EA001797B1

EA001797B1 - Хинолиновые антагонисты лейкотриенов

Info

Publication number: EA001797B1
Application number: EA199900824A
Authority: EA
Inventors: Байрон Х. Эрисон; Суреш К. Балани; Томас А. Бэйлли; Клод Дюфресн
Original assignee: Мерк Энд Ко., Инк.; Мерк Фросст Кэнада Энд Ко./Мерк Фросст Канада Э Ко.
Priority date: 1997-03-13
Filing date: 1998-03-10
Publication date: 2001-08-27
Also published as: DE69833429D1; ATE317224T1; WO1998039970A1; PL335604A1; EP0971587B1; TR199902242T2; CA2283101A1; EE9900406A; EP0971587A1; EA199900824A1; EP0971587A4; ID23656A; DE69833429T2; AU6758998A; JP2001514660A; AU726210B2; ES2256933T3; IS5167A; EE03732B1; CA2283101C

Abstract

Соединения формулы (I) являются антагонистами действия лейкотриенов. Эти соединения применяют в качестве противоастматических, противоаллергических, противовоспалительных и цитозащитных (защищающих клетки) агентов. Их также применяют при лечении стенокардии, мозгового спазма, гломерулярного нефрита, гепатита, при наличии в крови эндотоксинов, увеита и при отторжении аллотрансплантата.

Description

Настоящее изобретение относится к производным хинолиновых дикислот, обладающим активностью антагонистов лейкотриенов, к способам их получения, и к способам и фармацевтическим препаратам для использования этих соединений у млекопитающих (особенно для человека).

Благодаря их активности как антагонистов лейкотриенов, соединения настоящего изобретения используются в качестве противоастматических, противоаллергических, противовоспалительных и цитозащитных (защищающих клетки) агентов. Они также используются при лечении ангины, мозгового спазма, гломерулярного нефрита, гепатита, при наличии в крови эндотоксинов, увеита и при отторжении аллотрансплантата.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I:

и к индивидуальным оптическим изомерам этих соединений; или к их фармацевтически приемлемым производным.

В одном варианте это изобретение относится к соединению формулы I, которое выделено и очищено, т.е. к соединению формулы I, которое является, по существу, свободным от других продуктов метаболизма монтелукаста натрия.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу предотвращения действия лейкотриенов у млекопитающих, который включает введение вышеуказанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу предотвращения и лечения астмы, аллергий и воспаления у млекопитающего, который включает введение вышеуказанному млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Еще в другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, которая содержит соединение формулы I и фармацевтически приемлемый носитель.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к способам получения соединения формулы I.

Приведенные в данном описании соединения содержат два асимметрических центра и таким образом могут давать диастереомеры и оптические изомеры. Настоящее изобретение подразумевает включить подобные возможные диастереомеры индивидуально или в виде смеси диастереомеров, а также их рацемические и разделенные, энантиомерно чистые формы и их фармацевтически приемлемые производные.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения содержат соединение формулы I в качестве активного ингредиента или фармацевтически приемлемое его производное и могут также содержать фармацевтически приемлемый носитель и необязательно другие терапевтические ингредиенты. Термин «композиция», как в фармацевтической композиции, предполагает включение продукта, содержащего активный ингредиент (ингредиенты) и инертный ингредиент (ингредиенты), который представляет носитель, а также любой продукт, который является, прямо или косвенно, результатом комбинирования, комплексообразования или агрегации любых двух или более ингредиентов, или результатом диссоциации одного или более ингредиентов, или результатом других типов реакции или взаимодействий одного или более ингредиентов. Таким образом, фармацевтические композиции настоящего изобретения включают любую композицию, приготовленную путем смешивания соединения настоящего изобретения и фармацевтически приемлемого носителя.

Термин «фармацевтически приемлемое производное» относится к любой фармацевтически приемлемой соли, сложному эфиру, простому эфиру, амиду или макромолекулярным пролекарствам или их комбинациям. Изобретение также включает любые другие соединения, которые при введении реципиенту способствуют доставке (прямо или косвенно) соединения этого изобретения.

Фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные из фармацевтически приемлемых нетоксичных неорганических и органических оснований. Соли, полученные из неорганических оснований, включают алюминиевые, аммониевые, кальциевые, медные соли, соли трехвалентного и двухвалентного железа, литиевые, магниевые соли, соли трехвалентного и двухвалентного марганца, калиевые, натриевые, цинковые соли и подобные. Особенно предпочтительными являются аммониевые, кальциевые, магниевые, калиевые и натриевые соли. Соли, полученные из фармацевтически приемлемых органических нетоксичных оснований, включают соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминон, включающих встречающиеся в природе замещенные амины, циклических аминов, и основных ионообменных смол, таких как аргинин, бетаин, кофеин, холин, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, Ν-этилморфолин, Ν-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лизин, метилглюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, дициклогексиламин, полиаминовые смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин, трометамин и тому подобное.

Фармацевтически приемлемые сложные эфиры включают такие, которые образуются из гидроксильных групп соединения формулы I и органической кислоты (или ее ацилирующего эквивалента), такие как ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентапропионат, глюкогептаноат, глицерофосфат, глюконат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, гептаноат, гексаноат, 2гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, оксалат, памоат, пектинат, пикрат, пивалат, сукцинат, тартрат, тозилат, имидазол-1карбоксилат, фенилпропионат, феноксиацетат, пальмитат, лаурат, адамантоат, стеарат, октаноат, циклоалкилкарбоксилат, деканоат, меристилат, фталат, гексаноат, карбамат, аденозин-5'карбоксилат, пивалоилоксиметилат, в замещенных или незамещенных формах и тому подобное; или такие, которые образуются из карбоксильной группы соединения формулы I и спирта, такого как С_| -С₄алканол или других спиртов, общеизвестных специалистам для получения эфирных пролекарств. Фармацевтически приемлемые сложные эфиры также включают такие, которые образуются из соединения формулы I с неорганическими кислотами, такие как, но не ограничиваются этими примерами, сульфаты, фосфаты, карбонаты или конъюгаты соединения формулы I с глютатионом, глюкуроновой кислотой, сахарами (подобно глюкозе) и желчными кислотами (подобно таурину) и т.д.

Фармацевтически приемлемые простые эфиры представляют такие, которые хорошо известны специалисту в данной области, и включают, например, от метилового до пентилового эфиров, циклоалкиловый, метоксиметиловый, 3 '-гидроксипропиловый, бензиловый, аллиловый, анизилиденовый, этоксиэтиледеновый, тетрагидропираниловый, силиловый эфиры.

Фармацевтически приемлемые амиды представляют такие, которые хорошо известны специалисту в данной области, и включают, например, С₁-С₄амиды.

Соединения формулы I могут также использовать в качестве макромолекулярного пролекарства, включающего соединение формулы I, связанное ковалентно или обратимо с моно- или поликлональными антителами, или с другими макромолекулами, такими как поливинил, полиакрил, полисахарид и поли- (αаминокислота) и декстран, растворимый крахмал или с основанными на гидроксиалкилкрахмале эфирными пролекарствами, и инсулином.

Следует понимать, что в обсуждении способов лечения, которое имеет место, отсылки к соединениям формулы I также включают фармацевтически приемлемые производные.

Способность соединений формулы I противодействовать лейкотриенам делает их полезными для предупреждения или отмены симптомов, вызванных лейкотриенами у человека. Этот антагонизм к действию лейкотриенов указывает на то, что соединения и их фармацевтические композиции используются для лечения, предупреждения или уменьшения интенсивности симптомов заболевания у млекопитающих и особенно у человека: 1) легочные нарушения, включающие такие заболевания, как астма, хронический бронхит и родственные обструкции дыхательных путей, 2) аллергии и аллергические реакции, такие как аллергический ринит, контактный дерматит, аллергический конъюктивит и тому подобное, 3) воспаление, такое как артрит или воспалительное кишечное заболевание, 4) боль, 5) кожные нарушения, такие как атопическая экзема и тому подобное, 6) сердечно-сосудистые расстройства, такие как стенокардия, ишемия миокарда, гипертония, агрегация тромбоцитов, и тому подобное, 7) почечная недостаточность, являющаяся результатом ишемии, которая имеет иммунологическую или химическую (циклоспорин) этиологию, 8) мигрень или «гистаминовая» головная боль, 9) состояния глаз, такие как увеит, 10) гепатит, являющийся результатом химических, иммунологических или инфекционных стимулов, 11) травма или шоковые состояния, такие как ожоговые повреждения, наличие в крови эндотоксинов, и тому подобное, 12) отторжение аллотрансплантата, 13) предупреждение побочных эффектов, связанных с терапевтическим введением цитокинов, таких как интерлейкин II и фактор некроза опухолей, 14) хронические легочные заболевания, такие как муковисцидоз, бронхит и другие заболевания верхних и нижних дыхательных путей, и 15) холецистит.

