DE69534923T2

DE69534923T2 - Anabolische zubereitung für knochenmasse enthaltend olpadronat

Info

Publication number: DE69534923T2
Application number: DE69534923T
Authority: DE
Inventors: Socrates Papapoulos; Facultad Ciencias Medicas Jose Luis CEMFOC FERRETTI; Rafael Labriola; Nelida Mondelo; Emilio J.A. Roldan
Original assignee: Gador SA; Universiteit Leiden
Current assignee: Gador SA; Universiteit Leiden
Priority date: 1994-12-28
Filing date: 1995-12-27
Publication date: 2006-11-23
Anticipated expiration: 2015-12-28
Also published as: AU701258B2; AU4434796A; KR100385697B1; EP0800397A1; DE69534923D1; CA2208714A1; AR000555A1; ZA9510995B; BR9510123A; WO1996019998A1; ES2262145T3; JP3796693B2; JPH11502506A; EP0800397B1; CA2208714C

Description

Hintergrund der Erfindung:
Bisphosphonate, auch bekannt als Diphosphonate, sind synthetische Analoga von Pyrophosphat, gekennzeichnet durch zwei Kohlenstoff-Phosphatbindungen und eine hohe Affinität für mineralisierte Gewebe. Der Ersatz des Sauerstoffatoms in den Pyrophosphat-Molekülen (P-O-P) durch ein Kohlenstoff in den Bisphosphonat-Molekülen (P-C-P) machte die letzteren Verbindungen beständig gegenüber biologischem Abbau und geeignet für klinische Verwendung. Bisphosphonate wurden ursprünglich als Inhibitoren des Calciumkristallwachstums entwickelt, und es wurde festgestellt, daß sie Osteoklastenvermittelte Knochenresorption unterdrücken. Sie wurden anschließend für die Behandlung akuter und chronischer Zustände verwendet, die gekennzeichnet sind durch erhöhte Knochenresorption und/oder beschleunigten Knochenverlust, wie Osteoporose.
Langzeit-Knochenresorptionshemmung kann jedoch den Knochenremodellierungsprozeß beeinflussen, und als Folge die Knochenqualität, was zu einem schlechten biomechanischem Verhalten und anschließendem erhöhten Bruchrisiko führt.
Es wurde weiter festgestellt, daß das Vorhandensein eines Stickstoffmoleküls in der Seitenkette der Bisphosphonatstruktur seine Potenz und Spezifität gegenüber Knochenresorption erhöht.
Die Verwendung von Bisphosphonaten bei der Behandlung von Knochenstoffwechselstörungen ist im Prinzip bekannt, wie etwa Verfahren zur Wechselwirkung mit abnormer Ablagerung und Lösung von schwerlöslichen Calciumsalzen oder als Knochenresorptionshemmung. U.S.-Pat. Nr. 3,962,432 offenbart die Verwendung von Aminoalkandiphosphonsäuren zur Behandlung einer Vielzahl von Calciumstörungen. U.S.-Pat. Nr. 4,711,880 offenbart kristallines Dinatrium-3-amino-1-hydroxypropan-1,1-diphosphonat-Pentahydrat zur oralen Behandlung von Störungen des Calcium- und Phosphat-Stoffwechsels. U.S.-Pat. Nr. 5,137,880 offenbart bicyclische Diphosphonatverbindungen, pharmazeutische Präparate und Verfahren zur Behandlung von abnormem Calcium- und Phosphat-Stoffwechsel. U.S.-Pat.-Nr. 5,205,253 offenbart Diphosphonsäure-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und pharmazeutische Präparate, die diese Verbindungen enthalten, zur Behandlung des Calcium-Stoffwechsels. PCT/WO93/11786 offenbart ein Verfahren zur Behandlung von Osteoporose unter Verwendung von Bisphosphonaten und Parathyroid-Hormon. PCT/WO93/11774 offenbart die Behandlung von Periodontitis mit Alendronat.
