DE69022845T2

DE69022845T2 - Erythromycinderivate.

Info

Publication number: DE69022845T2
Application number: DE69022845T
Authority: DE
Inventors: David Bacino; Carla Edwards; Leslie Freiberg; Larry Klein; Clinton Yeung
Original assignee: Abbott Laboratories
Current assignee: Abbott Laboratories
Priority date: 1989-03-28
Filing date: 1990-03-28
Publication date: 1996-06-13
Anticipated expiration: 2010-03-29
Also published as: AU623764B2; IL93936A0; CA2049359A1; GR1000519B; WO1990011288A1; EP0465581B1; KR920701229A; JPH04504259A; ATE128714T1; AU5402890A; ES2080140T3; GR900100232A; IL93936A; US5288709A; EP0465581A1; DK0465581T3; EP0465581A4; DE69022845D1; NZ233117A

Description

Die vorliegende ist eine "Continuation-in-Part-Anmeldung" zur ebenfalls anhängigen US-Anmeldung mit der Seriennr. 07/329473, angemeldet am 28.03.1989.

TECHNISCHES UMFELD.

Diese Erfindung betrifft neue 9-Deoxo-9,12- epoxyerythromycinderivate mit antibakteriellen Eigenschaften, Zusammensetzungen, die die neuen Erythrommycinderivate umfassen, und Verfahren zur Behandlung von Säugerpatienten mit diesen.

HINTERGRUND DER ERFINDUNG.

Erythromycin und übliche Derivate desselben werden weit eingesetzt und weisen eine wünschenswerte Aktivität gegen eine Anzahl von gram-positiven Pathogenen auf. Da einige Pathogene weniger empfindlich als andere in Bezug auf diese Wirkstoffe sind, sind gelegentlich hohe Dosen dieser Antibiotika zur Behandlung von weit verbreiteten heftigen Infektionen notwendig. Wie bei allen Wirkstoffen, werden manchmal toxische Effekte bei höheren Dosierpegeln beobachtet, insbesondere wenn die Patienten durch die Infektion ernsthaft in Mitleidenschaft gezogen sind und infolgedessen die Behandlung am meisten benötigen.
Unglücklicherweise sind die Verbesserungen in Wirksamkeit und Spektrum oft von einem Anstieg der Toxizität begleitet, so daß die Wirkstoffe der neueren Generation üblicherweise einen Kompromiß zwischen diesen einander zuwiderlauf enden Betrachtungen darstellen. Als Folge davon findet eine permanente Suche nach Antibiotika statt, die gegen bestimmte Organismen wirksamer sind, oder vorzugsweise gegen alle, als die derzeit geläufig verwendeten. Vorzugsweise haben solche Wirkstoffe ein verbessertes therapeutisches Verhältnis, welches das Verhältnis der effektiven therapeutischen oder prophylaktischen Dosis zur toxischen Dosis ist, das üblicherweise als das ED&sub5;&sub0;/LD&sub5;&sub0;- Verhältnis dargestellt wird.

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG.

Diese Erfindung betrifft 9-Deoxo-9, 12-epoxyerythromycin- A-Verbindungen, die als antibakterielle Wirkstoffe mit breitem Spektrum nützlich sind, wobei sie Aktivität gegen gram-positive und gram-negative Bakterien aufweisen.
Die Verbindungen der Erfindung umfassen solche nach der folgenden Formel I:
wobei R&sub1; gleich einer Oxo-, Oxim-, Hydroxy- oder Aminogruppe in der 11-Position ist;
R gleich Wasserstoff, eine Sauerstoff-enthaltende Gruppe oder eine Stickstoff-enthaltende Gruppe in der 4"-Position ist; und
R&sub3; gleich Wasserstoff oder Niederalkyl ist.
Die vorliegende Erfindung umfaßt ebenfalls pharmazeutisch verträgliche Salze und Ester obiger Verbindungen.
Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung umfassen eine antibakteriell wirksame Menge einer Verbindung nach der Erfindung und einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünner.
Das Verfahren der vorliegenden Erfindung umfaßt die Behandlung bakterieller Infektionen bei einem Säuger, der einer solchen Behandlung bedarf, wobei die Behandlung die Verabreichung einer wirksamen Menge einer Verbindung nach der Erfindung an den Säuger umfaßt.

EINGEHENDE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Diese Erfindung umfaßt neue 9-Deoxo-9,12- epoxyerythromycin-A-Verbindungen und pharmazeutisch verträgliche Salze und Ester derselben. Strukturell ausgedrückt, umfaßt die Erfindung Verbindungen nach der folgenden Formel
wobei R&sub1; gleich einer Oxo-, Oxim-, Hydroxy- oder Aminogruppe in der 11-Position ist;
wobei R gleich Wasserstoff, eine Sauerstoff-enthaltende Gruppe oder eine Stickstoff-enthaltende Gruppe in der 4"-Position ist;
und wobei
R&sub3; gleich Wasserstoff oder Niederalkyl ist;
wie auch pharmazeutisch verträgliche Salze und Ester dieser.
Wenn die R&sub1;-Position mit einem divalenten Radikal wie Oxo substituiert ist, ist es offensichtlich, daß zwischen dem Radikal und dem Kohlenstoff in der 11-Position eine Doppelbindung besteht.
Diese Erfindung umfaßt ebenfalls antibakterielle Zusammensetzungen, die eine antibakteriell wirksame Menge einer Verbindung nach der Erfindung und einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünner enthalten.
Diese Erfindung umfaßt weiterhin ein Verfahren zur Behandlung bakterieller Infektionen bei einem Säuger, der einer solchen Behandlung bedarf, mittels Verabreichung einer wirksamen Menge einer Verbindung nach der Erfindung an den Säuger.
Die Verbindungen dieser Erfindung weisen eine verbesserte in-vitro und in-vivo antibiotische Wirksamkeit gegen gewisse Organismen verglichen mit Erythromycin auf. Spezifische Beispiele der antibiotischen Wirksamkeit sind in den Tabellen 2 bis 5 unten offenbart.
Verbindungen, die für die bevorzugte Verbindungsklasse nach der Erfindung repräsentativ sind, umfassen die folgenden Verbindungen wie auch ihre pharmazeutisch verträglichen Salze und Ester:
(9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A;
(9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A;
(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A;
(4"R,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A;
(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- [[(dimethylamino)methylen]amino]-11-oxoerythromycin A;
(4"R,9S)-9-Acetylamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromyc in A;
(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- [(methylsulfonyl)amino]-11-oxoerythromycin A;
(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [(phenylmethoxy)amino]erythromycin A;
(4"R,9S,11S)-9-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12-epoxy- erythromycin A;
(4"S,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A;
(4"S,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A;
(4"S,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- (methylsulfonyl)amino]-11-oxoerythromycin A;
(9S,11S)-4"-O-Aminocarbonyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12- epoxyerythromycin A;
(9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- hydroxyiminoerythromycin;
(9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-11,12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A;
(9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A;
(4"R,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A;
(4"R,9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A;
(4"S,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A;
(9S,11S)-4"-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A;
(9S)-4"-O-Aminocarbonyl-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A; und
(4"S,9S)-4"-[(Aminocarbonyl)amino)-9-deoxo-4",11,12-trideoxy- 9,12-epoxy-11-oxoerythromycin.
Die bevorzugten Zwischenstufen für die Darstellung der Verbindungen nach Formel I sind folgende:
9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"-0- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A;
2'-O-Acetyl-11-deoxy-11-oxoanhydroerythromycin A;
9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A;
(4"E)-9,10-Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12,epoxy-4"- hydroxyimino-11-oxoerythromycin A;
(2S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- triethylsilyl-4"-O-(2-oxoethyl)erythromycin A; und
9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-6-O-methyl-11- oxoerythromycin A.
Der Ausdruck "Sauerstoff-enthaltende Gruppe in der 4"- Position", wie er hierin verwendet wird, betrifft einen Hydroxyy-, Oxim-, Alkanoyloxy-, Aminoalkoxy-, Aminocarbonyloxyoder Carbonatsubstituenten, der mit dem Kohlenstoff verbunden ist, der die 4"-Position der Cladinosezuckergruppe der Erythromycinstruktur einnimmt.
Der Ausdruck "Stickstoff-enthaltende Gruppe in der 4"- Position" betrifft, wie hierin verwendet, einen Amino-, Oxim-, Imin- oder Carbamylsubstituenten, der mit dem Kohlenstoff verbunden ist, der die 4"-Position der Cladinosezuckergruppe der Erythromycinstruktur einnimmt.
Der Ausdruck "in der 11-Position", wie er hierin verwendet wird, betrifft einen Substituenten, der mit dem Kohlenstoffatom verbunden ist, das die 11'er-Position in der Erythromycinstruktur einnimmt.
Der Ausdruck "Alkanoyl", wie hierin verwendet, betrifft -C(O)R&sub4;, wobei R&sub4; eine gerad- oder verzweigtkettige Niederalkylgruppe ist. Alkanoyl umfaßt, ohne darauf beschränkt zu sein, Acetyl, Propionyl, Butyryl, Isobutyryl und dgl. Diese Verbindungen können unsubstituiert sein, oder aber sie können substituiert sein, sofern solche Substituenten nicht die Wirksamkeit der Verbindung behindern.
Der Ausdruck "Alkanoylamino", wie er hierin verwendet wird, betrifft -NHC(O)R&sub5;, wobei R&sub5; eine Niederalkylgruppe ist.
Der Ausdruck "Alkanoyloxy", wie hierin verwendet, betrifft -OC(O)R&sub6;, wobei R&sub6; ein Niederalkyl ist, wie z.B.
-OC (O) CH&sub3;.
Der Ausdruck "Alkoxy", wie er hierin verwendet wird, betrifft -OR, wobei R eine Niederalkylgruppe ist, einschließlich aber nicht beschränkt auf Methoxy, Ethoxy und dgl. Diese Verbindungen können unsubstituiert sein, oder aber sie können auch substituiert sein, vorausgesetzt, daß solche Substituenten die Wirksamkeit der Verbindung nicht behindern.
Der Ausdruck "Alkoxyalkyl", wie er hierin verwendet wird, betrifft ein Niederalkylradikal, das mit einer oder mehreren Alkoxygruppen substituiert ist.
Der Ausdruck "Amin" oder "Amino", wie er hierin verwendet wird, betrifft unsubstituierte wie auch mono- oder disubstituierte Aminsubstituenten nach der Formel -NR&sub7;R&sub8;, vorausgesetzt, daß alle diese Substituenten mit der Wirksamkeit der Verbindung nicht interferieren. Darüberhinaus wird in Betracht gezogen, daß R&sub7; und R&sub8; zusammengenommen einen Ring auszubilden vermögen, der 3 bis 8 Atome enthält, wobei diese Atome Kohlenstoff- oder Heteroatome umfassen können, die aus N, O oder 5 gewählt sind, wodurch ein heterocyclischer Ring ausgebildet wird, der seinerseits substituiert sein kann. Die Auswahl solcher Substituenten ist aufgrund der vorliegenden Offenbarung eine routinemäßige Laboratorbestimmung. Z.B. können R&sub7; und R&sub8; unabhängig voneinander Acetyl-, Aryl-, Arylcarbonyl-, Sulfonyl- und Niederalkylsubstituenten umfassen, die alle ihrerseits weiter substituiert sein können, vorausgesetzt, daß solche Substituenten die Wirksamkeit der Verbindung nicht behindern. Die bevorzugten substituierten Amine umfassen, ohne auf diese beschränkt zu sein, Piperidinyl, Alkanoylamino, Benzylamino, Methylsulfonylamino, -NHCH&sub3;, -N(CH&sub3;) und -N(CH&sub3;)CHCHN(CH&sub3;).
Der Ausdruck "Aminoalkylgruppe" wird hierin verwendet, um eine Aminogruppe zu bezeichnen, die mit einem Niederalkylradikal verbunden ist.
Der Ausdruck "Aminocarbonyloxy", wie er hierin verwendet wird, bezeichnet -OC(O)NR&sub9;R&sub1;&sub0;, wobei R&sub9; und R&sub1;&sub0; unabhängig voneinander aus Wasserstoff und Niederalkyl gewählt sein können, wie beispielsweise -OC(O)NH.
Der Ausdruck "Aminoalkoxy" wird hierin verwendet, um -OR&sub1;&sub1; zu bezeichnen, wobei R&sub1;&sub1; eine Aminoalkylgruppe ist, die 2- Aminoethoxy, N-Methyl-N-benzyl-2-aminoethoxy, N-Benzyl-2aminoethoxy und -OCHCHN(CH&sub3;) umfaßt, ohne auf diese beschränkt zu sein.
Der Ausdruck "Aryl", wie er hierin verwendet wird, bezeichnet aromatische Radikale, die fünf oder sechs Atome in einem einzelnen Ringsystem aufweisen, welches 1 bis 3 Heteroatome enthalten kann, die aus S, O und N gewählt sind, wobei die verbleibenden Atome Kohlenstoffatome sind. Repräsentative aromatische Radikale umfassend Phenyl, Pyridyl, Pyrazinyl, Thiazoyl, Furyl und Thienyl. Darüberhinaus kann das einzelne Ringsystem substituiert sein, wodurch ein mehrfaches kondensiertes Ringsystem ausgebildet wird, wie z.B. 1-Naphthyl, 2-Naphthyl und dgl. Diese Verbindungen können unsubstituiert sein, oder aber sie können substituiert sein, vorausgesetzt, daß solche Substituenten nicht die Wirksamkeit der Verbindungen behindern.
Der Ausdruck "Carbamyl", wie er hierin verwendet wird, betrifft -NHC(O)OR&sub1;&sub2;, wobei R&sub1;&sub2; ein Arylalkyl wie z.B. Benzylcarbamyl oder ein Niederalkyl ist.
Der Ausdruck "Carbonat", wie er hierin verwendet wird, betrifft -OC(O)OR&sub1;&sub3;, wobei R&sub1;&sub3; ein Arylalkyl oder ein Niederalkyl ist.
Der Ausdruck "Cycloalkyl", wie hierin verwendet, betrifft eine cyclische Gruppe mit 3 bis 7 Kohlenstoffen. Diese Verbindungen können unsubstituiert sein, oder aber sie können substituiert sein, vorausgesetzt, daß solche Substituenten die Wirksamkeit der Verbindung nicht beeinträchtigen.
Der Ausdruck "Enon", wie er hierin verwendet wird, betrifft ein Erythromycinderivat, das ein alpha-beta ungesättigtes 11-Keton mit einer Doppelbindung in der 9-10- Position aufweist: Ein Beispiel für das Enon ist in Schema II, Verbindung 6, gezeigt.
Der Ausdruck "Imin", wie hierin verwendet, betrifft
-C=NR&sub1;&sub4;, wobei R&sub1;&sub4; ein Niederalkyl ist, das substituiert sein kann, wie beispielsweise -N=CHN(CH&sub3;).
Der Ausdruck "Niederalkyl" wird hierin verwendet, um geradkettige oder verzweigte Radikale mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen zu bezeichnen. Repräsentativ für solche Radikal sind Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, sec- Butyl, Isobutyl, tert-Butyl, 2-Ethylhexyl, n-Octyl, 2,4- Dimethylpentyl und dgl. Diese können unsubstituiert sein, oder sie können substituiert sein wie z.B. mit Niederalkyl-, Cycloalkyl- oder Arylgruppen, vorausgesetzt, daß sie die Wirksamkeit der Verbindung nicht beeinträchtigen.
Der Ausdruck "Oxo", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich auf =O.
Der Ausdruck "Oxim", wie er hierin verwendet wird, bezieht sich au -C=NOH.
Der Ausdruck "Sulfonyl", wie er hierin verwendet wird, betrifft -S(O)R&sub1;&sub5;, wobei R&sub1;&sub5; Aryl oder Niederalkyl ist. Diese Verbindungen können unsubstituiert oder aber substituiert sein, vorausgesetzt, daß alle diese Substituenten die Wirksamkeit der Verbindung nicht beeinträchtigen.
Der Ausdruck "Schutzgruppe", wie er hierin verwendet wird, betrifft die Gruppen, die zum Schutze gegen unerwunschte Reaktionen während der synthetischen Verfahren gedacht sind. Solche Schutzgruppen sind dem Fachmann gut bekannt.
In Betracht gezogene Äquivalente der Verbindungen nach der allgemeinen Formel I sind solche Verbindungen, die diesen anderwie entsprechen, und die die gleichen allgemeinen Eigenschaften aufweisen, wobei eine oder mehrere der Gruppen R&sub1;, R und R&sub3; einfache Abwandlungen der Substituenten sind, wie sie hierin definiert sind. Es ist offensichtlich , daß - wo ein Substituent ein Wasserstoffatom sein kann - die genaue chemische Natur eines Substituenten, der kein Wasserstoff ist, in dieser Position nicht wesentlich ist, sofern er nicht die Wirksamkeit der Verbindung nachteilig beeinträchtigt.
Mit "pharmazeutisch verträglich" sind solche Salze und Ester gemeint, die im Rahmen der medizinischen Beurteilung für die Verwendung in Kontakt mit menschlichem und dem Gewebe von Tieren geeignet sind, ohne daß unangemessene Toxizität, Reizung, allergische Reaktion und dgl. Auftreten, die im Einklang mit einem vernünftigen Nutzen-/Risiko-Verhältnis stehen, und die für die vorgesehene Verwendung in der Chemotherapie und Prophylaxe von antimikrobiellen Infektionen wirksam sind. Die Salze können in situ während der Endisolierung und Reinigung der Verbindungen nach Formel (I) hergestellt werden, oder aber gesondert durch Umsetzen der freien Base- oder Säurefunktionen mit einer geeigneten organischen Säure oder Base. Repräsentative Säureadditionssalze umfassen das Hydrochlorid-, Hydrobromid-, Sulfat-, Bisulfat-, Acetat-, Oxalat-, Valerat-, Oleat-, Palmitat-, Stearat-, Laurat-, Borat-, Benzoat-, Lactat-, Phosphat-, Tosylat-, Mesylat-, Citrat-, Maleat-, Fumarat-, Succinat-, Tartrat-, Ascorbat-, Glucoheptonat-, Lactobionat-, Laurylsulfatsalz und dgl. Repräsentative Alkali- oder Erdalkalimetallsalze umfassen das Natrium-, Calcium-, Kaliumund Magnesiumsalz und dgl.
Gewisse Verbindungen der Erfindung existieren in optisch aktiven Formen. Die reinen R- und S-Isomere, wie auch die racemischen und andere Mischungen dieser werden von der Erfindung umfaßt. Zusätzliche asymmetrische Kohlenstoffatome können in einem Substituenten wie einer Niederalkylgruppe vorhanden sein. All diese Isomere, wie auch deren Mischungen, sind in der vorliegenden Erfindung enthalten. Insbesondere kann die Stereochemie des Substituenten in der 4"-Position (R) entweder achsial oder äquatorial sein, sofern nicht etwas spezifisch anderes behauptet wird.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können Menschen und Tieren entweder oral, rektal, parenteral oder mittels Inhalationsspray oder topisch in Dosiseinheitsformulierungen verabreicht werden, die herkömmliche nicht-toxische pharmazeutische verträgliche Träger, Adjuvanzien und Vehikel wie gewünscht enthalten.
Der Ausdruck "parenteral", wie er hierin verwendet wird, umfaßt subkutane, intravenöse, intramuskuläre und intraartikuläre Injektions- und Infusionsverfahren.
Der Ausdruck "Verabreichung" des Antibiotikums oder der Zusammensetzung umfaßt hierin die systemische Anwendung wie mittels intramuskulärer, intravenöser, intraperitonealer oder subkutaner Injektion und die kontinuierliche intravenöse Infusion und die orale Verabreichung, wie auch das topische Aufbringen der Verbindungen und Zusammensetzungen auf den Ort der Infektion oder der potentiellen Infektion.
Diese Erfindung stellt ebenfalls pharmazeutische Zusammensetzungen in Dosiereinheitsformen zur Verfügung, die eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung dieser Erfindung in Kombination einem herkömmlichen pharmazeutischen Träger umfassen.
Mit einer "therapeutischen wirksamen Menge" des Antibiotikums ist hier eine ausreichende Menge der Verbindung gemeint, um empfindliche bakterielle oder andere mikrobielle Infektionen zu behandeln oder diesen vorzubeugen, bei einem vernünftigen Nutzen/Risikoverhältnis, das bei jeder ärztlichen Behandlung anzuwenden ist. Natürlich wird der tägliche Gesamtverbrauch der hierin genannten Zusammensetzungen von dem therapierenden Arzt im Rahmen der ärztlichen Beurteilung entschieden. Die tatsächliche Menge des Antibiotikums dieser Erfindung hängt von dem besonderen Organismus, der behandelt wird, der Schwere der Infektion, der Dauer der Behandlung, der spezifischen Verbindung, des Esters oder Salzes die/der/das eingesetzt wird, dem Alter und Gewicht des Patienten und ähnlichen Faktoren ab, die in der Medizin gut bekannt sind.
Diese Erfindung umfaßt ebenfalls pharmazeutische Zusammensetzungen in Dosiereinheitsformen, die eine therapeutisch wirksame Menge einer Verbindung dieser Erfindung in Kombination mit einem herkömmlichen pharmazeutischen Träger umfassen.
Die tägliche Gesamtdosis der Verbindungen dieser Erfindung, die einem Wirts-Organismus in einzelnen oder aufgeteilten Dosen verabreicht werden können, können Mengen von z.B. von 0,01 bis 500mg/kg Körpergewicht täglich und üblichererweise von 0,1 bis 15mg/kg Körpergewicht täglich sein. Einzelne Dosiszusammensetzungen können solche Mengen oder Untereinheiten derselben enthalten, bis zum Ausmachen der Gesamt-Tagesdosis. Im allgemeinen sehen die Behandlungs- und Vorbeugungsvorschriften gemäß der vorliegenden Erfindung die Verabreichung an einen Patienten, der einer solchen Behandlung bedarf, von ungefähr 100mg bis ungefähr 2000mg der Verbindung dieser Erfindung pro Tag in mehrfachen Dosen oder vorzugsweise in einer einzelnen Dosis von 250 bis ungefähr 1000mg vor.
Es ist jedoch offensichtlich, daß das spezifische therapeutisch wirksame Dosisniveau für jedweden besonderen Patienten von einer Vielzahl von Faktoren einschließlich der Aktivität der spezifisch eingesetzten Verbindung, dem Alter, dem Körpergewicht, dem allgemeinen Gesundheitszustand, dem Geschlecht, dem Ernährungszustand, der Verabreichungszeit, dem Verabreichungsweg, der Ausscheidungsrate, der Wirkstoffkombination und der Schwere der besonderen Krankheit, die gerade therapiert wird, abhängt.
Die vorliegende Erfindung umfaßt eine oder mehrere Verbindungen der Erfindung, die als Zusammensetzung formuliert sind, zusammen mit einem oder mehreren nicht-toxischen pharmazeutisch verträglichen Trägern, Adjuvanzien oder Vehikeln (welche alle zusammengenommen hierin als Träger bezeichnet werden) zur parenteralen Injektion oder oralen Verabreichung in fester oder flüssiger Form, zur rektalen Verabreichung und dgl.
Nicht-toxische inerte pharmazeutisch geeignete Träger umfassen feste, halb-feste oder flüssige Verdünner, Füllstoffe und Formulierhilfen jeder Art.
Wie hierin verwendet, bezeichnet der Ausdruck "pharmazeutisch verträgliche Träger" einen festen oder flüssigen Füllstoff, Verdünner oder ein Einkapselmaterial. Einige Beispiele für diese Materialien, die als pharmazeutisch verträgliche Träger dienen können, sind Zucker wie Laktose, Glukose und Saccharose; Stärken wie Maisstärke und Kartoffelstärke; Cellulose und ihre Derivate wie Natriumcarboxymethylcellulose, Ethylzellulose und Celluloseacetat; Tragacanth in Pulverform; Malz; Gelatine; Talkum; Bindemittel wie Kakaobutter und Zäpfchenwachse; Öle wie Erdnußöl, Baumwollsamenöl, Distelöl, Sesamöl, Olivenöl, Maisöl und Sojabohnenöl; Glykole wie Propylenglykol; Polyole wie Glycerin, Sorbitol, Mannitol und Polyethylenglycol; Ester wie Ethyloleat und Ethyllaurat; Agar; puffernde Wirkstoffe wie Magnesiumhydroxid und Aluminiumhydroxid; Alginsäure; Pyrogenfreies Wasser; physiologische Kochsalzlösung; Ringer-Lösung, Ethylalkohol und Phosphatpufferlösungen wie auch andere nichttoxische kompatible Substanzen, die für pharmazeutische Formulierungen verwendet werden. Netzmittel, Emulgatoren und Schmierstoffe wie Natriumlaurylsulfat und Magnesiumstearat wie auch Farbstoffe, Trennmittel, Beschichtungsmittel, Süß-, Geschmacks- und Geruchsstoffe und Konservierungsstoffe können in den Zusammensetzungen ebenfalls vorhanden sein, je nach dem Wunsch des Formulierenden. Die Menge an aktivem Bestandteil, die mit den Trägermaterialien zur Bildung einer Dosiseinheitsform kombiniert werden kann, hängt von dem behandelten Wirtsorganismus und der besonderen Verabreichungsart ab.
Injizierbare Präparate wie sterile injizierbare wäßrige oder ölige Suspensionen können gemäß der bekannten Technik unter Verwendung geeigneter Dispersions- oder Netzmittel und Suspensionsmittel formuliert werden. Das sterile injizierbare Präparat kann ebenfalls eine sterile injizierbare Lösung oder Suspension in einem nicht-toxischen parenteral verträglichen Verdünner oder Lösungsmittel sein, z.B. eine Lösung in 1,3- Butandiol. Unter den verträglichen Vehikeln und Lösungsmitteln, die verwendet werden können, befinden sich Wasser, Ringer- Injektionslösung, USP [nach der Pharmacopoe der USA] und isotonische Natriumchloridlösung. Zusätzlich können sterile gehärtete Öle üblicherweise als Lösungsmittel oder Suspensionsmedium verwendet werden. Zu diesem Zweck kann jedes milde gehärtete Öl verwendet werden, einschließlich synthetischer und halb-synthetischer Mono-, Di- oder Triglyceride. Zusätzlich finden Fettsäuren wie Ölsäure bei der Herstellung von injizierbaren Präparaten Verwendung.
Zäpfchen für die rektale Verabreichung können durch Vermischung des Wirkstoffes mit einem geeigneten nicht-reizenden Bindemittel wie Kakaobutter oder einem Polyethylenglykol hergestellt werden, das bei gewöhnlichen Temperaturen fest, bei Rektaltemperatur aber flüssig ist, und daher im Rektum unter Abgabe des Wirkstoffes schmilzt.
Feste Dosierformen für die orale Verabreichung können Kapseln, Tabletten, Pillen, Pulver, Sprühkristallisate und Granalien umfassen. Bei solchen festen Dosierformen kann die aktive Verbindung mit wenigstens einem inerten Verdünner wie Saccharose, Laktose oder Stärke vermischt sein. Solche Dosierformen können ebenfalls, wie es normalerweise üblich ist, zusätzliche Substanzen, die keine inerten Verdünner sind, umfassen, z.B. Schmiermittel zum Tablettieren und andere Tablettierhilfen wie Magnesiumstearat und mikrokristalline Cellulose. Im Fall von Kapseln, Tabletten und Pillen können die Dosierformen ebenfalls puffernde Agenzien umfassen. Tabletten und Pillen können zusätzlich mit enterischen oder anderen, die Abgabe kontrollierenden, Beschichtungen versehen sein.
Flüssige Dosierformen für die orale Verabreichung können pharmazeutisch verträgliche Emulsionen, Mikroemulsionen, Lösungen, Suspensionen, Sirupe und Elixiere, die inerte Verdünner enthalten, die in der Technik üblicherweise verwendet werden, wie Wasser, enthalten. Solche Zusammensetzungen können ebenfalls Adjuvanzien wie Netzmittel, Emulgier- und Suspensionsmittel und Süß-, Geschmacks- und Geruchsstoffe enthalten.
Wenn gewünscht, können die Verbindungen der vorliegenden Erfindung in Systeme mit verzögerter Abgabe oder gezielter Abgabe eingebaut werden, wie in Polymermatrizen, Liposome und Mikrokugeln. Sie können sterilisiert werden z.B. mittels Filtration durch ein die Bakterien zurückhaltendes Filter oder durch den Einbau sterilisierender Agenzien in Form steriler fester Zusammensetzungen, die in sterilem Wasser oder einem anderen sterilen injizierbaren Medium kurz vor der Verwendung gelöst werden können.
Die aktiven Verbindungen können ebenfalls in mikroeingekapselter Form zusammen mit einem oder mehreren Bindemitteln, wie oben aufgeführt, vorliegen.
Die Dosierformen für die topische Verabreichung einer Verbindung dieser Erfindung umfassen desweiteren Salben, Pasten, Cremen, Gele, Pulver, Sprays und Inhalantien. Die aktive Komponente wird unter sterilen Bedingungen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger und jedweden benötigten Konservierungsstoffen oder Puffern, wie verlangt, vermischt. Ophtalmologische Formulierungen, Ohrentropfen, Augensalben, Pulver und Lösungen fallen ebenfalls unter den Schutzumfang dieser Erfindung.
Die Salben, Pasten, Cremen und Gele können zusätzlich zu einer aktiven Verbindung dieser Erfindung Bindemittel wie tierische und pflanzliche Fette, Wachse, Paraffine, Stärke, Tragacanth, Cellulosederivate, Polyethylenglykole, Silikone, Bentonite, Kieselsäuren, Talkum und Zinkoxid oder Mischungen derselben enthalten.
Die Pulver und Sprays können zusätzlich zu den Verbindungen dieser Erfindung Bindemittel wie Laktose, Talkum, Kieselsäure, Aluminiumhydroxid, Calciumsilikate und Polyamidpulver oder Mischungen dieser Substanzen enthalten. Die Sprays können zusätzlich herkömmliche Treibmittel wie Chlorfluorkohlenwasserstoffe enthalten.
Allgemein werden die Verbindungen dieser Erfindung nach den Reaktionsschemen I bis XII, wie sie unten gezeigt sind, synthetisiert. Es ist klar, daß R&sub1;, R und R&sub3;, wie hierin verwendet, den R-Gruppen, wie sie durch Formel I bezeichnet sind, entsprechen.