Таким образом, соединения настоящего изобретения могут также использоваться для лечения или предупреждения болезненных состояний у млекопитающих (особенно у человека), таких как эрозивный гастрит; эрозивный эзофагит; диарея; мозговой спазм; преждевременные роды; спонтанный аборт; дисменорея; ишемия, вызванные агентом пагубные поражения или некроз тканей печени, поджелудочной железы, почек или миокарда; поражение паренхимы печени, вызванное гепатотоксичными агентами, такими как СС1₄ и Ό-галактозамин; ишемическая почечная недостаточность; вызванное заболеванием поражение печени; поражение поджелудочной железы или желудка, вызванное желчной солью; вызванное травмой или стрессом клеточное нарушение; и вызванная глицерином почечная недостаточность. Соединения также проявляют цитозащитное действие.

Цитозащитную активность соединения можно наблюдать как у животных, так и у человека с помощью замеченной повышенной резистентности слизистой оболочки желудочнокишечного тракта к вредному воздействию сильных раздражителей, например, действию вызывающих язву аспирина и индометацина. В дополнение к снижению действия нестероидных противовоспалительных средств на желудочнокишечный тракт, исследования на животных показывают, что цитозащитные соединения предупреждают повреждения желудка, вызванные оральным введением сильных кислот, сильных оснований, этанола, гипертонических солевых растворов и тому подобное.

Используют два анализа для измерения цитозащитного эффекта. Этими анализами являются; (А) исследование нарушения, вызванного этанолом и (В) исследование язвы, вызванной индометацином, и они описаны в Европейском патенте ЕР 140684.

Диапазоны доз

Величина профилактической или терапевтической дозы соединения формулы I будет, конечно, изменяться в зависимости от природы тяжести состояния, которое подвергается лечению, от индивидуального соединения формулы I и от способа его введения. Она также будет изменяться в зависимости от возраста, веса и ответа индивидуального больного. Обычно суточный диапазон доз при использовании как противоастматических, противоаллергических и противовоспалительных средств, отличном от использования как цитозащитных средств, лежит в пределах диапазона от около 0,001 мг до около 100 мг на кг веса тела млекопитающего животного, предпочтительно от 0,01 мг до около 10 мг на кг, и самое предпочтительное от 0,1 до 1 мг на кг, в виде единичной или разделенной доз. С другой стороны, в некоторых случаях может быть необходимым использование дозировок, выходящих за пределы.

При использовании композиции для внутривенного введения подходящий диапазон доз для оказания противоастматического, противовоспалительного или противоаллергического действия составляет от около 0,001 мг до около 25 мг (предпочтительно от 0,01 мг до около 1 мг) соединения формулы I на кг веса тела в день и для цитозащитного применения от около 0,1 мг до около 100 мг [предпочтительно от около 1 мг до около 100 мг и более предпочтительнее от около 1 мг до около 10 мг) соединения формулы I на кг веса тела в день.

В случае применения оральной композиции для противоастматического, противовоспалительного или противоаллергического действия подходящий диапазон доз составляет от около 0,01 мг до 100 мг соединения формулы I на кг веса тела в день, предпочтительно от около 0,1 мг до около 10 мг на кг и для цитозащитного действия от 0,1 мг до около 100 мг (предпочтительно от около 1 мг до около 100 мг и более предпочтительно от около 10 мг до около 100 мг) соединения формулы I на кг веса тела в день.

При лечении заболеваний глаза могут быть использованы глазные препараты для введения в глаз, содержащие 0,001-1% по весу растворы или суспензии соединений формулы I в подходящей глазной композиции.

Точное количество соединения формулы 1, которое используется как цитозащитный агент, будет зависеть, между прочим, от того, вводится ли оно для заживления поврежденных клеток или во избежание будущего нарушения, от природы поврежденных клеток (например, желудочно-кишечные язвы в сравнении с нефротическим некрозом) и от природы вызывающего болезнь агента. Примером использования соединения формулы I для избежания будущего нарушения должно быть совместное введение соединения формулы I с Ν3ΑΓΌ, которое может в противном случае вызвать подобное нарушение (например, индометацин). При таком использовании соединение формулы I вводится от 30 мин раньше введения Ν3ΑΓΌ вплоть до 30 мин после введения ΝδΑΓΌ. Предпочтительно оно вводится раньше или одновременно с ΝδΑΓΌ (например, в комбинированной дозовой форме).

Фармацевтические композиции

Любой подходящий способ введения может быть применен для обеспечения млекопитающего, особенно человека, эффективной дозой соединения настоящего изобретения. Например, можно использовать оральный, ректальный, местный, парентеральный, глазной, легочный, носовой способы введения и тому подобное. Лекарственные формы включают таблетки, пастилки, дисперсии, суспензии, растворы, капсулы, кремы, мази, аэрозоли, кожные пластыри (повязки), системы, способствующие секреции, и тому подобное.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения содержат соединение формулы I в качестве активного ингредиента или фармацевтически приемлемое его производное, и могут также содержать фармацевтически приемлемый носитель и необязательно другие терапевтические ингредиенты.

Композиции включают композиции, пригодные для орального, ректального, местного, парентерального (включая подкожное, внутримышечное и внутривенное) или носовое введение, хотя самый подходящий путь введения в любом данном случае будет зависеть от природы и тяжести состояний, которые подвергаются лечению, и от природы активного ингредиента. Они могут быть представлены подходящим образом в стандартной лекарственной форме и приготовлены любым из способов, хорошо известных в области фармации.

Для введения путем ингаляции соединения настоящего изобретения подходящим образом доставляются в форме распрыскивающего аэрозоля из герметичных, находящихся под давлением упаковок или ингаляторов. Соединения могут также быть доставлены в виде порошков, которые могут быть представлены композицией, и порошковую композицию можно вдыхать с помощью вдувания через порошковый ингалятор. Предпочтительная система доставки при ингаляции представляет обмеренную ингаляционную дозу (ΜΌΙ) аэрозоля, который может быть представлен в виде суспензии или раствора соединения формулы I в подходящих метательных средствах (пропеллантах), таких как фторуглероды и углеводороды.

Подходящие местные композиции соединения формулы I включают трансдермальные приспособления, аэрозоли, кремы, мази, лосьоны, присыпающие порошки и тому подобное.

На практике соединения формулы I могут быть скомбинированы как активный ингредиент в однородной смеси с фармацевтическим носителем согласно обычной фармацевтической технике приготовления лекарственных средств. Носитель может быть представлен широким разнообразием форм в зависимости от формы препарата, требуемой для введения, например оральной или парентеральной (включая внутривенную). При приготовлении композиций для оральной дозированной формы может быть использована любая из обычных фармацевтических сред, таких как, например, вода, гликоли, масла, спирты, ароматизаторы, консерванты, красители и тому подобное в случае оральных жидких препаратов, таких как, например, суспензий, эликсиров и растворов; или носители, такие как крахмалы, сахара, микрокристаллическая целлюлоза, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, связывающие вещества, дезинтегрирующие агенты и тому подобное в случае оральных твердых препаратов, таких как, например, порошки, капсулы и таблетки, причем твердые оральные препараты предпочтительнее по сравнению с жидкими препаратами. Вследствие легкости их введения таблетки и капсулы представляют самую благоприятную оральную дозированную единичную форму, в случае которой используются твердые фармацевтические носители. Если желательно, то таблетки могут быть покрыты оболочкой посредством стандартного водного и неводного метода.

Кроме обычных, перечисленных выше дозированных форм, соединения формулы I могут быть введены с помощью устройств, контролирующих введение доз и/или приспособлений доставки, таких как описаны в патентах США N05. 3845770; 3916899; 3536809; 3598123; 3630200 и 4008719, раскрытие которых представлено в данном описании в качестве ссылок.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения, пригодные для орального введения, могут быть представлены в виде раздельных единиц, таких как капсулы, крахмальные облатки или таблетки, каждая содержащая предопределенное количество активного ингредиента, в виде порошка или гранул или в виде раствора или суспензии в водной жидкости, неводной жидкости, эмульсии масла в воде или эмульсии воды в масляной жидкости. Подобные композиции могут быть получены посредством любого из способов в фармацевтическом деле, но все способы включают стадию введения в комбинацию активного ингредиента с носителем, которая составляет один или более необходимых ингредиентов. Обычно композиции приготавливаются путем равномерного и однородного смешивания активного ингредиента с жидкими носителями или тонко раздробленными твердыми носителями или с обоими и затем, если необходимо, продукту придают форму в желаемом виде. Например, таблетка может быть приготовлена путем прессования или формования, необязательно с одним или более дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть приготовлены путем компрессии в соответствующем аппарате активного ингредиента в непылящей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем, поверхностноактивным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть приготовлены путем формования в соответствующем аппарате, смесь порошкообразного соединения увлажняют инертным жидким разбавителем. Желательно, когда каждая таблетка содержит от около 1 мг до около 500 мг активного ингредиента и каждая крахмальная облатка или капсула со держит от около 1 до около 500 мг активного ингредиента.

