DE69833429T2

DE69833429T2 - Chinolin-leukotrien-antagonisten

Info

Publication number: DE69833429T2
Application number: DE69833429T
Authority: DE
Inventors: H. Byron Rahway ARISON; K. Suresh Rahway BALANI; A. Thomas Rahway BAILLIE; Claude Kirkland DUFRESNE
Original assignee: Merck Frosst Canada Ltd; Merck and Co Inc
Current assignee: Merck Canada Inc; Merck and Co Inc
Priority date: 1997-03-13
Filing date: 1998-03-10
Publication date: 2006-11-09
Anticipated expiration: 2018-03-11
Also published as: CA2283101A1; EA001797B1; ATE317224T1; ES2256933T3; EE03732B1; EP0971587B1; AU6758998A; JP2001514660A; ID23656A; CA2283101C; AU726210B2; PL335604A1; TR199902242T2; EE9900406A; EA199900824A1; EP0971587A1; WO1998039970A1; IS5167A; DE69833429D1; EP0971587A4

Description

HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Das US-Patent 5 565 473 offenbart die Verbindung der Formel (a):
die jetzt allgemein als Montelukast-Natrium bekannt ist. Montelukast-Natrium ist ein Leukotrienantagonist, und mit ihm werden derzeit klinische Tests zur Behandlung von chronischem Asthma durchgeführt. Andere Leukotrienantagonisten sind in der US 4 918 081 und der US 4 920 130 offenbart.
Die veröffentlichte PCT-Anmeldung WO 96/40638, veröffentlicht am 19. Dezember 1996, und auch das J. Org. Chem. 61, 8518–8525 (1996) offenbaren Verbindungen der Formeln (b) und (c) und deren einzelne optische Isomere, die Stoffwechselprodukte von Montelukast-Natrium und ihrerseits Leukotrienantagonisten sind.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft Chinolindisäureverbindungen mit Wirkung als Leukotrienantagonisten, Verfahren für deren Herstellung und Verfahren und pharmazeutische Formulierungen zur Verwendung dieser Verbindungen bei Säugern (insbesondere Menschen).
Aufgrund ihrer Wirkung als Leukotrienantagonisten eignen sich die Verbindungen der vorliegenden Erfindung als Mittel gegen Asthma, antiallergische, antiinflammatorische und zytoprotektive Mittel. Sie eignen sich auch zur Behandlung von Angina, zerebralem Krampf, Glomerulonephritis, Hepatitis, Endotoxämie, Uveitis und Transplantat-Abstoßung.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung stellt Verbindungen der Formel I:
und die einzelnen optischen Isomere davon oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon zur Verfügung.
Bei einer Ausführungsform wird eine Verbindung der Formel I zur Verfügung gestellt, die isoliert und gereinigt ist, d.h. eine Verbindung der Formel I, die im wesentli chen frei von anderen Stoffwechselprodukten von Montelukast-Natrium ist.
Bei einem weiteren Aspekt stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung der Formel I zur Herstellung eines Medikaments zur Verhinderung der Wirkungen von Leukotrienen bei Säugern zur Verfügung.
Bei einem weiteren Aspekt stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung einer Verbindung der Formel I zur Herstellung eines Medikaments zur Prävention und Behandlung von Asthma, Allergien oder Entzündungen bei einem Säuger zur Verfügung.
Bei noch einem weiteren Aspekt stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verfügung, welche eine Verbindung der Formel I und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger enthält.
Ein weiterer Aspekt der vorliegenden Erfindung stellt Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I zur Verfügung.
Die hier beschriebenen Verbindungen enthalten zwei Asymmetriezentren und können daher Diastereomere und optische Isomere ergeben. Die vorliegende Erfindung soll solche möglichen Diastereomere einzeln oder als Diastereomerenmischung sowie deren racemische und aufgetrennte enantiomerenreine Formen und pharmazeutisch annehmbare Derivate davon umfassen.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung enthalten eine Verbindung der Formel I als einen Wirkstoff oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon und können auch einen pharmazeutisch annehmbaren Träger und gegebenenfalls andere therapeutische Bestandteile enthalten. Der Ausdruck "Zusammensetzung", wie in pharmazeutische Zusammensetzung, soll ein Produkt umfassen, das den/die Wirkstoff(e) und den/die inerten Bestandteil(e), welche den Träger bilden, sowie jedes Produkt, das direkt oder indirekt aus der Kombination, Komplexierung oder Aggregation von beliebigen zwei oder mehreren der Bestandteile oder durch Dissoziation von einem oder mehreren der Bestandteile oder durch andere Arten von Reaktionen oder Wechselwirkungen von einem oder mehreren der Bestandteile hervorgeht, umfaßt. Dementsprechend umfassen die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung jede Zusammensetzung, die durch Vermischen einer Verbindung der vorliegenden Erfindung und eines pharmazeutisch annehmbaren Trägers erhalten wird.
Die Bezeichnung "pharmazeutisch annehmbare Derivate" bezieht sich auf jedes/jeden beliebige(n) pharmazeutisch annehmbare(n) Salz, Ester, Ether, Amid oder auf makromolekulare Prodrugs oder Kombinationen davon. Die Erfindung umfaßt auch beliebige andere Verbindungen, die, bei der Verabreichung an den Empfänger, in der Lage sind, (direkt oder indirekt) eine Verbindung dieser Erfindung zur Verfügung zu stellen.
Pharmazeutisch annehmbare Salze sind u.a. Salze, die aus pharmazeutisch annehmbaren nichttoxischen anorganischen und organischen Basen hergestellt wurden. Salze, die aus anorganischen Basen hergeleitet sind, sind u.a. Aluminium-, Ammonium-, Calcium-, Kupfer-, Eisen(III)-, Eisen(II)-, Lithium-, Magnesium-, Mangan(III)-, Mangan(II)-, Kalium-, Natrium-, Zinksalze und dergleichen. Besonders bevorzugt sind die Ammonium-, Calcium-, Magnesium-, Kalium- und Natriumsalze. Salze, die aus pharmazeutisch annehmbaren organischen nichttoxischen Basen hergeleitet sind, sind u.a. Salze von primären, sekundären und tertiären Aminen, substituierten Aminen, einschließlich natürlich vorkommenden substituierten Aminen, cyclischen Aminen und basischen Ionenaustauschharzen, wie z.B. Arginin, Betain, Koffein, Cholin, N,N'-Dibenzylethylendiamin, Diethylamin, 2-Diethylaminoethanol, 2-Dimethylaminoethanol, Ethanolamin, Ethylendiamin, N-Ethylmorpholin, N-Ethylpiperidin, Glucamin, Glucosamin, Histidin, Hydrabamin, Isopropylamin, Lysin, Methylglucamin, Morpholin, Piperazin, Piperidin, Dicyclohexylamin, Polyaminharze, Procain, Purine, Theobromin, Triethylamin, Trimethylamin, Tripropylamin, Tromethamin und dergleichen.
Pharmazeutisch annehmbare Ester sind u.a. diejenigen, die aus einer Hydroxygruppe einer Verbindung der Formel I und einer organischen Säure (oder einem acylierendem Äquivalent davon) gebildet werden, wie z.B. Acetat, Adipat, Alginat, Aspartat, Benzoat, Benzolsulfonat, Butyrat, Citrat, Campherat, Camphersulfonat, Cyclopentanpropionat, Glucoheptanoat, Glycerophosphat, Gluconat, Dodecylsulfat, Ethansulfonat, Fumarat, Heptanoat, Hexanoat, 2-Hydroxyethansulfonat, Lactat, Maleat, Methansulfonat, 2-Naphthalinsulfat, Nicotinat, Oxalat, Pamoat, Pectinat, Picrat, Pivalat, Succinat, Tartrat, Tosylat, Imidazol-1-carboxylat, Phenylpropionat, Phenoxyacetat, Palmitat, Laurat, Adamantoat, Stearat, Octanoat, Cycloalkylcarboxylat, Decanoat, Merystylat, Phthalat, Hexanoat, Carbamat, Adenosin-5'-carboxylat, Pivaloyloxymethylat, in den substituierten oder nichtsubstituierten Formen, und dergleichen; oder diejenigen, die aus einer Carboxylgruppe einer Verbindung der Formel I und einem Alkohol, wie z.B. einem C₁-C₄-Alkanol, oder anderen im Stand der Technik allgemein bekannten Alkoholen gebildet werden, um Ester-Prodrugs zu bilden. Pharmazeutisch annehmbare Ester sind u.a. auch diejenigen, die aus Formel I mit anorganischen Säuren gebildet werden, wie z.B., ohne jedoch darauf beschränkt zu sein, Sulfate, Phosphate, Carbonate, oder Konjugate der Formel I mit Glutathion, Glucuronsäure, Zucker (wie Glucose) und Gallensäuren (wie Taurin) usw.
Pharmazeutisch annehmbare Ether sind diejenigen, die dem Fachmann leicht in den Sinn kommen würden, und sind u.a. zum Beispiel Methyl- bis Pentyl-, Cycloalkyl-, Methoxymethyl-, 3'-Hydroxypropyl-, Benzyl-, Allyl-, Anisyliden-, Ethoxyethyliden-, Tetrahydropyranyl-, Silylether.
Pharmazeutisch annehmbare Amide sind diejenigen, die dem Fachmann leicht in den Sinn kommen würde, und sind u.a. zum Beispiel C₁-C₄-Amide.
Die Verbindungen der Formel I könnten auch verwendet werden als makromolekulares Prodrug, das Formel I, kovalent oder reversibel gebunden an mono- oder polyklonale Antikörper, umfaßt, und andere Makromoleküle, wie z.B. Polyvinyl-, Polyacryl-, Polysaccharid- und Poly(a-aminosäure)-Hauptketten, und Prodrugs auf der Basis von Dextran, löslicher Stärke oder Hydroxyalkylstärke, und Insulin.
Man wird verstehen, daß bei der Diskussion der folgenden Behandlungsverfahren Hinweise auf die Verbindungen der Formel I auch die pharmazeutisch annehmbaren Derivate umfassen sollen.
Die Fähigkeit der Verbindungen der Formel I, die Wirkungen der Leukotriene zu antagonisieren, macht sie zur Verhinderung oder Umkehrung der durch die Leukotriene in einem menschlichen Subjekt hervorgerufenen Symptome geeignet. Dieser Antagonismus der Leukotrienwirkungen zeigt, daß die Verbindungen und deren pharmazeutische Zusammensetzungen bei Säugern und insbesondere Menschen geeignet sind zur Behandlung, Verhinderung oder Linderung von: 1) Lungenstörungen, einschließlich Erkrankungen wie Asthma, chronischer Bronchitis und damit verbundenen obstruktiven Atemwegserkrankungen, 2) Allergien und allergischen Reaktionen, wie z.B. allergischer Rhinitis, Kontaktdermatitis, allergischer Konjunktivitis und dergleichen, 3) Entzündung, wie z.B. Arthritis oder entzündlicher Darmerkrankung, 4) Schmerz, 5) Hautstörungen, wie z.B. atopisches Ekzem und dergleichen, 6) kardiovaskulären Störungen, wie z.B. Angina, Myokardischämie, Hypertension, Plättchenaggregation und dergleichen, 7) Niereninsuffizienz, hervorgerufen durch Ischämie, die durch immunologische oder chemische (Cyclosporin) Äthiologie verursacht wird, 8) Migräne oder Cluster-Kopfschmerz, 9) okulären Zuständen, wie z.B. Uveitis, 10) Hepatitis, die von chemischen, immunologischen oder infektiösen Reizen verursacht wird, 11) Trauma- oder Schockzuständen, wie z.B. Brandverletzungen, Endotoxämie und dergleichen, 12) Allotransplantatabstoßung, 13) Verhinderung von Nebenwirkungen, die mit der therapeutischen Verabreichung von Cytokininen, wie z.B. Interleukin II und Tumornekrosefaktor, in Zusammenhang stehen, 14) chronischen Lungenerkrankungen, wie z.B. zystische Fibrose, Bronchitis und andere Erkrankungen der kleinen und großen Atemwege, und 15) Cholezystitis.
Somit können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung auch verwendet werden, um Erkrankungszustände bei Säugern (insbesondere Menschen) zu behandeln oder zu verhindern, wie z.B. erosiver Gastritis; erosiver Ösophagitis; Diarrhöe; zerebralem Krampf; vorzeitigen Wehen; Spontanabort; Dysmenorrhoe; Ischämie; schädlicher wirkstoffverursachter Schädigung oder Nekrose von hepatischem, pankreatischem, renalem oder myokardialem Gewebe; Leberparenchymschaden, der durch hepatoxische Mittel, wie z.B. CCl₄ und D-Galactosamin, verursacht wird; ischämischem Nierenversagen; durch Krankheit verursachter Leberschädigung; gallensalzvermittelter Pankreas- oder Magenschädigung; trauma- oder streßvermittelter Zellschädigung; und glycerinvermitteltem Nierenversagen. Die Verbindungen zeigen auch zytoprotektive Wirkung.
Die zytoprotektive Wirkung einer Verbindung kann sowohl bei Tieren als auch beim Menschen beobachtet werden, indem die erhöhte Widerstandsfähigkeit der Gastrointestinalschleimhaut gegen die schädlichen Wirkungen starker Reizmittel, z.B. die ulcerogenen Wirkungen von Aspirin oder Indomethacin, beobachtet wird. Zusätzlich zu dem Verringern der Wirkung von nichtsteroidalen Antiphlogistika auf den Gastrointestinaltrakt, zeigen Untersuchungen an Tieren, daß zytoprotektive Verbindungen die durch orale Verabreichung starker Säuren, starker Basen, Ethanol, hypertonischer Kochsalzlösungen und dergleichen hervorgerufenen gastrischen Verletzungen verhindern werden.
Zwei Versuche zur Messung der zytoprotektiven Eignung können durchgeführt werden. Diese Versuche sind: (A) ein Versuch zur ethanolvermittelten Verletzung und (B) ein Versuch zur indomethacinvermittelten Geschwürbildung, und diese sind in der EP 140 684 beschrieben.
Dosisbereiche
Die Größe der prophylaktischen oder therapeutischen Dosis einer Verbindung der Formel I wird natürlich mit der Natur und der Schwere des zu behandelnden Zustandes und mit der speziellen Verbindung der Formel I und ihrem Verabreichungsweg variieren. Sie wird auch entsprechend dem Alter, dem Gewicht und dem Ansprechverhalten des einzelnen Patienten variieren. Im allgemeinen liegt der Tagesdosisbereich zur antiasthmatischen, antiallergischen oder antiinflammatorischen Verwendung und allgemein für Verwendungen, die nicht der Zytoprotektion dienen, innerhalb des Bereichs von etwa 0,001 mg bis etwa 100 mg pro kg Körpergewicht eines Säugers, vorzugsweise von 0,01 mg bis etwa 10 mg pro kg und besonders bevorzugt von 0,1 bis 1 mg pro kg in Einzel- oder getrennten Dosen. Andererseits kann es in manchen Fällen notwendig sein, Dosen außerhalb dieser Grenzen zu verwenden.
Zur Verwendung, wo eine Zusammensetzung zur intravenösen Verabreichung eingesetzt wird, ist ein geeigneter Dosisbereich zur antiasthmatischen, antiinflammatorischen oder antiallergischen Verwendung 0,001 mg bis 25 mg (vorzugsweise 0,01 mg bis 1 mg) einer Verbindung der Formel I pro kg Körpergewicht pro Tag und zur zytoprotektiven Verwendung 0,1 mg bis 100 mg (vorzugsweise etwa 1 mg bis 100 mg und besonders bevorzugt etwa 1 mg bis etwa 10 mg) einer Verbindung der Formel I pro kg Körpergewicht pro Tag.
In dem Fall, bei dem eine orale Zusammensetzung eingesetzt wird, ist ein geeigneter Dosisbereich zur antiasthmatischen, antiinflammatorischen oder antiallergischen Verwendung z.B. 0,01 mg bis 100 mg einer Verbindung der Formel I pro kg Körpergewicht pro Tag, vorzugsweise 0,1 mg bis 10 mg pro kg, und zur zytoprotektiven Verwendung 0,1 mg bis 100 mg (vorzugsweise 1 mg bis 100 mg und besonders bevorzugt 10 mg bis 100 mg) einer Verbindung der Formel I pro kg Körpergewicht pro Tag.
Zur Behandlung von Erkrankungen des Auges können ophthalmische Zubereitungen zur okulären Verabreichung verwendet werden, die 0,001–1 gew.-%ige Lösungen oder Suspensionen der Verbindungen der Formel I in einer annehmbaren ophthalmischen Formulierung enthalten.
Die genaue Menge einer Verbindung der Formel I, die als ein zytoprotektives Mittel verwendet werden soll, wird u.a. davon abhängen, ob sie verabreicht wird, um beschädigte Zellen zu heilen, oder um eine zukünftige Schädigung zu verhindern, sie wird abhängen von der Natur der beschädigten Zellen (z.B. Gastrointestinalgeschwüre gegenüber nephrotischer Nekrose) und von der Natur des verursachenden Mittels. Ein Beispiel für die Verwendung einer Verbindung der Formel I zur Verhinderung von zukünftiger Schädigung würde die gemeinsame Verabreichung der Verbindung der Formel I mit einem NSAID, das ansonsten eine solche Schädigung verursachen könnte (z.B. Indomethacin), sein. Für eine solche Verwendung wird die Verbindung der Formel I 30 Minuten vor bis 30 Minuten nach der Verabreichung des NSAID verabreicht. Vorzugsweise wird sie vor oder gleichzeitig mit dem NSAID verabreicht (zum Beispiel in einer Kombinationsdosisform).
Pharmazeutische Zusammensetzungen
Jeder beliebige Verabreichungsweg kann zur Versorgung eines Säugers, insbesondere eines Menschen, mit einer wirksamen Dosis einer Verbindung der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Zum Beispiel können orale, rektale, topische, parenterale, okuläre, pulmonale, nasale Wege und dergleichen verwendet werden. Dosisformen sind u.a. Tabletten, Pastillen, Dispersionen, Suspensionen, Lösungen, Kapseln, Cremes, Salben, Aerosole, Hautpflaster, Systeme mit verzögerter Freisetzung und dergleichen.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung enthalten eine Verbindung der Formel I als einen Wirkstoff oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon und können auch einen pharmazeutisch annehmbaren Träger und gegebenenfalls andere therapeutische Bestandteile enthalten.
Die Zusammensetzungen umfassen zur oralen, rektalen, topischen, parenteralen (einschließlich subkutanen, intramuskulären und intravenösen), okulären (ophthalmischen), pulmonalen (nasale oder bukkale Inhalation) oder nasalen Verabreichung geeignete Zusammensetzungen, obwohl der am besten geeignete Weg in jedem gegebenen Fall von der Natur und der Schwere der zu behandelnden Zustände und von der Natur des Wirkstoffes abhängen wird. Sie können zweckmäßigerweise in Einheitsdosisform dargereicht und durch ein beliebiges auf dem Gebiet der Pharmazie gut bekanntes Verfahren hergestellt werden.
Zur Verabreichung durch Inhalation werden die Verbindungen der vorliegenden Erfindung zweckmäßigerweise in Form eines Aerosolsprays aus unter Druck stehenden Packungen oder Zerstäubern zugeführt. Die Verbindungen können auch als Pulver zugeführt werden, die formuliert sein können, und die Pulverzusammensetzung kann mit Hilfe einer Insufflationspulverinhaliervorrichtung inhaliert werden. Das bevorzugte Abgabesystem zur Inhalation ist ein Aerosol zur Inhalation einer abgemessenen Dosis (MDI), die als eine Suspension oder Lösung einer Verbindung der Formel I in geeigneten Treibmitteln, wie z.B. Fluorkohlenstoffen oder Kohlenwasserstoffen, formuliert sein kann.
Geeignete topische Formulierungen der Verbindung I sind u.a. transdermale Vorrichtungen, Aerosole, Cremes, Salben, Lotionen, Puder und dergleichen.
Bei der praktischen Verwendung können die Verbindungen der Formel I als der Wirkstoff in inniger Vermischung mit einem pharmazeutischen Träger gemäß herkömmlichen pharmazeutischen Compoundierverfahren kombiniert werden. Der Träger kann eine breite Vielfalt an Formen annehmen, in Abhängigkeit der zur Verabreichung erwünschten Form der Zubereitung, z.B. oral oder parenteral (einschließlich intravenös). Bei der Herstellung der Zusammensetzungen für eine orale Dosisform kann irgendeines der üblichen pharmazeutischen Medien eingesetzt werden, wie z.B. Wasser, Glycole, Öle, Alkohole, Aromastoffe, Konservierungsstoffe, Farbmittel und dergleichen, im Falle von oralen flüssigen Zubereitungen, wie z.B. Suspensionen, Elixiere und Lösungen; oder Träger, wie z.B. Stärken, Zucker, mikrokristalline Cellulose, Verdünnungsmittel, Granuliermittel, Gleitmittel, Bindemittel, Sprengmittel und dergleichen, im Falle von oralen festen Zubereitungen, wie z.B. Pulvern, Kapseln und Tabletten, wobei die festen oralen Zubereitungen den flüssigen Zubereitungen vorgezogen werden. Aufgrund ihrer Leichtigkeit der Verabreichung stellen Tabletten und Kapseln die vorteilhafteste orale Dosiseinheitsform dar, wobei in diesem Fall selbstverständlich feste pharmazeutische Träger eingesetzt werden. Falls erwünscht, können Tabletten durch wäßrige oder nichtwäßrige Standardverfahren überzogen werden.
Zusätzlich zu den oben angegebenen üblichen Dosisformen können die Verbindungen der Formel I auch durch Mittel und/oder Abgabevorrichtungen zur gesteuerten Abgabe verabreicht werden, wie z.B. durch diejenigen, die in den US-Patenten mir den Nummern 3 845 770, 3 916 899, 3 536 809, 3 598 123, 3 630 200 und 4 008 719 beschrieben sind.
Zur oralen Verabreichung geeignete pharmazeutische Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können als getrennte Einheiten, wie z.B. Kapseln, Kapseln aus Stärkemasse oder Tabletten, die jeweils eine vorbestimmte Menge des Wirkstoffes enthalten, als Pulver oder Granulate oder als eine Lösung oder eine Suspension in einer wäßrigen Flüssigkeit, einer nichtwäßrigen Flüssigkeit, einer Öl-in-Wasser-Emulsion oder einer Wasser-in-Öl-Flüssigemulsion vorgelegt werden. Solche Zusammensetzungen können durch beliebige pharmazeutische Verfahren hergestellt werden, alle diese Verfahren umfassen jedoch den Schritt des Inverbindungbringens des Wirkstoffes mit dem Träger, der einen oder mehrere notwendigen Inhaltsstoffe beinhaltet. Im allgemeinen werden die Zusammensetzungen durch gleichmäßiges und inniges Vermischen des Wirkstoffes mit flüssigen Trägern oder feinteiligen festen Trägern oder mit beiden und, falls notwendig, anschließendes Formen des Produkts in die erwünschte Darreichungsform hergestellt. Zum Beispiel kann eine Tablette durch Pressen oder Formen gegebenenfalls mit einem oder mehreren Begleitinhaltsstoffen hergestellt werden. Gepreßte Tabletten können durch Pressen des Wirkstoffes zu einer freifließenden Form, wie z.B. Pulver oder Körnchen, gegebenenfalls mit einem Bindemittel, Gleitmittel, inerten Verdünnungsmittel, oberflächenaktiven oder Dispersionsmittel, in einer geeigneten Maschine hergestellt werden. Geformte Tabletten können durch Formen einer Mischung der mit einem inerten flüssigen Verdünnungsmittel benetzten pulverförmigen Verbindung in einer geeigneten Maschine hergestellt werden.
Es ist erwünscht, daß jede Tablette etwa 1 mg bis etwa 500 mg des Wirkstoffes und jede Kapsel aus Stärkemasse oder jede Kapsel etwa 1 bis etwa 500 mg des Wirkstoffes enthält.