SCHEMA I.

Die Verbindungen nach Formel IA werden nach dem hier beschriebenen Verfahren synthetisiert. Erythromycin A (1) wird an der 2'-Hydroxylgruppe mittels einer Schutzgruppe gegen Oxidation geschützt, z.B. mittels Acetylierung unter Verwendung von Acetanhydrid, mit oder ohne Protonenakzeptor wie Natriumoder Kaliumbicarbonat oder Triethylenamin (TEA), in einem inerten Lösungsmittel wie Methylenchlorid (CHCl) oder Acetonitril (CH&sub3;CN). Die 4"-Hydroxylgruppe wird mittels einer reaktiven Phenylmethoxycarbonylverbindung (CBZ) wie Benzylchloroformiat gegen Oxidation geschützt, und zwar in Anwesenheit eines Protonenakzeptors wie N,N-Dimethylaminopyridin (DMAP) in einem inerten Lösungsmittel wie CHCl oder CH&sub3;CN. Das resultierende 2'-O-Acetyl-4"-O-CBZ-Erythromycinderivat wird in das Anhydroerythromycin-A-Derivat (2) mittels Behandlung mit einer leicht zu ionisierenden Säure wie Chlorwasserstoffsäure (HCl) in wäßriger Lösung überführt. Verbindung 2 wird mit einem oxidierenden Agens wie N-Chlorsuccinimid (NCS)/Dimethylsulfid (DMS) in einem inerten Lösungsmittel wie Toluol und/oder CHCl behandelt, was das korrespondierende geschützte 11-Oxo- anhydroerythromycin-A-Derivat ergibt. Diese Verbindung wird nachfolgend durch Behandlung mit einem Säure-Basekatalysator wie Hydroxylamin oder Ammoniumacetat in einem polaren Lösungsmittel wie Methanol (MeOH) in das deacetylierte ungesättigte Keton (3) überführt. Das Derivat (3) kann ebenfalls als ein Enon beschrieben werden. Das ungesättigte Keton wird zum gesättigten Derivat reduziert, vorzugwseise durch Behandlung mit einem reduzierenden Hydridagens wie Lithiumborhydrid (LiBH) in einem ätherischen Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran (THF) oder Diethylether (EtO). Die 11-Hydroxylgruppe wird aus den Boratestern, die sich bei der Reduktion gebildet haben, durch Behandlung mit Methanol freigesetzt. Um die 2'-Position während der nachfolgenden selektiven Derivatisierung des 4"-Hydroxyls zu schützen, wird die 2'-Hydroxylgruppe auf die gleiche Weise wie oben beschrieben reacetyliert. Die 11-Hydroxylgruppe wird dann gegen Deriviatisierung mittels einer Trialkylsilylgruppe geschützt, die mittels Reaktion mit einem silierenden Agens wie Trimethylsilylchlorid (TMSCl) oder Triethylsilylchlorid (TESCl) in Anwesenheit eines Protonenakzeptors wie Imidazol (Im) oder Pyridin in einem inerten Lösungsmittel wie CHCl eingeführt wird. Die 4"-O-CBZ-Gruppe wird durch Hydrogenolyse an einem Katalysator wie Palladium auf Kohle (Pd/C) in einem nichtreaktiven Lösungsmittel wie Isopropylalkohol (IPA) und/oder Ethylacetat (EtOAc) unter Erhalt von Verbindung 4 entfernt. Verbindung 4 wird in geschütztes IA durch Derivatisierung der 4"-Hydroxylgruppe mit einer reaktiven Carbonylverbindungen wie Acetanhydrid oder N,N'-Carbonyldiimidazol in Anwesenheit eines Protonenakzeptors wie TEA oder DMAP in einem inerten Lösungsmittel wie CHCl überführt. Das Produkt der Reaktion von Verbindung 4 mit Carbonyldiimidazol kann unter basischen Bedingungen zum Carbamat hydrolysiert werden, mit einer Base wie Ammoniumhydroxid in einem inerten Lösungsmittel wie Acetonitril (CH&sub3;CN). Die Entfernung der 2'-O-Acetyl-Schutzgruppe wird z.B. durch Behandlung mit Methanol und einer schwachen Base wie Triethylamin durchgeführt. Die Silyl-Schutzgruppe wird mit Tetrabutylammoniumfluorid in einem polaren Lösungsmittel wie THF unter Erhalt von Verbindung IA entfernt. Wenn das Epi-Isomer der Verbindung IA bevorzugt wird, kann es nach der obigen Methode erhalten werden, wenn man von den geeigneten Isomeren des Ausgangsmaterials ausgeht. In den bevorzugte Ausführungsformen von IA ist R&sub1; =Hydroxy; R =Hydroxy,
-OC(O)CH&sub3;, oder -OC(O)NH; und R&sub3; = Wasserstoff.

SCHEMA II

Schema II zeigt das bevorzugte Verfahren für die Herstellung von (9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A und (9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A. Eine eingehendere Diskussion ist in den Beispielen 4 und 5, Verfahren A, beschrieben.
Erythromycin A wird in Anhydroerythromycin A mittels Behandlung mit einer leicht ionisierbaren Säure wie HCl in wäßriger Lösung überführt. Die 2'-Hydroxylgruppe von Anhydroerythromycin A wird für den nachfolgenden Oxidationsschritt, wie in Schema I beschrieben, geschützt. Das Anhydroerythromycin-A-Derivat (5) wird dann in ein ungesättigtes Keton (6) durch Behandlung mit einem oxidierenden Agens wie Chromsäure oder Tetrapropylammoniumperruthenat (TPAP) und N- Methylmorpholin-N-oxid (NMO), gefolgt von der Behandlung mit einem Säurebasekatalysator wie Hydroxylamin oder Ammoniumacetat in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH überführt. An diesem Punkt wird das Derivat (6) am besten als ein Enon beschrieben, d.h. als ein alpha-beta ungesättigtes 11-Keton mit einer Doppelbindung in der 9- bis 10-Position. Das Enon (6) wird in II (worin R&sub1; = Hydroxy ist) durch Behandlung mit einem stark reduzierenden Hydridreagens wie Lithiumborhydrid (LiBH&sub4;) überführt, oder in II (worin R&sub1; = Oxo ist) durch Behandlung mit einem milden reduzierenden Hydridreagens wie Diisobutylaluminiumhydrid (DIBAH), vorzugsweise in einem ätherischen Lösungsmittel wie EtO oder THF. Die 11- Hydroxylgruppe, die sich in dem Reduktionsschritt mit LiBH&sub4; gebildet hat, wird aus ihrem Boratester durch Behandlung mit Methanol freigesetzt. Bei den bevorzugten Ausführungsformen von II ist R&sub1; = Oxo oder Hydroxy; R =Hydroxy; und R&sub3; =Wasserstoff.
Die Verbindung II (R&sub1; =Oxo) kann in der 4"- Hydroxylposition weiter derivatisiert werden, wie dies in Schema I für Verbindung 4 beschrieben ist, und was IIA ergibt. Bei den bevorzugten Ausführungsformen von IIA ist R&sub1; = Oxo; R = -OC(O)NH ; und R&sub3; = Wasserstoff.
Alternativ kann die 4"-Hydroxylgruppe des Anhydroerythromycin-A-Derivates (5) ebenfalls mit einer CBZ- Gruppe geschützt werden, wie dies in Schema I vor der Oxidation beschrieben ist. Nach der Oxidation und der Behandlung mit einem Säurebasekatalysator unter Bildung des ungesättigten Ketons, wird die CBZ-Schutzgruppe aus der 4"-Position entfernt, was Verbindung 6 ergibt, die dann in II, wie oben beschrieben, überführt wird.

SCHEMA III

Die Verbindungen nach Formel III werden nach der hier vorgestellten Methode synthetisiert. 6-O-Methylerythromycin A (7) wird in ein 11-Oxo-erythromycin-A-9,12-hemiacetalderivat (8) durch Behandlung mit Oxalylchlorid und Dimethylsulfoxid (DMSO) in einem inerten Lösungsmittel wie CHCl überführt. Beide, die 2'- und die 4"-Hydroxylgruppen werden gegen Oxidation geschützt und auf die gleiche Weise wie in Schema I vorgestellt entschützt. Das Erythromycinderivat (8) wird in das ungesättigte Keton (9) durch Behandlung mit Wasserstoff überführt, das ganze in Gegenwart eines Katalysators wie Pd/C (zur Entfernung der 4"- O-CBZ-Schutzgruppe) in einer basischen Losung wie Ammoniak in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH. Die 2'-Hydroxyl- Schutzgruppe wird gleichzeitig mit der Eliminierungsreaktion entfernt. Das ungesättigte Keton (9) wird durch Reduktion unter Verwendung eines reduzierenden Hydridreagenzes wie LiBH&sub4; oder DIBAH in III überführt, vorzugsweise in einem ätherischen Lösungsmittel wie EtO oder THF. Bei den bevorzugten Ausführungsformen von III ist R&sub1; =Hydroxy oder Oxo; R =Hydroxy; und R&sub3; =-CH&sub3;.

SCHEMA IV

Die Verbindungen nach Formel IV werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Erythromycin A (1) wird in die Verbindung 4A überführt (worin die Schutzgruppe eine Triethylsibyloxygruppe ist), wie in Schema I vorgestellt. Das 4"-O-Allylderivat (10) wird durch Behandlung mit einem allylischen Halogenid wie Allylbromid und Natriumbis(trimethylsilyl)amid in einem polaren Lösungsmittel wie Dimethylformamid (DMF) dargestellt Das Allylderivat (10) wird in den Aldehyd (11) überführt, durch Überführung in das Diol mit einem oxidierenden Agens wie Osmiumtetroxid (OsO&sub4;), gefolgt von der Behandlung mit Natriummetaperjodat (NaIO&sub4;) in wäßrigem THF. Der Aldehyd (11) wird in IV überführt, durch reduktive Aminierung unter Verwendung eines Amins wie Ammoniak oder Dimethylamin oder N-Methyl-N-benzylamin oder Benzylamin und einem reduzierenden Agens wie Natriumcyanoborhydrid (NaBH&sub4;CN) in einem Lösungsmittel wie CH&sub3;CN oder wäßrigem CH&sub3;CN in Anwesenheit einer Säure wie Essigsäure. Die 2'-O-Acetyl- und die Triethylsilyl-Schutzgruppe werden, wie in Schema I vorgestellt, entfernt. In den bevorzugten Ausführungsformen von IV ist R&sub1; = Hydroxy; R = -O(CH)NH oder -O(CH)NHbenzyl, -O(CH)N(CH&sub3;), -O(CH)N(CH&sub3;)benzyl; und R&sub3; = Wasserstoff.

SCHEMA V

Die Verbindungen nach Formel V werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Das Anhydroerythromycin- A-Derivat (5) wird in das ungesättigte Ketonderivat (12) durch Behandlung mit einem oxidierenden Agens wie NCS/DMS oder DMSO/Oxalylchlorid in einem inerten Lösungsmittel wie Toluol oder CHCl überführt, gefolgt von der Behandlung des intermediären 4",11-Dideoxy-4",11-dioxo-Produktes mit Hydroxylaminhydrochlorid in Gegenwart einer Base wie TEA in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH. Die letztgenannte Reaktion entfernt ebenfalls die 2'-Hydroxyl-Schutzgruppe. Das ungesättigte Keton 4"-Oximderivat (12) wird dann zu Verbindung 13 durch Behandlung mit einem reduzierenden Hydridreagens wie LiBH&sub4; in einem polaren Lösungsmittel wie Dimethoxyethan (DME) überführt. Das 4"-Oximderivat (13) wird durch die folgende Verfahrenssequenz in V überführt: 1) Reduktion der Oximgruppe mit Wasserstoff in Gegenwart eines Katalysators wie Pd/C in einem sauren Lösungsmittel wie 10%igem Eisessig in MeOH oder in Gegenwart eines Katalysators wie Raney-Nickel in einem polaren Lösungsmittel wie 10%ig konzentriertem Ammoniumhydroxid in MeOH; 2) Deriviatisierung der resultierenden 4"-Aminogruppe mit einer CBZ-Gruppe mittels Reaktion mit N-Benzyloxycarbonyloxysuccinimid in einem inerten Lösungsmittel wie CHCl oder CH&sub3;CN; 3) chromatographische Trennung der isomeren N-CBZ-Derivate; und 4) Entfernung der N-CBZ-Gruppe von jedem isomeren 4"-Amin durch Hydrogenolyse mit einem Katalysator wie Pd/C oder Raney-Nickel in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH oder EtOH. Bei den bevorzugten Ausführungsformen von V ist R&sub1; = Hydroxy; R = -NH; und R&sub3; = Wasserstoff.

SCHEMA VI

Die Verbindungen nach Formel VI werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Das 4"-Oximderivat (12) wird in Gegenwart eines Katalysators wie Raney-Nickel in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH oder IPA mit oder ohne Zugabe von 5 bis 10%ig konzentriertem Ammoniumhydroxid hydriert. Die resultierenden isomeren Aminprodukte werden wie ihre N-CBZ- Derivate getrennt, welche nach Schema V dargestellt werden. Das (4"R)-Isomere des CBZ-geschützten Amins wird in das gesättigte Ketonderivat (14) mittels Behandlung mit einem milden reduzierenden Hydridreagens wie DIBAH, vorzugsweise in einem ätherischen Lösungsmittel wie THF überführt. Das (4"R)-4"-N-CBZ- Aminoderivat (14) wird in das korrespondierende (4"R)-4"- Aminoderivat (15) mittels Entfernung der CBZ-Gruppe überführt, wie dies in Schema V gezeigt ist. Das (4"R)-4"-Aminoderivat (15) wird in VI mittels einer der folgenden Reaktionsequenzen überführt.: 1) reduktive Aminierung eines Aldehyds wie Benzaldehyd, 1,5-Pentandial, Formaldehyd oder N-CBZ-N-Methyl-2aminoacetaldehyd mit Verbindung 15 in Gegenwart eines reduzierenden Agens wie NaBH&sub3;CN oder mit Wasserstoff und einem Katalysator wie Pd/C; 2) Behandlung von Verbindung 15 mit Dimethylformamiddimethylacetal in einem inerten Lösungsmittel wie CHCl; 3) Acetylierung von Verbindung 15 unter Verwendung von Acetanhydrid in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH; und 4) Sulfonierung von Verbindung 15 mit einem sulfonierenden Agens wie Methansulfonylanhydrid und einer Base wie Natrium- oder Kaliumcarbonat in einem inerten Lösungsmittel wie CHCl; oder 5) Behandlung von Verbindung 15 mit einer reaktiven Carbonylverbindung wie N,N'-Carbonyldiimidazol in Gegenwart oder Abwesenheit eines Protonenakzeptors wie TEA oder DMAP in einem inerten Lösungsmittel wie CHCl, gefolgt von der Hydrolyse des Harnstoffs mit einer Base wie Ammoniumhydroxid unter basischen Bedingungen in einem inerten Lösungsmittel wie CH&sub3;CN. Bei den bevorzugten Ausführungsformen von VI ist R&sub1; = Oxo; R =-NR&sub7;R&sub8;, wobei R&sub7; und R&sub8; zusammen -CH-CH-CH-CH- ausbilden oder getrennt wie folgt definiert sind: R&sub7; = H und R&sub8; = Benzyl, oder R&sub7; und R&sub8; = -CH&sub3; oder R&sub7; =H und R&sub8; =Acetyl; oder R =-NCH&sub3;(CH) N(CH&sub3;); oder R =-NHS(O) (O)CH&sub3;; oder R =-N=CHN(CH&sub3;); und R&sub3; = Wasserstoff.

SCHEMA VII

Die Verbindungen nach Formel VII werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Schema VII ist mit dem Schema VI identisch, wobei die folgenden Ausnahmen existieren: Das S-Isomere des 4"-N-CBZ-Aminoderivates (16) und nachfolgend das S-Isomere des 4"-Aminoderivates (17) werden vorzugsweise durch Hydrierung des 4"-Oxims in Gegenwart von Ammoniumhydroxid dargestellt. Das (4"S)-4"-Aminoderivat (17) wird in VII mittels derselben Reaktion überführt, wie sie in Schema VI für die Überführung des (4"R)-4"-Aminoderivates (15) in VI vorgestellt sind. Bei den bevorzugten Ausführungsformen nach VII sind R&sub1;, R und R&sub3;, wie für die bevorzugten Ausführungsformen von VI, definiert.

SCHEMA VIII

Die Verbindungen nach Formel VIII werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Das 9,12-Epoxyderivat von Erythromycin A (II, wobei R&sub1; = Hydroxy, R = Hydroxy und R&sub3; = Wasserstoff ist) wird in ein korrespondierendes 4",11- Diketoderivat (18) durch Behandlung mit einem oxidierenden Agens Chromsäure überführt. In diesem Verfahren wird die 2'- Hydroxygruppe gegen Oxidation mittels Acetylierung geschützt, wie dies in Schema I vorgestellt ist. Das 4"-Keton wird selektiv verändert und ergibt bei Hydrierung in Gegenwart eines Katalysators wie Raney-Nickel in einem polaren Lösungsmittel wie EtOAc/IPA oder bei Behandlung mit Hydroxylamin in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH VIII. Bei den bevorzugten Ausführungsformen von VIII ist R&sub1; = Hydroxy oder Oxo; R = Hydroxy oder Oxim; und R&sub3; = Wasserstoff.

SCHEMA IX

Die Verbindungen nach Formel IX werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Das 4"-Aminoderivat von 11-Oxoerythromycin A (eine Mischung der Verbindungen 15 und 17) wird in das isomere 11-Oximderivat (19) mittels Behandlung mit Hydroxylaminhydrochlorid und einem Protonenakzeptor wie TEA in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH oder EtOH überführt. Das 11-Oximderivat (19) wird mit Titan-(III)-Chlorid in einem polaren Lösungsmittel wie methanolischem Ammoniumhydroxid behandelt, was das 11-Iminderivat ergibt. Diese Verbindung wird dann in IX mittels Reduktion mit einem reduzierenden Agens wie Natriumborhydrid (NaBH&sub4;) in Gegenwart von Cer(III)-chlorid in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH überführt. Die bevorzugten Ausführungsformen von IX beinhalten R&sub1;=-CHNH; R = -NH2; und R&sub3;=Wasserstoff.

SCHEMA X

Die Verbindungen nach Formel X werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Eine Mischung der isomeren Verbindungen 15 und 17 wird in die isomeren 4"-N,N- Dimethylaminoderivate (20) mittels reduktiver Aminierung mit Formaldehyd in Gegenwart eines reduzierenden Agens wie NaBH&sub3;CN in einem polaren Lösungsmittel wie Essigsäure/CH&sub3;CN überführt, gefolgt von der Acetylierung der 2'-Hydroxylgruppe, wie dies in Schema I beschrieben ist. Die 2'-Hydroxygruppe wird acetyliert, um die 3'-N,N-Dimethylaminogruppe gegen oxidative N- Demethylierung zu schützen. Das 4"-N,N-Dimethylaminoderivat wird zu X oxidiert durch Behandlung mit Jod und Natriumacetat in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH. Die 2'-O-Acetylgruppe wird zusammen mit der 4"-N-Methylgruppe während des Oxidationsschrittes entfernt. Bei den bevorzugten Ausführungsformen von X ist R&sub1; = Oxo; R = -NHCH&sub3;; und R&sub3;=Wasserstoff.

SCHEMA XI

Die Verbindungen nach Formel XI werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Das 11-Oxo-erythromycin- A-Derivat (II, wobei R&sub1; =Oxo, R =Hydroxy und R&sub3; =Wasserstoff ist) wird in das 11-Oximderivat (21) überführt, indem es mit Hydroxylamin in einem polaren Lösungsmittel wie EtOH oder MeOH behandelt wird. Das Erythromycin-11-oximderivat (21) wird in XI durch Hydrierung in Gegenwart eines Katalysators wie Raney- Nickel in einem polaren Lösungsmittel wie MeOH oder EtOH, das 10%ig Ammoniumhydroxid enthält, überführt. Alternativ können die 11-Oximderivate in die korrespondierenden 11-Aminoderivate mittels Anwendung des Verfahrens, das in Schema IX beschrieben ist, überführt werden. Bei den bevorzugten Ausführungsformen von XI ist R&sub1; = Oxim oder -CHNH; R = Hydroxy; und R&sub3;= Wasserstoff.