Следующие примеры характерных фармацевтических лекарственных форм для соединений формулы I представлены ниже:

Инъецируемая суспензия (Ι.Μ.) мг/ мл Соединение формулы I10

Метилцеллюлоза5,0

Твин 800,5

Бензиловый спирт9,0

Бензалконийхлорид1,0

Вода для инъекции до общего объема 1 мл

Таблетка

Соединение формулы I

Микрокристаллическая целлюлоза

Повидон предварительно Желатинированный крахмал Стеарат магния

Капсула

Соединение формулы I

Лактозный порошок

Стеарат магния

Аэрозоль

Соединение формулы I

Лецитин, ΝΕ жидкий концентрат

Трихлорметан, ΝΕ

Дихлордифторметан, ΝΕ мг на таблетку

415

14,0

43,5

2,5/500 мг на капсулу

573,5

1,5/600 на канистру мг

1,2 мг 4,025 г

12,15 г

Комбинации с другими лекарственными препаратами

Кроме соединений формулы I фармацевтические композиции настоящего изобретения могут также содержать другие активные ингредиенты, такие как ингибиторы циклооксигеназы, нестероидные противовоспалительные средства фФАЮф. периферические анальгезирующие агенты, такие как зомепирак, дифлунизал и тому подобное. Весовое отношение соединения формулы I ко второму активному ингредиенту может изменяться и зависеть от эффективной дозы каждого ингредиента. Обычно используется эффективная доза каждого ингредиента. Таким образом, например, когда соединение формулы I комбинируют с ΝΞΑ^, весовое отношение соединения формулы I к Ν8ΑΣΟ обычно находится в области от около 1000:1 до около 1:1000, предпочтительно от около 200:1 до около 1:200. Комбинации соединения формулы I и других активных ингредиентов обычно находятся также в пределах вышеупомянутой области, но в каждом случае должна быть использована эффективная доза каждого активного ингредиента. ΝδΑΣΟδ можно подразделить на пять групп:

(1) производные пропионовой кислоты;

(2) производные уксусной кислоты;

(3) производные фенамовой кислоты;

(4) оксикамы; и (5) производные бифенилкарбоновой кислоты, или фармацевтически приемлемые их соли.

Производные пропионовой кислоты, которые могут быть использованы, включают: алминопрофен, беноксапрофен, буклоксовую кислоту (3 -хлор-4-циклогексил-а-оксобензолбутановая к-та), карпрофен, фенбуфен, фенопрофен, флупрофен, флурбинрофен, ибупрофен, индопрофен, кетопрофен, миропрофен, напроксен, оксапрозин, пирпрофен, пранопрофен, супрофен, тиапрофеновая кислота и тиоксапрофен. Структурно родственные производные пропионовой кислоты, имеющие подобные анальгезирующие и противовоспалительные свойства, также предполагается включить в эту группу.

Таким образом, «производные пропионовой кислоты», как определено в описании, являются ненаркотическими анальгезирующими/нестероидными противовоспалительными средствами, имеющими свободную -СН(СН₃)СООН или -СН₂СН₂СООН группу (которая необязательно может быть в форме фармацевтически приемлемой соли, например, -СН(СН₃)СОО^-№⁺ или -СН₂СН₂СОО^-№⁴, типичным образом присоединенную прямо или посредством карбонильной функции к кольцу, предпочтительно к ароматическому кольцу.

Производные уксусной кислоты, которые могут быть использованы, включают: индометацин, который является предпочтительным ΝΈΑ^ ацеметацин, алклофенак, клиданак, диклофенак, фенклофенак, фенклозановую кислоту, фентиазак, фурофенак, ибуфенак, изоксепак, окспинак, сулиндак, тиопинак, толметин, зидометацин и зомепирак. Структурно родственные производные уксусной кислоты, имеющие подобные анальгезирующие и противовоспалительные свойства, также предполагается включить в эту группу.

Таким образом, «производные уксусной кислоты», как определено в описании, являются ненаркотическими анальгезирующими/нестероидными противовоспалительными средствами, имеющими свободную группу (которая необязательно может быть в форме группы фармацевтически приемлемой соли, например, -СН₂СОО№1'ф типичным образом присоединенную прямо к кольцу, предпочтительно к ароматическому или гетероароматическому кольцу.

Производные фенамовой кислоты, которые могут быть использованы, включают: флуфенамовую кислоту, меклофенамовую кислоту, мефенамовую кислоту, нифлумовую кислоту и толфенамовую кислоту. Структурно родственные производные фенамовой кислоты, имеющие подобные анальгезирующие и противовоспалительные свойства, также предполагается включить в эту группу.

Таким образом, «производные фенамовой кислоты», как определено в описании, являются ненаркотическими анальгезирующими/нестероидными противовоспалительньми средствами, которые содержат основную структуру:

которая может иметь множество заместителей и в которой свободная -СООН группа может быть в форме фармацевтически приемлемой соли, например -СОО'Ка⁺.

Производные бифенилкарбоновой кислоты, которые могут быть использованы, включают: дифлунизал и флуфенизал.

Структурно родственные производные бифенилкарбоновой кислоты, имеющие подобные анальгезирующие и противовоспалительные свойства, также предполагается включить в эту группу.

Таким образом, «производные бифенилкарбоновой кислоты», как определено в описании, являются ненаркотическими анальгезирующими/нестероидными противовоспалительными средствами, которые содержат основную структуру:

которая может иметь множество заместителей и в которой свободная -СООН группа может быть в форме фармацевтически приемлемой соли, например -СОО^-Ка⁺.

Оксикамы, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, включают: изоксикам, пироксикам, судоксикам и теноксикам. Структурно родственные оксикамы, имеющие подобные анальгезирующие и противовоспалительные свойства, также предполагается включить в эту группу.

Таким образом,«оксикамы», как определено в описании, являются ненаркотическими анальгезирующими/нестероидными противовоспалительными средствами, которые имеют общую формулу:

он о

где К представляет арильное или гетероарильное кольцо.

Следующие Ν8ΑΙΌ8 также можно использовать: амфенак натрия, аминопрофен, анитразафен, антрафенин, ауранофин, бендазак лизинат, бензиданин, бепрозин, броперамол, буфезолак, кинметацин, кипроквазон, клоксимат, дазидамин, дебоксамет, делметацин, детомидин, дексиндопрофен, диацереин, дифисаламин, дифенпирамид, эморфазон, энфенамовую этофенамат, фанетизолмезилат, фенклорак, фендозал, фенфлумизол, фепразон, флоктафенин, флуниксин, флуноксапрофен, флупроквазон, фопиртолин, фосфосал, фурклопрофен, глюкаметацин, гуаимесал, ибупроксам, изофезолак, изониксим, изопрофен, изоксикам, лефетамин солянокислый, лефлуномид, лофемизол, лоназолак кальция, лотифазол, локсопрофен, лизин клониксинат, меклофенамат натрия, месеклазон, набуме тон, никтиндол, нимесулид, орпаноксин, оксаметацин, оксападол, перисоксал цитрат, пимепрофен, пиметацин, пипроксен, пиразолак, пирфенидон, проглюметацин малеат, проквазон, пиридоксипрофен, судоксикам, талметацин, талнифлумат, теноксикам, тиазолинобутазон, тиелавин В, тиарамид солянокислый, тифламизол, тимегадин, толпадол, триптамид и уфенамат.

Следующие Ν8ΑΙΌ8, обозначенные кодовыми номерами компаний (см. например, РЕагтарго|’ес18), могут также быть использованы: 4801568, АА861, ΑΌ1590, ЛЕР802, ЛЕР860, ΑΙ77Β, АР504, ЛИ8001, ВРРС, В\\'540С, СН1^ΙΝ 127, СХ100, ЕВ382, ЕБ508, Е1044, ОУ3658, ΙΤΕ182, КСУТЕ16090, КМЕ4, БЛ2851, МК714, МК897, ΜΥ309, ОХО3144, РК823, РУ102, РУ108, К830, К82131, 8СК152, 8Н440, 8ΙΚ133, 8РЛ8510, 8^27239, 8Τ281, 8Υ6001, ТА60, ΤΑΙ-901 (4-бензоил-1 -инданкарбоновая кислота), ТУХ2706, И60257, ϋΒ2301 и \Υ41770.

Наконец, Ν8ΑΙΌ8, которые могут быть использованы, включают салицилаты, особенно ацетилсалициловую кислоту и фенилбутазоны и их фармацевтически приемлемые соли.

Кроме индометацина другими предпочтительными Ν8ΑΙΌδ являются ацетилсалициловая кислота, диклофенак, фенбуфен, фенопрофен, флурбипрофен, ибупрофен, кетопрофен, напроксен, фенилбутазон, пироксикам, сулиндак и толметин.

Фармацевтические композиции, включающие соединения формулы Ι, также могут содержать ингибиторы биосинтеза лейкотриенов, такие, которые описаны в Европейском патенте ЕР 138481 (24 апреля 1985 г.), ЕР 115394 (8 августа 1984 г.), ЕР 136893 (10 апреля 1985 г.) и ЕР 140709 (8 мая 1985 г.), на которые ссылаются в данном описании.

Соединения формулы Ι могут также быть использованы в комбинации с антагонистами лейкотриенов, такими, которые описаны в Европейском патенте ЕР 106565 (25 апреля 1984 г.) и ЕР 104885 (4 апреля 1984 г.), на которые ссылаются в данном описании, и другие известные в данной области, такие, которые описаны в заявке на Европейский патент Νοδ. 56172 (21 июля 1982 г.) и 61800 (10 июня 1982 г.); и в описании патента Великобритании Νο. 2058785 (15 апреля 1981 г.), на которые ссылаются в данном описании.