Die Verwendung von Olpadronat und seinen Derivaten als Inhibitoren des Calciumkristallwachstums ist ebenfalls im Prinzip bekannt. U.S.-Pat. Nr. 4,054,598 offenbart ein Verfahren mit Komplexbildnern, insbesondere für Erdalkalimetall-Ionen, mit der Formel von 1-Hydroxy-3-aminoalkan-1,1-diphosphonsäuren, das nützlich ist für die Behandlung von Störungen des Calcium- oder Phosphat-Stoffwechsels, die gekennzeichnet sind durch abnorme Abscheidung von schwerlöslichen Calciumsalzen oder die abnorme Lösung von harten Geweben, was Verluste an harter Knochensubstanz bewirkt, die nicht ersetzt werden kann oder nur durch unvollständig kristallisierte Gewebe, wie etwa Paget-Krankheit, Lithiasis, Arthritis und andere. Spanisches Patent Nr. P9100885 (Veröffentlichungs-Nr. ES-A-2034877) offenbart pharmazeutische Liposom-Präparate, die Bisphosphonate als aktive Verbindungen enthalten.
Ein von der Kochenresorptionshemmung unterschiedlicher Effekt ist erforscht worden und anabolische Phasen sind cyclischer Bisphosphonat-Behandlung hinzugefügt worden (EP-A-162510).
Aus Bone Min., 17(sup.1), 1992, 150, J. Bone Miner. Res., 6(sup.1), 1991, S 128; und J. Bone Miner. Res., 5(sup. 2), 1990, 5105, ist bekannt, daß Olpadronat Knochenmasse und spezifische biomechanische Eigenschaften von Knochen erhöht und erhält.
Aus Drugs Exp. Clin. Res., 20(3), 1994, 103-108, ist die Verwendung von Olpadronat zur Behandlung von Paget-Krankheit bekannt.
Br. J. Clin. Pract., 48(6), 1994, 323-326 und WO 94/00129 beschreiben die Verwendung von Olpadronat zur Behandlung von Osteoporose.
Die Verwendung von Olpadronat zur Behandlung von Knochenbrüchen ist aus EP-A-0 600834 bekannt.
WO 92/14474 beschreibt Kombinationen von Phosphonaten mit Östrogen.
Es ist nunmehr von den Erfindern hiervon entdeckt worden, daß Olpadronat, erhalten durch ein hierin beschriebenes Syntheseverfahren (bereits bekannt aus dem argentinischen Patent Nr. 200,473, das ein Verfahren zur Herstellung von 1-Hydroxyalkylidendiphosphonsäuren und ihren Salzen offenbart, erweitert im argentinischen Patent Nr. 218,558, das ein Verfahren zur Herstellung von 3-Amino-1-hydroxypropylidendiphosphonsäure und deren Salzen offenbart), einen originären anabolischen Wirkungsmechanismus zeigt, der Knochenmasse erhält und erhöht, bei nicht-toxischen Dosen ohne Reizung des Magen-Darm-Traktes selbst bei hohen Dosen.
Zusammenfassung der Erfindung:
Die Erfindung betrifft die Verwendung von Olpadronat-Zusammensetzungen und -Kombinationen als ein neues anabolisches und nicht-toxisches Arzneimittel, um Knochenmasseverlustzustände, wie etwa verlängerte Bettruhe, Arthritis, Nebenschilddrüsenüberfunktion und Paradontose, zu verhindern oder zu behandeln.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird eine neuartige Verwendung einer wirksamen nichttoxischen Menge [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropyliden]-bisphosphonsäure oder Olpadronat (generischer WHO-Name) oder des Mononatriumsalzes oder eines anderen pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben zur Herstellung eines Arzneimittels zur anabolischen Erhaltung und Erhöhung von Knochenmasse bereitgestellt. Solche Bemühungen beziehen sich auf die Verbesserung biomechanischer Eigenschaften von Knochen in menschlichen oder anderen tierischen Patienten, die bereits von Knochenmasseverlust befallen sind.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung von Olpadronat-Zusammensetzungen und -Kombinationen in Behandlungen zur Verbesserung von Knochenmaterialqualität unabhängig von Knochenmassequantität.
