DE69731635T2

DE69731635T2 - Neuropeptid y agonisten

Info

Publication number: DE69731635T2
Application number: DE69731635T
Authority: DE
Inventors: Erica Potter
Original assignee: Prince of Wales Medical Research Institute Ltd POWMRI
Current assignee: Prince of Wales Medical Research Institute Ltd POWMRI
Priority date: 1996-06-05
Filing date: 1997-06-05
Publication date: 2005-12-15
Anticipated expiration: 2017-06-06
Also published as: AUPO029096A0; EP0907658A4; CN1322212A; CA2257424A1; ATE282632T1; DE69731635D1; WO1997046579A1; EP0907658B1; EP0907658A1; JP2001508025A

Description

Fachgebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft Peptide, die einige bestimmte der biologischen Aktivitäten des Neuropeptid Tyrosin (NPY) an spezifischen NPY-Rezeptoren, welche die neuronale Freisetzung von physiologisch aktiven Substanzen modulieren, nachahmen. Diese Rezeptoren sind oftmals auf Neuronen an Neuroeffektor-Kreuzungen lokalisiert und sind bei einigen Geweben und Spezies als vom Subtyp der NPY Y2-Rezeptoren klassifiziert worden. Außerdem betrifft die vorliegende Erfindung pharmazeutische Zusammensetzungen, die diese Peptide als dem Wirkstoff enthalten, als auch Behandlungsmethoden, die die Verabreichung dieser Zusammensetzungen einbeziehen.
Hintergrund der Erfindung
Neuropeptid Y, ein Peptid aus 36 Aminosäuren, das zur pankreatischen Polypeptid-Familie gehört, wurde im Jahr 1982 erstmalig aus Schweinehirn isoliert (Tatemoto et al., 1982) und wurde seitdem in den meisten sympathischen postganglionären Neuronen identifiziert, die das kardiovaskuläre System versorgen, wo es gemeinsam mit Noradrenalin lokalisiert ist (Potter, 1988). Im kardiovaskulären System erhöht es den Blutdruck durch eine Wirkung auf postjunktionale Neuropeptid-Y-Rezeptoren (Dahlöff et al., 1985; Potter, 1985; Revington et al., 1987; Potter und McCloskey, 1992) und hemmt die Neurotransmitter-Freisetzung – sowohl von Acetylcholin (Revington et al., 1987; Warner und Levy, 1989) als auch Noradrenalin (Edvinsson, 1988) – durch eine Wirkung auf präjunktionale Neuropeptid-Y-Rezeptoren. Rezeptoren für Neuropeptid Y sind auch an Sinnesnerven-Endigungen lokalisiert, und ihre Aktivierung kann lokale neurogene Reaktionen modulieren (Grundemar et al., 1990; 1993). Diese beiden Rezeptor-Subtypen wurden als Neuropeptid Y Y₁ (postjunktional) und Neuropeptid Y Y₂ (präjunktional) ausgehend von den verschiedenen Reaktionen auf ein verkürztes Analogon des verwandten Peptids YY-(13–36) im Vergleich zum Neu ropeptid Y in in vitro-Assaysystemen (Wahlestedt et al., 1986) bezeichnet. Neben diesen historisch wohldefinierten Neuropeptid-Y-Rezeptoren wurde das Vorhandensein einer Reihe weiterer Subtypen (Y3, Y4, Y5, Y6 und Y7) mit pharmakologischen Begründungen vorgeschlagen, und Einzelheiten des Klonierens von Rezeptoren, die Y1, Y2, Y4 und Y5 entsprechen, wurden veröffentlicht (Herzog et al., 1992; Gerald et al., 1995; Bard et al., 1995; Gerald et al., 1996). Die Verteilung und die physiologische Bedeutung dieser verschiedenen Rezeptor-Subtypen muss jedoch noch definiert werden. Obschon einige Widersprüchlichkeiten bezüglich der Selektivität der verkürzten Formen des Neuropeptid Y für den einen oder anderen Rezeptor-Subtyp vorhanden waren (Potter et al., 1989), unterstützt das entstehende Bild die ursprüngliche Klassifikation in prä- und postjunktionale Rezeptor-Subtypen. Es wurden Zelllinien entwickelt, die den einen oder den anderen Neuropeptid-Y-Rezeptor-Subtyp exprimieren, wobei die Entwicklung der Rezeptor-selektiven Analoga von Neuropeptid Y sich hauptsächlich auf die Bindungseigenschaften in diesen Zelllinien konzentriert hat (Sheikh et al., 1989; Aakerlund et al., 1990; Fuhlendorff et al., 1990). Vor kürzerem wurde eine cDNA, die den Neuropeptid Y Y₁-Rezeptor codiert, kloniert, und Zelllinien, die den klonierten Rezeptor exprimieren, wurden sowohl auf die spezifische Bindung der Neuropeptid-Y-Analoga (Herzog et al., 1992) als auch auf funktionelle Reaktionen, die durch spezifische Analoga ausgelöst werden, analysiert. Aus diesen Bindungsstudien, kombiniert mit anschließenden in vivo-Studien, wurden zwei Analoga als spezifisch am postjunktionalen (Neuropeptid Y Y₁)-Rezeptor wirkend klassifiziert. Diese Neuropeptid-Y Y₁-selektiven Analoga, (Pro³⁴)-Neuropeptid Y und (Leu³¹, Pro³⁴)-Neuropeptid Y, ahmen die Wirkung des Neuropeptids Y beim Anheben des Blutdrucks nach und haben auch eine ähnliche Bindung an Zelllinien gemeinsam, die lediglich Neuropeptid Y Y₁-Rezeptoren exprimieren, z. B. die humane Neuroblastom-Zelllinie SK-N-MC, und Fibroblastenlinien, die den klonierten Neuropeptid Y Y₁-Rezeptor exprimieren (Herzog et al., 1992). Der Neuropeptid Y Y₂-Rezeptor zeigt auch keine hemmende Wirkung auf die Kardiovagus-Tätigkeit in vivo, eine Erscheinung der Hemmung der Acetylcholin-Freisetzung (Potter et al., 1991; Potter und McCloskey, 1992).
Die Aktivierung von neuronalen präjunktionalen NPY-Rezeptoren hemmt allgemein die Nerventätigkeit, wodurch die Freisetzung von Neurotransmittern als Reaktion auf Nervenimpulse und als Reaktion auf lokale Faktoren, die auf die Freisetzung von Neurotransmittern einwirken, vermindert wird (Wahlestedt et al., 1986).
