DE69327263T2

DE69327263T2 - Verwendung des Gewebefaktor-Inhibitors zur Herstellung eines Arzneimittels gegen Mikrogefässthrombose

Info

Publication number: DE69327263T2
Application number: DE69327263T
Authority: DE
Inventors: Roger K. Khouri; Tze-Chein Wun
Original assignee: St Louis University; Washington University in St Louis WUSTL
Current assignee: St Louis University; Washington University in St Louis WUSTL
Priority date: 1992-03-18
Filing date: 1993-03-15
Publication date: 2000-08-10
Anticipated expiration: 2013-03-16
Also published as: DE69327263D1; PT563023E; DK0563023T3; CA2091789A1; EP0563023A1; JPH06293658A; JP3927605B2; CA2091789C; US5276015A; EP0563023B1; ATE187649T1

Description

Hintergrund der Erfindung

Diese Erfindung betrifft die Verwendung von Gewebef~ktor- Gerinnungsweg-Inhibitor für die Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei einem neuen Verfahren zur Inhibierung mikrovaskulärer Thrombosen und insbesondere ein Verfahren zur Verringerung der Thrombogenität mikrovaskulärer Anastomosen während der mikrovaskulären Wiederherstellung, durch die topische Verabreichung eines Blutgerinnungsinhibitors, der als Lipoproteinassoziierter Gerinnungsinhibitor (lipoprotein-associated coagulation inhibitor, LACI) und alternativ als Gewebefaktor- Gerinnungsweg-Inhibitor (tissue factor pathway inhibitor, TFPI) bekannt ist.
Die Thrombose mikrovaskulärer Anastomosen, insbesondere bei Fällen von Extremitäten-Verletzungen bei freien Klappenrekonstruktionen, stellt für den Wiederherstellungs-Chirurgen ein wesentliches Problem dar. Eine kürzlich von Salemark durchgeführte Studie, Microsurgery 12, 308-311 (1991), zeigte, dass viele Zentren für Replantation und freie Klappentransfers routinemäßig eine systemische Antikoagulation verwenden. Das Risiko einer generalisierten Blutung [Leung, Hand 12, 25-32 (1980); Hirsh, Semin. thromb. Hemostas. 12, 21-32 (1980)], mit den erschwerenden Risiken aus Bluttransfusionsprodukten lässt die Frage des Nutzens einer massiven systemischen Blutkreislaufveränderung, lediglich um in einem kleinen Gefäß, das einem nichtlebenswichtigen Gewebe Blut zuführt, die Strömung aufrecht zu erhalten, offen.
Das Konzept der stellenspezifischen Wirkung eines Antithrombosemittels, das durch einfache topische Anwendung verabreicht wird, wurde von Cooley und Gould, Microsurqery 12, 281- 287 (1991) vorgeschlagen. Da jene Gefäße, die zur Thrombose neigen, während des Wiederherstellungsbemühens freigelegt sind, mit einem guten Zugang zur Hohlraumfläche während der anastomotischen Reparatur, könnte ein Mittel auf dem Weg der normalen Gefäßdurchspülung angewendet werden, wodurch potentiell eine sehr lokalisierte Wirkung durch die Oberflächenbindung an die thrombogene(n) Stelle(n) erreicht werden kann. Tatsächlich beschrieben Cooley et al. ein mögliches Mittel, ein Peptid, das auf dem Plättchenbindungs- und Fibrinpolymerisationsbereich von Fibrinogen basiert, und zeigten seine Fähigkeit, das Auftreten einer thrombotischen Okklusion im Rattenmodell zu reduzieren [6th Ann. Meeting, Amer. Soc. Reconstructive Microsurgery, Toronto, Canada, 21.-23. Sept. 1990].
Eine durch eine vaskuläre Verletzung verursachte Thrombose wird zumindest teilweise, wenn nicht vorwiegend, über den Gewebefaktor-vermittelten Gerinnungsweg initiiert.
