DE69903911T2

DE69903911T2 - alpha-GLUCOSIDASE HEMMER

Info

Publication number: DE69903911T2
Application number: DE69903911T
Authority: DE
Inventors: Hiroyuki Fujita; Nobuhiro Fukushima; Takanori Kasai; Jun Kawabata
Original assignee: Nippon Synthetic Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Nippon Supplement Inc
Priority date: 1998-08-26
Filing date: 1999-08-20
Publication date: 2003-08-28
Anticipated expiration: 2019-08-21
Also published as: WO2000012109A1; EP1025851A4; EP1025851A1; US6299911B1; CN1275083A; CN1170550C; DE69903911D1; EP1025851B1

Description

TECHNISCHES GEBIET

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf einen α- Glucosidase-Inhibitor, der Touchi als einen aktiven Inhaltsstoff enthält, welcher in Arzneimitteln, Lebensmitteln, Gesundheitslebensmitteln und insbesondere in gesundheitsschützenden Lebensmitteln verwendet werden kann.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG

Es ist beschrieben, dass ein α-Glucosidase-Inhibitor die α-Glucosidase inhibiert, welche an den Mikrovilli des Dünndarms lokalisiert ist, und welche den raschen Anstieg des Blutzuckers nach der Mahlzeit kontrolliert und dann den Insulinspiegel anhebt (Diabate Medicine, 10, 688 (1993)). Da es den Metabolismus von Kohlenhydraten (insbesondere aus Stärke und Saccharose herrührende Oligosaccharide) ebenfalls in Menschen und Tieren unterdrückt und eine inhibitorische Wirkung auf den Blutzuckeranstieg aufweist, ist es bei der Verbesserung eines hyperglykemischen Zustandes als auch bei verschiedenen durch Hyperglykemie induzierten Krankheiten, wie etwa Fettsucht und Diabetes wirksam. Ein Lebensmittel, welches durch Zugabe von α-Glucosidase dazu erhalten wird, ist eine geeignete Mahlzeit für einen Patienten mit derartigen Symptomen, und ebenfalls für einen gesunden Menschen zum Zwecke der Prophylaxe gegen derartige Symptome.
Als ein aus einem Lebensmittel herrührender α- Glucosidase-Inhibitor wurde z. B. ein enzymatisches Hydrolysat eines tierischen Proteins oder eines pflanzlichen Proteins in der japanischen ungeprüften Patentveröffentlichung Nr. 9-65836 (1997) offenbart und Tee-Polyphenol wurde in der japanischen ungeprüften Patentveröffentlichung Nr. 5-17364 (1993) offenbart.
Jedoch wies der in der japanischen ungeprüften Patentoffenveröffentlichung Nr. 9-65836 (1997) offenbarte α-Glucosidase-Inhibitor das Problem auf, dass er in einer großen Menge als Lebensmittel aufgenommen werden musste, um seine Aktivität entfalten zu können. Der in der japanischen ungeprüften Patentveröffentlichung Nr. 5-17364 (1993) offenbarte α-Glucosidase-Inhibitor wies die Probleme auf, dass es kompliziert war, das Polyphenol zu reinigen und es war notwendig, regelmäßig eine große Menge Tee zu konsumieren. Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, einen hervorragenden α-Glucosidase- Inhibitor zur Verfügung zu stellen, welcher eine hohe Aktivität hat und einfach eingenommen werden kann.

OFFENBARUNG DER Erfindung

Wir machten bei dieser Erfindung Fortschritte bei der Lösung der vorher beschriebenen Probleme und entdeckten schließlich, dass Touchi, welches als ein Inhaltsstoff von chinesischen Lebensmitteln verwendet wird, eine hervorragende α-Glucosidase-Inhibitoraktivität hat.
Konkret bezieht sich die vorliegende Erfindung auf einen α-Glucosidase-Inhibitor, mit Touchi als einen aktiven Inhaltsstoff (Anspruch 1);
den α-Glucosidase-Inhibitor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass ein Extrakt, welcher durch Extraktion von Touchi mit Wasser und/oder Alkohol erhalten wird, als Touchi verwendet wird (Anspruch 2), und
den α-Glucosidase-Inhibitor nach Anspruch 2, wobei die Menge eines Bestandteils mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 in diesem durch Extraktion mit Wasser und/oder Alkohol erhaltenen Extrakt höchstens 20 Gew.-% ist (Anspruch 3).

