel gemäß der zweiten Ausführungsform dieser Erfindung wirksam, Detektion, Diagnose und Therapie eines solchen Tumors, der in einer tiefen Position innerhalb des Wirtskörpers vorkommt, durchzuführen, zum Beispiel Hirntumor, Lungenkrebs, Magenkrebs, Leberkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Gebärmutterkrebs, Prostatakrebs, Nierenkrebs, Speiseröhrenkrebs, etc. und ist auch wirksam Detektion, Diagnose und Therapie eines solchen Tumors oder Krebses, der sich auf oder nahe der Körperoberfläche entwickelt hat, durchzuführen. Die erfindungsgemäße Zusammensetzung ist auch wirksam Detektion, Diagnose und Therapie der Arterioskleroseläsionen durchzuführen, zum Beispiel Koronarsklerose, die Herzinfarkt oder Angina pectoris zur Folge haben kann, Arteriosklerose obliterans, die in peripheren Schlagadern der Extremitäten oder der Bauchschlagader auftreten kann, und Zerebralarteriensklerose, die vorübergehende zerebrale Ischämie zur Folge haben kann, und so weiter.
Der Goldkomplex, der als der Wirkstoff in die Zusammensetzung gemäß der zweiten Ausführungsform dieser Erfindung eingearbeitet ist, kann peroral oder durch intravenöse oder intramuskuläre Injektionen oder auf anderen parenteralen Wegen verabreicht werden. Die als der Wirkstoff verwendbare Verbindung kann auch perkutan verabreicht werden. Die als der Wirkstoff verwendbare Verbindung kann auch lokal verabreicht werden, zum Beispiel durch lokale und direkte Injektion in das Tumorgewebe, das in einer tiefen Position des Wirtskörpers vorkommt, oder durch lokales Verabreichen nahe der Arterioskleroseläsionen mittels eines speziellen Katheters. Die Zusammensetzung gemäß der zweiten Ausführungsform dieser Erfindung kann die Wirkstoff-Verbindung in Form eines Natriumsalzes davon enthalten und kann ferner als gefriergetrocknete, sterile, pyrogen-freie Zubereitung formuliert werden.
In Fällen, in denen das Arzneimittel gemäß der zweiten Ausführungsform dieser Erfindung peroral verabreicht werden soll, kann die Wirkstoff-Verbindung mit einem festen oder flüssigen Träger gemischt werden und kann in Form von Tabletten, Bukkaltabletten, Pastillen, Kapseln, Suspensionen, Sirupen und dergleichen formuliert werden.
In Fällen, in denen das Arzneimittel gemäß der zweiten Ausführungsform dieser Erfindung in Form eines Injektionspräparates vorliegt, kann die Wirkstoff-Verbindung in Form einer sterilen wässrigen Lösung oder Dispersion formuliert werden oder als eine sterile, gefriergetrocknete Zubereitung, die den Wirkstoff enthält. Als flüssige Träger werden vorzugsweise Wasser, physiologische Kochsalzlösung, Ethanol, wässriger Ethanol, Glycerol, Propylenglykol und Pflanzenöle als Beispiel genannt. In den meisten Fällen ist es auch bevorzugt, ein isotonisches Mittel, zum Beispiel Zucker oder Natriumchlorid, darin einzuarbeiten.
Die Verabreichungs-Dosis des erfindungsgemäßen Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats kann je nach Patient und den Zwecken der Detektion, Diagnose oder Therapie der Läsionen, auf die abgezielt wird oder die behandelt werden sollen, variieren und der Goldkomplex kann im Allgemeinen an einen Erwachsenen mit einer Einzeldosis von 0,01 bis 50 mg/kg, vorzugsweise von 0,1 bis 10 mg/kg, des Körpergewichts verabreicht werden.
Gemäß einer dritten Ausführungsform dieser Erfindung wird die Verwendung eines Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der vorstehenderwähnten allgemeinen Formel (I) oder eines Salzes davon oder eines Röntgenstrahlenauffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (Ia) oder eines Salzes davon zur Herstellung des Arzneimittels bereitgestellt, das zum Durchführen der Detektion, Diagnose und/oder Therapie des Tumorgewebes oder soliden Krebses mittels Bestrahlung mit Röntgenstrahlen verwendet werden soll.
Gemäß einer vierten Ausführungsform dieser Erfindung wird die Verwendung eines Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der vorstehenderwähnten allgemeinen Formel (I) oder eines Salzes davon oder eines Röntgenstrahlenauffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (Ia) oder eines Salzes davon zur Herstellung des Arzneimittels bereitgestellt, das zum Durchführen von Detektion, Diagnose und/oder Therapie der Arterioskleroseläsionen oder der Arterienbereiche, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, mittels Bestrahlung mit Röntgenstrahlen verwendet werden soll.