Фармацевтические композиции, включающие соединения формулы Ι, также содержат в качестве второго активного ингредиента антагонисты простагландинов, такие, которые описаны в Европейском патенте ЕР 11067 (28 мая 1980 г.) или антагонисты тромбоксана, такие, которые описаны в патенте США 4237160. Они также могут содержать ингибиторы гистидин декарбоксилазы, такие как α-фторметилгистидин, описанный в патенте США 4325961.

Соединения формулы I также можно успешно комбинировать с антагонистом Н₁- или 42рецептора, таким как, например, ацетамазол, аминотиадиазолы, описанные в Европейском патенте ЕР 40696 (2 декабря 1981 г.), бенадрил, циметидин, фамотидин, фрамамин, гистадил, фенерган, ранитидин, терфенадин, лоратадин и подобные соединения, которые описаны в патентах США Νοδ. 4283408; 4362736 и 4394508. Фармацевтические композиции также могут содержать ингибитор К⁺/Н⁺ АТФазы, например, омепразол, описанный в патенте США 4255431 и тому подобное. Соединения формулы I также можно благоприятно комбинировать с агентами, стабилизирующими тучные клетки, такими как 1,3-бис(2-карбоксихромон-5-илокси)-2-гидроксипропан и родственными соединениями, описанными в описаниях патентов Великобритании 1144905 и 1144906. Другая фармацевтическая композиция содержит соединения формулы I в комбинации с антагонистами серотонина, такими как метисергин, антагонистами серотонина, описанными в Ыа1иге, 316, 126-131 11985), и тому подобное. Каждая из ссылок, упомянутая в этом разделе, включена в данное описание.

Другие фармацевтические композиции включают соединения формулы I в комбинации с антихолинэргическими реагентами, такими как ипратропий бромид, бронходиляторами, такими как бета агонист сальбутамол, метапротеренол, тербуталин, фенотерол и тому подобное, и противоастматическими средствами теофиллином, теофиллинатом холина и энпрофиллином, антагонистами кальция нифедипином, дилтиаземом, нитрендипином, верацамилом, нимодипином, фелодипином и т.д. и кортикостероидами гидрокортизоном, метилпреднизолоном, бетаметазоном, дексаметазоном, беклометазоном и тому подобное.

Способы получения

Соединения формулы I являются желчными метаболитами монтелукаста натрия. Поэтому они могут быть выделены и очищены из желчи индивидуумов, которые принимают монтелукаст натрия, с использованием методов, которые хорошо известны в данной области, таких как хроматография.

В сравнении с этим соединения настоящего изобретения могут быть получены согласно следующим химическим способам, описанным в схемах 1 и 2.

В схеме 1 диоловый эфир окисляют до соответствующего альдегида 2, используя окислитель, например, диметилсульфоксид и электрофил, такой как оксалилхлорид. Реакцию проводят в инертном органическом растворителе, таком как метиленхлорид, и при температуре ниже 0°С, например, при около -60°С. Диол 1 является известным соединением и может быть получен согласно способу, описанному в Е Огд. СЬет., 1996, 61:8518-8525.

Дальнейшее окисление альдегида 2 до дикислоты I выполняют с нитратом серебра и основанием, таким как гидроокись калия. Окисление проводят при комнатной температуре в этаноле.

1. МеМдВг

2. - ΡΘ е ---------------------------·.

Схема 2 (продолжение)

- ГТЛ Г'^РОх°^н разделенные главный и минорный изомеры

1, МзС1 ν“7

2. Н5~ЗС/С°2^Н, пВи1Э

окисляют диоксидом селена с получением соответствующего α-кетоальдегида 4. Защитой для гидроксильной группы может быть, например, третбутилдиметилсилильная группа. Гидроксикетон 3 может быть получен согласно способу, описанному в Е Огд. Сйеш., 1993, 58:3731-3735.

α-Кетоальдегид 4 окисляют до соответствующей α-кетокарбоновой кислоты 5, из которой затем получают ее производное 8фенилментоловый эфир 6. Обработка 6 бромме тилмагнием с последующим снятием защиты приводит к диоловому эфиру 7 как диастереомерной смеси. С помощью хроматографии смесь разделяют на индивидуальные диастереомеры. Каждый диастереомер используют раздельно, чтобы получить индивидуальные диастереомеры формулы I.

Таким образом, вторичную гидроксильную группу 7 мезилируют и получают производное, которое затем взаимодействует с дианионом 1меркаптометилциклопропануксусной кислотой, реагирующей ΐπ зйи с н-бутиллитием, с получением эфира 8. Гидролиз 8 основанием, таким как гидроокись лития, приводит к желаемой двухосновной кислоте формулы I.

Методы определения биологической активности

Свойства соединений настоящего изобретения как антагонистов лейкотриенов оценива ют с использованием следующих методов:

1. [³Η]ΕΤΌ₄ рецептор связывающий анализ в ΌΜδΟ-дифференцириванных И937 клетках (моноцитарная линия клеток человека);

2. [³Н]ЬТБ₄ рецепторное связывание на легочных мембранах морской свинки;

3. [³Н]ЬТБ₄ рецепторное связывание на легочных мембранах человека;

4. νΐΐΓΟ трахея морской свинки; и

5. Τη νίνο анализы в наркотизированных морских свинках.

Вышеуказанные методы описаны Т.КЛопез е! а1., Сап. Е Рйуыо1. Рйагтасо1. 1991, 69, 18471854.

Испытание на крысах с астмой

Крыс получают из инбредной линии крыс с астмой. Используют как самок (190-250 г), так и самцов (260-400 г).

Яичный альбумин (ЕА), степень чистоты дгабе V, кристаллический и лиофилизированный, получают от 81§ша Сйеш1са1 Со., ЗЕЬошз. Гидроокись алюминия получают от Ке§18 Сйеш1са1 Сошрапу, СЫсадо. Метисергид бималеат предоставлен 8апбо/ I ЛЕ, Вазе1.

Провокацию и последующие регистрации дыхания выполняют в прозрачном пластиковом боксе с внутренними размерами 10х6х4 дюйма. Крышка бокса является съемной; при использовании ее крепко удерживают на месте с помощью четырех зажимов, а воздухонепроницаемый затвор поддерживают с помощью мягкойрезиновой прокладки. Через центр каждого края камеры ^еV^1Ь^88 вводят распылитель (Ыо. 40) посредством воздухонепроницаемого затвора и каждый край бокса также имеет выпускное отверстие. Пневмотахограф ГЫзсЬ Ыо. 0000 вводят в один край бокса и соединяют с Сгазз датчиком объемного давления (РТ5-А), который затем соединяют с усилителем Вихсо Е1ес!готс8 (Вихсо Е1ес!готс8 Ес., 8кагоп, Сопп.). Усилитель соединяют с динографом Весктап Туре К и с компьютером Вихсо, состоящим из волнового анализатора 1ЕПа ЛсдиЕШоп Боддег, со специальной слабой волной. Во время впрыскивания антигена выпускные отверстия открывают и пневмотахограф изолируют из камеры. Выпускные отверстия закрывают и пневмотахограф и камеру соединяют во время регистрации картины дыхания. Для провокации 2 мл 3%-ного раствора антигена в солевом растворе помещают в каждый распылитель и аэрозоль производится с воздухом из маленького мембранного насоса Ройег, действующего при 10 пси и скорости 8 л в мин.

Крыс сенсибилизируют путем инъекции (подкожно) 1 мл суспензии, содержащей 1 мг ЕА и 200 мг гидроокиси алюминия в солевом растворе. Их используют между 12 и 24 днями после сенсибилизации. Для того, чтобы исключить серотониновый компонент ответа, крысам предварительно вводят внутривенно за 5 мин до аэрозольной провокации 3 мг/мл метисергида, крыс затем выдерживают в атмосфере аэрозоля из 3% ЕА в солевом растворе в течение 1 мин точно, затем профили их дыхания записывают в течение дальнейших 30 мин. Продолжительность постоянной одышки измеряют с помощью компьютера Вихсо.

Соединения обычно вводят либо орально за 2-4 ч до провокации либо внутривенно за 2 мин до провокации. Их либо растворяют в солевом растворе либо в 1 %-ном метоцеле или суспендируют в 1 %-ном метоцеле. Вводимый объем составляет 1 мл/кг (внутривенно) или 10 мл/кг (орально). До оральной обработки крыс не кормят в течение ночи. Активность соединений определяют, исходя из их способности снижать продолжительность вызванной антигеном одышки по сравнению с контрольной группой, обработанной носителем. Обычно соединения оценивают при использовании серии доз и определяют ΕΌ₅₀. Активность выражается как доза (мг/кг), которая ингибирует продолжительность симптомов на 50%.