NPY-enthaltende Neuronen sind in der Nasenschleimhaut verschiedener Spezies einschließlich des Menschen, evident und oftmals mit Drüsenacini und Blutgefäßen verbunden (Baraniuk et al., 1990; Grunditz et al., 1994). Eine Stimulierung der parasympathischen Nervenversorgung zur Nasenschleimhaut (Vidianus-Nerv) bei Hunden erhöht den Blutfluss in dieser Region, wobei der größte Teil dieser Wirkung Atropin-resistent ist. Die intravenöse Verabreichung von NPY vermindert die Vasodilatation aufgrund einer parasympathischen Nervenstimulation, eine Wirkung, die durch den NPY Y1-selektiven Agonisten [Leu31, Pro34]NPY nicht nachgeahmt wurde, doch durch die Verabreichung des NPY Y2-Rezeptoragonisten N-Acetyl[Leu28, Leu31]NPY(24–36) nachgeahmt wird (Lacroix et al., 1994). Dies stimmt mit einer präjunktionalen NPY Y2-artigen Rezeptor-vermittelten Hemmung der Transmitterfreisetzung aus parasympathischen Nervenendigungen überein.
Die präjunktionale oder Neuropeptid-Y Y₂-Rezeptorklassifikation wurde auf der Grundlage der Wirkungen von Peptid YY (13–36) erstellt, doch in vielen Systemen zeigt dieses Molekül, ebenso wie Neuropeptid Y-(13–36), eine Pressoraktivität (Rioux et al., 1986; Lundberg, et al., 1988; Potter et al., 1989). Dies wurde von einigen als Hinweis darauf interpretiert, dass in einigen Gefäßbetten zwei Arten von Neuropeptid Y-Rezeptoren (sowohl Neuropeptid Y Y₁ als auch Neuropeptid Y Y₂) auf postjunktionalen Membranen vorliegen (Schwartz et al., 1989). Das Fehlen der Selektivität dieser Moleküle kann jedoch auf die Beibehaltung einer partiellen Agonistaktivität auf Y₁-Rezeptoren zurückzuführen sein, was ihnen die Hervorrufung einer reduzierten funktionellen Reaktion erlaubt. Wir haben zuvor ein 13–36-Analogon von Neuropeptid Y beschrieben, das (Leu¹⁷, Glu¹⁹, Ala²¹, Ala²², Glu²³, Leu²⁸, Leu³¹)-Neuropeptid Y-(13–36) (ANA-Neuropeptid Y-(13–36)), welches eine dem ganzen Neuropeptid Y-Molekül gleichwertige präjunktionale Aktivität in in vivo-Studien zeigte (Potter et al., 1989). Dieses Analogon behielt jedoch eine beträchtliche Pressoraktivität, oder Neuropeptid Y Y₁-Rezeptor-vermittelte Wechselwirkungen, bei.
Wir haben ebenso Analoga von Neuropeptid Y zuvor beschrieben, welche die Wirkung des Neuropeptid Y beim Hemmen der kardiovagalen Wirkung nachahmen, doch keine Pressorwirkung zeigen. Übereinstimmend mit diesen funktionellen Reaktionen sind Bindungsstudien mit einem Analogon, N-Acetyl-[Leu²⁸, Leu³¹]-Neuropeptid Y-(24–36), das eine beträchtliche Affinität für den Neuropeptid Y Y₂-Rezeptor-Subtyp, der auf der humanen Neuroblastom-Zelllinie SMS-KAN exprimiert wird, doch keine Affinität für den Neuropeptid Y Y₁-Rezeptortyp zeigte, der auf der humanen Zelllinie SK-N-MC exprimiert wird (Potter et al., 1994). Außerdem stimulierte dieses Analogon den humanen Neuropeptid-Y Y₁-Rezeptor, der in Fibroblastenzellen exprimiert wird, nicht dazu, einen Anstieg im cytosolischen Calcium zu induzieren, obschon der Rezeptor auf intaktes Neuropeptid Y reagiert.
In CA-A-2134428 sind Neuropeptid Y-Y2-Rezeptor-spezifische Peptide beschrieben, die Analoga von Neuropeptid Y sind.
In DE-A-38 11 193 sind Analoga von Neuropeptid Y beschrieben.
Beschreibung der Erfindung
Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben nun neuartige Peptide entwickelt, die Reaktionen nachahmen, die der Aktivierung von Neuropeptid Y Y2-artigen Rezeptoren zugeschrieben werden. In in vitro-Assays zeigen diese Agonisten eine hohe Affinität für Neuropeptid-Y Y2-Rezeptoren und eine geringe Affinität für NPY Y1-Rezeptoren. In in vivo-Assays zeigen die neuen Agonisten eine ähnliche oder erhöhte NPY Y2-Rezeptor-artige Agonistaktivität im Vergleich zu N-Acetyl (Leu²⁸, Leu³¹)-Neueopeptid Y-(24–36), und zeigen keine Pressor- oder Y₁-Rezeptoraktivität bei Dosen, die eine maximale Neuropeptid Y Y2-artige Agonistwirkung auslösen.
Demgemäß wird in einem ersten Aspekt der vorliegenden Erfindung ein Ligand für einen Neuropeptid-Y2-Rezeptor oder einen Neuropeptid-Y2-artigen Rezeptor bereitgestellt mit der Formel:
X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15
worin
X1 H, R1-CO oder eine oder zwei natürlich vorkommende Aminosäuren ist;
X2 Leu, Ile, Val, Nle, Sar, Gly, Ala, Aib, D-Leu, D-Ile, D-Val, D-Ala oder D-Nle ist;
X3 Arg, Lys, Orn, Ala, Dbu oder His ist;
X4 His, Lys, Arg, Ala, Gly, Ser, Thr, Asn, Gln oder Aib ist;
X5 Tyr, Phe, Ala, Gly, Ser, Thr, Asn, Gln oder Aib ist;
X6 Leu, Ile, Val, Ala, Arg oder Nle ist;
X7 Asn, Ala oder Gln ist;
X8 Leu, Ile, Val, Ala, Aib oder Nle ist;
X9 Leu, Ile, Val, Ala, Aib oder Nle ist;
X10 Thr, Ala oder Ser ist;
X11 Arg, Lys oder Orn ist;
X12 Gln, Pro oder Asn ist;
X13 Arg, Lys oder Orn ist;
X14 Tyr, Phe, His, Trp, D-Tyr, D-Phe, D-His oder D-Trp ist;
X15 OH, NH₂, NHR2, NR3R4 oder eine oder zwei natürlich vorkommende Aminosäuren ist, wobei die endständige Aminosäure in der normalen oder Amid-Form vorliegt; worin

(a) R1, R2, R3 und R4 unabhängig Alkylgruppen sind, von gerader, verzweigter oder alicyclischer Struktur;
(b) mindestens eines von X2 bis X10 Ala ist;
(c) wenn X5 Phe ist, X9 Leu, Ala oder Nle ist; und
(d) der Ligand kein Peptid der folgenden Struktur ist Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Ala-Arg-Gln-Arg-Tyr oder Ala-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Ala-Arg-Gln-Arg-Tyr.