SCHEMA XII

Die Verbindungen nach Formel XII (wobei R&sub3; = Wasserstoff oder Methyl ist) werden nach dem hier vorgestellten Verfahren synthetisiert. Ein 11-Aminoderivat aus dem vorhergehenden Schema (XI, wobei R&sub1; = -NH ist) oder sein 6-0-Methylanalogon (III, wobei R&sub1; =-NH2 ist) wird in ein 11-Benzyloxycarbonylaminoderivat oder in ein anderes Amino-geschütztes Derivat überführt, indem es in einem geeigneten Reagens wie Benzyloxy-N-hydroxysuccinimid behandelt wird, nachdem die 2-Hydroxygruppe acetyliert wird, wie z.B. mit Acetanhydrid in Gegenwart von Kaliumcarbonat oder Triethylamin. Die resultierende 11-2'-Di-geschützte Verbindung wird dann in ein Thiocarbamat (22) überführt, indem sie mit einem Thiocarbonylreagens wie 1,1'-Thiocarbonyl-bis-1H-imidazol, vorzugsweise in Gegenwart von einem bis zu fünf molaren Äquivalenten einer geeigneten Base wie N,N-Dimethyl-4- aminopyridin behandelt wird. Dieses Produkt (22) wird dann in eine Verbindung nach Formel (23) mittels Behandlung mit Tri-n- butylzinnhydrid in Gegenwart eines freien Radikalstarters wie 2,2'-Azobisisobutyronitril überführt.
Die Zwischenstufe (23) wird zuletzt unter Bildung des gewünschten Produktes XII entschützt, entweder durch getrennte Entfernung der Amino- oder Hydroxy-schützenden Gruppen mittels dem Verfahren nach Schema I oder durch gleichzeitige Entfernung der beiden Schutzgruppen unter Verwendung von z.B. Raney-Nickel in Methanol in Gegenwart einer Base wie Ammoniumhydroxid.
Für alle die oben dargelegten Schemen (Schemen 1 bis XII) variieren die besonderen gebildeten Reaktionsprodukte, die Verhältnisse der unterschiedlichen Produkte und die Reaktionsausbeuten mit den Reaktionsbedingungen, die angewendet werden, einschließlich z.B. dem Lösungsmittel, dem Katalysator, dem Verhältnis der Reaktanten, der Temperatur und der Reaktionszeit. SCHEMA I SCHRITTE SCHEMA II SCHRITTE SCHEMA III SCHRITTE SCHEMA IV SCHRITTE SCHEMA V SCHRITTE SCHEMA VI SCHRITTE SCHEMA VII SCHRITTE SCHEMA VIII SCHRITTE SCHEMA IX SCHEMA X SCHRITTE SCHEMA XI SCHEMA XII SCHRITTE
Obiges wird mit Bezug auf die nachfolgenden Beispiele besser verständlich, welche nur zur Veranschaulichung zur Verfügung gestellt werden und nicht als eine Einschränkung der Praxis der vorliegenden Erfindung zu verstehen sind.

BEISPIEL 1

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"-O[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

SCHRITT A

2'-O-Acetylerythromycin A

Erythromycin A (50,0g, 68, 1mmol) (handelsüblich erhältlich von Abbott Laboratories) wurde in 600ml Methylenchlorid (CHCl) bei Raumtemperatur gelöst. Triethylamin (20ml) und 10ml (10,82g, 106mmol) Acetanhydrid wurden zu dieser Lösung hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde am Rückfluß erhitzt und 100ml CHCl wurden aus der Reaktionsmischung abdestilliert, um jegliche Spuren von Wasser zu entfernen. Die Reaktionsmischung wurde bei Rückflußtemperatur zusätzliche 5 Stunden lang erhitzt. Nach 6 Stunden, nachdem die Reaktion gemäß der Dünnschichtanalyse abgeschlossen war, wurde die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur abgekühlt und in einen Scheidetrichter überführt. Die CHCl-Lösung wurde mit 300ml Ammoniumhydroxid/Natriumbicarbonatlösung, enthaltend 2,9% Ammoniak und 1,8% Natriumbicarbonat gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und abfiltriert. Das CHCl wurde am Rotationsverdampfer bei einer Wassertemperatur von 30 bis 40ºC entfernt. Der Rückstand wurde aus 200ml Acetonitril (CH&sub3;CN) umkristallisiert, indem er zunächst in heißem CH&sub3;CN gelöst wurde und die Lösung dann über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen wurde, worauf sie auf -25ºC gekühlt wurde, und diese Temperatur 24 Stunden lang erhalten blieb. Das Produkt wurde als weiße Kristalle isoliert, die mit kaltem (-25ºC) CH&sub3;CN gewaschen wurden, und in einem Trockenschrank bei 50ºC ungefähr 64 Stunden lang getrocknet wurden. Das 2'-O-Acetylerythromycin A wurde in 83%iger Ausbeute (43,91g) erhalten. Schmelzpunkt 138 bis 145ºC. ¹H NMR (CDC1&sub3;) delta 2.06 (s, OCOCH&sub3;), 4.76 (dd, 2').

SCHRITT B

2'-O-Acetyl-4"-0-[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

2'-O-Acetylerythromycin A (46,57g, 60,3mmol) aus Schritt A und 29,34g (240mmol) Dimethylaminopyridin wurden in 500ml CHCl gelöst, und die resultierende Lösung wurde auf -25ºC gekühlt. Zu dieser Lösung wurden 25,7ml (30,84g, 180,8mmol) Benzylchloroformiat über einen Zeitraum von 30 Minuten hinweg hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde 4 Tage lang bei -25ºC gehalten und dann 2x300ml wäßriger 4%iger Kaliumdihydrogenphosphatlösung und 200ml 2%iger Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die CHCl-Phase wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer abgezogen. Der Rückstand wurde in einem Trockenschrank 24 Stunden bei 50ºC getrocknet und dann zweimal aus Acetonitril bei -25ºC umkristallisiert. Die Kristalle wurden in einem Trockenschrank bei 50ºC getrocknet und ergaben 32,25g (65%ige Ausbeute) von 2'- O-Acetyl-4"-O-(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A. Schmelzpunkt 123 bis 128ºC.
Analyse berechnet für C&sub4;&sub7;H&sub7;&sub5;NO&sub1;&sub6;(910,119):
C, 62,03; H, 8,31; N, 1,54.
Gefunden: C, 61,77; H, 8,11; N, 1,87
¹HNMR (CPCl&sub3;) delta 2.05 (s, OCOCH&sub3;), 4.46 (d, 4"), 4.74 (dd, 2'), 5.13 (d, benzylische H), 5.25 (d, benzylische H), 7.36 (s, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT C

2'-O-Acetyl-4"-O-[(phenylmethoxy)carbonyl]anhydroerythromycin A

2'-O-Acetyl-4"-O-[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A (53,16g, 58,4mmol) aus Schritt B wurden in einem Trockenschrank bei 50ºC getrocknet. Nachdem es zu einem feinen Pulver verrieben worden war, wurde es unter heftigem Rühren in 975ml destilliertem Wasser in einem 2-l-Rundkolben suspendiert. Konzentrierte Chlorwasserstoffsäure (5,6ml 37%ig HCl) wurde dann auf einmal bei Raumtemperatur zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 40 bis 90 Minuten lang gerührt und mittels Dünnschichtchromatographie beobachtet. Die Silicagel- Dünnschichtplatten wurden mit einer Mischung aus Chloroform, Methanol und Ammoniak (9,5:0,3:0,2 Volumenanteile) eluiert. Nachdem das Ausgangsmaterial verbraucht worden war, was durch TLC- [dünnschichtchromatographische] Analyse überprüft wurde, wurde die Reaktionsmischung filtriert, mit konzentriertem Ammoniumhydroxid basisch gemacht und dreimal mit 300ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten Chloroformextrakte wurden einmal mit 300ml 5%ig Natriumbicarbonat (NaHCO&sub3;)-Lösung gewaschen, einmal mit 300ml gesättigter Natriumchloridlösung über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Chloroform wurde am Rotationsverdampfer abgezogen, was das Rohprodukt ergab. Umkristallisation aus Ethylacetat (EtOAc) :Heptan ergab 33,85g (65%ige Ausbeute) reinem 2'-O- Acetyl-4"-O-[(phenylmethoxy)]carbonylanhydroerythromycin A als weiße Kristalle. Schmelzpunkt 134 bis 137ºC
Analyse berechnet für C&sub4;&sub7;H&sub7;&sub3;NO&sub1;&sub5; (892,104):
C, 63,28; H, 8,25; N, 1,57
Gefunden: C, 63,61; H, 8,28; N, 1,44
IR (5% in CDCl&sub3;): max 2975, 2940, 2880, 2835, 2785, 1738, 1458, 1375, 1340, 1292, 1260, 1189, 1169, 1109, 1052, 1008 cm&supmin;¹.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 892.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.09 (s, OCOCH&sub3;), 4.47 (d, 4"), 4.81 (dd&sub1; 2'), 5.19 (s, benzylische CH), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT D

2'-O-Acetyl-11-deoxy-11-oxo-4"-O- [phenylmethoxy)carbonyl]anhydroerythromycin A

Eine Lösung von N-Chlorsuccinimid (30,4g, 228mmol) in 558ml einer Mischung aus Toluol und Benzol (2,88:1,00 Volumenanteile) wurde bei Raumtemperatur hergestellt und auf -10ºC abgekühlt. Methylsulfid (22ml, 18,6g, 299mmol) wurde zugesetzt, und die Mischung wurde 20 Minuten bei -10ºC gerührt. Eine zweite Lösung, die 33,85g (37,9mmol) 2'-O-Acetyl-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl] anhydroerythromycin A-6,9, 12-cyclisches Acetal aus Schritt C enthielt, in einer Mischung von 300ml an Toluol und CHCl (2,33:1,00 Volumenanteile) wurde bei Raumtemperatur bereitet und zu der Reaktionsmischungslösung zugesetzt. Die resultierende Lösung wurde 10 Minuten bei -10ºC gerührt und 2,5 Stunden bei 25ºC gehalten. Nach zusätzlichen 2,5 Stunden wurden 36ml trockenes Triethylamin (TEA) zu der Reaktionsmischung unter Verwirbelung hinzugegeben und diese Lösung wurde 5 Minuten bei Raumtemperatur stehengelassen. Die Reaktionsmischung wurde mit 250ml 5%iger Natriumbicarbonatlösung gefolgt von 250ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Die Lösungsmittel wurden am Rotationsverdampfer abgezogen. Der Rückstand wurde aus Isopropylalkohol umkristallisiert, was 28,6g (85%ige Ausbeute) an 2'-O-Acetyl-11-deoxy-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]anhydroerythromycin A als weiße Kristalle ergab. Schmelzpunkt: 128 bis 132ºC
Analyse berechnet für C&sub4;&sub7;H&sub7;&sub1;NO&sub1;&sub5; (890,088):
C, 63,42; H, 8,04; N, 1,57
Gefunden: C, 63,29; H, 8,08; N, 1,44
IR (5% in CDCl&sub3;): max 2980, 2940, 2880, 1740, 1458, 1374, 1260, 1170, 1058, 1009 cm&supmin;¹.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 890.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.05 (s, OCOCH&sub3;), 4.47 (d, 4"), 4.73 (dd, 2'), 5.19 (s, benzylische CH), 7.36 (m, C&sub5;H&sub6;). ¹³C NMR (CDCl&sub3;) delta 115.0 (C 9), 215.6 (C 11).

SCHRITT E

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

2'-O-Acetyl-11-deoxy-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]anhydroerythromycin A aus Schritt D wurde 24 Stunden in einem Trockenschrank bei 50ºC getrocknet. Eine Aufschlämmung wurde aus 25,74g (28,9mmol) des getrockneten Materials in 805ml Methanol hergestellt. Triethylamin (22ml) wurde zu der Aufschlämmung hinzugegeben, gefolgt von 11,2g (161mmol) Hydroxylaminhydrochlorid. Die Reaktionsmischung wurde auf Rückflußtemperatur gebracht und wurde 3,5 Stunden bei Rückflußtemperatur belassen. Die klare Lösung, die sich ausgebildet hatte, wurde auf Raumtemperatur abgekühlt auf ungefähr 100ml eingeengt und mit 400ml Methylenchlorid verdünnt, mit 400ml 5%ig Natriumbicarbonat gewaschen, mit 400ml gesättigter Kochsalzlösung, dann über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Die Lösungsmittel wurden am Rotationsverdampfer abgezogen und es ergaben sich 21g (24mmol, 85%ige Ausbeute) reinen 9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy- 9,12-epoxy-11-oxo-4"-O-[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycins A.
Analyse berechnet für C&sub4;&sub5;H&sub6;&sub9;NO&sub1;&sub4; (848,050):
C, 63,73; H, 8,20; N, 1,65
Gefunden: C,63,29; H, 8,26; N, 1,71
IR (5% in CDCl&sub3;): 3400, 2960, 2940, 2880, 1734, 1690, 1613, 1458, 1383, 1262, 1180, 1018 cm&supmin;¹.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 848.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 1.74 (s, 10 CH&sub3;), 3.31 (dd, 2'), 4.48 (d, 4"), 5.14 (d, benzylische H), 5.22 (d, benzylische H), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).
¹³C NMR delta 108.8 (C 10), 193.1 (C 9), 204.9 (C 11).

BEISPIEL 2

2'-O-Acetyl-11-deoxy-11-oxoanhydroerythromycin A

VERFAHREN A

2'-O-Acetyl-11-deoxy-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]anhydroerythromycin A, das Produkt aus Beispiel 1 aus Schritt D (2,0g, 2,25mmol) wurde in 100ml Ethylacetat (EtQAc) gelöst. Zu dieser Lösung wurden 2,00g 10%ig Palladium-auf-Kohle (Pd/C) hinzugegeben. Die resultierende Suspension wurde bei Raumtemperatur geschüttelt, wobei 4 Atmosphären Wasserstoffgas 1,5Stunden lang einwirken lassen wurden. Die Reaktionsmischung wurde dann zur Entfernung des Katalysators filtriert, und der Filterkuchen wurde 4x mit 100ml EtOAc gewaschen. Das grau farbene Filtrat wurde im Vakuum auf 200ml eingeengt und 2x mit 100ml 5%iger wäßriger Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die EtOAc-Lösung war nach dem Waschen klar und farblos. Die klare Lösung wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde bis zur Trockne mit einer Vakuumpumpe abgezogen und ergab 1,48g (87,3%ige Ausbeute) an obengenannter Verbindung als weißes Glas, welches in einem Trockenschrank bei 100ºC 2 Stunden weiter getrocknet wurde.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub5;NO&sub1;&sub3; (755,952):
C, 61,97; H, 8,67; N, 1,85
Gefunden: C, 61,71; H, 8,58; N, 1,83
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 756.
IR (0.15% in CCl&sub4;): 3560, 1750, 1740 cm&supmin;¹.
¹H NMR (CDCl&sub3;: delta 2.07 (s, COCH&sub3;), 2.27 (s, N(CH&sub3;)), 3.01 (dd, 4"), 3.28 (s, OCH&sub3;), 4.37 (d, 1'), 4.77 (dd, 2'), 5.13 (2H, m, 1",13).

VERFAHREN B

SCHRITTE A, B UND C

2'-O-Acetylanhydroerythromycin A

SCHRITT A

Erythromycin A (50,0g, 68,1mmol) wurde in einem Mörser mit einem Pistill zu einem feinen Pulver vermahlen und in 1,5l Wasser in einem 4-l-Erlenmeyerkolben suspendiert. Die Suspension wurde mechanisch gerührt. Drei 25-ml-Anteile von 1N HCl-Lösung wurden hinzugegeben, wodurch der pH der Reaktionsmischung auf 2 abgesenkt wurde. Nach 1-stündigem Rühren bei Raumtemperatur zeigte die HPLC-Analyse auf einer C-Umkehrphasensäule 4,6 x250mm (YMC, INC, Morris Plains, N.J.) mit Wasser:Acetonitril:Methanol (12:7:1 Volumenanteile) enthaltend 10g/l Natriumacetattrihydrat und 0,5ml/l Eisessig; bei isokratischer Elution; Flußgeschwindigkeit = 1ml/min; Retentionszeit des Ausgangsmaterials: 7,4 min) kein Ausgangsmaterial mehr, und die Zwischenstufe, Anhydroerythromycin A, wurde mit einer Retentionszeit von 11,4 Minuten (Reinheit 95,5%, RI-Detektion) eluiert. Die Zwischenstufe wurde bei dieser Synthese nicht charakterisiert, aber sie war zuvor gereinigt und charakterisiert worden, mit den folgenden NMR- und MS-Daten: ¹H-NMR (CDCl&sub3;/DO) delta 2,99 (d, 4"), 3,21 (dd, 2'), 3,50 (d, 11), ¹³C-NMR delta 115,9 (C 9), FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 716. Ungefähr 0,5ml des konzentrierten Ammoniumhydroxids wurden hinzugegeben, um den pH der Reaktionsmischung auf 4,5 einzustellen, um jegliche weitere Reaktion zu löschen. Die Reaktionsmischung wurde in einen Scheidetrichter überführt und 100ml konzentrierten Ammoniumhydroxids wurden hinzugegeben, um die klare Lösung basisch zu machen. Das ausgefallene Produkt wurde 3mal mit 400ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten Chloroformphasen wurden mit 400ml 5%ig Natriumbicarbonat gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet.

SCHRITT B

Die trockene Chloroformlösung wurde in einen 2-1- Rundkolben filtriert und 50ml Triethylamin wurden hinzugegeben, gefolgt von 20ml (21,64g, 212mmol) Acetanhydrid. Die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Geinäß der HPLC- und Dünnschichtanalyse trat die Überführung in das Produkt 2'-O-Acetylanhydroerythromycin A vollständig ein (Retentionszeit an HPLC: 42,6 Minuten). Die Chloroformlösung wurde einmal mit 450ml einer basischen Lösung gewaschen, die 400ml 5%ig Natriumbicarbonat und 50ml konzentriertes Ammoniumhydroxid enthielt, einmal mit 5%ig Natriumbicarbonat und dann über wasserfreiem Natriumsulfat getrocoknet und filtriert. Das Chloroform wurde am Rotationsverdampfer abgezogen. Der Rückstand wurde in Acetonitril wieder aufgelöst und das Acetonitril wurde nachfolgend am Rotationsverdampfer entfernt, um das Produkt, 2'-O-Acetylanhydroerythromycin A, zu ergeben. Obengenannte Verbindung wurde bei Raumtemperatur getrocknet und ergab 49,4g (95,7%ige Ausbeute).
&sub1;H NMR (CDCl&sub3;) delta 2.10 (s, COCH&sub3;), 3.01 (m, 4"), 3.51 (m, 11), 4.83 (dd, 2').
FAB (M+H)&spplus; at M/Z: 776 (775.983 berechnet für C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub9;NO&sub1;&sub4;).

SCHRITT C1

Es wurde eine Lösung hergestellt, die 84,59g (111,5mmol) 2'-O-Acetylanhydroerythromycin A (aus Schritt B) und 14,69g (125,4mmol) N-Methylmorpholin-N-oxid (NMO) in 1,5l Methylenchlorid (CHCl) enthielt. Zu dieser Lösung wurden 50g eines 4 Å Molekularsiebs hinzugegeben, und die resultierende Suspension wurde mechanisch für ungefähr 5 Minuten gerührt. Tetrapropylammoniumperruthenat (TPAP; 3,19g, 9,1mmol) wurde unter Rühren hinzugegeben, und die Reaktionsmischung wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann durch 2 Mikron Filterpapier in einen Scheidetrichter schwerkraftfiltriert. Die CHCl-Lösung wurde 2x mit 1l 5%iger wäßriger Natriumsulfitlösung, gefolgt von 1l 5%iger wäßriger Natriumdihydrogenphosphatlösung (pH = 5) gewaschen. die gewaschene organische Phase wurde dann über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum aufkonzentriert. Das Konzentrat (ein schwarzer Schlamm) wurde in 900ml Isopropylalkohol (IPA) gelöst und mit aktivierter Aktivkohle (7 Spatelspitzen von Darco G-60) behandelt. Die Aktivkohlelösung wurde verwirbelt und bei Raumtemperatur ungefähr 5 Minuten stehenlassen. Die zugegebene Aktivkohle wurde dann durch Filtration entfernt und der IPA wurde im Vakuum abgezogen, was 73g rohen 2'-O-Acetyl-11-deoxy-11- oxoanhydroerythromycin A ergab, das zu 63,1% rein war, wie durch die HPLC-Analyse unter Verwendung einer YMC R-ODS-7 (C&sub8;)- Umkehrphasensäule unter folgenden Bedingungen bewiesen wurde. Eluent: CH&sub3;CN:HO:MeOH (13:7:1 Volumenanteile), enthaltend 10g/l Natriumacetat und 0,5ml/l Eisessig; isokratische Elution; Flußgeschwindigkeit 1,0ml/min.

SCHRITT C2

Eine Chromsäurelösung, enthaltend 20g (68,0mmol) Kahumdichromat, 15ml (281,3mmol) Schwefelsäure und 110ml Eisessig in 900ml Wasser wurde hergestellt. Zu dieser Lösung wurde bei mechanischer Rührung 49,0g (64,6mmol) 2'-O- Acetylanhydroerythromycin A aus Schritt B hinzugegeben, das in 1l Methylenchlorid gelöst worden war. Die zweiphasige Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 2,5 Stunden lang gerührt. Der Reaktionsfortgang wurde mit HPLC (YMC) an einer C&sub8;- Umkehrphasensäule (4,6x250mm; Eluent: CH&sub3;CN:HO:CH&sub3;OH (13:7:1 Volumenanteile), enthaltend 10g/l Natriumacetat und 0,5ml/l Eisessig; isokratische Elution; Flußgeschwindigkeit 1,0ml/min) verfolgt. Nach 2,5 Stunden betrug die gewünschte Produktpeakfläche 73,7% (RI-Detektion: Retentionszeit 20,4 Minuten), und die Reaktion wurde mit 30ml Isopropylalkohol gelöscht. Die Reaktionsmischung wurde dann bei Raumtemperatur für eine zusätzliche Stunde gerührt, wobei sie in einem Eiswasserbad gekühlt wurde. Die Reaktionsmischung wurde durch die Zugabe von 100ml konzentrierten Ammoniumhydroxids basisch gemacht. Die Phasen wurden getrennt, und die wäßrige Phase wurde mit 300ml Methylenchlorid extrahiert. Die Methylenchloridphasen wurden vereinigt und 4x mit 400ml 5%ig Natriumbicarbonat gefolgt von 5 400-ml-Waschschritten mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen (bis die Waschwässer fast farblos waren). Die Methylenchloridlösung wurde dann über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt und ergab einen Rückstand, der in Acetonitril wieder aufgenommen wurde. Das Acetonitril wurde verdampft und ergab 45,3 g Rohprodukt, das 73,2%ig an 2'-O- Acetyl-11-deoxy-11-oxoanhydroerythromycin A war, wie durch HPLC- Analyse ermittelt.

BEISPIEL3

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A

VERFAHREN A

Das Produkt nach Beispiel 1 (2,06g 2,4mmol) wurde in 70ml Methanol gelöst und bei Raumtemperatur 2 Tage stehenlassen. Zu dieser Lösung wurden 1g 20%ig Palladium auf Kohle hinzugegeben. Die Suspension wurde bei Raumtemperatur unter 4 Atmosphären Wasserstoffdruck 10 Stunden lang geschüttelt. Die Reaktionsmischung wurde dann sequentiell durch ein Millipore- Filter Schwerkraft-gefiltert, um den Katalysator zu entfernen. Das Methanol wurde am Rotationsverdampfer entfernt, und der Rückstand wurde in 100ml Methylenchlorid aufgenommen. Die Methylenchloridlösung wurde mit 200ml 5%ig Natriumbicarbonatlösung, 150ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand betrug 1,24g reines 9, 10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A, das aus heißem Acetonitril umkristallisiert wurde. Schmelzpunkt: 149 bis 153ºC
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub3;NO&sub1;&sub2;(13,914):
C, 62,25; H, 8,89; N, 1,96
Gefunden: C, 61,92; H, 9,06; N, 1,94
FAB (M+H)&spplus; at M/Z: 714.
IR (5% in CDCL&sub3;): 3400 (O-H), 1730 (Lakton C=O), 1687 (Enon C=O), 1612 (Enon C=C) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;/DO) delta 1.74 (s, 10 CH&sub3;), 2.32 (s, N(CH&sub3;)), 3.02 (d, 4"), 3.29 (s, OCH&sub3;), 3.37 (dd, 2'), 5.02 (dd, 13).
¹³C NMR (CDCl&sub3;) delta 96.5 (C 1"), 104.7 (C 1'), 108.6 (C 10), 193.0 (C 9), 204.9 (C 11).

VERFAHREN B

Das Produkt aus Beispiel 2/Verfahren B wurde in 1,25l Methanol gelöst und 250ml Methanol wurden abdestilliert, um jegliches verbleibende Methylenchlorid zu entfernen. Triethylamin (80ml) und Hydroxylaminhydrochlorid (40g, 0,58mol) wurden hinzugegeben, und die Reaktion wurde, wie in Beispiel 1/Schritt E beschrieben, durchgeführt. Das Rohprodukt wurde 2mal aus Acetonitril umkristallisiert und ergab 22,47g reinen 9,10- Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycins A. Schmelzpunkt: 149 bis 153ºC.
149-153ºC.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 714.
IR (5% in CDCl&sub3;): 3400 (O-H), 1730 (Lakton C=O), 1687 (Enon C=O), 1612 (Enon C=C) cm&supmin;¹.
Die 300MHz-¹H- und ¹³C-NMR-Spektren waren mit denjenigen des Produktes nach Verfahren A identisch.