BESTE ART DER DURCHFÜHRUNG DER ERFINDUNG

Das in der vorliegenden Erfindung eingesetzte Touchi ist herkömmlicherweise eines, welches durch Dämpfen von Sojabohnen und ihrer Fermentierung mit Koji (Aspergillus) erhalten wird. Touchi schließt ein Daitokuji natto, Hama natto, Tera natto, Shiokara natto, Ikkyuji natto, welche in Japan fermentierte Sojabohnen sind.
Während eine herkömmliche Fermentation durch Konservierung in Salz durchgeführt wird, kann ein ähnlich hergestelltes Produkt ohne Salz oder ein nach Abschluss der Fermentation entsalztes Produkt ebenfalls in der vorliegenden Erfindung eingesetzt werden.
Touchi wird in der herkömmlichen Form verwendet und Pulver, welches durch Pulverisierung nach dem Trocknen, und eine Ausschlämmung, welche durch Pulverisierung in Wasser erhalten wird, weisen ebenfalls eine Glukosidaseinhibierende Wirkung auf. Jedoch sind Extrakte, welche durch Extraktion von Touchi mit Wasser und/oder Alkohol erhalten werden, vom Standpunkt des Besitzes einer hohen α-Glucosidase-inhibierenden Aktivität bevorzugt.
Beispiele für den bei der Extraktion eingesetzten Alkohol sind Methanol, Ethanol, Propanol und Butanol. Methanol und Ethanol sind bevorzugt. Beispiele für das Extraktionsverfahren sind Rührextraktion, erhaltende Extraktion und superkritische Extraktion. Gewöhnlich wird Rührextraktion oder Immersionsextraktion eingesetzt. Falls Wasser und Alkohol kombiniert eingesetzt werden, ist das Verhältnis (Gewicht) von Wasser zu Alkohol bevorzugt 1/10 bis 10/1, mehr bevorzugt 1/5 bis 5/1.
Wenn die Extraktion mit Wasser durchgeführt wird, wird zu unbehandeltem Touchi, oder durch Pulverisierung erhaltenes Touchi, Wasser in einer 1 bis 20-fachen Menge hinzugegeben und Touchi wird durch Rührextraktion bei 40ºC bis 60ºC für 12 bis 20 Stunden oder bei 100ºC bis 140ºC für 1 bis 3 Stunden extrahiert.
Falls die Extraktion mit Alkohol oder einer Kombination von Wasser und Alkohol durchgeführt wird, wird zu Touchi, wie es ist, oder zu Touchi, welche durch Pulverisierung erhalten wird, Alkohol oder eine Mischung von Wasser und Alkohol in einer 1 bis 15-fachen Menge hinzugegeben, und Touchi wird durch Immersionsextraktion bei 40ºC bis 60ºC für 3 bis 10 Stunden, oder bei Raumtemperatur für 10 Stunden bis 7 Tage durchgeführt. Wenn nötig, kann Wasser und Alkohol abdestilliert werden, um die Konzentration davon einzustellen.
Ein nach den vorherigen Extraktionsschritten erhaltener Extrakt kann wie er ist verwendet werden. Alternativ kann er in der Form von Pulver nach dem Abdestillieren von Wasser und Alkohol verwendet werden.
