DE60019954T2

DE60019954T2 - Fab i hemmer

Info

Publication number: DE60019954T2
Application number: DE60019954T
Authority: DE
Inventors: H. William MILLER; A. Kenneth NEWLANDER; A. Mark SEEFELD
Original assignee: Affinium Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Affinium Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1999-10-08
Filing date: 2000-10-06
Publication date: 2006-02-23
Anticipated expiration: 2020-10-07
Also published as: EP1225895B1; EP1225895A1; CO5251401A1; HK1049610A1; JP4961084B2; JP2003511415A; EP1225895A4; AU1192501A; DE60019954D1; WO2001026654A1; ATE294578T1

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Diese Erfindung bezieht sich auf pharmazeutisch aktive Verbindungen, welche Fab I inhibieren und die nützlich sind für die Behandlung bakterieller Infektionen.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Während der Gesamtweg der Biosynthese gesättigter Fettsäuren bei sämtlichen Organismen ähnlich ist, variieren die Fettsäuresynthase-(FAS-)Systeme merklich im Hinblick auf ihre strukturelle Organisation. Vertebraten und Hefen besitzen eine FAS, bei der die gesamten enzymatischen Aktivitäten auf einer bzw. zwei Peptidketten kodiert sind und das Acylträgerprotein (ACP) ist ein integraler Teil des Komplexes. Im Gegensatz dazu ist bei bakterieller FAS jede der Reaktionen durch ein unterschiedliches, monofunktionales Enzym katalysiert und das ACP ist ein gesondertes Protein. Deswegen gibt es ein merkliches Potenzial für die selektive Inhibition des bakteriellen Systems durch antibakterielle Mittel.
Fab I (zuvor bezeichnet als EnvM) wirkt als eine Enoyl-ACP-Reduktase (Bergler et al., (1994), J. Biol. Chem. 269, 5493–5496) in dem Endschritt der vier Reaktionen, die in jeden Zyklus der bakteriellen Fettsäurebiosynthese verwickelt sind. Bei diesem Weg wird der erste Schritt durch β-Ketoacyl-ACP-Synthase katalysiert, welche Malonyl-ACP mit Acetyl-CoA (FabH, Synthase III) kondensiert. In den nachfolgenden Runden wird Malonyl-ACP mit der wachsenden Kette von Acyl-ACP kondensiert (FabB und FabF, Synthasen I bzw. II). Der zweite Schritt in dem Verlängerungszyklus ist die Ketoesterreduktion durch die NADPH-abhängige β-Ketoacyl-ACP-Reduktase (FabG). Die nachfolgende Dehydrierung durch die β-Hydroxyacyl-ACP-Dehydrase (entweder FabA oder FabZ) führt zu Trans-2-Enoyl-ACP, welches wiederum zu Acyl-ACP durch die NADP-abhängige Enoyl-ACP-Reduktase (Fab I) umgewandelt wird. Weitere Runden dieses Zyklus, wobei zwei Kohlenstoffatome pro Zyklus hinzugefügt werden, führen schließlich zu Palmitoyl-ACP (16C), worauf der Zyklus gestoppt wird, im Wesentlichen wegen der Rückkopplungsinhibition von Fab I durch Palmitoyl-ACP (Heath et al., (1996), J. Biol. Chem. 271, 1833–1836). Folglich ist Fab I ein Hauptbiosyntheseenzym und ist ein Schlüsselregulationspunkt bei dem Gesamtsyntheseweg der bakteriellen Fettsäurebiosynthese. Deswegen ist Fab I ein ideales Ziel für die antibakterielle Intervention.
Studien zeigten, dass Diazaborin-Antibiotika die Fettsäure-, Phospholipid- und Lipopolysaccharid-(LPS-)Biosynthese inhibieren und dass das antibakterielle Ziel dieser Verbindungen Fab I ist. Zum Beispiel wurde von dem Derivat 2b18 von Grassberger, et al., (1984). J. Med. Chem, 27, 947–953, berichtet, dass es ein nicht-kompetitiver Inhibitor von Fab I ist (Bergler et al., (1994), J. Biol. Chem. 269, 5493–5496). Ebenfalls übertrugen Plasmide, die das Fab-I-Gen aus diazaborinresistentem S. typhimurium enthielten, Diazaborinresistenz auf E. coli (Turnowsky et al., (1989), J. Bacteriol., 171, 6555–6565). Ferner ist die Inhibition von Fab I entweder durch Diazaborin oder durch Erhöhen der Temperatur in einer Fab-I-temperatursensitiven Mutante letal. Diese Ergebnisse zeigen, dass Fab I für das Überleben des Organismus essenziell ist (Bergler et al., (1994), J. Biol. Chem, 269, 5493–5496).
Vorangegangene Studien zeigten, dass Fab I ebenfalls das Ziel für das antibakterielle Breitspektrummittel Triclosan ist (McMurry et al., (1998), Nature, 394, 531–532). Eine Kristallstruktur des E.-coli-FabI, das mit NAD und Triclosan komplexiert worden ist, zeigt, dass Triclosan als ein ortsgerichteter, sehr potenter Inhibitor von Fab I wirkt, indem er sein natürliches Substrat nachahmt (Levy et al., (1999), Nature, 398, 383–384). Ward et al. ((1999), Biochem., 38, 12514–12525) zeigten, dass es keinen Beleg für die Bildung eines kovalenten Komplexes zwischen Fab I und Triclosan gibt, welcher analog zu den Diazaborinen sein würde; Triclosan unterscheidet sich von diesen Verbindungen dahingehend, dass es ein reversibler Inhibitor von Fab I ist. Die Strukturdaten für den Komplex von Fab I mit NAD und Triclosan stellen wichtige Information über Fab I als ein therapeutisches Ziel bereit.
Wichtig ist, dass nun entdeckt worden ist, dass gewisse Verbindungen Fab-I-Inhibitoren sind und antibakterielle Aktivität haben und deshalb für die Behandlung von bakteriellen Infektionen in Säugern, insbesondere beim Menschen, nützlich sein könnten.
WO 98/57952 beschreibt Isochinolin-Indol-Verbindungen als antimikrobielle Mittel. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Band 7, Nr. 10, S. 1349–1352, beschreibt die chemische Synthese der Anti-Staphylokokken-Verbindung Nematophin, ein Antibiotikum, das aus Xenorhabdus nematophilus isoliert worden ist. Die US 5,932,743 beschreibt die Festphasensynthese einer Gruppe substituierter Indolverbindungen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Diese Erfindung umfasst Verbindungen der Formel (I), wie hiernach beschrieben, welche Fab I inhibieren und nützlich sind bei der Behandlung bakterieller Infektionen.
Diese Erfindung ist ebenfalls eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung gemäß der Formel (I) und eine pharmazeutisch annehmbare Trägersubstanz umfasst.
Diese Erfindung ist ebenfalls ein Verfahren zur Behandlung bakterieller Infektionen durch Inhibieren von Fab I. In einem besonderen Aspekt sind die Verbindungen dieser Erfindung nützlich als antibakterielle Mittel.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG
Diese Erfindung umfasst Verbindungen der Formel (I):
worin
R¹ C_1-4Alkyl ist;
R² C_1-4Alkyl ist;
R³ -C_1-4Alkyl, -C_0-4Alkyl-Ar oder -C_0-4Alkyl-Het ist;
R⁴ -C_1-4Alkyl, -(CH₂)_1-4OH, -OC_1-4Alkyl, -SC_1-4Alkyl, -N(C_1-4Alkyl)₂, -C_0-4Alkyl-Ar, -C_0-4Alkyl-Het, -C_0-4Alkyl-C_3-6Cycloalkyl, -CH(OH)-CH₂-R* oder -(CH₂)_1-3SO₂Ar ist;
R* C_1-4Alkyl, Ar oder Het ist;
X H, C_1-4Alkyl, OR', SR', CN, N(R')₂, CH₂N(R')₂, NO₂, CF₃, CO₂R', CON(R')₂, OR', NR'C(O)R', F, Cl, Br, I oder -S(O)_rCF₃ ist;
R' H, C_1-6Alkyl oder -C_0-6Alkyl-Ar ist; und
r 0, 1 oder 2 ist;
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Ebenfalls eingeschlossen in dieser Erfindung sind pharmazeutisch annehmbare Additionssalze und Komplexe der Verbindungen dieser Erfindung. In Fällen, worin die Verbindungen dieser Erfindung eines oder mehrere chirale Zentren haben mögen, schließt diese Erfindung, soweit nicht anders spezifiziert, jede einzelne racemische Verbindung ein, ebenso wie jede einzelne nicht-racemische Verbindung.
In Fällen, in welchen Verbindungen ungesättigte Kohlenstoff-Kohlenstoff-Doppelbindungen haben, liegen sowohl die Cis-(Z-) als auch die Trans-(E-)Isomere im Schutzumfang dieser Erfindung. In Fällen, worin Verbindungen in tautomeren Formen existieren mögen, wie z. B. Keto-Enol-Tautomere, wie z. B.
und
wird von jeder tautomeren Form beabsichtigt, dass sie in dieser Erfindung eingeschlossen ist, ob im Äquilibrium vorkommend oder in einer Form durch eine geeignete Substitution mit R' eingeschlossen. Die Bedeutung jedes Substituenten bei jedem Erscheinen ist unabhängig von seiner Bedeutung oder der Bedeutung jedes anderen Substituenten bei irgendeinem anderen Erscheinen.
Als Prodrogen der Verbindungen dieser Erfindung werden alle kovalent gebondeten Träger erachtet, die das aktive elterliche Arzneimittel gemäß der Formel (I) in vivo freisetzen.
Die Verbindungen der Formel (I) inhibieren Fab I. Die Inhibition dieses Enzyms ist nützlich bei der Behandlung bakterieller Infektionen. Ebenfalls können die Verbindungen dieser Erfindung nützlich sein als Antipilzmittel. Zusätzlich können die Verbindungen in Kombination mit bekannten Antibiotika nützlich sein.
Hinsichtlich Formel (I) umfasst diese Erfindung vorzugsweise Verbindungen der Formel (Ia):
in welcher R³ und R⁴ wie für Formel-(I)-Verbindungen definiert sind.
Geeigneterweise sind hinsichtlich Formel (I) R³ -C_1-4Alkyl oder -C_0-2Alkyl-Ph und R⁴ -C_1-4Alkyl, -(CH₂)OH, -OC_1-4Alkyl, -C_0-2Alkyl-Ph, -C_0-2Alkyl-C_3-6Cycloalkyl, -CH(OH)CH₂-R* oder -(CH₂)₂SO₂Ph, worin R* wie für Formel-(I)-Verbindungen definiert ist.
Vertreter der neuen Verbindungen dieser Erfindung sind die folgenden:
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methylacetamid;
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-(2-phenylethyl)acetamid;
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy-4-methyl-N-methylpentanamid;
{4-Amino-3-[(ethoxy-N-methylcarbonylamino)methyl]phenyl}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid;
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy-N-methylacetamid;
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-3-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methylacetamid;
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-phenylacetamid;
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy-3-indol-3-yl-N-methylpropanamid;
(4-Amino-3-{[(4-hydroxyphenyl)-N-methylcarbonylamino]methyl}phenyl)-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid;
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methyl-3-(phenylsulfonyl)propanamid; und
N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-cyclopentyl-N-methylacetamid;
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Abkürzungen und Symbole, die auf dem Fachgebiet der Peptide und Chemie allgemein verwendet werden, werden hierin verwendet, um die Verbindungen dieser Erfindung zu beschreiben. Im Allgemeinen folgen die Aminasäureabkürzungen der IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, wie beschrieben in Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984).