BEISPIEL 4

(9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A

VERFAHREN A

SCHRITT A

(9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 1 wurde in einem Trockenschrank 24 Stunden bei 50ºC getrocknet und 20,28g (23,91mmol) diesen Produktes wurden in einer Mischung von 260ml Tetrahydrofuran (THF) und 33ml Isopropylalkohol gelöst. Lithiumborhydrid (8,0g, 367,3mmol) wurde hinzugegeben, wobei die Lösung bei Raumtemperatur gerührt wurde. Hitze und Gas entwickelten sich während der Zugabe. Die resultierende graue Suspension wurde 2 Tage bei 5ºC gehalten, und dann mit 25ml 50%ig Natriumcarbonat behandelt und mit 300ml Denzol verdünnt. Die organische Phase wurde 5x 100-ml-Anteilen Natriumbicarbonat gewaschen (bis die Blasenbildung aufhörte) und dann mit 100ml gesättigter Kochsalzlösung über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und bis auf 18g rohen (9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A als weißes Glas eingeengt. Das Rohprodukt wurde in Methanol gelöst und diese Lösung wurde 2 Tage lang bei Raumtemperatur belassen, um die Boratesterkomplexe zu zerstören. Das Methanol wurde am Rotationsverdampfer entfernt. Der Rückstand (in aufgeteilten Anteilen) wurde an einer Silicagelsäule (3,5x50cm) chromatographiert, die mit 1l einer Mischung von Chloroform, Methanol und Ammoniak (9,5:0,15:0,15 Volumenanteilen) eluiert wurde, wobei die Fraktionen in 1,8-Minutenintervallen gesammelt wurden. Die Fraktionen, die das Produkt enthielten, wurden vereinigt, und die Lösungsmittel wurden am Rotationsverdampfer entfernt, was 7,0 g (35%ige Ausbeute) reines (9S,11S)-9-Deoxo- 12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O-[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 852 (852.082 berechnet für C&sub4;&sub5;H&sub7;&sub3;NO&sub1;&sub4;).
IR (5% in CDCl&sub3;): 3440 (O-H), 1740 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 3.17 (dd, 2'), 2.28 (s, N(CH&sub3;)), 3.31 (s, OCH&sub3;), 3.67 (dd, 9), 4.28 (dd, 11), 4.49 (d, 4"), 5.13 (d, benzylische H), 5.24 (d, benzylische H), 7.35 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT B

(9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-erythromycin A

(9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A aus Schritt A wurde entschützt und zwar wurde spezifisch die 4"-O-Benzyloxycarbonyl (CBZ)-Gruppe entfernt, wie es in Beispiel 3, Verfahren A, beschrieben ist, und zwar für die Entfernung der CBZ-Gruppe aus 9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A. Obengenannte Verbindung wurde als weiße Kristalle aus Benzol/Heptan in 92%iger Ausbeute erhalten. Schmelzpunkt 137 bis 143ºC.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub7;NO&sub1;&sub2;(717,946):
C, 61,90; H, 9,41; N, 1,95
Gefunden: C, 61,86; H, 9,36; N, 1,90
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 718.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 3.01 (dd, 4"), 3.22 (dd, 2'), 3.66 (dd, 9), 4.27 (dd, 11).

VERFAHREN B

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A aus Beispiel 3 (22,39g, 31,36mmol) wurde in 800ml Tetrahydrofuran (THF) in einem 3-l-Dreihalskolben gelöst, der mit einem mechanischen Überkopfrührer ausgestattet war. Lithiumborhydrid (9,0g, 413,2mmol) wurde hinzugeführt und in den Kolben mit zusätzlichen 200ml THF überspült. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur gerührt und periodisch für die Dünnschichtanalyse überprüft. Die Silicagel- Dünnschichtplatten wurden mit einer Lösungsmittelmischung aus Chloroform, Methanol und Ammoniak (9:1:0,2) eluiert. Nach 7,5 Stunden wurden zusätzliche 1,0g Lithiumborhydrid zugegeben, und die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Am nachfolgenden Morgen wurden 100ml Methanol tropfenweise zu der gerührten Reaktionsmischung hinzugegeben. Weder eine Wasserstoffentwicklung noch ein Temperaturanstieg der Reaktionsmischung wurden beobachtet. Eisessig (25ml) wurde dann tropfenweise zu der Reaktionsmischung durch einen Tropftrichter hinzugegeben. Wasserstoffgas entwickelte sich 30 bis 40 Minuten lang und die Mischung wurde auf einem Eiswasserbad gekühlt. Nach 2 Stunden Rühren bei Raumtemperatur wurden 800 bis 900ml TH am Rotationsverdampfer entfernt. Die konzentrierte Reaktionsmischung wurde mit 1,01 5%ig Natriumbicarbonatlösung verdünnt. Die resultierende Lösung wurde 3 x mit 300ml Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit 400ml 5%ig Natriumbicarbonatlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Es wurde ein Rotationsverdampfer verwendet, um das Lösungsmittel zu entfernen, was das Rohprodukt ergab, welches in 100ml Acetonitril wieder aufgenommen wurde. Das Acetonitril wurde am Rotationsverdampfer entfernt und der Rückstand wurde bis zur Trockne (1 Stunde lang) mit einer Vakuumpumpe abgezogen, was 21,8g Rohprodukt ergab. Es war notwendig, 500ml Methanol hinzuzugeben, um den Borhydridkomplex des Produktes vollständig zu zerstören. die Methanollösung wurde bei Raumtemperatur 4 Tage lang gerührt, nachdem das Methanol aus einem Rotationsverdampfer abgezogen wurde. Der Rückstand wurde in 500ml Ethylacetat wieder aufgenommen und die Ethylacetatlösung wurde 3x mit 200ml 5%ig Natriumbicarbonatlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert. Das Ethylacetat wurde am Rotationsverdampfer entfernt, was ein weißes Glas ergab, das an der Vakuumpumpe 3 Tage lang getrocknet wurde. Das Glas wurde in 40ml Chloroform, enthaltend 3%ig Methanol und 0,2%ig konzentriertes Ammoniumhydroxid (das eluierende Solvents) aufgelöst. Diese Lösung wurde auf eine Silicagelsäule (70 bis 230-Körnung, 5x 41,5cm) aufgegeben, die in Acetonitril gepackt worden war und mit 41 einer 3%igen Lösung von konzentriertem Ammoniumhydroxid in Chloroform vorbehandelt, gefolgt von 3,01 des eluierenden Solvens. Die Säule wurde bei 3,51/min betrieben, und die Fraktionen wurden in 7-Minuten-Intervallen gesammelt. Bei Fraktion Nr. 135 war die Konzentration des Ammoniumhydroxids in dem eluierenden Solvent auf 0,3% angestiegen. Die Fraktionen mit den Nummern 55 bis 210 wurden vereinigt, und das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt, was ein weißes Glas ergab, das an der Vakuumpumpe bei Raumtemperatur bis zur Gewichtskonstanz getrocknet wurde. Das Glas wurde aus 200ml heißem Benzol umkristallisiert, zu dem 200ml n-Heptan hinzugegeben worden war. Die Kristalle wurden mit 50/50 Benzol/Heptan-Lösung gewaschen und luftgetrocknet, was 11,23g (9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A, Schmelzpunkt 137 bis 143ºC, ergab. Zusätzliche 1,9g des Produktes wurden aus der Mutterlauge erhalten, was eine Ausbeute an (9S,11S)-9-Deoxo- 12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A von 58,2% ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 718
Das ¹H-NMR war mit demjenigen des Produktes nach Verfahren A identisch.

BEISPIEL 5

(9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A

VERFAHREN A

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A nach Beispiel 3 wurde mit Diisobutylaluminiumhydrid in Tetrahydrofuran behandelt, wie dies in Beispiel 7, Schritt B, für 9,10-Didehydro-9-deoxy-11,12- dideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A beschrieben ist, was die obengenannte Verbindung als Nadeln aus Methanol/Wasser ergab. Schmelzpunkt: 159 bis 161ºC
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub5;NO&sub1;&sub2; (715,930):
C, 62,07; H, 9,15; N, 1,96
Gefunden: C, 61,83; H, 9,20; N, 1,90
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 716.
IR (0.15% in CDCl&sub3;): 3480 (O-H), 1755 und 1738 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.30 (s, N(CH&sub3;)), 3.03 (dd, 4"), 3.28 (s, OCH&sub3;), 3.30 (dd. 2'), 3.78 (dd, 9), 5.13 (dd, 13).
¹³C NMR delta 87.5 (C 9), 97.7 (C 1"), 105.1 (C 1'), 177.0 (C 1), 217.6 (C 11).

VERFAHREN B

SCHRITT A

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 4, Verfahren 4, Schritt A (3,4g, 4,0mmol) wurde in 23ml Methylenchlorid bei Raumtemperatur gelöst. Kaliumcarbonat (1,7g, 12,3mmol) wurde mit Mörser und Pistill zerrieben und unter Rühren zu der Lösung zugegeben, gefolgt von Acetanhydrid (1,13ml, 1,22g, 12,0mmol) Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 2 Stunden lang gerührt, nachdem die Reaktion durch die Zugabe von 23ml 5%ig Natriumbicarbonat gelöscht wurde. Die Methylenchloridphase wurde abgetrennt und mit 23ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, wo sich 2,85g (80%ig Ausbeute) an (9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A als weißes Pulver ergaben.
FAB (M+1)&spplus; bei M/Z: 894 (894,120 berechnet für C&sub4;&sub7;H&sub7;&sub5;O&sub1;&sub5;).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.06 (s, COCH&sub3;), 2.27 (s, N(CH&sub3;)), 3.32 (s, OCH&sub3;), 3.66 (dd, 9), 4.48 (d, 4"), 4.75 (dd, 2'), 5.15 (d, benzylische H), 5.24 (d, benzylische H), 7.37 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT B

(9S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A (0,959, 1,06mmol) aus Schritt A wurden in 12,4ml Toluol gelöst. In einem separaten Kolben wurde NCS (N-Chlorsuccinimid) (1,5g, 11,2mmol) in einer Mischung aus 20,7ml Toluol und 6,9ml Benzol gelöst. Die NCS- Lösung wurde auf -20ºC gekühlt und Dimethylsulfid (DMS; 1,1ml 15,0mmol) wurde auf einmal unter Rühren hinzugegeben. Die resultierende Lösung wurde bei -20ºC 20 Minuten lang gerührt. Die Lösung aus (9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy- 4"-O-[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A in Toluol wurde zu der Lösung hinzugegeben, die NCS und DMS enthielt. Die Reaktionsmischung wurde auf -25ºC gekühlt und bei -25ºC 2,5 Stunden lang gerührt. Die Reaktion wurde durch die Zugabe von 2ml Triethylamin gelöscht und mit 25ml 5%iger Bicarbonatlösung gewaschen. Die wäßrige Phase wurde mit 20ml Toluol extrahiert und die vereinigten organischen Phasen wurden mit Kochsalz gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer aufkonzentriert, was 0,80g (94%ige Ausbeute) obengenannten Produkts ergab.
Analyse berechnet für C&sub4;&sub7;H&sub3;&sub7;NO&sub1;&sub5; (892,104): C, 63,28; H, 8,25; N, 1,57
Gefunden: C, 62,93; H, 8,51; N, 1,53
FAB (M+1)&spplus; bei M/Z: 892.
¹HNMR (CDC1&sub3;) delta 2.06 (s, COCH&sub3;), 2.26 (s, N(CH&sub3;)), 3.32 (s, OCH&sub3;), 3.78 (dd, 9), 4.48 (d, 4"), 4.75 (dd, 2'), 5.13 (d, benzylische H), 5.24 (d, benzylische H), 7.37 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT C

(9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A

Es wurden die Schutzgruppen aus der 2' (O-Acetyl)- und der 4" (O-Benzyloxycarbonyl)-Position von (9S)-2'-O-Acetyl-9- deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A entfernt, d.h. dem Produkt nach Schritt B, wie im Beispiel 3, Verfahren A beschrieben, was 0,62g (87%ige Ausbeute) an (9S)-9-Deoxo-11,12- dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A mit einem Schmelzpunkt von 159 bis 161ºC ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 716 (715,930 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub5;NO&sub1;&sub2;) IR-Banden (0,15% in CDCl&sub3;): 3480 (O-H), 1755 und 1738 (C=O) cm Das ¹H-NMR war mit dem nach Verfahren A erhaltenen Produkt identisch.

BEISPIEL 6

(4"E)-9,10-Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- hydroxyimino-11-oxoerythromycin A

VERFAHREN A

SCHRITT A

2'-O-Acetyl-4",11-dioxoanhydroerythromycin A

2'-O-Acetylanhydroerythromycin A (40g, 52,8mmol) aus Beispiel 2 wurde mit N-Chlorsuccinimid (54,0g; 404mmol) und Dimethylsulfid (33,0g, 531mmol) wie im Beispiel 1, Schritt D, behandelt, was 37,7g (94% Ausbeute) der obengenannten Verbindung als Glas ergab.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub3;NO&sub1;&sub3; (753,936):
C, 62,13; H, 8,42; N, 1,86
Gefunden: C, 61,71; H, 8,42; N, 1,87
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 754.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.07 (s, COCH&sub3;), 2.28 (s, N(CH&sub3;)), 3.28 (s, OCH&sub3;), 4.72 (dd, 2'), 5.10 (dd, 13), 5.67 (t, 1").

SCHRITT B

(4"E)-9,10-Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- hydroxvimino-11-oxoerythromycin A

2'-O-Acetyl-4",11-dideoxy-4",11-dioxoanhydroerythromycin A (53,97g, 71,7mmol) aus Schritt A wurden in 1,0l Methanol aufgelöst. Hydroxylaminhydrochlorid (19,3g, 27,8mmol) wurden auf einmal bei Raumtemperatur hinzugegeben, gefolgt von Triethylamin (40,5ml, 285,7mmol).
Die Reaktion wurde durchgeführt, und das Produkt wurde isoliert, wie dies in Beispiel 1, Schritt E, beschrieben ist. Das Rohprodukt wurde aus heißem Ethylacetat umkristallisiert, was 19,6g (37,7%ige Ausbeute) an (4"E)-9,10-Didehydro-9-deoxo- 4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"-hydroxyimino-11-oxoerythromycin A ergab. Eine 1,1-g-Probe obengenannter Verbindung wurde mehrmals aus heißem Ethylacetat umkristallisiert, was 0,48g weiße Kristalle ergab. Schmelzpunkt: 236 bis 241ºC.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub2;NO12 (726,913):
C, 61,14; H, 8,60; N, 3,85
Gefunden: C, 61,31; H, 8,63; N, 3,83
IR (0.5% in CHCl&sub3;): 3595, 1734, 1695, 1620 cm&supmin;¹.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 727.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 1.76 (s, 10 CH&sub3;), 2.32 (s, N(CH&sub3;)), 3.29 (s, OCH&sub3;), 3.38 (dd, 2'), 4.59 (d, 1'), 4.97 (dd, 13), 5.11 (dd, 1"), 5.31 (q, 5"), 8.73 (S=NOH). ¹³C NMR (CDCl&sub3;) delta 93.7 (C 1"), 104.2 (C 1'), 109.1 (C 10), 159.5 (C 4"), 177.3 (C 1), 192.5 (C 9), 204.5 (C 11)

VERFAHREN B

SCHRITT A

2'-O-Acetyl-4",11-dideoxy-4",11-dioxoanhydroerythromycin A

Eine Lösung von Oxalylchlorid (24ml, 275mmol) in 250ml Methylenchlorid in einem 1-l-Dreihalskolben wurde auf -70ºC in einem Trockeneis/Acetonbad gekühlt. Eine Lösung von Dimethylsulfoxid (35ml, 493mmol) in 45ml Methylenchlorid wurde tropfenweise aus einem Tropftrichter zu der Oxalylchloridlösung bei -70ºC hinzugegeben. Nachdem die Zugabe abgeschlossen worden war, wurde die Reaktionsmischung 5 Minuten lang gerührt. Eine Lösung von 2'-O-Acetylanhydroerythromycin A aus Beispiel 2 (13,9g, 18,34mmol) in 250ml Methylenchlorid wurde dann durch den Tropftrichter zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 75 Minuten bei -70ºC gerührt und mit 118ml Triethylamin gelöscht. Die Reaktionsmischung wurde auf -30ºC aufwärmen lassen, und sie wurde mit 250ml Methylenchlorid verdünnt und dann in einen Scheidetrichter überführt. Sie wurde dann 3x mit 300ml 6%igem Phosphatpuffer (pH 6,0) und 300ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, was obengenannte Verbindung ergab, die in Schritt B ohne zusätzliche Reinigung weiter eingesetzt wurde.

SCHRITT B

(4"E)-9,10-Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- hvdroxyimino-11-oxoerythromycin A

Der Rückstand aus Schritt A (18g) wurde mit Hydroxylaminhydrochlorid und Triethylamin in Methanol behandelt, wie dies in Beispiel 6, Verfahren A, Schritt B, beschrieben ist. Obengenannte Verbindung wurde in 53%iger Ausbeute (aus 2'-O- Acetylanhydroerythromycin A) nach Umkristallisierung aus Ethylacetrat erhalten.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 727 (726,913 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub2;NO&sub1;&sub2;)
Die 300-MHZ-¹H- und ¹³C-NMR-Spektren stimmten mit der vorgeschlagenen Struktur überein.

BEISPIEL 7

(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A

SCHRITT A

4"-Amino-9,10-didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-edoxy-11- oxoerythromycin A

(4"E)-9,10-didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxy-4"-hydroxyimino-11-oxoerythromycin A (6,35g, 8,75mmol), das Produkt aus Beispiel 6, wurde in 250ml Isopropylalkohol gelöst und Raney-Nickel (30g) wurde hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde auf einem Parr-Rüttler bei Raumtemperatur unter 4 Atmosphären Wasserstoffgas 24 Stunden lang gerüttelt. Die Reaktionsmischung wurde Filtriert und der Filterkuchen wurde mit Isopropylalkohol gewaschen. Die Isopropyl-alkoholischen Waschflüssigkeiten wurden mit dem ersten Filtrat vereinigt und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 5,9g einer Mischung aus 4"-Amino-Epimeren obengenannter Verbindung als farblosen Schaum ergab, der im nächsten Schritt eingesetzt wurde.

SCHRITT B

(4"R)-9-DeDidehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo- 4"-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A

4"-Amino-9,10-didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxy-11-oxoerythromycin A (2,7g, 3,8mmol) aus Schritt A wurde in 110ml Methylenchlorid gelöst und Benzyloxycarbonyl-N- Hydroxysuccinimid (1,24g, 5,0mmol) wurde hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 16 Stunden lang gerührt und dann 3x mit 80ml 6%iger Phosphatpufferlösung (pH 6,0) und 80ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen. Die gewaschenen organischen Phasen wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 3,2g Rückstand ergab. Dieser Rückstand wurde an einer Silicagelsäule (2,5x 60cm) mit 0,2%ig Ammoniumhydroxid in Acetonitril eluiert. Die Fraktionen mit den Nummern 185 bis 230 wurden vereinigt und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 0,51g (15%ige Ausbeute) obengenannter Verbindung ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 847 (847,056 berechnet für C&sub4;&sub5;H&sub7;&sub0;NO&sub1;&sub3;).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 1.74 (s, 10 CH&sub3;), 2.32 (s, N(CH&sub3;)), 3.30 (s, OCH&sub3;), 3.32 (dd, 2'), 3.47 (d, 4", J4",5"=3 Hz), 4.58 (d, 1'), 4.71 (q, 5"), 4.83 (d, 1"), 5.01 (dd, 13), 5.12 (d, NH), 5.14 (s, benzylische CH), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT C

(4"R)-9,10-Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxy-11-oxo-4"-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino] erythromycin A (1,68 g, 1,98mmol) aus Schritt B wurde in 68ml trockenem THF in einem 250-ml-Rundkolben gelöst, der über Nacht in einem Trockenschrank getrocknet worden war und mit Stickstoff gespült. Die Lösung wurde in einem Trockeneis/Acetonitrilbad auf -45ºC abgekühlt und Diisobutylaluminiumhydrid (15,5ml einer 1,0M Lösung in Toluol) wurde über eine Spritze hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei -45ºC unter Stickstoffatmosphäre 2 Stunden lang gerührt. Methanol (1,2ml) wurde vorsichtig in 0,1ml-Anteilen hinzugegeben, und die Reaktionsmischung wurde offen an der Atmosphäre bei -45ºC 5 Minuten lang gerührt. Dann wurden 1,9ml Wasser in 0,1-ml-Anteilen hinzugegeben, und die Reaktionsmischung wurde wieder bei -45ºC 10 Minuten lang gerührt. Die Reaktionsmischung wurde bis auf Raumtemperatur aufwärmen lassen, wobei sie mehrere Stunden lang gerührt wurde, sie wurde durch einen Glasfrittentrichter filtriert und 3x mit 50ml THF oder Methanol gespült. Das Lösungsmittel wurde am Rotationsverdampfer entfernt und es ergaben sich 1,58g eines farblosen Feststoffs. Dieser Rückstand wurde an einer Silicagelsäule (40 bis 60-Körnung, 2,5x45cm) gereinigt, die mit 0,2%ig Ammoniumhydroxid in Acetonitril eluiert wurde. Die obengenannte Verbindung (1,03g, 50%ige Ausbeute) wurde als ein Glas aus den Fraktionen mit den Nummern 43 bis 118 erhalten.
¹HNMR (CDC1&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.29 (s, OCH&sub3;), 3.30 (dd, 2'), 3.50 (d, 4"), 3.77 (dd, 9), 4.41 (d, 1'), 4.72 (q, 5", J4",5",=1.5 Hz), 4.85 (d, 1"), 5.10 (dd, 13), 5.11 (d, NH), 5.15 (s, benzylic CH), 7.37 (m, C&sub6;H&sub5;).

BEISPIEL 8

(4"R,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A

(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A (0,92g, 1,1mmol), das Produkt nach Beispiel 7, wurde katalytisch hydriert, um die CBZ-Schutzgruppe zu entfernen, wie dies in Beispiel 3, Verfahren A, beschrieben ist, was 0,7g (89%ige Ausbeute) obengenannter Verbindung als Glas ergab.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub6;NO&sub1;&sub1; (714,945):
C, 62,16; H, 9,30; N, 3,92
Gefunden: C, 62,66; H, 924; N, 3,76
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 715.
IR (0.15% in CCl&sub4;): 3480 (O-H), 1756 und 1736 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.30 (s, N(CH&sub3;)), 3.29 (s, OCH&sub3;), 3.33 (dd, 2'), 3.77 (dd, 9), 4.41 (d, 1'), 4.68 (dq, 5", J4",5"=1.2 Hz), 4.83 (d, 1"), 5.13 (dd, 13).

BEISPIEL 9

(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- [[(dimethylamino)methylen]amino]-11-oxoerythromycin A

(4"R,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A (das Produkt nach Beispiel 8) (0,20g, 0,28mmol) wurden in 2,5ml frisch destillierten Methylenchlorids in einem Kolben gelöst, der über Nacht in einem Trockenschrank getrocknet worden war. Dimethylformamiddimethylacetal (0,18ml, 1,35mmol) wurden auf einmal hinzugegeben, und die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 20 Stunden lang gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann in 5 ml Methylenchlorid eingegossen und mit 5ml 5%ig Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die wäßrige Schicht wurde 3x mit 5ml Methylenchlorid extrahiert und die organisches Phasen wurden vereinigt. Die vereinigten organischen Phasen wurde mit 10ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und aufkonzentriert, was 0,15g eines gelben Glases ergab. Der gelbe Rückstand wurde an einer Silicagelsäule gereinigt, die mit einer Mischung von Heptan, Chloroform, Methanol und Ammoniak (6:3:1:0,2 Volumenanteile) eluiert wurde. Die Fraktionen mit den Nummern 94 bis 105 wurden vereinigt und aufkonzentriert, was 21,4 mg (10%ige Ausbeute) an obengenannter Verbindung als geschäumtes Glas ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 770 (770,025 berechnet für C&sub4;&sub0;H&sub3;&sub4;N&sub3;O&sub1;&sub1;).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.30 (s, N(CH&sub3;)), 2.55 (bs, NCH&sub3;), 2.90 (bs, NCH&sub3;), 3.28 (dd, 2'), 3.30 (s, OCH&sub3;), 3.77 (dd, 9), 4.43 (d, 1'), 4.62 (brn, 5"), 4.93 (d, 1"), 5.12 (dd, 13), 7.25 (bs, N=CH-N).

BEISPIEL 10

(4"R,9S)-4"-Acetylamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-edoxy-11- oxoerythromycin A

(4"R,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy- 11-oxoerythromycin A (das Produkt nach Beispiel 8) (34,7mg, 0,049mmol) wurde in 2ml Methanol aufgelöst und in einen 25-ml- Rundkolben eingetragen. Die Lösung wurde auf einem Eisbad auf 0ºC gekühlt. Triethylamin (4,9mg, 0,048mmol) wurde unter Rühren zu der Lösung hinzugegeben, gefolgt von Acetanhydrid (8,0mg, 0,78mmol). Nach 1 Stunde Rühren bei 0ºC wurde die Reaktionsmischung mit 40ml Ethylacetat verdünnt. Die resultierende Lösung wurde 3x mit 20ml 4%iger Natriumbicarbonatlösung gewaschen und dann mit 20ml gesättigter Kochsalzlösung; sie wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 29mg (79%ige Ausbeute) obengenannter Verbindung ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 756 (756,983 berechnet für C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub2;). ¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.07 (s, NCOCH&sub3;), 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.28 (s, OCH&sub3;), 3.32 (dd, 2'), 3.78 (dd, 9), 3.83 (bd, 4", J4",5"=l.2 Hz), 4.41 (d, 1'), 4.73 (dq, 5"), 5.14 (dd, 13), 5.78 (bd, NHCO).

