DE3701891A1 - Chinolinderivate als immunosuppressiva - Google Patents

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft immunosuppressive Chinolinderivate.

Es wurde gefunden, dass niedermolekulare Chinolinderivate eine immunosuppressive Wirkung zeigen und dass sie an sich oder zusammen mit anderen immunosuppressiven Verbindungen, z. B. Cyclosporin, (wodurch eine Reduzierung der Dosierung der immunosuppressiven Verbindung ermöglicht wird), verabreicht werden können.

Nachfolgend werden diese Chinolinderivate als die Verbindungen der Erfindung bezeichnet. Ein Aspekt der vorliegenden Erfindung betrifft die Verwendung der Verbindungen der Erfindung zur Herstellung von immunosuppressiven pharmazeutischen Präparaten. Diese Verbindungen können z. B. als freie Basen oder als pharmazeutisch akzeptable Säureadditionssalze, z. B. Hydrochloride, Maleate oder Mesylate, eingesetzt werden.

Die Verbindungen der Erfindung können z. B. bis zu 4 kondensierten Ringe, welche den Chinolinrest umfassen, enthalten. Dieses Ringsystem kann auch Substituenten, z. B. Seitenketten, tragen. Es handelt sich hier um niedermolekulare Verbindungen in dem Sinne, dass die Seitenketten keine kondensierten Ringsysteme enthalten.

Beispiele solcher niedermolekularer Chinolinderivate sind die Benzochinoline, besonders solche der Formel I worin die Ringe A und B trans-verknüpft sind und R₁ und R₂ unabhängig voneinander für Wasserstoff, Hydroxy oder Methoxy stehen, beide jedoch nicht gleichzeitig Wasserstoff sein können,
R₃ für Wasserstoff oder C_1-4-Alkyl,
R₄ für COOH, CH₂OR₅, CH₂CN, CON(R₆)R₇, CH₂SR₈, NHSO₂N(R₉)R₁₀ oder NHCON(R₉)R₁₀,
R₅ für Wasserstoff oder C_1-3-Alkyl,
R₆ für Wasserstoff oder C_1-3-Alkyl,
R₇ für Wasserstoff, C_1-3-Alkyl, Phenyl oder Pyridyl, wobei die Phenyl- oder Pyridylreste durch Halogen, Methyl oder Methoxy substituiert sein können, oder
R₆ und R₇ zusammen für (CH₂)₄, (CH₂)₅ oder (CH₂)₂-O-(CH₂)_-2,
R₈ für C_1-4-Alkyl, Pyridyl oder durch Halogen, Methyl oder Methoxy substituiertes Pyridyl, und
R₉ und R₁₀ unabhängig voneinander für Wasserstoff oder C_1-3-Alkyl oder zusammen für (CH₂)₄ oder (CH₂)₅,
stehen, sowie die physiologisch hydrolysierbaren und verträglichen Ester dieser Verbindungen.

Diese Verbindungen sind z. B. bekannt aus der europäischen Patentveröffentlichung Nr. 77 754. Unter Bezugnahme auf diese Patentanmeldung umfasst die vorliegende Erfindung deren Inhalt, inklusive alle Beispiele. Aus dieser Gruppe ist die nachfolgende Verbindung bevorzugt:

N-N-Diäthyl-N′[(3α,4aα,10aβ)-1,2,3,4,4a,5,10,10a-octahydro- 6-hydroxy-1-propyl-3-benzo[g]chinolinyl]sulfamid,

auch bekannt als CV (nachfolgend als Verbindung A), vorzugsweise als Hydrochlorid verwendet.

Bevorzugte Verbindungen sind die niedermolekularen Ergotderiate, d. h. Verbindungen, welche keinen Peptidteil in Stellung 8 enthalten, also keine Ergopeptide. Sie können z. B. eine Aminogruppe oder Derivat davon, z. B. eine Acylamino-, Ureido- oder Sulfamino- oder eine Thiomethylgruppe in Stellung 8 tragen; diese Gruppen können gegebenenfalls durch z. B. eine oder gewünschtenfalls zwei C_1-4-Alkylgruppen substituiert sein.

Geeignet sind Verbindungen mit einer einfachen Bindung zwischen Stellungen 9 und 10 im Ergolinmolekül. Bevorzugt sind hier die 8α-Sulfamoylaminoergoline. Diese haben die nachfolgende Basisstruktur: worin R₁a u. a. für (C_1-4)Alkyl,
R₂a u. a. für H oder (C_1-4)Alkyl und
R₃a u. a. für -NHSO₂N[(C_1-4Alkyl]₂ stehen.

Bevorzugte Verbindungen sind u. a.:

• a) 1,6-Dimethyl-8α-(N,N-dimethylsulfamoylamino)-ergolin-I (auch als Mesulergine bekannt; nachfolgend als Verbindung B)
• b) 6-n-Propyl-8α-(N,N-diäthylsulfamoylamino)-ergolin-I (N,N-Diäthyl-N′-(6-propylergolin-8α-yl)sulfamid) bevorzugt als Hydrochlorid, auch als CQP bekannt; nachfolgend als Verbindung C)
• c) N,N-Diäthyl-N′-[8α)-1-äthyl-6-methyl-ergolin-8-yl]-sulfamid, bevorzugt als Hydrochlorid, nachfolgend als Verbindung D bezeichnet).