C_1-4Alkyl, wie hierin angewandt, bedeutet eine wahlweise substituierte Alkylgruppe von 1 bis 4 Kohlenstoffatomen und schließt Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl und t-Butyl ein. C_1-6Alkyl schließt zusätzlich Pentyl, n-Pentyl, Isopentyl, Neopentyl und Hexyl und die einfachen aliphatischen Isomere davon ein. C_0-4Alkyl und C_0-6Alkyl gibt zusätzlich an, dass keine Alkylgruppe vorhanden zu sein braucht (z. B. dass eine kovalente Bindung vorhanden ist).
Jedes C_1-4Alkyl oder C_1-6Alkyl kann wahlweise mit der Gruppe R^x substituiert sein, welche sich an jedem Kohlenstoffatom befinden kann, die in einer stabilen Struktur resultiert und durch gewöhnliche Synthesetechniken zugänglich ist. Geeignete Gruppen für R^x sind C_1-4Alkyl, OR', SR', CN, N(R')₂, CH₂N(R')₂, -NO₂, -CF₃, -CO₂R', -CON(R')₂, -COR', -NR'C(O)R', F, Cl, Br, I oder -S(O)_rCF₃, worin R' und r wie für Formel-(I)-Verbindungen definiert sind.
Halogen oder Halo bedeutet F, Cl, Br und I.
Ar oder Aryl, wie hierin verwendet, bedeutet Phenyl oder Naphthyl oder Phenyl oder Naphthyl, das durch eins bis drei Substituenten, wie z. B. jene oben für Alkyl definierten, substituiert worden ist oder durch Methylendioxy substituiert worden ist.
Het oder Heterocyclus bedeutet ein wahlweise substituierter fünf- oder sechsgliedriger monocyclischer Ring oder ein neun- oder zehngliedriger bicyclischer Ring, der ein bis drei Heteroatome enthält, ausgewählt aus der Gruppe aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel, die stabil und durch gewöhnliche chemische Synthese erhältlich sind. Beispielhafte Heterocyclen sind Benzofuryl, Benzimidazolyl, Benzopyranyl, Benzothienyl, Furyl, Imidazolyl, Indolinyl, Morpholinyl, Piperidinyl, Piperazinyl, Pyrrolyl, Pyrrolidinyl, Tetrahydropyridinyl, Pyridinyl, Thiazolyl, Thienyl, Chinolinyl, Isochinolinyl und Tetra- und Perhydrochinolinyl und -isochinolinyl. Jede zugängliche Kombination von bis zu drei Substituenten an dem Het-Ring, wie z. B. jene oben für Alkyl definierten, die durch chemische Synthese erhältlich sind und stabil sind, liegen im Schutzumfang dieser Erfindung.
Gewisse Radikalgruppen werden hierin abgekürzt. t-Bu bezieht sich auf das tertiäre Butylradikal, Boc bezieht sich auf das t-Butyloxycarbonylradikal, Fmoc bezieht sich auf das Fluorenylmethoxycarbonylradikal, Ph bezieht sich auf das Phenylradikal, Cbz bezieht sich auf das Benzyloxycarbonylradikal, Bn bezieht sich auf das Benzylradikal, Me bezieht sich auf Methyl, Et bezieht sich auf Ethyl, Ac bezieht sich auf Acetyl, Alk bezieht sich auf C_1-4Alkyl, Nph bezieht sich auf 1- oder 2-Naphthyl und cHex bezieht sich auf Cyclohexyl. Tet bezieht sich auf 5-Tetrazolyl.
Gewisse Reagenzien werden hierin abgekürzt. DCC bezieht sich auf Dicyclohexylcarbodiimid, DMAP bezieht sich auf Dimethylaminopyridin, EDC bezieht sich auf 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimid, Hydrochlorid, HOBt bezieht sich auf 1-Hydroxybenzotriazol, THF bezieht sich auf Tetrahydrofuran, DIEA bezieht sich auf Diisopropylethylamin, DEAD bezieht sich auf Diethylazodicarboxylat, PPh₃ bezieht sich auf Triphenylphosphin, DIAD bezieht sich auf Diisopropylazodicarboxylat, DME bezieht sich auf Dimethoxyethan, DMF bezieht sich auf Dimethylformamid, NBS bezieht sich auf N-Bromsuccinimid, Pd/C bezieht sich auf Palladium auf einem Kohlenstoffkatalysator, PPA bezieht sich auf Polyphosphorsäure, DPPA bezieht sich auf Diphenylphosphorylazid, BOP bezieht sich auf Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphoniumhexafluorphosphat, HF bezieht sich auf Flusssäure, TEA bezieht sich auf Triethylamin, TFA bezieht sich auf Trifluoressigsäure, PCC bezieht sich auf Pyridiniumchlorchromat.
Allgemein werden die Verbindungen der Formel (I) zubereitet durch zur Reaktion bringen in der Anwesenheit von EDC und HOBT einer Verbindung der Formel (II) mit einer Verbindung der Formel (III):
worin R¹, R², R³, R⁴ und X wie in Formel (I) definiert sind, wobei jede reaktive funktionelle Gruppe geschützt ist;
und danach Entfernen aller Schutzgruppen und wahlweise Bilden eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes.
Insbesondere werden die Verbindungen der Formel (I) durch die in Schema I beschriebenen allgemeinen Verfahren zubereitet.
Schema I
Reagenzien und Bedingungen: (a) PhSO₂Cl, Pyridin, t-BuOH; (b) N-Bromsuccinamid, Benzoylperoxid, CH₂Cl₂; (c) 40 % CH₃NH₂ in H₂O; (d) (CH₃CO)₂O, (i-Pr)₂NEt, CH₂Cl₂; (e) H₂, 10 % Pd/C, MeOH; (f) TFA, CH₂Cl₂; (g) 1-Methyl-2-(methylaminomethyl)indol, EDC, HOBt·H₂O, (i-Pr)₂NEt, DMF.
Im Handel erhältliche 3-Methyl-4-nitrobenzoesäure (I-1) wird an der Carboxylsäurefunktionalität mit einer geeigneten Schutzgruppe geschützt, z. B. durch eine tertiäre Butyl-(t-Bu-)Gruppe, um I-2 zu liefern. Die Verwendung von Schutzgruppen, um eine reaktive Funktionalität zu maskieren, ist Fachleuten wohl bekannt und andere Schutzgruppen werden in Standardnachschlagewerken aufgelistet, wie z. B. Greene "Protective Groups in Organic Synthesis" (veröffentlicht durch Wiley-Interscience). Die Benzylposition wird unter radikalen Bedingungen unter Verwendung von N- Bromsuccinamid (NBS) und dem Radikalinitiator Benzoylperoxid bromiert, wodurch I-3 geliefert wird. Halogenierung reaktiver Positionen, wie z. B. die Benzylposition von I-2, ist wohl bekannt. Nucleophile Substitution des Bromids wird mit einem Überschuss an wässrigem Methylamin bewerkstelligt, z. B. 40 % Methylamin in Wasser, wodurch das Benzylamin I-4 bereitgestellt wird. Acylierung des überhängenden Stickstoffs wird mit einem geeigneten Acylierungsreagens, wie einem Acylhalid oder einem Säureanhydrid, bewerkstelligt, um N-Acyl-substituierte Derivate zu liefern. Zum Beispiel kann der Benzylstickstoff mit Essigsäureanhydrid acyliert werden, um das Amidderivat I-5 zu liefern. Die Arylnitroverbindung I-5 wird unter Hydrogenierungsbedingungen in der Anwesenheit einer katalytischen Menge von Palladiummetall auf aktiviertem Kohlenstoff (Pd/C) zu dem Amin I-6 umgewandelt. Aromatische Nitrogruppen können durch eine Anzahl von Verfahren reduziert werden, welche die Verwendung von Metallen einschließen, und beispielhafte Prozeduren können in Standardchemietexten gefunden werden, wie z. B. "Reductions in Organic Chemistry" veröffentlicht durch die (American Chemical Society). Der t-Butylester wird entfernt, um die Carboxylsäurefunktionalität aufzudecken, mit einem geeigneten sauren Reagens, wie Trifluoressigsäure (TFA), um I-7 zu ergeben. Andere Standardverfahren für die Entfernung einer t-Butyl-Schutzgruppe werden beschrieben durch Green (siehe oben). Das Carboxylsäurederivat wird dann zu dem Amid I-8 durch Reaktion mit einem aktivierenden Mittel und einer geeigneten Aminart umgewandelt. Zum Beispiel wird saures I-7 zu einer aktivierten Form durch Reaktion mit EDC und HOBt umgewandelt und die aktivierte Form wird nachfolgend mit dem Amin-[1-methyl-2-(methylaminomethyl)indol] in einem geeigneten Lösungsmittel wie DMF, CH₂Cl₂ oder CH₃CN zur Reaktion gebracht. In Abhängigkeit davon, ob eine Säureneutralisierung erforderlich ist, kann eine zugefügte Base wie Triethylamin (Et₃N), Diisopropylethylamin ((i-Pr)₂NEt) oder Pyridin verwendet werden.
Es sind viele weitere Verfahren für die Umwandlung einer Carboxylsäure zu einem Amid bekannt und können in Standardnachschlagewerken, wie z. B. "Compendium of Organic Synthetic Methods", Band I – VI (veröffentlicht von Wiley-Interscience), oder Bodansky, "The Practice of Peptide Synthesis" (veröffentlicht vom Springer-Verlag) gefunden werden, die hierin durch Bezugnahme eingeschlossen werden.
Amidkopplungsreagenzien werden hierin verwendet, um Reagenzien zu bezeichnen, die verwendet werden können, um Peptidbindungen zu bilden. Typische Kopplungsverfahren nutzen Carbodiimide, aktivierte Anhydride und Ester und Acylhalide. Reagenzien, wie z. B. EDC, DCC, DPPA, PPA, BOP-Reagens, HOBt, N-Hydroxysuccinimid und Oxalylchlorid sind typisch.
Typischerweise wird das Amin über seine freie Aminogruppe an ein geeignetes Carboxylsäuresubstrat unter Verwendung eines geeigneten Carbodiimidkopplungsmittels, wie N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) gekoppelt, wahlweise in der Anwesenheit von Katalysatoren, wie z. B. 1-Hydroxybenzotriazol (HOBt) und Dimethylaminopyridin (DMAP). Andere Verfahren, wie die Bildung von aktivierten Estern, Anhydriden oder sauren Haliden der freien Carboxylgruppe eines geeignet geschützten sauren Substrats und die nachfolgende Reaktion mit dem freien Amin, wahlweise in der Anwesenheit einer Base, sind ebenfalls geeignet. Zum Beispiel wird eine Benzoesäure in einem wasserfreien Lösungsmittel, wie Methylenchlorid oder Tetrahydrofuran (THF), in der Anwesenheit einer Base, wie N-Methylmorpholin, DMAP oder einem Trialkylamin, mit Isobutylchlorformat behandelt, um das "aktivierte Anhydrid" zu bilden, das nachfolgend mit dem freien Amin zur Reaktion gebracht wird.
