DE60001924T2 - Verfahren zur herstellung von anthocyanosid-enthaltenden extrakten von roten früchten - Google Patents

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Description

  • Die Erfindung bezieht sich auf ein Reinigungsverfahren eines Anthozyane enthaltenden Extrakts aus roten Früchten. Sie betrifft auch den durch das Verfahren gewonnenen Extrakt sowie seine Verwendung.
  • In der weiteren Beschreibung und in den Patentansprüchen werden mit «roten Früchten» insbesondere die Holunderbeeren (Sambucus nigra), die schwarzen Johannisbeeren (Ribes nigrum), die roten Johannisbeeren (Ribes rubrum), die Brombeeren (Morus nigra), die Trauben (Vitis vinifera) und im engeren Sinne die Heidelbeeren (Vaccinium myrtillus und andere Arten der Gattung Vaccinium) bezeichnet, ohne dass damit eine Einschränkung verbunden wäre.
  • Allgemein bezeichnet man mit "Anthozyanen" ein Heterosid aus der Verbindung eines anthozyanen Aglykons mit einer oder mehreren Monosaccharidgruppen. Die Anthozyane gibt es in Form von Monomeren, aber auch als Diniere, Oligomere und Polymere, je nach wachsendem Polymerisierungsgrad. Die Anthozyan-Anthozyan-Verbindung erfolgt zwischen dem C4 des C-Kerns und dem C8 des A-Kerns.
  • Im vorliegenden Fall bezeichnen die Anthozyane die monomeren Strukturen, deren Molekulargewicht zwischen 400 und 600 Dalton schwankt. Einige Dimerformen, deren Molekulargewicht ca. 1000 Dalton erreichen kann, können ebenfalls präsent sein.
  • Die roten Früchte sind reich an Anthozyane genannten Pigmenten, deren Wirkung auf die Feinzirkulation des Blutes nachgewiesen wurde, insbesondere als Vitamin P-Faktor, Antioxidans, Wirkstoff gegen Thrombozytenaggregation und gegen freie Radikale. Diese Eigenschaften fanden Anerkennung für die Behandlung von Störungen des Retinakreislaufs, bei der Behandlung von funktionellen Störungen der Kapillarfragilität und der gefäßbedingten Sehstörungen. Sie werden auch von dem Pharmaunternehmen LEURQUIN MEDIOLANUM in pharmazeutischen Spezialitäten, die unter den Markennamen DIFRAREL® 100 und DIFRAREL® E vertrieben werden, für die Behandlung der Nachtblindheit und der Kurzsichtigkeit genutzt.
  • Für die Extraktion von Anthozyanen aus Pflanzen oder Pflanzenteilen wurden mehrere Verfahren vorgeschlagen.
  • Das Patent FR-A-2 299 385 beschreibt ein Verfahren für die Extraktion von Anthozyanen aus Traubentrester mit der eigentlichen Extraktionsstufe und der anschließenden Konzentration des gewonnenen Extrakts.
  • Nach diesem Verfahren besteht die Extraktionsstufe aus einer Behandlung des Tresters mit einer sauren wässrigen Extraktionslösung (pH = 2) unter Zusatz von erwärmtem SO2 (zwischen 40 und 55°C). Die dabei entstehende klare Lösung enthält Anthozyane, aber auch Säuren, Salze, Polyphenole und Proteine; sie wird anschließend konzentriert. Dazu wird sie auf ein Harz geladen. Das Harz wird dann mit einer Elutionslösung, die wahlweise ein Keton, ein Amid oder eine wässrige Lösung aus einem Alkali- oder Erdalkalihydroxid enthält, eluiert. Die Anthozyane werden schließlich vom erzielten Eluat getrennt.
  • Aus den beschriebenen Beispielen, insbesondere aus Beispiel 1, geht hervor, dass man aus einem Extrakt mit 120 mg Anthozyane pro Liter nach der Verharzung einen Extrakt mit 800 mg Anthozyanen pro Liter erhält, d. h. einen 6,6 mal höher konzentrierten Extrakt.
  • Aber auch wenn das eingesetzte Verfahren die Anthozyankonzentration im Extrakt deutlich erhöht, sagt die Konzentration nichts über eine Reinigung der Anthozyane aus.