Die bevorzugte Verbindung ist die Verbindung C (oben unter b) erwähnt).

Weitere bevorzugte Verbindungen sind:

• i) 3-(9,10-Didehydro-6-methyl-ergolin-8α-yl)-1,1-diäthyl-harnstoff (auch als Lisuride bekannt, bevorzugt als Hydrogenmaleat verwendet).
• ii) 6-n-Propyl-8a-methylmercaptomethyl-ergolin-I (auch als Pergolide bekannt, bevorzugt als Mesylat verwendet),
• iii) Transhydrolisuride, auch als Terguride bekannt (= 3-(6-Methyl- ergolin-8α-yl)-1,1-diäthylharnstoff z. B. in DOS 31 35 305 und 31 24 714, veröffentlicht),
• iv) 6-n-Propyldihydro-lisuride, auch als Proterguride bekannt (= 3-(6-n-Propyl-ergolin-8α-yl)-1,1-diäthylharnstoff) urea.
• v) In Stellung 6 und 2 substituierte, z. B. 6-n-Propyl- und/oder 2-Methyl- oder Brom-Derivate von Terguride, Lisuride oder Proterguride, welche z. B. in den europäischen Patentveröffentlichungen Nr. 21 206 und 1 60 842 beschrieben werden. Unter Bezugnahme auf diese Patentanmeldung umfasst die vorliegende Erfindung deren Inhalt, inklusive alle Beispiele. Die Beispiele umfassen u. a. 2-Bromterguride, auch bekannt als 2-Bromtetrahydrolisuride, bevorzugt als Hydrochlorid.
• vi) Metergoline (= (+)-N-(Carboxy)-1-methyl-9,10-dihydrolysergamine benzyl-ester).
• vii) Dosergoside (= N-(1S,2R,3E),2-Hydroxy-1-(hydroxymethyl)-3-heptadecanyl)- 6-methylergolin-8-beta-carboxamid.
• viii) FCE-21336 (= 1-Aethyl-3-(3′-dimethylaminopropyl)-3-(6-allylergolin- 8′-beta-carbonyl)-harnstoff, bevorzugt als Diphosphat.
• ix) GYKI-32887 (= 6-Methyl-8-(N-mesyl-N-2-azidoäthyl)ergolen bevorzugt als Bimaleat, z. B. wie in USP 42 99 836 beschrieben.

Eine Gruppe umfasst Verbindungen der Formel I′ worin R₁′ für Wasserstoff oder C_1-4-Alkyl
R₂ für Wasserstoff, Cl, Br oder CH₃
R₃′ für C_1-5-Alkyl oder C_3-5-Alkenyl, wobei die Doppelbindung sich nicht am dem am N-benachbarten C-Atom befindet und
R₄′ für C_3-7-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl, Adamantyl, gegebenenfalls durch C_1-3-Alkyl, C_1-3-Alkoxy, C_1-3-Alkylthio, CF₃, OH, NO₂, NH₂, NH-(C_1-3-Alkyl) und/oder N(C_1-3-Alkyl)₂ einmal oder mehrmals substituiertes Phenyl, oder Phenyl, das mit einem nicht- aromatischen, 1 oder 2 O und/oder S-Atome enthaltenden 5- oder 6-Ring kondensiert ist, stehen.

Diese Verbindungen werden in der GB-Patentschrift 21 52 507 beschrieben. Bezugnehmend auf diese Patentanmeldung umfasst die vorliegende Erfindung auch deren Inhalt, inklusive die Beispiele. Beispiele dieser Gruppe sind:
(5R,8S,10R)-2,6-Dimethyl-8α-pivaloylamino-ergolin (nachfolgend als Verbindung E), bevorzugt als das Hydrochlorid, und das 2-Chloro-Derivat, (5R,8S,10R)- 2-Chloro-6-methyl-8α-pivaloylamino-ergolin.

Eine weitere Gruppe umfasst Verbindungen der Formel I″ worin R₁″ für Wasserstoff oder C_1-4-Alkyl
R₂″ für Wasserstoff, Cl, Br oder CH₃
R₃″ für C_1-5-Alkyl oder C_3-5-Alkenyl, wobei die Doppelbindung sich nicht an dem am N-benachbarten C-Atom befindet und
R₄″ für C_1-7-Alkyl, C_3-7-Cycloalkyl, Adamantyl, gegebenenfalls durch C_1-3-Alkyl, C_1-3-Alkoxy, C_1-3-Alkylthio, CF₃, OH, NO₂, NH₂, NH- (C_1-3-Alkyl) und/oder N (C_1-3-Alkyl)₂ einmal oder mehrmals substituiertes Phenyl, oder Phenyl, das mit einem nicht-aromatischen, 1 oder 2 O und/oder S-Atome enthaltenden 5- oder 6-Ring kondensiert ist,
stehen, mit der Massgabe, dass, falls R₂″ für Wasserstoff steht, weder R₃″ noch R₄″ eine Methylgruppe bedeuten können, z. B. Verbindungen, worin R₁″ = H, R₂″ = Br oder besonders CH₃, R₃″ = CH₃ und R₄″ = tert. Butyl.