Folgende Beispiele sind repräsentative pharmazeutische Dosisformen für die Verbindungen der Formel I:

Injizierbare Suspension (I.M.)	mg/ml
Verbindung der Formel I	10
Methylcellulose	5,0
Tween 80	0,5
Benzylalkohol	9,0
Benzalkoniumchlorid	1,0
Wasser zur Injektion auf ein Gesamtvolumen von 1 ml
Tablette	mg/Tablette
Verbindung der Formel I	25
Mikrokristalline Cellulose	415
Povidon	14,0
Vorgelatinierte Stärke	43,5
Magnesiumstearat	2,5
	500
Kapsel	mg/Kapsel
Verbindung der Formel I	25
Lactosepulver	573,5
Magnesiumstearat	1,5
	600
Aerosol	Pro Kanister
Verbindung der Formel I	24 mg
Lecithin, NF Flüssigkonzentrat	1,2 mg
Trichlorfluormethan, NF	4,025 g
Dichlordifluormethan, NF	12,15 g

Kombinationen mit anderen Arzneistoffen
Zusätzlich zu den Verbindungen der Formel I können die pharmazeutischen Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung auch andere Wirkstoffe enthalten, wie z.B. Cyclooxygenaseinhibitoren, nichtsteroidale Antiphlogistika (NSAIDs), peripher wirksame Analgetika, wie z.B. Zomepirac, Diflunisal und dergleichen. Das Gewichtsverhältnis der Verbindung der Formel I zum zweiten Wirkstoff kann variiert werden und wird von der wirksamen Dosis jedes Inhaltsstoffes abhängen. Im allgemeinen wird von jedem eine wirksame Dosis verwendet werden. Somit wird, wenn zum Beispiel eine Verbindung der Formel I mit einem NSAID kombiniert wird, das Gewichtsverhältnis der Verbindung der Formel I zum NSAID im allgemeinen im Bereich von 1000:1 bis 1:1000, vorzugsweise 200:1 bis 1:200, liegen. Kombinationen aus einer Verbindung der Formel I und anderen Wirkstoffen werden im allgemeinen ebenfalls innerhalb des oben genannten Bereichs liegen, in jedem Fall sollte jedoch eine wirksame Dosis von jedem Wirkstoff verwendet werden.
NSAIDs können in fünf Gruppen eingeordnet werden:

(1) Propionsäurederivate,
(2) Essigsäurederivate,
(3) Fenaminsäurederivate,
(4) Oxicame und
(5) Biphenylcarbonsäurederivate