Ferner wird gemäß einer fünften Ausführungsform dieser Erfindung ein Verfahren zur Detektion und Diagnose von Tumorgewebe oder solidem Krebs bereitgestellt, das umfasst: Verabreichen eines Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (I) oder eines Salzes davon oder eines Röntgenstrahlenauffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (Ia) oder eines Salzes davon gemäß der ersten Ausführungsform dieser Erfindung, besonders des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes der Formel (Ia-1) oder eines Natriumsalzes davon, an einen einen Tumor oder soliden Krebs aufweisenden Säugerwirt, in einer Menge des Goldkomplexes, die es wirksam erlaubt, dass der Goldkomplex in dem Tumor- oder soliden Krebsgewebe akkumuliert, danach Bestrahlen des Tumors oder Krebses von außerhalb des Wirtskörpers mit einem Röntgenstrahlenbündel, das Röntgenstrahlen einer Wellenlänge von 0,153 Å enthält, und Aufnehmen eines Röntgenbildes des Tumor- oder soliden Krebsgewebes, das darin den Goldkomplex enthält, auf einem Röntgenfilm mit einer Technik der Röntgencomputertomographie und Diagnostizieren des Tumor- oder Krebsgewebes.
Darüber hinaus wird gemäß einer sechsten Ausführungsform dieser Erfindung ein Verfahren zur Detektion und Therapie eines Tumors oder soliden Krebses bereitgestellt, das umfasst: Verabreichen eines Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (I) oder eines Salzes davon oder eines Röntgenstrahlenauffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (Ia) oder eines Salzes davon gemäß der ersten Ausführungsform dieser Erfindung, besonders des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes der Formel (Ia-1) oder eines Natriumsalzes davon, an einen einen Tumor oder soliden Krebs aufweisenden Säugerwirt, in einer Menge des Goldkomplexes, die es wirksam erlaubt, dass der Goldkomplex in dem Tumor- oder soliden Krebsgewebe akkumuliert, danach Bestrahlen des Tumors oder Krebses von außerhalb des Wirtskörpers mit einem Röntgenstrahlenbündel, das Röntgenstrahlen einer Wellenlänge von 0,153 Å enthält, und Aufnehmen eines Röntgenbildes des Tumor- oder soliden Krebsgewebes, das darin den Goldkomplex enthält, auf einem Röntgenfilm mit einer Technik der Röntgencomputertomographie, um den Bereich des Tumors oder soliden Krebses zu detektieren, und danach weiterhin Bestrahlen des Bereichs des Tumors oder soliden Krebses mit einem Röntgenstrahlenbündel, das Röntgenstrahlen einer Wellenlänge von 0,153 Å enthält, wodurch mindestens ein Anteil der Zellen des Tumors oder des soliden Krebses durch die Wirkung des mit den so ausgestrahlten Röntgenstrahlen angeregten Goldkomplexes und auch durch das von dem Goldatom des Komplexes emittierte Elektron abgetötet wird.
Das Verfahren der fünften Ausführungsform dieser Erfindung, ebenso wie das Verfahren der sechsten Ausführungsform dieser Erfindung, ist auf einen Hirntumor, Lungenkrebs, Magenkrebs, Leberkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Gebärmutterkrebs, Prostatakrebs, Nierenkrebs, Speiseröhrenkrebs eines Säugerwirts als das Ziel, das behandelt werden soll, anwendbar.
Ferner wird gemäß einer siebten Ausführungsform dieser Erfindung ein Verfahren zur Detektion und Therapie von Arterioskleroseläsionen bereitgestellt, das umfasst: Verabreichen eines Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der vorstehenden allgemeinen Formel (I) oder eines Salzes davon oder eines Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats mit der vorstehenden allgemeinen Formel (Ia) oder eines Salzes davon, besonders des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes der Formel (Ia-1) oder eines Natriumsalzes davon, an einen Arteriosklerose aufweisenden Säugetierwirt, in einer Menge des Goldkomplexes, die es wirksam erlaubt, dass der Goldkomplex in den Arterioskleroseläsionen akkumuliert, danach Bestrahlen der Arteriosklerose-Läsionen von außerhalb des Wirtskörpers mit einem Röntgenstrahlenbündel, das Röntgenstrahlen einer Wellenlänge von 0,153 Å enthält, und Aufnehmen eines Röntgenbildes der Arterioskleroseläsionen, die darin den Goldkomplex enthalten, auf einem Röntgenfilm mit einer Technik der Röntgencomputertomographie, um den Bereich der Arterioskleroseläsionen zu detektieren, und danach weiterhin Bestrahlen des Bereichs der Arterioskleroseläsionen mit einem Röntgenstrahlenbündel, das Röntgenstrahlen einer Wellenlänge von 0,153 Å enthält, wodurch die innerhalb der Arterioskleroseläsionen vorhandenen Teile, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, durch die Wirkungen des mit den so ausgestrahlten Röntgenstrahlen angeregten Goldkomplexes und auch durch das von dem Goldatom des Komplexes emittierte Elektron zerstört werden.