Diese Verbindungen sind in der veröffentlichten GB Patentanmeldung Nr. 21 69 291 beschrieben. Bezugnehmend auf diese Patentanmeldung umfasst die vorliegende Erfindung auch deren Inhalt, inklusive alle Beispiele.

Viele der o. e. Verbindungen werden als Prolaktinsekretionshemmer beschrieben, einige sind äusserst aktiv und haben eine lange Wirkungsdauer. Die Wirksamkeit dieser Verbindungen als Prolaktinsekretionshemmer kann in Standardtests gezeigt werden, z. B. durch die Senkung des basalen Prolaktinspiegels im Serum bei der männlichen Ratte.

Beispielsweise wurden mit einigen repräsentativen Verbindungen die nachfolgenden Resultate erhalten:

VerbindungID₅₀ mg/kg nach 4 Stunden A0,03 B0,003 C0,001

Eine Verbindungsgruppe umfasst D₂-agonistische Verbindungen ohne antagonistische Aktivität. Eine andere Verbindungsgruppe enthält Verbindungen mit Serotoninagonistischer Aktivität, z. B. festgestellt in üblichen in vitro Bindungstests und durch Aktivierung der 5-HT sensitiven Adenylatcyclase des Leberegels gemäss der Methode von R. Markstein, Neurochemical effects of some ergot derivatives: A basis for their antiparkinson actions. J. neural transm. 51, 39 (1981).

Beispiele solcher Verbindungen sind: Verbindung C und Pergolide. Verbindung C, Pergolide und 5-HT haben Wirksamkeiten von 90, 80 bzw. 100 und pD₂[10gEC₅₀) von 6,9; 6,9 bzw. 7,7 in diesem Test auf durch Serotonin stimuliertes Adenylatcyclase.

Wie unten erwähnt kann die Wirksamkeit der Verbindungen der Erfindung als Prolaktinsekretionshemmer überraschenderweise als Anhaltspunkt für ihre immunossupressive Wirkung dienen, jedoch gibt es mindestens bis vor dem Datum dieser Erfindung keine eindeutigen Anzeichen für eine direkte Korrelation zwischen ihren prolaktinhemmenden und immunosuppressiven Wirkungen. Tatsächlich könnte die Wirksamkeit dieser Verbindungen als Prolaktinsekretionshemmer und ihre lange Wirkungsdauer in dieser Hinsicht die Wahrnehmung weiterer interessanten Eigenschaften verdecket haben, besonders bei in vitro Tests. Wir haben die Verbindungen der Erfindung gründlich getest und haben gefunden, dass sie besonders interessante immunosuppressive Eigenschaften, manchmal bei niedrigeren Dosen als erwartet, aufweisen.

Die Verbindungen der Erfindung hemmen die Immunantwort wie in ex-vivo und in vitro Standardtests gezeigt wird.

Test I: Entwicklung von antikörperproduzierenden Zellen bei der Maus (PFC-Test)

Die Verbindungen der Erfindung reduzieren den Antikörpertiter gegen Schaferythrocyten (SE) im plaquebildenden Zellen (= plaque forming cell = PFC)-Versuch. Diese Methode ermöglicht die Quantifizierung der Zahl der Milzlymphozyten, welche lytische Antikörper gegen SE bilden, sowie die Unterscheidung zwischen IgM und IgG produzierenden Zellen.

Die Injektion von SE (5.10⁷) in 0,2 ml i. . dient als Antigenquelle für die primäre Immunisierung bei den Mausversuchen. Es werden in diesem Test weibliche schwarze C57-Mäuse von ca. 20 g Körpergewicht verwendet. Alle Tiere wurden einen Tag vor der SE-Behandlung mit der betreffenden Verbindung vorbehandelt und nachher täglich um 11 Uhr während 6 Tagen. Die Milzen wurden nachher entfernt zur Bestimmung der PFC-Zahlen gegenüber dem SE-Antigen.

Die Milzzellen wurden in HBSS (Hepes-buffered Balanced Salt Solution) suspendiert, einmal gewaschen und erneut suspendiert in einem Volumen, das der erwarteten Zahl der plaquebildenden Zellen angepasst wird. Die direkte Quantifizierung der IgM-PFC wird durch Aufbringen von 0,1 ml der verdünnten Milzzellen mit 0,025 ml SE (30%), 0,3 ml Agar (0,5% in HBSS) und 0,025 ml Komplement (Meerschweinchenserum) auf Petri-Schalen ausgeführt. Eine indirekte Methode zur IgG-PEC-Quantifizierung wurde mit einem monoklonalen Antikörper gegen IgM (1 : 4 Verdünnung) und einem anti-gamma polyspezifischen Antiserum (1 : 8000) zur Komplementfixierung durchgeführt. Die Milzlymphozyten jeder Mausmilz wurden auf Petri-Schalen angebracht zur doppelten Quantifizierung von IgM- und IgG-PFC. Alle Petri-Schalen wurden während 4 Stunden bei 37°C inkubiert, dann über Nacht in befeuchteten Kammern bei 4° gelagert. Die Plaques wurden von Hand unter Verwendung eines Plaques-Zählers gezählt.