BEISPIEL 11

(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- [(methylsulfonyl)amino]-11-oxoerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 8 (4"R,9S)-4"-Amino-9-deoxo- 4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A (0,075g, 0,105mmol) wurde in einen 25-ml-Rundkolben gegeben, gefolgt von 0,07g (0,507mmol) fein vermahlenem Kaliumcarbonat und 8ml Methylenchlorid. Die Suspension wurde auf einem Eisbad gekühlt und unter Stickstoffatmosphäre gerührt. Eine Lösung von Methansulfonsäureanhydrid (0,057g, 0,33mmol) in 1ml Methylenchlorid wurde hergstellt und zu der Suspension über eine Spritze hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei 0ºC unter Stickstoffatmosphäre 40 Minuten lang gerührt, wobei sie nach dieser Zeit mit 20ml Methylenchlorid verdünnt und in einen Scheidetrichter überführt wurde. Sie wurde mit 3 x 15ml 4%iger Natriumbicarbonatlösung gewaschen, einmal mit 15ml Kochsalzlösung über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, was einen farblosen festen Rückstand ergab. Der Rückstand wurde an eine Silicagelsäule (1,1x30cm) gereinigt, die mit 0,3%ig Ammoniumhydroxid in Acetonitril eluiert wurde. Die Fraktionen mit den Nummern 11 bis 20 wurden vereinigt, was 0,05 g (63%ige Ausbeute) an reinem (4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxy-4"-[(methylsulfonyl)amino]-11-oxoerythromycin A ergab.
MW berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub3;S (793,031).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.30 (s, N(CH&sub3;)), 3.03 (s, NSOCH&sub3;), 3.22 (d, 4", J4",5"=1.2 Hz), 3.29 (s, OCH&sub3;), 3.31 (dd, 2'), 3.78 (dd, 9), 4.39 (d, 1'), 4.65 (bd, NHSO), 4.78 (dq, 5"), 4.84 (d, 1"), 5.12 (dd, 13).

BEISPIEL 12

(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-edoxy-11-oxo-4"-[[(phenylmethyl)amino]oxoerythromycin A

(4"R,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy- 11-oxoerythromycin A (0,06 g, 0,084mmol), das Produkt nach Beispiel 8, und 0,1 g (0,98mmol) Benzaldehyd wurden in 3ml Acetonitril (CH&sub3;CN) aufgelöst. Diese Lösung wurde unter Rühren zu einer Suspension von Natriumcyanoborhydrid (0,022g, 0,350mmol) in 2ml CH&sub3;CN in einem 10-ml-Rundkolben hinzugegeben. Zu der resultierenden Lösung wurden 0,05ml 3N HCl-Lösung hinzugegeben. Es wurde ein Aufschäumen festgestellt. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 1 Stunde lang gerührt. Die Reaktion wurde dann durch die Zugabe von 1ml 4%ig Natriumbicarbonatlösung gelöscht und in einen Scheidetrichter überführt, wo sie mit 40ml CHCl verdünnt wurde. Die gesamte Lösung wurde mit 3x 20ml 4%ig Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit 20ml Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und zu einem Öl aufkonzentriert. Das Öl wurde an einer Säule (1,1x30cm) gereinigt, die mit 5g Silicagel in CH&sub3;CN gepackt war und mit 0,2%ig Ammoniumhydroxid in CH&sub3;CN eluiert wurde. Die Fraktionen mit den Nummern 11 bis 34 wurden vereinigt und aufkonzentriert, was 0,043g an oben genannter Verbindung ergab (64%ige Ausbeute).
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 805 (805,071 berechnet für C&sub4;&sub4;H&sub7;&sub2;NO&sub1;&sub1;).
¹HMNR (CDCl&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.28 (s, OCH&sub3;), 3.32 (dd, 2'), 3.76 (dd, 9), 3.79 (d, benzylische H), 3.94 (d, benzylische H), 4.44 (d, 1'), 4.74 (dq, 5", J4",5"=1.5 Hz), 4.79 (d, 1"), 5.13 (dd, 13).

BEISPIEL 13

(4"R,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-trideoxy-9,12-erythromycin A

VERFAHREN A

SCHRITT A

(4"E,9S,11S)-9-Deoxo-4",12-dideoxy-9,12-epoxy-4"- hydroxyiminoerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 6 (4g, 5,5mmol) wurde in einer Mischung von 50ml Dimethoxyethan (getrocknet über 4Å Molekularsieb) und 3ml Isopropylalkohol gelöst. In einem getrennten 5-ml-Rundkolben (der über Nacht in einem Trockenschrank getrocknet worden war, und der mit einem Calciumchlorid-Trockenrohr versehen war) wurde eine Lösung von Lithiumborhydrid (2,2g, 101mmol) in der gleichen Lösungsmittelmischung bereitet. Es fanden Erwärmung und Wasserstoffentwicklung statt. Es war notwendig, den Kolben in einem Wasserbad zu kühlen, um die Borhydridlösung bei Raumtemperatur zu halten. Die Lösung des (4"E)-9,10-Didehydro-9- deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- hydroxyiminoeryhtromycin A wurde zu der Borhydridlösung tropfenweise aus einem Tropftrichter über 10 Minuten hinweg hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur gehalten, indem der Reaktionskolben in einem Wasserbad eingetaucht wurde, und sie wurde bei Raumtemperatur 6 Stunden lang gerührt. Die Reaktion wurde durch Dünnschichtchromatographie (Elutionsmittel: Chloroform/Methanol/Ammoniak 9/1/0,2) in 1-stündigen Intervallen überwacht. Nach 6 Stunden wurde die Reaktionsmischung über Nacht bei -5ºC gehalten, dann bei Raumtemperatur eine zusätzliche Stunde lang gerührt. Die Reaktionsmischung wurde in 100ml 50%ig wäßrigen Methanols eingegossen und verwirbelt. Methylenchlorid (200ml) und 5%ig Natriumbicarbonatlösung wurden hinzugegeben und die resultierende Lösung wurde bei Raumtemperatur 5 Minuten lang gerührt und dann 10 Minuten ohne Rühren stehen lassen. Die Lösung wurde in einen Scheidetrichter überführt und 3 x mit 300ml Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten Methylenchloridphasen wurden mit 300ml Kochsalzlösung gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, futriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 3,74g Rückstand ergab. Der Rückstand wurde in 150ml Methanol aufgenommen und die Lösung wurde bei Raumtemperatur 5 Tage belassen, um die Boratesterkomplexe zu zersetzen. Das Methanol wurde am Rotationsverdampfer abgezogen und die 3,34g Rückstand wurden mit 3,59g ähnlich zubereiteten Materials vereinigt und an einer Silicagelsäule gereinigt, die mit einer Mischung aus Chloroform, Methanol und Ammoniak (9:1:0,5) eluiert wurde, was 3,3g (41%ige Ausbeute) obengenannter Verbindung aus den Fraktionen mit den Nummern 61 bis 120 ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 731 (805,071 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub6;NO&sub1;&sub2;).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.29 (s, N(CH&sub3;)), 3.23 (dd, 2'), 3.30 (s, OCH&sub3;), 3.68 (dd, 9), 4.29 (dd, 11), 4.41 (d, 1'), 4.97 (dd, 13), 5.10 (dd, 1"), 5.15 (q, 5"), 8.80 (bs, N-OH).

SCHRITT B

(95,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12-edoxyerythromycin A

(4"E,9S,11S)-9-Deoxo-4",12-dideoxy-9,12-epoxy-4"- hydroxyiminoerythromycin A, das Produkt nach Schritt A (2,02g, 2,76mmol) wurde 3 Tage wie in Beispiel 3, Verfahren A, beschrieben, hydriert, mit Methanol: 10%ig Essigsäure als Lösungsmittel. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt und der Filterkuchen wurde mit 800ml MeOH, mit 800ml MeOH: 10%ig NH&sub4;OH und zuletzt mit 800ml CHCl gewaschen. Das Filtrat und die Waschflüssigkeiten wurden vereinigt und verdampft, der Rückstand wurde in EtOAc aufgelöst und wurde mit einer Mischung aus gesättigter Kochsalzlösung und gesättigter NH&sub4;OH (9/1 Volumenanteile) gewaschen. Die EtOAc-Phase wurde getrocknet (NaSO&sub4;), filtriert und verdampft, was 1, 75g einer Mischung von 4"-Amino-Epimeren obengenannter Verbindungen ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 717 (716,961 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1;).

SCHRITT C

(4"R,9S,11S)-9-Deoxo-4",12-dideoxy-9,12-edoxy-4"-[(phenylmethyl)amino]erythromycin A

Das Produkt nach Schritt B (1,74g, 2,43mmol) wurde in 2,39g des rohen 4"-CBZ-Derivats überführt, wie dies in Beispiel 7, Schritt B, beschrieben ist. Die oben genannte Verbindung wurde erhalten, nachdem sie an einer Silicagelsäule (CH&sub3;CN/konzentriertes NH&sub4;OH, 200/1 Volumenanteile) gereinigt worden war, was 0,88g eines weißen Glases ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 851 (851,097 berechnet für C&sub4;&sub5;H&sub7;&sub4;NO&sub1;&sub3;).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.28 (s, N(CH&sub3;)), 3.21 (dd, 2'), 3.31 (s, OCH&sub3;), 3.47 (d, 4"), 3.65 (dd, 9), 4.28 (dd, 11), 4.42 (d, 1'), 4.67 (dq, 5", J4",5"=1.2 Hz), 4.88 (d, 1"), 5.07 (dd, 13), 5.10 (bd, NH), 5.11 (d, benzylische H), 5.15 (d, benzylische H), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT D

(4"R,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Schritt C (0,88g, 1,03mmol) wurde entschützt, wie dies in Beispiel 14, Schritt D beschrieben ist, was 0,73g (99%ige Ausbeute) obengenannter Verbindung als farblosen Feststoff ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 717 (716,961 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1;)
IR (KBr): 1735 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.28 (s, N(CH&sub3;)), 3.22 (dd, 2'), 3.32 (s, OCH&sub3;), 3.66 (dd, 9), 4.29 (bd, 11), 4.43 (d, 1'), 4.61 (dq, 5", J4",5"=1.2 Hz), 4.88 (d, 1"), 5.09 (dd, 13).

VERFAHREN B

(4"R,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 8 (4"R,9S)-4"-Amino-9-deoxo- 4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A (0,05 g, 0,07mmol) wurde in 1,2ml Methanol gelöst. Diese Lösung wurde auf einem Eis/Wasserbad gekühlt. Eine getrennte Lösung wurde hergestellt (durch Auflösen von 0,034g Natriumborhydrid (0,89mmol) in 0,6ml Wasser) und diese auf einem Eis/Wasserbad gekühlt. Die Natriumborhydridlösung wurde über eine Spritze in die methanolische Lösung auf einmal eingebracht. Die Reaktionsmischung wurde 1 Stunde lang mit einem Magnetrührer gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann mit 30ml Ethylacetat verdünnt, 3x mit 20ml 4%ig Natriumbicarbonatlösung und 20ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und an einem Rotationsverdampfer eingeengt, was 0,031g obengenannter Verbindung (62%ige Ausbeute) ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 717 (716,961 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1;). Das 300-MHZ-¹H-NMR war mit demjenigen des Produktes nach Verfahren A, Schritt D identisch.

BEISPIEL 14

(4"S,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-epoxy-11- oxoerythromycin A

SCHRITT A

4"-Amino-9,10-didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 6 (31,69g, 43,6mmol) wurde in 1800ml Methanol aufgelöst. Raney-Nickel (158g) und Ammoniumhydroxid (200ml) wurden hinzugegeben. Die Hydriermischung wurde auf einen Parr-Rüttler gebracht und bei Raumtemperatur unter 4 Atmosphären Wasserstoffdruck 24 Stunden lang gerüttelt. Die Reaktionsmischung wurde filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 26g oben genannter Verbindung als Mischung der 4"-Amino-Epimere ergab, die im nächsten Schritt ohne Reinigung eingesetzt wurden.

SCHRITT B

(4"S)-9,10-Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxo-4"[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A

4"-Amino-9,10-didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxy-11-oxoerythromycin A (26g, 35,8mmol) aus Schritt A wurden in 500ml Methylenchlorid gelöst. Carbobenzyloxy N- Hydroxysuccinimid (9,6g, 38,5mmol) wurde hinzugegeben und die Reaktion wurde wie in Beispiel 7, Schritt B durchgeführt. Das Rohprodukt (34,8g) wurde an einer Silicagelsäule chromatographisch gereinigt. Die Säule wurde mit 2kg Silikagel gepackt und mit Acetonitril eluiert, was 0,6%ig Ammoniumhydroxid enthielt. Das Lösungsmittel wurde entfernt (an einem Rotationsverdampfer), wobei die Fraktionen 14,4g (40%ige Ausbeute) oben genannter Verbindung, d.h. von (4"S)-9,10- Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A enthielten
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 847 (847,056 berechnet für C&sub4;&sub5;H&sub0;NO&sub1;&sub3;).
IR (0.15% in CCl&sub4;): 3440 (NH), 1734 (Lakton CBZ), 1697 (11 C=O), 1620 (C=C) cm-1.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 1.74 (s, 10 CH&sub3;), 2.32 (s, N(CH&sub3;)), 3.22 (s, OCH&sub3;), 3.37 (dd, 2'), 3.39 (t, 4", J4",5"=10 Hz), 4.15 (d, q, 5"), 5.03 (dd, 13), 5.07 (d, benzylische H), 5.16 (d,benzylische H), 5.23 (d, NH), 7.37 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT C

(4"S,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A

(4"S)-9,10-Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxy-11-oxo-4"-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A (14g, 16mmol) aus Schritt B wurden mit Diisobutylaluminiumhydrid behandelt, wie dies in Beispiel 7, Schritt C beschrieben ist, und ergaben 6,2g (44%ige Ausbeute) reinen oben genannten Produktes nach der Chromatographie.
Analyse berechnet für C&sub4;&sub5;H&sub7;&sub1;NO&sub1;&sub3; (849,081):
C, 63,66; H, 8,55; N, 3,30
Gefunden: C, 63,49; H, 8,59; N, 3,31
FAB (M+H)&spplus; at M/Z: 849.
IR (0.15% in CCl&sub4;): 3480 (O-H), 3445 (scharf; N-H), 1755 (11 C=O) und 1734 Lakton , CBZ cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;): delta 2.30 (s, N(CH&sub3;)), 3.21 (s, OCH&sub3;), 3.29 (dd, 2'), 3.39 (t, 4"), 3.78 (dd, 9), 4.12 (dq, 5", J4",5"=10.5 Hz), 4.34 (d, 1'), 4.87 (d, 1"), 5.10 (d, benzylische H), 5.13 (dd, 13), 5.16 (d, benzylische H), 5.22 (d, NH), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT D

(4"S,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A

(4"S,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A (7,4g, 8,45mmol) aus Schritt C wurden in 225ml Methanol gelöst. Raney-Nickel (14,8g) und Ammoniumhydroxid (25ml) wurden hinzugegeben und die Reaktion wurde wie in Beispiel 14, Schritt A beschrieben, durchgeführt. Das Rohprodukt wurde in 200ml Methylenchlorid gelöst und mit 200ml 5%ig Natriumbicarbonat gewaschen. Die wäßrige Phase wurde dann 3x mit 150ml Methylenchlorid extrahiert und die Methylenchloridphasen wurden alle vereinigt. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit 300ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 5,65g (93,5% Ausbeute) oben genannter Verbindung als weißes Glas ergab.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub6;NO&sub1;&sub1; (714,945):
C, 62,16; H, 9,31; N, 3,92
Gefunden: C, 62,66; H, 9,24; N, 3,76
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.25 (s, OCH&sub3;), 3.33 (dd), 3.78 (dd, 9), 4.07 (dq, 5", J4",5"=9.6 Hz), 4.40 (d, 1'), 4.83 (d, 1"), 5.13 (dd, 13).
IR (0.15% in CCl&sub4;): 3490 (OH), 1755 (11 C=O), 1738 (Lakton ) cm&supmin;¹.

BEISPIEL 15

(4"S,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A

VERFAHREN A

SCHRITT A

(9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 13, Verfahren A, Schritt A (4"E,9S,11S)-9-Deoxo-4",12-dideoxy-9,12-epoxyerythromycin A (2,23g, 3,05mmol) wurde mit Raney-Nickel (12g) unter Anwendung des Verfahrens, das in Beispiel 14, Schritt A beschrieben ist, reduziert. Die Reduktion ergab 2,17g oben genannter Verbindung als Mischung der 4"-Amino-Epimere.
Das gewünschte Amino-Epimer mit der natürlichen Konfiguration am 4" wurde erhalten, wie dies in den Schritten B und C beschrieben ist.

SCHRITT B

(4"R,9S,11S)-9-Deoxo-4",12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"-[[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A

Das Produkt nach Schritt A, (2,17g, 3,05mmol) wurde in das 4"-CBZ-Derivat mit Carbobenzoxycarbonyl N-Hydroxysuccinimid (1,05g, 4,2mmol) in Methylenchlorid überführt, wie dies in Beispiel 7, Schritt B beschrieben ist. Oben genannte Verbindung wurde nach Reinigung an einer Silicagelsäule erhalten, die mit CH&sub3;CN: 0,2%ig konzentriertem NH&sub4;OH eluiert wurde; die Ausbeute betrug 56% (1,46g).
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 851 (851,097 berechnet für C&sub4;&sub5;H&sub7;&sub4;NO&sub1;&sub3;).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.27 (s, N(CH&sub3;)), 3.21 (dd, 2'), 3.23 (s, OCH&sub3;), 3.49 (t, 4"), 3.67 (dd, 9), 4.08 (dq, 5", J4",5"=10 Hz), 4.29 (3H, m, 3, 11, 1'), 4.89 (d, 1"), 5.08 (d&sub1; benzylische H), 5.12 (dd, 13), 5.17 (d, benzylische H), 5.25 (d, NH), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT C

(4"S,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Schritt B (4,37g, 5,1mmol) wurde zum Aminoderivat mit 9,5g Raney-Nickel, wie in Beispiel 14, Schritt A beschrieben, entschützt. Oben genannte Verbindung wurde in 91%iger Ausbeute (3,36g) erhalten.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1; (716,961):
C, 61,99; H, 9,56; N, 3,91
Gefunden: C, 61,81; H, 9,47; N, 3,84
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 717.
IR ((0.15% in CCl&sub4;): 3636 und 3480 (O-H und N-H), 1739 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.30 (s, N(CH&sub3;)), 3.22 (dd, 2'), 3.28 (s, OCH&sub3;), 3.67 (dd, 9), 4.00 (dq, 5", J4",5"=10 Hz), 4.29 (2H, m, 3, 11), 4.40 (d, 1'), 4.85 (d, 1"), 5.09 (dd, 13).

VERFAHREN B

(4"S,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 14 (4"S,9S)-4"-Amino-9-deoxo- 4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A (0,082g, 0,11mmol) wurde unter Verwendung unter Natriumborhydrid (0,56g, 1,48mmol) reduziert, wie es in Beispiel 13, Verfahren B beschrieben ist. Obengenannte Verbindung wurde in 74%iger Ausbeute (0,058g) als farbloses Glas erhalten.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 717 (716,961 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1;).
Das ¹H-NMR-Spektrum war mit demjenigen des Produktes nach Verfahren A identisch.

BEISPIEL 16

(4"S,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- (methylsulfonyl)amino-11-oxoerythromycin A

(4"S,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy- 11-oxoerythromycin A (0,10g, 0,14mmol), das Produkt nach Beispiel 14, wurde mit Methansulfonsäureanhydrid (0,075g, 0,43mmol) wie in Beispiel 11 für das 4"R-Isomere beschrieben, behandelt, was 0,06g (54%ige Ausbeute) oben genannter Verbindung ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 793 (793,031 berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub3;S).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.33 (bs, N(CH&sub3;)), 3.02 (s, NSOCH&sub3;), 3.15 (t, 4", J4",5"=10 Hz), 3.24 (s, OCH&sub3;), 3.31 (bm, 2'), 3.78 (dd, 9), 4.19 (dq, 5"), 4.35 (d, 1"), 4.86 (2H, bd, 1", NHSO), 5.13 (dd, 13).

BEISPIEL 17

(9S,11S)-4"-O-Aminocarbonyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12- epoxyerythromycin A

SCHRITT A

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- trimethylsilyl-4"-O-[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 5, Verfahren B, Schritt A (0,62g, 0,69mmol) wurde in 93ml Methylenchlorid gelöst. Imidazol (0,33g, 46,8mmol) wurde zu der klaren Lösung unter Rühren hinzugegeben, gefolgt von Trimethylsilylchlorid (0,43ml, 0,37g, 3,4mmol). Ein weißer Nebel und Hitze entwickelten sich während der Zugabe, und es bildete sich ein Niederschlag. Die trübe Suspension wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Der Niederschlag löste sich wieder auf. Die Lösung wurde in einen Scheidetrichter überführt und mit 100ml 5%ig Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die wäßrige Phase wurde 2x mit 50ml Methylenchlorid extrahiert und die organischen Phasen wurden vereinigt. Die vereinten organischen Phasen wurden mit 1001 Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und an einem Rotationsverdampfer eingeengt, was 0,59 g (89%ige Ausbeute) der oben genannten Verbindung ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 966 (966,302 berechnet für C&sub5;&sub0;H&sub8;&sub3;NO&sub1;&sub5;Si).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.15 (s, Si(CH&sub3;)&sub3;), 2.06 (s, COCH&sub3;), 2.25 (s, N(CH&sub3;)), 3.32 (s, OCH&sub3;), 3.65 (dd, 9), 4.20 (d, 11), 4.48 (d, 4"), 4.76 (dd, 2'), 5.05 (dd, 13), 5.13 (d, benzylic H), 5.24 (d, benzylic H), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT B

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- trimethylsilylerythromycin A

Die Benzyloxycarbonyl (CBZ)-Gruppe wurde aus dem (9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- trimethylsilyl-4"-O-(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A, dem Produkt aus Schritt A (0,59g, 0,6mmol) mittels katalytischer Hydrierung, wie in Beispiel 3, Verfahren A beschrieben, entfernt, was 0,49g (96%ige Ausbeute) oben genannter Verbindung ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 832 (832,166 berechnet für C&sub4;&sub2;H&sub7;&sub7;NO&sub1;&sub3;Si).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.17 (s, Si(CH&sub3;)&sub3;), 2.08 (s, COCH&sub3;), 2.28 (s, N(CH&sub3;)), 3.04 (bt, 4"), 3.32 (s, OCH&sub3;), 3.66 (dd, 9), 4.20 (d, 11), 4.77 (dd, 2), 5.06 (dd, 13).

SCHRITT C

(9S,11S)-2"-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O-(1- imidazolyl)carbonyl-11-O-trimethylsilylerythromycin A

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- trimethylsilylerythromycin A (0,47g, 0,57mmol), aus Schritt B, wurden in 5ml Methylenchlorid gelöst. N,N'-Carbonyldiimidazol (0,37g, 2,3mmol) wurde hinzugegeben, gefolgt von N,N- Dimethylaminopyridin (0,28g, 0,4mmol). Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 3 Stunden gerührt, wobei sie durch die Zugabe von 50ml Methylenchlorid verdünnt wurde. Die Reaktionsmischung wurde in einen Scheidetrichter überführt und mit 100ml 0,3M (pH 5,0) Phosphatpufferlösung gewaschen, gefolgt von 100ml 5% Natriumbicarbonatlösung. Die vereinigten wäßrigen Phasen wurden mit 2x50ml Methylenchlorid extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt, mit 100ml Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 0,37g (70%) obiger Verbindung ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 926 (926,240 berechnet für C&sub4;&sub6;H&sub7;&sub9;N&sub3;O&sub1;&sub4;Si).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.17 (s, Si(CH&sub3;)&sub3;, 2.14 (s, COCH&sub3;), 2.29 (s, N(CH&sub3;)), 3.34 (51 OCH&sub3;), 3.66 (dd, 9), 4.21 (d, 11), 4.79 (d, 4"), 7.10/7.44/8.13 (3H, Imidazolid).

SCHRITT D

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-4"-O-aminocarbonyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12- epoxy-11-O-trimethylsilylerythromycin A

(9S,11S)-2"-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O-(1- imidazolyl)carbonyl-11-O-trimethylsilylerythromycin A (0, 36g, 0,39mmol) aus Schritt C, wurden in 4ml Acetonitril gelöst. Konzentriertes (14,8M) Ammoniumhydroxid (4ml, 59,2mmol) wurden unter Rühren bei Raumtemperatur zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 40 Minuten gerührt und dann mit 0,3M Phosphatpufferlösung (pH 5,0) gelöscht. Die gelöschte Reaktionsmischung wurde mit 100ml Methylenchlorid verdünnt, und die Phasen wurden getrennt. Die organische Phase wurde 2x mit 50ml 5%iger Natriumbicarbonatlösung gewaschen, und die wäßrigen Phasen wurden vereinigt. Die vereinigten wäßrigen Phasen wurden 2x mit 50ml Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit 100ml Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 0,25g (73%) oben genannter Verbindung ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 875 (875,192 berechnet für C&sub4;&sub3;H&sub7;&sub8;NO&sub1;&sub4;Si)
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.17 (s, Si(CH&sub3;)&sub3;), 2.09 (s, COCH&sub3;), 2.30 (s, N(CH&sub3;)), 3.33 (s, OCH&sub3;), 3.65 (dd, 9), 4.20 (d, 11), 4.56 (d, 4"), 4.79 (dd, 2'), 5.05 (dd, 13).