Die Propionsäurederivate, die verwendet werden können, umfassen: Alminoprofen, Benoxaprofen, Bucloxinsäure, Carprofen, Fenbufen, Fenoprofen, Fluprofen, Flurbiprofen, Ibuprofen, Indoprofen, Ketoprofen, Miroprofen, Naproxen, Oxaprozin, Pirprofen, Pranoprofen, Suprofen, Tiaprofensäure und Tioxaprofen. Strukturell verwandte Propionsäurederivate mit ähnlichen analgetischen und antiinflammatorische Eigenschaften sollen ebenfalls in dieser Gruppe enthalten sein.
Somit sind "Propionsäurederivate", wie sie hier definiert sind, nichtnarkotische Analgetika/nichtsteroidale Antiphlogistika mit einer freien -CH(CH₃)COOH- oder -CH₂CH₂COOH-Gruppe (die gegebenenfalls in der Form einer pharmazeutisch annehmbaren Salzgruppe vorliegen kann, z.B. -CH(CH₃)COO^–Na⁺ oder -CH₂CH₂COO^–Na⁺), typischerweise direkt oder mittels einer Carbonylfunktion an ein Ringsystem, vorzugsweise an ein aromatisches Ringsystem, gebunden.
Die Essigsäurederivate, die verwendet werden können, umfassen: Indomethacin, das ein bevorzugtes NSAID ist, Acemetacin, Alclofenac, Clidanac, Diclofe nac, Fenclofenac, Fenclozinsäure, Fentiazac, Furofenac, Ibufonac, Isoxepac, Oxpinac, Sulindac, Tiopinac, Tolmetin, Zidometacin und Zomepirac. Strukturell verwandte Essigsäurederivate mit ähnlichen analgetischen und antiinflammatorischen Eigenschaften sollen ebenfalls von dieser Gruppe umfaßt sein.
Somit sind "Essigsäurederivate", wie sie hier definiert sind, nichtnarkotische Analgetika/nichtsteroidale Antiphlogistika mit einer freien -CH₂COOH-Gruppe (die gegebenenfalls in der Form einer pharmazeutisch annehmbaren Salzgruppe, z.B. -CH₂COO^–Na⁺, vorliegen kann), die typischerweise direkt an ein Ringsystem, vorzugsweise an ein aromatisches oder heteroaromatisches Ringsystem, gebunden ist.
Die Fenaminsäurederivate, die verwendet werden können, umfassen: Flufenaminsäure, Meclofenaminsäure, Mefenaminsäure, Nifluminsäure und Tolfenaminsäure. Strukturell verwandte Fenaminsäurederivate mit ähnlichen analgetischen und antiinflammatorischen Eigenschaften sollen ebenfalls von dieser Gruppe umfaßt sein.
Somit sind "Fenaminsäurederivate", wie sie hier definiert sind, nichtnarkotische Analgetika/nichtsteroidale Antiphlogistika, welche die Grundstruktur:
enthalten, die eine Vielzahl an Substituenten tragen kann und worin die freie -COOH-Gruppe in der Form einer pharmazeutisch annehmbaren Salzgruppe, z.B. -COO^–Na⁺, vorliegen kann.
Die Biphenylcarbonsäurederivate, die verwendet werden können, umfassen: Diflunisal und Flufenisal. Strukturell verwandte Biphenylcarbonsäurederivate mit ähnlichen analgetischen und antiinflammatorischen Eigenschaften sollen ebenfalls von dieser Gruppe umfaßt sein.
Somit sind "Biphenylcarbonsäurederivate", wie sie hier definiert sind, nichtnarkotische Analgetika/nichtsteroidale Antiphlogistika, welche die Grundstruktur:
enthalten, die eine Vielzahl an Substituenten tragen kann und worin die freie -COOH-Gruppe in der Form einer pharmazeutisch annehmbaren Salzgruppe, z.B. -COO^–Na⁺, vorliegen kann.
Die Oxicame, die in der vorliegenden Erfindung verwendet werden können, umfassen: Isoxicam, Piroxicam, Sudoxicam und Tenoxican. Strukturell verwandte Oxicame mit ähnlichen analgetischen und antiinflammatorischen Eigenschaften sollen ebenfalls von dieser Gruppe umfaßt sein.
Somit sind "Oxicame", wie sie hier definiert sind, nichtnarkotische Analgetika/nichtsteroidale Antiphlogistika, welche die allgemeine Formel:
besitzen, worin R ein Aryl- oder Heteroarylringsystem ist.
Die folgenden NSAIDs können ebenfalls verwendet werden: Natrium-Amfenac, Aminoprofen, Anitrazafen, Antrafenin, Auranofin, Bendazaclysinat, Benzydanin, Beprozin, Broperamol, Bufezalac, Cinmetacin, Ciproquazon, Cloximat, Dazidamin, Deboxamet, Delmetacin, Detomidin, Dexindoprofen, Diacerein, Difisalamin, Difenpyramid, Emorfazon, Enfenaminsäure, Enolicam, Epirizol, Etersalat, Etodolac, Etofenamat, Fanetizolmesylat, Fenclorac, Fendosal, Fenflumizol, Feprazon, Floctafenin, Flunixin, Flunoxaprofen, Fluproquazon, Fopirtolin, Fosfosal, Furcloprofen, Glucametacin, Guaimesal, Ibuproxam, Isofezolac, Isonixim, Isoprofen, Isoxicam, Lefetamin-HCl, Leflunomid, Lofemizol, Calcium-Lonazolac, Lotifazol, Loxoprofen, Lysinclonixinat, Natrium-Meclofenamat, Meseclazon, Nabumeton, Nictindol, Nimesulid, Orpanoxin, Oxametacin, Oxapedol, Perisoxalcitrat, Pimeprofen, Pimetacin, Piproxen, Pirazolac, Pirfenidon, Proglumetacinmaleat, Proquazon, Pyridoxiprofen, Sudoxicam, Talmetacin, Talniflumat, Tenoxicam, Thiazolinbutazon, Thielavin B, Tiaramid-HCl, Tiflamizol, Timegadin, Tolpadol, Tryptamid und Ufenamat.
Die folgenden NSAIDs, die durch Firmencodenummern bezeichnet sind (siehe z.B. Pharmaprojects), können ebenfalls verwendet werden:
480156S, AA861, AD1590, AFP802, AFP860, AI77B, AP504, AU8001, BPPC, BW540C, CHINOIN 127, CN100, EB382, EL508, F1044, GV3658, ITF182, KCNTE16090, KME4, LA2851, MR714, MR897, MY309, ONO3144, PR823, PV102, PV108, R830, RS2131, SCR152, SH440, SIR133, SPAS510, SQ27239, ST281, SY6001, TA60, TAI-901 (4-Benzoyl-1-indancarbonsäure), TVX2706, U60257, UR2301 und WY41770.
Schließlich sind NSAIDs, die ebenfalls verwendet werden können, u.a. die Salicylate, insbesondere Acetylsalicylsäure, und die Phenylbutazone und pharmazeutisch annehmbare Salze davon.
Zusätzlich zu Indomethacin, sind andere bevorzugte NSAIDs Acetylsalicylsäure, Diclofenac, Fenbufen, Fenoprofen, Flurbiprofen, Ibuprofen, Ketoprofen, Naproxen, Phenylbutazon, Piroxicam, Sulindac und Tolmetin.
Pharmazeutische Zusammensetzungen, welche die Verbindungen der Formel I enthalten, können auch Inhibitoren für die Biosynthese der Leukotriene enthalten, wie sie z.B. in der EP 138 481 (24. April 1985), der EP 115 394 (8. August 1984), der EP 136 893 (10. April 1985) und der EP 140 709 (8. Mai 1985) offenbart sind.
Die Verbindungen der Formel I können auch in Kombination mit Leukotrienantagonisten verwendet werden, wie z.B. denjenigen, die in der EP 106 565 (25. April 1984) und der EP 104 885 (4. April 1984) offenbart sind, und mit anderen im Stand der Technik bekannten Leukotrienantagonisten, wie z.B. denjenigen, die in den EP-Anmeldungen mit den Nummern 56 172 (21. Juli 1982) und 61 800 (10. Juni 1982) und in der UK-Patentschrift Nr. 2 058 785 (15. April 1981) offenbart sind.
Pharmazeutische Zusammensetzung, welche die Verbindungen der Formel I enthalten, können als den zweiten Wirkstoff auch Prostaglandinantagonisten, wie z.B. diejenigen, die in der EP 11 067 (28. Mai 1980) offenbart sind, oder Thromboxanantagonisten, wie z.B. diejenigen, die in dem US-Patent 4 237 160 offenbart sind, enthalten. Sie können auch Histidindecarboxylaseinhibitoren, wie z.B. das in dem US-Patent 4 325 961 beschriebene α-Fluormethylhistidin, enthalten. Die Verbindungen der Formel I können vorteilhafterweise auch mit einem H₁- oder H₂-Rezeptorantagonisten, wie z.B. Acetamazol, Aminothiazodiazolen, die in der EP 40 696 (2. Dezember 1981) offenbart sind, Benadryl, Cimetidin, Famotidin, Framamin, Histadyl, Phenergan, Ranitidin, Terfenadin, Loratadin und ähnlichen Verbindungen, wie z.B. denjenigen, die in den US-Patenten mit den Nummern 4 283 408, 4 362 736 und 4 394 508 offenbart sind, kombiniert werden. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können auch einen K⁺/H⁺-ATPase-Inhibitor, wie z.B. das in dem US-Patent 4 255 431 offenbarte Omeprazol, und dergleichen enthalten. Verbindungen der Formel I können auch mit mastzellenstabilisierenden Mitteln, wie z.B. 1,3-Bis(2-carboxychromon-5-yloxy)-2-hydroxypropan und verwandten Verbindungen, die in den Britischen Patentschriften 1 144 905 und 1 144 906 beschrieben sind, geeignet kombiniert werden. Eine weitere nützliche pharmazeutische Zusammensetzung umfaßt die Verbindungen der Formel I in Kombination mit Serotoninantagonisten, wie z.B. Methysergid, den Serotoninantago nisten, die in Nature, 316, 126–131 (1985) beschrieben sind, und dergleichen. Andere vorteilhafte pharmazeutische Zusammensetzungen enthalten die Verbindungen der Formel I in Kombination mit Anticholinergika, wie z.B. Ipratropiumbromid, Bronchodilatoren, wie z.B. dem beta-Agonisten Salbutamol, Metaproterenol, Terbutalin, Fenoterol und dergleichen, und den Antiasthmatika Theophyllin, Cholintheophyllinat und Enprofyllin, den Calciumantagonisten Nifedipin, Diltiazem, Nitrendipin, Verapamil, Nimodipin, Felodipin usw., und den Corticosteroiden Hydrocortison, Methylprednisolon, Betamethason, Dexamethason, Beclomethason und dergleichen.
Syntheseverfahren
Die Verbindungen der Formel I sind Gallenstoffwechselprodukte von Montelukast-Natrium. Daher können sie aus der Gallensäure von Individuen, die Montelukast-Natrium eingenommen haben, durch im Stand der Technik gut bekannte Verfahren, wie z.B. Chromatographie, isoliert und gereinigt werden.
Alternativ können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung gemäß den folgenden chemischen Verfahren, die in den Schemata 1 und 2 beschrieben sind, hergestellt werden.
Schema 1
In Schema 1 wird der Diolester 1 durch Verwendung eines Oxidationsmittels, zum Beispiel Dimethylsulfoxid, und eines Elektrophils, wie z.B. Oxalylchlorid, zum entsprechenden Aldehyd 2 oxidiert. Die Reaktion wird in einem inerten organischen Lösungsmittel, wie z.B. Methylenchlorid, und bei einer Temperatur unter 0°C, zum Beispiel bei etwa –60°C, durchgeführt. Diol 1 ist eine bekannte Verbindung und kann gemäß dem in J. Org. Chem., 1996, 61: 8518–8525 beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Die weitere Oxidation des Aldehyds 2 zur Disäure I erfolgt mit Silbernitrat und einer Base, wie z.B. Kaliumhydroxid. Die Oxidation wird zweckmäßigerweise bei Raumtemperatur in Ethanol durchgeführt.
Schema 2
Schema 2 (Forts.)
In Schema 2 wird das geschützte Hydroxyketon 3 mit Selendioxid oxidiert, um den entsprechenden α-Ketoaldehyd 4 zu ergeben. Die Hydroxyschutzgruppe kann zum Beispiel die t-Butyldimethylsilylgruppe sein. Das Hydroxyketon 3 kann gemäß dem in J. Org. Chem., 1993, 58: 3731–3735 beschriebenen Verfahren hergestellt werden.
Der α-Ketoaldehyd 4 wird zu der entsprechenden α-Ketocarbonsäure 5 oxidiert, die dann zu ihrem 8-Phenylmentholester 6 derivatisiert wird. Die Behandlung von 6 mit Methylmagnesiumbromid, gefolgt von der Entfernung der Schutzgruppe, ergibt den Diolester 7 als eine Diastereomerenmischung. Die einzelnen Diastereomere werden mittels Chromatographie getrennt. Jedes Diastereomer wird getrennt verwendet, um die einzelnen Diastereomere der Formel I herzustellen.
So wird die sekundäre Hydroxylgruppe von 7 mesyliert und anschließend mit dem Dianion von 1-Mercaptomethylcyclopropanessigsäure, das mit n-Butyllithium in situ erzeugt wird, umgesetzt, um die Esterverbindung 8 zu ergeben. Die Hydrolyse von 8 mit einer Base, wie z.B. Lithiumhydroxid, ergibt die erwünschte Disäure der Formel I.
Versuche zur Bestimmung der biologischen Aktivität
Die Leukotrienantagonist-Eigenschaften der Verbindungen der vorliegenden Erfindung werden durch folgende Versuche ermittelt:

1. [³H]LTD₄-Rezeptorbindungsversuch in DMSO-differenzierten U937-Zellen (eine menschliche monozytische Zell-Linie);
2. [³H]LTD₄-Rezeptorbindung an Meerschweinchenlungenmembranen;
3. [³H]LTD₄-Rezeptorbindung an Menschenlungenmembranen;
4. In-Vitro-Meerschweinchen-Trachea; und
5. In-Vivo-Versuche an anästhesierten Meerschweinchen.