  • Außerdem und vor allem führt die anfängliche Extraktion der Anthozyane durch ein mit SO2 versetztes Lösungsmittel zu einer Fixierung der Anthozyane am Harz in veränderter Form und demzufolge zu einer möglichen Beeinträchtigung der physikalischchemischen Eigenschaften des Anthozyans und damit seiner Aktivität.
  • In jüngerer Zeit wurde in der EP-A-412 300 ein Verfahren für die Extraktion mit anschließender Reinigung von Anthozyanen aus Heidelbeeren vorgeschlagen.
  • Bei der eigentlichen Extraktion werden gefrorene Produkte mit einer wässrigen Methanollösung in Kontakt gebracht, wobei jeder Extraktionsschritt vier Stunden dauert.
  • Das gewonnene Extrakt wird dann gereinigt. Dazu wird es zunächst im Vakuum konzentriert, und das erzielte Konzentrat wird dann mit Natriumbisulfit versetzt. Es entsteht dann eine Bindung zwischen den Anthozyanen und den Bisulfitionen. Nach dreistündigem Rühren und Neutralisierung durch Zugabe einer Natriumhydroxidlösung wird das erhaltene Extrakt auf eine Säule eines nicht ionogenen Polymerharzes geladen; dann wird die Säule mit gereinigtem Wasser eluiert. Das Eluat wird dann durch konzentrierte Salzsäure (HCl) auf pH = 1 gesäuert. Um das SO2 zu beseitigen, wird Stickstoff durch die gewonnene Lösung geblasen, um den Anthozyane-Bisulfit-Komplex zu trennen. Diese Trennung führt zur Freisetzung von Schwefeldioxid. Die wässrige Lösung wird dann mit Hilfe von Butanol extrahiert. Die Butanollösung wird mit 14 Volumenanteilen Ethylacetat versetzt. Nach einer Nacht Ruhe wird das Präzipitat bei 40°C getrocknet.
  • Wie zuvor erfordert dieses Verfahren auch hier den Einsatz von Bisulfitionen, die zur Bildung eines Anthozyan-Bisulfit-Komplexes führen, durch den die physikalisch-chemischen Eigenschaften der gesuchten Anthozyane beeinträchtigt werden können.
  • Außerdem führt der Rückgriff auf Stickstoff für die Regeneration der Anthozyane zur Freisetzung von Schwefeldioxid, das Umweltprobleme hervorrufen und aufwendige Abfallbehandlungen erfordern kann.
  • Zu betonen ist auch die Vielzahl der verwendeten Lösungsmittel (Methanol, Butanol, Ethylacetat) und die aufwendigen chemischen Behandlungen bei diesem Extraktionsverfahren: Einsatz von SO2, NaOH, Säuerung auf pH = 1 durch konzentriertes HCl und Gebrauch von Stickstoff.
  • Aus der FR 2641983 ist ein Verfahren für die Extraktion von farbgebenden Stoffen bekannt, im engeren Sinne ein Extraktionsverfahren der Anthozyane von Fruchtbeeren (Heidelbeeren, schwarze Johannisbeeren oder Preiselbeeren), die insbesondere den Einsatz eines superkritischen, schwach polaren Lösungsmittels erfordern, das später destilliert wird. Der Extraktionsrest wird mit den üblichen physikalischen Mitteln gereinigt, insbesondere durch Chromatographie auf einer Polyamidsäule bei anschließender Elution mit Hydrochlormethanol.
  • Die derart gewonnenen Anthozyane, insbesondere diejenigen der Heidelbeere, sind Arzneimittelwirkstoffe.
  • Ausgehend von diesem Stand der Technik betrifft die Erfindung ein Verfahren für die Reinigung eines Extrakts aus Anthozyane enthaltenden roten Früchten, das geeignet ist, die folgenden Probleme zu lösen:
    • – Verzicht auf den Einsatz von Additiven des Typs SO2, von denen die Struktur und die physikalisch-chemischen Eigenschaften der extrahierten Anthozyane verändert werden können;
    • – Vermeidung jeglicher Freisetzung von Schadstoffen und insbesondere von Schwefeldioxid;
    • – Steigerung der Anthozyankonzentration des gewonnenen gereinigten Extrakts;
    • – Durchführung einer Reinigung ohne strukturelle Änderung der Anthozyane;
    • – Maximale Reduzierung der im gereinigten Extrakt enthaltenen Restlösungsmittelmenge;
    • – Gewinnung eines Extrakts, in dem die Restlösungsmittel eindeutig identifiziert sind, wobei deren geringe Menge die ICH- Vorgaben (International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use) erfüllt.