SCHRITT E

(9S,11S)-4"-O-Aminocarbonyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12- edoxyerythromycin A

Das Produkt aus Schritt D, (9S,11S)-2'-O-Acetyl-4"-Oaminocarbonyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- trimethylsilylerythromycin A (0,25g, 0,28mmol) wurde in 10ml Methanol gelöst und die Lösung wurde 3 Tage bei Raumtemperatur belassen, um den 2'-Acetylester zu entfernen. Das Methanol wurde verdampft und der Rückstand (0,18g) wurde in 0,5ml Tetrahydrofuran (THF) gelöst. Methylenchlorid (1ml) wurde unter Verwirbelung zugegeben, gefolgt von Tetra-n-butylammoniumfluorid (0,22ml, 56,6mmol) Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 15 Minuten gerührt, wobei zu diesem Zeitpunkt 50ml Benzol zugesetzt wurden. Die Reaktionsmischung wurde mit 100ml 5% Natriumbicarbonatlösung gewaschen und mit 100ml gesättigter Kochsalzlösung. Sie wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, was 0,1g Rückstand ergab. Der Rückstand wurde aus einer Mischung aus Methylenchlorid und Hexan (5/1 Volumenanteile) umkristallisiert, was 0,03g (18%ige Ausbeute) an (9S,11S)-4"-O-Aminocarbonyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12- epoxyerythromycin A ergab.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub3;HO (778,987):
C, 58,59; H, 9,06; N, 3,60
Gefunden: C, 58,59; H, 8,73; N, 3,57
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 761 (760,971 berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub3;).
¹H NMR (CDCl&sub3;) delta 2.29 (s, N(CH&sub3;)), 3.21 (dd, 2'), 3.33 (s, OCH&sub3;), 3.66 (dd, 9), 4.29 (dd, 11), 4.38 (3H, m, 3,4",5"), 5.09 (dd, 13).
IR (0.15% in CCl&sub4;): 1710 (OCONH), 1740 (Lakton ) cm&supmin;¹.

BEISPIEL 18

(9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- hydroxyiminoerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 5 (1,11g, 1,55mol) wurde in 15ml absolutem Ethanol gelöst. Hydroxylaminhydrochlorid (1,27g, 18,28mmol) und Triethylamin (1,50ml, 10,72mmol) wurden der Lösung bei Raumtemperatur zugesetzt, und die Reaktionsmischung wurde in einem Ölbad auf 80ºC erwärmt. Die Reaktionsmischung wurde 3 Tage bei 80ºC gerührt und dann 3 Tage bei 70ºC. Die Reaktion wurde täglich mit HPLC an einer C&sub8;-Umkehrphasensäule 4,6 x 250mm ((YMC, INC) mit einem Eluenten von 55% Wasser, 40% Acetonitril und 5% Methanol, enthaltend 10g/l Natriumacetat und 0,5ml Eisessig; bei isokratischer Eluierung; Flußgeschwindigkeit 1,0ml/min), beobachtet. Nach 6 Tagen wurde die Reaktionsmischung mit 150ml 4%ig Natriumbicarbonatlösung verdünnt und mit konzentriertem Ammoniumhydroxid (3ml) auf pH 10 eingestellt. Die wäßrige Mischung wurde 3x mit 33ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten Chloroformextrakte wurden mit 75ml 4%ig Natriumbicarbonat gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt, wo sie 1,1g eines weißen Glases ergaben. Dieses Rohprodukt wurde an einer Silicalgelsäule (2,4 x44cm) gereinigt, wobei es mit einem Stufengradienten von Methanol in Chloroform, enthaltend 0,2% Ammoniumhydroxid eluiert wurde. Die Methanolkonzentration wurde von anfänglichen 2% in den ersten 500ml Laufmittel auf 5% in den letzten 500ml Laufmitteln angehoben. Sie wurde in 0,5%igen Schritten (500ml) angehoben.
Das (9S,11Z)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- hydroxyiminoerythromycin A (0,14g) wurde aus den Fraktionen mit den Nummern 90 bis 100 bei einem Schmelzpunkt von 218 bis 235ºC (CH&sub3;CN) erhalten.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub6;NO&sub1;&sub2; (730,945):
C, 60,80; H, 9,10; N, 3,82
Gefunden: C, 60,82; H, 9,26; N; 4,19
IR (0.15% in CCL4 - Lösung ): 3595, 1738 cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.32 (s, N(CH&sub3;), 3.05 (t, 4"), 3.34 (s, OCH&sub3;), 3.35 (dd, 2'), 3.55 (dd, 9), 4.57 (d, 1'), 4.74 (d, 1"), 4.92 (dd, 13).
¹HNMR (SO(CD&sub3;)) delta 10.88 (s, NOH).
Das (9S,11S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- hydroxyiminoerythromycin A (0,35g) wurde aus den Fraktionen mit den Nummern 115 bis 150 erhalten. Schmelzpunkt: 145 bis 148ºC (CH&sub3;CN).
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub6;NO&sub1;&sub2; (730,945):
C, 60,80; H, 9,10; N, 3,83
Gefunden: C, 60,35; H, 9,36; N, 3,82
IR (0.15% in CCL&sub4; - Lösung ): 3595, 1738 cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCL&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.02 (t, 4"), 3.26 (dd, 2'), 3.30 (s, OCH&sub3;), 3.82 (dd, 9), 4.39 (d, 1'), 4.85 (d, 1"), 5.21 (dd, 13).
¹HNMR (SO(CD&sub3;)) delta 10.79 (s, NOH).

BEISPIEL 19

(9S,11S)-11-Amino-9-Deoxo-11,12-deoxy-9,12-edoxyerythromycin A

VERFAHREN A

Eine Mischung der beiden isomeren Produkte aus Beispiel 18 (0,21g, 0,29mmol) wurde unter Verwendung eines Raney-Nickel- Katalysators und Methanol als Lösungsmittel reduziert, wie dies in Beispiel 7, Schritt A beschrieben ist. Nach einer halbpräparativen Chromatographie mittels HPLC an einer C&sub8;- Umkehrphasensäule (20x250mm; 35%ig CH&sub3;CN in Wasser, enthaltend 20g/l Natriumacetattrihydrat und 1,0ml/l Eisessig als Laufmittel bei isokratischer Elution; Flußgeschwindigkeit = 12ml/min) zur Abtrennung der beiden isomeren Aminprodukte, ergab sich die oben genannte Verbindung (0,047g) in 23%iger Ausbeute, mit einem Schmelzpunkt von 168 bis 172ºC (CH&sub3;CN).
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1; (716,961):
C, 61,99; H, 9,56; N, 3,91
Gefunden: C, 62,25; H, 9,62; N, 3,91
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 717.
IR (0.15% in CCL&sub4;): 1739 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.29 (s, N(CH&sub3;)), 3.02 (t&sub1; 4"), 3.23 (dd, 2'), 3.31 (s, OCH&sub3;), 3.50 (d, 11, J10,11=10.5 Hz), 3.58 (dd, 9), 4.38 (d, 1'), 4.85 (d, 1"), 5.10 (dd, 13).

VERFAHREN B

SCHRITT A

(9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-edoxy-11-iminoerythromycin A

Das Produkt aus Beispiel 18, (9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy- 9,12-epoxy-11-hydroxyiminoerythromycin A (4,0g, 5,4mmol) wurde in 150ml Methanol gelöst und die resultierende Lösung wurde auf einem Eisbad gekühlt. Der Kolben wurde mit Stickstoff gespült und unter Stickstoffüberdruck belassen. Konzentriertes Ammoniumhydroxid (30ml) wurde über einen Zeitraum von 30 Minuten tropfenweise hinzugegeben, gefolgt von 20ml (23,2mmol) Titan(III)-chlorid in ca. 25Gew.% Chlorwasserstoffsäure. Nach dem Rühren der Reaktion für 1 Stunde bei Raumtemperatur war die Reaktionsmischung blau, zeigte aber kein Substrat mit der HPLC. Die Reaktionsmischung wurde dann mit 1,2l gesättigter Kochsalzlösung verdünnt und mit 100ml konzentriertem Ammoniumhydroxid. Die wäßrige Lösung wurde 4x mit 100ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit einer Mischung von 40ml Wasser, 50ml Kochsalzlösung und 10ml konzentriertem Ammoniumhydroxid gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft, was 3,35g (87%ige Ausbeute) an (9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12- epoxy-11-iminoerythromycin A als weißes Glas ergab.

SCHRITT B

(9S,11S)-11-Amino-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Schritt A, (9S)-9-Deoxo-11,12 dideoxy- 9,12-epoxy-11-iminoerythromycin A (3,13g, 4,38mmol) wurde in 100ml Methanol gelöst und die resultierende Lösung wurde auf -25ºC unter Verwendung eines Bades aus Trockeneis/CCl&sub4; abgekühlt. Cer(III)-chloridheptahydrat (1,69g, 4,5mmol) wurde hinzugegeben, gefolgt von 0,17g (4,5mmol) von Natriumborhydrid. Nach 0,5 Stunden wurde die Reaktionsmischung mit 600ml gesättigter Kochsalzlösung verdünnt und 50ml konzentriertes Ammoniumhydroxid und 600ml Wasser wurden zugesetzt. Die wäßrige Lösung wurde 6x mit 100ml Chloroform extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit einer Mischung aus 100ml gesättigter Kochsalzlösung und 10ml konzentriertem Ammoniumhydroxid gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt, was 3,01g an Rohprodukt ergab, welches gemäß der HPLC-Analyse an einer Umkehrphasen-C&sub8;-Säule mit 40%igem Acetonitril als Laufmittel bei isokratischer Elution und einer Flußgeschwindigkeit von 1ml/min, 51,6% obengenannter Verbindung enthielt. Dieses Rohprodukt und 1,66g eines vorhergehenden Ansatzes wurden unter milden hydrolytischen Bedingungen behandelt, um eine störende Verunreinigung in das 11-Keton zu überführen. Das Rohprodukt (4,67g) wurde in Acetonitril/Wasser gelöst (1:1 Volumenanteile) und 0,5ml Eisessig wurde hinzugegeben, um den pH auf 5,0 einzustellen. Nach 20 Minuten wurde die Reaktionsmischung in 1,01 4%ig Natriumbicarbonat gegossen und 20ml konzentriertes Ammoniumhydroxid wurden hinzugesetzt. Die resultierende wäßrige Lösung wurde 3x mit 100ml Chlorofrom extrahiert. Die vereinigten Chloroformphasen wurden mit 100ml 4%ig Natriumbicarbonat gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt.
Das Konzentrat wurde in Acetonitril gelöst und wieder aufkonzentriert, um überschüssiges Chloroform zu entfernen, was 4,52g eines weißen Glases ergab. Das weiße Glas wurde durch Chromatographie an einer Silicagelsäule (2,9x62cm) gereinigt, die mit 30%ig Methanol in Acetonitril, enthaltend 1% konzentriertes Ammoniumhydroxid und 500ml 1%ig konzentriertes Ammoniumhydroxid in Acetonitril, gewaschen worden war. Die Säule war ebenfalls mit 4%igem Methanol in Acetonitril, enthaltend 0,1%ig Ammoniumhydroxid (das anfängliche Laufmittel) vorbehandelt worden. Die Säule wurde mit einem Stufengradienten bei 2,75ml/min gefahren und die Fraktionen wurden alle 8 Minuten geschnitten. Die Methanolkonzentration im Eluenten wurde von 4% bis 6% und schließlich auf 10% erhöht. Die Ammoniumhydroxidkonzentration wurde von 0,1% auf 0,4% erhöht. Die oben genannte Verbindung wurde in 66%iger Ausbeute (2,07g) aus den Fraktionen 131 bis 300 erhalten, Schmelzpunkt; 168 bis 172ºC (CH&sub3;CN).
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 717 (816,961 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1;)
IR (0,15% in CCl&sub4;): 1738 (C=O) cm&supmin;¹
Das ¹H-NMR war mit demjenigen des Produktes nach Verfahren A identisch.

BEISPIEL 20

(4"R,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- edoxyerythromycin A

SCHRITT A

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 4 (11,2g, 15,6mmol) wurde mit 5,0ml Essigsäureanhydrid und 10,0ml Triethylamin, wie in Beispiel 2, Schritt B beschrieben, behandelt, was 9,68g (82% Ausbeute) obiger Verbindung ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 760 (759,984 berechnet für C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub9;NO&sub1;&sub3;).
¹HNMR (DCDl&sub3;) delta 2.08 (s,COCH&sub3;), 2.26 (s, N(CH&sub3;)), 3.04 (t,4"), 3.32 (s OCH&sub3;), 3.67 (dd,9), 4.28 (dd,11), 4.49 (d,1'), 4.76 (dd,2'), 4.85 (d,1"), 5.09 (dd,13).

SCHRITT B

(9S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4",11- dioxoerythromycin A

Eine Lösung von Kaliumdichromat (24,5g, 83,3mmol) wurde in 500ml Wasser bereitet, zu denen konzentrierte Schwefelsäure (18M) (18ml, 337,6mmol) bei Raumtemperatur zugegeben worden waren. Eine Lösung von (9S,11S)-2¹-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A (9,44g, 12,4mmol) aus Schritt A, wurde in einer Mischung aus 250ml Methylenchlorid (CHCl) und 250ml Dichlorethan (CHClCHCl) bereitet und zu der Chromsäurelösung zugesetzt. Die Reaktion wurde durchgeführt, wie dies in Beispiel 2, Schritt C beschrieben ist, jedoch wurde kein Eisessig zugesetzt. Die oben genannte Verbindung wurde als 8,81g Rohmaterial erhalten, das im nächsten Schritt ohne weitere Reinigung eingesetzt wurde.

SCHRITT C

(4"E,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"-hydroxyimino- 11-oxoerythromycin A

Das Produkt aus Schritt B wurde in 300ml Methanol gelöst. In einem getrennten 1-l-Rundkolben wurde eine Lösung von Hydroxylaminhydrochlorid (4,03g, 58mmol) und 8,2ml Triethylamin hergestellt. Die methanolische Lösung von (9S)-2'-O-Acetyl-9- deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4",11-dioxoerythromycin A wurde zu der Hydroxylaminlösung bei Raumtemperatur hinzugegeben, und die Reaktionsmischung wurde am Rückfluß erhitzt. Nach 5,5 Stunden wurde die Reaktionsmischung am Rotationsverdampfer auf 30ml eingeengt und wurde mit 500ml 4%iger Natriumbicarbonatlösung und 3ml konzentriertem Ammoniumhydroxid verdünnt. Die resultierende wäßrige Mischung wurde 1x mit 200ml und 2x mit 75ml Anteilen Chloroform extrahiert. Die vereinigten Chloroformextrakte wurden in 100ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und an einem Rotationsverdampfer eingeengt, was 9,0g Rückstand ergab. Der Rückstand wurde in 75ml kochenden Methylenchlorids gelöst, und es wurden 200ml Ethylacetat zugesetzt. Die Lösung wurde auf einem Dampfbad eingeengt, bis die Kristallisation einsetzte und dann bei Raumtemperatur 24 Stunden lang stehen lassen. Die Kristalle wurden abfiltriert und luftgetrocknet und ergaben 4,77g (53%) reiner oben genannter Verbindung. Schmelzpunkt: 252 bis 256ºC.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub4;NO&sub1;&sub2; (728,929):
C, 60,97; H, 8,85; N, 3,84
Gefunden: C, 60,87; H, 8,71; N, 3,55
IR (0.15% in CCl&sub4;): 1750 und 1729 (C=O) cm&supmin;¹
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.31 (s,N(CH&sub3;)), 3.30 (dd,2'), 3.31 (s, OCH&sub3;), 3.27 (dd,9), 4.46 (d,l'), 5.06 (m,2H,1",13), 5.17(q,5"), 8.50 (bs,NOH).

SCHRITT D

(9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4",11- di(hydroxyimino)erythromycin A

Zu einer Lösung von Triethylamin (1,2ml, 8,57mmol) in 10 ml Ethanol wurden 858mg (12,4mmol) Hydroxylaminhydrochlorid und 750mg (1,03mmol) 11-Oxo-9,12-oxy-9-deoxyerythromycin A 4"-Oxim aus Schritt C zugesetzt. Die Mischung wurde gerührt und in einem Ölbad zum Rückfluß erhitzt. Nach 7 Tagen bei Rückfluß wurde die Reaktionsmischung bei 180ml gesättigter Kochsalzlösung verdünnt und 10ml konzentrierten Ammoniumhydroxids wurden zugesetzt. Das Produkt wurde 5x mit 33ml Anteilen an CHCl&sub3; extrahiert. Die vereinigten CHCl&sub3;-Extrakte wurden mit 50ml 4%ig wäßrig NaHCO&sub3; gewaschen, über NaSO&sub4; getrocknet, filtriert und aufkonzentriert, was 739mg eines weißen Glases ergab. Das Produkt wurde chromatographisch an 100g Silikagel (2,4x44cm) durch Elution mit einer Mischung von Chloroform, Acetonitril, Methanol und konzentriertem Ammoniumhydroxid (75:20:5:0,2 Volumenanteile) gereinigt. Die Fraktionen, die das Produkt als eine 4:1-Mischung der beiden Oximisomeren enthielten, wurden vereinigt und die Lösungsmittel wurden am Rotationsverdampfer abgezogen, was 405mg (53%) eines weißen Feststoffes ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 744 (743,944 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub5;N&sub3;O&sub1;&sub2;).
¹H-NMR (CDCl&sub3;) Hauptisomer delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.26 (dd, 2'), 3.31 (s, OCH&sub3;), 3.83 (dd, 9), 4.43 (d, 1'), 4.99 (dd, 1"), 5.13 (q, 5"), 5.23 (dd, 13), 7.83 (bs, NOH).

SCHRITT E

(4"R,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

(9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4",11- di(hydroxyimino)erythromycin A (373g, 0,50mmol), das Produkt aus Schritt D, wurde in 54ml Methanol gelöst. Dann wurden 6ml konzentriertes Ammoniumhydroxid und 3,0g Raney-Nickel zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde auf einem Parr-Rüttler gerüttelt, dies bei 4Atm Wasserstoffdruck 4 Tage lang. Die Reaktionsmischung wurde filtriert und der Filterkuchen wurde mit Methanol gewaschen. Die vereinigten methanolischen Filtrate wurden am Rotationsverdampfer aufkonzentriert und der Rückstand wurde in einem kleinen Volumen Acetonitril gelöst. Die Acetonitrilmischung wurde filtriert (0,45u, Nylon) und das Lösungsmittel wurde verdampft, was 253mg des Rohproduktes als eine Mischung aus 4"- und 11-Amino-Epimeren ergab. Das gewünschte Isomere wurde durch Umkehrphasen-HPLC isoliert unter Verwendung einer YMC, INC. C&sub8;-Säule (20x250mm) mit einer Mischung von Wasser, Acetonitril und Methanol (14:5:1 Volumenanteile) als Laufmittel, das 30g/l Natriumacetat und 1,5ml/l Eisessig enthielt, bei einer Flußgeschwindigkeit von 12ml/min. Das Produkt wurde das den Fraktionen erhalten, die zwischen 8 und 9 Minuten nach der Injektion eluiert wurden und sie lieferten 13,4mg eines weißen Feststoffes.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 716 (715,977 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub9;N&sub3;O&sub1;&sub0;)
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.25 (dd,2'), 3.32 (s, OCH&sub3;), 3.50 (d,11,J&sub1;&sub0;,&sub1;&sub1;=10.5 Hz), 3.57 (dd, 9), 4.45 (d, 1'), 4.61 (dq,5", J4",5"=1.2 Hz), 4.89 (d, 1"), 5.10 (dd, 13).

BEISPIEL 21

(4"R,9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A

Eine 700-mg-Probe von (9S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-4",11,12- trideoxy-9,12-epoxy-4",11-dioxoerythromycin A (nach Beispiel 20, Schritt B) wurde in einer Mischung von 50ml Isopropylalkohol und 50ml Ethylacetat gelöst. Dann wurden 1,29 Raney-Nickel zugegeben und die Mischung wurde auf einem Parr-Rüttler unter 4Atm Wasserstoff bei Raumtemperatur 18 Stunden lang gerüttelt. Die Reaktionsmischung wurde filtriert und der Filter wurde mit Ethylacetat gewaschen. Die Lösungsmittel wurden unter Verwendung eines Rotationsverdampfers entfernt. Der Rückstand wurde in 2001 Acetonitril gelöst, filtriert (0,45u, Nylon) und dann zur Trockne im Vakuum aufkonzentriert. Das 2'-Acetat wurde in Methanol (100ml) durch Stehenlassen bei Raumtemperatur 2 Tage lang gespalten. Das Methanol wurde entfernt und der Rückstand wurde an 100g Silikagel chromatographiert, wobei Acetonitril zu konzentriertem Ammoniumhydroxid (10:0,07 Volumenanteile) als Laufmittel verwendet wurde, was 284mg (40%ige Ausbeute) oben genannter Verbindung ergab. Schmelzpunkt: 165 bis 168ºC (CH&sub3;CN).
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub5;NO&sub1;&sub2; (715,930):
C, 62,07; H, 9,15; N, 1,96
Gefunden: 0, 61,53; H, 9,01; N, 1,93
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.08 (bd, 4"), 3.28 (s, OCH&sub3;), 3.32 (dd,2'), 3.78 (dd,9), 4.40 (d,1"), 4.64 (dq, 5", J4",5" = 1.0 Hz), 4.87 (d,1"), 5.14 (dd,13).

BEISPIEL 22

(4"S,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

SCHRITT A

(4"S,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- hydroxyiminoerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 14, Schritt D, (4"S,9S)-4"- Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A (9,29g, 13mmol) wurde mit Hydroxylaminhydrochlorid (19,5g, 280mmol) behandelt und Triethylamin (36ml) wurde, wie in Beispiel 18 beschrieben, zugegeben. Das Rohprodukt (10,51g), eine Mischung der Z- und E-Oximisomere, wurde an einer Silicagelsäule gereinigt. Die Säule war in Acetonitril: 0,6%ig mit Ammoniumhydroxid gepackt. Die Säule wurde mit einem Stufengradienten von Ammoniumhydroxid von 0,2% in Acetonitril in den anfänglichen 2,8l Laufmittel, bis hin zu 0,6% im zweiten 2,8-l-Ansatz an Laufmittel, bis zu 0,8% im dritten 2,8-l-Ansatz an Laufmittel auf einen Endwert von 1,0% in den letzten erhaltenen Fraktionen eluiert. Die Fraktionen wurden, beruhend auf den Daten der Dünnschichtanalyse vereinigt, was 5,60g einer Mischung der Z- und E-Oximisomere ergab. Ein kleiner Anteil des früh eluierenden Materials wurde aus Acetonitril umkristallisiert und ergab reines Z-Oxim. Schmelzpunkt: 239 bis 242ºC.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub7;N&sub3;O&sub1;&sub1; (729,960):
C, 60,88; H, 9,25; N, 5,76
Gefunden: C, 60,92; H, 9,32; N, 6,00
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 730.
IR (0.15% in CCl&sub4;) v 3595 (NOH) und 1738 cm&supmin;¹( Lakton )
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.29 (s, OCH&sub3;), 3.35 (dd, 2'), 3.55 (dd, 9), 4.03 (dq, 5", J4",5" = 10Hz), 4.58 (d, 1'), 4.73 (d, 1"), 4.93 (dd, 13), 8.26 (bs, NOH).
Eine erneute Chromatographie des später eluierenden Materials lieferte das reine E-Oxim.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 730 (729,960 berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub7;N&sub3;O&sub1;&sub1;).
IR (0.15% in CCl&sub4;) v 3595 (NOH) und 1738 cm&supmin;¹ (Lakton ).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.32 (s, N(CH&sub3;)), 3.25 (s, OCH&sub3;), 3.28 (dd, 2'), 3.81 (dd, 9), 4.03 (dq, 5", J4", 5" = 10Hz), 4.39 (d, 1'), 4.83 (d, 1"), 5.21 (dd, 13), 6.98 (bs, NOH).

SCHRITT B

(4"S,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- iminoerythromycin A

Das Produkt nach Schritt A (5,31g, 7,28mmol) wurde mit Titan(III)-chlorid, wie in Beispiel 19, Verfahren B, Schritt A beschrieben, behandelt. Die oben genannte Verbindung wurde in 96%iger Ausbeute (4,97g) erhalten und im nächsten Schritt ohne weitere Reinigung eingesetzt.

SCHRITT C

(4"S,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Schritt (4,97g, 7,0mmol) wurde mit Natriumborhydrid (0, 51g) und Cer(III)-chloridheptahydrat (3,52g), wie in Beispiel 19, Verfahren B, Schritt B beschrieben, behandelt. Das Rohprodukt (4,54g) wurde an einer Silikagelsäule (4,4x42cm) gereinigt. Die Säule war in Acetonitril: 5%ig Ammoniumhydroxid gepackt worden und mit 1,25l Chloroform/Acetonitril/Methanol/Arnmoniumhydroxid (10:2,5:0,15:0,02 Volumenanteile) eingestellt worden. Der pH des Eluats betrug 9. Die Konzentrationen an Methanol und Ammoniak wurden im Laufe der Schritte während der Elution erhöht. Die anfänglichen 2,81 des eluierenden Laufmittels waren die gleichen wie diejenigen des einstellenden Lösungsmittels. Im zweiten 2,8- l-Ansatz waren die Lösungsmittelverhältnisse 20:2,5:0,2:0,2 und im dritten 2,8-l-Ansatz waren die Lösungsmittelverhältnisse 10:2,5:0,3:0,03. In den Endfraktionen betrugen die Lösungsmittelverhältnisse 10:3,0:0,5:0,05. Die Fraktionen, die (4"S,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A erhielten, wurden vereinigt und im Vakuum aufkonzentriert. Oben genannte Verbindung wurde in 56%iger Ausbeute (2,8g) rein erhalten.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub7;H&sub6;&sub9;N&sub3;O&sub1;&sub0; (715,977):
C, 62,07; H, 9,71; N, 5,87
Gefunden: C, 61,76; H, 9,72; N, 5,73
IR ((0.15% in CCl&sub4;): 3480 (N-H), 1736 (C=O) cm&supmin;¹.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 716.
¹HNMR (CDCl&sub4;) delta 2.29 (s, N(CH&sub3;)), 3.22 (dd, 2'), 3.28 (s, OCH&sub3;), 3.50 (d, 11, J&sub1;&sub0;,&sub1;&sub1; = 10Hz), 4.01 (dq, 5",J4",5" = 10 Hz), 4.40 (d, 1'), 4.87 (d, 1"), 5.10 (dd, 13).