Abkürzungen

Sar: Sarcosin oder N-Methylglycin
Aib: Aminoisobutyrsäure
Orn: Ornithin
Dbu: Diaminobutyrsäure

In einer bevorzugten Ausführungsform sind mindestens zwei Gruppen, ausgewählt aus X2, X4, X5, X8 und X9, Ala. In einer besonders bevorzugten Ausführungsform sind X2 und X5 Ala.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform ist R1 eine Alkylgruppe, ausgewählt aus Methyl, Ethyl, n-Butyl, t-Butyl, Cyclohexyl und anderen Alkylgruppen mit 10 oder weniger Kohlenstoffatomen.
In noch einer weiteren bevorzugten Ausführungsform sind R2, R3 und R4 Alkylgruppen, die unabhängig ausgewählt sind aus Methyl, Ethyl, Isopropyl, n-Butyl, Cyclohexyl und anderen Alkylgruppen mit 10 oder weniger Kohlenstoffatomen.
In wiederum einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung ist der Ligand
Ac-Ala-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Ala-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Leu-Ala-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Leu-Arg-Ala-Tyr-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Leu-Arg-His-Ala-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Leu-Arg-His-Tyr-Ala-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Ala-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Ala-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Ala-Arg-His-Ala-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Leu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-Ala-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-DLeu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder
Ac-DLeu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH₂, oder
Ac-DLeu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH₂, oder
Ac-DLeu-Arg-Ala-Aib-Leu-Asn-Ala-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH₂, oder
Ac-DLeu-Lys-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Lys-Gln-Lys-Phe-NH₂, oder
Butyryl-Leu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH₂, oder
Ac-Ala-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-DTyr-NH₂, oder
Ac-Ala-Arg-Ala-Ala-Leu-Gln-Ile-Leu-Ser-Arg-Asn-Arg-Tyr-NH₂.
In einer bevorzugten Ausführungsform dieser Erfindung ist der Neuropeptid-Y-Rezeptor ein Neuropeptid Y Y2-artiger Rezeptor. Mit "Neuropeptid Y Y2-artiger Rezeptor" meinen wir einen Rezeptor, der pharmakologische Eigenschaften mit dem humanen Neuropeptid Y Y2-Rezeptor teilt. Diese Rezeptoren können die Freisetzung von Neurotransmittern wie Acetylcholin und Noradrenalin modulieren und können die Freisetzung von Effektoren aus Sinnesnerven modulieren. Einige NPY-Rezeptor-Subtypen, z. B. Y5, können durch Liganden mit hoher Potenz an NPY Y2-Rezeptoren, doch geringer Potenz an NPY Y1-Rezeptoren aktiviert werden (Gerald et al., 1996) und sind daher Y2-artig. In einer bevorzugtesten Ausführungsform ist der Rezeptor ein Neuropeptid-Y Y2-Rezeptor.
Die Liganden der Erfindung können in multimerer Form vorliegen; d. h. sie können in dimerer oder trimerer Form vorliegen.
Es wird für Fachleute des Gebiets erkennbar sein, dass eine Reihe von Modifikationen auch an den Peptiden der vorliegenden Erfindung vorgenommen werden können, ohne die biologische Aktivität des Peptids abträglich zu beeinflussen. Dies kann mittels verschiedener konservativer oder nicht-konservativer Veränderungen, wie etwa Insertionen und Substitutionen, in der Peptidsequenz erreicht werden, wo solche Veränderungen die biologische Aktivität des Peptids nicht wesentlich vermindern.
Zu hierin in Betracht gezogenen Modifikationen der Peptide zählen, ohne darauf beschränkt zu sein, Modifikationen der Seitenketten, ein Einbau nicht-natürlicher Aminosäuren und/oder ihrer Derivate während der Peptidsynthese und die Verwendung von Quervernetzern und anderen Methoden, die den Peptiden konformelle Beschränkungen auferlegen.
Beispiele der durch die vorliegende Erfindung in Betracht gezogenen Seitenketten-Modifikationen umfassen Modifikationen der Aminogruppen, wie etwa mittels reduktiver Alkylierung durch Reaktion mit einem Aldehyd, gefolgt von einer Reduktion mit NaBH₄; Amidierung mit Methylacetimidat; Acylierung mit Acetanhydrid; Carbamoylierung von Aminogruppen mit Cyanat; Trinitrobenzylierung von Aminogruppen mit 2,4,6-Trinitrobenzolsulfonsäure (TNBS); Acylierung von Aminogruppen mit Succinanhydrid und Tetrahydrophthalanhydrid; und Pyridoxylierung von Lysin mit Pyridoxal-5'-phosphat, gefolgt von einer Reduktion mit NaBH₄.
Die Guanidingruppe der Argininreste kann durch die Bildung von hetercyclischen Kondensationsprodukten mit Reagentien wie 2,3-Butandion, Phenylglyoxal und Glyoxal modifiziert werden.
Die Carboxylgruppe kann durch Carbodiimid-Aktivierung über O-Acylisoharnstoff-Bildung, gefolgt von einer anschließenden Derivatisierung zum Beispiel zu einem entsprechenden Amid, modifiziert werden.
Tryptophan-Reste können zum Beispiel durch Oxidation mit N-Bromsuccinimid oder Alkylierung des Indolrings mit 2-Hydroxy-5-nitrobenzylbromid oder Sulphenylhaliden modifiziert werden. Tyrosin-Reste dagegen können durch Nitrierung mit Tetranitromethan zur Bildung des 3-Nitrotyrosin-Derivats verändert werden.
Die Modifikation des Imidazolrings eines Histidin-Rests kann durch Alkylierung mit Iodessigsäure-Derivaten oder der N-Carbethoxylierung mit Diethylpyrocarbonat erreicht werden.
Zu Beispielen der Aufnahme von nicht-natürlichen Aminosäuren und Derivaten während der Peptidsynthese zählen, ohne darauf beschränkt zu sein, die Verwendung von Norleucin, 4-Aminobutyrsäure, 4-Amino-3-hydroxy-5-phenylpentansäure, 6-Aminohexansäure, t-Butylglycin, Norvalin, Phenylglycin, Ornithin, Sarcosin, 4-Amino-3-hydroxy-6-methylheptansäure, 2-Thienylalanin und/oder D-Isomeren von Aminosäuren.