Saure Additionssalze der Verbindungen werden auf eine Standardweise in einem geeigneten Lösungsmittel aus der elterlichen Verbindung und einem Überschuss einer Säure, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Flusssäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Äpfelsäure, Bernsteinsäure oder Methansulfonsäure, zubereitet. Gewisse Verbindungen bilden innere Salze oder Zwitterionen, die akzeptierbar sein können. Kationische Salze werden durch Behandlung der elterlichen Verbindung mit einem Überschuss eines alkalischen Reaktionsmittels wie einem Hydroxid, Carbonat oder Alkoxid behandelt, welche das geeignete Kation enthalten; oder mit einem geeigneten organischen Amin. Kationen, wie Li⁺, Na⁺, K⁺, Ca⁺⁺, Mg⁺⁺ und NH₄ ⁺ sind spezifische Beispiele von in pharmazeutisch annehmbaren Salzen vorhandenen Kationen.
Diese Erfindung stellt ebenfalls eine pharmazeutische Zusammensetzung bereit, die eine Verbindung gemäß der Formel (I) und einen pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoff umfasst. Demgemäß können die Verbindungen der Formel (I) bei der Herstellung eines Medikamentes verwendet werden. Pharmazeutische Zubereitungen der Verbindungen der Formel (I), zubereitet wie hierin zuvor beschrieben, können als Lösungen oder lyophilisierte Pulver für die parenterale Verabreichung formuliert werden. Pulver können durch die Zugabe eines geeigneten Verdünnungsmittels oder eines anderen pharmazeutisch annehmbaren Trägerstoffes vor der Verwendung rekonstituiert werden. Die flüssige Formulierung kann eine gepufferte, isotonische, wässrige Lösung sein. Beispiele geeigneter Verdünnungsmittel sind normale isotonische Salzlösung, 5 % Standarddextrose in Wasser oder gepufferte Natrium- oder Ammoniumacetatlösung. Solch eine Formulierung ist besonders geeignet für die parenterale Verabreichung, kann jedoch ebenfalls für die orale Verabreichung oder in einem Inhalationsgerät oder Vernebelungsgerät mit einer einzustellenden Dosis zum Einatmen verwendet werden. Es kann wünschenswert sein, Hilfsmittel, wie Polyvinylpyrrolidon, Gelatine, Hydroxycellulose, Akaziengummi, Polyethylenglykol, Mannitol, Natriumchlorid oder Natriumcitrat, hinzuzufügen.
Alternativ dazu können diese Verbindungen verkapselt, zu Tabletten verpresst oder in eine Emulsion oder einen Sirup für die orale Verabreichung zubereitet werden. Pharmazeutisch annehmbare feste oder flüssige Trägerstoffe können hinzugefügt werden, um die Zusammensetzung zu verbessern oder zu stabilisieren oder um die Zubereitung der Zusammensetzung zu erleichtern. Feste Trägerstoffe schließen Stärke, Lactose, Calciumsulfatdihydrat, Terra alba, Magnesiumstearat oder Stearinsäure, Talkum, Pektin, Akaziengummi, Agar oder Gelatine ein. Flüssige Trägerstoffe schließen Sirup, Erdnussöl, Olivenöl, Salzsäure und Wasser ein. Die Trägerstoffe können ebenfalls ein Material zur verzögerten Freisetzung, wie Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat alleine oder mit einem Wachs, einschließen. Die Menge der festen Trägerstoffe variiert, wird jedoch bevorzugt zwischen ungefähr 20 mg bis ungefähr 1 g pro Dosiseinheit betragen. Die pharmazeutischen Zubereitungen werden gemäß den gewöhnlichen Techniken der Pharmakologie hergestellt werden, einschließlich Vermahlen, Mischen, Granulieren und Verpressen, wenn notwendig, für Tablettenformen; oder Mahlen, Mischen und Einfüllen für Hartgelatinekapselformen. Wenn ein flüssiger Trägerstoff verwendet wird, wird die Zubereitung in der Form eines Sirups, Elixiers, einer Emulsion oder einer wässrigen oder nicht-wässrigen Suspension sein. Solch eine flüssige Formulierung kann direkt p.o. verabreicht werden oder kann in eine Weichgelatinekapsel eingefüllt werden.
Für die rektale Verabreichung können die Verbindungen dieser Erfindung ebenfalls mit Hilfsmitteln, wie Kakaobutter, Glycerin, Gelatine oder Polyethylenglykol, kombiniert werden und zu einem Suppositorium gegossen werden.
Für die topische Verabreichung können die Verbindungen dieser Erfindung mit Verdünnungsmitteln kombiniert werden, um die Form von Salben, Gelen, Pasten, Cremes, Pudern oder Sprays anzunehmen. Die Zusammensetzungen, die Salben, Gele, Pasten oder Cremes sind, enthalten z. B. als Verdünnungsmittel tierische und pflanzliche Fette, Wachse, Paraffine, Stärke, Tragant, Cellulosederivate, Polyethylenglykole, Silikone, Bentonite, Kieselsäure, Talkum und Zinkoxid oder Mischungen dieser Substanzen. Die Zusammensetzungen, die Puder oder Sprays sind, enthalten als Verdünnungsmittel z. B. Lactose, Talkum, Kieselsäure, Aluminiumhydroxid, Calciumsilikat und Polyamidpuder oder Mischungen dieser Substanzen. Zusätzlich sind für die topische ophthalmologische Verabreichung die typischen Trägerstoffe Wasser, Mischungen von Wasser und mit Wasser mischbare Lösungsmittel, wie z. B. niedrige Alkanole oder Pflanzenöle, und wasserlösliche, nicht-toxische Polymere, wie z. B. Cellulosederivate, wie Methylcellulose.
Die hierin beschriebenen Verbindungen sind Inhibitoren von Fab I und sind nützlich für die Behandlung von bakteriellen Infektionen. Zum Beispiel sind diese Verbindungen nützlich für die Behandlung bakterieller Infektionen, wie z. B. Infektionen der oberen Atemwege (z. B. Otitis media, bakterielle Tracheitis, akute Epiglottitis, Thyroiditis), der unteren Atemwege (z. B. Empyem, Lungenabszess), des Herzens (z. B. infektiöse Endocarditis), des Magen-Darm-Traktes (z. B. sekretorische Diarrhöe, Milzabszess, retroperitonealer Abszess), des ZNS (z. B. zerebraler Abszess), des Auges (z. B. Blepharitis, Conjunctivitis, Keratitis, Endophthalmitis, preseptale und orbitale Cellulitis, Darcrocystitis), der Nieren und des Harntraktes (z. B. Epididymitis, intrarenaler und perineraler Abszess, toxisches Schocksyndrom), der Haut (z. B. Impetigo, Folliculitis, Hautabszess, Cellulitis, Wundinfektion, bakterielle Myositis) und des Knochens und der Gelenke (z. B. septische Arthritis, Osteomyelitis). Ebenfalls können die Verbindungen dieser Erfindung nützlich sein als Antipilzmittel. Zusätzlich können die Verbindungen in Kombination mit bekannten Antibiotika nützlich sein.
Die Verbindungen dieser Erfindung werden dem Patienten in einer Weise verabreicht, so dass die Konzentration des Arzneimittels ausreichend ist, um bakterielle Infektionen zu behandeln. Die die Verbindung enthaltende pharmazeutische Zusammensetzung wird in einer oralen Dosis von zwischen ungefähr 10 mg bis ungefähr 1000 mg verabreicht, die auf einmal eingenommen wird oder etliche Male am Tag, in einer Weise, die in Übereinstimmung steht mit dem Zustand des Patienten. Vorzugsweise würde die orale Dosis ungefähr 50 mg bis ungefähr 500 mg betragen, obwohl die Dosis in Abhängigkeit von dem Alter, Körpergewicht und den Symptomen des Patienten variiert werden kann. Für die Akuttherapie wird die parenterale Verabreichung bevorzugt. Eine intravenöse Infusion der Verbindung der Formel (I) in 5 % Dextrose in Wasser oder normaler Salzlösung oder eine ähnliche Formulierung mit geeigneten Hilfsstoffen ist am wirksamsten, obwohl eine intramuskuläre Bolusinjektion ebenfalls nützlich ist. Der genaue Spiegel und das Verfahren, mit welchem die Verbindungen verabreicht werden, wird leicht durch einen Fachmann bestimmt.
Die Verbindungen können in einem von etlichen biologischen Tests getestet werden, um die Konzentration der Verbindung zu bestimmen, die erforderlich ist, um eine gegebenen pharmakologische Wirkung zu haben.
Klonierung von S.-aureus-FabI:
DasfabI-Gen wurde aus der chromosomalen DNS des S-aureus-Stammes WCUH29 unter Verwendung der Polymerasekettenreaktion kloniert. Amplifikation wurde unter Verwendung von Taq-DNS-Polymerase (BRL) und den folgenden Primern durchgeführt:
5'-CGCCTCGAGATGTTAAATCTTGAAAACAAAACATATGTC-3' und
5'-CGCGGATCCAATCAAGTCAGGTTGAAATATCCA-3' (XhoI- und BamHI-Stellen sind unterstrichen). Das resultierende Fragment wurde dann mit XhoI und BamHI verdaut und wurde in den mit XhoI und BamHI verdauten Expressionsvektor pET-16b (Novagen), ligiert, wodurch pET-His₁₀-fabI hergestellt wurde. Die Gensequenz vonfabI wurde durch automatisiertes zyklisches Sequenzieren unter Verwendung einer Maschine von Applied Biosystems, Modell 377, bestätigt. Die unmarkierte Version von pET-fabI wurde konstruiert durch Verdauen von pET-His₁₀-fabI mit NcoI und NdeI, um ein 97 bp langes Fragment zu entfernen, welches den His-10-Anhang, die Faktor-Xa-Spaltungsstelle und die ersten 8 Aminosäuren von FabI kodiert, und indem es mit einem Linker ersetzt wurde, der die ersten 8 Aminosäuren von FabI kodiert, plus einem Glycinrest zwischen dem Initiator Methionin und dem Lysin an Position 2. Dieses Plasmid wurde pET-fabI genannt. Der Linker wurde hergestellt durch Annealing der folgenden zwei Oligonucleotide:
5'-CATGGGCTTAAATCTTGAAAACAAAACA-3' und
5'-TATGTTTTGTTTTTCAAGATTTAAGCC-3'. Die Linkersequenz in pET-fabI wurde bestätigt durch Didesoxysequenzieren. Es wurde nur natives FabI für die Beurteilung der Verbindung verwendet. Für die Überproduktion von nativem FabI wurde das Plasmid pET-fabI in BL21(DE3)-Zellen (Novagen) transformiert, um den Stamm BL21(DE3):pET-fabI zu bilden.
Aufreinigung von S.-aureus-FabI
S-aureus-FabI wurde als lösliches Protein zu 10 % vom Gesamtzellprotein exprimiert, wobei 400 g Zellen aus einer 15-Liter-Fermentation in Tryptonphosphatmedium wiedergewonnen wurden. Die Zellen wurden lysiert und die Probe wurde zentrifugiert. Der resultierende Überstand wurde filtriert und aufgereinigt unter Verwendung von drei aufeinander folgenden Chromatographiesäulen: Ionenaustausch-(Sourse-15K-), Dye-Affinity-(Blue-Sepharose-) und Größenausschlusschromatographiesäulen (Superose 12). Nach jeder Säule wurden die FabI enthaltenden Fraktionen vereinigt, aufkonzentriert und hinsichtlich Reinheit und biologischer Aktivität überprüft.