  • Um dies zu erreichen, ist der Gegenstand der Erfindung ein Verfahren zur Reinigung eines Anthozyane enthaltenden Extrakts aus roten Früchten, wobei:
    • – der besagte Extrakt einer wässrigen Lösung zugesetzt wird;
    • – anschließend der wässrige Extrakt bis auf eine homogene Temperatur unter 15°C abgekühlt wird;
    • – nach dem Filtern des wässrigen Extrakts das gewonnene Permeat entnommen und auf ein zu Riesenmolekülen vernetztes Polymerharz geladen wird;
    • – das Harz anschließend mit entmineralisiertem Wasser gespült wird;
    • – das erzielte Harz dann mit einer alkoholischen Elutionslösung herausgelöst wird;
    • – das gewonnene Eluat konzentriert und dann getrocknet wird.
  • Auf diese Art und Weise, unter Verzicht auf Lösungsmittel mit SO2-Zusatz, führt das unter "sanften" Bedingungen durchgeführte Reinigungsverfahren der Erfindung zu keinerlei Änderung der nativen physikalisch-chemischen Eigenschaften, d. h. zu keiner Denaturierung der extrahierten Anthozyane. Dieses Merkmal kann durch die Überdeckung der chromatographischen HPLC-Profile in Abhängigkeit von der Rückhaltezeit des Extrakts einerseits und der roten Ausgangsfrucht andererseits bestätigt werden.
  • Außerdem ist festzustellen, dass die Kombination der einzelnen Verfahrensschritte, insbesondere die Kühlstufe mit anschließender Filtration und Aufharzung, auf ganz und gar überraschende Weise dazu führt, dass der extrahierte Anthozyantiter im letztlichen Trockenextrakt beträchtlich zunimmt. Bei einer Temperatur des wässrigen Extrakts von mehr als 15°C kommt es nicht zu einer ausreichenden Reinigung der Anthozyane.
  • In einer ersten Ausführungsform der Erfindung erfolgt das Reinigungsverfahren an einem alkoholischen Extrakt aus roten Früchten, der in folgenden Schritten gewonnen wird:
    • – man trennt zunächst das Fruchtfleisch von den ganzen roten Früchten;
    • – man bringt dann das Fruchtfleisch in Kontakt mit einer alkoholischen Extraktionslösung;
    • – man trennt die Festphase von der Flüssigphase;
    • – man lässt abschließend den Hauptanteil des in der Flüssigphase enthaltenen Restalkohols im Vakuum verdampfen, um ein alkoholisches Konzentrat zu erzielen.
  • Vorteilhafterweise stammt das bei der alkoholischen Extraktion eingesetzte Lösungsmittel aus der Gruppe, zu der Methanol, Ethanol, Butanol, Aceton gehören.
  • In der Praxis erfolgt die alkoholische Extraktion bei Raumtemperatur in mindestens zwei aufeinanderfolgenden Schritten von jeweils 20 Minuten. Das Lösungsmittel wird dann verdampft. Außerdem kann die Extraktion der Anthozyane nicht allein aus dem Fruchtfleisch, sondern aus ganzen Früchten vorgesehen werden.
  • Die Trennung der festen Phase und der Flüssigphase kann zudem durch beliebige bekannte Mittel, insbesondere durch Zentrifugieren, erfolgen.
  • Nach einer zweiten Ausführungsform der Erfindung erfolgt das Reinigungsverfahren aus Extrakten von im Handel erhältlichen roten Früchten oder aus dem Extrakt von vorgereinigten Anthozyanen, die jeweils in flüssiger Form oder als Pulver vorliegen. In diesem Fall kann der Fruchtextrakt oder der vorgereinigte Extrakt vor dem Reinigungsschritt wahlweise mit Alkohol, insbesondere Methanol, oder mit Wasser versetzt werden.