Функционирование легких у обученных чувствительных беличьих обезьян

Процедура испытания включает помещение обученных беличьих обезьян на стулья в камеры, которые обрабатывают аэрозолем. Для контрольных тестов оценку функционирования легких путем измерения дыхательных параметров производят в течение периода, составляющего около 30 мин, чтобы установить для каждой обезьяны нормальные контрольные величины в течение этого дня. Для орального введения соединения растворяют или суспендируют в 1%-ном растворе метоцела (метилцеллюлозы, 65НС, 400 срк) и дают в объеме 1 мл/кг веса тела. Для аэрозольного введения соединений используют ультразвуковой распылитель ЭсУПЫкк. Периоды предварительной обработки варьируют от 5 мин до 4 ч до того, как обезьян провоцируют аэрозольными дозами либо лейкотриена И₄ (ЬТО₄) либо антигена Аксапк киит, разведение 1:25.

После провокации каждая минута приводит к информации, которая просчитывается с помощью компьютера как процент отклонения от контрольных величин для каждого дыхательного параметра, включая резистентность дыхательных путей (КД и динамическую расслабленность (С_буп). Результаты от каждого испытуемого соединения получают последовательно в течение минимального периода 60 мин после провокации, которые затем сравнивают с ранее полученными контрольными величинами для этой обезьяны. Кроме того полные величины в течение 60 мин после провокации для каждой обезьяны (величины базовой линии и полученные в результате испытаний) усредняют отдельно и используют для расчета полного процента ингибирования реакции от ЬТП₄ или антигена Аксапк киит с помощью испытуемых соединений. Для статистики используют спаренный (двойной) ΐ-тест. (Ссылки: МсРаг1апе, С.8. е! а1., Рго51ад1апбш5. 28, 173-182 (1984) апб МсРаг1апе, С.8. е!. а1., АдегИк Асбопк, 22, 63-68 (1987).

Предотвращение вызванного бронхостеноза у овцы с аллергией

А. Объяснение: Определенная овца с аллергией с известной чувствительностью к специфическому антигену (Аксапк киит) реагирует на ингаляционную провокацию острой и замедленной реакцией бронхов. Время течения как острой, так и замедленной реакции бронхов приближается ко времени течения, наблюдаемого у астматиков, и фармакологическая модификация обеих реакций является подобной той, которая обнаружена у человека. Действие антигена у этих овец в значительной степени наблюдают в верхних путях и его удобно измерять как изменение легочной резистентности или специфической легочной резистентности.

В. Методы. Животный материал.

Используют взрослых овец со средним весом 35 кг (диапазон от 18 до 50 кг). Все используемые животные соответствуют 2 критериям: а) они имеют природную кожную реакцию при разбавлении 1:1000 или 1:10000 экстракта Аксапк киит (Стеет Ихадпокбск, Ьепо18, ИС); и Ь) они ранее реагировали на ингаляционную провокацию с Аксапк киит как острым бронхостенозом, так и замедленной бронхиальной непроходимостью (А.М.АЬгабат е! а1., Ат. Кеу. Кекр. Όίκ., 128, 839-44 (1983)).

Измерение функционирования дыхательных путей: Овец, на которых не воздействовали седативными средствами, удерживают в распростертом положении с неподвижными головами. После местной анестезии носовых проходов с 2%-ным раствором лизокаина баллонный катетер продвигают вперед через одну ноздрю в нижний отдел пищевода. Затем животным через другую ноздрю вводят эндотрахеальную трубку, используя гибкий волоконно-оптический бронхоскоп в качестве зонда. Определяют плевральное давление с помощью пищеводного баллонного катетера (заполненного 1 мл воздуха), который располагают так, что в результате вдоха наблюдают зубец (смещение) отрицательного давления с четко заметными кардиогенными колебаниями. Латеральное давление в трахее измеряют с помощью катетера с боковым отверстием (внутренний размер 2,5 мм), продвигаемого вперед и располагаемого периферически к верхушке (наконечнику) носотрахеальной трубки. Общее легочное давление, разницу между трахеальным давлением и плевральным давлением, измеряют с помощью дифференциального датчика давления (ΌΡ45; Уаббупе Согр., Иоббпбде, СА). Для измерения легочной резистентности (КД максимальный конец носотрахеальной трубки соединяют с пневмотахографом (Р1е1ксб, Иупа 8с1епсек, В1ие Ве11, РА). Сигналы потока и общего легочного давления регистрируют на осциллоскопе (Мобе1 ЭК-12; Е1есбошск Тот Мебюше, Аббе Р1а1И8, ΝΥ), который связан с компьютером ΡΌΡ-11 И1дйа1 (П1дба1 Ес.|шртеп1 Согр., Маупагб, МА) для расчета на линейном участке К_ъ, исходя из общего легочного давления, дыхательного объема, полученного путем интеграции, и потока. Анализ 10-15 вздохов применяют для определения К_ъ. Грудной объем газа (УД измеряют в плетизмографе для регистрации изменений объема всего тела, чтобы получить специфическую легочную резистентность (8К_Ъ=К_Ь-УД.

Аэрозольная система доставки

Аэрозоли из экстракта Аксапк киит (1:20) получают, используя находящийся в распоря жении медицинский распылитель (Катбтор®. Ритйап Веппе11). который производит аэрозоль со средним аэродинамическим диаметром по большей части 6.2 мМ (геометрическое стандартное отклонение, 2.1). как определяют с помощью анализатора электрических величин (Мо6е1 3030; Т11сгша1 8у81ет8. 81.Раи1. ΜΝ). Продукт из распылителя направляют на пластиковый 1-участок, один конец которого прикрепляют к носотрахеальной трубке, а другой конец которого соединяют с дыхательной частью респиратора Натуатб. Аэрозоль доставляют при приливно-отливном объеме 500 мл при скорости 20 в мин. Таким образом, каждая овца получает эквивалентную дозу антигена как в плацебо, так и в лекарственной пробе.

Протокол эксперимента

До измерения базовой линии 8Р_Ь после антигенной провокации вливание испытуемого соединения начинают за 1 ч до провокации, измерения 8К_Ъ повторяют и затем овцу подвергают ингаляционной провокации с антигеном А8сагЬ 8иит. Измерения 8К_Ъ производят немедленно после антигенной провокации и при 1. 2. 3. 4. 5. 6. 6.5. 7. 7.5 и 8 ч после антигенной провокации. Плацебо и лекарственные тесты разделяют, по крайней мере, 14 дней. При дальнейшем изучении овце дают дозу испытуемого соединения в пищевом комке с последующим вливанием испытуемого соединения за 0.5-1 ч до Аксатщ провокации и в течение 8 ч после А8сап8. как описано выше.

Статистический анализ

Используют Кги8ка1-Ма1118 однонаправленный ΑΝΟνΑ тест, чтобы сравнить острую немедленную реакцию к антигену и максимум замедленной реакции у контрольных и принимающих лекарство животных.

Изобретение теперь иллюстрируют следующими неограничивающими примерами, в которых если не указано особо (ί) все операции выполняют при комнатной температуре или при температуре окружающей среды, т.е. при температуре в области 18-25°С;

(й) упаривание растворителя выполняют с использованием роторного испарителя при пониженном давлении (600-4000 паскалей; 4.5-30 мм Нс.|) с температурой в бане до 60°С;

(ϊϊϊ) за ходом реакции следят с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) и время реакции дается только для иллюстрации;

(ίν) точки плавления не поправлены и '6' означает разложение; данные точки плавления получены для материалов. приготовленных как описано; полиморфизм может приводить к выделению материалов с различными точками плавления в некоторых препаратах;

(ν) структуру и чистоту всех конечных продуктов подтверждают, по крайней мере, одним из следующих методов: ТСХ. массспектрометрией, спектрометрией ядерного маг нитного резонанса (ЯМР) или микроаналитическими данными;

(νί) выходы даны для иллюстрации только;

(νίί) когда указаны, данные ЯМР находятся в форме дельта (6) величин для главных диагностических протонов, даны в частях на миллион (ррт) относительно тетраметилсилана (ТМС) как внутреннего стандарта, определенных при 300 мегагерц или 400 мегагерц, используя указанный растворитель; принятая аббревиатура, используемая для формы сигнала, является: 8. синглет; 6. дублет; 1. триплет; т. мультиплет; Ьг. широкий; и т.д.; в дополнение «Аг» означает ароматический сигнал;

(νίίί) химические символы имеют их обычные обозначения;

следующая аббревиатура также используется: об. (объем), вес (вес), т. к. (точка кипения), т.пл. (точка плавления), л (литр(ы)). мл (миллилитры). г (грамм(ы)). мг (миллиграммы(ы)). мол (моли), ммол (миллимоли). экв. (эквивалент(ы)).

Пример 1. (К. К или 3)-1-[((1-[3-(2-(7-хлор-2хинолинил)-(Е)-этенил)фенил]-3-(2-(1-гидрокси-1карбоксиэтил)фенил)пропилтио)метил]циклопропануксусная кислота.

Диастереомерная смесь

Стадия 1. Метил (К. К или 8)-1[((1-[3-(2(7-хлор-2-хинолинил)-(Е)-этенил)фенил]-3-(2(1 -гидрокси-1 -карбонилэтил)фенил)-пропил)тио)метил] циклопропанацетат.