Der Extrakt beträgt gewöhnlich 30 bis 90 Gew.-% der Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000, wie später diskutiert wird.
Um eine Wirkung bei der Aufnahme einer geringen Menge zu erhalten, kann ein Extrakt einer Lösungsmittelfraktionierung unter Verwendung eines polaren organischen Lösungsmittels wie etwa Methanol, Ethanol, Propanol, Butanol, Chloroform, Ethylacetat, Toluol, Hexan oder Benzol unterzogen werden, um einen aktiven Bestandteil zu konzentrieren, oder er kann durch wenigstens eine geeignete Reinigungsmethode aus der aus Aluminiumoxid-Säulenchromatographie, Silicagel- Säulenchromatographie, Ionenaustauscher-Chromatographie, hydrophobe Chromatographie, Hochleistungsflüssigchromatographie bestehenden Gruppe, gereinigt werden.
In der Erfindung ist es vom Standpunkt des Aufweisens einer hervorragenden Glucosidase-Inhibitoraktivität bevorzugt, dass die Menge der Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 höchstens 20 Gew.-% in den vorher beschriebenen durch Wasser- und/oder Alkoholextraktion erhaltenen Extrakte von Touchi ist. Konkret ist es bevorzugt, ein Produkt zu verwenden, welches durch Entfernung aller Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 von dem vorherigen Extrakt erhalten wird, um in einer Menge von höchstens 20 Gew.-% davon (hiernach als gereinigtes Produkt bezeichnet), mehr bevorzugt von 0,1 bis 15 Gew.-% zu sein.
Das vorher angegebene Molekulargewicht der Probe wird durch Gelfiltrationschromatographie gemessen. Konkret wird unter Verwendung einer Aminosäure, eines Peptids und eines Proteins [Ala (Molekulargewicht 89), Ile-Tyr (Molekulargewicht 330), Asp-Gly-Leu-Tyr-Pro (Molekulargewicht 563), Neurotensin (Molekulargewicht 1637) und Ribonuclease (Molekulargewicht 13700), die als ein Referenzstandard mit einem bekannten Molekulargewicht verwendet werden, ein Extrakt unter den folgenden Bedingungen eluiert, um eine Retentionszeit zu bestimmen, und das Molekulargewicht wird unter Verwendung einer Eichkurve, welche durch logarithmisches Auftragen der Molekulargewichte auf der Ordinate und der Retentionszeiten auf der Abszisse erhalten wird, bestimmt.
In der Erfindung wird die Menge in "Gew.-% " der Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000, als "Flächen-%" der Peaks, welche den Bestandteil mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 nach Teilen der Peaks an der Position des Molekulargewichts 3000 auf einem Elutionschromatogramm entsprechen, dargestellt.

