DE4431174A1 - Nachweisverfahren für tumorspezifische mRNA - Google Patents

Nachweisverfahren für tumorspezifische mRNA

Info

Publication number
DE4431174A1
DE4431174A1 DE4431174A DE4431174A DE4431174A1 DE 4431174 A1 DE4431174 A1 DE 4431174A1 DE 4431174 A DE4431174 A DE 4431174A DE 4431174 A DE4431174 A DE 4431174A DE 4431174 A1 DE4431174 A1 DE 4431174A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
mrna
cdna
tumor
hpv
primers
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
DE4431174A
Other languages
English (en)
Inventor
Doeberitz Magnust Von D Knebel
Stefan Woerner
Jeaninne Lacroix
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Deutsches Krebsforschungszentrum DKFZ
Original Assignee
Deutsches Krebsforschungszentrum DKFZ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Deutsches Krebsforschungszentrum DKFZ filed Critical Deutsches Krebsforschungszentrum DKFZ
Priority to DE4431174A priority Critical patent/DE4431174A1/de
Publication of DE4431174A1 publication Critical patent/DE4431174A1/de
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6858—Allele-specific amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zum Nachweis von tumorspezifi­ scher mRNA und seine Verwendung.
Bei der Krebsvorsorge und der Therapiekontrolle nach aufgetretenen Krebserkran­ kungen geht es um den Nachweis von Tumorzellen. Bis jetzt wurde dies mit zytologischen, radiologischen oder serologischen Methoden durchgeführt. Diese Methoden haben aber allgemein den Nachteil, daß die Proben, die auf Tumorzellen getestet werden sollen, oft nur schwer zu erhalten sind und die Ergebnisse wegen geringer Sensitivität und Spezifität des Verfahren nur bei Proben mit vielen Tumor­ zellen verläßlich sind. Dies ist aber ein deutlicher Nachteil, wenn es um den Nach­ weis geringster Mengen von Tumorzellen geht.
Der vorliegenden Erfindung liegt somit die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren bereitzustellen, mit dem auch geringste Mengen von Tumorzellen im Rahmen der Krebsvorsorge und/oder Therapiekontrolle bei Krebserkrankungen nachweisbar sind.
Erfindungsgemäß wird dies durch ein Verfahren erreicht, mit dem tumorspezifische mRNA in Körperproben nachgewiesen wird. Ein solches Verfahren umfaßt folgende Verfahrensschritte
  • (a) Entnahme und Aufbereitung einer Körperprobe,
  • (b) Isolierung von mRNA aus der Körperprobe von (a),
  • (c) Übersetzung der mRNA von (b) in cDNA,
  • (d) Amplifikation der cDNA von (c) durch eine PCR-Reaktion mit Tumor­ marker-spezifischen Primern, und
  • (e) Nachweis der amplifizierten cDNA von (d).
Dem erfindungsgemäßen Verfahren liegt die Idee zugrunde, daß durch den Nach­ weis spezifischer mRNA, die nur in Tumorzellen, nicht aber in normalen Körperzel­ len, vorkommt, direkt auf das Vorliegen von Tumorzellen geschlossen werden kann. Eine solche mRNA ist z. B. eine "aberrant gespleißte" mRNA oder eine, die für einen Tumormarker, z. B. CEA, NSE, etc. kodiert. Diese mRNA kann nach reverser Transkription in cDNA durch geeignete Primer in einer PCR-Reaktion amplifiziert werden und durch Southernblot-Hybridisierung nachgewiesen werden.
Eine Körperprobe, in der eine tumorspezifische mRNA nachgewiesen werden soll, wird dem Patienten entnommen. Geeignet sind hierzu u. a. Blut, Sputum, Urin, Stuhl, Liquor, Galle, gastrointestinale Sekrete, Biopsien bzw. Organpunktate und Lymphflüssigkeit, wobei Blut und Sputum bevorzugt sind.
Für eine Blutprobe wird vorzugsweise ca. 10 ml Blut, aus der Armvene des Patien­ ten entnommen. Dieses Blut wird in mit gerinnungshemmenden Agentien ver­ sehene Blutröhrchen gegeben und kann bis zur Gewinnung der PBL/Tumorzellen kurz, maximal 4-7 h bei 4°C gelagert werden. Die Extraktion der PBL/Tumorzellen kann nach bekannten Verfahren erfolgen, vorzugsweise durch Dichtegradienten­ zentrifugation mit Ficoll-Paque (Pharmacia) gemäß einem Standardprotokoll für Lymphozytenextraktion. Anschließend wird das Zellpellet schockgefroren und bei - 70°C aufbewahrt.