Klonieren von E.-coli-FabI:
Ein PCR-Fragment der richtigen Größe für E.-coli-FabI wurde mit PCR aus chromosomaler DNS aus E. coli amplifiziert, subkloniert in den TOPO-TA-Klonierungsvektor und bestätigt durch Kolonie-PCR- und Restriktionsendonucleaseanalyse. Das mutmaßliche E.-coli-FabI-PCR-Fragment wurde in den Expressionsvektor pBluePet subkloniert. Der FabI-Klon wurde in den E.-coli-Stamm BL21(DE3) transformiert. Expressionsstudien in kleinem Maßstab zeigen eine überexprimierte Proteinbande mit dem richtigen Molekulargewicht (ungefähr 28 kDa) für E.-coli-FabI, die deutlich sichtbar ist nach Coomassie-Färbung der SDS-PAGE-Gele. DNS-Sequenzieren der E.-coli-FabI-Expressionskonstrukte zeigte, dass keine Fehler ersichtlich waren. N-terminales Aminosäuresequenzieren bestätigte, dass die überexprimierte Proteinbande E.-coli-FabI ist.
Aufreinigung von E.-coli-FabI
E.-coli-FabI wurde als lösliches Protein zu 15 % des Gesamtzellproteins exprimiert, wobei 120 g Zellen aus einer 3-Liter-Fermentation in Schwenkkolben in modifizierter Terrific-Broth wiedergewonnen wurden. Die Zellen wurden lysiert und die Probe wurde zentrifugiert. Der resultierende Überstand wurde filtriert und aufgereinigt unter Verwendung von drei aufeinander folgenden Chromatographiesäulen: Ionenaustausch (Sourse 15K), Dye-Affinity (Blue Sepharose) und Größenausschluss (Superose 12). Nach jeder Säule wurden die FabI enthaltenden Fraktionen vereinigt, aufkonzentriert und hinsichtlich Reinheit und biologischer Aktivität überprüft.
S-aureus-FabI-Enzyminhibitionstest (NADH):
Tests wurden in Mikrotiterplatten mit halber Oberfläche mit 96 Vertiefungen durchgeführt. Verbindungen wurden in 50 μl Testmischungen beurteilt, die 100 mM NaADA, pH 6,5 (ADA = N-[2-Acetamido]-2-iminodiessigsäure), 4 % Glycerol, 0,25 mM Crotonoyl-CoA, 1 mM NADH und eine geeignete Verdünnung von S-aureus-FabI enthielten. Inhibitoren wurden typischerweise über den Bereich von 0,01 bis 10 μM variiert. Der Verbrauch an NADH wurde für 20 Minuten bei 30 °C überwacht, indem der Änderung in der Absorption bei 340 nm gefolgt wurde. Anfangsgeschwindigkeiten wurden aus einer Exponentialanpassung der nicht linearen Verlaufskurven abgeschätzt, repräsentiert durch die Steigung der Tangente bei t = 0 Minuten. IC₅₀-Werte wurden aus einer Anpassung der Anfangsgeschwindigkeiten an ein Standard-4-Parameter-Modell abgeschätzt und werden typischerweise als der Mittelwert ± S.D. von Doppelbestimmungen berichtet. Triclosan, ein im Handel erhältliches antibakterielles Mittel und Inhibitor von FabI, wird laufend in sämtlichen Tests als eine Positivkontrolle eingeschlossen. Verbindungen dieser Erfindung haben IC₅₀-Werte von ungefähr 2,0 Mikromolar bis ungefähr 0,15 Mikromolar.
S-aureus-FabI-Enzyminhibitionstest (NADPH):
Tests wurden in Mikrotiterplatten mit halber Oberfläche mit 96 Vertiefungen durchgeführt. Verbindungen wurden in 150 μl Testmischungen beurteilt, die 100 mM NaADA, pH 6,5 (ADA = N-[2-Acetamido]-2-iminodiessigsäure), 4 % Glycerol, 0,25 mM Crotonoyl-CoA, 50 μM NADPH und eine geeignete Verdünnung von S-aureus-FabI enthielten. Inhibitoren wurden typischerweise über dem Bereich von 0,01 bis 10 μM variiert. Der Verbrauch an NADPH wurde für 20 Minuten bei 30 °C überwacht, indem der Änderung in der Absorption bei 340 nm gefolgt wurde. Anfangsgeschwindigkeiten wurden aus einer Exponentialanpassung der nicht linearen Verlaufskurven abgeschätzt, repräsentiert durch die Steigung der Tangente bei t = 0 Minuten. IC₅₀-Werte wurden aus einer Anpassung der Anfangsgeschwindigkeiten an ein Standard-4-Parameter-Modell abgeschätzt und werden typischerweise berichtet als der Mittelwert ± S.D. von Doppelbestimmungen. Triclosan, ein im Handel erhältliches antibakterielles Mittel und Inhibitor von FabI, wird laufend in sämtlichen Tests als eine Positivkontrolle eingeschlossen.
E.-coli-FabI-Enzyminhibitionstest:
Tests wurden in Mikrotiterplatten mit halber Oberfläche mit 96 Vertiefungen durchgeführt. Verbindungen wurden in 150 μl Testmischungen beurteilt, die 100 mM NaADA, pH 6,5 (ADA = N-[2-Acetamido]-2-iminodiessigsäure), 4 % Glycerol, 0,25 mM Crotonoyl-CoA, 50 μM NADH und eine geeignete Verdünnung von E.-coli-FabI enthielten. Inhibitoren wurden typischerweise über dem Bereich von 0,01 bis 10 μM variiert. Der Verbrauch an NADH wurde für 20 Minuten bei 30 °C überwacht, indem der Änderung in der Absorption bei 340 nm gefolgt wurde. Anfangsgeschwindigkeiten wurden aus einer Exponentialanpassung der nicht linearen Verlaufskurven abgeschätzt, repräsentiert durch die Steigung der Tangente bei t = 0 Minuten. IC₅₀-Werte wurden aus einer Anpassung der Anfangsgeschwindigkeiten an ein Standard-4-Parameter-Modell abgeschätzt und werden typischerweise als der Mittelwert ± S.D. von Doppelbestimmungen berichtet. Triclosan, ein im Handel erhältliches antibakterielles Mittel und Inhibitor von FabI, wird laufend in sämtlichen Tests als eine Positivkontrolle eingeschlossen. Verbindungen dieser Erfindung haben IC₅₀-Werte von ungefähr 4,0 Mikromolar bis ungefähr 0,15 Mikromolar.
Zubereitung und Aufreinigung von Crotonoyl-ACP
Die Reaktionen enthielten 5 mg/ml E.-coli-apo-ACP, 0,8 mM Crotonoyl-CoA (Fluka), 10 mM MgCl₂ und 30 μM ACP-Synthase von S. pneumoniae in 50 mM NaHEPES, pH 7,5. Die Mischung wurde sanft auf einem Magnetrührer bei 23 °C für 2 Stunden vermischt und die Reaktion wurde durch die Zugabe von 15 mM EDTA beendet. Die Reaktionsmischung wurde durch ein 0,2-Mikronfilter (Millipore) filtriert und wurde auf eine MonoQ-Säule (Pharmacia) aufgetragen, die mit 20 mM Tris-Cl, pH 7,5, äquilibriert worden war. Die Säule wurde mit Puffer gewaschen, bis sämtliches nicht anhaftendes Material entfernt worden war (wie durch UV-Nachweis beobachtet) und das Crotonoyl-ACP wurde mit einem linearen Gradienten von 0 bis 400 mM NaCl eluiert.
S.-aureus-FabI-Enzyminhibitionstest unter Verwendung von Crotonoyl-ACP:
Tests wurden in Mikrotiterplatten mit halber Oberfläche mit 96 Vertiefungen durchgeführt. Verbindungen wurden in 150 μl Testmischungen beurteilt, die 100 mM NaADA, pH 6,5 (ADA = N-(2-Acetamido)-2-iminodiessigsäure), 4 % Glycerol, 25 μM Crotonoyl-ACP, 50 μM NADPH, und eine geeignete Verdünnung von S.-aureus-FabI (annähernd 20 nM) enthielten. Inhibitoren werden typischerweise über dem Bereich von 0,01 bis 10 μM variiert. Der Verbrauch von NADPH wird für 20 Minuten bei 30 °C überwacht, indem der Änderung in der Absorption bei 340 nm gefolgt wurde. Anfangsgeschwindigkeiten werden aus einer linearen Anpassung der Verlaufskurven abgeschätzt. IC₅₀-Werte werden aus einer Anpassung der Anfangsgeschwindigkeiten an ein Standard-4-Parameter-Modell (Gleichung 1) abgeschätzt und werden typischerweise als der Mittelwert ± S.D. von Doppelbestimmungen berichtet. Der anscheinende Ki-Wert (Ki(app)) wird aus der Gleichung 2 berechnet, unter der Annahme, dass die Inhibition mit Crotonoyl-ACP kompetitiv ist. v = Bereich/(1+[I]/IC50)s + Hintergrund Gleichung 1 Ki(app) = IC50/(1+[S]/Ks) Gleichung 2
Test der antimikrobiellen Aktivität
Die antimikrobielle Gesamtzellaktivität wurde durch Mikroverdünnung der Nährlösung unter Verwendung des von dem National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) in dem Dokument M7-A4 "Methods for Dilution Susceptibility Tests for Bacteria that Grow Aerobically" bestimmt. Die Verbindung wurde in doppelten Reihenverdünnungen untersucht, die sich von 0,06 bis 64 mcg/ml erstreckten. Testorganismen wurden aus den folgenden Laborstämmen ausgewählt: Staphylococcus aureus Oxford, Staphylococcus aureus WCUH29, Streptococcus pneumoniae ERY2, Streptococcus pneumoniae 1629, Streptococcus pneumoniae N 1387, Enterococcus faecalis 7, Enterococcus faecalis 7, Haemophilus influenzae Q1, Haemophilia influenzae NEMC1, Moraxella Catarrhalis 1502, Escherichia coli 7623 AcrABEFD+, Escherichia coli 120 AcrAB-, Escherichia coli MG1655, Escherichia coli MG1658. Die inhibitorische Minimumkonzentration (MIC) wurde als die niedrigste Konzentration der Verbindung, welche das sichtbare Wachstum inhibierte, bestimmt. Ein Spiegellesegerät wurde verwendet, um bei der Bestimmung des MIC-Endpunktes zu unterstützen.
Ein Fachmann würde jede Verbindung mit einer MIC von weniger als 256 μg/ml als eine mögliche Leitverbindung ansehen. Vorzugsweise haben die in den antimikrobiellen Untersuchungen der vorliegenden Erfindung verwendeten Verbindungen MIC-Werte von weniger als 128 μg/ml. Am bevorzugtesten haben diese Verbindungen MIC-Werte von weniger als 64 μg/ml.
Von den folgenden Beispielen ist beabsichtigt, dass sie in keiner Weise den Schutzumfang dieser Erfindung begrenzen, sondern bereitgestellt werden, um zu erläutern, wie die Verbindungen dieser Erfindung gemacht und verwendet werden. Viele andere Ausführungsbeispiele werden für Fachleute leicht ersichtlich sein.