Plasma enthält einen multivalenten Gerinnungsinhibitor vom Kunitz-Typ, hier als Gewebefaktor-Gerinnungsweg-Inhibitor (TFPI) bezeichnet. Diese Bezeichnung wurde von der International Society on Thrombosis and Hemostasis amd 30. Juni 1991 in Amsterdam angenommen. Der TFPI wurde erstmals aus einer Hepatom- Zelle vom Menschen, Hep G2, gereinigt, wie von Broze und Miletich, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 1886-1890 (1987) beschrieben, und danach aus Humanplasma, wie von Novotny et al., J. Biol. Chem. 264, 18832-18837 (1989) beschrieben; Chang-Leber- und SK-Hepatom-Zellen, wie von Wun et al., J. Biol. Chem. 265, 16096-16101 (1990) geoffenbart. TFPI-cDNA wurden aus Plazenta- und Endothelium-cDNA-Banken isoliert, wie von Wun et al., J. Biol. Chem. 263, 6001-6004 (1988) beschrieben; Girard et al., Thromb. Res. 55, 37-50 (1989). Die primäre, aus der cDNA-Sequenz hergeleitete Aminosäuresequenz von TFPI zeigt, daß TFPI einen stark negativ geladenen Amino-Terminus, drei inhibitorische Tandern-Kunitz-Typ-Domänen und einen stark positiv geladenen Carboxy-Terminus enthält. Die erste Kunitz-Domäne des TFPI wird für die Hemmung des Faktor VIIa/Gewebefaktor-Komplex benötigt, und die zweite Kunitz-Domäne des TFPI ist für die Hemmung von Faktor Xa gemäß Girard et al., Nature 328, 518-520 (1989) verantwortlich, während die Funktion der dritten Kunitz-Domäne unbekannt bleibt. Vgl. auch U. S. Patent S 106 833. Man nimmt an, dass der TFPI in vivo die Funktion hat, die Gerinnungsinitiierung durch die Bildung eines inerten, quaternären Faktor Xa : TFPI : Faktor VIIa : Gewebefaktorkomplexes zu begrenzen.
Weitere Hintergrundinformationen über TFPI sind durch Nachschlagen in den jüngsten Berichten von Rapaport, Blood 73, 359- 365 (1989); Broze et al., Biochemistry 29, 7539-7546 (1990) erhältlich.
Rekombinanter TFPI wurde als glykosyliertes Protein unter Verwendung von Säugerzellen-Wirten, einschließlich Mäuse-C127- Zellen, exprimiert, wie von Day et al., Blood 76, 1538-1545 (1990), Babyhamster-Nierenzellen, wie von Pedersen et al., J. Biol. Chem. 265, 16786-16793 (1990) berichtet, Chinesisrhe Hamster-Eierstockzellen und menschliche SK-Hepätom-Zellen. Der C127-TFPI wurde in Tierstudien verwendet und erwies sich als wirksam bei der Hemmung von durch Gewebefaktor induzierter intravaskulärer Koagulation bei Kaninchen gemäß Day et al., su ra, und bei der Prävention arterieller Reokklusion nach Thrombolyse bei Hunden, wie von Haskel et al., Circulation 84, 821-827 (1991) beschrieben.
Rekombinanter TFPI wurde auch als nicht-glykosyliertes Protein unter Verwendung von E.coli-Wirtszellen erxprimiert, wobei ein hoch-aktiver TFPI durch Faltung des Proteins in vitro, wie in der gleichzeitig schwebenden Anmeldung von Judy A. Diaz- Collier, Mark E. Gustafson und Tze-Chein Wun über "Verfahren zur Herstellung von Gewebefaktor-Gerinnungsweg-Inhibitor ("Method of Producing Tissue Factor Pathway Inhibitor") US-A-5 212 091 beschrieben, erhalten wird.
Das Klonieren der TFPI-cDNA, die für das 276 Aminosäurereste-Protein des TFPI kodiert, ist weiter in Wun et al., U. S. Patent 4 966 852, dessen Offenbarung durch Hinweis hierin mit einbezogen ist, beschrieben.