  • In dem erfindungsgemäßen Reinigungsverfahren erfolgt das Abkühlen des Rotfruchtextrakts vorteilhafterweise, bis die Temperatur des Extrakts homogen ist und weniger als 10°C - vorzugsweise weniger als 5°C - beträgt, wobei diese Temperatur mindestens zwölf Stunden lang aufrechterhalten wird.
  • Die Filtration des wässrigen Extrakts kann ihrerseits mit einem Zellulosefilter, einem rostfreien Metalldrahtgewebe mit einer Trennschwelle zwischen 0 und 100 Mikrometer oder Gleichwertigem erfolgen.
  • Wie bereits, gesagt, wird das Permeat aus der Filtrationsstufe dann auf ein adsorbierendes, zu Riesenmolekülen vernetztes Harz geladen.
  • Um den Titer und die Anthozyankonzentration im Endextrakt noch weiter zu steigern, ist die alkoholische Lösung, mit der die Anthozyane aus dem Harz eluiert werden, vorzugsweise eine wässrige Ethanollösung, wobei die Ethanolkonzentration zwischen 10 und 90%, vorteilhafterweise bei 40%, liegt.
  • Das gewonnene Eluat wird unter auf ca. 30°C kontrollierter Temperatur konzentriert und dann durch Gefriertrocknen oder auch durch Zerstäubung getrocknet, um ein Pulver zu erhalten.
  • Im Übrigen ist festzustellen, dass das erhaltene Pulver eine sehr geringe Restmenge an alkoholischem Lösungsmittel enthält, weniger als 3000 ppm bei Methanol (wenn die Reinigung ausgehend von einem Methanolextrakt erfolgt) und weniger als 2000 ppm bei Ethanol. Diese Lösungsmittelreste werden durch GC identifiziert und sind die einzigen, die im Endpulver enthalten sind.
  • Die Erfindung bezieht sich auch auf den Extrakt, der durch das vorstehend beschriebene Reinigungsverfahren gewonnen werden kann.
  • Außerdem kann der Extrakt aufgrund seines hohen Originalanthozyantiters und seines geringen Gehalts an Lösungsmittelresten für kosmetische, pharmazeutische und diätetische Verbindungen verwendet werden. Er kann auch in nutrazeutischen Verbindingen, für funktionelle Nahrungsmittel, angereicherte Nahrungsmittel und Nahrungsmittelzusätze genutzt werden.
  • Die Erfindung und die davon abzuleitenden Vorteile sind besser aus den nachfolgenden Ausführungsbeispielen mit den beigefügten Zeichnungen zu ersehen. Es zeigen:
    • – die 1 ist ein Vergleich eines HPLC-Chromatogramms des nach Beispiel 1 gewonnenen Endextrakts mit demjenigen der Frucht und demjenigen des ursprünglichen Fruchtfleischs;
    • – die 2 ist ein identischer Vergleich ausgehend von dem nach Beispiel 2 gewonnenen Extrakt.
  • Die beiden folgenden Beispiele beziehen sich auf die Extraktion von Anthozyanen aus Heidelbeerfruchtfleisch.
  • Beispiel 1
  • 1/ Trennung des Fruchtfleischs
  • Auf beliebige bekannte Weise werden 125 Kilo Heidelbeeren aus Litauen ausgepresst. Nach dem Auspressen wird das Fruchtfleisch (52,24 Kilo) vom Saft (71,48 Kilo) getrennt.
  • 2/ Extraktion
  • Man unternimmt dann nacheinander zwei Extraktionen aus 35 Kilo Heidelbeerfruchtfleisch mit jeweils 210 Liter Methanol (d. h. 1 Volumenanteil Fruchtfleisch auf 6 Volumenanteile Extraktionslösung) während zwanzig Minuten bei Raumtemperatur. Am Ende der Extraktion wird das Fruchtfleisch ausgepresst, um den Methanolanteil zurückzugewinnen. Das Methanol wird dann im Vakuum verdampft, wobei die Temperatur des Extrakts dann 22°C beträgt.
  • 3/ Reinigung
  • Man versetzt dann das Konzentrat mit 70 Litern entmineralisiertem Wasser (d. h. 1 Volumenanteil
  • Fruchtfleisch für 2 Volumenanteile entmineralisiertes Wasser).
  • Der derart gewonnene Flüssigextrakt wird dann eine Nacht lang bei einer Temperatur unter 15°C gelagert.