Fraktionierungsbedingungen

Säule: Protein Pak60 (hergestellt durch Waters) 5 · 250 mm Fließmittel: wässrige Acetonitrillösung mit 50 Vol.-%, welche 0,1 Vol.-% TFA (Trifluoressigsäure) enthält
Flussrate: 1 mL/min
Detektion: RI
Probenmenge: 1 mg Tabelle 1 Beziehung zwischen Molekulargewicht und Elutionszeit
Bei den vorhergehenden Bedingungen wird, da eine Substanz mit einem Molekulargewicht von 3000 nach 25 Minuten eluiert wird, jede nach nicht mehr als 25 Minuten eluierte Substanz als Bestandteil angesehen, welche ein Molekulargewicht von wenigstens 3000 hat.
Die folgenden sind Beispiele für Verfahren zur Entfernung von Bestandteilen mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000.
[1] Ein Verfahren zur Entfernung von Fraktionen mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 mittels Gelfiltrationschromatographie
[2] ein Verfahren zur Entfernung von Fraktionen mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 mittels einer Membranbehandlung
[3] ein Verfahren zur Entfernung von Fraktionen mit einem hohen Molekulargewicht durch eine Lösungsmittelextraktion unter Verwendung eines polaren organischen Lösungsmittels wie etwa Methanol, Ethanol, Propanol, Butanol, Chloroform, Ethylacetat, Toluol, Hexan oder Benzol.
Diese Verfahren können allein oder in Kombination von zwei oder mehreren davon verwendet werden.
Die Verfahren [1] bis [3] werden kurz erläutert.
In dem Verfahren [1] wird das vorher als ein Molekulargewichtsanalyseverfahren beschriebene Verfahren in einem industriellen Maßstab durchgeführt.
In dem Verfahren [2] wird ein Extrakt durch eine Membran mit einem Fraktionierungs-Molekulargewicht von etwa 3000 (UF-Membran) filtriert, derartige UF-Membranen sind "PLBC (Fraktionierungs-Molekulargewicht 3000)" erhältlich von Millipore und UF-Membran "SEP 1013 (Fraktionierungs- Molekulargewicht 3000)" erhältlich von Asahikasei.
In dem Verfahren [3] wird ein durch Extraktion erhaltener Extrakt in einem derartigen Maße mit Wasser und/oder Alkohol konzentriert, dass keine Präzipitation auftritt, dann werden 5 bis 10 Volumen Alkohol hinzugegeben, um jede Substanz mit einem hohen Molekulargewicht zu präzipitieren.
Der erfindungsgemäß erhaltene α-Glucosidase-Inhibitor hat eine inhibitorische Wirkung auf den Anstieg des Blutzuckers. Daher kann es als eine pharmazeutische Formulierung wie etwa als Ampullen, Granulat, Pillen, Kapseln oder Sirup verwendet werden; als ein Gesundheitslebensmittel, wie etwa eine Mahlzeit für einen Patienten mit einem Symptom, als auch als prophylaktisches Mittel dafür, ein Diabetes vorbeugendes Mittel, ein Anti-Fettsucht-Mittel, ein diätetisches Lebensmittel und ähnliches, welche durch Verdünnung eines Trägerstoffs ohne Toxizität erhalten werden; wie einen flüssigen Trägerstoff, wie etwa Wasser, Ethanol, Ethylenglycol oder Polyethylenglycol, und einen festen Trägerstoff, wie etwa Stärke, Zellulose oder Polyamidpulver. Zusätzlich kann eine Erhöhung des durch Aufnahme von Mahlzeiten erhöhten Blutzuckerniveaus durch Aufnahme der vorherigen Formulierung, welche einen erfindungsgemäßen α-Glucosidase-Inhibitor enthält, vor, während und zwischen den Mahlzeiten inhibiert werden.
Die Menge an Touchi, welche von einem Menschen aufgenommen wird, ist bevorzugt 1 bis 50 g pro Tag, mehr bevorzugt 5 bis 10 g pro Tag. Im Falle eines Extrakts erhalten durch Extraktion mit Alkohol, kann die Menge 1/10 der von unbehandeltem Touchi sein.
Ein gereinigtes Produkt wird bevorzugt in einer Menge von 0,00001 bis 5 g pro Tag, insbesondere 0,005 bis 0,5 g pro Tag bezogen auf die getrocknete Produktbasis eingesetzt, da es eine inhibitorische Aktivität, die 2 bis 1000-fach mehr als die des Extrakts ist, welcher mit Wasser und/oder Alkohol erhalten wird.
Ein erfindungsgemäßer α-Glucosidase-Inhibitor kann ebenfalls zu Lebensmittelprodukten wie den Folgenden hinzugefügt werden.

[1] Verarbeitete landwirtschaftliche und Meeresprodukte

Gelatinenudeln, pürierte süße Bohnenmarmelade, ein gelatinöses Lebensmittel, hergestellt aus Teufelszungenstärke, Brot, Nudeln (Instantnudeln, Pasta, rohe Nudeln, getrocknete Nudeln), Reiskuchen, Getreideprodukte, verarbeitete Sojabohnenprodukte (Tofu, Sojabohnenmilch, Natto, getrockneter Bohnenquark), verarbeitete Meeresprodukte [gekochte Fischpaste, Fischwürstchen (mit Krabbengeschmack), (Fisch-)Schinken, (Fisch-)Wurst, (Fisch-)Wiener Würstchen, Reisgarnierungen, Seegrasflocken für Reis mit Tee], Ei haltige Lebensmittel (Suppe, Reiskugeln und ähnliches), Dosenlebensmittel (Dosenthunfisch, ölkonservierte Sardinen, Yakitori-Spieße), eingeschweißte Lebensmittel (Curry, Stew, Spaghetti-Saucen).