Das Verfahren gemäß der siebten Ausführungsform dieser Erfindung ist auf Läsionen von Koronarsklerose, die Herzinfarkt oder Angina pectoris zur Folge haben können, von Arteriosklerose obliterans, die in peripheren Schlagadern der Extremitäten oder der Bauchschlagader auftreten können, von Zerebralarteriensklerose, die vorübergehende zerebrale Ischämie zur Folge haben können, als die Ziele, die behandelt werden sollen, anwendbar. Das Röntgenstrahlenbündel, das die Röntgenstrahlen der Wellenlänge von 0,153 Å enthält, kann unter Verwendung eines bekannten Röntgenstrahlen erzeugenden Apparates erhalten werden.
Wir haben unsere Forschungsarbeiten weiterhin fortgesetzt. Als ein Ergebnis dieser weiteren Untersuchungen haben wir nun festgestellt, dass, wie das Gold, auch Platin einen Röntgenstrahlen-auffangenden Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6, durch koordinative Bindung oder Chelatbildung des Platinatoms mit dem Chlorinring eines Chlorin e6-Derivats, bilden kann.
Gemäß einer achten Ausführungsform dieser Erfindung wird deshalb als die neue Verbindung ein Röntgenstrahlen-auffangender Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 bereitgestellt, der durch koordinative Bindung oder Chelatbildung eines Platinkations mit dem Chlorinring von mono-L-Aspartylchlorin e6 mono-L-Glutamylchlorin e6 oder einem pharmakologisch verträglichen Salz davon hergestellt wird.
Der Röntgenstrahlen-auffangende Platinkomplex gemäß der achten Ausführungsform dieser Erfindung kann im Allgemeinen als ein Röntgenstrahlen-auffangender Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem di- oder trivalenten Platinatom ausgedrückt werden, der durch die folgende allgemeine Formel (II) wiedergegeben ist
wobei Pt ein Platinatom bedeutet, z eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet und n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet.
In einer bevorzugten Ausführungsform der achten Ausführungsform dieser Erfindung, kann der Platinkomplex des Chlorin e6-Derivats, der durch die vorstehende allgemeine Formel (II) wiedergegeben ist, ein Röntgenstrahlen-auffangender Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem tetravalenten Platinatom sein, der durch die folgende allgemeine Formel (IIa) wiedergegeben ist
wobei n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet.
Der Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6, wiedergegeben durch die vorstehende allgemeine Formel (IIa), kann ein Dinatriumsalz bilden.
Das Platinatom kann die Fähigkeit, Röntgenstrahlen aufzufangen, besitzen und weist auch eine solche spezielle Eigenschaft auf, dass das Platinatom Röntgenstrahlen einer spezifischen Wellenlänge (0,158 Å) absorbiert und in einen angeregten Zustand übergeht und dass das Platinatom, wenn es aus dem angeregten Zustand in den Grund- oder Normalzustand zurückfällt, nicht die Emission eines Photons nach sich zieht, sondern stattdessen die Emission eines Elektrons nach sich ziehen kann (nämlich der Auger-Effekt), auf Grund dessen, dass Energie auf ein anderes Elektron innerhalb des Platinatoms übertragen werden kann.
Das in dem erfindungsgemäßen Platinkomplex des Chlorin e6-Derivats vorhandene Platinatom weist auch die gleichen Eigenschaften wie vorstehend auf und daher weist der erfindungsgemäße Platinkomplex die Fähigkeit, Röntgenstrahlen aufzufangen, auf und ist deshalb geeignet, das Röntgenbild durch Röntgenstrahlenradiographie zu liefern. Ferner ist der erfindungsgemäße Platinkomplex imstande Röntgenstrahlen von 0,158 Å Wellenlänge zu absorbieren und in den angeregten Zustand überzugehen.
Wenn der angeregte Platinkomplex in den Grundzustand zurückfällt, emittiert er das Elektron, so dass, bedingt durch die Wirkung des so emittierten Elektrons, der erfindungsgemäße Platinkomplex die Zellen des Tumors oder Krebses, in denen der Platinkomplex spezifisch akkumuliert ist, schädigen kann oder dass der erfindungsgemäße Platinkomplex die Zersetzung des in den Arterioskleroseläsionen vorhandenen Cholesterols, auf die Bestrahlung mit Röntgenstrahlen hin, fördern kann.