Für eine Sputumprobe wird der Patient 20 bis 30 min einer Inhalation mit ver­ nebelter, physiologischer Kochsalzlösung ausgesetzt, bevor ca. 5 ml Sputum abgenommen werden. Diese kann bis zu seiner Aufarbeitung kurz, maximal 4-7 h, bei 4°C gelagert werden. Die Aufarbeitung der Sputumprobe erfolgt in ca. 20 ml einer 20 mM DTT-Lösung, wozu das verwendete Gefäß, vorzugsweise ein 50 ml Falcon-Röhrchen, 30 min bei 4°C in einen Over-head-turner gestellt wird. Dann erfolgt eine Zentrifugation der Probe für ca. 15 min bei 300 xg und 4°C. Es schließt sich ein Waschschritt mit kaltem PBS und nochmaliger Zentrifugation unter vorstehenden Bedingungen an. Das gewonnene Zellpellet wird in flüssigem Stickstoff schockgefroren und bei -70°C aufgewahrt.
Aus vorstehenden Zellpellets wird Gesamt-RNA isoliert, wobei mRNA besonders angereichert wird. Hierzu können übliche Verfahren verwendet werden. Günstig ist es, den käuflichen Guanidinium-lsothiocyanat-Extraktionskit (GlassMax, Gibco BRL) zu verwenden.
Die angereicherte mRNA wird dann einer unspezifischen, reversen Transkription unterzogen, wobei hierfür übliche Oligonukleotide, vorzugsweise Hexanukleotide (erhältlich z. B. bei Boehringer Mannheim) und eine MMLV-reverse Transkriptase (z. B. SUPERSKRIPT II, erhältlich bei Gibco BRL) verwendet werden. Ein bevorzugter Reaktionsansatz mit Hexanukleotiden wird 10 min bei 65°C und 60 min bei 37°C inkubiert. Hierdurch wird die mRNA in cDNA übersetzt.
Die erhaltene cDNA wird einer Polymerase-Kettenreaktion (PCR-Reaktion) unter­ worfen, wobei eine Taq-Polymerase (erhältlich z. B. bei Gibco BRL) verwendet wird. Als Primer werden Oligonukleotide verwendet, deren Sequenzen entsprechend bekannter DNA- und/oder RNA-Sequenzen von tumorspezifischen Transkripten ausgewählt werden, u. a. mRNA, die für sogenannte Tumormarker kodieren. Beispielsweise werden folgende Primer eingesetzt:
Primer für NSE:
nse255.forward: GCA AGA GAA GCT GGA CAA CC
nse944.reverse: ACA ATC TGG ATC CCT ACA TTG G
Primer für HPV 16:
16forward: ACT GCA ATG TTT CAG GAC CC
16reverse: CAT GCA TGA TTA CAG CTG GG
Primer für HPV 18:
18forward: ACA ATA CTA TGG CGC GCT TT
18reverse: AGC ACG AAT GGC ACT GG
Die Bedingungen für die PCR-Reaktion entsprechen den üblichen Standard­ bedingungen. Insbesondere wird die Reaktion wie folgt durchgeführt:
1,5 U Polymerase pro Ansatz;
1,5 min, 93°C;
35×30 sec, 93°C;
30 sec, Annealingtemperatur, entsprechend des Primerpaares;
30-60 sec, 72°C, entsprechend der Fragmentlänge;
6 min, 72°C.
Die Annealingtemperatur liegt z. B. für NSE und GAPDH bei ca. 60°C und für HPV 16/18 bei ca. 56°C.
Zur Kontrolle vorstehender Anreicherung von mRNA und deren Übersetzung in cDNA empfiehlt es sich, eine GAPDH-PCR-Reaktion durchzuführen. Diese erfolgt unter den vorstehenden Bedingungen. Als Primer werden z. B. verwendet:
Primer für GAPDH:
gapdh1forward: CAT CTC TGC CCC CTC TGC TGA
gapdh2reverse: GGA TGA CCT TGC CCA CAG CCT
Die vorstehende amplifizierte DNA wird in üblicher Weise nachgewiesen. Günstig ist es, sie auf einem Agarosegel, vorzugsweise 13-1,5%, aufzutrennen, mit Ethidiumbromid anzufärben und einer Southern Blot-Hybridisierung zu unterziehen. Hierzu wird die DNA auf eine Nitrozellulosemembran übertragen und mit einem, z. B. ³²P-5′-End-markierten Oligonukleotid hybridisiert, wobei das Oligonukleotid spezifisch für den durch das vorstehende Primerpaar festgelegten Tumormarker bzw. GAPDH ist. Das erhaltene Ergebnis gibt Aufschluß darüber, ob die Körper­ probe Tumorzellen aufweist, die den speziellen Tumormarker expremieren.
Als Hybridisierungsnukleotide eignen sich
für NSE: AAC AAG CTG GCC ATG CAG
und für GAPDH: CTC TCC AGA ACA TCA TCC CTG
Das erfindungsgemäße Verfahren eignet sich insbesonders, folgendes nachzuweisen:
kleinzelliges Bronchialkarzinom/u. a. NSE-mRNA, Synaptophysin-mRNA, Gastrin- Releasing-Peptide-mRNA, u. a. aus Sputum, Blut oder Organpunktaten/Tumor- bzw. Metastasensuche;