[2] Molkereiprodukte

Milch, verarbeitete Milch, milchsäurevergärte Getränke, Butter, Käse, Kondensmilch, Milchpulver.

[3] Gewürze

Miso (fermentierte Sojabohnenpaste), Sojasauce, Geschmacksmittel und Gewürze, (pulverisierte) natürliche Gewürze, Sauce, Dressing, Barbecuesauce, süßes Sakegewürz, Curry, Stew, scharfe und milde Gewürze, Joghurt.

[4] Gesundheitslebensmittel (Nahrungsmittelzusätze)

1] Saponin enthaltende Lebensmittel (Panax Ginseng Wurzel enthaltende Lebensmittel, Acanthopanax Senticosus Harms enthaltende Lebensmittel)
2] Saccharide enthaltende Lebensmittel [Oligosaccharide (Fluctooligosaccharide enthaltende Lebensmittel, Isomaltoligosaccharide enthaltende Lebensmittel, Galactooligosaccharide enthaltende Lebensmittel), Polysaccharide enthaltende Lebensmittel (Cortinellus shiitake enthaltende Lebensmittel, Mucosaccharide enthaltende Lebensmittel, Protein enthaltende Lebensmittel, Chondroitinsulfat enthaltende Lebensmittel, Ganoderma lucidium enthaltende Lebensmittel (Reishi), Chitin/Chitosan enthaltende Lebensmittel].
3] Mineralstoffe enthaltende Lebensmittel (Kalzium enthaltende Lebensmittel, Luzerne enthaltende Lebensmittel, Pflaumenextrakt enthaltende Lebensmittel, β-Carotin enthaltende Lebensmittel)
4] Fett enthaltende Lebensmittel(Fett, das Vitamin E enthält [Weizen- und Hiobstränenkeimöl, Sojabohnenkeimöl, Reiskeimöl], Eicosapentanonsäure enthaltende Lebensmittel, Sojabohnenlecithin enthaltende Lebensmittel, γ-Linolensäure enthaltende Lebensmittel (Nachtkerzenöl, Borretschöl), Docosahexanonsäure enthaltende Lebensmittel).
5] Protein enthaltende Lebensmittel(Sojabohnenprotein, Kasein, Milchprotein und verarbeitete Karpfen enthaltende Lebensmittel).
6] Taurinaustern, verarbeitete Körbchenmuscheln, verarbeitete grüne Seemuschel enthaltende Lebensmittel.

(5) Andere

Verarbeitete Weichschildkröten, auf Aminosäurestoffwechselstörung ausgerichtete Lebensmittel, flüssige Lebensmittel (Patientenversorgung).
Es ist möglich, es zu Lebensmitteln zu geben, welche eine große Menge der folgenden Saccharide enthalten, aber dabei besteht die Möglichkeit, dass die erfindungsmäßige Wirkung nicht deutlich auftreten kann. Es wird bevorzugt, den Saccharidgehalt des beabsichtigen Lebensmittels auf ein Niveau so gering wie möglich im Falle der Zugabe zu den folgenden Lebensmitteln zu senken.

(6) Süßwaren

Kuchen, Mousse, (pulverisiertes) Dessert, Eiscreme, Bonbons, Schokolade, Gummibonbons, Kekse, Waffeln, Gelee.