BEISPIEL 23

(9S,11S)-4"-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A

SCHRITT A

(9S,11S)-2',4"-O-Diacetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- trimethylsilylerythromycin A

Zu einer gerührten Lösung von (9S,11S)-2'-O-acetyl-9- deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O-trimethylsilylerythromycin A (0,60g, 0,72mmol), dem Produkt aus Beispiel 17, Schritt B, in 4ml CHCl wurde 0,12g (0,98mmol) 4-Dimethylaminopyridin und 0,42ml (4,39mmol) Acetanhydrid zugegeben. Nach 40 Minuten wurde die Reaktionsmischung mit 100ml Benzol verdünnt, mit 5% NaHCO&sub3; gewaschen und am Rotationsverdampfer zur Trockne eingeengt, was 370mg (62%ige Ausbeute) oben genannter Verbindung ergab.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.17 (s, Si(CH&sub3;)&sub3;), 2.08 (s, COCH&sub3;), 2.13 (s, COCH&sub3;), 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 3.32 (s, OCH&sub3;), 3.65 (dd, 9), 4.20 (d, 11), 4.56 (d, 1'), 4.70 (d, 4"), 4.81 (dd, 2'), 4.91 (d, 1"), 5.05 (dd, 13).

SCHRITT B

(9S,11S)-4"-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxo-9,12-epoxyerythromycin A

Das Produkt aus Schritt A (0,37g, 0,45mmol) wurde in einer Mischung von 50ml Methanol und 1ml Triethylamin gelöst und 18 Stunden auf 50ºC erhitzt. Die Lösungsmittel wurden entfernt und dann wurde der Rückstand in 50ml Benzol gelöst. Die Benzolphase wurde mit 5%ig NaHCO&sub3; und dann mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen. Das Benzol wurde entfernt, und es ergaben sich 0,25g Rückstand. Dieser Rückstand wurde in die oben genannte Verbindung mit Tetra-n-butylammoniumfluorid überführt, wie dies in Beispiel 17, Schritt E beschrieben ist. Nach der Reinigung erhielt man (9S,11S)-4"-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A in 28%iger Ausbeute (0,1g).
Analyse berechnet für C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub9;NO&sub1;&sub3;HO (777,999):
C, 60,21; H, 9,20; N, 1,80
Gefunden: C, 60,69; H, 9,05; N, 1,77
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 760 (759,984 berechnet für C&sub3;&sub9;H&sub6;&sub9;NO&sub1;&sub3;).
IR bands (0.15% in CCl&sub4;): v 3480 (O-H), 1720 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.13 (s, COCH&sub3;), 2.30 (s, N(CH&sub3;)) 3.21 (dd, 2'), 3.33 (s, OCH&sub3;), 3.66 (dd, 9), 4.28 (dd, 11), 4.46 (d, 1'), 4.71 (d, 4"), 4.89 (d, 1"), 5.08 (dd, 13).

BEISPIEL 24

(9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"-methylamino-11- oxoerythromcycin A

SCHRITT A

(9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-edoxy-11- oxoerythromcycin A

Das Produkt aus Beispiel 20, Schritt C, (9S)-9-Deoxo- 4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"-hydroxyimino-11-oxoerythromcycin A (0,62g, 0,85mmol) wurde mit Raney-Nickel (1,0g) in Methanol, wie in Beispiel 14, Schritt A beschrieben, reduziert. Oben genannte Verbindung, eine isomere Mischung der Produkte nach den Beispielen 8 und 14, wurde in 90%iger Ausbeute erhalten und im nächsten Schritt eingesetzt.

SCHRITT B

(9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"-dimethylamino-11- oxoerythromcycin A

Das Produkt aus Schritt A (0,55g, 0,77mmol) wurde mit Natriumcyanoborhydrid (0,19g, 3,1mmol), wie im Beispiel 12 behandelt, unter Verwendung von 37%igem Formaldehyd (0,58ml, 7,74mmol) anstelle von Benzaldehyd und Essigsäure (0,09ml) anstelle von Chlorwasserstoffsäure behandelt. Oben genannte Verbindungen wurden erhalten und als Isomerenmischung gereinigt. Die Reinigung wurde an einer Silicagelsäule durchgeführt, die mit 0,2%ig Ammoniumhydroxid in Acetonitril vorbehandelt worden war und eluiert wurde. Die Säulenflußgeschwindigkeit betrug 2,5ml/min. Die Fraktionen, die die gewünschten Produkte enthielten, wurden vereinigt und im Vakuum aufkonzentriert, was 0,292g (51%ige Ausbeute) oben genannter Verbindung als Isomerenmischung der Beispiele 29C und 30B (siehe Tabelle 1) als weißes Glas ergab.

SCHRITT C

(9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-enoxy-4"-methylamino-11- oxoerythromcycin A

Die Produkte nach Schritt B (0,227g, 0,305mmol) wurden mit Acetanhydrid (0,64mmol) und Triethylamin (0,1ml) in Methylenchlorid, wie in Beispiel 1, Schritt A beschrieben, behandelt. Die 2'-O-Acetylverbindung wurde in 98%iger Rohausbeute (0,234g) erhalten und in einen 100-ml-Rundkolben überführt und auf einem Eis/Wasserbad gekühlt. In einem separaten Kolben wurden 12,5ml Methanol auf einem Eis/Wasserbad gekühlt. Natriumacetattrihydrat (0,22g, 1,617mmol) wurde in dem Methanol, gefolgt von 0,078g (0,307mol) festem Jod gelöst. Als sich alles Jod gelöst hatte, wurde die methanolische Lösung zu dem Kolben, der das (9S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-4",11,12-trideoxy- 9,12-epoxy-4"-dimethylamino-11-oxoerythromycin A enthielt, zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde mit einer 150 Watt Flutlichtlampe belichtet. Nach 2 Stunden wurden 0,1g Natriumthiosulfat zugesetzt, um überschüssiges Jod zu zersetzen. Die klare weiße Lösung wurde ungefähr 64 Stunden bei Raumtemperatur stehenlassen. Das Methanol wurde im Vakuum verdampft, und der Rückstand wurde in 80ml Benzol aufgelöst. Die Benzollösung wurde 3 x mit 35ml konzentrierter Kochsalzlösung gewaschen, die 1%ig konzentriertes Ammoniumhydroxid enthielt, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft, was 0,166g (79%ige Ausbeute) obiger Verbindung als Isomerenmischung ergab. Die Isomeren wurden mittels halbpräparativer HPLC an einer Umkehrphasen-C&sub8;-Säule getrennt (20x250mm), mit einem Laufmittel aus 45% Acetonitril, 5% Methanol in Wasser, enthaltend 30g/l Natriumacetattrihydrat und 1,5ml/l Eisessig; bei isokratischer Elution; Flußgeschwindigkeit = 12ml/min. Sieben 0,4-ml-Zugaben wurden aus dem Produkt in methanolischer Lösung (0,055g/ml) gemacht. Die Fraktionen, die jedes Produkt enthielten, wurden getrennt vereinigt und im Vakuum eingeengt, um die organischen Lösemittel zu entfernen. Die konzentrierten wäßrigen Lösungen wurden basisch gemacht (pH 10,5) mit 7%iger Natriumcarbonatlösung und mit 3x 20ml Chloroform extrahiert. Beide vereinigten Chloroformphasen wurden mit konzentrierter Kochsalzlösung, enthaltend 1% konzentriertes Ammoniumhydroxid, gewaschen und im Vakuum eingeengt. Die Rückstände wurde getrennt in Acetonitril gelöst, mit wasserfreiem Natriumcarbonat behandelt, filtriert und die Lösungsmittel wurden am Rotationsverdampfer entfernt.
Das erste isomere Produkt (4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12- trideoxy-9,12-epoxy-4"-methylamino-11-oxoerythromycin A wurde in 36%iger Ausbeute (0,075g) erhalten.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1; (728,972):
C, 62,61; H, 9,40; N, 3,84
Gefunden: C, 62,43; H, 9,42; N, 3,85
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 729.
IR (0.15% in CCl&sub4;): 1755 und 1738 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 2.52 (s, N(CH&sub3;), 3.27 (s, OCH&sub3;), 3.35 (dd, 2'), 3.77 (dd, 9), 4.40 (d, 1'), 4.72 (dq, 5", J4", 5" = 1.5 Hz), 4.78 (d, 1"), 5.15 (dd, 13).
Ein zweites isomeres Produkt (4"S,9S)-9-Deoxo-4",11,12- trideoxy-9,12-epoxy-4"-methylamino-11-oxoerythromycin A wurde in 18%iger Ausbeute (0,0384g) erhalten.
Analyse berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub8;NO&sub1;&sub1; (728,972):
C, 62,61; H, 9,40; N, 3,84
Gefunden: C, 62,48; H, 9,43; N, 3,78
FAB (M+H)&spplus; at M/Z: 729.
IR (0.15% in CCl&sub4;): 1755 und 1738 (C=O) cm&supmin;¹.
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 2.31 (s, N(CH&sub3;)), 2.53 (s, NCH&sub3;), 3.23 (s, OCH&sub3;), 3.32 (dd, 2'), 3.77 (dd, 9), 4.04 (dq, 5", J4",5" = 10 Hz), 4.40 (d, 1"), 4.81 (d, 1"), 5.13 (dd, 13).

BEISPIEL 25

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- triethylsilyl-4"-O-(2-oxoethyl)erythromycin A

SCHRITT A

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- triethylsilyl-4"-O-[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

Das Produkt aus Beispiel 5, Verfahren B, Schritt A, nämlich (9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A (0,65g, 0,73mmol) wurde mit Triethylsilylchlorid (0,6ml, 4,38mmol) in 4ml Chloroform gemäß dem in Beispiel 17, Schritt A beschriebenem Verfahren behandelt. Oben genannte Verbindung wurde in 84%iger Ausbeute (0,62g) erhalten.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 1008 (1008,383 berechnet für C&sub5;&sub3;H&sub8;&sub9;NO&sub1;&sub5;Si)
1HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.65 (q, Si(CH&sub5;)&sub3;), 1.00 (t, Si(CH&sub5;)&sub3;), 2.04 (s, COCH&sub3;), 2.25 (s, N(CH&sub3;)), 3.32 (s, OCH&sub3;), 3.64 (dd,9), 4.28 (d, 11), 4.48 (d, 4"), 4.52 (d,1'), 4.75 (dd,2'), 4.90 (d,1"), 5.07 (dd,13), 5.13 (d, benzylische H), 5.25 (d, benzylische H), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT B

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- triethylsilylerythromycin A

Das Produkt nach Schritt A (0,62g, 0,61mmol) wurde katalytisch in Ethylacetat unter Verwendung von 0,3g 10% Palladium auf Kohle als Katalysator hydriert, wie dies in Beispiel 3, Verfahren A beschrieben ist. Oben genannte Verbindung wurde in 80%iger Ausbeute (0,43g) erhalten.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 874 (874,248 berechnet für C&sub4;&sub5;H&sub8;&sub3;NO&sub1;&sub3;Si)
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.65 (q, Si(CH&sub5;)&sub3;), 1.00 (t, Si(CH&sub5;)&sub3;), 2.07 (s, COCH&sub3;), 2.25 (s, N(CH&sub3;)), 3.03 (dd,4"), 3.31 (s, OCH&sub3;), 3.63 (dd, 9), 4.28 (d, 11), 4.48 (d,1'), 4.76 (dd,2'), 4.83 (d,1"), 5.07 (dd,13).

SCHRITT C

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- triethylsilyl-4"-O-(2-propenyl)erythromycin A

Das Produkt nach Schritt B (1,24g, 1,41mmol) wurde in 13ml Dimethylformamid (DMF) gelöst. Diese Lösung wurde auf -50ºC gekühlt und 3ml 1M Bis(trimethylsilyl)amid wurden zugegeben, gefolgt von 0,25ml (2,8mmol) Allylbromid. Die Reaktionsmischung wurde 2 Stunden bei -50ºC gerührt und mit 3ml gesättigter Kochsalzlösung gelöscht. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand wurde zwischen Chloroform und gesättigter Kochsalzlösung verteilt. Die Chloroformphase wurde verdampft, und das Öl wurde an einer Silikagelsäule gereinigt; das Laufmittel war 5%ig Methanol in Chloroform. Oben genannte Verbindung wurde in 75%iger Ausbeute (0,97g) erhalten.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 914 (914,303 berechnet für C&sub4;&sub8;H&sub8;&sub7;NO&sub1;&sub3;Si)
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.65 (q, Si(CH&sub5;)&sub3;), 1.00 (t, Si(CH&sub5;)&sub3;), 2.04 (s, COCH&sub3;), 2.26 (s, N(CH&sub3;)), 2.87 (d, 4"), 3,33 (s, OCH&sub3;), 3.64 (dd, 9), 4.13 (m, allylic CH), 4.30 (d, 11), 4.53 (d, 1'), 4.75 (dd, 2'), 4.83 (d, 1"), 5.07 (dd, 13), 5.20 (m, C=CH), 5.95 (m, CH=C).

SCHRITT D

Das Produkt nach Schritt C (0,49g, 0,6mmol) wurde in 12ml 20% Wasser in THF bei Raumtemperatur gelöst und Methylmorpholin- N-Oxid (15g, 1,5mmol) wurde hinzugegeben, gefolgt von 1,3ml (0,06mmol) 2,5-gew.%igem Osmiumtetroxid in t-Butylalkohol. Die Reaktionsmischung wurde 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und mit 5%ig Natriumhydrogensulfit auf Celite gelöscht und dann filtriert. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand wurde an einer Silicagelsäule mit 10%ig Methanol in Chloroform, enthaltend l%ig konzentriertes Ammoniumhydroxid, gereinigt. Die Dihydroxy-Zwischenstufe wurde in 79%iger Ausbeute (0,4g) erhalten.
Die Dihydroxy-Zwischenstufe (0,4 g, 0,47mmol) wurde in 20% Wasser in THF bei 0ºC gelöst. Natriummetaperjodat (0,5g, 2,3mmol) wurde zugesetzt, und die Reaktionsmischung wurde 2,5 Stunden bei 0ºC gerührt und durch 2,5g Silikagel mit 10%ig Methanol in Chloroform filtriert. Die Lösungsmittel wurden im Vakuum entfernt und das resultierende Öl wurde an Silicagel gereinigt und mit 10% Methanol in Chloroform eluiert. Obige Verbindung wurde in 97%iger Ausbeute (0,37g) erhalten.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 916 (größere Massenpeaks wurden ebenfalls beobachtet, 916,285 berechnet für C&sub4;&sub7;H&sub8;&sub5;NO&sub1;&sub4;Si).
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 0.65 (q, Si(CH&sub5;)&sub3;), 1.00 (t, Si(CH&sub5;)&sub3;), 2.05 (s, COCH&sub3;), 2.27 (s, N(CH&sub3;)), 2.93 (d, 4"), 3.36 (s, OCH&sub3;), 3.64 (dd, 9), 4.25 (d, OCHC), 4.29 (d, 11), 4.52 (d, 1'), 4.77 (dd, 2'), 4.83 (d, 1"), 5.08 (dd, 13), 9.80 (t, CHO).

BEISPIEL 26

Gemäß der Synthese, die in Beispiel 12 vorgestellt ist, wurde unter Verwendung des Produktes aus Beispiel 25 und dem geeigneten Amin, gefolgt von dem Entfernen von den Acetyl- und Silyl-Schutzgruppen, wie in Beispiel 17 beschrieben, die Beispiele 26A, 26B, 26C und 26D erhalten, wie dies in Tabelle 1 offenbart ist. Die Struktur eines jeden wurde durch ¹H-NMR, Elementaranalyse und/oder das Massenspektrum, wie jeweils angegeben, bestätigt.

BEISPIEL 27

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-eopxy-6-O-methyl-1- oxoerythromycin A

SCHRITT A

2'-O-Acetyl-6-O-methylerythromycin A

Eine Acetyl-Schutzgruppe wurde zu dem Aminozucker von 6- O-Methylerythromycin A mit Essigsäureanhydrid und Triethylamin in Methylenchlorid hinzuaddiert, wie dies in Beispiel 1, Schritt 1 beschrieben ist. Oben genannte Verbindung wurde dann im nächsten Schritt eingesetzt.

SCHRITT B

2'-O-Acetyl-6-O-methyl-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

Eine Benzyloxycarbonyl-Schutzgruppe wurde an das Produkt aus Schritt A mit Benzyloxycarbonylchlorid angehängt, wie dies im Beispiel 1, Schritt 2 beschrieben ist. Die oben genannte Verbindung wurde erhalten und im nächsten Schritt eingesetzt.

SCHRITT C

2'-O-Acetyl-11-deoxy-6-O-methyl-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A

Oxalylchlorid (5,0ml, 57,5mmol) wurde in 50ml Methylenchlorid in einem trockenen Kolben unter Stickstoffatmosphäre aufgelöst. Diese Lösung wurde in einem Trockeneis/Acetonbad auf -70ºC abgekühlt und 6,9ml (88,3mmol) Dimethylsulfoxid (DMSO) in 5ml Methylenchlorid wurden über 5 Minuten hinzugegeben. Die Lösung wurde 6 Minuten lang gerührt und eine Lösung von 5 g (5,41mmol) 2'-O-Acetyl-6-O-methyl-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A aus Schritt B in 20ml Methylenchlorid wurde mittels Spritze über 5 Minuten hinweg hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei -70ºC 65 Minuten lang gerührt und 26ml Triethylamin wurden langsam zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur aufgewärmt und sie wurde mit 500ml Methylenchlorid verdünnt. Die verdünnte Methylenchloridlösung wurde 3x mit 250ml 6%igem Phosphatpuffer gewaschen, gefolgt von 3 x 250ml 4%ig Natriumbicarbonatlösung und 250ml Salzwasser; sie wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und am Rotationsverdampfer eingeengt. Der Rückstand (5,14g) wurde an einer Silicagel (120 g) Säule (2,5x60cm) unter Luftüberdruck (11psi) (Flash-Chromatographie) gereinigt. Die Säule wurde mit 1,5l CHCl:CH&sub3;OH: NH&sub4;OH (98:2,0:0,2) eluiert. Die Fraktionen, die obengenannte Verbindung enthielten, wurden vereinigt und aufkonzentriert und man erhielt 3,21g (64%ige Ausbeute) an reinem 2'-O-Acetyl-11- deoxy-6-O-methyl-11-oxo-4"-O- [(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A, das hauptsächlich als sein 9,12-Hemiacetal vorlag.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 922 (922,130 berechnet für C&sub4;&sub8;H&sub7;&sub5;NO&sub1;&sub6; ).
¹H-NMR (CDCl&sub3;, Hauptisomer) delta 2.06 (s, COCH&sub3;), 2.26 (s, N(CH&sub3;)), 3.25 (s, OCH&sub3;), 3.29 (s, OCH&sub3;), 4.48 (m, 4", 5"), 4.52 (d, 1'), 4.75 (dd, 2'), 4.85 (d, 1"), 5.13 (dd, 13), 5.20 (s, benlzylische CH), 7.36 (m, C&sub6;H&sub5;).

SCHRITT D

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-6-O-methyl-11- oxoerythromycin A

Das Produkt aus Schritt C (3,21g, 3,46mmol) wurde in einer Lösung von 36ml Ammoniak und 60ml Methanol in einer Bombe gelöst. 20%iges Palladium auf Kohle (1,6g) wurden hinzugegeben und die Reaktion wurde unter 500psi Wasserstoff 3 Stunden lang bei 60ºC laufen gelassen. Die Reaktionsmischung wurde über Nacht abkühlen lassen und die verschlossene Reaktionsbombe wurde dann unter Argon schwerkraftfiltriert. Die Reaktionsmischung wurde erneut durch ein Nylonmembranfilter filtriert, um jegliche Spuren an Katalysator zu entfernen. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum entfernt und der Rückstand wurde in 125ml Methanol wieder aufgenommen. Die Lösung wurde über Nacht auf einem Ölbad bei 50ºC gerührt. Das Methanol wurde im Vakuum entfernt. Der Rückstand (2,56g) wurde an einer 250-g-Silicagelsäule (5x30cm) gereinigt. Die Säule wurde unter 11psi Luftdruck gefahren und mit 1L CHCl:CH&sub3;OH:NH&sub4;OH (9,8:0,2:0,02), gefolgt von 1l CHCl:CH&sub3;OH:NH&sub4;OH (9,7:0,3:0,03) eluiert. Die Fraktionen, die oben genannte Verbindung enthielten, wurden vereinigt und aufkonzentriert, was 2,22g (88%ige Ausbeute) an reinem 9,10- Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-6-O-methyl-11- oxoerythromycin A ergab.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 728 (727,941 berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub5;NO&sub1;&sub2;)
¹HNMR (CDCl&sub3;) delta 1.77 (s, 10 CH&sub3;), 2.30 (s, N(CH&sub3;)), 3.01 (t, 4"), 3.19 (dd, 2'), 3.21 (s, 3"OCH&sub3;), 4.37 (d, 1'), 4.86 (d, 1"), 5.26 (dd, 13).

BEISPIEL 28

Gemäß der in Beispiel 13, Schritt A beschriebenen Synthese, wurde das Produkt nach Beispiel 27 mit Lithiumborhydrid (LiBH&sub4;) reduziert, was Beispiel 28A ergab, wie in Tabelle 1 offenbart.
Gemäß der Synthese, die in Beispiel 7, Schritt C beschrieben ist, wurde das Produkt nach Beispiel 27 mit Diisobutylaluminiumhydrid (DIBAH) reduziert, was Beispiel 28B ergab, wie in Tabelle 1 offenbart.
Die Struktur jeder Substanz wurde mittels ¹H-NMR, Elementaranalyse und/oder Massenspektrographie bestätigt, wie dies in Tabelle 1 angegeben ist.

BEISPIEL 29

Gemäß der Synthese nach Beispiel 12 und unter der Verwendung des Produktes aus Beispiel 14 als dem Amin, dem geeigneten Aldehyd und Natriumcyanoborhydrid (NaCNBH&sub3;) als dem reduzierenden Agens, und im Falle von Beispiel von 29A, nach nachfolgender Behandlung mit Wasserstoff und Formaldehyd in Gegenwart eines geeigneten Katalysators wurden die Beispiele 29A, 29B und 29C erhalten, wie sie in Tabelle 1 offenbart sind.
Gemäß der in Beispiel 14 dargestellten Synthese und unter Verwendung des Produktes nach Beispiel 14 als dem Amin- Ausgangsmaterial, dem geeigneten Aldehyd und Palladium auf Kohle (Pd/C) als dem Reduktionskatalysator, wurde Beispiel 29D erhalten, wie es in Tabelle 1 offenbart ist.
Gemäß der Synthese, die in Beispiel 9 vorgestellt ist, und unter der Verwendung des Produktes nach Beispiel 14 als dem Ausgangsmaterial und unter Verwendung der geeigneten Reagenzien wurde Beispiel 29E wie in Tabelle 1 offenbart erhalten.
Gemäß der Synthese, die in Beispiel 10 vorgestellt ist, unter Verwendung des Produktes nach Beispiel 14 als dem Ausgangsmaterial und den geeigneten Reagenzien wurde Beispiel 29F erhalten, wie es in Tabelle 1 offenbart ist.
Die Struktur eines jeden der obigen Beispiele wurde mittels ¹H-NMR, Elementaranalyse und/oder Massenspektrographie bestätigt, wie dies in Tabelle 1 unten angezeigt ist. Es ist offensichtlich, daß R&sub1;, R und R&sub3;, wie sie hierin verwendet werden, den R-Gruppen entsprechen, wie sie durch Formel I bezeichnet sind.

BEISPIEL 30

Gemäß der Synthese, die in Beispiel 12 beschrieben ist, unter der Verwendung des Produktes nach Beispiel 8 als dem Amin, dem geeigneten Aldehyd und dem geeigneten reduzierenden Agens, und, im Falle des Beispiels 30A und 30B, bei nachfolgender Behandlung mit Wasserstoff und Formaldehyd in Gegenwart eines geeigneten Katalysators wurden die Beispiele 30A und 30B erhalten, wie sie in Tabelle 1 offenbart sind.
Gemäß der Synthese, die in Beispiel 14 beschrieben ist unter Verwendung des Produktes nach Beispiel 8 als dem Amin- Ausgangsmaterial, dem geeigneten Aldehyd und dem geeigneten Hydrierungskatalysator, wurde Beispiet 30C erhalten, wie es in Tabelle 1 offenbart ist.
Die Struktur einer jeden Substanz wurde mittels ¹H-NMR, mittels Elementaranalyse und/oder Massenspektrographie bestätigt, wie dies in Tabelle 1 angegeben ist.