Zervix-Karzinom/u. a. HPV 16/18-mRNA aus Blut- oder Lymphknoten/Tumor- bzw. Metastasensuche;
Kolon-Karzinom/u. a. CEA-mRNA aus Stuhl, Blut oder Lymphknoten/Tumor- bzw. Metastasensuche;
Leberzell-Karzinom/u. a. α-Fetoprotein-mRNA aus Galle oder Blut/Tumor- bzw. Metastasensuche;
Gehirn-Karzinom/u. a. NSE-mRNA oder Synaptophysin-mRNA aus Liquor oder Blut/Tumor- bzw. Metastasensuche;
Mammakarzinom/u. a. CEA-mRNA aus Blut oder Lymphknoten/Tumor- bzw. Meta­ stasensuche; und
Schilddrüsenkarzinom/u. a. Tyroxin-mRNA aus Urin oder Blut/Tumor- bzw. Meta­ stasensuche.
Wird das erfindungsgemäße Verfahren für diagnostische Zwecke eingesetzt, werden verschiedene Tumormarker-spezifische Primer nacheinander verwendet und abhängig davon, welche cDNA amplifiziert werden konnte, können Rück­ schlüsse darauf gezogen werden, wo der Patient Krebs hat bzw. ob überhaupt. Um eine diagnostische Breite des erfindungsgemäßen Verfahrens zu erlauben, ist das Verfahren nicht auf die vorn angegebenen speziellen mRNAs und die dazugehöri­ gen Primer beschränkt.
Das erfindungsgemäße Verfahren zeichnet sich dadurch aus, daß der Nachweis von geringsten Mengen an Tumorzellen auf sehr einfache Weise spezifisch und sensitiv gelingt. Das Verfahren ist universell einsetzbar und nicht auf bestimmte Tumoren beschränkt. Krebsvorsorgemaßnahmen werden dadurch schon im frühe­ sten Tumorstadium ermöglicht. Therapieverfahren können früher eingeleitet werden und Tumorrezidive früher erfaßt werden. Schon durchgeführte Therapiever­ fahren können besser kontrolliert werden und dem Patienten bleibt möglicherweise eine weitergehende Behandlung erspart.
Die vorliegende Erfindung wird durch das folgende Beispiel erläutert.
Beispiel Nachweis von Zervix-Karzinom-spezifischer mRNA aus Blut
Einer an Zervix-Karzinom erkrankten Person wurden 10 ml Blut aus der Armvene entnommen. Dieses Blut wurde in mit EDTA versehene Blutröhrchen gegeben und 6 h bei 4°C gelagert. PBL/Tumorzellen wurden durch eine Dichtegradientenzen­ trifugation mit Ficoll-Paque gemäß einem Standardprotokoll für Lymphozyten­ extraktion extrahiert. Das Zellpellet wurde in flüssigem Stickstoff schockgefroren und bei -70°C aufbewahrt.
Aus dem Zellpellet wurde Gesamt-RNA isoliert, wobei mRNA angereichert wurde. Hierzu wurde der käufliche Guanidinium-Isocyanat-Extraktionskit verwendet.
Die angereicherte mRNA wurde einer unspezifischen, reversen Transkription unterzogen, wobei käufliche Hexanukleotide und eine MMLV-reverse Transkriptase verwendet wurden. Der Reaktionsansatz wurde 10 min bei 65°C und 60 min bei 37°C inkubiert. Es wurde cDNA erhalten.
Die cDNA wurde einer PCR-Reaktion unterzogen. Hierzu wurden eine Taq-Polyme­ rase und folgende Primer verwendet:
Primer für HPV 16:
16forward: ACT GCA ATG TTT CAG GAC CC
16reverse: CAT GCA TGA TTA CAG CTG GG
Primer für HPV 18
18forward: ACA ATA CTA TGG CGC GCT TT
18reverse: AGC ACG AAT GGC ACT GG
Die PCR-Reaktion wurde wie folgt durchgeführt:
1,5 U-Taq-Polymerase pro Ansatz;
1,5 min, 93°C;
35 × 30 sec, 93°C;
30 sec, 56°C Annealingtemperatur;
30 sec, 72°C; und
6 min, 72°C.
Zur Kontrolle wurde vorstehende cDNA auch einer GAPDH-PCR-Reaktion unter­ zogen. Diese wurde unter den vorstehenden Bedingungen durchgeführt, wobei als Primer verwendet wurden:
Primer für GAPDH:
gapdh1forward: CAT CTC TGC CCC CTC TGC TGA
gapdh2reverse: GGA TGA CCT TGC CCA CAG CCT
Die amplifizierte DNA wurde auf einem 1% Agarosegel aufgetrennt und mit Ethidiumbromid angefärbt. Die DNA wurde dann auf eine Nitrozellulosemembran übertragen und mit folgenden ³²P-5′-End-markierten Oligonukleotiden getrennt hybridisiert. Die Hybridisierungstemperatur lag jeweils 5°C unter der Schmelztem­ peratur des verwendeten Oligonukletids.
Folgende Oligonukleotide wurden verwendet:
Für HPV 16: TAT AGT TGT TTG CAG CTC TGT
Für HPV 18: CAA TAC TGT CTT GCA ATA TAC
Für GAPDH: CTC TCC AGA ACA TCA TCC CTG
Mit den verwendeten Oligonukleotiden konnte jeweils eine amplifizierte DNA nach­ gewiesen werden.