(7) Getränke

Erfrischungsgetränke (kohlensäurehaltige Getränke, Fruchtsäfte, Sportgetränke, Gesundheitsgetränke), Luxusgetränke (Kaffee, Kakaogetränke, Gerstengetränke), Misosuppe, klare Suppe.
In den vorher erwähnten (1) bis (7) ist der Anteil von Touchi bevorzugt 1 bis 85 Gew.-%, mehr bevorzugt 10 bis 60 Gew.-% in den vorher erwähnten Lebensmitteln. Wenn ein Extrakt mit Wasser und/oder Alkohol verwendet wird, kann die Menge 1/10 (des Gewichts) von Touchi selbst sein. Insbesondere, wenn gereinigtes Touchi eingesetzt wird, ist die Menge bevorzug 0,00001 bis 20 Gew.-%, mehr bevorzugt 0,001 bis 10 Gew.-%.
Zusätzlich können Zusatzstoffe wie Süßungsmittel, Konservierungsstoffe, Dispersionsmittel und Antioxidationsmittel ebenfalls zugegeben werden, solange sie nicht die erfindungsgemäße Wirkung nachteilig beeinflussen. Ferner können weitere α-Glucosidase- Inhibitoren wie etwa Varienamin und Aminocyclitol ebenfalls eingeschlossen sein.
Die vorliegende Erfindung wird im folgenden weiter erläutert. In der folgenden Beschreibung steht, soweit nicht anders angegeben "%" für Gew.-%.

BEISPIEL 1

Ein kg getrocknetes Touchi wurde in 10 L einer 50%igen wässrigen Ethanollösung für einen Tag eingetaucht. Das erhaltene Exudat wurde unter Verwendung eines Rotationsverdampfers konzentriert und in Wasser gelöst und filtriert. Das erhaltene Filtrat wurde unter reduziertem Druck konzentriert, um einen Extrakt (E-1) zu erhalten.
Der Extrakt wurde bis zur Trockenheit unter Verwendung eines Rotationsverdampfers eingedampft, um 19,3 g eines Feststoffs zu erhalten. Der Feststoff wurde in einem Scheidetrichter gebracht und eine Mischung aus Ethylacetat und Wasser (Volumenverhältnis 1/2) in einer fünffach größeren Menge wie die des Feststoffs hinzugegeben. Es wurde eine wässrige Schicht (E-2) und eine Ethylacetatschicht (E-3) getrennt, um die α- Glucosidase inhibierende Aktivität zu untersuchen.
Die α-Glucosidase inhibierende Aktivität in jeder Fraktion (E-1, E-2 und E-3) wurde wie im Folgenden beschrieben, bestimmt.

(1) Präparation von Di-(tri-)saccharidhydrolase (α- Glucosidase) aus Rattendünndarm

Ein gefroren gelagerter Rattendünndarm (Jejunum) wurde aufgetaut und die Mucosa wurde durch Ausdrücken unter Verwendung einer Pinzette gesammelt. Zu der Mucosa wurden 0,1 M Kaliumphosphatpuffer (pH 7,0) mit 5 mM Ethylendiamintetraessigsäure in einer fünffach größeren Menge als die Mucosa hinzugegeben, und die Mischung wurde unter Kühlung homogenisiert. Nachfolgend wurde die Mischung zentrifugiert (4ºC, 21.000 · g, 60 Minuten), zu dem erhaltenen Präzipitat wurde 0,1 M Kaliumphosphatpufferlösung (pH 7,0) mit 1% Triton X-100 in einer Menge zugegeben, dass die Gesamtmenge der Mischung fünfmal größer als das Präzipitat wird, um einen Aufschluss durchzuführen (4ºC, 60 Minuten). Die Mischung wurde ultrazentrifugiert (4ºC, 110.000 · g, 90 Minuten) und der Überstand wurde mit 0,01 M Kaliumphosphatpufferlösung (pH 7,0) dialysiert (4ºC, 24 Stunden), um eine Enzymlösung zu erhalten.