Kurze Beschreibung der Erfindung

Gemäß der vorliegenden Erfindung wird die Verwendung von TFPI zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei einem neuen Verfahren zur Inhibition mikrovaskulärer Thrombose vorgesehen. Das Verfahren umfasst die topische Verabreichung einer kleinen, jedoch wirksamen Menge an TFPI, die ausreicht, um die Thrombogenität mikrovaskulärer Anastomosen zu verringern, an einen warmblütigen Säuger am Ort mikrovaskulärer Anastomosen zugleich mit der mikrovaskulären Wiederherstellung.
Das Verfahren wird hier durch die topische Anwendung des TFPI an einem Kaninchenohrarterien-Modell einer Quetsch/Ausreiß- Verletzung, die einer mikrovaskulären Reparatur unterzogen wird, veranschaulicht. Bei dieser illustrativen topischen Anwendung des TFPI erreichten traumatisierte Arterien, die durch Hohlraumspülung mit normalem Kochsalz-Vehikel (Kontrollen) behandelt wurden, Durchgängigkeitsraten von 8% bzw. 0% 1 und 7 Tage nach der Operation (p. o.). Eine Heparinspülung (10 Einheiten/ml) führte zu einer Durchgängigkeit von 40% zu beiden Evaluierungs zeiten. Im Gegensatz ergab der TFPI bei einer Dosis von 20 ug/ml (0,2 ml Gesamtvolumen; 10minütige Einwirkungszeit) eine Durchgängigkeitsrate von 91% 1 Tag und 73% 7 Tage p. o. (p < 0,0005 vs. Kontrollen). Die systemische Antikoagulaltionswirkung wurde mit der peripheren Blut-Prothrombinzeit (PT) und der aktivierten partiellen Thromboplästinzeit (APTT) überprüft. Diese Werte waren nach topischer Behandlung mit TFPI nicht verändert. Elektronenmikroskop-Scannen zeigte eine dramatisch inhibierte Thrombogenese auf den verletzten Oberflächen von mit TFPI behandelten Gefäßen. Diese Ergebnisse belegen die Wirksamkeit von TFPI, als topisch angewandtes Antithrombosemittel zur Verhinderung von Thrombosen in der klinischen Mikrogefäßchirurgie.
Verständlicherweise ist dieses Verfahren für andere warmblütige Säuger, beispielsweise Menschen, auf analoge Weise geeignet und ausdrücklich für die mikrovaskuläre Wiederherstellung, wie durch freien Klappentransfer oder Replantationschirurgie, angepasst.
Wie hierin definiert, kann der TFPI entweder glykosyliert oder nicht-glykosyliert sein.

Detaillierte Beschreibung der Erfindung

Während die Beschreibung mit Patentansprüchen schließt, die den Gegenstand, der als die vorliegende Erfindung bildend angesehen wird, besonders aufzeigen und genau beanspruchen, nimmt man an, dass die Erfindung aus der folgenden detaillierten Beschreibung bevorzugter Ausführungsformen in Verbindung mit den beiliegenden Zeichnungen besser verständlich ist, wobei:
Fig. 1 ein Säulendiagramm ist, das die Durchgängigkeitsraten zeigt, die 1 und 7 Tage postopertiv für jede von drei Behandlungsgruppen erreicht wurden, bei welchen die topische Verabreichung von TFPI während der mirkovaskulären Reparatur eines Gefäßtraumas im Kaninchenohr-Modell mit einer ähnlichen Verabreichung von Heparin oder dem Kontrollvehikel (normale Kochsalzlösung) ohne TFPI oder Heparin verglichen wird;
Fig. 2 die Scan-Elektronenmikrographien der Gefäßhohlraumoberflächen in mehrfacher Vergrößerung eine Stunde nach Wiederdurchströmung, nach Mikrogefäßreparatur und topischer Verabreichung von TFPI, wie in Fig. 1, zeigt. Fig. 2A = 30X; Fig. 2B = 100X; Fig. 2C = 2000X;
Fig. 3 die Scan-Elektronenmikrographien der Hohlraumober flächen in mehrfacher Vergrößerung eine Stunde nach Wiederdurchströmung, nach Mikrogefäßreparatur und topischer Verabreichung von Heparin wie in Fig. 1, zeigt. Fig. 3A = 30X; Fig. 3B = 100X; Fig. 3C = 2000X;
Fig. 4 die Scan-Elektronenmikrographien der Hohlraumoberflächen in mehrfacher Vergrößerung eine Stunde nach Wiederdurchströmung, nach Mikrogefäßreparatur und topischer Verabreichung des Kontroll-Vehikels ohne TFPI oder Heparin, wie in Fig. 1, zeigt. Fig. 4A = 30X; Fig. 4B = 100X; Fig. 4C = 2000X.
Um die Erfindung detaillierter zu veranschaulichen, wurde die folgende illustrative mikrochirurgische Reparatur eines Gefäßtraumas zusammen mit einer Verabreichung von TFPI durchgeführt.