BEISPIELE
Allgemeines
Magnetische Protonenkernresonanz-(¹H-NMR-)Spektren wurden bei 300 MHz aufgenommen und chemische Verschiebungen werden in Teile pro Million (δ) feldabwärts von dem inneren Standard Tetramethylsilan (TMS) berichtet. Abkürzungen für NMR-Daten sind wie folgt: s = Singulett, d = Dublett, t = Triplett, q = Quartett, m = Multiplett, dd = Dublette von Dubletten, dt = Dublette von Tripletten, app = scheinbar, br = breit. J gibt die in Hertz gemessene NMR-Kopplungskonstante an. CDCl₃ ist Deuteriochloroform, DMSO-d₆ ist Hexadeuteriodimethylsulfoxid und CD₃OD ist Tetradeuteriomethanol. Massenspektren wurden unter Verwendung von Elektrospray-(ES-)Ionisierungstechniken gewonnen. Elementaranalysen wurden von Quantitative Technologies Inc., Whitehouse, NJ, durchgeführt. Schmelzpunkte wurden auf einem Thomas-Hoover-Schmelzpunktgerät gewonnen und sind nicht korrigiert. Sämtliche Temperaturen werden in Grad Celsius angegeben. Silica-Gel-GF-Dünnschichtplatten von Analtech und Silica-Gel-60-F-254-Dünnschichtplatten von E. Merck wurden für Dünnschichtchromatographie verwendet. Flash-Chromatographie wurde auf einem Kieselgel-60-(230-400-Mesh)-Kieselsäuregel von E. Merck durchgeführt. Analytische HPLC wurde auf Chromatographiesystemen von Beckman durchgeführt. Präparative HPLC wurde unter Verwendung von Chromatographiesystemen von Gilson durchgeführt. ODS bezieht sich auf einen mit Octadecylsilyl derivatisierten Kieselsäuregel-Chromatographieuntergrund. YMC ODSAQ^® ist ein ODS-Chromatographieuntergrund und ist eine registrierte Marke von YMC Co. Ltd., Kyoto, Japan. PRP-1^® ein polymerer (Styrol-Divinylbenzol)-Chromatographieuntergrund und ist eine registrierte Marke von Hamilton Co., Reno, Nevada. Celite^® ist ein Filterhilfsstoff, zusammengesetzt aus mit Säure gewaschener Diatomeenkieselsäure, und ist eine registrierte Marke von Manville Corp., Denver, Colorado.
Zubereitung 1
Zubereitung von 1-Methyl-2-(methylaminomethyl)indol
a) Ethyl-1-methylindol-2-carboxylat
NaH (60 %ige Dispersion in Mineralöl, 8,0 g, 200,5 mmol) wurde mit Hexanen gewaschen und wurde dann in trockenem DMF (530 ml) suspendiert. Festes Ethylindol-2-carboxylat (25,3 g, 133,7 mmol) wurde portionsweise über 5 bis 10 Minuten hinzugefügt, wobei der Gasentwicklung ermöglicht wurde, sich zwischen den Zugaben abzusetzen. Wenn die Zugabe abgeschlossen war, wurde die gelbe Mischung für 15 Minuten gerührt und dann wurde Methyliodid (42 ml, 668,3 mmol) auf einmal hinzugefügt. Die Reaktion war exothermisch und die innere Temperatur stieg auf 40 bis 45 °C an. Nach 1 Stunde wurde die Reaktion mit 10 % NH₄Cl (100 ml) abgelöscht und auf dem Rotavap (Hochvakuum) konzentriert. Der Rückstand wurde zwischen Et₂O (500 ml) und H₂O (100 ml) verteilt und die Schichten wurden getrennt. Die Et₂O-Schicht wurde mit H₂O (100 ml) gewaschen, getrocknet (MgSO₄) und aufkonzentriert, um die Titelverbindung (27,1 g, quantitativ) als einen hellgelben Feststoff zurück zu lassen. Dieser wurde ohne weitere Aufreinigung verwendet: TLC (10 % EtOAc/Hexane) R_f = 0,39.
b) N,1-Dimethylindol-2-carboxamid
Eine Suspension aus Ethyl-1-methylindol-2-carboxylat (27,1 g, 133,3 mmol) in 40 % wässrigem CH₃NH₂ (300 ml) und MeOH (30 ml) wurde bei RT gerührt. Ein Feststoff neigte dazu, schrittweise die Kolbenwände hoch zu kriechen, und wurde periodisch mit MeOH herunter gewaschen. Der Kolben wurde fest verstöpselt, um das Material innerhalb des Kolbens zu halten. Indem die Reaktion fortschritt, löste sich der Feststoff, schließlich begann das Produkt jedoch auszufallen. Die Reaktion wurde bei RT für 3 Tage gerührt, wurde dann aufkonzentriert, um annähernd 200 ml des Lösungsmittels zu entfernen. Der verbleibende Rückstand wurde mit H₂O (300 ml) verdünnt und der Feststoff wurde durch Saugfiltration gesammelt und mit H₂O gewaschen. Trocknen bei 50 bis 60 °C in Hochvakuum beließ die Titelverbindung (23,4 g, 93 %) als einen schwach gelben Feststoff: MS (ES) m/e 189 (M+H)⁺.
c) 1-Methyl-2-(methylaminomethyl)indol
Ein 3-Liter-Dreihals-Rundbodenkolben, ausgestattet mit einem Rührer von oben, wurde mit N,1-Dimethylindol-2-carboxamid (23,4 g, 124,6 mmol) und wasserfreiem THF (170 ml) befüllt. Die Lösung wurde gerührt, während eine Lösung von LiAlH₄ in THF (1,0 M, 250 ml, 250 mmol) mittels einer Spritze hinzugefügt wurde. Gas wurde während der Zugabe der ersten 50 ml der LiAlH₄-Lösung entwickelt. Wenn die Zugabe abgeschlossen war, wurde die resultierende hellgelbe Lösung am leichten Rückfluss gekocht. Nach 24 Stunden wurde die Reaktion auf Eis gekühlt und durch die aufeinander folgende, tropfenweise Zugabe von H₂O (9,5 ml), 15 % NaOH (9,5 ml) und H₂O (28,5 ml) abgelöscht. Die Mischung wurde für 15 Minuten gerührt, wurde dann durch Celite^® filtriert und das Filterkissen wurde gründlich mit THF gewaschen. Das Filtrat wurde aufkonzentriert und der Rückstand wurde der Flash-Chromatographie auf Kieselsäuregel (10 % MeOH/CHCl₃, enthaltend 5 % konz. NH₄OH) unterzogen. Die Titelverbindung (20,2 g, 93 %) wurde als ein hellgelbes Öl gewonnen: MS (EI) m/e 175 (M+H)⁺.
Zubereitung 2
Die Zubereitung von 1-Methyl-3-(methylaminomethyl)indol
a) Ethyl-1-methylindol-3-carboxylat
Gemäß dem Vorgehen von Zubereitung 1a, mit der Ausnahme, dass Ethylindol-2-carboxylat durch Ethyl-3-indolacetat (25,3 g, 133,7 mmol) ersetzt wurde, wurde die Titelverbindung als ein hellgelber Feststoff zubereitet und ohne weitere Aufreinigung verwendet.
b) N,1-Dimethylindol-3-carboxamid
Gemäß dem Vorgehen von Zubereitung 1b, mit der Ausnahme, dass Ethyl-1-methylindol-2-carboxylat durch Ethyl-1-methylindol-3-carboxylat (27,1 g, 133,3 mmol) ersetzt wurde, wurde die Titelverbindung (23,4 g, 93 %) als ein hellgelber Feststoff zubereitet und ohne weitere Aufreinigung verwendet: MS (ES) m/e 189 (M+H)⁺.
c) 1-Methyl-3-(methylaminomethyl)indol
Gemäß dem Vorgehen von Zubereitung 1c, mit der Ausnahme, dass N,1-Dimethylindol-2-carboxamid durch N,1-Dimethylindol-3-carboxamid (23,4 g, 124,6 mmol) ersetzt wurde, wurde die Titelverbindung (20,2 g, 93 %) als ein hellgelbes Öl zubereitet: MS (ES) m/e 175 (M+H)⁺.
Zubereitung 3
Zubereitung von 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat
a) tert-Butyl-3-methyl-4-nitrobenzoat
Zu einer Pyridinlösung aus 3-Methyl-4-nitrobenzoesäure (18,1 g, 100,0 mmol) wurde bei RT Benzolsulfonylchlorid in einer Portion hinzugefügt. Nach 10 Minuten wurde wasserfreier t-Butanol (9,4 ml, 100,0 mmol) hinzugefügt und der Reaktionslösung wurde ermöglicht, für 1 Stunde zu rühren. Die resultierende Suspension wurde in Eiswasser (400 ml) gegossen und kräftig für 1 Stunde gerührt. Die hellgelbe Suspension wurde durch einen Sinterglastrichter filtriert, wobei mit H₂O gewaschen wurde. Die verbleibenden gelben Feststoffe wurden in Toluol(400 ml) gelöst, über MgSO₄ getrocknet und dann durch eine kurze Kieselsäuregelsäule unter Waschen mit Toluol filtriert. Konzentrieren der Lösung unter Vakuum (15 mm Hg) und Trocknen im Hochvakuum lieferte die Titelverbindung (22,5 g, 95 %) als einen hellgelben Feststoff: MS (ES) m/e 238 (M+H)⁺.
b) tert-Butyl-3-methylaminomethyl-4-nitrobenzoat
Zu einer gerührten Lösung aus tert-Butyl-3-methyl-4-nitrobenzoat (22,5 g, 94,9 mmol) in CH₂Cl₂ (450 ml) bei RT, enthalten in einem 1-Liter-Einhalsrundbodenkolben, wurden NBS (18,6 g, 104,4 mmol) und Benzoylperoxid (2,3 g, 9,5 mmol) hinzugefügt. Der Kolben wurde mit einem Rückflusskondensator ausgestattet und es wurde eine 150 Watt Wolframlichtquelle auf den Reaktionsansatz für 36 Stunden scheinen lassen. Die Reaktionslösung wurde mit H₂O gewaschen, über Na₂SO₄ getrocknet und unter Vakuum aufkonzentriert. Der resultierende orangefarbene Rückstand wurde in Ethylacetat gelöst und durch Kieselsäuregel filtriert (EtOAc/Hexane, 1:4). Konzentrieren auf einem Rotationsverdampfer ergab ein orangefarbenes Öl, das direkt im nächsten Schritt ohne weitere Aufreinigung verwendet wurde.
Zu dem Rohbromid in THF (150 ml) wurde 40 % wässriges CH₃NH₂ (50 ml) in einer Portion bei RT hinzugefügt. Nach 18 Stunden wurde die Reaktionslösung aufkonzentriert, um das THF zu entfernen. Die resultierende wässrige Lösung wurde mit EtOAc (2 × 200 ml) extrahiert und die vereinigten organischen Phasen wurden nacheinander mit H₂O und Lauge gewaschen. Trocknen über K₂CO₃ und Konzentrieren ergaben ein gelbes Öl, das auf Kieselsäuregel gereinigt wurde (Hexane/EtOAc, 1:1), um die Titelverbindung (19,2 g, 96 %) als einen hellgelben Feststoff zu liefern: MS (ES) m/e 267 (M+H)⁺.
c) tert-Butyl-4-amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoat
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-3-(methylaminomethyl)-4-nitrobenzoat (2,4 g, 9,0 mmol) in CH₂Cl₂ bei RT wurden Et₃N (2,52 ml, 18,0 mmol) und Essigsäureanhydrid (1,8 g, 18,0 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurde die Reaktionslösung unter Vakuum aufkonzentriert, in EtOAc (150 ml) gelöst und mit H₂O gewaschen. Die EtOAc-Lösung wurde über Na₂SO₄ getrocknet und unter Vakuum zu einem gelben Öl konzentriert. Das Öl wurde weiter unter Hochvakuum getrocknet und direkt bei dem nächsten Vorgehen verwendet.