Zusätzlich schließt die Erfindung gleichzeitige oder sequentielle Verabreichung wenigstens eines Calciumsalzes, von Vitamin D oder Derivaten desselben, wenigstens eines Fluoridsalzes, wenigstens eines Androgens und/oder wenigstens eines Östrogens ein.
Olpadronat kann vorzugsweise in oralen Formulierungen oder intravenös mit oder ohne einen pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff, Verdünnungsmittel oder Vehikel verwendet werden.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird eine neuartige Verwendung einer wirksamen nichttoxischen Menge [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropyliden]-bisphosphonsäure oder Olpadronat oder des Mononatriumsalzes oder eines anderen pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Zuständen aufgrund von verlängerter Bettruhe und knochenkatabolischen Veränderungen, die sekundär sind zu Arthritis, Nebenschilddrüsenüberfunktion und Paradontose, bereitgestellt, wobei die orale Dosis im Bereich von 1 bis 15 mg/Tag liegt und wobei die intravenöse Dosis im Bereich von 0,025 bis 0,2 mg/kg/Anwendung liegt.
Die orale Dosis Olpadronat (oder seines Salzes) liegt im Bereich von 1 bis 15 mg/Tag [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropyliden]-bisphosphonsäure oder des Mononatriumsalzes oder eines anderen pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben. Alternativ liegt die intravenöse Dosis Olpadronat (oder seines Salzes) im Bereich von 0,025 bis 0,2 mg/kg/Anwendung [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropyliden]-bisphosphonsäure oder des Natriumsalzes oder eines anderen pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung:
Olpadronat-Synthese:
a. Darstellung von 3-(N,N-Dimethylamino)-propionsäure (I).
Überführe 153 l Salzsäure und 30 l 3-(N,N-Dimethylamino)-propionnitril in einen 250 l-Reaktor. Rühre während 3 Stunden, kühle ab und filtriere. Konzentriere das Filtrat unter verringertem Druck, bis die Hälfte seines ursprünglichen Volumens erreicht ist. Gebe 40 l Isopropanol hinzu und kühle ab. Filtriere die Suspension unter verringertem Druck und wasche mit Isopropanol. Trockne bis zu konstantem Gewicht. 41,3 kg 3-(N,N-Dimethylamino)-propionsäure mit einem Schmelzpunkt von 188-192°C werden erhalten.
b. Darstellung von [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropoyliden]-bisphosphonsäure (II)
Überführe 2 kg (I) in einen 22 l-Reaktor. Gebe 0,94 l Wasser und dann langsam, unter konstantem Rühren, 2,3 l Phosphortrichlorid zu. Nach dieser Zugabe wird die Mischung während einer Stunde rührengelassen. Gebe langsam unter Rühren 0,99 l Phosphoroxychlorid hinzu und anschließend 2 l Wasser. Filtriere unter verringertem Druck und wasche den Feststoff mit Methanol. Trockne in einem Umluftofen, bis der Feststoff trocken ist, 1,3 kg (II) werden erhalten.
c. Darstellung von [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropyliden]-bisphosphonsäure-Mononatriumsalz (III).
Gebe unter konstantem Rühren 11,11 kg (II) zu 33,3 l Natriumhydroxid (50,7 g/l) hinzu. Filtriere, falls erforderlich, gebe 122 l Methanol hinzu und trockne in einem Umluftofen bis zu konstantem Gewicht. 10,7 kg (III) werden erhalten.
Beispiel 2 (Vergleichsbeispiel)
In-vivo-Test der anabolischen Wirkung
Verbindung (III) wurde in Dosen zwischen 5 und 50 mg/Tag oral an Patienten mit vertebraler Osteoporose und einem Altersbereich zwischen 2 und 70 Jahren gegeben. Bei den erwachsenen Patienten wurden Anstiege der Knochenmasse von bis zu 13% der anfänglichen Werte bei einer Verfolgung über 3 Jahre beobachtet. Bei den Kindern wurden nicht nur Anstiege der Knochenmasse erreicht, sondern es gab auch radiologische Belege der Verstärkung von Rinden- und Trabekelknochen.
Beispiel 3
In-vivo-Test der Knochenmasseerhöhung bei intakten Ratten.