  • Die Lösung wird dann auf einem rostfreien Metalldrahtgewebe (50 Mikrometer) gefiltert.
  • Dann wird ein zu Riesenmolekülen vernetztes Harz, z. B. das von ROHM & HAAS vertriebene Harz XAD761, mit dem flüssigen Extrakt geladen. In der Praxis werden 25 Liter Harz verwendet.
  • Wenn das Harz geladen ist, wird es mit 105 Litern entmineralisiertem Wasser ausgespült (d. h. 1 Volumenanteil Fruchtfleisch für 3 Volumenanteile entmineralisiertes Wasser).
  • Das Harz wird dann mit 200 Liter Ethanol 40 eluiert.
  • Das Eluat wird dann im Vakuum konzentriert, worauf die Temperatur des Extrakts zwischen 26 und 31°C liegt.
  • Um ein Pulver zu erhalten, wird das Eluat dann zerstäubt.
  • Der Anthozyangehalt des Endextrakts beträgt 50.46 % des Endgewichts, d. h. 53.50% Gewichtsanteil Trockenmasse.
  • Diese Ergebnisse werden im Verhältnis zum Cyanidinchlorid, dem betreffenden Standard für die HPLC-Analyse (Artikelnr. 0909S, Lieferant: Extrasynthese), ausgedrückt.
  • Die Lösungsmittelrestmenge im Endextrakt beträgt:
    • – 0 ppm bei Butanol,
    • – weniger als 3000 ppm bei Methanol,
    • – weniger als 2000 ppm bei Ethanol.
  • Auf der 1 sind die Ergebnisse eines HPLC-Chromatogramms des Endextrakts (1) gegenüber demjenigen der ursprünglichen Frucht (2) und des Fruchtfleischs (3) dargestellt.
  • Wie dieses Chromatogramm zeigt, ist das Profil der extrahierten Anthozyane identisch mit demjenigen der im Fruchtfleischs bzw. in der ursprünglichen Frucht vorhandenen nativen Anthozyane, was vermuten lässt, dass die physikalisch-chemischen Eigenschaften der Anthozyane bei dem Extraktions- und Reinigungsverfahren nicht beeinträchtigt werden.
  • Man kann daher annehmen, dass das gewonnene Extrakt, dessen Anthozyanzusammensetzung mit derjenigen der Originalfrucht identisch ist, alle anerkannten Qualitäten der Frucht bewahrt.
  • Beispiel 2
  • Vorgehen wie im Beispiel 1, diesmal mit einer zweiten, aus Polen stammenden Heidelbeercharge.
  • Festzustellen ist, dass die erzielte Anthozyankonzentration 49,1% Gewichtsanteile des Endextrakts, d. h. 52,01% Gewichtsanteile Trockenmasse, ausmacht.
  • Die Lösungsmittelrestmenge beträgt:
    • – 0 ppm bei Butanol,
    • – weniger als 3000 ppm bei Methanol,
    • – weniger als 2000 ppm bei Ethanol.
  • Wie zuvor, zeigt die 2 das HPLC-Chromatogramm des Fruchtfleischs, der Frucht und des gewonnenen Extrakts.
  • Es ist gleichfalls festzustellen, dass das Profil der im Extrakt (4) enthaltenen Anthozyane demjenigen der Anthozyane im Fruchtfleisch (5) und in der Frucht (6) entspricht.
  • Vergleichsbeispiel 3
  • In diesem Beispiel wurden verschiedene Merkmale von handelsüblichen Heidelbeerextrakten, nämlich:
    • – ein von der Firma INDENA unter dem Namen ANTHOCYANOSIDE vertriebener Heidelbeerextrakt
    • – und ein zweiter Heidelbeerextrakt, der von der Firma VINYALS unter dem Namen BILBERRY DRY EXTRACT (25% Anthozyane) vertrieben wird,
  • mit einem nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Exrakt verglichen.
  • Beurteilte Kriterien:
    • – die durch HPLC berechnete Anthozyankonzentration gegenüber einem Cyanidinchlorid-Standard;
    • – die Lösungsmittelrestmenge im Endextrakt.
  • Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengefasst.
    Figure 00140001
  • Wie die Tabelle zeigt, erhält man mit dem erfindungsgemäß gewonnen Extrakt im Vergleich mit den handelsüblichen Extrakten eine sehr hohe Anthozyankonzentration.