Als weiteres Beispiel ist es bei der vorliegenden Erfindung möglich, den Rest bei X14 durch andere nicht-natürliche Aminosäuren mit hydrophoben Seitenketten wie Cha (beta-Cyclohexyl-L-alanin), Nal (beta-(2-Naphthyl)-alanin), phg (L-Phenylglycin), Tic (L-1,2,3,4-Tetrahydroisochinolin-3-carbonsäure), Thi (beta-(2-Thienyl)-L-alanin) oder deren D-Isomeren ohne wesentliche Veränderung der biologischen Aktivität zu ersetzen.
Es kann auch möglich sein, dem Peptid der vorliegenden Erfindung verschiedene Gruppen hinzuzuaddieren, die ihnen Vorteile verleihen, wie etwa eine erhöhte Potenz oder verlängerte Halbwertszeit in vivo, ohne die biologische Aktivität des Peptids wesentlich zu vermindern. Es ist beabsichtigt, dass solche Modifikationen des Peptids der vorliegenden Erfindung, die zu keiner Abnahme der biologischen Aktivität führen, in den Rahmen der vorliegenden Erfindung fallen.
Die Liganden der vorliegenden Erfindung können bei der Behandlung der folgenden Zustände nützlich sein:

– Zustände in Verbindung mit einer Entzündung (zum Beispiel einer Nasenentzündung, Rhinitis einschließlich allergischer und vasomotorischer, Asthma, Arthritis).
– Zustände in Verbindung mit einer neurogenen Entzündung (wie etwa Migräne, Kopfschmerzen, Entzündung des Auges, Rhinitis, etc.).
– Rhinitis – vasomotorische Rhinitis.
– Atemwegserkrankungen (wie etwa Lungenstauung, Asthma, Entzündung des oberen Atemwegs).
– Schlafstörungen.
– Zustände in Verbindung mit einer erhöhten sympathischen Nervenaktivität.
– Störungen in Verbindung mit einer sexuellen Dysfunktion und Reproduktionsstörungen.
– Störungen oder Erkrankungen in Bezug auf das Herz, Blutgefäße oder das Nierensystem (wie etwa Vasospasmus, Herzversagen, Schock, Herzhypertrophie, erhöhter Blutdruck, Angina, Myokardinfarkt, plötzlicher Herztod, Arrhythmie, periphere Verschlusskrankheit, Nierenversagen, etc.).
– Zustände in Verbindung mit einer erhöhten sympathischen Nervenaktivität (z. B. während oder nach einer Koronararterien-Chirurgie, und Eingriffen und Chirurgie im Magen-Darm-Trakt).
– Hirnerkrankungen und Erkrankungen in Verbindung mit Schmerz oder Nozizeption.
– Erkrankungen in Verbindung mit dem zentralen Nervensystem (z. B. Hirninfarkt, Neurodegeneration, Epilepsie, Hirnschlag, zerebraler Vasospasmus, Depression, Angstneurose und Dementia).
– Erkrankungen in Verbindung mit einer abnormalen Magen-Darm-Motilität und -Sekretion (z. B. Crohn-Krankheit).
– Erkrankungen und Zustände, die das Urogenitalsystem betreffen (z. B. Harninkontinenz).
– Störungen durch abnormale Alkohol- und Nahrungsaufnahme (wie etwa Fettsucht, Anorexie, Bulimie, etc.).

In einem zweiten Aspekt besteht die vorliegende Erfindung daher in einer Zusammensetzung zur Verwendung bei der Linderung einer Nasenverstopfung oder zur Behandlung einer für akutes Nierenversagen prädisponierenden Vasokonstriktion, gegen hypertonische Zustände, kardiovaskuläre Störungen, von Zuständen in Verbindung mit Lungenstauung, Entzündung, neurogener Entzündung, Schlafstörungen, Zuständen in Verbindung mit einer erhöhten sympathischen Nervenaktivität, Erkrankungen in Verbindung mit dem Zentralnervensystem, Zuständen in Verbindung mit Schmerz oder Nozizeption, Erkrankungen in Verbindung mit der Magen-Darm-Motilität und -Sekretion, Fettsucht, oder Alzheimer-Krankheit, oder als ein Antipsychotikum, wobei die Zusammensetzung das Peptid des ersten Aspekts der vorliegenden Erfindung und einen pharmazeutischen Träger umfasst.
In einem dritten Aspekt stellt die vorliegende Erfindung die Verwendung eines Liganden der Erfindung in der Herstellung einer Zusammensetzung zur Linderung einer Nasenverstopfung, Herabsetzung der Kardiovagus-Tätigkeit, Behandlung einer für akutes Nierenversagen prädisponierenden Vasokonstriktion, Bluthochdruck, kardiovaskulären Störungen, von Zuständen in Verbindung mit Lungenstauung, Entzündung, neurogener Entzündung, Schlafstörungen, Zuständen in Verbindung mit einer erhöhten sympathischen Nervenaktivität, Erkrankungen in Verbindung mit dem Zentralnervensystem, Zuständen in Verbindung mit Schmerz oder Nozizeption, Erkrankungen in Verbindung mit der Magen-Darm-Motilität und -Sekretion, Fettsucht, oder Alzheimer-Krankheit bei einem Patienten bereit.
In einer bevorzugten Ausführungsform des dritten Aspekts der vorliegenden Erfindung leidet der Patient an Nasenverstopfung, Lungenstauung oder einer für akutes Nierenversagen prädisponierenden Vasokonstriktion. In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird die Zusammensetzung als ein Nasenspray verabreicht.
Die Wirkverbindung kann in einer bequem geeigneten Weise verabreicht werden, zum Beispiel auf dem oralen, intravenösen (wo wasserlöslich), intramuskulären, subkutanen, intranasalen, intradermalen oder suppositorischen Weg oder durch Implantieren (z. B. unter Verwendung von zeitverzögert freisetzenden Molekülen). Sie kann auch in die Lungen inhaliert (trocken oder in Lösung) werden. In Abhängigkeit vom Verabreichungsweg können die Wirkstoffe eine Beschichtung mit einem Material erfordern, um die Inhaltsstoffe vor der Wirkung von Enzymen, Säuren oder anderen natürlichen Bedingungen zu schützen, die diese Inhaltsstoffe inaktivieren können. Zum Beispiel könnte eine geringe Lipophilie der Peptide zulassen, dass sie im Magen-Darm-Trakt durch Enzyme, die zum Spalten von Peptidbindungen fähig sind, und im Magen durch Säurehydrolyse zerstört werden. Um die Peptide durch eine andere als die parenterale Verabreichung zu verabreichen, könnten sie beispielsweise beschichtet werden oder verabreicht werden mit einem Material, das ihre Inaktivierung verhindert. Zum Beispiel können die Peptide in einem Lösungsmittel, in Liposomen verabreicht oder gemeinsam mit Enzyminhibitoren verabreicht werden. Zu Enzyminhibitoren zählen ein pankreatischer Trypsinhemmer, Diisopropylfluorphosphat (DFP) und Trasylol. Zu Liposomen zählen Wasser-in-Öl-Emulsionen ebenso wie herkömmliche Liposomen.