Claims (6)

1. Verfahren zum Nachweis von tumorspezifischer mRNA in einer Körperprobe, umfassend die folgenden Verfahrensschritte:
  • (a) Entnahme und Aufbereitung einer Körperprobe,
  • (b) Isolierung von mRNA aus der Körperprobe von (a),
  • (c) Übersetzung der mRNA von (b) in cDNA,
  • (d) Amplifikation der cDNA von (c) durch eine PCR-Reaktion mit Tumor­ marker-spezifischen Primern, und
  • (e) Nachweis der amplifizierten cDNA von (d).
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Körperprobe Blut, Sputum, Urin, Stuhl, Liquor, Galle, gastrointestinale Sekrete, Organ­ punktate bzw. Biopsien und/oder Lymphflüssigkeit ist.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Tu­ mormarker-spezifischen Primer solche für NSE oder HPV 16/18 sind.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Primer für NSE sind: nse255forward: GCA AGA GAA GCT GGA CAA CC
nse944reverse: ACA ATC TGG ATC CCT ACA TTG G
5. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Primer für HPV 16/18 sind: HPV 16:
16forward: ACT GCA ATG TTT CAG GAC CC
16reverse: CAT GCA TGA TTA CAG CTG GG
HPV 18:
18forward: ACA ATA CTA TGG CGC GCT TT
18reverse: AGC ACG AAT GGC ACT GG
6. Verwendung des Verfahren nach einem der Ansprüche 1-5 zur Tumor- bzw. Metastasensuche in der Krebsvorsorge und -Nachsorge.
DE4431174A 1994-09-01 1994-09-01 Nachweisverfahren für tumorspezifische mRNA Ceased DE4431174A1 (de)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4431174A DE4431174A1 (de) 1994-09-01 1994-09-01 Nachweisverfahren für tumorspezifische mRNA