К смеси оксалилхлорида (0.45 ммоль, 4.3 мл) в СН₂С1₂; (200 мл) при -60°С добавляют ΌΜ8Ο (0.097 ммоль, 7 мл) по каплям и перемешивают в течение 5 мин. Затем метил(К. К или 8)-1[((1-[3-(2-(7-хлор-2-хинолинил)-(Е)-этенил)фенил]-3(2-(1.2-дигидрокси-1 -метилэтил)-фенил)пропил)тио)метил] циклопропанацетат (1.

Отд. СЬет.. 1996. 61.8518-85251 (0.041 моль, 25 мг) в СН2С12 (50 мл) медленно добавляют при 60°С. Реакционную смесь перемешивают в течение 15 мин и реакцию останавливают добавлением Ε1₃Ν (0.2 ммоль, 28 мл). Температуру повышают до 25°С и добавляют воду (2 мл). реакционную смесь экстрагируют Е1ОАс (2 мл). Органические экстракты высушивают над №ь8О4 и упаривают досуха. Остаток под высоким вакуумом доводят до постоянного веса и получают 20 мг соединения, указанного в заглавии, которое используют как таковое в следующей стадии.

'|| ЯМР (СЭ₃СОСЭ₃) д 0.38-0.53 (м, 4Н).

1.51 (с, 3Н) . 2.05-2.30 (м, 2Н), 2.39 (д, 1Н), 2.46 (д, 1Н) . 2.55 (с, 2Н), 2.60-2.80 (м, 2Н), 3.05-3.15 (м, 1Н), 3.58 (с, 3Н). 4.05 (т, 1Н), 7.15-7.30 (м, 3Н) . 7.39-7.55 (м, 5Н). 7.62 (м, 1Н) . 7.75 (с, 1Н).

7.85 (д, 1Н), 7.9 (м, 2Н). 8.0 (с, 1Н), 8.35 (д, 1Н). 9.62 (с, 1Н).

Стадия 2. (К. К или 8)-1-[((1-[3-(2-(7-хлор2-хинолинил)-(Е)-этенил)фенил] -3 -(2-( 1 -гидриокси-1-карбоксиэтил)фенил)-пропил)тио)метил] циклопропануксусная кислота.

К раствору альдегида из стадии 1 (20 мг, 0,032 ммоль) в ЕЮН (500 мл) и АдЫО₃ (13 мг, 0,76 ммоль) (предварительно растворяют в 30 мл воды) добавляют раствор КОН (0,16 ммоль, 0,16 мл) по каплям. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь подкисляют уксусной кислотой. (10 мл) и разбавляют насыщенным раствором ΝΗ₄Ο1 (2 мл) и экстрагируют ЕЮАс (2 мл). Органические экстракты высушивают над №1₂8О₄ и упаривают. Остаток очищают с помощью флеш-хроматографии на силикагеле, используя смесь растворителей МеОН/СНС1₃/ИН₃ = 4:8:1 и получают 5 мг вещества, которое далее очищают с помощью ВЭЖХ в колонке с силикагелем ΝοναραΚ. используя смесь для элюции МеОН/Н₂О/АсОН (80-20-0,1%) и контролируя элюируемые фракции при 350 нм, и получают 2,8 мг соединения, указанного в заглавии.

Ή ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,35-0,68 (м, 4Н),

1,75 (с, 3Н), 2,10-2,25 (м, 2Н), 2,45 (д, 2Н), 2,50-

2,70 (м, 3Н), 3,0 (м, 1Н), 4,05 (м, 1Н), 7,05-7,20 (м, 3Н), 7,35-7,55 (м, 5Н), 7,6 (с, 1Н), 7,8 (с, 1Н), 7,85-8,0 (м, 3Н), 8,02 (с, 1Н), 8,25 (д, 1Н). ВРМС (ЕАВ) т/ζ рассчитано для ί.’₃₅Η₃₄ΟΝ0₅8: 616,192448, найдено 616,19269.

Пример 2. (К, К или 8)-1-[((1-[3-(2-(7-хлор2-хинолинил)-{Е}-этенил)фенил] -3 -(2-( 1 гидрокси-1-карбоксиэтил)фенил)пропил)тио)метил] циклопропануксусная кислота.

Главный изомер

Стадия 1. (8)-2-(3-[3-(2-(7-хлор-2-хинолинил)(Е)-этенил)фенил]-3-трет-бутилдиметилсилилоксипропил)фенилэтанон.

К [8-(Е)-1-[2-[3-[3-[2-(7-хлор-2-хинолинил)этенил]фенил]-3-гидроксипропил]фенил]этанону (1. ОтдСйет., 1993, 58, 3731-3735) (13,4 г, 30,35 ммоль) в СН₂С1₂; (67 мл) добавляют 2,6 лутидина (5,32 мл, 45,52 ммоль). Смесь охлаждают до -78°С, затем ТВБМ8О Т£ (7,0 мл, 30,35 ммоль) добавляют по каплям. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч. Реакцию останавливают путем добавления 25% раствора ΝΗ-ОАс (50 мл) и экстрагируют с ЕЮАс (100 мл). Органический экстракт высушивают над Ыа₂8О₄ и упаривают до остатка. Сырой продукт очищают с помощью флеш-хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь гексана и ЕЮАс в отношении 95:5 и получают 14,4 г соединения, указанного в заглавии.

Ή ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,15 (с, 6Н), 0,95 (с, 9Н), 2,0 (м, 2Н), 2,81-3,02 (м, 2Н), 4,95 (т, 1Н) , 7,25 (т, 2Н), 7,36-7,55 (м, 5Н), 7,72 (д, 1Н), 7,75 (с,2Н), 7,82 (д, 1Н), 7,90 (д, 2Н), 8,0 (с, 1Н), 8,35 (д, 1Н).

Стадия 2. (8)-2-(3-[3-(2-(7-хлор-2-хинолинил)-(Е)-этенил)фенил]-3-трет-бутилдиметилсилилоксипропил)бензоилформальдегид.

К предварительно растворенному 8еО₂(2,95 г, 26,57 ммоль) в смеси диоксана с водой (100 мл: 0,48 мл) при 60°С добавляют кетон из стадии 1 (14,4 г, 26 ммоль) в растворе с диоксаном (70 мл). Реакционную смесь нагревают при 100°С в течение ночи. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через прокладку из целита и промывают диоксаном (20 мл). После упаривания досуха получают соединение, указанное в заглавии, которое используют как таковое в следующей стадии (Сырой вес 14 г).

Стадия 3. (8)-2-(3-[3-(2-(7-хлор-2-хинолинил)-(Е)-этенил)фенил]-3-трет-бутилдиметилсилилоксипропил)бензоилмуравьиная кислота.

К раствору альдегида из стадии 2 (14 г, 24,6 ммоль) в ЕЮН (118 мл) добавляют раствор АдЫО₃ (10 г, 59 ммоль), предварительно растворенного в воде (23 мл), а затем добавляют раствор КОН (118 мл, 118 ммоль 1М) по каплям. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Объем ЕЮН удаляют упариванием, водный раствор подкисляют 1Ν НС1 (118 мл) и экстрагируют ЕЮАс дважды (100 мл). Органические экстракты высушивают над №1₂8О₄ и упаривают. Остаток очищают с помощью флеш-хроматографии, вначале в качестве элюента используют чистый ЕЮАс, а затем смесь ЕЮАс:АсОН-95:5 и получают 5,0 г соединения, указанного в заглавии.

'Н ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,15 (с, 6Н), 0,95 (с, 9Н), 2,0 (м, 2Н), 2,95-3,18 (м, 2Н), 4,95 (т, 1Н), 7,35-7,65 (м, 8Н), 7,75-7,97 (м, 5Н), 8,0 (с, 1Н),

8,32 (д, 1Н).

Стадия 4. 8-фенилментил (8)-2-(3-[3-(2-(7хлор-2-хинолил)-(Е)-этенил)фенил]-3-трет-бутилдиметилсилилоксипропил)бензоилформат.

К кетокислоте из стадии 3 (5,0 г, 8,5 ммоль) в СН₂С1₂ (40 мл) при 0°С добавляют ДМР (100 мл), а затем оксалилхлорид (1,12 мл, 12,8 ммоль) по каплям. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч. Затем реакционную смесь упаривают досуха и остаток оставляют под высоким вакуумом в течение 1 ч и полученный продукт используют как таковой в следующей стадии.

К 8-фенилментолу (2,0 г, 8,6 ммоль) в толуоле (40 мл) и пиридине (0,7 мл, 8,5 ммоль) добавляют неочищенный хлорангидрид из предыдущей стадии в толуоле (10 мл) при комнатной температура. Смесь перемешивают в течение ночи. Реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора ΝΠ·|Ο и НС1 1 Ν 1:1 (50 мл) и экстрагируют ЕЮАс дважды (50 мл). Органические экстракты высушивают над №1₂8О₄ и упаривают досуха. Остаток очищают с помощью флеш-хроматографии, в качестве элюента используют смесь толуола с ЕЮАс в отношении 99; 1 и получают 5,0 г соединения, указанного в заглавии.