Nachfolgend einige repräsentative Resultate:

TEST B

In diesem Test hatte Verbindung A bei einer Dosierung von 1 mg/kg/Tag, s. c. verabreicht während 6 Tagen eine Wirkung der gleichen Grössenordnung wie Cyclosporin A bei 36 mg/kg/Tag unter ähnlichen Bedingungen. Verbindung C hatte bei einer Dosierung von 0,01 mg/kg/Tag, p. o. während 6 Tagen verabreicht, eine Wirkung der gleichen Grössenordnung wie Cyclosporin A bei 60 mg/kg/Tag unter ähnlichen Bedingungen. Die immunosuppressive Wirkung der Verbindung C nahm bei höheren Dosierungen ab.

Die Dosierung für andere Verbindungen der Erfindung kann durch Routine-Experimente festgestellt werden, wobei man auf die relative Wirksamkeit als Prolaktinsekretionshemmer achten soll und weiter berücksichtigen muss, dass die immunosuppressive Aktivität gegebenenfalls nicht bei niedrigen oder hohen Dosierungen beobachtet werden kann. Beispiele für Dosierungen liegen im Bereich 0,1 bis 10 mg/kg, z. B. bis 1 mg/kg p. o und s. c.

Test 2: "Mixed Lymphocyte Reaction" bei der Maus

Die Fähigkeit der Verbindungen der Erfindung die Reagibilität von Lymphozyten gegenüber allogener Stimulierung zu reduzieren, wird im "mixed lymphocyte reaction"-Test (MLR) gemessen, wobei bestrahlte allogene Zellen von Stimulatormäusen eine proliferative Antwort in histo-inkompatiblen Responderzellen hervorrufen.

1. Variante

Respondermäuse (Balb/c weiblich, 8-10 Wochen alt) werden während 5 Tagen s. c. mit den Verbindungen der Erfindung behandelt. Gleiche Zahlen Stimulator-Mäuselymphozyten (von Stimulator-CBA-Mäusen; Lymphozyten in vitro mit 200R bestrahlt) und Effektorlymphozyten der behandelten Tieren oder Kontrolltiere werden während 5 Tagen inkubiert. Das ³H-Thymidin, aufgenommen im Lymphozyt-DNA, wurde als Parameter für die Zellproliferation als Antwort auf den allogenen Stimulus verwendet [siehe S. S. Rich et al., J. Exp. Medicine, (1974), 140, 1588-1693].

Nachfolgend ein repräsentatives Resultat für die Verbindung E:

dpm × 10³/10
Zellen ± SD Kontrolle131192 ± 12344 Verbindung E bei 5 mg/kg s. c.103218 ± 21497

Verbindung E hemmte die Antwort also um ungefähr 21%. Die Dosierung für andere Verbindungen kann durch Experimentieren unter Berücksichtigung der relativen Wirksamkeiten als Prolaktinsekretionshemmer festgestellt werden, wobei man weiter bedenken soll, dass die immunosuppressive Wirkung gegebenenfalls nicht bei niedrigen oder hohen Dosierungen beobachtet werden kann. Beispiele für Dosierungen liegen im Bereich von 1 bis 10 mg/kg s. c.

2. Variante

Weiter hemmen die Verbindungen die Immunantwort von Effektorlymphozyten gegen histoinkompatible (allogene) Lymphozyten in einer Variante des oben erwähnten MLR (mixed lymphocyte reaction)-Zweiwegtests.

Mäuse von zwei histo-inkompatiblen Stämmen (Balb/c und CBA) (6 bis 8 Wochen alt) werden während mindestens 7 Tagen täglich einmal s. c. mit einer Verbindung der Erfindung behandelt. Die Milzen werden 3 Stunden nach der letzten Verabreichung der Verbindung entfernt. Der MLR-Test wird mit 0,5 · 10⁶ Milzzellen von Balb/c-Mäusen und 0,5 · 10⁶ mit 2000 rad. bestrahlten Milzzellen von CBA-Mäusen durchgeführt. Die Milzzellen der Balb/c-Mäuse werden während 4 Tagen mit den allogenen CBA-Milzzellen inkubiert. Radioaktives Thymidin wird zugegeben und nach 16 Stunden wird die Aufnahme von ³H-Thymidin in die DNA der Mäusemilzzellen gemessen.