Männliche und weibliche intakte Wistar-Ratten (mit normaler Knochenmasse) wurden mit oraler Verbindung (III), 8, 40 und 200 mg/kg/d, für 6 Monate behandelt. Oberschenkelknochen wurden seziert und der Knochenmineralgehalt (BMC) und die Gesamtknochenfläche (TBA) wurden mit einem speziell programmierten Norland-Röntgendensitometer gemessen. Die Knochenmineraldichte (BMD) wurde als das BMC/TBA-Verhältnis bestimmt. Es gab signifikante Anstiege im BMD der behandelten Gruppen im Bereich zwischen 39 bis 67%.
Beispiel 4
In-viv-Test der Knochenmasseerhaltung in osteopenischen Ratten.
Verhinderung von Knochenverlust, induziert durch Ovariektomie (ox) und unilaterale Hüftektomie (cx) in weiblichen Ratten oder durch unilaterale Hüftektomie in männlichen Ratten, wurden unter Verwendung verschiedener Modi (zyklisch, kontinuierlich) und Verabreichungswege von Verbindung (III) untersucht.

a. Orale Verbindung (III) oder Mononatriumsalz von Pamidronat wurden weiblichen Wistar-Ratten unmittelbar nach der Operation für 11 Wochen gegeben. Die Knochemasse (BMD) wurde bestimmt, wie oben beschrieben. In ox/cx-Tieren gab es eine Abnahme der BMD, deren Größe von der gemessenen Stelle und Seite abhing. (III) verhinderte dosisabhängig Knochenverlust in Oberschenkelknochen und Wirbeln, wobei es 5-10-mal potenter war als Mononatriumsalz von Pamidronat.
b. Intravenöse Verbindung (III), gegeben in unterschiedlichen Dosen alle 15 Tage nach der Operation für 12 Wochen an weibliche Kontrolltiere oder ox/cx-Ratten. Die verwendeten Dosen waren 75, 150 und 300 μg/kg. In dieser Studie reichte der Knochenverlust in der Kontrollgruppe bis zu 19,1 % links (cx) und 8,6% im rechten Oberschenkelknochen. Die drei Dosisniveaus von i.v. Olpadronat waren in der Lage, Rinden- ebenso wie Trabelkel-Knochenverlust zu verhindern. Obgleich der BMD-Verlust in Vertebralkörpern der Kontrollgruppe etwa 11,8% betrug, zeigten behandelte Tiere nicht nur Erhaltung, sondern zeigten auch einen Anstieg von 4,7 bis 8,6%. Ganzkörpermineraldichte nahm 5,2% in der Kontrollgruppe ab. Dies konnte nur in den zwei mit höherer Dosis behandelten Gruppen verhindert werden.
c. Intravenöse Verbindung (III) oder Mononatriumsalz von Pamidronat wurden 3 Monate alten männlichen Kontrolltieren von cx-Ratten nach der Operation für 3 Monate gegeben. Behandelt mit intravenös wiederholten Dosen von Verbindung (III), 0,5, 0,25, 0,125 mg/kg Körpergewicht, verglichen mit Mononatriumsalz von Pamidronat, 5, 2, 1,5 und 1,25 mg/kg Körpergewicht. Die Dosen wurden gemäß den vorherigen Ergebnissen, die mit Mononatriumsalz von Pamidronat und seinem Äquivalent beobachtet worden waren, ausgewählt. Jede Dosis wurde verdünnt, um jedem Tier ein ähnliches Volumen zu verabreichen (2 ml/kg). Insgesamt 7 Injektionen wurden alle 15 Tage verabreicht. Operierte nicht-behandelte Gruppen von Ratten dienten als Kontrolltiere. Immobilisiertes Bein zeigte 9% weniger Knochenmasse in seinem Oberschenkelknochen als im kontralateraler Oberschenkelknochen, bestimmt durch densitometrische Techniken (dualer Photonendensitometer Norland XR-26 mit einer an kleine Tiere angepaßten Software). Beide Bisphosphonate verhinderten Knochenverlust mit allen verabreichten Dosisniveaus.