Deshalb sind der Röntgenstrahlen-auffangende Platinkomplex des Chlorin e6-Derivats oder ein Salz davon gemäß der achten Ausführungsform dieser Erfindung, ähnlich wie der Röntgenstrahlen-auffangende Goldkomplex des Chlorin e6-Derivats oder ein Salz davon gemäß der ersten Ausführungsform dieser Erfindung, zum Durchführen der Detektion, Diagnose und Therapie des Tumors oder soliden Krebses oder der Arterioskleroseläsionen nutzbar.
Der Platinkomplex des Chlorin e6-Derivats mit der allgemeinen Formel (II) kann durch Umsetzen von mono-L-Aspartyl (oder mono-L-Glutamyl) chlorin e6-tetranatriumsalz mit einem Chlorid oder Fluorid eines di- oder tetravalenten Platinatoms, vorzugsweise Hydrogentetrachloroplatinat oder Hydrogen-hexachloroplatinat, in einer Menge von 2 bis 5 Moläquivalenten in einer Phosphatpufferlösung bei einer Temperatur von 0 bis 50°C hergestellt werden.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
1 zeigt ein Infrarotabsorptionsspektrum (gemessen im KBr-Verfahren) des mono-L-Aspartylchlorin e6-tetranatriumsalzes.
2 zeigt ein Infrarotabsorptionsspektrum (gemessen im KBr-Verfahren) des wie in nachstehend angegebenem Beispiel 2 hergestellten mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplextetranatriumsalzes.
3 zeigt ein Massenspektrum des wie in nachstehend angegebenem Beispiel 1 hergestellten mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes.
4 zeigt ein Massenspektrum des wie in nachstehend angegebenem Beispiel 2 hergestellten mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex-tetranatriumsalzes.
DIE BESTE ART, DIE ERFINDUNG AUSZUFÜHREN
Nun wird diese Erfindung mit Bezug auf die folgenden Beispiele und Testbeispiele konkret veranschaulicht, aber diese Erfindung ist nicht darauf beschränkt.
Beispiel 1 Synthese des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes
Fünf Gramm mono-L-Aspartylchlorin e6-tetranatriumsalz, das gemäß dem in dem Beispiel der Japanischen Offenlegungsschrift Hei 6-88902 (oder U.S.-Patent Nr. 4,675,338) beschriebenen Verfahren synthetisiert worden war und das das in 1 der beigefügten Zeichnungen gezeigte Infrarotabsorptionsspektrum ergibt, wurden in 900 ml einer 1/15 M Phosphatpufferlösung (pH-Wert 7,5) gelöst. Zu der so erhaltenen Lösung wurde eine wässrige Lösung von Hydrogen-tetrachloroaurat-tetrahydrat (HAuCl₄·4H₂O) (3 g) in Wasser (100 ml) hinzugefügt. Die Menge des hinzugefügten Hydrogen-tetrachloroaurattetrahydrats betrug etwa 1,1 Moläquivalente zu 1 Mol mono-L-Aspartylchlorin e6-tetranatriumsalz.
Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur gerührt. Proben der Reaktionslösung wurden in bestimmten Zeitintervallen entnommen und wurden mit Kieselgel-Dünnschichtchromatographie (DC) wie unten erwähnt analysiert, um auf das Vorhandensein des Flecks von mono-L-Aspartylchlorin e6 (Rf-Wert: 0,71) zu prüfen. Die Umsetzung wurde zu dem Zeitpunkt beendet, an dem die Reaktionslösung keinen Fleck des mono-L-Aspartylchlorin e6 auf dieser DC zeigte. Die Reaktionslösung von dunkelgrüner Farbe, wie nach der vollständigen Umsetzung erhalten, wurde durch Hinzufügen von 3 N Salzsäure auf pH-Wert 2,5 bis 3,5 eingestellt, was zur Ausfällung eines dunkelgrünen Niederschlags führte. Der den mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex umfassende Niederschlag wurde durch Zentrifugation gesammelt.