(2) Enzym-(α-Glucosidase-) Aktivitätsuntersuchung

Die Enzymaktivität wurde unter Verwendung einer kommerziellen Ausrüstung bestimmt.
Eine Standardreaktionsmischung (1,0 ml gesamt) enthielt 0,7 ml der 60 mM Substratlösung (Saccharose, gelöst in einer 0,1 M Kaliumphosphatpufferlösung, pH 6,3), 0,2 ml der Testsubstanzlösung (nach vollständiger Entfernung von Wasser und des organischen Lösungsmittels, gefolgt von Lösung in 50%iger wässriger Dimethylsulfoxidlösung) und 0,1 ml der vorherigen Enzymlösung. Die Reaktion erfolgte bei 37ºC für 15 Minuten und wurde dann mit 1,5 ml 2 M Tris-Hydrochlorid-Pufferlösung (pH 7,0) beendet, um eine Testlösung zu erhalten.
Nachfolgend wurde in jede Vertiefung einer Mikroplatte mit 96 Vertiefungen 200 ul eines Farbentwicklungsreagens [Glucose B Test Wako, erhältlich von Wako Pure Chemical] und 50 ul der Testlösung (nach Abdestillieren des Lösungsmittels wie etwa Ethylacetat) gefüllt, und die Mischung wurde bei 37ºC für 30 Minuten inkubiert. Dann wurde die Extinktion bei 490 nm unter Verwendung eines Mikroplatten-Lesegerätes (Modell 550, hergestellt durch BIO RAD) gemessen. Als Leerwert wurde die Extinktion einer Probe, welche 0,1 M Kaliumphosphatpuffer (pH 6,3) anstatt der Substratlösung verwendet, wobei der Unterschied zwischen diesen zwei Werten als A4gos angegeben wird. Als Kontrollwert (A490C) wurde die Extinktion einer Probe, die 50 Gew.-% wässrige Dimethylsulfoxidlösung anstelle der Testlösung enthält, verwendet und die α-Glucosidase-Inhibitoraktivität wurde gemäß der folgenden Gleichung berechnet. Die Bestimmung erfolgte zweifach und der Mittelwert wurde als der gemessene Wert verwendet.
α-Glucosidase-Inhibitoraktivität (%) = {(A490C - A49S/A490C} · 100
Die α-Glucosidase-Inhibitoraktivität jeder Fraktion (E-1, E2-, E-3) ist in Tabelle 2 angegeben.
Die in der Tabelle gezeigten Ausbeuten sind relative Werte jeder Fraktion, basierend auf dem Gewicht des Ausgangsmaterials, welches durch Konzentration bis zur Trockenheit erhalten wird. Tabelle 2

BEISPIEL 2

30 Gramm von 193 g des getrockneten Konzentrats der Fraktion (E-1), erhalten in Beispiel 1, wurde mit einer Membran unter den folgenden Bedingungen behandelt und eine Membrankonzentrierte Fraktion (E-5) wurde entfernt, um ein Membrandurchtrittsfraktion (E-4) zu erhalten, welche bis zur Trockenheit konzentriert wurde, um 5,8 g eines getrockneten Feststoffs zu erhalten. Das Molekulargewicht der Membrandurchtrittsfraktion (E-4) wurde gemessen und es wurde gefunden, dass die Menge der Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 15% war.
Ähnlich wie in Beispiel 1 wurde die α-Glucosidase- Inhibitoraktivität gemessen und in Tabelle 3 angegeben. Die in der Tabelle gezeigten Ausbeuten sind relative Werte jeder Fraktion, basierend auf dem Gewicht des Ausgangsmaterials, welche durch Konzentration bis zur Trockenheit erhalten werden.

Bedingungen der Membranbehandlung

Instrument: REMOLINO (hergestellt von Millipore)
Membran: PLBC (Fraktionierungs-Molekulargewicht 3000, hergestellt von Millipore)
Druckbedingungen: Unter 5 kg mit Stickstoffgas Tabelle 3
Die Menge der Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 war in E-1 80%.