BEISPIELE

MATERIALIEN UND METHODEN

Die NIH-Leitlinien für die Betreuung und Verwendung von Labortieren wurden während der gesamten Zeit befolgt. New Zealand White-Kaninchen (3-5 Pfund) wurden durch intramuskuläre Injektion von Ketamin (100 mg) und Xylazin (20 mg) anästhesiert. Unter sterilen Bedingungen wurde die zentrale Ohrarterie über eine Länge von 20 mm freigelegt. Eine Modifikation der Quetsch- Ausreißverletzung von Cooley und Hansen, Microsurciery 6, 46-48 (1985) wurde wie folgt erzeugt. Zwei Webster-Nadelhalter wurden 2 mm voneinander fest auf die Arterie geklemmt, dann in proximal-distalen Richtungen auseinander bewegt, wodurch die Arterie traumatisch durchtrennt wurde. Temporäre Mikrogefäßklemmen wurden hinter den Webster-Quetschstellen angelegt, und der Hohlraum wurde mit normaler Kochsalzlösung gespült. Die abgerissenen Enden der Arterie wurden minimal zurückgeschnitten, wobei im Wesentlichen die gesamte Länge der traumatisierten Arterie bewahrt wurde. Als Nächstes wurde eine Ende-an-Ende-Anastomose unter Verwendung von 8-10 Einzelnähten einer 10-0 Nylonnaht durchgeführt. Vor dem Festziehen der letzten Einzelnaht wurden 0,2 ml einer Testlösung über die Anastomose und den verletzten Hohlraum gespült, wobei das Gefäß mit dem Fluid gefüllt wurde. Sie wurde 10 Minuten an Ort und Stelle gelassen, dann mit normaler Kochsalzlösung ausgewaschen. Eine von drei Lösungen wurde pro Gefäß verblindet und randomisiert verwendet: TFPI mit einer Konzentration von 20 ug/ml in normaler Kochsalzlösung, Heparin (10 Einheiten/ml) in normaler Kochsalzlösung, oder normale Kochsalzlösung (das Kontroll-Vehikel).
Der in diesen Beispielen verwendete TFPI wurde durch rekombinante, in E. coli exprimierte DNA-Klone erhalten. Er ist ein 277 Aminosäuren-Protein, bestehend aus der 276 Reste-Sequenz, die von Wun et al., J. Biol. Chem. 263, 6001-6004 (1988) und im U. S. Patent 4 966 852 beschrieben wurde, wobei ein zusätzlicher Alanin-Rest am N-Terminus inseriert war, wie weiter in der zuvor genannten, gleichzeitig schwebenden Anmeldung von Diaz-Collier, Gustafson und Wun US-A-5 212 091 beschrieben wurde. Sie ist > 95% homogen.
Nach Beendigung der Reparatur und Spülung des Hohlraums, wie oben beschrieben, wurden die temporären Klemmen gelöst. In 34 Arterien (von 17 Kaninchen) wurde die Durchgängigkeit 1 h lang verfolgt, danach wurde die Wunde geschlossen. 1 und 7 Tage postoperativ wurde eine Reanästhesie zur Reevaluierung der Durchgängigkeit induziert.
In einer separaten Serie wurden 9 Arterien (von 5 Kaninchen) in 3 Gruppen zu je 3 Gefäßen unterteilt; TFPI, Heparin oder Vehikel wurden an jede, wie oben beschrieben, verabreicht. Die verletzten und reparierten Gefäße wurden nach 1 h Strömung geerntet, in gepuffertem Glutaraldehyd fixiert und zur Untersuchung der Hohlraumoberflächen mit einem Scan-Elektronenmikroskop präpariert. Vor der arteriellen Verletzung und wiederum eine Stunde nach Wiederdurchströmung (vor dem Ernten des Gefäßes) wurde Blut aus einem Zweig der Vena femoralis entnommen. Die Prothrombin (PT)- und aktivierte partielle Thromboplastin (APTT)-Zeit wurden auf Plasmaproben unter Verwendung eines im Handel erhältlichen Standard-Fibrometers bestimmt.