Zwecks Bewirkens der Reinigung wurde der vorstehend-erwähnte Niederschlag in einem kleinen Volumen einer 1/15 M Phosphatpufferlösung (pH-Wert 7,5) gelöst. Die so erhaltene Lösung wurde durch eine Säule mit umgekehrten Phasen hindurchgeleitet, mit Octadecylsilicagel (ODS) [500 g, Cosmosil 75C₁₈ (ein Produkt von Nakaraitesk Co.) als feste Phase und mit 10% Methanol enthaltendem Wasser als mobile Phase. Das aus der Säule ausfließende Medium wurde in 2 ml-Fraktionen gesammelt. Fraktionen von denen festgestellt worden war, dass sie einzig den mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex enthielten, wurden vereinigt und unter reduziertem Druck konzentriert, um Methanol zu entfernen. Die so erhaltene konzentrierte Lösung wurde durch Hinzufügen von 3 N Salzsäure auf pH-Wert 2,5 bis 3,5 eingestellt, um dadurch einen dunkelgrün gefärbten Niederschlag auszufällen. Der so ausgefällte Niederschlag wurde abfiltriert und mit 50%igem wässrigem Aceton gewaschen. Der somit gewaschene Niederschlag wurde danach durch Zentrifugation von dem wässrigen Aceton abgetrennt. Der so erhaltene dunkelgrün gefärbte Feststoff wurde unter reduziertem Druck getrocknet, was den mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex als amorphes Pulver von dunkelgrüner Farbe lieferte (Ausbeute: etwa 450 mg). Diese pulvrige Substanz mit dunkelgrüner Farbe zeigte keinen definierten Schmelzpunkt, sondern zersetzte sich bei 270°C.
Der so als das dunkelgrün gefärbte amorphe Pulver in dem Vorstehenden erhaltene mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex wurde einer Dünnschichtchromatographie (DC) unterzogen, mit Baker Si-C₁₈ (ein Produkt von J. T. Baker Co.) als Dünnschichtplatte und mit Methanol-1/15 M Phosphatpufferlösung (= 4 : 1) (pH-Wert 7,0) als das Entwicklungs-Lösungsmittel, bei der der so chromatographierte Goldkomplex einen Rf-Wert von 0,77 ergab.
Ferner wurden das Ultraviolettabsorptionsspektrum, Infrarotabsorptionsspektrum, Massenspektrum, ¹H-NMR-Spektrum, die Elementaranalyse und das Atomabsorptionsspektrum des erhaltenen Goldkomplexes geprüft. Das gemessene Massenspektrum wird in 3 der beigefügten Zeichnungen gezeigt. Die Ergebnisse der verschiedenen Messungen werden nachstehend gezeigt.
UV λmax: 621 nm (O. D. = 0,109), 384 nm (O. D. = 0,331), (wobei die Konzentration bei der Messung 4 μg/ml betrug.)
Masse m/z: 906
Elementaranalyse
Berechnet (als C₃₈H₃₈AuN₅O₉):
Atomabsorption von Gold:
Berechnet (als C₃₈H₃₈AuN₅O₉): 21,8%
Gefunden: 17,4%
¹H-NMR: Mono-L-Aspartylchlorin e6 zeigt im ¹H-NMR-Spektrum ein charakteristisch von dem Chlorinring-NH stammendes Proton-Signal nahe bei –1,8 ppm, wohingegen das Proton-Signal bei dem Goldkomplex verschwunden ist. Dies hat die Bildung des Goldkomplexes bestätigt.
Ferner wurde, in Anbetracht der Tatsache, dass der tatsächlich gemessene m/z-Wert in der Massenspektrum-Analyse 906 (M + H)⁺ beträgt, was gleich ist wie der theoretische Wert, und dass die in der Elementaranalyse gefundenen Werte wie in dem Vorstehenden angegeben sind, festgestellt, dass der Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6, wie in diesem Beispiel erhalten, eine solche Molekül-Zusammensetzung hatte, dass das Molekül von mono-L-Aspartylchlorin e6 dreier Wasserstoffatome beraubt worden war und ein Goldatom darin eingeführt worden ist. Folglich wurde festgestellt, dass der Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6, der in diesem Beispiel in Form einer dunkelgrün gefärbten pulvrigen Substanz erhalten wurde, die Molekülformel (Summenformel): C₃₈H₃₈AuN₅O₉ aufweist und durch die vorstehend-erwähnte Strukturformel (Ia-1) wiedergegeben wird.
Beispiel 2 Synthese eines Natriumsalzes des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes
Mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex (100 mg), wie in vorstehendem Beispiel 1 erhalten, wurde in deionisiertem Wasser suspendiert. Zu der so erhaltenen wässrigen Suspension wurde 1N NaOH in einer berechneten Menge hinzugefügt und das daraus resultierende Gemisch wurde gerührt. Nach der vollständigen Auflösung wurde die so erhaltene Reaktionslösung zur Trockene konzentriert. Somit wurde ein Natriumsalz des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes als ein dunkelgrün gefärbtes, amorphes Pulver erhalten (Ausbeute: etwa 110 mg).
Von dem so erhaltenen Goldkomplex-Natriumsalz wurde sein Infrarotabsorptionsspektrum und Massenspektrum analysiert. Das gemessene Infrarotabsorptionsspektrum wird in 2 der beigefügten Zeichnungen gezeigt und das gemessene Massenspektrum wird in 4 der beigefügten Zeichnungen gezeigt.