Resultate erhalten mit Verbindung C

DosisAenderung gegenüber Kontrolle 5 mg/kg- 20% 0.5 mg/kg- 50% 0.05 mg/kg- 71% (Cyclosporin 100 mg/kg)- 53%

Dosierungen für weitere Verbindungen können durch Experimentieren gefunden werden, wobei man die relativen Aktivitäten als Prolaktinsekretionshemmer beachten soll. Weiter ist zu berücksichtigen, dass die immunosuppressive Wirksamkeit gegebenenfalls bei niedrigen oder hohen Dosierungen nicht beobachtet werden kann. Beispielsweise liegen die Dosierungsbereiche zwischen 0,01 und 10 mg/kg, z. B. zwischen 0,01 und 1 mg/kg.

Test 3: Freund's Adjuvans-Arthritis an der Ratte

Ein Testmodell ist das Nagetier-Modell für die Entwicklung einer autoimmunen Adjuvans-Arthritis. Eine Hemmung der Entwicklung der Adjuvans-Arthritis wird beobachtet.

In einer Variante wurde Myobacterium butyricum gekauft bei Difco Laboratories, Detroit, Michigan, zu einer Suspension in Paraffinum subliquidium PHHVI (Siegfried Zofingen, Schweiz) mit einer Konzentration von 6 mg/ml verarbeitet. Unter Aether-Narkose wurde männlichen Sprague-Dawley Ratten (ca. 150-175 g) ein Volumen von 0,1 ml der Emulsion mit einer 21 g 1-1/2 inch Nadel intrakutan in die Schwanzwurzel injiziert. Arthritis entwickelte sich in 95 bis 100% der Hinterpfoten bei den positiven Kontrolltieren. Die Dicke der Hinterpfoten (Mitte des Schienbeins) wurde mit einem linearen Messgerät (Mitutoyo), verbunden mit einem elektronischen digitalen Ablesegerät, (Mitutoyo) gemessen.

Bei 100% der Kontrollgruppe entwickelte sich eine Adjuvans-Arthritis. Die Verbindungen der Erfindung wurden mittels einer subkutan angebrachten, osmotischen Pumpe während 7 oder 14 Tagen an eine Gruppe von 5 Tieren verabreicht. Das Fortschreiten der Arthritis und die hemmende Wirkung einer repräsentativen Verbindung (Verb. B) bei 0,1 mg/kg/Tag sind nachfolgend dargestellt:

Dicke (mm) der Hinterpfote

Dosierungen für andere Verbindungen können mittels Routine-Experimenten festgestellt werden, wobei die relativen Aktivitäten der Prolaktinsekretionshemmung beachtet werden sollten. Dosierungen liegen beispielsweise zwischen 0,1 bis 1 mg/kg/Tag s. c.

Test 4: Lokale Graft-versus Host (GvH) bei der Ratte

Milzzellen (ca. 1·10⁷) werden 6 Wochen alten Wistar/Furth (W/F-Ratten) entnommen und in die linken Hinterpfoten von weiblichen (F344 × WF) Fl-Ratten, welche ca. 100 g wiegen, eingespritzt. Die Ratten wurden ab dem 7. Tag vor dieser Einspritzung und noch 3 Tage nach der Einspritzung täglich mit einer Verbindung der Erfindung behandelt. Die Gewichtsdifferenz zwischen den linken und rechten Lymphknoten wird als Parameter zur Bewertung der Reaktion genommen.

Resultate mit repräsentativen Verbindungen:

Wie ersichtlich ist die Wirkung der Verbindung C dosisabhängig.

Dosierungen für andere Verbindungen können in Routine-Experimenten festgestellt werden, wobei die relativen Aktivitäten der Prolaktinsekretionshemmung beachtet werden sollten. Weiter ist zu berücksichtigen, dass die immunosuppressive Wirkung bei niedrigen oder hohen Dosierungen nicht zu beobachten ist. Dosierungen liegen beispielsweise im Bereich von ca. 0,001 bis 5 mg/kg/Tag.

Test 5: Geschwindigkeit der Biosynthesis in der Ratte

Die Verbindungen der Erfindung hemmen die Biosynthese eines geeigneten Markers für Hormone, Mitogene und andere Verbindungen, nämlich der Ornithindecarboxylase (ODC) in Thymus, Milz, Knochenmark und Hypophysenvorderlappen, z. B. in einer immunstimulierten Ratte. Der hier zur Bestimmung der Geschwindigkeit der Biosynthese in lymphoiden und endokrinen Geweben verwendete Marker zur Bestimmung der Geschwindigkeit war Ornithindecarboxylase. ODC, das geschwindigkeitsbegrenzende Enzym in der Polyaminsynthese, dient als ein früher Marker für den Verlauf des G₁-Zellcyclus in proliferierenden Geweben und für die erhöhte Biosynthese in sekretorischen Geweben, als Antwort auf tropische und stimulierende Verbindungen. Nach Stimulierung in vivo entsteht innerhalb 4 Stunden eine maximale ODC-Aktivität; dies macht dieses Enyzm zu einem nutzvollen intrazellulären Marker für eine Einsicht in das Verhältnis zwischen Agonisten und Antwort der Zielgewebe. Die ODC-Aktivität von lymphoiden Geweben hängt anscheinend zusammen mit einer funktionellen Antwort auf das Immunsystem.