ERGEBNISSE

Die Durchgängigkeitsraten für alle Gruppen sind in Fig. 1 gezeigt. Alle Gefäße, die am Tag 1 durchgängig waren, zeigten eine deutliche Durchgängigkeit nach 1-stündiger Wiederdurchströmung. Gefäße, bei denen Thrombosen am Tag 1 gefunden wurden, hatten noch immer Thrombosen am Tag 7, bei allen Gruppen. Die Durchgängigkeitsraten für die Kontroll- (mit Vehikel behandelten)-Arterien waren 8% (1/13) am Tag 1, und 0% (0/13) am Tag 7 postoperativ. Die mit Heparin behandelten Gefäße erreichten eine 40% Dürchgängigkeit (4/10) sowohl am Tag 1 als auch am Tag 7, wobei am Tag 7 eine deutliche Verbesserung festgestellt wurde (p < 0,025; Fisher-exact-Test). Die Behandlung mit TFPI führte zu Durchgängigkeitsraten von 91% (10/11) und 73% (8/11) an den Tagen 1 und 7, wesentlich besser als die Kontrollen für beide Zeitperioden (p < 0,0005). Die mit TFPI behandelten Gefäße hatten eine deutlich höhere Durchgängigkeit als die mit Heparin behandelten Gefäße am Tag 1 (p < 0,02), aber nicht am Tag 7 (p > 0,1)..
Die peripheren Blut-PT- und -APTT-Werte für mit TFPI behandelte Kaninchen lagen im normalen Bereich (6-8,5 s für PT; 14- 18 s für APTT). Die Zeiten für jedes Tier zeigten keine Unterschiede zwischen Vor- und Nach-Behandlungswerten.
Eine Scan-Elektronenmikroskopie bei 15 KV der durchgängigen Proben, die nach 1 h Strömung geerntet wurden, zeigten bei 30facher Vergrößerung eine Nahtlinie, die durch Thromben bei den Kontrollgefäßen (Fig. 4A) und mit Heparin behandelten (Fig. 3A) Gefäßen undeutlich gemacht wurde. Dagegen waren die Nahtlinie und der umgebende Gefäßhohlraum praktisch frei von jeglicher größeren thrombotischen Akkumulation bei den mit TFPI behandelten Gefäßen (Fig. 2A). Bei stärkerer Vergrößerung (100X und 2000X) zeigten die Kontrollen einen gemischten Thrombus aus Fibrinsträngen und Plättchenaggregaten. Die mit Heparin behandelten Gefäße hatten auffallend weniger Fibrinstrangbildung, wobei der Großteil des Thrombus aus Plättchenaggregaten und eingeschlossenen roten Blutkörperchen zusammengesetzt war (Fig. 3B und C). Die mit TFPI behandelten Gefäße zeigten sehr wenige organisierte thrombotische Elemente, und es blieb eine Oberfläche, die relativ inert gegen Thrombogenese zu sein schien (Fig. 2B und C).
In Bezug auf die Probleme, auf welche man bei der Thrombose großer Gefäße, bei zerebraler und Koronarthrombose trifft, hat die rekonstruktive Mikrogefäßchirurgie den großen Vorteil einer leichten und häufig notwendigen chirurgischen Zugänglichkeit zu den Gefäßen, die am meisten zu Thrombosen neigen. Während der Mikrogefäßreparatur kann der Chirurg eine direkte Freilegung der thrombogenen Oberfläche erreichen. Die Standardbehandlung für verletzte Gefäße war, alle traumatisierten Teile zu identifizieren, zu resezieren und (mit Venentransplantaten) jene zu ersetzen, die man für zu schwer verletzt hielt, und