'|| ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,18 (с, 6Н), 0,8-0,9 (м, 4Н), 0,95 (с, 9Н), 1,02-1,20 (м, 2Н), 1,3 (д, 6Н), 1,45-1,60 (м, 3Н), 1,95-2,15 (м, 4Н), 2,92-

3,15 (м, 2Н), 4,95 (т, 1Н), 6,95 (т, 1Н), 7,1-7,18 (м, 4Н), 7,4-7,55 (м, 6Н), 7,57-7,75 (м, 4Н), 7,823

7,85 (м, 1Н), 7,9-7,98 (д, д, 2Н), 8,02 (с, 1Н), 8,35 (Д, 1Н).

Стадия 5. (8, К. или 8) 8-фенилментил-2-[2(3-(3-(2-(7-хлор-2-хинолил)-(Е)этенил)фенил] -3 трет-бутилдиметилсилилоксипропил)фенил-2гидроксипропионат.

К кетоэфиру из стадии 4 (1,0 г, 1,25 ммоль) в эфире (25 мл) добавляют при -78°С МеМдВт 3М (0,83 мл, 2,5 ммоль).

Реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч. Реакцию останавливают путем добавления 0,4 мл АсОН непосредственно в смесь, а затем добавляют насыщенный раствор ИН₄С1 (10 мл) и экстрагируют ЕЮАс (20 мл). Органические экстракты высушивают над Ыа₂8О₄ и упаривают досуха. Остаток очищают флешхроматографией, используя смесь гексана и ЕЮАс в отношении 90:10, и получают 0,8 г соединения, указанного в заглавии.

Ή ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,2 (с, 6Н), 0,62-1,2 (м, 23Н), 1,35 (м, 2Н), 1,72 (т, 1Н), 1,80 (с, 3Н),

2,70 (т, 1Н), 2,85 (т, 1Н), 4,75 (м, 1н), 5,0 (м, 1Н), 7,05-7,25 (м, 8Н), 7,35-7,55 (м, 5Н), 7,65 (с, 1Н), 7,75-8,05 (м, 5Н), 8,35 (д, 1Н).

Стадия 6. (8, В или 8) 8-фенилментил-2-[2(3-(3-(2-(7-хлор-2-хинолил)-(Е)этенил)фенил] -3 гидрокси)пропилфенил-2-гидроксипропионат.

К эфирокарбинолу из стадии 5 (0,8 г, 0,98 ммоль) в ТГФ добавляют раствор ТВАЕ (1 мл, 0,98 ммоль) при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора ИН₄С1 и экстрагируют с ЕЮАс (2х10 мл). Органические экстракты высушивают над №ь8О₄ и упаривают досуха. Остаток очищают флеш-хроматографией, элюируя смесью СН₂С1₂ и ацетона в отношении 95:5, и получают 0,39 г главного изомера и 0,10 г минорного изомера.

Главный: '11 ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,65-1,00 (м, 9Н), 1,05 (с, 3Н), 1,18 (м, 1Н), 1,40 (м, 2Н),

1,75 (м, 1Н), 1,80 (с, 3Н), 2,00 (м, 2Н), 2,28 (м, 1Н), 2,7 (м, 1Н), 3,02 (м, 1Н), 4,70 (м, 1Н), 4,80 (м, 1Н), 7,08-7,25 (м, 8Н), 7,4-7,55 (м, 5Н), 7,62 (м, 1Н), 7,82-8,02 (м, 5Н), 8,35 (д, 1Н). Минорный: 0,060-1,00 (м, 6Н), 1,2 (м, 7Н), 1,3-1,45 (м, 2Н), 1,68 (с, 3Н), 1,8-1,9 (м, 2Н), 2,04 (м, 1Н), 2,15-2,25 (м, 1Н), 2,65-2,75 (м, 1Н), 2,92-3,0 (м, 1Н), 4,78-4,90 (м, 2Н), 7,09-7,3 (м, 8Н), 7,4-7,65 (м, 5Н), 7,75-8,05 (м, 6Н), 8,35 (д, 1Н).

Стадия 7. (8, В или 8) 8-фенилментил-2-[2(3-(3-(2-(7-хлор-2-хинолил)-(Е)-этенил)фенил]3-метансульфонат)пропилфенил-2-гидроксипропионат.

К главному изомеру спиртокарбинолоэфира из стадии 6 (0,3 г, 3,41 ммоль) в смеси 1:1 толуола с СН₃СИ (2,5 мл) добавляют основание Нишд (75 мл, 0,43 ммоль). Реакционную смесь охлаждают до -40°С и добавляют метансульфонилхлорид (33 мл, 0,43 ммоль) по каплям. Температуру постепенно поднимают до -30°С в течение 1 ч. Реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора NаНСО₃ (3 мл) и экстрагируют с ЕЮАс (3 мл). Органические экстракты высушивают над Ыа₂8О₄ и упаривают досуха. Полученное соединение, указанное в заглавии, используют как таковое в следующей стадии.

'|| ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,65-0,98 (м, 9Н), 1,0 (с, 3Н), 1,25-1,45 (м, 2Н), 1,75 (м, 4Н), 1,9 (м, 1Н), 2,28 (м, 1Н), 2,42-2,55 (м, 1Н), 2,7-2,85 (М, 2Н), 2,95-3,05 (м, 4Н), 4,65-4,75 (м, Н), 5,80 (т, 1Н), 7,05-7,25 (м, 8Н), 7,45-7,60 (м, 5Н), 7,757,82 (д, 1Н), 7,83-8,05 (м, 5Н), 8,35 (д, 1Н).

К дегазированному ТГФ (1 мл) под Ν₂ добавляют 1-(меркаптометил)-1-циклопропануксусную кислоту (Вюогдашс Меб. Ьейегк, 1995, 5(3), 283-288) (60 мг, 0,41 ммоль). К этому раствору, охлажденному до -15°С, добавляют бутиллитий (339 мл, 0,82 ммоль). Температуру поднимают до -8°С в течение 30 мин. Затем неочищенный мезилат из предыдущей стадии (0,33 г, 0,41 ммоль), растворенный в дегазированном ТГФ (1 мл), добавляют к реакционной смеси по каплям. Смесь перемешивают при 0°С в течение ночи. Реакцию останавливают насыщенным раствором ΝΗ₄Ο1 (2 мл) и экстрагируют с ЕЮАс (2 мл). Органические экстракты высушивают над №ь8О₄ и упаривают досуха. Остаток очищают флеш-хроматографией, используя смесь для элюции гексана с ЕЮАс в отношении 1:1 с добавлением 1% АсОН и получают 138 мг соединения, указанного в заглавии.

'|| ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,3-0,58 (м, 4Н), 0,6-0,96 (м, 5Н), 1,10-1,25 (м, 7Н), 1,28-1,45 (м, 1Н), 1,62 (с, 3Н), 1,75-1,90 (м, 1Н), 2,09-2,20 (м, 1Н), 2,25-2,36 (м, 1Н), 2,40-2,52 (м, 2Н), 2,60 (с, 2Н), 2,65-2,84 (м, 2Н), 4,02 (т, 1Н), 4,75 (м, 1Н), 7,09 (м, 11Н), 7,35-7,55 (3Н), 7,62 (М, 1Н), 7,758,05 (м, 4Н), 8,35 (д, 1Н).

Стадия 8. (В, В или 8)-1-[((1-[3-(2-(7-хлор2-хинолинил)-(Е)-этенил)фенил] -3 -(2-( 1 -гидрокси-1-карбоксиэтил)фенил)пропил)тио)метил]циклопропануксусная кислота.

К карбинолоэфиру из стадии 7 (138 мг, 0,16 ммоль) в ЕЮН (500 мл) добавляют раствор 1Ν ЬЮН (480 мл, 0,48 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 3-х дней, реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора ΝΗ₄Ο1 (2 мл) и уксусной кислоты (30 мл) и экстрагируют с ЕЮАс (2 мл). Органические экстракты высушивают над №ь8О₄ и упаривают досуха. Остаток очищают флеш-хроматографией, используя в качестве элюента смесь СНС1₃ и МеОН в отношении 2:1, затем смесь СНС1₃/МеОН/ ИН₄ОН=2/1/0,25 и получают 65 мг соединения, указанного в заглавии, которое в дальнейшем очищают с помощью ВЭЖХ на колонке Νοуарак, контролируя при 350 нм, используя элюент МеОН-вода-АсОН = 80:20;0,1%, и получают 11 мг соединения, указанного в заглавии.

' Н ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,3-0,7 (м, 4Н), 1,78 (д, 3Н), 2,16-2,72 (м, 7Н), 3,05 (т, 1Н), 4,02 (т, 1Н), 7,02-7,20 (м, 3Н), 7,25-7,35 (м, 1Н), 7,3825

7,58 (М, 4Н), 7,62 (т, 1Н), 7,78 (д, 1Н), 7,80-7,98 (м, 3Н), 8,01 (с, 1Н), 8,34 (д, 1Н). ¹³С ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 12,3, 12,3, 17,1, 27,5, 31,8, 39,2,

39,5, 39,6, 50,4, 76,0, 120,7, 125,8, 126,3, 126,2, 126,7, 127,1, 127,5, 128,1, 128,2, 129,0, 129,2, 129,2, 130,0, 131,2, 135,3, 135,8, 137,0, 137,5, 140,9, 141,7, 144,5, 149,1, 157,7, 173,1, 177,4.