Aus dem in 4 angegebenen Massenspektrum wurde festgestellt, dass das Goldkomplex-Natriumsalz, wie in diesem Beispiel erhalten, in der Massenspektrum-Analyse den m/z-Wert von 972 aufweist.
Ferner wird aus dem Vergleich von 2 mit 1 der beigefügten Zeichnungen gezeigt, dass das Muster des in 2 gezeigten Infrarotabsorptionsspektrums des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex-Natriumsalzes analog zu dem Muster des in 1 gezeigten Infrarotabsorptionsspektrums des mono-L-Aspartylchlorin e6 Natriumsalzes ist. Somit wird bestätigt, dass die Struktur des Chloringerüsts in dem Goldkomplex-Natriumsalz, das in vorstehendem Beispiel 2 erhalten wurde, erhalten geblieben ist.
Testbeispiel 1
Detektion und Therapie von Tumorgewebe mit Röntgenstrahlenradiographie
Männliche Balb/c-Mäuse mit einem Körpergewicht von 16 bis 20 g (fünf Mäuse pro Gruppe) wurden in ihrem Bauchbereich mit MKSA-Zellen inokuliert, um ein solides Asziteskarzinom im Bauchbereich der Maus zu bilden. Das mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex-Natriumsalz (das Produkt von vorstehendem Beispiel 2) wurde mit einer Dosis von 0,01 bis 0,04 mg in Form einer Lösung des Goldkomplex-Natriumsalzes in physiologischer Kochsalzlösung an die krebsleidenden Mäuse über deren Schwanzvene verabreicht. Nach dem Ende einer Stunde bis drei Stunden nach Verabreichung wurden die Mäuse mit Nembutal narkotisiert. Der Bauchbereich der Mäuse wurde mit einem Röntgenstrahlenbündel, das die Röntgenstrahlen der Wellenlänge von 0,153 Å enthielt, von außerhalb des Körpers über einen geeigneten Zeitraum bestrahlt.
Man ließ die Röntgenstrahlen durch den Bauchbereich der Mäuse hindurchgehen und einen Röntgenfilm aussetzen und sensibilisieren, wodurch ein Röntgenbild gebildet wurde. Somit wurde ohne weiteres eine Röntgenaufnahme, in der der solide Krebs, der detektiert werden sollte, scharf abgebildet worden war, erhalten und somit konnte der solide Krebs aus der so erhaltenen Röntgenaufnahme, mit der das Gewebe des soliden Krebses diagnostiziert werden konnte, ohne weiteres detektiert werden.
Eine Woche nach der Bestrahlung mit Röntgenstahlen wurden die Mäuse anatomisch untersucht und inspiziert, wo beobachtet werden konnte, dass die Ausmaße des soliden Krebses, im Vergleich zu den zum Zeitpunkt der Aufnahme des Röntgenbildes beobachteten, signifikant reduziert worden sind. Somit wurde festgestellt und bestätigt, dass der an die Mäuse verabreichte Goldkomplex des Chlorin e6-Derivats, auf die Bestrahlung der Mäuse mit Röntgenstrahlen hin, eine zellabtötende Wirkung auf die Asziteskarzinom-Zellen ausgeübt hatte.
Testbeispiel 2
Detektion und Therapie von Arterioskleroseläsionen mit Röntgenstrahlenradiographie
Einem Kaninchen mit hoher Hypercholesterinämie und einem Körpergewicht von etwa 4 kg wurden 8 mg des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex-Natriumsalzes (das Produkt von Beispiel 2) über die Ohrvene verabreicht. Eine Stunde nach der Verabreichung wurde an dem Kaninchen eine Narkose mit Nembutal ausgeführt. Danach wurde der gesamte Körper des Kaninchens für eine geeignete Zeit mit einem Röntgenstrahlenbündel bestrahlt, das die Röntgenstrahlen der Wellenlänge von 0,153 Å, die zu der Elektronenabsorption der K-Schale des Goldatoms passt, enthielt. Man ließ die Röntgenstrahlen, die durch das Kaninchen hindurchgegangen waren, einen Röntgenfilm sensibilisieren und ein Röntgenbild herstellen. Somit konnte ein scharfes Röntgenbild der Arterioskleroseläsionen der Arterie (die atherosklerotischen Schichten des Blutgefäßes) erhalten werden und deshalb konnten die Arterioskleroseläsionen ohne weiteres detektiert werden.