systemische Antithrombosemittel (Heparin, Aspirin, Dipyridamol und/oder Dextran am häufigsten) zu verabreichen, um das Auftreten einer nachfolgenden Thrombose zu verhindern. Es kann mehrere Probleme geben, von welchen nicht alle dem Chirurgen bekannt sein könnten: eine offenbar normale Gefäßoberfläche kann tatsächlich eine beträchtliche thrombogene Kapazität infolge einer Endothel- Bloßlegung, feiner medialer Risse oder möglicherweise eines aktivierten Gerinnungsweges an der Oberfläche eines ansonsten unverletzten Gefäßes haben; das Ausmaß der Gefäßverletzung kann größer sein als für den Chirurgen direkt ersichtlich ist, selbst unter Zuhilfenahme eines Mikroskops; Venentransplantate können von der Verfügbarkeit her begrenzt sein, oder die Wahl kann weniger als ideal sein; der traumatische Vorfall oder eine unvermutete systemische Coagulopathie kann die Wahrscheinlichkeit einer lokalisierten bzw. generalisierten Blutung steigern. Aus diesen Gründen ist die Entwicklung eines wirksamen antithrombotischen Medikaments zur Anwendung durch intra-operative topische Spülung gemäß der vorliegenden Erfindung nützlich und sehr praktisch.
Es zeigte sich, daß Heparin in vivo eine sehr hohe Affinität zum Endothelium hat [Hiebert und Jaques, Thrombosis Res. 8, 195- 204 (1976); Hiebert und Jaques, Arterv 2, 26-37 (1976); Mahadoo et al., Thrombosis Res. 12, 79-90 (1977)]. Eine bedeutende Verbesserung in mikrovaskulärer Durchgängigkeit mit topischem Heparin, im Vergleich zu nicht-heparinisierten Lösungen, wurde im Experiment gezeigt. Reichel et al., J. Hand Surg. 13A, 33-36 (1988) wiesen unter Verwendung des Modells einer gequetschten Arterie der Ratte für Thrombose nach, dass Heparin, Urokinase und andere Mittel die Durchgängigkeit moderal verbesserten (bis zu 55%-, im Vergleich zu einer Kontrollhöhe von 10%) nach lediglich topischer Verabreichung. Eine deutlichere Verbesserung wurde von Cooley et al. unter Verwendung eines 21-(Aminosäure-)Reste-Peptid-Homologs am Carboxy-Terminus der Fibrinogen-gamma-Kette festgestellt (83% Durchlässigkeit, im Vergleich zu 17% bei den Kontrollen). [6th Ann. Meeting, Amer. Soc. Reconstructive Microsurgery, Toronto, Kanada, 21.-23. Sept. (1990)]. Gemäß der vorliegenden Erfindung werden vergleichbar hohe Erfolge unter Verwendung eines im Wesentlichen anderen Mittels, TFPI, erhalten.
Jüngste Untersuchungen mit TFPI unter Verwendung von in vitro-Tests zeigten, dass er einen Komplex mit dem Gewebefaktor und den Faktoren VIIA und Xa bildet, wodurch er diese Schlüsselenzyme der Gerinnungskaskade unwirksam macht. [Broze et al., Blood 71, 335 (1988)].
Die topische Anwendung von TFPI auf eine traumatisierte Gefäßoberfläche kann es dieser ermöglichen, mit diesen Enzymen, die durch die Gefäßverletzung aktiviert worden sind, zu komplexieren. Nach der Wiederherstellung des Blutflusses ist die Kapazität der extrinsischen Gerinnungsbahn an dieser Stelle wesentlich reduziert. Da TFPI lokal und in winzigen Mengen aufgetragen werden kann, gibt es praktisch keine systemischen Wirkungen, wie die voranstehenden Ergebnisse zeigten.