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4431174A DE4431174A1 (de) 1994-09-01 1994-09-01 Nachweisverfahren für tumorspezifische mRNA

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE4431174A1 true DE4431174A1 (de) 1996-03-07

Family

ID=6527187

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE4431174A Ceased DE4431174A1 (de) 1994-09-01 1994-09-01 Nachweisverfahren für tumorspezifische mRNA

Country Status (1)

Country Link
DE (1) DE4431174A1 (de)

Cited By (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997018334A2 (en) * 1995-11-15 1997-05-22 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes complementary to human papillomavirus nucleic acid and related methods and kits
WO1998020166A2 (en) * 1996-11-06 1998-05-14 Sequenom, Inc. Dna diagnostics based on mass spectrometry
DE19813788A1 (de) * 1998-03-27 1999-10-07 Deutsches Krebsforsch Nachweisverfahren für Tumorzellen
DE19825082C1 (de) * 1998-06-05 2000-02-24 Gabriele Jaques Nachweisverfahren für epitheliale Tumorzellen mittels Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR)
GR1003455B (el) * 1999-11-12 2000-10-12 Limeart Limited Νεα μεθοδος ανιχνευσης του καρκινικου αντιγονου 17-1α (ga 733-1 και ga733-2) σε περιφερικο αιμα και σε ιστους και προσδιορισμο σ μεταστατικων καρκινικων κυτταρων σε ασθενεις με διαφορους τυπους καρκινου
US6258538B1 (en) 1995-03-17 2001-07-10 Sequenom, Inc. DNA diagnostics based on mass spectrometry
US6428955B1 (en) 1995-03-17 2002-08-06 Sequenom, Inc. DNA diagnostics based on mass spectrometry
US6468748B1 (en) 1996-03-04 2002-10-22 Sequenom, Inc. Methods of screening nucleic acids using volatile salts in mass spectrometry
US6566055B1 (en) 1996-09-19 2003-05-20 Sequenom, Inc. Methods of preparing nucleic acids for mass spectrometric analysis
WO2003057914A2 (en) * 2002-01-07 2003-07-17 Norchip A/S METHOD FOR DETECTING HUMAN PAPILLOMAVIRUS mRNA
US6635452B1 (en) 1996-12-10 2003-10-21 Sequenom Inc. Releasable nonvolatile mass label molecules
US6660229B2 (en) 2000-06-13 2003-12-09 The Trustees Of Boston University Use of nucleotide analogs in the analysis of oligonucleotide mixtures and in highly multiplexed nucleic acid sequencing

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3838269A1 (de) * 1988-11-11 1990-05-17 Behringwerke Ag Nachweis humaner papillomavirus dna und ihrer expression in zervix-abstrichen
EP0390323A2 (de) * 1989-03-29 1990-10-03 The Johns Hopkins University Nachweis des Ausfalls des Wildtyps des p53-Gens
WO1991005064A1 (en) * 1989-10-02 1991-04-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce A sensitive method for measurement of chimeric transcripts of dna containing translocations
WO1992013103A1 (en) * 1991-01-16 1992-08-06 The Johns Hopkins University Inherited and somatic mutations of apc gene in colorectal cancer of humans
WO1992016656A1 (en) * 1991-03-13 1992-10-01 The Johns Hopkins University Gene mutated in colorectal cancer of humans

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3838269A1 (de) * 1988-11-11 1990-05-17 Behringwerke Ag Nachweis humaner papillomavirus dna und ihrer expression in zervix-abstrichen
EP0390323A2 (de) * 1989-03-29 1990-10-03 The Johns Hopkins University Nachweis des Ausfalls des Wildtyps des p53-Gens
WO1991005064A1 (en) * 1989-10-02 1991-04-18 The United States Of America, As Represented By The Secretary, U.S. Department Of Commerce A sensitive method for measurement of chimeric transcripts of dna containing translocations
WO1992013103A1 (en) * 1991-01-16 1992-08-06 The Johns Hopkins University Inherited and somatic mutations of apc gene in colorectal cancer of humans
WO1992016656A1 (en) * 1991-03-13 1992-10-01 The Johns Hopkins University Gene mutated in colorectal cancer of humans