d. Regionaler Knochenverlust (proximaler und distaler Oberschenkelknochen und Mittelschaft) war größer bei distalem Oberschenkelknochen (17%). Knochenmineralisierungszuwachs war bei beiden Bisphosphonaten signifikant erhöht. Um den Mineralisierungsverlust an Mittelschaftoberschenkelknochen (vorherrschend von Rindengewebe) betrug 6% bei den Kontrolltieren. Alle Dosen von Verbindung (III) waren darin wirksam, Osteopenie zu verhindern, während das Mononatriumsalz von Pamidronat in diesem Bereich teilweise wirksam war. Die Dosisniveaus von Verbindung (III) waren 10-mal niedriger. Dieses Modell für Inaktivitäts-Osteopenie bei Ratten zeigte Überlegenheit im Hinblick auf intakten Knochen bei viel niedrigeren Dosen als Mononatriumsalz von Pamidronat.

Beispiel 5
In-vivo-Test von Knochenmasseerhöhung in ostopenischen Ratten.
Die Wirkungen zyklischer Verabreichungen von I.V.-Verbindung (III) an osteopenische Ratten wurden bewertet, um zu erhellen, ob die Verbindung in der Lage war, Knochenmineralisierungsdichte bei Tieren wiederherzustellen, die zuvor einem Knochenverlust unterworfen worden waren.
Weibliche Ratten, 2,5 Monate alt, n 6-8 in jeder Gruppe, wurden ovariektomisiert und halbhüftektomisiert gemäß früheren Experimenten. Die Tiere wurden während 13 Wochen nach dem chirurgischen Eingriff untergebracht und dann wurde Verbindung (III) intravenös alle 15 Tage während der folgenden 12 Wochen in 150, 300 oder 600 μg verabreicht. Eine operierte, nicht-behandelte Gruppe und intakte Tiere dienten als Kontrolltiere. Rückgrat- und Oberschenkelknochen-BMD wurde durch Densitometrie wie in früheren Experimenten bestimmt. Das Rückgrat von nicht-behandelten Tieren zeigte eine durchschnittliche BMD-Abnahme von 12,9% im Vergleich mit nicht-operierten Ratten. Statt dessen betrug die durchschnittliche prozentuale BMD-Abnahme –9,3, –4,3 und –3,6% in mit Verbindung (III) behandelten Gruppen (1). Die letzten zwei Werte entsprechen den höheren Dosen, von denen festgestellt wurde, daß sie gegenüber nicht-operierten Ratten nicht signifikant waren. Statistische Ergebnisse waren ähnlich bei isoliertem vollständigen Oberschenkelknochen (2). Durchschnittlicher prozentualer BMD-Verlust betrug –10,4, –6,7, –1,5 bzw. –0,7 in Gruppen mit 0, 150, 300 und 600 μg IG-8801, verglichen mit nicht-operierten Ratten. In proximalem Oberschenkelknochen zeigten die mit einer höheren Dosis von Verbindung (III) behandelte Gruppe einen Anstieg von 5,0% BMD in bezug auf intakte Tiere. Bei mittleren Oberschenkelknochen zeigten die zwei Gruppen mit höherer Dosis erhöhte Werte (+0,8 und +2,3%) und in distalem Oberschenkelknochen betrug der durchschnittliche BMD-Verlust –11,4, –7,9, –3,6 bzw. –5,0 in den Gruppen mit 0, 150, 300 und 600 μg (III). Für weitere Details, siehe 1 und 2, die die „Rückgrat-Knochenmineraldichte in ox-Ratten, behandelt mit Verbindung (III)" bzw. die „Gesamtoberschenkelknochenmineraldichte in ox-Ratten, behandelt mit Verbindung (III)" zeigen.
Es wird geschlossen, daß dieses Modell Knochenverlust in Rückgrat und Oberschenkelknochen induziert, der mit (III) wiederhergestellt werden kann. Wirksame Dosen in diesem Modell sind 300 und 600 μg.