Die topische Verabreichung des TFPI kann mittels herkömmlicher Methoden zur Verabreichung topisch wirksamer Arzneistoffe durchgeführt werden, die dem Fachmann auf diesem Gebiet wohlbekannt sind. Beispielsweise kann TFPI auf die herkömmliche Weise topisch verabreicht werden, mittels welcher Heparin als topisches Mittel während eines mikrochirurgischen Eingriffs verabreicht wird. Vgl. z. b. Cooley und Gould, Microsurgery 12, 281- 287 (1991). Für herkömmliche Methoden einer topischen Verabreichung kann man auch auf die zahlreichen Texte und Abhandlungen auf dem Gebiet der Arzneistoffverabreichung zurückgreifen, z. B. Remington's Pharmaceutical Sciences, Hrsgb. Arthur Osol, 16. Ausgabe, 1980, Mack Publishing Co., Easton, Pa. Beim erfindungsgemäßen Medikament befindet sich der TFPI in einem physiologisch akzeptablen Träger oder einer Kontrolle, wie normaler Kochsalzlösung oder gepufferter Kochsalzlösung, wie mit Phosphat gepufferter Kochsalzlösung oder anderen solchen pharmazeutisch akzeptablen Puffern, z. B. HEPES. Das TFPI-enthaltende Medikament kann auch in einem Pulver, einer Salben- oder Unguentum-Form, die herkömmliche Träger enthält, hergestellt und verabreicht werden. Die Menge an TFPI, die an die Stelle des Gefäßtraumas verabreicht wird, kann eine sehr geringe Menge sein, je nach dem Teil, dem Grad und dem Ausmaß des Traumas. Dosen an TFPI von etwa 1 ug/ml bis etwa 100 ug/ml, aufgetragen in einem Volumen von etwa 0,01 bis etwa 1 ml Volumen über einen Einwirkungszeitraum von 1 bis mehrere Minuten sind zweckmäßig.

Claims

1. Verwendung eines Gewebefaktor-Gerinnungsweg-Inhibitors (tissue factor pathway inhibitor, TFPI) für die Herstellung eines Medikaments zur Verwendung bei einem Verfahren zur Verringerung der Thrombogenität mikrovaskulärer Anastomosen bei einem warmblütigen Säuger, umfassend die Verabreichung einer geringen, jedoch hemmend wirksamen Menge von glykosyliertem oder nicht-glykosyliertem TFPI an diesen Säuger an der Stelle der mikrovaskulären Anastomosen, gleichzeitig mit der mikrovaskulären Wiederherstellung.

2. Verwendung nach Anspruch 1, wobei der verabreichte TFPI in einem normalen Kochsalzträger vorliegt.

3. Verwendung nach Anspruch 2, wobei der verabreichte TFPI in diesem Träger in einer Dosis vorliegt, die die periphere Blut-PT und die APTT nicht beeinträchtigt.

4. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Verabreichung des TFPI während der mikrovaskulären Wiederherstellung durch einen freien Klappentransfer erfolgt.

5. Verwendung nach Anspruch 1, wobei die Verabreichung des TFPI während der mikrovaskulären Wiederherstellung durch Replantation erfolgt.