BEISPIEL 31

(9S)-4"-O-Aminocarbonyl-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoeryhtromycin A

Oben genannte Verbindung wurde aus dem Produkt nach Beispiel 5 als das 2'-O-Acetylderivat gemäß den Verfahren nach Beispiel 17, Schritte C und D hergestellt.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 759 (758,955 berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub6;NO&sub1;&sub3;)
¹H NMR (CDCl&sub3;) delta 3.30 (dd, 2'), 3.79 (dd, 9), 4.38 (d, 1'), 4.56 (d, 4"), 4.87 (d, 1"), 5.14 (dd, 13)

BEISPIEL 32

(4"S,9S)-4"-[(Aminocarbonyl)amino]-9-deoxo-4",11,12-trideoxy- 9,12-eopxy-11-oxoerythromycin A

Oben genannte Verbindung wurde aus dem Produkt nach Beispiel 14 als ihr 2'-O-Acetylderivat bereitet, unter Anwendung der Verfahren, die in Beispiel 17, Schritte C und D beschrieben sind.
FAB (M+H)&spplus; bei M/Z: 758 (758,955 berechnet für C&sub3;&sub8;H&sub6;&sub7;N&sub3;O&sub1;&sub2;).
¹H NMR (CDCl&sub3;) delta 3.37 (dd, 2'), 3.79 (dd, 9), 4.26 (bd, 4"), 4.31 (d, 1'), 4.89 (d, 1"), 5.13 (dd, 13).

BEISPIEL 33

(9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

SCHRITT A

(9S,11S)-11-(N-Benzyloxycarbonyl)amino-9-deoxo-11,12-dideoxy- 9,12-epoxyerythromycin A

Das Produkt nach Beispiel 19 (9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxyerythromycin A (8g, 11,17mmol), wurde in 161ml Methylenchlorid gelöst; 2,8g (11,24mmol) Benzyloxycarbonyl N-Hydroxysuccinimid wurden hinzugegeben, und die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann in einen Scheidetrichter überführt und mit 300ml einer 5%igen Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die wäßrige Phase wurde 3x mit 100ml Methylenchlorid rückextrahiert, und die organischen Phasen wurden vereinigt. Die vereinigten organischen Phasen wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck aufkonzentriert, was 10,43g oben genannter Verbindung ergab. Das Produkt wurde ohne weitere Reinigung im nächsten Schritt eingesetzt.

SCHRITT B

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-11-(N-benzyloxycarbonyl)amino-9-deoxo- 11,12-dideoxy-9,12-edoxyerythromycin A

Zu einer Lösung von 10,43g (9S,11S-11-(N- Benzyloxycarbonyl)amino-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A aus Schritt A in 104ml Methylenchlorid bei Raumtemperatur wurden 5,21 g (37,7mmol) Kaliumcarbonat und 2,76ml (29,2mmol) Acetanhydrid hinzugegeben, und die Reaktionsmischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wurde in eine Scheidetrichter überführt und mit 50ml 5%iger wäßriger Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die wäßrige Phase wurde 3x mit 100ml Methylenchlorid rückextrahiert und die organischen Phasen wurden vereinigt. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingeengt, was 8,65g obengenannter Verbindung ergab. Das Produkt wurde ohne weitere Reinigung im nächsten Schritt eingesetzt.

SCHRITT C

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-11-(N-benzyloxycarbonyl)amino-9-deoxo- 11,12-dideoxy-9,12-epoxy-4"-O-(1'-H-1'- imidazol)thiocarbonylerythromycin A

Eine Lösung von 6,86g von (9S,11S)-2'-O-Acetyl-11-(N- benzyloxycarbonyl)amino-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A aus Schritt B in 16ml Methylenchlorid wurde in einem im Trockenschrank getrockneten Kolben bereitet. Zu dieser Lösung wurden 3,75g (30,7mmol) N,N-Dimethyl-4- aminopyridin, gefolgt von 3,5g (19,6mmol) 1,1'-Thiocarbonyl-bis- 1H-imidazol hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur 24 Stunden lang gerührt, mit 200ml Methylenchlorid verdünnt und mit Phosphatpufferlösung von pH 5 gewaschen. Die organische Phase wurde abgetrennt und mit 5%iger wäßriger Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die vereinigten wäßrigen Phasen wurden mit 2x 50ml Methylenchlorid rückextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingeengt. Der Rückstand (ein gelbes Glas) wurde mittels Chromatographie an Silicagel gereinigt, wobei mit Chloroform:Acetonitril (1:1) eluiert wurde, was 3,19g (28,5%ige Ausbeute) an (9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A, der oben genannten Verbindung, ergab.
MS DCI-NH&sub3; M/Z:
1004 (M+H)&spplus;; ¹H NMR delta 0.84 (t, 3H, 15), H NMR (CDC1&sub3;) 2.13 (s, 3H, COCH&sub3;), 2.29 (s, 6H, NMe), 3.38 (s, 3H, OCH&sub3;), 3.42 (m, 1H, 5'), 3.50 (d, 1H, 5), 3.59 (dd, 1H, 9), 7.06 (dd, 1H, Im), 7.30-7.40 (m, 5H, Ph), 7.63 (m, 1H, Im), 8.33 (d, 1H, Im).

SCHRITT D

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-11-(N-benzyloxycarbonyl)amino-9-deoxo- 4",11,12-trideoxy-9,12-epoxyerythromycin A

Eine Mischung von 2 g (2mmol) von (9S,11S)-2'-O-Acetyl- 11-(N-benzyloxycarbonyl)amino-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy- 4"-O-(1'-H-1'-imidazol)thiocarbonylerythromycin A (aus Schritt C), 30ml trockenem Toluol und 20mg 2,2'-Azobisisobutyronitril wurde in einem im Trockenschrank getrockneten 50-ml-Kolben hergestellt und mit Stickstoff gespült. Tri-n-butylzinnhydrid (2,05ml, 7,65mmol) wurde bei Raumtemperatur hinzugegeben, und die Reaktionsmischung wurde auf 65ºC erhitzt. Die Reaktionsmischung wurde 18 Stunden bei 65ºC gehalten, danach wurde sie auf Raumtemperatur abgekühlt und mit 52ml einer 4,8%igen wäßrigen Natriumbicarbonatlösung, die 1%ig Ammoniak enthielt, gewaschen. Die wäßrige Phase wurde mit Toluol rückextrahiert. Die vereinigten toluolischen Phasen wurden 2x mit 50ml Hexan/Acetonitril extrahiert. Die vereinigten Acetonitrilphasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum aufkonzentriert, was 1,46 g (84%ige Ausbeute) obengenannter Verbindung als weißes Glas ergab.
MX EI M/Z: 877 (M+H)&spplus;

SCHRITT E

(9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A

Zu einer Lösung von 1,46g (1,67mmol) an (9S,11S)-2'-O- Acetyl-11-(N-benzyloxycarbonyl)amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy- 9,12-epoxyerythromycin A, aus Schritt D, in 900ml Methanol wurde 10ml konzentrierte wäßrige Ammoniumhydroxidlösung und 3g Raney- Nickel hinzugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur unter 4 Atm Wasserstoff 22 Stunden lang hydriert. Die Reaktionsmischung wurde abfiltriert und im Vakuum aufkonzentriert. Der Rückstand wurde in 100ml Methylenchlorid gelöst und die Methylenchloridlösung wurde mit 50ml 5%iger Natriumbicarbonatlösung gewaschen. Die wäßrige Phase wurde 3x mit 50ml Methylenchlorid rückextrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum aufkonzentriert. Der Rückstand (900mg) wurde an Silicagel gereinigt, das mit Acetonitril:Ammoniumhydroxid (10:0,03) vorbehandelt worden war. Die Säule wurde mit obigem Lösungsmittel eluiert, bis 50 Fraktionen 261 gesammelt worden waren. Dann wurde das Lösungsmittel auf Acetonitril:Ammoniumhydroxid (10:0,07) umgestellt. Die Fraktionen 110 bis 125 wurden vereinigt, aufkonzentriert und nochmals nach demselben Verfahren chromatographiert, wobei nur mit Acetonitril: Ammoniumhydroxid (10:0,03) eluiert wurde, was oben genannte Verbindung ergab.
MS FAB M/Z: 701 (M+H)&spplus;; ¹H NMR
(CDCl&sub3;) delta 0.83 (t, 3H, 15), 1.26 (s, 3H, 12), 2.30 (s, 6H, NMe2), 2.51 (dt, 1H, 3'), 2.71 (m, 1H, 2), 3.21 (dd, 1H, 2'), 3.25 (s, 3H, OCH3), 4.45 (d, 1H, 1'), 4.95 (d, 1H, 1"), 5.10 (dd, 1H, 13).

BEISPIEL 34

IN-VITRO-ANTIBIOTISCHE AKTIVITÄT

Das antimikrobielle Spektrum verschiedener der Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurde, wie unten beschrieben, untersucht. Die Ergebnisse sind in den Tabellen 2 und 3 angezeigt.
12 Petri-Schalen, die wäßrige Reihenverdünnungen der Testverbindungen vermischt mit 10ml von sterilisiertem Hirn- Herz-Infusionsagar (BHI) (Difco 0,418-01-5) enthielten, wurden bereitet. Jede Platte wurde mit 1:100- (oder 1:10- für langsam wachsende Stämme (vorwiegend Micrococcus und Streptococcus) Verdünnungen von bis zu 32 verschiedenen Mikroorganismen angeimpft, wobei ein Steers-Replikatorblock verwendet wurde. Die angeimpften Platten wurden bei 35 bis 37ºC 20 bis 24 Stunden lang inkubiert. Zusätzlich wurde eine Kontrollplatte bereitet, bei der BHI-Agar verwendet wurde, der keine Testverbindung enthielt, und sie wurde zu Beginn und am Ende eines jeden Testes inkubiert.
Eine zusätzliche Platte, die eine Verbindung enthielt, die ein bekanntes Empfindlichkeitsmuster für die zu testenden Organismen aufweist, und die zur gleichen antibiotischen Klasse wie die Testverbindungen gehört, wurde ebenfalls bereitet und als weitere Kontrolle inkubiert, wie auch, um die Test-zu-Test- Vergleichbarkeit zu überprüfen. Zu diesem Zweck wurde Erythromycin A verwendet.
Nach der Inkubation wurde jede Platte abgelesen. Die MIC (Minimum-Inhibitions-Konzentration) ist als die niedrigste Konzentration der Testverbindung definiert, die zu keinem Wachstum, einem schwachen Schatten oder vereinzelten verbreiteten Kolonien auf der Animpfstelle führt, wenn man mit der Wachstumskontrolle vergleicht, die keine Testverbindung enthält. Tabelle 1 BEISPIEL SCHEMA REAGENZ TYPISCHES NMR ppm RELATIV ZU TMS MASSENSPEKTRUM (M/Z) AMMONIAK H-METHYLBENZYLAMIN TABELLE 1 FORTSETZUNG BEISPIEL SCHEMA REAGENZ TYPISCHES NMR ppm RELATIV ZU TMS MASSENSPEKTRUM (M/Z) BENZYLAMIN DIBAH TABELLE 1 FORTSETZUNG BEISPIEL SCHEMA REAGENZ TYPISCHES NMR ppm RELATIV ZU TMS MASSENSPEKTRUM (M/Z) N-piperidino TABELLE 1 FORTSETZUNG BEISPIEL SCHEMA REAGENZ TYPISCHES NMR ppm RELATIV ZU TMS MASSENSPEKTRUM (M/Z) ACET AN HYDRID TABELLE 1 FORTSETZUNG BEISPIEL SCHEMA REAGENZ TYPISCHES NMR ppm RELATIV ZU TMS MASSENSPEKTRUM (M/Z) N-piperidino TABELLE 2 IN-VITRO ANTIMIKROBIELLE AKTIVITÄT, ERSTE UNTERSUCHUNG ORGANISMUS MIC (microgram/mL) Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Micrococcus luteus Enterococcus faecium Streptococcus bovis Streptococcus agalactiae Streptococcus pyrogenes Escherichia coli Enterobacter aerogenes Klebsiella pneumoniae Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas cepacia Acinetobacter TABELLE 2 IN-VITRO ANTIMIKROBIELLE AKTIVITÄT, ERSTE UNTERSUCHUNG ORGANISMUS MIC (microgram/mL) Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Micrococcus luteus Enterococcus faecium Streptococcus bovis Streptococcus agalactiae Streptococcus pyrogenes Escherichia coli Enterobacter aerogenes Klebsiella pneumoniae Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas cepacia Acinetobacter TABELLE 2 IN-VITRO ANTIMIKROBIELLE AKTIVITÄT, ERSTE UNTERSUCHUNG ORGANISMUS MIC (microgram/mL) Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Micrococcus luteus Enterococcus faecium Streptococcus bovis Streptococcus agalactiae Streptococcus pyrogenes Escherichia coli Enterobacter aerogenes Klebsiella pneumoniae Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas cepacia Acinetobacter TABELLE 3 IN-VITRO ANTIMIKROBIELLE AKTIVITÄT, ERSTE UNTERSUCHUNG ORGANISMUS MIC (microgram/mL) Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Micrococcus luteus Enterococcus faecium Streptococcus bovis Streptococcus agalactiae Streptococcus pyrogenes Escherichia coli Enterobacter aerogenes Klebsiella pneumoniae Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas cepacia Acinetobacter TABELLE 3 IN-VITRO ANTIMIKROBIELLE AKTIVITÄT, ERSTE UNTERSUCHUNG ORGANISMUS MIC (microgram/mL) Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Micrococcus luteus Enterococcus faecium Streptococcus bovis Streptococcus agalactiae Streptococcus pyrogenes Escherichia coli Enterobacter aerogenes Klebsiella pneumoniae Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas cepacia Acinetobacter

BEISPIEL 35

IN-VIVO-ANTIBAKTERIELLE AKTIVITÄT

Ein akuter Mäuseschutztest wurde an 10 Mäusen durchgeführt, und zwar mit einer jeden von 3 Konzentrationen von ausgewählten Verbindungen der Erfindung. Jede Konzentration war eine vierfache Verdünnung der vorhergehenden Konzentration. Die anfängliche Konzentration hängt von dem Mikroorganismus ab, mit dem die Maus befallen ist. Die Mäusemortalität wurde verwendet, um einen ED&sub5;&sub0;-Wert, d.h. die Dosis an Wirkstoff, die notwendig ist, um 50% der Testtiere gegen Tod aufgrund der angeimpften Krankheit zu schützen, zu berechnen.
Der akute Mäuseschutztest wurde an weiblichen schweizerischen Albino-Mäusen mit 18 bis 20g Gewicht durchgeführt. Die Mäuse wurden intraperitoneal mit einer 18stündigen Kultur des angezeigten Testorganismus angeimpft, die ausreichend verdünnt worden war, um den gewünschten LD&sub5;&sub0;-Wert zu liefern. Die gewünschte Infektionsdosis lag in einem Bereich von ungefähr 10 bis 1000mal dem LD&sub5;&sub0;. Vorzugsweise beträgt die Infektionsdosis das 100-fache des LD&sub5;&sub0;-Wertes. Um die Wirksamkeit der Animpfung zu überprüfen, wurde der angezeigte Testorganismus in den Kontrolltieren titriert. Die Titration bestimmt den LD&sub5;&sub0;- Wert für einen speziellen Mikroorganismus. Die Behandlungsgruppen der Tiere wurden oral, über eine Magensonde, oder subkutan mit den Testverbindungen 1 und 5 Stunden nach der Injektion dosiert und 7 Tage lang beobachtet. Die ED&sub5;&sub0;-Werte wurden unter Verwendung der aufgezeichneten Mortalitätsdaten berechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 unten angezeigt, und zeigen die Wirksamkeit der erfinderischen Verbindung zur Behandlung von Infektionen an. TABELLE 4 IN-VIVO MÄUSESCHUTZTEST ED&sub5;&sub0; mg/kg Staphylococcus aureus Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae Haemophilus influenzae BEISPIEL Oral SUBKUTAN *Standard - ERYTHROMYCIN

BEISPIEL 36

PHARMAKOKINETISCHE BEWERTUNG IN HUNDEN

Ausgewählte Verbindungen der vorliegenden Erfindung wurden als Lösungen in verdünnter Lactobionsäure bei einer Konzentration von 10 oder 20mg/ml formuliert. Gruppen von zwei oder drei Hunden wurde eine 10-mg-Makrolid/kg intravenöse Spritz- oder Oraldosis (über eine Magensonde) verabreicht. Plasmaproben, die zu ausgewählten Zeitpunkten von 15 Minuten bis 32 Stunden nach der Dosierung erhalten wurden, wurden unter Verwendung von Umkehrphasen-HPLC mit elektrochemischer Detektion (Hauptwirkstoff) und mikrobiologischem Assay (gesamtmikrobiologische Aktivität) untersucht. Die Plasmakonzentration- Zeitkurven wurden einer multi-exponentiellen Kurvenanpassung unterzogen, um die Endabbau-Halbwertszeiten zu bestimmen. Die Fläche unter der Kurve (AUC)-Werte, die mittels der trapezoidalen Methode berechnet wurde, wurde zur Berechnung der absoluten Bioverfügbarkeit verwendet. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 unten aufgeführt. TABELLE 5 PHARMAKOKINETISCHE PARAMETER AUSGEWÄHLTER MAKROLIDE IN HUNDEN NACH VERABREICHUNG EINER 10MG/KG-DOSIS VERBINDUNG Assay STUNDE Oral Micro * Biologische Halbwertszeit ** Maximal-Konzentration im Blut *** Zeitraum zum Erreichen der Maximum-Konzentration im Blut **** Prozent Extinktion ++ Erythromycin A

BEISPIEL 37

BEHANDLUNG VON INDUZIERTER OTITIS MEDIA

Die Wirksamkeit einer der Verbindungen der vorliegenden Erfindung bei der Behandlung von Otitis Media wurde, wie unten beschrieben, untersucht. Eine 5-stündige Kultur aus der logarithmischen Wachstumsphase von Haemophilus influenzae ATCC 43095 wurde in Herz-Infusionsbrühe (BHIB), die mit 4%ig Fildes- Anreicherung und 0,001% Nicotinamidadenindinukleotid (NAD; handelsüblich erhältlich von Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri) bezusatzt worden war, bereitet. Weibliche mongolische Wüstenspringmäuse mit einem Gewicht von etwa 40 bis 50g (von den Tumblebrook-Farms, West Brookfield, Massachusetts) wurden mit Diethylether anästhesiert und perkutan in die hintere Kammer der Mittelohrblase mit einer 0,02 ml Impfkultur, enthaltend ungefähr 10 Bakterien, injiziert.
Kurz vor der Behandlung mit den Testverbindungen, wurde Mittelohrflüssigkeit von 5 Wüstenspringmäusen, wie unten beschrieben, erhalten und kultiviert, um das Infektionsniveau zu Beginn der Therapie festzustellen. Die Testverbindungen aus Beispiel 19, (9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-11,12-deoxy-9,12- epoxyerythromycin A, wurde oral über eine Magensonde in einem Volumen von 0,5ml, beginnend 17 Stunden nach der Infusion, verabreicht, und weiterführend 3mal am Tag 2 Tage lang an Gruppen von je 5 Wüstenspringmäusen. Als Standardvergleichswert wurden eine zweite Gruppe von Wüstenspringmäusen unter Verwendung von Erythromycin gleichartig behandelt. 18 Stunden nach der Endbehandlung wurden die Wüstenspringmäuse getötet, 0,02ml BHIB wurden in die Mittelohrblase durch das Trommelfell gespritzt, und die Mittelohrflüssigkeiten wurden gesammelt und kultiviert.
Die Flüssigkeiten wurden in BHIB verdünnt und 2-fach auf Schokoladeagarplatten aufgebracht. Die Kolonien wurden nach der Inkubierung über Nacht gezählt und die Bakterienzählwerte wurden als Kolonie-bildende Einheiten (CFU, "colony forming units") pro Mittelohr ausgedrückt. Die Minimalanzahl von nachweisbaren Bakterien nach diesem Verfahren betrug 100 CFU.
Bakterienzählungen von den behandelten Tieren wurden mit denjenigen der unbehandelten Kontrollwerte verglichen, und die zu 50% effektive Dosis (ED&sub5;&sub0;), die zur Reduzierung der CFU um 90% von Nöten war, wurde mittels Regressionsanalyse für jede Testverbindung als mg/kg berechnet. Die Wüstenspringmäuse wurden als von der Infektion geheilt erachtet, wenn keine Bakterien mehr aus den unverdünnten Mittelohrflüssigkeiten isoliert werden konnten.
Unter Verwendung obiger Verfahren wurde der ED&sub5;&sub0; der Testverbindung als 46,5mg/kg betragend bestimmt, während derjenige von Erythromycin nachgewiesenermaßen mehr als 300mg/kg betrug. Diese Ergebnisse zeigen die Wirksamkeit der erfinderischen Verbindungen bei der Behandlung von Mittelohrinfektion an.
Diese Erfindung wurde im Rahmen spezifischer Ausführungsformen detailliert beschrieben. Es ist jedoch offensichtlich, daß diese Ausführungsformen nur auf dem Wege der Veranschaulichung gezeigt werden, und daß die Erfindung nicht notwendigerweise auf diese beschränkt ist. Z.B. ist es offensichtlich, daß, obwohl Erythromycin A hier beschrieben wird, nur geringe strukturelle Unterschiede zwischen Erythromycin A und C bestehen. Daher können die Reaktionen und Produkte der vorliegenden Erfindung sowohl auf Erythromycin A als auch auf Erythromycin C angewendet werden.

Claims

1. Verbindung mit folgender Struktur:

wobei R&sub1; gleich einer Oxo-, Oxim-, Hydroxy- oder Aminogruppe in der 11-Position ist;

R gleich Wasserstoff, einer sauerstoffhaltigen Gruppe oder einer stickstoffhaltigen Gruppe in der 4"-Position ist;

R&sub3; gleich Wasserstoff oder Niederalkyl ist; und

pharmazeutisch verträgliche Salze und Ester derselben.

2. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine therapeutisch wirkungsvolle Menge eines Erythromycinderivats nach Anspruch 1 umfaßt.

3. Verbindung nach Anspruch 1 zur Verwendung als therapeutischer Wirkstoff.

4. Verwendung eines Erythromycinderivats nach Anspruch 1 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung und Vorbeugung bakterieller und anderer mikrobiologischer Infektionen in Säugern.

5. Verbindung, die aus der Gruppe gewählt ist, die aus folgendem besteht:

(9S,11S)-9-Deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A;

(9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A;

(4"R,9S)9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [[(phenylmethoxy)carbonyl]amino]erythromycin A;

(4"R,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A;

(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- [(dimethylamino)methylen]amino]-11-oxoerythromycin A;

(4"R,9S)-Acetylamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A;

(4"R,9S)-9-Deoxo-4"-11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- [(methylsulfonyl)amino]-11-oxoerythromycin A;

(4"R,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- [(phenylmethyl)amino]erythromycin A;

(4"R,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A;

(4"S,9S)-4"-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A;

(4"S,9S,11S)-4"-Amino-9-deoxo-4",12-dideoxy-9,12- epoxyerythromycin A;

(4"S,9S)-9-Deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- (methylsulfonyl)amino-11-oxoerythromycin A;

(9S,11S)-4"-O-aminocarbonyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12--

epoxyerythromycin A;

(9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- hydroxyiminoerythromycin;

(9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-11,12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A;

(9S,11S)-11-Amino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy- erythromycin A;

(4"R,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A;

(4"R,9S)-9-Deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A;

(4"S,9S,11S)-4",11-Diamino-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12- epoxyerythromycin A;

(9S,11S)-4"-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxyerythromycin A;

(9S)-4"-O-Aminocarbonyl-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A;

(4"S,9S)-4"-[(Aminocarbonyl)amino]-9-deoxo-4",11,12-trideoxy- 9,12-epoxy-11-oxoerythromycin A; und Salze und Ester dieser.

6. Verbindung, die aus der Gruppe gewählt ist, die aus folgendem besteht:

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11-oxo-4"- O-[(phenylmethoxy)carbonyl]erythromycin A;

2'-O-Acetyl-11-deoxy-11-oxoanhydroerythromycin A;

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-11- oxoerythromycin A;

(4"E)-9,10-Didehydro-9-deoxo-4",11,12-trideoxy-9,12-epoxy-4"- hydroxyimino-11-oxoerythromycin A;

(9S,11S)-2'-O-Acetyl-9-deoxo-12-deoxy-9,12-epoxy-11-O- triethylsilyl-4"-O-(2-oxoethyl)erythromycin A;

9,10-Didehydro-9-deoxo-11,12-dideoxy-9,12-epoxy-6-O-methyl-11- oxoerythromycin A; und Salze und Ester dieser.

7. Verbindung mit folgender Struktur:

wobei R gleich Hydroxy ist, R&sub3; gleich Wasserstoff ist, und R&sub1; aus Oxo und Hydroxy gewählt ist.

8. Verfahren für die Darstellung der Verbindung nach Anspruch 7, wobei das Verfahren folgendes umfaßt:

a. Behandlung von Erythromycin A mit einer Säure unter Bildung von Anhydroerythromycin A;

b. Schützen der Position 2' mit einer Schutzgruppe;

c. Oxidieren des geschützten Anhydroerythromycins A unter Bildung eines ungesättigten Ketons;

d. Überführen des ungesättigten Ketons in ein Enon und Entschützen der Position 2'; und

e. Reduzieren des Enons.