BEISPIEL 3

30 Gramm von 193 g des getrockneten Konzentrats der in Beispiel 1 erhaltenen Fraktion (E-1) wurde in 100 mL Wasser gelöst und Ethanol wurde zu 95 Vol.-% hinzugegeben. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur über Nacht stehen gelassen und ein gebildetes Präzipitat wurde als Fraktion (E-6) durch Filtration entfernt und das Ethanol in dem Filtrat wurde unter reduziertem Druck abdestilliert, um 4,2 g der Fraktion (E-7) zu erhalten. Das Molekulargewicht der Fraktion (E-7) wurde gemessen, wobei gefunden wurde, dass die Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 5% waren.
Ähnlich wie in Beispiel 1 wurde die α-Glucosidase- Inhibitoraktivität bestimmt und wird in Tabelle 4 angegeben. Tabelle 4
Die in der Tabelle gezeigten Ausbeuten sind relative Werte jeder Fraktion, basierend auf dem Gewicht des Ausgangsmaterials, welches bis zur Trockenheit konzentriert wird.

BEISPIEL 4

Ein kg getrocknetes Touchi wurde in 10 L Wasser eingetaucht und bei 130ºC für eine Stunde zur Sterilisation erwärmt. Das erhaltene Exsudat wurde filtriert und das Filtrat (E-8) wurde unter Verwendung eines Rotationsverdampfers bis zur Trockenheit konzentriert, um 215 g eines Feststoffs zu erhalten.
30 Gramm der 215 g des getrockneten Konzentrats der Fraktion (E-8) wurde mit einer Membran in der gleichen Art und Weise wie in Beispiel 2 behandelt, um 5,5 g einer Membrandurchtrittsfraktion (E-9) und eine Membrankonzentrierte Fraktion (E-10) zu erhalten. Das Molekulargewicht der Membrandurchtrittsfraktion (E-9) wurde gemessen, um zu finden, dass die Menge der Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 9,7% war. Ähnlich wie in Beispiel 1 wurde die α- Glucosidase-Inhibitoraktivität bestimmt, und wird in Tabelle 5 angegeben.
Die in der Tabelle gezeigten Ausbeuten sind relative Werte jeder Fraktion, basierend auf dem Gewicht des Ausgangsmaterials, welches bis zur Trockenheit konzentriert wird. Tabelle 5
Da der α-Glucosidase-Inhibitor der vorliegenden Erfindung Touchi als aktiven Bestandteil enthält, kann er einfach aufgenommen werden und weist eine hohe Inhibitoraktivität auf.

INDUSTRIELLE ANWENDBARKEIT

Es wird ein α-Glucosidase-Inhibitor zur Verfügung gestellt, welcher einfach aufgenommen werden kann und eine hohe Inhibitoraktivität aufweist. Da der erfindungsgemäße α-Glucosidase-Inhibitor Touchi als einen aktiven Bestandteil enthält, kann er einfach aufgenommen werden und weist eine hohe Inhibitoraktivität auf. Da er Touchi (chinesische fermentierte Sojabohnen) als aktiven Bestandteil enthält, kann dieser α-Glucosidase-Inhibitor leicht verwendet werden und zeigt eine hohe Inhibitoraktivität.
Ein α-Glucosidase-Inhibitor, der einfach verwendet werden kann, zeigt eine hohe α-Glucosidase-Inhibitoraktivität.
Da er Touchi (chinesische fermentierte Sojabohnen) als aktiven Bestandteil enthält, kann dieser α-Glucosidase- Inhibitor einfach verwendet werden und zeigt eine hohe Inhibitoraktivität.

Claims

1. α-Glucosidase-Inhibitor mit Touchi als aktiven Bestandteil.

2. α-Glucosidase-Inhibitor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass ein Extrakt, erhalten durch die Extraktion von Touchi mit Wasser und/oder Alkohol, als Touchi verwendet wird.

3. α-Glucosidase-Inhibitor nach Anspruch 2, wobei die Menge der Bestandteile mit einem Molekulargewicht von wenigstens 3000 in dem durch die Extraktion mit Wasser und/oder Alkohol erhaltenen Extrakt höchstens 20 Gew.-% ist.