In einer typischen Testmethode werden männliche KFM-Ratten (150-175 g) einen Tag vor der Verabreichung des vollständigen Freund's Adjuvans auf analoge Weise wie oben beschrieben mit einer Verbindung der Erfindung behandelt. Nachher wurde die Verabreichung einmal pro Tag wiederholt. Nach zwei Tagen wurden die Tiere dekapitiert, die Gewebe entfernt und in flüssigem Stickstoff eingefroren. Die ODC-Aktivitäten (pmol/30 Min./mg Protein) wurden gemessen. Die ODC-Aktivität wurde bestimmt durch Messen des freigesetzten 14CO₂ aus L-(l-¹⁴C)-Ornithin wie von Snyder et al. im Proc. Natl.Acad.Sci.60: 1420 (1968) beschrieben.

Folgende Resultate wurden mit Verbindung C erhalten:

Wie hieraus hervorgeht, hemmt Verbindung C bei Dosierungen, wobei sie eine starke immunosuppressive Wirkung besitzt, z. B. bei 0,001 mg/kg Geschwindigkeit der Biosynthese. Bei höheren Dosierungen stimulierte Verbindung C die ODC-Aktivität im Nebennierenmark und die immunosuppressive Wirkung war geringer.

Toxizitätsdaten wurden für einige der Verbindungen der Erfindung veröffentlicht. Solche Daten können in Routine-Experimenten bestimmt werden.

Toxizitätsdaten für einige repräsentative Verbindungen

NTEL = No toxic effect level = höchste Dosis ohne erkennbare toxische Effekte
Akute Versuche wurden während 7 oder 14 Tagen nach i. v. bzw. p. o. Verabreichung durchgeführt, falls nichts anderes angegeben wird.

Verbindung A:akute LD₅₀ (Maus) 17 mg/kg i. v. 357 mg/kg p. o.
NTEL (4 Wochen) Ratte zwischen 0.2 und 0.57 mg/kg/Tag p. o.
NTEL (4 Wochen) Hund zwischen 0.02 und 0.06 mg/kg/Tag p. o. Verbindung B:Aehnlich wie Verbindung E Verbindung C:akute LD₅₀ (Maus) 45 mg/kg i. v. 69 mg/kg p. o.
NTEL (4 Wochen) Ratte 0.19 mg/kg/Tag p. o.
NTEL (4 Wochen) Hund 0.2 mg/kg/Tag p. o. Verbindung D:akute LD₅₀ (Maus) 44 mg/kg i. v. 992 mg/kg p. o.
NTEL (26 Wochen) Ratte zwischen 5 und 17 mg/kg/Tag p. o.
NTEL (26 Wochen) Hund 0.3 mg/kg/Tag p. o. Verbindung E:gut verträglich bei Verabreichung während 4 Wochen an Beagle-Hunde bei Dosierungen bis 3 mg/kg/Tag p. o.

Aufgrund ihrer immunosuppressiven Aktivität sowohl gegen eine primäre als eine sekundäre Immunantwort und gegen sowohl IgM als auch IgG-PFC, sind die Verbindungen der Erfindung nützlich für die Prophylaxe und Behandlung von Krankheiten und krankhaften Zuständen, welche eine Herabsetzung der Immunantwort verlangen, besonders solche, welchen über T- und/oder B-Zellen verlaufen. Sie können deshalb verwendet werden bei der Unterdrückung der Proliferation von Lymphozyten und Immunozyten, so z. B. zur Verhinderung der Abstossung von Transplantaten, z. B. bei Haut-, Knockenmark- und Nierentransplantationen, zur Behandlung und Verhinderung von "graft versus host" Krankheiten und besonders zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten.

Die Verbindungen sind nicht nur nützlich bei vaskulären autoimmunen Krankheiten, sondern auch bei verschiedenen Autoimmunkrankheiten, welche mit Geweben, anderen Organen und Plättchen zusammenhängen.

Spezifische Autoimmunkrankheiten, wofür die Verbindungen der Erfindung nützlich sind, umfassen solche, welche spontan auftreten (z. B. nicht durch Arzneimittel verursacht). Solche Autoimmunkrankheiten können durch spezifische Antikörper charakterisiert sein. Sie umfassen solche, für die die Behandlung mit Cyclosporin A vorgeschlagen oder bereits angewendet worden ist, z. B. aplastische Anämie, "pure red cell anaemia", idiopathische Thrombozytopenie (z. B. idiopathische thrombozytopemische Purpura), systemischer Lupus erythematodes, Polychondritis, Sklerodermie, Wegener Granulomatosis, Dermatomyositis, chronisch aktive Hepatitis, Myasthenia gravis, Psoriasis, Stevens-Johnson Syndrom, Sprue z. B. idiopathische Sprue, Morbus Crohn, Graves disease, Graves Opthalmopathie, Sarcoidose, Multiple Sklerose, primäre biliäre Zirrhose, primäre juvenile Diabetes (Diabetes Typ I), Uveitis, z. B. Uveitis posterior und anterior, nephrotisches Syndrom, Glomerulonephritis, interstitielle Lungenfibrose und Psoriasis Arthiritis.