Das Rohprodukt wurde in EtOAc (50 ml) und CH₃OH (50 ml) gelöst und in einen Parr-Hydrierkolben gegeben. Eine katalytische Menge von 10 % Pd/C wurde zu der Reaktionslösung hinzugefügt und die Inhalte wurden auf ein Parr-Schüttelgerät unter H₂ bei 345 kPa (50 psi) gestellt und für 4 Stunden geschüttelt. Die Lösung wurde durch Celite filtriert und unter Vakuum konzentriert. Aufreinigung auf Kieselsäure (Hexane/EtOAc, 1:1) lieferte die Titelverbindung (2,13 g, 85 % über zwei Schritte) als einen gebrochen weißen Feststoff: MS (ES) m/e 279 (M+H)⁺.
d) 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetatsalz
Zu einer Lösung aus t-Butyl-4-amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoat (2,13 g, 7,65 mmol) in CH₂Cl₂ (150 ml) bei RT wurde TFA (30 ml) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurde die Reaktionslösung zu einem Öl aufkonzentriert und unter Hochvakuum über Nacht getrocknet. Der resultierende Rückstand wurde mit Hexanen und Et₂O gewaschen, um die Titelverbindung (2,56 g, 7,60 mmol) als einen gebrochen weißen Feststoff zu liefern. Diese Verbindung wurde ohne weitere Aufreinigung verwendet: MS (ES) m/e 223 (M+H-TFA)⁺.
Zubereitung 4
Zubereitung von 4-Amino-3-[(N-phenylethylacetylamino)methyl]benzoesäure
a) tert-Butyl-4-nitro-3-(phenylethylamino)methylbenzoat
Rohes tert-Butyl-3-brommethyl-4-nitrobenzoat (von Zubereitung 3b) wurde in trockenem THF (50 ml) gelöst und festes NaHCO₃ (2,52 g, 30 mmol) wurde hinzugefügt. Die Mischung wurde lebhaft gerührt und Phenylethylamin (3,8 ml, 30 mmol) wurde hinzugefügt. Die Farbe der Lösung verdunkelte sich leicht zu einem tiefen Gelb. Innerhalb von etlichen Minuten wurde die Mischung sehr trübe. Nach 4 Stunden wurde die Reaktion aufkonzentriert und der Rückstand wurde zwischen H₂O (50 ml) und Et₂O (100 ml) verteilt. Die Schichten wurden getrennt und die wässrige Schicht wurde mit Et₂O (2 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Schichten wurden kombiniert, getrocknet (MgSO₄) und zu einem gelben Öl aufkonzentriert. Flash-Chromatographie auf Kieselsäuregel (20 % EtOAc/Hexane) ergab die Titelverbindung (2,86 g, 40 % für zwei Schritte) als ein gelbes Öl:
¹H NMR (250 MHz, CDCl₃) δ 8.19 (d, J = 1.7 Hz, 1 H), 7.98 (dd, J = 8.4, 1.7 Hz, 1 H), 7.90 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 7.10 – 7.40 (m, 5 H), 4.06 (s, 2 H), 2.75 – 3.00 (m, 4 H), 1 .61 (s, 9 H); MS (ES) m/e 357 (M + H)⁺.
b) tert-Butyl-3-[N-(tert-butoxycarbonyl)-N-phenylethylamino]methyl-4-nitrobenzoat
Di-tert-butyldicarbonat (2,10 g, 9,62 mmol) wurde auf einmal zu einer Lösung aus tert-Butyl-3-(phenylethylamino)methyl-4-nitrobenzoat (2,86 g, 8,02 mmol) in CHCl₃ (30 ml) bei RT hinzugefügt. Die Reaktion wurde bei RT für 2,5 Stunden gerührt und dann am Rückfluss für 0,5 Stunden. Konzentrieren und Flash-Chromatographie auf Kieselsäuregel (15 % EtOAc/Hexane) ergaben die Titelverbindung (3,70 g, quantitativ) als ein gelbes Öl:
¹H NMR (250 MHz, CDCl₃) δ 7.85 – 8.10
(m, 3 H), 7.05 – 7.40 (m, 5 H), 4.55 – 4.85 (m, 2 H), 3.35 – 3.60 (m, 2 H), 2.75 – 3.00 (m, 2 H), 1.20 – 1.80 (m, 18 H); MS (ES) m/e 479 (M + Na)⁺, 457 (M + H)⁺.
c) tert-Butyl-4-amino-3-[[N-(tert-butoxycarbonyl)-N-phenylethylamino]methyl]benzoat
Eine Mischung aus tert-Butyl-3-[[N-(tert-butoxycarbonyl)-N-phenylethylamino]methyl]-4-nitrobenzoat (2,7 g, 5,8 mmol), 10 % Pd/C (0,6 g, 0,6 mmol Pd) und EtOAc (60 ml) wurde unter H₂ (50 psi) geschüttelt. Nach 3 Stunden wurde die Mischung filtriert, um den Katalysator zu entfernen, und das Filtrat wurde zur Trockene aufkonzentriert. Flash-Chromatographie auf Kieselsäuregel (20 % EtOAc/Hexane) ergab die Titelverbindung (2,3 g, 91 %) als ein gelbes schäumendes Öl, welches sich langsam teilweise verfestigte:
¹H NMR (250 MHz, CDCl₃) δ 7.74 (dd, J = 8.4, 2.0 Hz, 1 H), 7.67 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.05 – 7.40 (m, 5 H), 6.57 (d, 7 = 8.4 Hz, 1 H), 5.00 (br s, 2 H), 430 (s, 2 H), 3.32 (app. t, 2 H), 2.69 (app. t, 2 H), 1.59 (s, 9 H), 1.46 (s, 9 H); MS (ES) m/e 449.2 (M + Na)⁺, 427.2 (M + H)⁺.
d) 4-Amino-3-[N-phenylethylaminomethyl]benzoattrifluoracetatsalz
Zu einer Lösung aus tert-Butyl-4-amino-3-[[N-(tert-butoxycarbonyl)-N-phenylethylamino]methyl]benzoat (2,3 g, 5,4 mmol) in CH₂Cl₂ (100 ml) bei RT wurde TFA (25 ml) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurde die Reaktionslösung zu einem Öl aufkonzentriert und der Rückstand wurde unter Hochvakuum über Nacht getrocknet. Der resultierende Rückstand wurde mit Hexanen und Diethylether gewaschen, um die Titelverbindung (2,7 g, 5,4 mmol) als einen gebrochen weißen Feststoff zu liefern: MS (ES) m/e 271 (M+H-2TFA)⁺.
e) 4-Amino-3-[(N-phenylethylacetylamino)methyl]benzoesäure
Zu einer gerührten Lösung aus 4-Amino-3-[N-phenylethylaminomethyl]benzoat-bistrifluoroacetatsalz (1,0 g, 2,0 mmol) in CH₂Cl₂ bei RT wurden Et₃N (1,1 ml, 7,9 mmol) und Essigsäureanhydrid (0,26 g, 2,6 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurde die Reaktionslösung unter Vakuum konzentriert, in 1 M NaOH (15 ml) gelöst und mit Hexanen gewaschen. Die wässrige Lösung wurde mit 1 M HCl neutralisiert und mit EtOAc (2 × 50 ml) extrahiert. Die EtOAc-Lösung wurde über Na₂SO₄ getrocknet und zu einem gebrochen weißen Feststoff aufkonzentriert, der ohne weitere Aufreinigung verwendet wurde: MS (ES) m/e 313 (M+H)⁺.
Zubereitung 5
Zubereitung von tert-Butvl-4-amino-3-[(N-methyl)aminomethyl)]benzoat
Eine Lösung aus t-Butyl-3-[N-(methyl)aminomethyl]-4-nitro-benzoat (12,0 g, 45,1 mmol) aus dem Vorgehen 3a in CH₃OH (50 ml) wurde in einen Parr-Hydrierkolben gegeben. Annähernd (0,50 g) 10 % Pd/C wurden zu der Reaktionslösung hinzugefügt und die Inhalte wurden auf einem Parr-Schüttelgerät unter H₂ bei 345 kPa (50 psi) für 4 Stunden geschüttelt. Die Suspension wurde durch Celite gefiltert und unter Vakuum aufkonzentriert. Das Waschen des resultierenden Rückstandes mit Et₂O lieferte ein viskoses hellgelbes Öl, das ohne weitere Aufreinigung verwendet wurde: MS (ES) m/e 237 (M+H)⁺.
Zubereitung-6
Zubereitung von 4-Amino-3-[(2-hydroxy-4,N-dimethylpentanoylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat
a) tert-Butyl-4-amino-3-[(2-hydroxy-4,N-dimethylpentanoylamino)methyl]benzoesäure
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-3-[N-(methyl)aminomethyl]-4-aminobenzoat (2,6 g, 11,0 mmol) in DMF (20 ml) bei RT wurden Diisopropylethylamin (2,9 ml, 16,9 mmol), HOBt (2,3 g, 16,9 mmol), 2-Hydroxy-4-methylpentansäure (2,04 g, 15,15 mmol) und schließlich EDC (3,24 g, 16,9 mmol) bei RT hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte auf H₂O (200 ml) gegossen und mit EtOAc (2 × 150 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) lieferten die Titelverbindung (3,50 g, 91 %) als ein hellgelbes Öl: MS (ES) m/e 351 (M+H)⁺.
b) 4-Amino-3-[(2-hydroxy-4,N-dimethylpentanoylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-4-amino-3-[(2-hydroxy-4,N-dimethylpentanoylamino)methyl]benzoesäure (3,50 g, 10,0 mmol) in CH₂Cl₂ (20 ml) bei RT wurde TFA (20 ml) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte verdampft, mit Hexanen gewaschen und unter Hochvakuum über Nacht getrocknet, um die Titelverbindung als ein orangefarbenes Öl (4,42 g, 10,8 mmol) zu liefern. Dieses Produkt wurde ohne weitere Aufreinigung verwendet: MS (ES) m/e 295 (M+H-TFA)⁺.
Zubereitung 7
Zubereitung von 4-Amino-3-[(ethoxy-N-methylcarbonylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat
a) tert-Butyl-4-amino-3-[(ethoxy-N-methylcarbonylamino)methyl]benzoat
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-3-[N-(methyl)aminomethyl]-4-aminobenzoat (2,51 g, 10,63 mmol) in CH₂Cl₂ (20 ml) bei 0 °C wurden Triethylamin (1,63 ml, 11,7 mmol) und Ethylchlorformat (1,15 g, 10,63 mmol) hinzugefügt. Der Reaktionslösung wurde ermöglicht, sich über Nacht auf RT zu erwärmen. Die Reaktionsinhalte wurden unter Vakuum konzentriert und zwischen H₂O (100 ml) und EtOAc (200 ml) verteilt. Die organische Phase wurde vereinigt, nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) lieferten die Titelverbindung (2,98 g, 91 %) als ein hellgelbes Öl: MS (ES) m/e 309 (M+H)⁺.
b) 4-Amino-3-[(ethoxy-N-methylcarbonylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-4-amino-3-[(2-hydroxy-4,N-dimethylpentanoylamino)methyl]benzoesäure (2,98 g, 9,67 mmol) in CH₂Cl₂ (20 ml) bei RT wurde TFA (20 ml) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte konzentriert, mit Hexanen gewaschen und unter Hochvakuum über Nacht getrocknet, wodurch die Titelverbindung als ein orangefarbenes Öl (3,51 g, 9,60 mmol) geliefert wurde. Dieses Produkt wurde ohne weitere Aufreinigung verwendet: MS (ES) m/e 253 (M+H-TFA)⁺.