Eine Woche nach der Bestrahlung mit Röntgenstrahlen wurde das Kaninchen für die notwendige Inspektion anatomisch untersucht, wo festgestellt wurde, dass die Ausmaße der Arterioskleroseläsionen, im Vergleich zu jenen zum Zeitpunkt der Bestrahlung mit Röntgenstrahlen beobachteten, deutlich abgenommen haben.
Testbeispiel 3
Das Verfahren von Testbeispiel 1 wurde wiederholt, außer dass die in Testbeispiel 1 verwendeten Asziteskarzinom-leidenden Mäuse durch nackte Mäuse ersetzt wurden, die auf dem Rücken des Körpers einen soliden Krebs aufwiesen, gebildet durch Transplantation von PC-10-Zellen, die von menschlichem Lungenkrebs abstammten. Ein scharfes Röntgenbild des soliden Krebses konnte auf Röntgenfilm hergestellt werden.
INDUSTRIELLE ANWENDBARKEIT
Wie in dem Vorstehenden erklärt, stellt diese Erfindung einen neuen Röntgenstrahlenauffangenden Goldkomplex des Chlorin e6-Derivats bereit. Der Goldkomplex ist imstande, spezifisch in dem Gewebe verschiedener Tumoren und in den Arterioskleroseläsionen innerhalb eines Säugerkörpers zu akkumulieren und ist imstande, durch Bestrahlung mit Röntgenstrahlen ein scharfes Röntgenbild des Tumors und der Arterioskleroseläsionen zu liefern.
Der neue Röntgenstrahlen-auffangende Goldkomplex des Chlorin e6-Derivats oder ein Salz davon ist zum Durchführen der Detektion, Diagnose und Therapie von Tumoren, soliden Krebsen oder Arterioskleroseläsionen mit Röntgenstrahlenradiographie oder Bestrahlung mit Röntgenstrahlen verwendbar. Auch kann ein Röntgenstrahlen-auffangender Platinkomplex des Chlorin e6-Derivats hergestellt werden.

Claims

Röntgenstrahlen-auffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6, welcher durch koordinative Bindung oder Chelatbildung eines Goldkations mit dem Chlorinring von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 hergestellt wird, oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon.
Röntgenstrahlen-auffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem mono-, di- oder trivalenten Goldatom der nachstehenden allgemeinen Formel (I)
wobei Au ein Goldatom bedeutet, m eine ganze Zahl 1, 2 oder 3 bedeutet und n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet, oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon.
Goldkomplex gemäß Anspruch 2, wobei der Goldkomplex ein Röntgenstrahlenauffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L- Glutamylchlorin e6 mit einem trivalenten Goldatom ist, der durch die nachstehende allgemeine Formel (Ia) wiedergegeben ist
wobei Au ein Goldatom bedeutet und n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet, oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon.
Goldkomplex gemäß Anspruch 3, wobei der Goldkomplex der in Anspruch 3 gezeigten allgemeinen Formel (Ia) ein Röntgenstrahlen-auffangender Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 mit einem trivalenten Goldatom ist, welcher durch die nachstehende Formel (Ia-1) wiedergegeben ist
oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon.
Pharmakologisch verträgliches Salz des Goldkomplexes gemäß Anspruch 4, wobei das Salz des Goldkomplexes der in Anspruch 3 gezeigten allgemeinen Formel (Ia) ein Natriumsalz des mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplexes der in Anspruch 4 gezeigten Formel (Ia-1) ist.
Arzneimittel, umfassend als Wirkstoff einen Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6, welcher durch die in Anspruch 2 gezeigte allgemeine Formel (I) wiedergegeben ist, oder einen Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6, welcher durch die in Anspruch 3 gezeigte allgemeine Formel (Ia) wiedergegeben ist, oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Feststoff oder einem flüssigen Träger.
Arzneimittel gemäß Anspruch 6, welches an einen einen Tumor oder einen soliden Krebs aufweisenden Säugerwirt verabreicht wird, zwecks Detektion und Diagnose des Tumorgewebes oder soliden Krebses des Wirts durch Röntgenstrahlenradiographie.
Arzneimittel gemäß Anspruch 6, welches an einen einen Tumor oder einen soliden Krebs aufweisenden Säugerwirt verabreicht wird, zwecks Detektion des Tumorgewebes oder soliden Krebses des Wirts durch Röntgenstrahlenradiographie und weiterhin zwecks Behandlung oder Therapie des detektierten Tumors oder Krebses durch nachfolgende Bestrahlung mit Röntgenstrahlen.
Arzneimittel gemäß Anspruch 6, welches an einen Arteriosklerose aufweisenden Säugerwirt verabreicht wird, zwecks Detektion und Diagnose von Arterioskleroseläsionen oder Arterienbereichen, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, durch Röntgenstrahlenradiographie.