ВРМС (РАВ; т/ζ рассчитано для С₃₅Н₃₄СШО₅8: 616,192448, найдено 616,19269.

Пример 3. (В, В или 8)-1-[((1-[3-(2-(7-хлор-

2- хинолинил)-{Е}-этенил)фенил] -3 -(2-( 1 гидрокси- 1-карбоксиэтил)фенил)пропил)тио)метил]циклопропануксусная кислота.

Минорный изомер

Стадия 1. (8, Я или 8) 8-фенилментил-2-[2(3-(3-(2-(7-хлор-2-хинолил)-(Е)-этенил)фенил]-

3- метансульфонат)пропилфенил-2 -гидроксипропионат.

К минорному изомеру спиртокарбинолоэфира из примера 2, стадии 6 (0,5 г, 0,68 ммоль) в смеси толуола с СН ₃ΕΝ в отношении 1:1 (4,0 мл) добавляют основание Нишд (125 мл, 0,68 ммоль). Реакционную смесь охлаждают до 40°С. Затем добавляют по каплям метансульфонилхлорид (55 мл, 0,71 ммоль). Температуру постепенно поднимают до -30°С в течение 1 ч. Реакцию останавливают путем добавления насыщенного раствора ЫаНСО₃ (3 мл) и экстрагируют с ЕЮАс (3 мл). Органические экстракты высушивают над Ν;·ι₂8Ο₄ и упаривают досуха с получением соединения, указанного в заглавии, которое используют как таковое в следующей стадии.

К дегазированному ТГФ (1 мл) под Ν₂ добавляют 1-(меркептометил)-1-циклопропануксусную кислоту (Вюогдашс Меб. Ьейегк, 1995, 5(3), 283-288) (99 мг, 0,68 ммоль). К этому раствору, охлажденному до -15°С, добавляют бутиллитий (542 мл, 1,36 ммоль). Температуру поднимают до -8°С в течение 30 мин. Затем неочищенный мезилат из предыдущей стадии (0,55 г, 0,68 ммоль), растворенный в дегазированном ТНС (1,6 мл), добавляют к реакционной смеси по каплям. Смесь перемешивают при 0°С в течение ночи. Реакцию останавливают насыщенным раствором ΝΗ₄Ο (2 мл) и экстрагируют с ЕЮАс (2 мл). Органические экстракты высушивают над Ν;·ι₂8Ο₄ и упаривают досуха. Остаток очищают флеш-хроматографией, используя смесь для элюции гексана с ЕЮАс в отношении 1:1 с добавлением 1% АсОН и получают 200 мг соединения, указанного в заглавии.

'|| ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,3-0,58 (м, 4Н), 0,6-0,96 (м, 5Н), 1,10-1,25 (м,7Н), 1,28-1,45 (м, 1Н), 1,62 (с, 3Н), 1,75-1,90 (м, 1Н), 2,09-2,20 (м, 1Н), 2,25-2,36 (м, 1Н), 2,40-2,52 (м, 2Н), 2,60 (с,

2Н), 2,65-2,84 (М, 2Н), 4,02 (т, 1Н), 4,75 (м, 1Н), 7,09 (м, 11Н), 7,35-7,55 (3Н), 7,62 (м, 1Н), 7,758,05 (м, 4Н), 8,35 (д, 1Н).

Стадия 2. (В, В или 8)-1-[((1-[3-(2-(7-хлор2-хинолинил)-(Е)-этенил)фенил] -3 -(2-( 1 -гидрокси-1-карбоксиэтил)фенил)пропил)тио)метил]циклопропануксусная кислота.

К карбинолоэфиру из стадии 7 (200 мг, 0,23 ммоль) в ЕЮН(500 мл) добавляют раствор 1Ν ЫОН (700 мл, 0,70 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником 3 дня, реакцию останавливают добавлением насыщенного раствора ΝΠ·|Ο (2 мл) и уксусной кислоты (30 мл) к экстрагируют с ЕЮАс (2 мл). Органические экстракты высушивают над Ν;·ι₂8Ο₄ и упаривают досуха. Остаток очищают флешхроматографией, используя в качестве элюента сначала смесь СНС1₃/МеОН в отношении 2-1, а затем смесь СНС13/МеОН/МН4ОН в отношении 2:1:0,25, и получают 80 мг соединения, указанного в заглавии, которое в дальнейшем очищают с помощью ВЭЖХ на колонке ΝοναραΕ контролируя при 350 нм, используя смесь для элюции МеОН-вода-АсОН в отношении 80:20:0,1% и получают 13 мг соединения, указанного в заглавии.

' Н ЯМР (СБ₃СОСБ₃) д 0,3-0,7 (м, 4Н), 1,78 (д, 3Н), 2,16-2,72(м, 8Н), 3,05 (т, 1Н), 4,02 (т, 1Н), 7,02-7,20 (м, 3Н), 7,25-7,35(м, 1Н), 7,38-7,58 (м, 4Н), 7,62 (т, 1Н), 7,78 (д, 1Н), 7,80-7,98(м, 3Н), 8,01 (с, 1Н), 8,34 (д, 1Н). ВРМС (РАВ) т/ζ рассчитано для С₃₄Н₃₄С1НО₄: 616,192448, найдено 616,19269.

Пример 4. Выделение 1-[((1-[3-(2-(7-хлор2-хинолинил)-(Е)-этенил)фенил]-3-(2-(2-гидрокси-2-пропионовая кислота)фенилпропил)тио)метил] циклопропануксусной кислоты из желчи человека.

Здоровым субъектам вводят разовую оральную дозу, состоящую из 50 мг монтелукаста натрия, после голодания в течение ночи (3 субъекта) или через 5 ч после диеты с содержанием жира (3 субъекта). Желчь собирают посредством гастродуоденальной трубки, помещенной через рот около печеночно-желудочной ампулы, от 2 до 8 ч или от 8 до 12 ч после принятия дозы. За 2 ч до конца процедуры сбора внутривенно вводят холецистокининовый Сконцевой октапептид, чтобы стимулировать сокращения желчного пузыря и таким образом увеличить отток желчи. Субъекты голодают на протяжении всей процедуры сбора. Все образцы хранятся при -70°С в темноте до анализа, и все анализы выполняют в условиях желтого света.

Образцы желчи анализируют непосредственно после центрифугирования, используя колонку С18 Бескшап (4,6х250 мм), элюируя со скоростью 1 мл/мин с линейными градиентами от 35% до 45% ацетонитрила в 1 мМ ацетате аммония, рН 3,5 в течение 5 мин, от 45% до 55% ацетонитрила в течение 35 мин, от 55% до 87% ацетонитрила в течение 20 мин, от 87% до 95% ацетонитрила в течение 0,3 мин. При этих условиях ВЭЖХ указанное в заглавии соединение элюируется при около 53 мин в виде диастереомерной смеси. Полученное таким образом соединение, указанное в заглавии, вновь подвергают очистке, используя колонку 2огЬах-ХИВ ЕсНрзе С8 (4,6х250 мм) и элюируя 15 мин с помощью линейного градиента от 28% ацетонитрила и 28% метанола в воде до 47% ацетонитрила и 47% метанола в воде. Время удерживания указанного в заглавии соединения при этих условиях составляет 15 мин. ЯМР и массспектры повторно очищенного соединения соответствуют тем спектрам, которые получены для аутентичного образца указанного в заглавии соединения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы ^___/^СО2^Н и его индивидуальные оптические изомеры или его фармацевтически приемлемое производное.

2. Выделенное и очищенное соединение по п. 1, по существу свободное от других продуктов метаболизма монтелукаста натрия.

3. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.

4. Способ предотвращения действия лейкотриена у млекопитающего, включающий введение вышеуказанному млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по п. 1.

5. Способ лечения или предупреждения астмы, аллергий или воспаления у млекопитающего, включающий введение вышеуказанному млекопитающему, нуждающемуся в таком ле чении, терапевтически эффективного количества соединения по п. 1.

6. Способ получения соединения по п.1, который включает

а) взаимодействие соединения формулы 1

СООР где К означает низший алкил, с диметилсульфоксидом и электрофилом с получением соединения формулы 2;

соов

Ь) взаимодействие соединения формулы 2 с нитратом серебра и основанием с получением соединения по п. 1.

7. Способ получения индивидуальных диастереомеров соединения по п.1, который включает

а) разделение диастереомерной смеси соединения формулы 7 где К* означает 8-фенилментил;

Ь) взаимодействие индивидуального диастереомера с метансульфонилхлоридом с полу чением соответствующего мезилата;

с) взаимодействие мезилата из стадии Ь) с дианионом 1 -меркаптометилциклопропануксусной кислотой с получением соединения формулы 8

б) удаление 8-фенилментильной группы с получением соединения по п.1.