Besonders interessante Indikationen sind Psoriasis und Arthritis, Multiple Sklerose, Diabetes Typ I, Graves disease, Uveitis und Myasthenia gravis.

Weiter sind sie nutzvoll bei der Behandlung von entzündlichen Zuständen, z. B. Arthritis und rheumatischen Erkrankungen mit einer Autoimmunkomponente und weiter bei der Behandlung von Protozoen-Infektionen, z. B. Malaria und Schistosomiasis.

Die Dosen für die oben erwähnten Verwendungen werden selbstständlich variieren je nach Art der Verabreichung, der verwendeten Verbindung, der speziellen zu behandelnden Erkrankung und der gewünschten Therapie. Im allgemeine werden jedoch befriedigende Resultate erzielt bei Dosierungen, welche eine lang anhaltende und kontinuierliche Prolaktinsekretionshemmung, z. B. bis weniger als 2 nanogramm Prolaktin pro ml Blutplasma hervorrufen oder bei ungefähr zweimal höheren Dosierungen, um eine plötzlichen Anstieg des Prolaktins zu verhindern. In der Tat sollten Dosen bis zu ein Zehntel der prolaktinhemmenden Dosen wirksam sein in der immunsuppressiven Indikation.

Bei höheren Säugetieren, besonders beim Mensch, liegt die erforderliche Tagesdosis für die Verbindungen der Erfindung im Bereich von ca. 0,001 bis 10 mg (z. B. 0,1 bis 10 mg) p. o. Eine Verabreichung dieser Dosis in Teildosen bis zu viermal pro Tag oder vorzugsweise in Retardform ist geeignet. Einheitsdosen enthalten z. B. von ca. 0,0002 bis ca. 10 mg der Verbindungen.

Die genaue zu verabreichende Dosis kann weiter von der relativen Wirksamkeit gegenüber Cyclosporin A in den oben erwähnten Tests abhängen. Auf dieser Basis wurde z. B. abgeschätzt, dass die Verbindung A in einer Dosis von 0,1 bis 1 gpro Tag, z. B. 0,5 mg p. o. zu verabreichen ist.

Die bevorzugte Verbindung ist Verbindung C. Diese Verbindung bewirkt eine lang anhaltende Prolaktinsekretionshemmung bei 0,01 mg bis 0,03 mg p. o. pro Tag. Erforderliche Dosen für eine immunosuppressive Wirkung liegen zwischen 0,005 und 0,03 mg p. o.

Die Verbindungen der Erfindung können als freie Basen oder als pharmazeutisch geeignete Säureadditionssalze verabreicht werden. Solche Zusammensetzungen sind allgemein bekannt und können auf herkömmliche Weise hergestellt werden. Die Verbindungen können auf jedem üblichem Wege, besonders enteral oder oral, z. B. als Kapseln oder Tabletten, oder, falls angemessen, parenteral als injizierbare Lösungen oder Suspensionen, verabreicht werden.

Nachfolgend beispielsweise eine Kapselzusammensetzung für die Verbindung A:

Verbindung A (0.1 mg Base) als Hydrochlorid  0.1092 mg Maisstärke175.3908 mg Laktose (200 mesh)120.0    mg Kieselerde  1.5    mg Magnesiumstearat  3.0    mg Total300     mg

Eine Kapsel für die bevorzugte Verbindung, nämlich Verbindung C, könnte beispielsweise wie folgt zusammengesetzt sein:

Verbindung C als Hydrochlorid  0.02725* mg Mannitol107.47275  mg Maisstärke 80.0      mg Kieselerde (Aerosil 200)  0.5      mg   188       mg

(* übereinstimmend mit 0,025 mg freie Base)

Kapseln mit geringeren Mengen der Verbindung C, z. B. 0,005 mg, können auf analoge Weise hergestellt werden.

Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein neues Therapieverfahren, nämlich das nebeneinander Verabreichen 1) eines Immunosuppressivums, z. B. eines Cyclosporins, besonders des Cyclosporins A und 2) eines niedermolekularen Chinolinderivates.

Weitere immunosuppressive Verbindungen sind z. B. Azathioprin, Cyclophosphamid, Steroide, z. B. Methylprednisolon und Ciamexon.

Als Cyclosporine wird eine Reihe von strukturell eigenartigen, cyclischen, poly-N-methylierten Undecapeptiden bezeichnet, die wertvolle pharmakologische Wirkungen, insbesondere immunosuppressive, entzündungshemmende und antiparasitäre Wirkungen aufweisen. Das als erste isolierte Cyclosporin, und auch die Stammverbindung dieser Reihe, ist der natürliche Pilzmetabolit Cyclosporin A, wovon Herstellung und Eigenschaften u. a. im US Patent Nr. 41 17 118 beschrieben werden.