Die Wirkverbindungen können auch parenteral verabreicht werden. Dispersionen können auch in Glycerol, flüssigen Polyethylenglykolen, und Gemischen davon, und in Ölen zubereitet werden. Unter gewöhnlichen Bedingungen der Lagerung und Anwendung enthalten diese Präparate ein Konservierungsmittel, um das Wachstum von Mikroorganismen zu verhüten.
Zu für Injektionsanwendungen geeigneten pharmazeutischen Formen zählen sterile wässrige Lösungen (wo wasserlöslich) oder Dispersionen und sterile Pulver für die extemporierte Zubereitung steriler Injektionslösungen oder Dispersionen. In allen Fällen muss die Form steril und in dem Maße flüssig sein, dass eine leichte Spritzbarkeit vorliegt. Sie muss unter den Bedingungen der Herstellung und Lagerung stabil sein und muss gegen die kontaminierende Wirkung von Mikroorganismen, wie z. B. Bakterien und Pilzen, konserviert sein. Der Träger kann ein Lösungsmittel- oder Dispersionsmedium sein, das zum Beispiel Wasser, Ethanol, Polyol (z. B. Glycerol, Propylenglykol und flüssiges Polyethylenglykol und ähnliches), geeignete Gemische davon und Speiseöle enthält. Die geeignete Fluidität kann zum Beispiel durch Verwenden einer Beschichtung, wie etwa aus Lecithin, durch die Aufrechterhaltung der erforderlichen Teilchengröße im Falle der Dispersion und durch die Verwendung von grenzflächenaktiven Mitteln beibehalten werden. Die Verhütung der Wirkung von Mikroorganismen kann durch verschiedene antibakterielle und antifungale Mittel, z. B. Parabene, Chlorbutanol, Phenol, Sorbinsäure, Thiomersal und ähnliches, bewerkstelligt werden. In vielen Fällen wird es bevorzugt sein, isotonische Mittel, wie z. B. Zucker oder Natriumchlorid, aufzunehmen. Eine verlängerte Absorption der injizierbaren Zusammensetzungen kann durch Verwendung in den Zusammensetzungen von Absorptions-verzögernden Mitteln, zum Beispiel Aluminiummonostearat und Gelatine, bewerkstelligt werden.
Sterile Injektionslösungen werden durch Aufnahme der Wirkverbindungen in der erforderlichen Menge in das geeignete Lösungsmittel mit verschiedenen bedarfsbedingten Inhaltsstoffen, gefolgt von einer Filtersterilisation, zubereitet. Allgemein werden Dispersionen durch Aufnahme der verschiedenen sterilisieren Inhaltsstoffe in ein steriles Vehikel zubereitet, welches das zugrundeliegende Dispersionsmedium und die erforderlichen weiteren Inhaltsstoffe enthält. Im Falle der sterilen Pulver zur Verwendung als solches oder für die Zubereitung steriler Injektionslösungen sind die bevorzugten Herstellungsmethoden die Vakuumtrocknungs- und Gefriertrocknungstechniken, die ein Pulver des Wirkstoffs plus jeglichen gewünschten Inhaltsstoffs aus einer zuvor steril filtrierten Lösung davon ergeben.
Um die Natur der vorliegenden Erfindung klarer verständlich zu machen, werden nun bevorzugte Formen davon unter Bezugnahme auf die folgenden Beispiele und die Figur beschrieben werden, wobei:
1 die Wirkung von Ac[Ala24, Ala27, Leu28, Leu31]NPY(24–36) auf einen erhöhten renalen Gefäßwiderstand bei Ratten zeigt, ausgelöst durch elektrische Stimulierung des sympathischen Nierennervs.
Materialien und Methoden
In vivo
Experimente wurden an ausgewachsenen Ratten (Wistar) beiderlei Geschlechts (250 bis 350 g), anästhesiert mit Natriumpentobarbiton (Nembutal, Boehringer Ingelheim; 60 mg/kg, i. p.) vorgenommen. Die Luftröhre wurde kanüliert und das Tier künstlich beatmet. Die Oberschenkelvene wurde zur Verabreichung der Peptide und weiteren Dosierungen des Anästhetikums kanüliert. Die linke Oberschenkelarterie wurde zur Aufzeichnung des Arteriendrucks kanüliert. Beide Vagusnerven wurden durchschnitten. Dies wurde zur Ausschaltung vagal vermittelter Reflexwirkungen auf das Herz vorgenommen, was passieren kann, wenn der Blutdruck durch Neuropeptid Y erhöht wird. Das kardiale Ende des rechten Vagusnerven wurde alle 30 s mit einer 6 s-Folge von supramaximalen Stimuli (2 Hz, 1 ms; 7 V) unter Verwendung eines isolierten Square-Wave-Stimulators (Grass Instruments) stimuliert. Die Frequenz wurde so gewählt, dass das Pulsintervall um etwa 100 ms erhöht war, ein submaximaler Effekt auf diese Variable. Das Elektrokardiogramm wurde unter Verwendung von Nadelelektroden gemessen und auf einem Kanal eines Oszilloskops überwacht. Das Pulsintervall (der Zeitraum zwischen aufeinanderfolgenden Herzschlägen) wurde Schlag-für-Schlag durch EKG-Triggering aufgezeichnet. Das Pulsintervall und der Arteriendruck wurden auf dem Meßdatenschreiber aufgezeichnet.
Dosis-Wirkungs-Kurven wurden aus den Gruppendaten für alle Ratten konstruiert. Aufgrund des Langzeitverlaufs der Wirkung der getesteten Peptide wurden nicht jeder Ratte alle Peptide verabreicht. Üblicherweise erhielt jedoch jede Ratte Neuropeptid Y und zwei weitere Peptide.
Als einer Angabe der präjunktionalen Aktivität wurden zwei Parameter gemessen: die maximale prozentuale Hemmung der Zunahme des Pulsintervalls, wie durch Stimulation des Vagusnervs im Anschluss an die Injektion von Peptid hervorgerufen, und die Halbwertszeit des Abbaus dieser Wirkung (T50). Für die Pressortätigkeit, einem Indikator der postjunktionalen Aktivität, wurden ebenfalls zwei Parameter gemessen: die Spitzen-Pressorreaktion in Anschluss an die Injektion des Peptids und die Dauer des Anstiegs des Blutdrucks. Diese Indizes ergeben ein zuverlässiges Maß der Wirkungen eines Peptids an prä- und postjunktionalen Stellen und wurden bereits zuvor in diesem Labor für diesen Zweck angewendet (Potter et al., 1989; Postter et al., 1991). Die Ergebnisse wurden unter Anwendung eines One-Way-ANOVA analysiert.