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chemical Abstracts 120 (28.03.1994):155103f *
PECHUMER, H., et.al.: Lab. Invest. 1993, 69 (6), S. 743-749 *

Cited By (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6589485B2 (en) 1995-03-17 2003-07-08 Sequenom, Inc. Solid support for mass spectrometry
US6258538B1 (en) 1995-03-17 2001-07-10 Sequenom, Inc. DNA diagnostics based on mass spectrometry
US6602662B1 (en) 1995-03-17 2003-08-05 Sequenom, Inc. DNA diagnostics based on mass spectrometry
US7759065B2 (en) 1995-03-17 2010-07-20 Sequenom, Inc. Mass spectrometric methods for detecting mutations in a target nucleic acid
US6500621B2 (en) 1995-03-17 2002-12-31 Sequenom, Inc. DNA diagnostics based on mass spectrometry
US6428955B1 (en) 1995-03-17 2002-08-06 Sequenom, Inc. DNA diagnostics based on mass spectrometry
US6300076B1 (en) 1995-03-17 2001-10-09 Sequenom, Inc. DNA diagnostics based on mass spectrometry
US8501410B2 (en) 1995-11-15 2013-08-06 Gen-Probe Incorporated Oligonucleotides for detecting human papilloma virus in a test sample
EP0774518A3 (de) * 1995-11-15 2000-11-22 Gen-Probe Incorporated Nukleinsäure-Sonden complementär zu Nukleinsäure von humane Papillomavirus, entsprechende Verfahren und Kits
WO1997018334A2 (en) * 1995-11-15 1997-05-22 Gen-Probe Incorporated Nucleic acid probes complementary to human papillomavirus nucleic acid and related methods and kits
US7355034B2 (en) 1995-11-15 2008-04-08 Gen-Probe Incorporated Oligonucleotides for use in determining the presence of human papilloma virus in a test sample
US9194008B2 (en) 1995-11-15 2015-11-24 Gen-Probe Incorporated Hybridization assay detection probes for detecting human papilloma virus in a sample
WO1997018334A3 (en) * 1995-11-15 1997-10-02 Gen Probe Inc Nucleic acid probes complementary to human papillomavirus nucleic acid and related methods and kits
US7470512B2 (en) 1995-11-15 2008-12-30 Gen-Probe Incorporated Oligonucleotides for use in determining the presence of human papilloma virus in a test sample
US6468748B1 (en) 1996-03-04 2002-10-22 Sequenom, Inc. Methods of screening nucleic acids using volatile salts in mass spectrometry
US6566055B1 (en) 1996-09-19 2003-05-20 Sequenom, Inc. Methods of preparing nucleic acids for mass spectrometric analysis
EP1164203A2 (de) * 1996-11-06 2001-12-19 Sequenom, Inc. DNA-Diagnostik mittels Massenspektrometrie
EP1164203A3 (de) * 1996-11-06 2002-03-13 Sequenom, Inc. DNA-Diagnostik mittels Massenspektrometrie
WO1998020166A3 (en) * 1996-11-06 1998-10-22 Sequenom Inc Dna diagnostics based on mass spectrometry
WO1998020166A2 (en) * 1996-11-06 1998-05-14 Sequenom, Inc. Dna diagnostics based on mass spectrometry
US8486623B2 (en) 1996-12-10 2013-07-16 Sequenom, Inc. Releasable nonvolatile mass-label molecules
US6635452B1 (en) 1996-12-10 2003-10-21 Sequenom Inc. Releasable nonvolatile mass label molecules
DE19813788A1 (de) * 1998-03-27 1999-10-07 Deutsches Krebsforsch Nachweisverfahren für Tumorzellen
DE19825082C1 (de) * 1998-06-05 2000-02-24 Gabriele Jaques Nachweisverfahren für epitheliale Tumorzellen mittels Reverse-Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR)
GR1003455B (el) * 1999-11-12 2000-10-12 Limeart Limited Νεα μεθοδος ανιχνευσης του καρκινικου αντιγονου 17-1α (ga 733-1 και ga733-2) σε περιφερικο αιμα και σε ιστους και προσδιορισμο σ μεταστατικων καρκινικων κυτταρων σε ασθενεις με διαφορους τυπους καρκινου
US6660229B2 (en) 2000-06-13 2003-12-09 The Trustees Of Boston University Use of nucleotide analogs in the analysis of oligonucleotide mixtures and in highly multiplexed nucleic acid sequencing
WO2003057914A3 (en) * 2002-01-07 2004-02-26 Norchip As METHOD FOR DETECTING HUMAN PAPILLOMAVIRUS mRNA
EP1715062A3 (de) * 2002-01-07 2007-07-11 Norchip A/S Detektionsverfahren für papillomavirus mRNA
WO2003057914A2 (en) * 2002-01-07 2003-07-17 Norchip A/S METHOD FOR DETECTING HUMAN PAPILLOMAVIRUS mRNA
EP2267155A3 (de) * 2002-01-07 2011-06-08 Norchip A/S Detektionsverfahren für papillomavirus mRNA
EP2272988A3 (de) * 2002-01-07 2011-06-15 Norchip A/S Detektionsverfahren für papillomavirus mRNA
US8420314B2 (en) 2002-01-07 2013-04-16 Norchip A/S Method for detecting human papillomavirus mRNA