  • Festzuhalten ist auch eine sehr geringe Restmenge an organischem Lösungsmittel.
  • Letztlich: während in den Spezifikationen der INDENA- und VINYALS-Extrakte keine Aussagen zum chromatographischen Profil gemacht werden, ist festzustellen, dass das Chromatographieprofil des erfindungsgemäßen Extrakts mit demjenigen der Originalfrucht deckungsgleich ist.
  • Die Vorteile der Erfindung im Hinblick auf die Wiedergabe der nativen Fruchtanthozyane im Extrakt gehen aus der Beschreibung deutlich hervor.
  • Hinzuweisen ist insbesondere auf den Gebrauch herkömmlicher Extraktionslösungsmittel, die im Laufe des Verfahrens kontinuierlich eliminiert werden, so dass im gewonnen Extrakt nur noch Spuren von Restlösungsmitteln vorliegen.
  • Ebenso erfordert das Verfahren keine Zusatzmittel des Typs SO2 zu den Extraktionslösungsmitteln oder den Einsatz von chemischen Verbindungen, deren Beseitigung sehr schwierig ist und eine Reihe von Umweltproblemen aufwirft.
  • Ansonsten ist festzuhalten, dass die Anthozyane während des Verfahrens nicht denaturiert werden und die Zusammensetzung der Originalfrucht bewahren, wodurch das gesamte Wirkspektrum erhalten bleibt.
  • Zu unterstreichen ist schließlich die Anthozyankonzentration des gewonnenen Extrakts, die bei 50% Trockenmassegewicht liegt.

Claims (9)

  1. Verfahren zur Reinigung eines Anthozyane enthaltenden Extrakts aus roten Früchten, wobei: – der besagte Extrakt einer wässrigen Lösung zugesetzt wird; – anschließend der wässrige Extrakt bis auf eine homogene Temperatur unter 15°C abgekühlt wird; – nach dem Filtern des wässrigen Extrakts das erzielte Permeat gewonnen und auf ein zu Riesenmolekülen vernetztes Polymerharz geladen wird; – das Harz anschließend mit entmineralisiertem Wasser gespült wird; – das erzielte Harz mit einer alkoholischen Elutionslösung herausgelöst wird; – das erzielte Eluat konzentriert und dann getrocknet wird.
  2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man den wässrigen Extrakt bis auf eine homogene Temperatur unter 10°C abkühlen lässt.
  3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Extrakt aus roten Früchten, an dem die Reinigung vorgenommen wird, ein alkoholischer Extrakt ist, der in folgenden Schritten erzielt wird: – man trennt zunächst das Fruchtfleisch von den ganzen roten Früchten; – man bringt dann das Fruchtfleisch in Kontakt mit einer alkoholischen Extraktionslösung; – man trennt die Festphase von der Flüssigphase; – man lässt abschließend den Hauptanteil des in der Flüssigphase enthaltenen Restalkohols im Vakuum verdampfen, um ein alkoholisches Konzentrat zu erzielen.
  4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das bei der alkoholischen Extraktion eingesetzte Lösungsmittel aus der Gruppe ausgewählt wird, zu der Methanol, Ethanol, Butanol, Aceton gehören.
  5. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Reinigung an einem vorgereinigten Extrakt erfolgt, der in Pulverform oder in flüssiger Form vorliegt.
  6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die alkoholische Elutionslösung eine wässrige Ethanollösung ist, wobei die Ethanolkonzentration zwischen 10 und 90% liegt.
  7. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass die alkoholische Elutionslösung eine wässrige Ethanollösung ist, wobei die Ethanolkonzentration 40% beträgt.
  8. Gereinigter Extrakt, der aus dem Verfahren nach einem der Ansprüche 1–7 hervorgegangen ist.
  9. Verwendung des Extrakts nach Anspruch 8 für die Zubereitung einer pharmazeutischen, kosmetischen, diätetischen, nutrazeutischen Zusammensetzung in funktionellen Nahrungsmitteln, angereicherten Nahrungsmitteln und Nahrungsmittelzusätzen.
DE60001924T 1999-02-15 2000-02-07 Verfahren zur herstellung von anthocyanosid-enthaltenden extrakten von roten früchten Revoked DE60001924T2 (de)

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