Die obigen Versuche werden von T. R. Jones et al., Can. J. Physiol. Pharmacol. 1991, 69, 1847–1854, beschrieben.
Versuch mit asthmatischen Ratten
Ratten werden von einer Inzuchtlinie asthmatischer Ratten erhalten. Sowohl weibliche (190–250 g) als auch männliche (260–400 g) Ratten werden verwendet.
Eialbumin (EA), Qualität V, kristallisiert und gefriergetrocknet, wird von Sigma Chemical Co., St. Louis, erhalten. Aluminiumhydroxid wird von der Regis Chemical Company, Chicago, erhalten. Methysergidbimaleat wird von Sandoz Ltd., Basel, zur Verfügung gestellt.
Der Reiz und die nachfolgenden respiratorischen Aufzeichnungen werden in einer durchsichtigen Kunststoffbox mit den Innenabmessungen 10 × 6 × 4 Inch durchgeführt. Das Oberteil der Box ist abnehmbar; während des Gebrauchs wird es durch vier Klammern fest geschlossen gehalten, und durch eine Weichgummidichtung wird eine luftdichte Versiegelung aufrechterhalten. Durch die Mitte eines jeden Endes der Kammer wird ein DeVilbiss-Zerstäuber (Nr. 40) durch eine luftdichte Abdichtung eingeführt, und jedes Ende der Box hat auch einen Auslaß. Ein Fleisch-Nr.0000-Pneumotachograph wird in ein Ende der Box eingeführt und mit einem Grass-Meßfühler für den volumetrischen Druck (PT5-A) verbunden, der dann mit einem Buxco-Electronics-Vorverstärker (Buxco Electronics Inc., Sharon, Conn.) verbunden wird. Der Vorverstärker ist mit einem Beckman-Typ-R-Dynograph und mit einem Buxco-Computer, der aus einem Wellenformanalysator, Data Acquisition Logger mit spezieller Software besteht, verbunden. Während das Antigen versprüht wird, sind die Auslässe geöffnet, und der Pneumatograph ist von der Kammer abgetrennt. Die Auslässe werden geschlossen und der Pneumatograph und die Kammer während der Aufzeichnung der Atmungsmuster angeschlossen. Für den Reiz werden 2 ml einer 3%igen Lösung von Antigen in Salzlösung in jeden Zerstäuber gegeben und das Aerosol mit Luft aus einer kleinen Potter-Membranpumpe, die mit 10 psi und einem Fluß von 8 Liter/Minute arbeitet, erzeugt.
Die Ratten werden durch Injektion (subkutan) von 1 ml einer Suspension, die 1 mg EA und 200 mg Aluminiumhydroxid in Salzlösung enthält, sensibilisiert. Sie werden zwischen dem 12. und dem 24. Tag nach der Sensibilisierung eingesetzt. Um die Serotonin-Komponente der Reaktion zu eliminieren, werden die Ratten intravenös 5 Minuten vor dem Aerosolreiz mit 3,0 mg/kg Methysergid vorbehandelt. Die Ratten werden dann exakt 1 Minute lang einem Aerosol aus 3% EA in Salzlösung ausgesetzt, anschließend werden weitere 30 Minuten lang ihre Atmungsprofile aufgezeichnet. Die Dauer der kontinuierlichen Dyspnoe wird vom Buxco-Computer gemessen.
Die Verbindungen werden im allgemeinen entweder oral 2–4 Stunden vor dem Reiz oder intravenös 2 Minuten vor dem Reiz verabreicht. Sie sind entweder in Salzlösung oder in 1 % Methocel gelöst oder in 1 % Methocel suspendiert. Das injizierte Volumen beträgt 1 ml/kg (intravenös) oder 10 ml/kg (oral). Vor der oralen Behandlung läßt man die Ratten über Nacht hungern. Die Aktivität der Verbindungen wird durch ihre Fähigkeit, die Dauer der antigen-induzierten Dyspnoe im Vergleich mit einer Gruppe vehikelbehandelter Kontrollen zu verringern, bestimmt. In der Regel wird eine Verbindung bei einer Reihe von Dosen untersucht und ein ED₅₀-Wert ermittelt. Dieser ist definiert als die Dosis (mg/kg), welche die Dauer der Symptome zu 50% inhibieren würde.
Lungenmechaniken bei trainierten, bei Bewußtsein befindlichen Totenkopfäffchen Das Testverfahren umfaßt das Setzen von trainierten Totenkopfäffchen auf Stühle in Aerosoleinwirkungskammern. Für Kontrollzwecke werden Lungenmechanikmessungen von Atmungsparametern über einen Zeitraum von etwa 30 Minuten aufgezeichnet, um die normalen Kontrollwerte eines jeden Affen für diesen Tag zu ermitteln. Zur oralen Verabreichung werden die Verbindungen in einer 1%igen Methocel-Lösung (Methylcellulose, 65HG, 400 cps) gelöst oder suspendiert und in einem Volumen von 1 ml/kg Körpergewicht verabreicht. Zur Aerosolverabreichung von Verbindungen wird ein DeVilbiss-Ultraschall-Zerstäuber verwendet. Die Vorbehandlungszeiten variieren von 5 Minuten bis 4 Stunden, bevor die Affen mit Aerosoldosen von entweder Leukotrien D₄(LTD₄) oder Ascaris-suum-Antigen, Verdünnung 1:25, gereizt werden.
Im Anschluß an die Reizung wird jede Datenminute vom Computer als eine prozentuale Abänderung von den Kontrollwerten für jeden Atmungsparameter gemessen, einschließlich Atemwegswiderstand (R_L) und dynamischer Nachgiebigkeit (C_dyn). Die Ergebnisse für jede Testverbindung werden nachfolgend über eine Zeitdauer von minimal 60 Minuten nach der Reizung aufgenommen, welche dann mit zuvor erhaltenen historischen Grundlinien-Kontrollwerten für diesen Affen verglichen werden. Zusätzlich wird von den Gesamtwerten 60 Minuten nach der Reizung für jeden Affen (historische Grundlinienwerte und Testwerte) getrennt der Durchschnitt ermittelt und dieser verwendet, um die prozentuale Gesamtinhibierung von LTD₄- oder Ascaris-Antigenreaktion durch die Testverbindung zu berechnen. Zur statistischen Analyse wird ein gepaarter t-Test verwendet (Literatur: C. S. McFarlane et al., Prostaglandins, 28, 173–182 (1984) und C. S. McFarlane et al., Agents Actions 22, 63–68 (1987)).
Verhinderung von induzierter Bronchialverengung bei allergischen Schafen
A. Grundprinzip.
Bestimmte allergische Schafe mit bekannter Sensibilität für ein bestimmtes Antigen (Ascaris suum) sprechen auf einen Inhalationsreiz mit akuten und späten bronchialen Reaktionen an. Der Zeitverlauf sowohl der akuten als auch der späten bronchialen Reaktionen entspricht ungefähr dem Zeitverlauf, der bei Asthmatikern beobachtet wird, und die pharmakologische Modifizierung beider Reaktionen ist ähnlich zu der, die beim Menschen gefunden wird. Die Auswirkungen von Antigen bei diesen Schafen werden größtenteils in den großen Atemwegen beobachtet und werden zweckmäßigerweise als Änderungen des Lungenwiderstandes oder des spezifischen Lungenwiderstandes aufgezeichnet.
B. Verfahren.
Tierpräparation: Erwachsene Schafe mit einem mittleren Gewicht von 35 kg (Bereich von 18 bis 50 kg) werden verwendet. Alle verwendeten Tiere erfüllen zwei Kriterien: a) Sie haben eine natürliche kutane Reaktion auf 1:1000- oder 1:10000-Verdünnungen von Ascaris-suum-Extrakt (Greer Diagnostics, Lenois, NC), und b) sie haben zuvor auf eine Inhalationsreizung mit Ascaris suum sowohl mit einer akuten Bronchialverengung als auch mit einer späten Bronchialverstopfung reagiert (W. M. Abraham et al., Am. Rev. Resp. Dis., 128, 839–844 (1983)).
Messung der Atemwegsmechaniken:
Die unsedierten Schafe werden auf dem Bauch liegend in einen Wagen gesperrt, wobei sie ihre Köpfe nicht bewegen können. Nach der topischen Anästhesie der Nasenwege mit 2%iger Lidocain-Lösung wird durch ein Nasenloch ein Ballonkatheter in die untere Speiseröhre geschoben. Die Tiere werden dann durch das andere Nasenloch unter Verwendung eines flexiblen faseroptischen Bronchoskops als Führung mit einer Endotrachealröhre mit Manschette intubiert. Der Pleuraldruck wird mit dem Speiseröhren-Ballonkatheter (mit 1 ml Luft gefüllt) untersucht, der so positioniert ist, daß das Einatmen einen negativen Druckausschlag mit deutlich erkennbaren kardiogenen Oszillationen erzeugt. Der Lateraldruck in der Luftröhre wird mit einem Nebenlochkatheter (Innenabmessung 2,5 mm) gemessen, der durch die Nasotrachealröhre geschoben und distal zu deren Spitze positioniert wird. Der Transpulmonardruck, die Differenz zwischen dem Trachealdruck und dem Pleuraldruck, wird mit einem Differentialdruckfühler (DP45, Validyne Corp., Northridge, CA) gemessen. Zur Messung des Lungenwiderstandes (R_L) wird das Maximalende der Nasotrachealröhre mit einem Pneumotachographen (Fleisch, Dyna Sciences, Blue Bell, PA) verbunden. Die Fluß- und Transpulmonardrucksignale werden auf einem Oszilloskop (Modell DR-12; Electronics for Medicine, White Plains, NY), das mit einem PDP-11-Digital-Computer (Digital Equipment Corp., Maynard, MA) zur On-line-Berechnung von R_L aus Transpulmonardruck, Respirationsvolumen, erhalten durch Integration, und Fluß ausgestattet ist, aufgezeichnet. Die Analyse von 10–15 Atemzüge wird zur Bestimmung von R_L verwendet. Das Thoraxgasvolumen (V_tg) wird in einem Körperplethysmographen gemessen, um den spezifischen Lungenwiderstand (SR_L = R_L·V_tg) zu erhalten.
Aerosolabgabesysteme:
Aerosole für Ascaris-suum-Extrakt (1:20) werden durch Verwendung eines medizinischen Einweg-Zerstäubers (Raindrop^®, Puritan Bennett) erzeugt, der ein Aerosol mit einem massengemittelten aerodynamischen Durchmesser von 6,2 mM (geometrische Standardabweichung 2,1), gemessen durch einen elektrischen Größenanalysator (Modell 3030; Thermal Systems, St. Paul, MN), erzeugt. Der Ausstoß aus dem Zerstäuber wird in ein Kunststoff-T-Stück geleitet, wobei ein Ende davon mit der Nasotrachealröhre und das andere Ende mit dem Einatmungsteil eines Harvard-Respirators verbunden ist. Das Aerosol wird bei einem Flutvolumen von 500 ml mit einer Rate von 20 pro Minute abgegeben. Somit erhält jedes Schaf eine äquivalente Antigendosis sowohl in Placebo- als auch in Arzneistoffversuchen.
Versuchsprotokoll:
Bevor Antigenreizgrundlinienmessungen von SR_L aufgenommen werden, wird die Infusion der Testverbindung eine Stunde vor dem Reiz begonnen, die Messung von SR_L wird wiederholt, und anschließend erhält das Schaf einen Inhalationsreiz mit Ascaris-suum-Antigen. Die SR_L Messungen werden unmittelbar nach dem Antigenreiz und 1, 2, 3, 4, 5, 6, 6,5, 7, 7,5 und 8 Stunden nach dem Antigenreiz aufgenommen. Die Placebo- und Arzneistofftests liegen wenigstens 14 Tage auseinander. Bei einer weiteren Untersuchung werden den Schafen eine Bolusdosis der Testverbindung verabreicht, gefolgt von einer Infusion der Testverbindung 0,5–1 Stunde vor dem Ascaris-Reiz und 8 Stunden nach dem Ascaris-Reiz, wie es oben beschrieben ist.
Statistische Analyse:
Ein Kruskal-Wallis-Einweg-ANOVA-Test wird verwendet, um die akuten unmittelbaren Reaktionen auf Antigen und die maximale Spätreaktion bei den Kontrollen und den arzneistoffbehandelten Tieren zu vergleichen.
Die Erfindung wird jetzt durch die folgenden Beispiele veranschaulicht, in denen, sofern nichts anderes angegeben ist:

(i) alle Vorgänge bei Raum- oder Umgebungstemperatur, d.h. bei einer Temperatur im Bereich von 18–25°C, durchgeführt wurden;
(ii) das Eindampfen des Lösungsmittels durch Verwendung eines Rotationsverdampfers unter vermindertem Druck (600–4000 Pascal: 4,5–30 mm Hg) bei einer Badtemperatur von bis zu 60°C durchgeführt wurde;
(iii) der Reaktionsverlauf durch Dünnschichtchromatographie (DC) verfolgt wurde und die Reaktionszeiten nur zur Veranschaulichung angegeben sind;
(iv) Schmelzpunkte unkorrigiert sind und "Zers." Zersetzung bedeutet; die angegebenen Schmelzpunkte diejenigen sind, die für die wie beschrieben hergestellten Materialien erhalten wurden; Polymorphismus zur Isolierung von Materialien mit unterschiedlichen Schmelzpunkten führen kann;
(v) die Struktur und Reinheit aller Endprodukte durch wenigstens eines der folgenden Verfahren bestätigt wurde: DC, Massenspektrometrie, magnetische Kernresonanzspektroskopie (NMR) oder mikroanalytische Daten;
(vi) Ausbeuten nur zur Veranschaulichung angegeben sind;
(vii) NMR-Daten, wenn sie angegeben sind, in Form von delta(δ)-Werten für die diagnostischen Haupt-Protonen sind, angegeben in Teilen pro Millionen Teile (ppm) relativ zu Tetramethylsilan (TMS) als ein interner Standard, aufgenommen bei 300 MHz oder 400 MHz unter Verwendung des angegebenen Lösungsmittels; herkömmliche Abkürzungen, die für die Signalform verwendet werden, folgende sind: s Singulett, d Dublett, t Triplett, m Multiplett, br. breit, usw., außerdem bedeutet "Ar" ein aromatisches Signal;
(viii) chemische Symbole ihre üblichen Bedeutungen haben, wobei auch die folgenden Abkürzungen verwendet worden sind: Vol. (Volumen), Gew. (Gewicht), Sdp. (Siedpunkt), Schmp. (Schmelzpunkt), l (Liter), ml (Milliliter), g (Gramm), mg (Milligramm), mol (Mol), mmol (Millimol), Äqu. (Äquivalente).