Methoden für Experimente zur Nierendurchblutung (in vivo)
Es wurden Experimente an sechs ausgewachsenen Mischlingshunden beiderlei Geschlechts mit einem Gewicht von 18 bis 26 kg vorgenommen. Die Hunde wurden mit einer Bolusinjektion von Natriumpentobarbiton (36 mg/kg intravenös; Nembutal, Boehringer Ingelheim) anästhesiert und dann auf einer Infusion (2–3 mg/kg/Std.) gehalten. Die Tiere wurden künstlich beatmet, bei konstanter Temperatur gehalten, und der Blutdruck und die Herzfrequenz wurden kontinuierlich überwacht.
Die linke Niere wurde retroperitoneal freigelegt und die arterielle Nierendurchblutung kontinuierlich überwacht (Pernow & Lundberg, 1989a) unter Verwendung einer schallnahen Strömungssonde (Transonic System Inc., N. Y.). Die postganglionären Nerven zur Niere wurden isoliert, durchschnitten und über bipolaren Platinelektroden zur Stimulierung platziert (1–10 Hz, 5–10 V, 1–5 msek). Noradrenalin und Neuropeptid Y wurden als gemeinsam in der Niere vorhanden nachgewiesen und werden auf Stimulierung der Nierennerven hin gemeinsam freigesetzt (Pernow & Lundberg, 1989b).
Der Nierennerv wurde über einen Bereich von Frequenzen (1–10 Hz) für 30 Sekunden stimuliert, und es wurde eine Frequenz-Wirkungs-Kurve konstruiert. Die Wirkungen wurden bei der Spitzenveränderung im Strom gemessen. Diese Frequenz-Wirkungs-Beziehung wurde vor und nach einer Bolusdosis (40 nmol/kg) des NPY Y2-Rezeptoragonist untersucht. Die Wirkungen wurden als Veränderung im Gefäßwiderstand aufgezeichnet.
Methoden für die Bindungsexperimente (in vitro)
Zellkultur
SK-N-MC-Zellen, die den humanen Y1-Rezeptor exprimieren, und SMS-MSN-Zellen, die den humanen Y2-Rezeptor exprimieren, wurden von der ATCC erhalten. Sie wurden in 1 : 1 DMEM : Ham's F12-Medium (ICN) gezüchtet, enthaltend 10% fötales Kälberserum, 0,1% nicht-essentielle Aminosäuren, 0,2 mM Glutamin und 0,056% Natriumbicarbonat. Die zusammenfließenden Zellen wurden durch Abschaben geerntet und die Pellets bei –80°C gelagert. Am Tag der Verwendung wurden die Zellen aufgetaut, einmal in Bindungspuffersalzen gewaschen, mehrmals durch eine 22 ga.-Nadel geleitet, und der Proteingehalt wurde unter Verwendung von Bicinchoninsäure (BCA-Kit, Pierce) untersucht. Das Zellvolumen wurde zum Erhalt einer Proteinkonzentration von 200–400 μg/ml (SMS-MSN-Zellen) oder 400–800 μg/ml (SK-N-MC-Zellen) eingestellt, und BSA und Proteasehemmer wurden zugegeben.
Rezeptorbindungsassays
Rezeptorbindungsassays wurden in Multiscreen FC-Platten (Millipore) vorgenommen [Gregor et al., 1996], die über Nacht bei 4°C mit 0,5% PVP/0,1% Tween-20 [Scott et al., 1995) zur Verhinderung einer nicht-spezifischen Bindung vorbeschichtet worden waren. Direkt vor der Verwendung wurden die Platten filtriert und zweimal mit 50 mM Tris-HCl, pH 7,4/0,1% BSA gewaschen. 30 pM [125]NPY (Amersham), Kompetitoren (10 pM bis 1 μM) und Zellen (10–20 μg für SMS-MSN oder 20–40 μg für SK-N-MC) wurden für 2,5 Stunden bei Raumtemperatur in einem Gesamtvolumen von 200 μl in Bindungspuffer inkubiert, enthaltend 50 mM Tris-HCl, pH 7,4, 115 mM NaCl, 15 mM KCl, 5 mM CaCl₂, 2 mM MgSO₄, 1,25 mM KH₂PO₄, 25 mM NaHCO₃, 10 mM Glucose, 0,1% BSA, 4 mg/ml Bacitracin und 0,5 mM PMSF [Tschöpl et al., 1993]. Die Bindung wurde durch Filtration beendigt. Die Filter wurden zweimal durch Schnellfiltrierung mit 200 μl-Volumina an 50 mM Tris-HCl, pH 7,4/0,1% BSA bei 2°C gewaschen und auf einem LKB-Gammazähler ausgezählt. Die spezifische Bindung wurde durch nichtlineare Regression unter Verwendung einer Einzelstellen-Fittingfunktion (Graphpad Prism) analysiert. Die nicht-spezifische Bindung wurde durch Bindung in Gegenwart von 1 μM Kompetitor definiert.
Peptidsynthese und Reinigung
Peptidamide wurden durch standardmäßige Boc- oder Fmoc-Festphasen-Chemie synthetisiert.
Die Boc-Synthese wurde unter Verwendung von MBHA-Harz auf Polystyrolbasis durchgeführt. Die Acetylierung am Ende der Synthese wurde unter Verwendung von Acetanhydrid in Methanol vorgenommen. Die Peptide wurden durch Fluorwasserstoff-haltiges Phenol (1,3 g bis 10 ml) als einem Säurefänger gespalten und in eine wässrige Phase (30% wässriges Acetonitril v/v) extrahiert. Die Säurefänger wurden mit Ether gewaschen, und die wässrigen Rohextrakte wurden zum Erhalt des Rohpeptids lyophilisiert. Die für jede Aminosäure gewählten Seitenketten-Schutzgruppen wurden während des Spaltungsvorgangs entfernt. Die Peptide wurden mittels Ionenaustausch- und Umkehrphasen-HPLC (Hochdruck-Flüssigchromatographie) auf 95% gereinigt.