Arzneimittel gemäß Anspruch 6, welches an einen Arteriosklerose aufweisenden Säugerwirt verabreicht wird, zwecks Detektion von Arterioskleroseläsionen oder Arterienbereichen, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, durch Röntgenstrahlenradiographie und weiterhin zwecks Behandlung oder Therapie der Arterioskleroseläsionen oder der Arterienbereiche, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, durch nachfolgende Bestrahlung mit Röntgenstrahlen.
Verwendung eines Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats der in Anspruch 2 gezeigten allgemeinen Formel (I) oder eines Salzes davon, oder eines Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats der in Anspruch 3 gezeigten allgemeinen Formel (Ia) oder eines Salzes davon, zur Herstellung eines Arzneimittels zum Durchführen der Detektion, Diagnose und/oder Therapie von Tumorgewebe oder solidem Krebs mittels Bestrahlung mit Röntgenstrahlen.
Verwendung eines Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats der in Anspruch 2 gezeigten allgemeinen Formel (I) oder eines Salzes davon, oder eines Röntgenstrahlen-auffangenden Goldkomplexes des Chlorin e6-Derivats der in Anspruch 3 gezeigten allgemeinen Formel (Ia) oder eines Salzes davon, zur Herstellung eines Arzneimittels zum Durchführen der Detektion, Diagnose und/oder Therapie von Arterioskleroseläsionen oder Arterienbereichen, in denen sich Cholesterol akkumuliert hat, mittels Bestrahlung mit Röntgenstrahlen.
Verfahren zur Herstellung eines gereinigten Produkts aus dem mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex der in Anspruch 4 gezeigten Formel (Ia-1), welches die Schritte umfasst, Umsetzen von mono-L-Aspartylchlorin e6-tetranatriumsalz mit 1 bis 2 Moläquivalenten von Hydrogen-tetrachloroaurat (HAuCl₄) in einer Phosphatpufferlösung, welche eine Molkonzentration von 1/10 bis 1/20 (pH 7,0 bis 8,0) aufweist, bei einer Temperatur von 0 bis 50°C bis die Umsetzung vollständig ist, danach Einstellen des pH-Werts der resultierenden Reaktionslösung durch Hinzufügen von verdünnter Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 bis 3,5, wodurch ein den Goldkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 umfassender Niederschlag ausgefällt wird, Sammeln des Niederschlags, danach Lösen des so gesammelten Niederschlags in einer Phosphatpufferlösung, welche eine Molkonzentration von 1/10 bis 1/20 (pH 7,0 bis 8,0) aufweist, um eine Reinigung des Goldkomplexes zu erreichen, Hindurchleiten der resultierenden Lösung durch eine Kolonne mit umgekehrter Phase, wobei Octadecylsilicagel (ODS) als feste Phase verwendet wird und 5 bis 15% (Vol.-%) Methanol enthaltendes Wasser als mobile Phase verwendet wird, danach fraktioniertes Sammeln des aus der Kolonne mit umgekehrter Phase ausfließenden Mediums, Konzentrieren der Fraktionen des ausfließenden Mediums, welche einzig den mono-L-Aspartylchlorin e6-Goldkomplex enthalten, unter reduziertem Druck, Einstellen des pH-Werts der resultierenden konzentrierten Lösung mit verdünnter Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 bis 3,5, wodurch ein Niederschlag von dunkelgrüner Farbe ausgefällt wird, Sammeln des Niederschlags, Waschen des resultierenden Niederschlags mit 40 bis 50% (Vol.-%) Aceton enthaltendem Wasser, Abtrennen des Niederschlags aus dem wässrigen Aceton durch Zentrifugation und weiterhin Trocknen des Niederschlags, gebildet aus dem Goldkomplex, unter reduziertem Druck.
Röntgenstrahlen-auffangender Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6, welcher durch koordinative Bindung oder Chelatbildung eines Platinkations an den Chlorinring von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 hergestellt wird, oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon.
Röntgenstrahlen-auffangender Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem di- oder tetravalenten Platinatom der nachstehenden allgemeinen Formel (II)
wobei Pt ein Platinatom bedeutet, z eine ganze Zahl 2 oder 4 bedeutet und n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet.
Platinkomplex gemäß Anspruch 15, wobei der Platinkomplex von dem Chlorin e6-Derivat der in Anspruch 15 gezeigten allgemeinen Formel (II) ein Röntgenstrahlenauffangender Platinkomplex von mono-L-Aspartylchlorin e6 oder mono-L-Glutamylchlorin e6 mit einem tetravalenten Platinatom ist, der durch die nachstehende allgemeine Formel (IIa) wiedergegeben ist
wobei n eine ganze Zahl 1 oder 2 bedeutet.