Biomechanische Tests wurden in Oberschenkelknochendiaphysen durchgeführt, um das knochenmechanische Verhalten des anabolisch wiederhergestellten Knochens zu verifizieren. Durch Ovarieektomie verringerte Knochenmaterialqualität (elastischer Modul und maximale elastische Belastung) und die Bruchbelastung ohne Beeinflussung von deren Steifigkeit oder Querschnittsträgheitsmoment. Verbindung (III) kehrte alle negativen Effekte von Ovarieektomie um und erhöhte die diaphyseale Steifigkeit zu übernormal ohne Beeinflussung der Knochengeometrie (3).
Beispiel 6
Test auf orale Letalität und chronische Toxizität:
Bei Ratten wurde die LD50 von Verbindung (III) zwischen 1800 und 2300 mg/kg geschätzt, die LD50 bei Mäusen betrug 1400 mg/kg.
Drei Gruppen von Ratten (N = 50 ♂ und 50 ♀) wurden mit täglichen oralen Dosen von 8 mg, 40 mg und 200 mg/kg für 6 Monate behandelt. Eine vierte Gruppe diente als Kontrollgruppe.
Einige der Tiere (5 von 30) in der Gruppe mit höherer Dosis starben an Hypokalziämie. Männliche Ratten waren häufiger befallen als weibliche und die gesamte 200 mg/kg-Gruppe litt an Zahnbruch.
Keine signifikanten hämatologischen oder Urinveränderungen wurden bei behandelten Tieren nachgewiesen. Serum-GOT und -GPT stieg an, ohne eine klare Beziehung mit der Dosis oder dem Verabreichungsweg zu zeigen.
Relatives und absolutes Gewicht der Leber nahm bei behandelten Tieren ab, während ein signifikanter Anstieg des Oberschenkelgewichts gemessen wurde. Knochenmark bei mit 200 und 40 mg/kg behandelten Tieren zeigte eine leichte Abnahme der Megakaryocyten-Population. Keine andere relevante Veränderung wurde beobachtet. Beide Dosen von 8 und 40 mg/kg wurden als aktiv qualifiziert, im Hinblick auf Oberschenkelgewicht und BMD-Anstieg.
Diese Ergebnisse zeigen, daß dentale Strukturen und Calciumgehalte durch die höchste Dosis (200 mg/kg) nur nachteilig beeinflußt werden.
In der Schlußfolgerung wird die Toxizität einiger Organe mit Dosen beschrieben, die 50- bis 200-mal höher sind als die vorgeschlagenen höchsten Dosen für Menschen.
Beispiel 7
Test auf intravenöse Letalität und chronische Toxizität:
Bei Ratten betrug die LD50 von Verbindung (III) 117 mg/kg und bei Mäusen 109 mg/kg. Die Unterschiede zwischen oralen und intravenösen Dosen beruht auf schlechter Absorption des oral verabreichten Bisphosphonats.
Tiere zeigten Konvulsion, Atemnot und Hinterbeinparalyse, Symptome, die schwerer Hypokalziämie aufgrund der primären Wirkung des Arzneistoffs zugeschrieben werden können.
Ein 4-wöchiger Test mit täglich verabreichter intravenöser Verbindung (III) wurde an 200 männlichen und weiblichen Wistar-Ratten durchgeführt. Ausgewählte Dosen waren 0 (physiologische Kochsalzlösung), 0,5, 2,5, 10 und 12,5 mg/kg. 20 Tiere pro Geschlecht pro Dosisniveau wurden randomisiert. Zwei zusätzliche Gruppen, die mit den zwei höheren Dosen behandelt wurden, wurden beobachtet, um die Umkehrbarkeit toxischer Wirkungen zu bestimmen.
Den Tieren wurden intravenös eingestellte Konzentrationen von Verbindung (III) injiziert, so daß sie 2 ml/kg Körpergewicht erhielten. Die zwei zusätzlichen Gruppen wurden während einer zweiten Periode von weiteren 4 Wochen, die frei von Behandlung war, verfolgt.