Die Fmoc-Synthese wurde unter Verwendung von Tentagel SRAM-Harz durchgeführt. Die Acetylierung wird als dem letzten Zyklus unter Verwendung von AcONSu (N-Succinimidylester der Essigsäure) vorgenommen. Die Peptide wurden mittels 95% TFA-enthaltendem Thioanisol und p-Cresol als Säurefänger gespalten und in eine wässrige Phase extrahiert, die 30% Acetonitril enthielt. Die Säurefänger wurden mit Ether gewaschen, und die wässrigen Rohextrakte wurden dann zum Erhalt der Rohpeptide lyophilisiert, die mittels Ionenaustausch- und Umkehrphasen-HPLC auf 95% gereinigt wurden. Die Peptide wurden auf die Aminosäure-Zusammensetzung und auf die korrekten Molekülionen durch Elektrospray-Massenspektrometrie analysiert. Die Reinheit wurde sowohl mittels analytischer HPLC als auch CE (Kapillarelektrophorese) beurteilt. Alle Peptide, die positive Nettoladungen trugen, wurden als Acetatsalze präsentiert, und die Peptidgehalte in allen Proben wurden auf der Grundlage des Pierce-Standards, wie bei der Picotag-Aminosäureanalyse verwendet, bestimmt.
Ergebnisse und Diskussion
Neuartige Peptide, basierend auf der Aminosäuresequenz des Neuropeptids Y in der von Aminosäuren 24–36 besetzten Region, wurden synthetisiert und auf ihre in vivo-Aktivität getestet.
Von allen in vivo bei Ratten getesteten Molekülen erhöhte lediglich NPY den Blutdruck in einer dosisabhängigen Weise signifikant. Keine der anderen Verbindungen veränderte den Blutdruck bei den getesteten Dosen signifikant. Dies ist Indikativ für das Fehlen einer direkten Wirkung auf Neuropeptid-Y-Rezeptoren, die mit Anstiegen des Blutdrucks in Verbindung stehen, nämlich des Y1-Rezeptor-Subtyps.
Die Verabreichung aller in Tabelle 1 aufgelisteten Verbindungen hemmt in Dosisabhängiger Weise die Senkung der Herzfrequenz aufgrund einer elektrischen Stimula tion des Vagusnervs. Bemerkenswerterweise führte eine Substitution von Ala an jeglicher Position von 24 bis 31 in Ac(Leu28, Leu31]NPY(24–36) zu einer erhöhten Potenz (Verminderung der EC50) als einem Inhibitor der Wirkung der Vagusstimulation auf die Herzfrequenz. Diese Hemmung der Wirkung der Vagusstimulation zeigt eine Verminderung der Freisetzung von Acetylcholin aus der parasympathischen Versorgung des Herzens an und wurde der Stimulierung der NPY Y2-Rezeptoren zugeschrieben (Potter et al., 1994). Ala-Substitutionen an Positionen 24 bis 31 waren alle mit einer hohen Affinität für NPY Y2-Rezpetoren und einer geringen Affinität für NPY Y1-Rezeptoren verbunden (Tabelle 1). Unerwarteterweise lag keine direkte Korrelation zwischen der in vivo-Aktivität beim Hemmen der Vagusnerv-vermittelten Senkungen der Herzfrequenz und der Affinität für Y2-Rezeptoren vor, was eine erhöhte in vivo-Stabilität einiger Verbindungen anzeigen könnte. Diese Erhöhung der biologischen Aktivität durch Ala-Substitution in einem beliebigen von 8 der 13 Aminosäure-Resten von Ac[L28, L31]NPY24-36 war unerwartet. Noch überraschender war der Befund, dass mehrfache Ala-Substitutionen Verbindungen erzeugen wie Ac[A24, A27, L28, L31]NPY24–36, AC[A26, A27, L28, L31]NPY24–36 und Ac[A24, 26, 27, 30, 31, L28]NPY24–36, die außerdem in ihrer in vivo-Aktivität bei Y2-Rezeptoren erhöht waren. Die Beobachtung, dass 5 Reste der 13 durch Ala ersetzt werden konnten, bedeutet, dass die vergleichsweise verlängerten Seitenketten in diesen Positionen (24,26,27,30,31) für die Beibehaltung der Wirksamkeit oder Affinität bei NPY Y2-Rezeptoren nicht wesentlich ist. Dies ist überraschend, da die ersetzten Aminosäure-Reste von vielfältiger Struktur und Eigenschaften sind, nämlich zwei aromatisch (His, Tyr) sind, eine mit einer Carboxyamid-Seitenkette und der Rest mit aliphatischen Seitenketten versehen ist, die drei Kohlenstoffe mehr als Ala tragen. Weiterhin war die Affinität der vielfach Ala-substituierten Verbindungen bei NPY Y2-Rezeptoren ähnlich oder besser als die von Ac[L28, L31]NPY24–36, obschon die Substitution von Leu24 oder von His26 alleine durch Ala zu einer offenkundigen Verminderung der Affinität führte. Eine solche Beibehaltung, oder Steigerung, der Aktivitäten konnte nicht vorhergesagt werden. Die vielfach Ala-enthaltende Verbindung Ac[A24, A27, L28, L31]NPY24–36 wurde auf ihre Fähigkeit ausgewertet, die Zunahme des renalen Gefäßwiderstands zu hemmen, die durch die Nierennerv-Stimulation ausgelöst wurde. Eine 40 nmol-Dosis dieser Verbindung, die keine direkte Wirkung auf den Blutkreislauf ausübte (Tabelle 1), hemmte nahezu vollständig die Wirkung der Nerven stimulation (1), was eine Hemmung der Transmitterfreisetzung aus dem stimulierten Nerv anzeigt. Diese Verbindung zeigt eine hohe Affinität für NPY Y2-Rezeptoren, weshalb, obschon diese eine Hemmung der Transmitterfreisetzung aus Nierennerven vermittelnden Rezeptoren nicht identifiziert worden sind, diese als Y2-artig charakterisiert werden können.
Die in vivo-Beobachtungen zeigen, dass diese Verbindungen generell die Fähigkeit zur Hemmung der Neurotransmitter-Freisetzung aus sympathischen und parasympathischen Nerven aufweisen und von den Agenzien zu erwarten stünde, dass sie eine Aktivität unter Gegebenheiten zeigen würden, bei denen die Hemmung einer Neurotransmission einer jeglichen Art wünschenswert wäre. Beispiele der Gegebenheiten, unter denen eine Hemmung der Neurotransmission wünschenswert sein kann, sind Zustände wie Nasenverstopfung, Lungenstauung und neurogene Entzündung.
Für Fachleute des Gebiets wird erkennbar sein, dass zahlreiche Abweichungen und/oder Abwandlungen an der Erfindung vorgenommen werden können, wie in den spezifischen Ausführungsformen gezeigt, ohne vom Geiste oder Rahmen der Erfindung, wie breit beschrieben, abzuweichen. Die vorliegenden Ausführungsformen sind daher in jeglicher Hinsicht als Veranschaulichungen und nicht als Beschränkungen zu verstehen.