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0861334B2 (de) Verfahren zur quantifizierung von tumorzellen in einer körperflüssigkeit und dazu geeignete testkits
DE19849348A1 (de) Linear Amplification mediated PCR (=LAM PCR)
DE69333289T2 (de) Verfahren zur bestimmung von säugetier nukleinsäuren aus stuhlproben und dafür benötigte reagenzien
DE4431174A1 (de) Nachweisverfahren für tumorspezifische mRNA
WO2005085471A2 (de) Verfahren und mittel zur differentiellen diagnose von schilddrüsentumoren
DE69015261T2 (de) Verfahren zum Nachweis des humanen Papillomvirus.
EP1532444B1 (de) Verfahren zum untersuchen von körperflüssikeiten auf krebszellen sowie entsprechende analysekits
Scurto et al. A multiplex RT-PCR assay for the detection of chimeric transcripts encoded by the risk-stratifying translocations of pediatric acute lymphoblastic leukemia
US6087098A (en) Enhanced reverse transcriptase polymerase chain assay to detect MN in patients with renal cell carcinoma
DE19804372A1 (de) Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Tumorzellen in einer Körperflüssigkeit und dazu geeignete Testkits
EP0920535B1 (de) Verfahren zum nachweis klinisch relevanter veränderungen der dns-sequenz des ki-ras-onkogens, seine verwendung und testkit zur früherkennung von tumoren
DE69736002T2 (de) GEN ASSOZIIERT MIT IgA GLOMERULONEPHRITIS
DE60019625T2 (de) Nukelinsäure primer und proben zum nachweis von tumorzellen
DE60125171T2 (de) Verfahren zur detektion und quantifizierung von menschlichen p450-molekülen und sonde und kit für dieses verfahren
DE69434809T2 (de) Bc200 rna, daraus abgeleitete proben und entsprechende anwendungen
US5994528A (en) Method of detecting gene expression and/or of preventing such expression in cells
DE19716346C1 (de) Verfahren zum Nachweis von Cytokeratinen
DE19813788A1 (de) Nachweisverfahren für Tumorzellen
EP0926245B1 (de) Nachweis von Harnblasenkarzinom in einer Urinprobe
DE602004005300T2 (de) Polynucleotide microarray einschließlich zwei oder mehr Gruppen von Polynukleotide-sonden immobilisiert auf einem Substrat
DE60316464T2 (de) Neue real-time rt-pcr methode zur sensitiven detektierung mehrerer mage gen transkripte
EP0991780A2 (de) Verfahren und testkit zum nachweis bösartiger tumore
EP0870061B1 (de) Verfahren zum nachweis der expression von cd95-ligand in zellen
DE102007051578B3 (de) Verfahren zur parallelen Amplifikation von wenigstens zwei verschiedenen Nukleinsäureabschnitten
DE102005011003B4 (de) Verfahren und Mittel zur differentiellen Diagnose von Schilddrüsentumoren

Legal Events

Date Code Title Description
OP8 Request for examination as to paragraph 44 patent law
8131 Rejection