Zubereitung 8
Zubereitung von 4-Amino-3-[(2-hydroxy-N-methylacetylamino)methyl]benzoesäure
a) tert-Butyl-4-nitro-3-[(2-hydroxy-N-methylacetylamino)methyl]benzoat
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-3-[N-(methyl)aminomethyl]-4-aminobenzoat (7,0 g, 26,3 mmol) in DMF (30 ml) bei RT wurden Diisopropylethylamin (5,0 ml, 28,9 mmol), HOBt (3,90 g, 28,9 mmol), 2-Hydroxyessigsäure (2,2 g, 28,9 mmol) und schließlich EDC (5,54 g, 28,9 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte auf H₂O (200 ml) gegossen und mit EtOAc (2 × 150 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) lieferten die Titelverbindung (7,92 g, 93 %) als ein hellgelbes Öl: MS (ES) m/e 325 (M+H)⁺.
b) tert-Butyl-4-amino-3-[(2-hydroxy-N-methylacetylamino)methyl]benzoat
Zu einer Lösung aus t-Butyl-4-nitro-3-[(2-hydroxy-N-methylacetylamino)methyl]benzoat (7,92 g, 23,15 mmol) in CH₃OH (25 ml) und EtOAc (25 ml) in einem Parr-Hydrierkolben wurde 10 % Pd/C (0,20 g) hinzugefügt. Die Inhalte wurden auf einem Parr-Schüttelgerät unter H₂ bei 345 kPa (50 psi) für 4 Stunden geschüttelt. Die Suspension wurde durch Celite filtriert, unter Vakuum aufkonzentriert und mit Et₂O gewaschen, um die Titelverbindung als einen hell-orangefarbenen Schaum zu liefern, der ohne weitere Aufreinigung verwendet wurde: MS (ES) m/e 295 (M+H)⁺.
Zubereitung 9
Zubereitung von 4-Amino-3-[(2-hydroxy-3-indol-3-yl-N-methylpropanoylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat
a) tert-Butyl-4-amino-3-[(2-hydroxy-3-indol-3-yl-N-methylpropanoylamino)methyl]benzoesäure
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-3-[N-(methyl)aminomethyl]-4-aminobenzoat (0,60 g, 2,52 mmol) aus dem Vorgehen 5 in DMF (20 ml) bei RT wurden Diisopropylethylamin (0,88 ml, 5,03 mmol), HOBt (0,37 g, 2,77 mmol), DL-3-Indolmilchsäure (0,57 g, 2,77 mmol) und schließlich EDC (0,53 g, 2,77 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte auf H₂O (100 ml) gegossen und mit EtOAc (2 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) lieferten die Titelverbindung (0,99 g, 93 %) als ein hellgelbes Öl: MS (ES) m/e 425 (M+H)⁺.
b) 4-Amino-3-[(2-hydroxy-3-indol-3-yl-N-methylpropanoylamino)methyl]benzosäuretrifluoracetat
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-4-amino-3-[(2-hydroxy-3-indol-3-yl-N-methylpropanoylamino)methyl]benzoesäure (0,99 g, 2,34 mmol) in CH₂Cl₂ (20 ml) bei RT wurde TFA (20 ml) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte verdampft, mit Et₂O gewaschen und unter Hochvakuum über Nacht getrocknet, wodurch die Titelverbindung (0,86 g, 2,34 mmol) als ein pinkfarbener Feststoff geliefert wurde. Dieses Produkt wurde ohne weitere Aufreinigung verwendet: MS (ES) m/e 223 (M+H-TFA)⁺.
Zubereitung 10
Zubereitung von 4-Amino-3-[(2-cyclopent methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat
a) tert-Butyl-4-amino-3-[(2-cyclopentyl-N-methylacetylamino)methyl]benzoesäure
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-3-[N-(methyl)aminomethyl]-4-aminobenzoat (0,55 g, 2,32 mmol) aus dem Vorgehen 5 in DMF (20 ml) bei RT wurden Diisopropylethylamin (0,81 ml, 4,64 mmol), HOBt (0,34 g, 2,55 mmol), Cyclopentanessigsäure (0,33 g, 2,55 mmol) und schließlich EDC (0,49 g, 2,55 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte auf H₂O (100 ml) gegossen und mit EtOAc (2 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) lieferten die Titelverbindung (0,75 g, 94 %) als ein hellgelbes Öl: MS (ES) m/e 348 (M+H)⁺.
b) 4-Amino-3-[(2-cyclopentyl-N-methylacetylamino)methyl]benzosäuretrifluoracetat
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-4-amino-3-[(2-cyclopentyl-N-methylacetylamino)methyl]benzoesäure (0,85 g, 2,16 mmol) in CH₂Cl₂ (20 ml) bei RT wurde TFA (20 ml) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte verdampft, mit Hexanen gewaschen und unter Hochvakuum über Nacht getrocknet, wodurch die Titelverbindung (0,63 g, 2,16 mmol) als ein orangefarbenes Öl geliefert wurde. Dieses Produkt wurde ohne weitere Aufreinigung verwendet: MS (ES) m/e 292 (M+H-TFA)⁺.
Zubereitung 11
Zubereitung von {4-Amino-3-[(methylamino)methyl]phenyl}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid
a) t-Butyl-4-nitro-3-{[(N-methyl(phenylmethoxy)carbonylamino]methyl}benzoat
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-3-[N-(methyl)aminomethyl]-4-nitrobenzoat (11,97 g, 45,0 mmol) aus dem Vorgehen 3b in DMF (100 ml) bei RT wurden Triethylamin (7,27 ml, 52,2 mmol) und N-(Benzyloxycarbonyloxy)succinamid (13,0 g, 52,2 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalt auf H₂O (200 ml) gegossen und mit EtOAc (2 × 200 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (Hexane/EtOAc, 1:1) lieferten die Titelverbindung (17,46 g, 96 %) als ein hellgelbes Öl: MS (ES) m/e 401 (M+H)⁺.
b) 4-Nitro-3-{[(N-methyl(phenylmethoxy)carbonylamino]methyl}benzoesäure
Zu einer gerührten Lösung aus t-Butyl-4-nitro-3-{[(N-methyl(phenylmethoxy)carbonylamino]methyl}benzoat (17,46 g, 43,65 mmol) in CH₂Cl₂ (100 ml) bei RT wurde TFA (50 ml) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden Reaktionsinhalte verdampft, mit Hexanen gewaschen und unter Hochvakuum über Nacht getrocknet, um die Titelverbindung (14,62 g, 42,5 mmol) als ein orangefarbenes Öl zu liefern. Dieses Produkt wurde ohne weitere Aufreinigung verwendet: MS (ES) m/e 345 (M+H)⁺.
c) N-[(2-Nitro-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methyl(phenylmethoxy)carboxamid
Zu einer gerührten Lösung aus 4-Nitro-3-{[(N-methyl(phenylmethoxy)carbonylamino]methyl}benzoesäure (4,56 g, 13,26 mmol) in DMF (20 ml) bei RT wurden Diisopropylethylamin (2,31 ml, 13,26 mmol), HOBt (1,79 g, 13,26 mmol), 1-Methyl-2-(methylaminomethyl)indol (2,1 g, 12,0 mmol) und schließlich EDC (2,54 g, 13,26 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte auf H₂O (100 ml) gegossen und mit EtOAc (2 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (Hexane/EtOAc, 1:1) lieferten die Titelverbindung (5,52 g, 92 %) als ein viskoses gelbes Öl: MS (ES) m/e 501 (M+H)⁺.
d) {4-Amino-3-[(methylamino)methyl]phenyl}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid
Zu einer Lösung aus N-[(2-Nitro-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl)phenyl}methyl]-N-methyl(phenylmethoxy)carboxamid (6,1 g, 12,2 mmol) in CH₃OH (50 ml), enthalten in einem Parr-Hydrierkolben, wurde 0,75 g 10 % Pd/C hinzugefügt. Die Inhalte wurden auf einem Parr-Schüttelgerät unter H₂ bei 345 kPa (50 psi) für 6 Stunden geschüttelt. Die Suspension wurde über Celite filtriert und unter Vakuum konzentriert. Aufreinigung auf Kieselsäure [CHCl₃/CH₃OH (enthaltend 5 % NH₄OH), 9:1] lieferte die Titelverbindung (3,40 g, 83 %) als ein viskoses gelbes Öl: MS (ES) m/e 337 (M+H)⁺.
Die folgenden Beispiele erläutern Verfahren für die Zubereitung biologisch aktiver Verbindungen dieser Erfindung aus Zwischenverbindungen, wie jene, die in den vorangegangenen Zubereitungen beschrieben worden sind.
Beispiel 1
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-phenylacetamid
a) tert-Butyl-3-[(phenylamino)methyl]-4-nitrobenzoat
Zu einer Lösung aus rohem t-Butyl-3-brommethyl-4-nitrobenzoat (2,0 g, 6,3 mmol) aus dem Vorgehen 3b in THF (25 ml) bei RT wurde Anilin (2,0 ml, 21,9 mmol) hinzugefügt. Die Reaktionsinhalte wurden konzentriert, gelöst in EtOAc und nacheinander mit 10 % wässrigem NaHCO₃ und Lauge gewaschen. Aufreinigung auf Kieselsäure lieferte die Titelverbindung (1,95 g, 94 %) als einen orangefarbenen Feststoff: MS (ES) m/e 429 (M+H)⁺.
b) {3-[(Phenylamino)methyl]phenyl-4-nitro}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl] carboxamid
Zu einer gerührten Lösung aus tert-Butyl-3-[(phenylamino)methyl]-4-nitrobenzoat (1,95 g, 4,55 mmol) in CH₂Cl₂ (20 ml) bei RT wurde TFA (20 ml) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte konzentriert, mit 4 M wässriger HCl und Dioxan (10 ml) behandelt und unter Vakuum konzentriert, wodurch ein gebräunter Feststoff geliefert wurde. Der feste Rückstand wurde mit Hexanen gewaschen und unter Hochvakuum getrocknet. Dieses Produkt wurde direkt im nächsten Schritt ohne weitere Aufreinigung verwendet.
Zu einer gerührten Lösung der obigen Verbindung in DMF (30 ml) bei RT wurden Diethylamin (1,7 ml, 12,1 mmol), 1-Methyl-2-(methylaminomethyl)indol (1,0 g, 6,0 mmol), HOBt (0,81 g, 6,0 mmol) und schließlich EDC (1,15 g, 6,0 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte auf H₂O (100 ml) gegossen und mit EtOAc (2 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (EtOAc) lieferten die Titelverbindung (2,33 g, 92 %) als einen festen gelben Schaum: MS (ES) m/e 429 (M+H)⁺.
c) N-[(2-Nitro-5-[N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl]phenyl)methyl]-N-phenylacetamid
Zu einer Lösung aus {3-[(Phenylamino)methyl]phenyl-4-nitro}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid (0,75 g, 1,8 mmol) in CHCl₃ (10 ml) bei 45 °C wurde Essigsäureanhydrid (0,38 ml, 4,2 mmol), gefolgt von Pyridin (0,30 ml, 3,8 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurde die Reaktionslösung unter Vakuum konzentriert, in EtOAc gelöst und nacheinander mit 1 M HCl und Lauge gewaschen. Trocken über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (EtOAc) lieferten die Titelverbindung (0,82 g, 92 %) als einen gelben Schaum: MS (ES) m/e 493 (M+Na)⁺.
d) N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-phenylacetamid
Zu einer Lösung aus N-[(2-Nitro-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-phenylacetamid (0,82 g, 1,7 mmol) in CH₃OH (50 ml) in einem Parr-Hydrierkolben wurde 10 % Pd/C (0,50 g) hinzugefügt. Die Inhalte wurden auf einem Parr-Schüttelgerät unter H₂ bei 345 kPa (50 psi) für 4 Stunden geschüttelt. Die Reaktionssuspension wurde durch Celite filtriert und unter Vakuum aufkonzentriert. Reinigung auf Kieselsäure (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) lieferte die Titelverbindung (0,51 g, 68 %) als einen gebrochen weißen Feststoff: MS (ES) m/e 441 (M+H)⁺.