Tabelle 1 In vivo-Aktivitäten [Veränderung bei Pulsintervall (P1: Aktivität an Y2-artigen Rezeptoren) und bei Blutdruck (BD: Aktivität an Y1-Rezeptoren) in anästhesierten Ratten] und Affinitäten für Y1- und Y2-Rezpetoren in vitro einer Reihe von Peptiden
Literaturnachweise

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Claims

Ligand für einen Neuropeptid-Y2-Rezeptor oder einen Neuropeptid-Y2-artigen Rezeptor mit der Formel: X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15 worin X1 H, R1-CO oder eine oder zwei natürlich vorkommende Aminosäuren ist; X2 Leu, Ile, Val, Nle, Sar, Gly, Ala, Aib, D-Leu, D-Ile, D-Val, D-Ala oder D-Nle ist; X3 Arg, Lys, Orn, Ala, Dbu oder His ist; X4 His, Lys, Arg, Ala, Gly, Ser, Thr, Asn, Gln oder Aib ist; X5 Tyr, Phe, Ala, Gly, Ser, Thr, Asn, Gln oder Aib ist; X6 Leu, Ile, Val, Ala, Arg oder Nle ist; X7 Asn, Ala oder Gln ist; X8 Leu, Ile, Val, Ala, Aib oder Nle ist; X9 Leu, Ile, Val, Ala, Aib oder Nle ist; X10 Thr, Ala oder Ser ist; X11 Arg, Lys oder Orn ist; X12 Gln, Pro oder Asn ist; X13 Arg, Lys oder Orn ist; X14 Tyr, Phe, His, Trp, D-Tyr, D-Phe, D-His oder D-Trp ist; X15 OH, NH₂, NHR2, NR3R4 oder eine oder zwei natürlich vorkommende Aminosäuren ist, wobei die endständige Aminosäure in der normalen oder Amid-Form vorliegt; worin (a) R1, R2, R3 und R4 unabhängig Alkylgruppen sind, von gerader, verzweigter oder alicyclischer Struktur; (b) mindestens eines von X2 bis X10 Ala ist; (c) wenn X5 Phe ist, X9 Leu, Ala oder Nle ist; und (d) der Ligand kein Peptid der folgenden Struktur ist Ala-Ser-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Ala-Arg-Gln-Arg-Tyr oder Ala-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Val-Ala-Arg-Gln-Arg-Tyr.
Ligand nach Anspruch 1, worin mindestens zwei Gruppen, gewählt aus X2, X4, X5, X8 und X9, Ala sind.
Ligand nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, worin X2 und X5 Ala sind.
Ligand nach einem der Ansprüche 1 bis 3, worin R1 eine Alkylgruppe ist, gewählt aus Methyl, Ethyl, n-Butyl, t-Butyl, Cyclohexyl und anderen Alkylgruppen mit 10 oder weniger Kohlenstoffatomen.
Ligand nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin R2, R3 und R4 Alkylgruppen sind, unabhängig gewählt aus Methyl, Ethyl, Isopropyl, n-Butyl, Cyclohexyl und anderen Alkylgruppen mit 10 oder weniger Kohlenstoffatomen.
Ligand nach einem der Ansprüche 1 bis 5, welcher folgende Formel aufweist: Ac-Ala-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Ala-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Leu-Ala-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Leu-Arg-Ala-Tyr-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Leu-Arg-His-Ala-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Leu-Arg-His-Tyr-Ala-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Ala-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Ala-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Leu-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Ala-Arg-His-Ala-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Leu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-Ala-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-DLeu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂, oder Ac-DLeu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH₂, oder Ac-DLeu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH₂, oder Ac-DLeu-Arg-Ala-Aib-Leu-Asn-Ala-Aib-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH₂, oder Ac-DLeu-Lys-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Lys-Gln-Lys-Phe-NH₂, oder Butyryl-Leu-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Ala-Ala-Thr-Arg-Gln-Arg-Phe-NH₂, oder Ac-Ala-Arg-Ala-Ala-Leu-Asn-Leu-Leu-Thr-Arg-Gln-Arg-DTyr-NH₂, oder Ac-Ala-Arg-Ala-Ala-Leu-Gln-Ile-Leu-Ser-Arg-Asn-Arg-Tyr-NH₂.
Ligand nach einem der Ansprüche 1 bis 6, worin der Neuropeptid-Y-Rezeptor ein Y2-artiger Neuropeptid-Y-Rezeptor ist.
Ligand nach einem der Ansprüche 1 bis 7, worin der Neuropeptid-Y-Rezeptor ein Y2-Neuropeptid-Y-Rezeptor ist.
Zusammensetzung zur Verwendung bei der Behandlung von Zuständen, bei denen eine verminderte Neurotransmitter-Freisetzung vorteilhaft ist, insbesondere bei der Linderung einer Nasenverstopfung oder zur Behandlung einer für akutes Nierenversagen prädisponierenden Vasokonstriktion, gegen hypertonische Zustände, kardiovaskuläre Störungen, Zustände in Verbindung mit Lungenstauung, Entzündung, neurogener Entzündung, Schlafstörungen, Zustände in Verbindung mit einer erhöhten sympathetischen Nervenaktivität, Erkrankungen in Verbindung mit dem Zentralnervensystem, Zustände in Verbindung mit Schmerz oder Nozizeption, Erkrankungen in Verbindung mit der Magen-Darm-Motilität und -Sekretion, Fettsucht oder Alzheimer-Krankheit, oder als ein Antipsychotikum, wobei die Zusammensetzung einen Liganden nach einem der Ansprüche 1 bis 8 und einen pharmazeutischen Träger umfasst.
Verwendung eines Liganden nach einem der Ansprüche 1 bis 8 in der Herstellung einer Zusammensetzung zur Linderung einer Nasenverstopfung, Herabsetzung der Herzvagus-Tätigkeit oder zur Behandlung einer für akutes Nierenversagen prädisponierenden Vasokonstriktion, gegen Hypertonie, kardiovaskuläre Störungen, Zustände in Verbindung mit Lungenstauung, Entzündung, neurogener Entzündung, Schlafstörungen, Zustände in Verbindung mit einer erhöhten sympathetischen Nervenaktivität, Erkrankungen in Verbindung mit dem Zentralnervensystem, Zustände in Verbindung mit Schmerz oder Nozizeption, Erkrankungen in Verbindung mit der Magen-Darm-Motilität und -Sekretion, Fettsucht oder Alzheimer-Krankheit bei einem Patienten.
Verwendung nach Anspruch 10, wobei die Zusammensetzung zur Linderung einer Nasenverstopfung nasal verabreicht wird.