BEISPIEL 1
(R,R oder S)-1-[((1-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-(2-(2-hydroxy-2-propionsäure)phenyl)propyl)thio)methyl]cyclopropanessigsäure
Diastereomerenmischung Schritt 1 Methyl-(R,R oder S)-1-[((1-[3-(2-(7-chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl}-3-(2-(2-hydroxy-2-propionaldehyd)phenyl)propyl)thio)methyl]cyclopropanacetat
Zu einer Mischung aus Oxalylchlorid (0,045 mmol, 4,3 ml) in CH₂Cl₂ (200 ml) bei –60°C wurde tropfenweise DMSO (0,097 mmol, 7 ml) zugegeben, und man ließ 5 Minuten rühren. Anschließend wurde Methyl-(R,R oder S)-1-[((1-[3-(2-(7-chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-(2-(1,2-dihydroxy-1-methylethyl)phenyl)propyl)thio)methyl]cyclopropanacetat (J. Org. Chem., 1996, 61, 8518–8525) (0,041 mol, 25 mg) in CH₂Cl₂ (50 ml) langsam bei –60°C zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 15 Minuten gerührt und mit Et₃N (0,2 mmol, 28 ml) gequencht. Die Temperatur wurde auf 25°C erhöht und H₂O (2 ml) zugegeben und die Reaktionsmischung mit EtOAc (2 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über NazSO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. An den Rückstand wurde bis zur Gewichtskonstanz Hochvakuum angelegt, und es wurden 20 mg der Titelverbindung erhalten, die als solche im nächsten Schritt verwendet wurde.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,38–0,53 (m, 4H), 1,51 (s, 3H), 2,05–2,30 (m, 2H), 2,39 (d, 1H), 2,46 (d, 1H), 2,55 (s, 2H), 2,60–2,80 (m, 2H), 3,05–3,15 (m, 1H), 3,58 (s, 3H), 4,05 (t, 1H), 7,15–7,30 (m, 3H), 7,39–7,55 (m, 5H), 7,62 (m, 1H), 7,75 (s, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,9 (m, 2H), 8,0 (s, 1H), 8,35 (d, 1H), 9,62 (s, 1H).
Schritt 2 (R,R oder S)-1-[((1-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-(2-(2-hydroxy-2-propionsäure)phenyl)propyl)thio)methyl]cyclopropanessigsäure
Zu einer Lösung des Aldehyds von Schritt 1 (20 mg, 0,032 mmol) in EtOH (500 ml) und AgNO₃ (13 mg, 0,076 mmol) (zuvor gelöst in 30 ml H₂O) wurde eine KOH-Lösung (0,16 mmol, 0,16 ml) tropfenweise zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktion wurde mit Essigsäure (10 ml) angesäuert und mit gesättigter NH₄Cl-Lösung (2 ml) verdünnt und mit EtOAc (2 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie auf Kieselgel mit 4:8:1 McOH/CHCl₃/NH₃ gereinigt, um 5 mg zu ergeben, die durch HPLC unter Verwendung einer Novapak-Silicasäule bei 350 nm mit McOH/H₂O/AcOH (80-20-0,1%) gereinigt wurde, um 2,8 mg der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,35–0,68 (m, 4H), 1,75 (s, 3H), 2,10–2,25 (m, 2H), 2,45 (d, 2H), 2,50–2,70 (m, 3H), 3,0 (m, 1H), 4,05 (m, 1H), 7,05–7,20 (m, 3H), 7,35–7,55 (m, 5H), 7,6 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 7,85–8,0 (m, 3H), 8,02 (s, 1H), 8,25 (d, 1H).
HRMS (FAB) m/z berechn. für C₃₅H₃₄C₁NO₅S: 616,192448, gefunden 616,19269.
BEISPIEL 2
(R,R oder S)-1-[((1-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-{E}-ethenyl)phenyl]-3-(2-(2-hydroxy-2-propionsäure)phenyl)propyl)thio)methyl]cyclopropanessigsäure
Hauptisomer
Schritt 1 (S)-2-(3-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-tert.-butyldimethylsilyloxypropyl)ethanon
Zu [S-(E)]-1-[2-[3-[3-[2-(7-Chlor-2-chinolinyl)ethenyl]phenyl]-3-hydroxypropyl]phenyl]ethanon (J. Org. Chem., 1993, 58, 3731–3735) (13,4 g, 30,35 mmol) in CH₂Cl₂ (67 ml) wurde 2,6-Lutidin (5,32 ml, 45,52 mmol) zugegeben. Die Mischung wurde auf –78°C abgekühlt, dann tropfenweise mit TBDMSO Tf (7,0 ml, 30,35 mmol) versetzt. Die Reaktion wurde 1 Stunde gerührt. Die Mischung wurde durch Zugabe von 25%iger NH₄OAc-Lösung (50 ml) gequencht und mit EtOAc (100 ml) extrahiert. Der organische Extrakt wurde über Na₂SO₄ getrocknet und zu einem Rückstand eingedampft. Das Rohprodukt wurde durch Flashchromatographie auf Kieselgel unter Verwendung von 95:5 Hexan/EtOAc als Elutionsmittel gereinigt, um 14,4 g der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,15 (s, 6H), 0,95 (s, 9H), 2,0 (m, 2H), 2,81–3,02 (m, 2H), 4,95 (t, 1H), 7,25 (t, 2H), 7,36–7,55 (m, 5H), 7,72 (d, 1H), 7,75 (s, 2H), 7,82 (d, 1H), 7,90 (d, 2H), 8,0 (s, 1H), 8,35 (d, 1H).
Schritt 2 (S)-2-(3-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-tert.-butyldimethylsilyloxypropyl)benzoylformaldehyd
Zu zuvor gelöstem SeO₂ (2,95 g, 26,57 mmol) in Dioxan/N₂O-Mischung (100 ml:0,48 ml) bei 60°C wurde das Keton von Schritt 1 (14,4 g, 26 mmol) in Lösung in Dioxan (70 ml) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde über Nacht auf 100°C erhitzt. Die Reaktion wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und durch ein Celitekissen filtriert und mit Dioxan (20 ml) gewaschen. Das Eindampfen zur Trockene ergab die Titelverbindung, die als solche im nächsten Schritt verwendet wurde (Rohgewicht 14 g).
Schritt 3 (S)-2-(3-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-tert.-butyldimethylsilyloxypropyl)benzoylameisensäure
Zu einer Lösung des Aldehyds von Schritt 2 (14 g, 24,6 mmol) in EtOH (118 ml) wurde eine Lösung von AgNO₃ (10 g, 59 mmol), zuvor gelöst in H₂O (23 ml), zugegeben, tropfenweise gefolgt von einer KOH-Lösung (118 ml, 118 mmol, 1M). Die Mischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Der Großteil des EtOH wurde durch Eindampfen entfernt und die wäßrige Lösung mit 1N HCl (118 ml) angesäuert und zweimal mit EtOAc (100 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie zunächst mit reinem EtOAc, dann mit 95:5 EtOAc:AcOH, gereinigt, um 5,0 g der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,15 (s, 6H), 0,95 (s, 9H), 2,0 (m, 2H), 2,95–3,18 (m, 2H), 4,95 (t, 1H), 7,35–7,65 (m, 8H), 7,75–7,97 (m, 5H), 8,0 (s, 1H), 8,32 (d, 1H).
Schritt 4 8-Phenylmenthyl-(S)-2-(3-[3-(2-(7-chlor-2-chinolyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-tert.-butyldimethylsilyloxypropyl)benzoylformiat
Zu der Ketosäure von Schritt 3 (5,0 g, 8,5 mmol) in CH₂Cl₂ (40 ml) bei 0°C wurde DMF (100 ml) zugegeben, tropfenweise gefolgt von Oxalylchlorid (1,12 ml, 12,8 mmol). Die Reaktionsmischung wurde 1 Stunde gerührt. Die Reaktion wurde zur Trockene eingedampft und der Rückstand 1 Stunde unter Hochvakuum gesetzt und als solcher im nächsten Schritt verwendet.
Zu 8 Phenylmenthol (2,0 g, 8,6 mmol) in Toluol (40 ml) und Pyridin (0,7 ml, 8,5 mmol) wurde das rohe Säurechlorid aus dem vorherigen Schritt in Toluol (10 ml) bei Raumtemperatur zugegeben. Die Mischung wurde über Nacht gerührt. Die Reaktion wurde durch Zugabe von gesättigter NH₄Cl-Lösung und 1N HCl 1:1 (50 ml) gequencht und zweimal mit EtOAc (50 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie mit 99/1 Toluol/EtOAc gereinigt, um 5,0 g der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,18 (s, 6H), 0,8–0,9 (m, 4H), 0,95 (s, 9H), 1,02–1,20 (m, 2H), 1,3 (d, 6H), 1,45–1,60 (m, 3H), 1,95–2,15 (m, 4H), 2,92–3,15 (m, 2H), 4,95 (t, 1H), 6,95 (t, 1H), 7,1–7,18 (m, 4H), 7,4–7,55 (m, 6H), 7,57–7,75 (m, 4H), 7,8–7,85 (m, 1H), 7,9–7,98 (d, d, 2H), 8,02 (s, 1H), 8,35 (d, 1H).
Schritt 5 (S,R oder S)-8-Phenylmenthyl-2-(3-[3-(2-(7-chlor-2-chinolyl-(E)-ethenyl)phenyl]-3-tert.-butyldimethylsilyloxypropyl)-2-hydroxy-2-phenylpropionat
Zu dem Ketoester von Schritt 4 (1,0 g, 1,25 mmol) in Ether (25 ml) wurde bei –78°C 3M McMgBr (0,83 ml, 2,5 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 1,5 Stunden gerührt. Die Reaktion wurde durch Zugabe von 0,4 ml AcOH direkt zu der Mischung, gefolgt von gesättigter NH₄Cl-Lösung (10 ml), gequencht und mit EtOAc (20 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie mit 90/10 Hexan/EtOAc gereinigt, um 0,8 g der Titelverbindung zu ergeben.
1H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,2 (s, 6H), 0,62–1,2 (m, 23H), 1,35 (m, 2H), 1,72 (t, 1H), 1,80 (s, 3H), 2,70 (t, 1H), 2,85 (t, 1H), 4,75 (m, 1H), 5,0 (m, 1H), 7,05–7,25 (m, 8H), 7,35–7,55 (m, 5H), 7,65 (s, 1H), 7,75–8,05 (m, 5H), 8,35 (d, 1H).
Schritt 6 (S,R oder S)-8-Phenylmenthyl-2-(3-[3-(2-(7-chlor-2-chinolyl-(E)-ethenyl)phenyl]-3-hydroxy)-2-hydroxy-2-phenylpropionat
Zu dem Estercarbinol von Schritt 5 (0,8 g, 0,98 mmol) in THF wurde TBAF-Lösung (1 ml, 0,98 mmol) bei Raumtemperatur über Nacht zugegeben. Die Reaktion wurde mit gesättigter NH₄Cl-Lösung (10 ml) gequencht und mit EtOAc (2 × 10 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie mit 95:5 CH₂Cl₂/Aceton als Elutionsmittel gereinigt, um 0,39 g eines Hauptisomers und 0,10 g eines Nebenisomers zu ergeben.
Hauptisomer: ¹N-NMR (CD₃COOD₃) d 0,65–1,00 (m, 9H), 1,05 (s, 3H), 1,18 (m, 1H), 1,40 (m, 2H), 1,75 (m, 1H), 1,80 (s, 3H), 2,00 (m, 2H), 2,28 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 3,02 (m, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,80 (m, 1H), 7,08–7,25 (m, 8H), 7,4–7,55 (m, 5H), 7,62 (m, 1H), 7,82–8,02 (m, 5H), 8,35 (d, 1H), Nebenisomer: 0,60–1,00 (m, 6H), 1,2 (m, 7H), 1,3–1,45 (m, 2H), 1,68 (s, 3H), 1,8–1,9 (m, 2H), 2,04 (m, 1H), 2,15–2,25 (m, 1H), 2,65–2,75 (m, 1H), 2,92–3,0 (m, 1H), 4,78–4,90 (m, 2H), 7,09–7,3 (m, 8H), 7,4–7,65 (m, 5H), 7,75–8,05 (m, 6H), 8,35 (d, 1H).