Beispiel 2
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methylacetamid
Zu einer gerührten Lösung aus 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat (0,73 g, 2,17 mmol) aus Vorgehen 3 in DMF (20 ml) bei RT wurden Diisopropylethylamin (0,83 ml, 4,78 mmol), HOBt (0,32 g, 2,39 mmol), 1-Methyl-2-(methylaminomethyl)indol (0,40 g, 2,39 mmol) und schließlich EDC (0,45 g, 2,39 mmol) hinzugefügt. Nach 12 Stunden wurden die Reaktionsinhalte auf H₂O (100 ml) gegossen und mit EtOAc (2 × 100 ml) extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und nacheinander mit H₂O (100 ml) und Lauge gewaschen. Trocknen über Na₂SO₄ und Aufreinigung auf Kieselsäure (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) lieferten die Titelverbindung (0,73 g, 89 %) als einen hellgelben Feststoff: MS (ES) m/e 379 (M+H)⁺.
Beispiel 3
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-(2-phenylethyl)acetamid
Gemäß dem Vorgehen in Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 4-Amino-3-[(N-phenylethylacetylamino)methyl]benzoesäure (0,60 g, 1,92 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (0,83 g, 92 %) als ein gelber Feststoff nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) zubereitet: MS (ES) m/e 469 (M+H)⁺.
Beispiel 4
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy--4-methyl-N-methylpentanamid
Gemäß dem Vorgehen in Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 4-Amino-3-[(2-hydroxy-4,N-dimethylpentanoylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat (2,1 g, 5,1 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (2,06 g, 90 %) als ein gelber Schaum nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) zubereitet: MS (ES) m/e 451 (M+H)⁺.
Beispiel 5
Zubereitung von {4-Amino-3-[(ethoxy-N-methylcarbonylamino)methyl]phenyl}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid
Gemäß dem Vorgehen von Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 4-Amino-3-[(ethoxy-N-methylcarbonylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat (0,75 g, 2,05 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (0,75 g, 90 %) als ein gebräunter Schaum nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) zubereitet: MS (ES) m/e 409 (M+H)⁺.
Beispiel 6
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy-N-methylacetamid
Gemäß dem Vorgehen von Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 4-Amino-3-[(2-hydroxy-N- methylacetylamino)methyl]benzoesäure (1,0 g, 2,84 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (0,99 g, 88 %) als ein gebrochen weißer Feststoff nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) zubereitet: MS (ES) m/e 395 (M+H)⁺.
Beispiel 7
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-3-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methylacetamid
Gemäß dem Vorgehen von Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat (0,44 g, 1,31 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (0,45 g, 92 %) als ein gebrochen weißer Feststoff nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) zubereitet: MS (ES) m/e 379 (M+H)⁺.
Beispiel 8
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy-3-indol-3-yl-N-methylpropanamid
Gemäß dem Vorgehen von Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 4-Amino-3-[(2-hydroxy-3-indol-3-yl-N-methylpropanoylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat (0,41 g, 1,12 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (0,46 g, 78 %) als ein gebrochen weißer Feststoff nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) zubereitet: MS (ES) m/e 524 (M+H)⁺.
Beispiel 9
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-cyclopentyl-N-methylacetamid
Gemäß dem Vorgehen von Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 4-Amino-3-[(2-cyclopentyl-N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat (1,05 g, 3,60 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (1,45 g, 90 %) als ein gebrochen weißer Feststoff nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (Hexane/EtOAc, 1:2) zubereitet: MS (ES) m/e 448 (M+H)⁺.
Beispiel 10
Zubereitung von {4-Amino-3-{[(4-hydroxyphenyl)-N-methylcarbonylamino]methyl}phenyl)-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid
Gemäß dem Vorgehen von Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 4-Hydroxybenzoesäure (0,23 g, 1,64 mmol) ersetzt worden ist und dass 1-Methyl-2-(methylaminomethyl)indol durch {4-Amino-3-[(methylaminomethyl]phenyl}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid (0,50 g, 1,49 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (0,62 g, 92 %) als ein gebrochen weißer Feststoff nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) zubereitet: MS (ES) m/e 457 (M+H)⁺.
Beispiel 11
Zubereitung von N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methyl-3-(phenylsulfonyl)propanamid
Gemäß dem Vorgehen von Beispiel 2, mit der Ausnahme, dass 4-Amino-3-[(N-methylacetylamino)methyl]benzoesäuretrifluoracetat durch 3-(Phenylsulfonyl)propionsäure (0,35 g, 1,64 mmol) ersetzt worden ist und dass 1-Methyl-2-(methylaminomethyl)indol durch {4-Amino-3-[(methylaminomethyl]phenyl}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid (0,50 g, 1,49 mmol) ersetzt worden ist, wurde die Titelverbindung (0,72 g, 91 %) als ein gebrochen weißer Feststoff nach Chromatographie auf Kieselsäuregel (CHCl₃/CH₃OH, 95:5) zubereitet: MS (ES) m/e 533 (M+H)⁺.
Beispiel 12
Zusammensetzung einer parenteralen Dosierungseinheit
Eine Zubereitung, die 20 mg der Verbindung von Beispiel 1 als ein steriles trockenes Pulver enthält, wird wie folgt zubereitet: 20 mg der Verbindung werden in 15 ml destilliertem Wasser gelöst. Die Lösung wird unter sterilen Bedingungen in eine 25ml-Mehrfachdosisampulle filtriert und lyophilisiert. Das Pulver wird durch die Zugabe von 20 ml 5 % Dextrose in Wasser (D5W) für die intravenöse oder intramuskuläre Injektion rekonstituiert. Die Dosierung wird dabei durch das Injektionsvolumen bestimmt. Eine anschließende Verdünnung kann durch die Zugabe eines abgemessenen Volumens dieser Dosiseinheit zu einem anderen Volumen D5W für die Injektion hergestellt werden oder es kann eine abgemessene Dosis zu einem anderen Mechanismus hinzugefügt werden, um das Arzneimittel zuzubereiten, wie in einer Flasche oder einem Beutel für die IV-Tropfeninfusion oder ein anderes Injektions-Infusions-System.
Beispiel 13
Zusammensetzung einer oralen Dosierungseinheit
Eine Kapsel für die orale Verabreichung wird zubereitet durch Mischen und Mahlen von 50 mg der Verbindung von Beispiel mit 75 mg Lactose und 5 mg Magnesiumstearat. Das resultierende Pulver wird gesiebt und in eine Hartgelatinekapsel eingefüllt.
Beispiel 14
Zusammensetzung einer oralen Dosierungseinheit
Eine Tablette für die orale Verabreichung wird zubereitet durch Mischen und Granulieren von 20 mg Sucrose, 150 mg Calciumsulfatdihydrat und 50 mg der Verbindung von Beispiel 1 mit einer 10 %igen Gelatinelösung. Die feuchten Granulae werden gesiebt, getrocknet, mit 10 mg Stärke, 5 mg Talkum und 3 mg Stearinsäure vermischt und zu einer Tablette verpresst.
Die obige Beschreibung offenbart vollständig, wie die vorliegende Erfindung gemacht und verwendet wird. Die vorliegende Erfindung ist jedoch nicht auf die hierin oben beschriebenen besonderen Ausführungsbeispiele beschränkt, sondern schließt alle Modifikationen davon innerhalb des Schutzumfangs der folgenden Ansprüche ein.

Claims

Verbindung nach Formel (I):
worin R¹ C_1-4Alkyl ist; R² C_1-4Alkyl ist; R³ C_1-4Alkyl, -C_0-4Alkyl-Ar oder -C_0-4Alkyl-Het ist; R⁴ -C_1-4Alkyl, -(CH₂)_1-4OH, -OC_1-4Alkyl, -SC_1-4Alkyl, -N(C_1-4Alkyl)₂, -C_0-4Alkyl-Ar, -C_0-4Alkyl-Het, -C_0-4Alkyl-C_3-6Cycloalkyl, -CH(OH)-CH₂-R* oder -(CH₂)_1-3SO₂Ar ist; R* C_1-4Alkyl, Ar oder Het ist; X H, C_1-4Alkyl, OR', SR', CN, N(R')₂, CH₂(N(R')₂, NO₂, CF₃, CO₂R', CON(R')₂, COR', NR'C(O)R', F, Cl, Br, I oder -S(O)_rCF₃ ist; R' H, C_1-6Alkyl oder -C_0-6Alkyl-Ar ist; und r 0, 1 oder 2 ist; worin Ar Aryl bedeutet und Het Heterocyclus bedeutet, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verbindung nach Anspruch 1 der Formel (Ia):
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, in der R³ -C_1-4Alkyl oder -C_0-2Alkyl-Ph ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, in der R⁴ -C_1-4Alkyl, -(CH₂)OH, -OC_1-4Alkyl, -C_0-2Alkyl-Ph, -C_0-2Alkyl-C_3-6Cycloalkyl, -CH(OH)-CH₂-R* oder -(CH₂)₂SO₂Ph ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon;
Verbindung, die: N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methylacetamid; N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-(2-phenylethyl)acetamid; N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy-4-methyl-N-methylpentanamid; {4-Amino-3-[(ethoxy-N-methylcarbonylamino)methyl]phenyl}-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid; N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy-N-methylacetamid; N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-3-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methylacetamid; N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-phenylacetamid; N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-2-hydroxy-3-indol-3-yl-N-methylpropanamid; (4-Amino-3-{[(4-hydroxyphenyl)-N-methylcarbonylamino]methyl}phenyl)-N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carboxamid; N-[(2-Amino-5-{N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl]carbamoyl}phenyl)methyl]-N-methyl-3-(phenylsulfonyl)propanamid; oder N-[(2-Amino-5- {N-methyl-N-[(1-methylindol-2-yl)methyl] carbamoyl}phenyl)methyl]-2-cyclopentyl-N-methylacetamid; oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 5 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 5 oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon zur Verwendung als Medikament.
Verwendung einer Verbindung, wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert wurde oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon in der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von bakteriellen Infektionen.
Verwendung einer Verbindung wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert wurde, oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon in der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Erkrankungen, in denen die Inhibition von Fab I indiziert ist.
Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I), wie sie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert sind, wobei das Verfahren das Umsetzen einer Verbindung der Formel (II) mit einer Verbindung der Formel (III):
worin R¹, R², R³, R⁴ und X wie in Formel (I) definiert sind, wobei alle reaktiven funktionellen Gruppen in der Anwesenheit von EDC und HOBT geschützt werden; und anschließendes Entfernen aller Schutzgruppen und optional das Bilden eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes umfasst.