Toxische Manifestationen waren beschränkt auf die zwei erwähnten mit hoher Dosis (10 mg/kg und 12,5 mg/kg) behandelten Gruppen. Weder Toxizitätsanzeichen noch Mortalität wurden in Kontrollgruppen und den zwei Gruppen mit niedriger Dosis (0,5 und 2,5 mg/kg) nachgewiesen. Bei der höheren Dosis wurden lokale Anzeichen an der Stelle der Injektionen beobachtet, Ödem, Erythem und Nekrose. Diese Manifestationen begannen an Tag 7 und waren bei männlichen Ratten deutlicher. Diese Tatsache bewirkte, daß die befallenen Tiere eine geringere Anzahl von Injektionen während des Zeitraums der Studie erhielten.
Tiere der Gruppe mit hoher Dosis waren erregt, ängstlich und irritierbar nach der Dosierung. Vier Ratten starben (eine männliche und drei weibliche in der Gruppe mit hoher Dosis) während des aktiven Behandlungszeitraums und zwei weitere starben (eine männliche und eine weibliche der Gruppe mit hoher Dosis) während der Erholungsperiode. Ratten der hohen Gruppe zeigten eine milde Verringerung des Wasserverbrauchs sowie Körpergewichtszunahme. Nach Beendigung der Behandlung gewannen Ratten der zwei zusätzlichen Gruppen Körpergewichtszunahme zurück.
Urinanalyse zeigte Glycosurie und granulierte oder leukozytische Zylinder bei einer geringen Anzahl von männlichen Tieren der Gruppe mit hoher Dosis. Niedrige Hämatokritwerte, Leukozytose und Anisozytose wurden in männlichen und weiblichen Tieren der Gruppe mit hoher Dosis beobachtet. Verringerte Kreatinin-Ausscheidung und erhöhtes BUN und Serum-Kreatinin waren bei einigen Tieren des hohen Dosisniveaus zu sehen. Grobe Untersuchung der Organe zeigte vergrößerte Milz und Ganglionengrößen (Infarkt) und gonadale Veränderungen bei einem Drittel der mit der hohen Dosis behandelten Tiere. Histologische Untersuchungen zeigten Glomerulonephritis, tubuläre Nekrose, interstitielle Nephritis (bei 4 Ratten), Epithelatrophie und tubuläre Dilatation in Testis (1 Ratte) und Myokardschlaganfall (1 Ratte). Alle erwähnten Befunde scheinen irreversibel, mit Ausnahme der Anisozytose und der gonadalen Veränderungen. Gruppen mit niedriger Dosis, 0,5 und 2,5 mg/kg-Gruppen, zeigten keine Abnormitäten.
In Schlußfolgerung wird die Toxizität einiger Organe mit einer Dosis beschrieben, die proportional 100-mal größer ist als die vorgeschlagenen höchsten Dosen für Menschen.

Claims

Verwendung einer wirksamen nicht-toxischen Menge [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropyliden]-bisphosphonsäure, oder Olpadronat, mit der Formel:
oder des Mononatriumsalzes oder eines anderen pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Knochenmasseverlustzuständen, die ausgewählt sind aus verlängerter Bettruhe, Arthritis, Nebenschilddrüsenüberfunktion und Paradontose, wobei die orale Dosis im Bereich von 1 bis 15 mg/Tag [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropyliden]-bisphosphonsäure oder des Mononatriumsalzes oder anderen pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben liegt und wobei die intravenöse Dosis im Bereich von 0,025 bis 0,2 mg/kg/Anwendung [3-(N,N-Dimethylamino)-1-hydroxypropyliden]-bisphosphonsäure oder des Mononatriumsalzes oder anderen pharmazeutisch annehmbaren Salzes derselben liegt.
Verwendung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß sie die gleichzeitige oder sequentielle Verabreichung wenigstens eines Calciumsalzes umfaßt.
Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß sie gleichzeitige oder sequentielle Verabreichung von Vitamin D oder Derivaten desselben umfaßt.
Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sie die gleichzeitige oder sequentielle Verabreichung wenigstens eines Fluoridsalzes umfaßt.
Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sie die gleichzeitige oder sequentielle Verabreichung wenigstens eines Androgens umfaßt.
Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß sie die gleichzeitige oder sequentielle Verabreichung wenigstens eines Estrogens umfaßt.
Verwendung nach einem der vorangehenden Ansprüche, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einem pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff, Verdünnungsmittel oder Vehikel im Arzneimittel.