Schritt 7 (S,R oder S)-8-Phenylmenthyl-2-(3-[3-(2-(7-chlor-2-chinolyl-(E)-ethenyl)phenyl]-3-methansulfonat)-2-hydroxy-2-phenylpropionat
Zu dem Hauptisomer des Alkoholcarbinolesters von Schritt 6 (0,3 g, 0,41 mmol) in 1:1 Toluol/CH₃CN (2,5 ml) wurde Hünig-Base (75 ml, 0,43 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde auf –40°C abgekühlt und tropfenweise mit Methansulfonylchlorid (33 ml, 0,43 mmol) versetzt. Die Temperatur wurde allmählich innerhalb eines Zeitraums von 1 Stunde auf –30°C erhöht. Die Reaktionsmischung wurde durch Zugabe einer gesättigten NaHCO₃-Lösung (3 ml) gequencht und mit EtOAc (3 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Die dabei erhaltene Titelverbindung wurde als solche im nächsten Schritt verwendet.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,65–0,98 (m, 9H), 1,0 (s, 3H), 1,25–1,45 (m, 2H), 1,75 (m, 4H), 1,9 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 2,42–2,55 (m, 1H), 2,7–2,85 (m, 2H), 2,95–3,05 (m, 4H), 4,65–4,75 (m, H), 5,80 (t, 1H), 7,05–7,25 (m, 8H), 7,45–7,60 (m, 5H), 7,75–7,82 (d, 1H), 7,83–8,05 (m, 5H), 8,35 (d, 1H).
Zu entgastem THF (1 ml) unter N₂ wurde 1-(Mercaptomethyl)-1-cyclopropanessigsäure (Bioorganic Med. Chem. Letters, 1995, 5(3), 283–288) (60 mg, 0,41 mmol) zugegeben. Zu dieser Lösung, abgekühlt auf –15°C, wurde Butyllithium (339 ml, 0,82 mmol) zugegeben. Die Temperatur wurde 30 Minuten auf –8°C erhöht. Dann wurde das rohe Mesylat aus dem vorhergehenden Schritt (0,33 g, 0,41 mmol), gelöst in entgastem THF (1 ml), tropfenweise zu der Reaktionsmischung zugegeben. Die Mischung wurde über Nacht bei 0°C gerührt. Die Reaktion wurde mit gesättigter NH₄Cl-Lösung (2 ml) gequencht und mit EtOAc (2 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie unter Verwendung von 1:1 Hexan:EtOAc unter Zugabe von 1% AcOH gereinigt, um 138 mg der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,3–0,58 (m, 4H), 0,6–0,96 (m, 5H), 1,10–1,25 (m, 7H), 1,28–1,45 (m, 1H), 1,62 (s, 3H), 1,75–1,90 (m, 1H), 2,09–2,20 (m, 1H), 2,25–2,36 (m, 1H), 2,40–2,52 (m, 2H), 2,60 (s, 2H), 2,65–2,84 (m, 2H), 4,02 (t, 1H), 4,75 (m, 1H), 7,09 (m, 11H), 7,35–7,55 (3H), 7,62 (m, 1H), 7,75–8,05 (m, 4H), 8,35 (d, 1H).
Schritt 8 (R,R oder S)-1-[((1-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-{E}-ethenyl)phenyl]-3-(2-(2-hydroxy-2-propionsäure)phenyl)propyl)thio)methyl)cyclopropanessigsäure
Zu dem Carbinolester von Schritt 7 (138 mg, 0,16 mmol) in EtOH (500 ml) wurde 1N LiOH-Lösung (480 ml, 0,48 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 3 Tage zum Rückfluß erhitzt, mit gesättigter NH₄Cl-Lösung (2 ml) und Essigsäure (30 ml) gequencht und mit EtOAc (2 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie zunächst mit 2/1 CHCl₃/MeOH als Elutionsmittel, dann mit 2/1/0,25 CHCl₃/MeOH/NH₄OH, gereinigt, um 65 mg der Titelverbindung zu ergeben, die durch eine HPLC-Novapak-Säule mit Überwachung bei 350 nm mit 80-20-0,1% McOH-H₂O-AcOH weiter gereinigt wurde, um 11 mg der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,3–0,7 (m, 4H), 1,78 (d, 3H), 2,16–2,72 (m, 7H), 3,05 (t, 1H), 4,02 (t, 1H), 7,02–7,20 (m, 3H), 7,25–7,35 (m, 1H), 7,38–7,58 (m, 4H), 7,62 (t, 1H), 7,78 (d, 1H), 7,80–7,98 (m, 3H), 8,01 (s, 1H), 8,34 (d, 1H).
¹³C-NMR (CD₃COOD₃) d 12,3, 12,3, 17,1, 27,5, 31,8, 39,2, 39,5, 39,6, 50,4, 76,0, 120,7, 125,8, 126,3, 126,2, 126,7, 127,1, 127,5, 128,1, 128,2, 129,0, 129,2, 129,2, 130,0, 131,2, 135,3, 135,8, 137,0, 137,5, 140,9, 141,7, 144,5, 149,1, 157,7, 173,1, 177,4.
HRMS (FAB) m/z berechn. für C₃₅H₃₄ClNO₅S: 616,192448, gefunden 616,19269.
BEISPIEL 3
(R,R oder S)-1-[((1-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-(2-(2-hydroxy-2-propionsäure)phenyl)propyl)thio)methyl]cyclopropanessigsäure
Nebenisomer
Schritt 1 (S,R oder S)-8-Phenylmenthyl-2-(3-[3-(2-(7-chlor-2-chinolyl-(E)-ethenyl)phenyl]-3-methansulfonat)-2-hydroxy-2-phenylpropionat
Zu dem Nebenisomer des Alkoholcarbinolesters von Beispiel 2, Schritt 6, (0,5 g, 0,68 mmol) in 1:1 Toluol/CH₃CN (4,0 ml) wurde Hünig-Base (125 ml, 0,68 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde auf –40°C abgekühlt. Anschließend wurde Methansulfonylchlorid (55 ml, 0,71 mmol) tropfenweise zugegeben. Die Temperatur wurde über einen Zeitraum von 1 Stunde allmählich auf –30°C erhöht. Die Reaktionsmischung wurde durch Zugabe einer gesättigten NaHCO₃-Lösung (3 ml) gequencht und mit EtOAc (3 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft, um die Titelverbindung zu ergeben, die als solche im nächsten Schritt verwendet wurde.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,65–0,98 (m, 9H), 1,0 (s, 3H), 1,25–1,45 (m, 2H), 1,75 (m, 4H), 1,9 (m, 1H), 2,28 (m, 1H), 2,42–2,55 (m, 1H), 2,7–2,85 (m, 2H), 2,95–3,05 (m, 4H), 4,65–4,75 (m, H), 5,80 (t, 1H), 7,05–7,25 (m, 8H), 7,45–7,60 (m, 5H), 7,75–7,82 (d, 1H), 7,83–8,05 (m, 5H), 8,35 (d, 1H).
Zu entgastem THF (1 ml) unter N₂ wurde 1-(Mercaptomethyl)-1-cyclopropanessigsäure (Bioorganic Med. Chem. Letters, 1995, 5(3), 283–288) (99 mg, 0,68 mmol) zugegeben. Zu dieser Lösung, abgekühlt auf –15°C, wurde Butyllithium (542 ml, 1,36 mmol) zugegeben. Die Temperatur wurde 30 Minuten auf –8°C erhöht. Dann wurde das rohe Mesylat aus dem vorhergehenden Schritt (0,55 g, 0,68 mmol), gelöst in entgastem THF (1,6 ml), tropfenweise zu der Reaktionsmischung zugegeben. Die Mischung wurde über Nacht bei 0°C gerührt. Die Reaktion wurde mit gesättigter NH₄Cl-Lösung (2 ml) gequencht und mit EtOAc (2 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie unter Verwendung von 1:1 Hexan:EtOAc gereinigt, wobei 1% AcOH zugegeben wurde, um 200 mg der Titelverbindung zu ergeben.
¹N-NMR (CD₃COOD₃) d 0,3–0,58 (m, 4H), 0,6–0,96 (m, 5H), 1,10–1,25 (m, 7H), 1,28–1,45 (m, 1H), 1,62 (s, 3H), 1,75–1,90 (m, 1H), 2,09–2,20 (m, 1H), 2,25–2,36 (m, 1H), 2,40–2,52 (m, 2H), 2,60 (s, 2H), 2,65–2,84 (m, 2H), 4,02 (t, 1H), 4,75 (m, 1H), 7,09 (m, 11H), 7,35–7,55 (3H), 7,62 (m, 1H), 7,75–8,05 (m, 4H), 8,35 (d, 1H).
Schritt 2 (R,R oder S)-1-[((1-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-(2-(2-hydroxy-2-propionsäure)phenyl)propyl)thio)methyl]cyclopropanessigsäure
Zu dem Carbinolester von Schritt 7 (200 mg, 0,23 mmol) in EtOH (500 ml) wurde 1N LiOH-Lösung (700 ml, 0,70 mmol) zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 3 Tage zum Rückfluß erhitzt, mit gesättigter NH₄Cl-Lösung (2 ml) und Essigsäure (30 ml) gequencht und mit EtOAc (2 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über Na₂SO₄ getrocknet und zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wurde durch Flashchromatographie zunächst mit 2/1 CHCl₃/MeOH als Elutionsmittel, dann mit 2/1/0,25 CHCl₃/MeOH/NH₄OH, gereinigt, um 80 mg der Titelverbindung zu ergeben, die durch eine HPLC-Novapak-Säule mit Überwachung bei 350 nm mit 80-20-0,1% McOH-H₂O-AcOH weiter gereinigt wurde, um 13 mg der Titelverbindung zu ergeben.
¹H-NMR (CD₃COOD₃) d 0,3–0,7 (m, 4H), 1,78 (d, 3H), 2,16–2,72 (m, 8H), 3,05 (t, 1H), 4,02 (t, 1H), 7,02–7,20 (m, 3H), 7,25–7,35 (m, 1H), 7,38–7,58 (m, 4H), 7,62 (t, 1H), 7,78 (d, 1H), 7,80–7,98 (m, 3H), 8,01 (s, 1H), 8,34 (d, 1H).
HRMS (FAB) m/z berechnet für C₃₅H₃₄ClNO₅: 616,192448, gefunden 616,19269.
BEISPIEL 4
Isolierung von 1-[((1-[3-(2-(7-Chlor-2-chinolinyl)-(E)-ethenyl)phenyl]-3-(2-(2-hydroxy-2-propionsäure)phenyl)propyl)thio)methyl]cyclopropanessigsäure aus menschlicher Galle
Gesunden Subjekten wurde, nachdem sie über Nacht nüchtern geblieben waren (3 Subjekte) oder 5 Stunden nach einer fetten Mahlzeit (3 Subjekte), eine einzelne orale Dosis von 50 mg Montelukast-Natrium verabreicht. Die Gallenflüssigkeit wurde durch einen neben der Vaterschen Ampulle plazierten Gastroduodenaltubus 2–8 Stunden oder 8–12 Stunden nach der Dosis gesammelt. Zwei Stunden vor dem Ende des Sammelverfahrens wurde Cholecystokinin-C-Terminal-Octapeptid intravenös verabreicht, um Gallenblasenkontraktionen zu stimulieren und somit den Gallenflüssigkeitsstrom zu fördern. Die Subjekte blieben während des Sammelverfahrens nüchtern. Alle Proben wurden bei –70°C im Dunkeln bis zur Analyse aufbewahrt, und alle Analysen wurden unter Gelblicht durchgeführt.
Die Gallenflüssigkeitsproben wurden direkt nach der Zentrifugation unter Verwendung einer Beckman-C18-Säule (4,6 × 250 mm), die bei 1,1 ml/Minute mit linearen Gradienten von 35% bis 45% Acetonitril in 1 mM Ammoniumacetat, pH 3,5 in 5 Minuten, 45% bis 55% Acetonitril in 35 Minuten, 55% bis 87% Acetonitril in 20 Minuten, 87% bis 95% Acetonitril in 0,3 Minuten eluiert wurde, analysiert. Unter diesen HPLC-Bedingungen eluierte die Titelverbindung bei etwa 53 Minuten als Diastereomerenmischung. Die so erhaltene Titelverbindung wurde mit einer Zorbax-XDB-Eclipse-C8-Säule (4,6 × 250 ml), die mit einem linearen 15-Minuten-Gradienten von 28% Acetonitril und 28% Methanol in Wasser auf 47% Acetonitril und 47% Methanol in Wasser eluiert wurde, erneut gereinigt. Die Retentionszeit der Titelverbindung unter diesen Bedingungen betrug etwa 15 Minuten. Die NMR- und MS-Spektren der neu gereinigten Verbindung stimmten mit den aus einer authentischen Probe der Titelverbindung erhaltenen Spektren überein.

Claims

Eine Verbindung der Formel
und die einzelnen optischen Isomere davon oder ein pharmazeutisch annehmbares Derivat davon.
Eine isolierte und gereinigte Verbindung nach Anspruch 1, die im wesentlichen frei von anderen Stoffwechselprodukten von Montelukast-Natrium ist.
Eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung nach Anspruch 1 und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger enthält.
Die Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Medikaments zur Verhinderung der Wirkungen von Leukotrien bei einem Säugetier.
Die Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung oder Prävention von Asthma, Allergien oder Entzündung bei einem Säugetier.
Ein Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach Anspruch 1, das umfaßt: a) Umsetzung einer Verbindung der Formel 1
wobei R Niederalkyl ist, mit Dimethylsulfoxid und einem Elektrophil, um eine Verbindung der Formel 2 zu ergeben
b) Umsetzung einer Verbindung der Formel 2 mit Silbernitrat und einer Base, um die Verbindung nach Anspruch 1 zu ergeben.
Ein Verfahren zur Herstellung der einzelnen Diastereomere einer Verbindung nach Anspruch 1, das umfaßt: (a) Auftrennen einer diastereomeren Mischung einer Verbindung der Formel 7:
wobei R* 8-Phenylmenthyl ist, (b) Umsetzung eines einzelnen Diastereomeren mit Methansulfonylchlorid, um das entsprechende Mesylat zu ergeben, (c) Umsetzung des Mesylats von Schritt (b) mit dem Dianion von 1-Mercaptomethylcyclopropanessigsäure, um eine Verbindung der Formel 8 zu ergeben:
(d) Entfernen der 8-Phenylmenthylgruppe, um eine Verbindung nach Anspruch 1 zu ergeben.