Seit der ursprünglichen Entdeckung von Cyclosporin A wurden zahlreiche, natürliche Cyclosporine isoliert und identifiziert, und es wurden mehrere weitere in der Natur nicht vorkommende Cyclosporine durch Totalsynthese oder halbsynthetisch, oder auch durch modifizierte Kulturverfahren hergestellt. Die Cyclosporinreihe hat daher an Bedeutung gewonnen und nun beinhaltet sie z. B. die natürlichen Cyclosporine (Thr²)-, (Val²)- und (Nva²)-Cyclosporin (auch als Cyclosporine C, D bzw. G bekannt) sowie verschiedene semisynthetische Derivate, wie ihre Dihydroderivate (z. B. veröffentlicht in den US Patenten Nr. 41 08 985, 42 10 581 und 42 20 641), z. B. (Dihydro-MeBmt¹), (Val²)-Cyclosporin (auch als Dihydrocyclosporin D bekannt) und weitere natürlichen und synthetischen Cyclosporine, z. B. die in der euorpäischen Patentveröffentlichung Nr. 58 134 beschriebenen Verbindungen, z. B. [(D)-Ser⁸]- Cyclosporin.

Gemäss nun gebräuchlicher Nomenklatur für Cyclosporine werden diese in der vorliegenden Beschreibung und in den Ansprüchen mit Bezug auf Cyclosporin A bezeichnet. Dies erfolgt, indem man zuerst die Teile des Moleküls angibt, die von denen in Cyclosporin A abweichen, und dann durch Angabe des Wortes "Cyclosporin" die übrigen Teile, die denjenigen in Cyclosporin A entsprechen, charakterisiert.

Cyclosporin A entspricht der Formel I worin A für -MeBmt- [N-methyl-(4R)-4-but-2E-en-l-yl-4-methyl-(L) threonyl]-rest der Formel II steht worin x-y CH=CH (trans) bedeutet und B für α-Abu steht. Dementsprechend entspricht (Thr²)-Cyclosporin (= Cyclosporin C) der Formel I, worin A die oben erwähnte Bedeutung hat und B für Thr steht und entspricht (Dihydro-MeBmt¹), (Val²)-Cyclosporin (= Dihydrocyclosporin D) der Formel I, worin A für den Dihydro-MeBmt-rest der Formel II, x-y für CH₂-CH₂ und B für Val stehen).

Als "Stammverbindung" dieser Klasse hat Cyclosporin A bisher die meiste Aufmerksamkeit erhalten. Klinisch wurden die Cyclosporine in erster Instanz als immunosuppressive Wirkstoffe untersucht, besonders im Zusammenhang mit ihrer Verabreichung an Empfänger von Organtransplantaten, wie Herz, Lunge, Herz und Lunge kombiniert, Leber, Nieren, Pankreas, Knochenmark, Haut- und Hornhauttransplantaten und besonders allogene Organtransplantaten. Auf diesem Gebiet hat Cyclosporin A einen beachtenswerten Erfolg errungen und ist nun kommerziell erhältlich und wird allgemein klinisch verwendet.

Daneben hat es eine intensive Verwendung von Cyclosporin A bei Autoimmunkrankheiten und Entzündungskrankheiten, insbesondere bei Entzündungen mit einer eine Autoimmunkomponente enthaltenden Aetiologie, wie bei Arthritis und rheumatischen Erkrankungen, gegeben und Berichte und Resultate über in vitro Versuche, in Tiermodellen und in klinischen Experimenten sind in der Literatur weit verbreitet.

Ein weites Untersuchungsgebiet war die mögliche Anwendung als anti-parasitäre, besonders anti-protozoale Wirkstoffe, wobei als Verwendung besonders die Behandlung der Malaria und der Schistosomiasis vorgeschlagen wurde.

Weitere Cyclosporine zeigen die gleiche allgemeine pharmakologische Aktivität wie Cyclosporin A und mehrere Vorschläge für ihre Anwendung, besonders in einer oder anderer der oben erwähnten Indikationen, sind in der Literatur weit verbreitet.
Trotz des sehr grossen Beitrages von Cyclosporin A auf diesem Gebiet, besonders bei Transplantationen und trotz der allgemein günstigen Aufnahme und des Erfolges in der Klinik, ist seine in der Literatur berichtete Organtoxizität, z. B. Leber- und Nierentoxizität, ein unverkennbar negativer Aspekt. In der Klinik ist man im allgemeinen mehr um die Nephtrotoxizität besorgt und obschon es klar ist, dass in den relativ wenigen Fällen, wo Probleme entstehen, die Nephrotoxizität allenfalls dosis-abhängig, resersibel und nicht progressiv bei Langzeitbehandlung ist (klinisch könnte, wenn überhaupt, nur ein Problem auftreten in der Anfangsphase der Cyclosporin A-therapie, z. B. unmittelbar nach der Transplantation, wenn eine Differenzierung zwischen Abstossung und Nephrotoxizität schwierig ist) würden Mittel zur Reduzierung dieses speziellen Nebeneffekts und weiterer möglicherweise auftretenden verwandter Nebeneffekte der Organtoxizität einen bedeutenden Gewinn darstellen. Dies würde die Cyclosporin A-therapie nicht nur allgemeiner anwendbar machen, sondern auch die Notwendigkeit von Kontrollen, z. B. sofort nach einer Transplanation, sowie die gelegentlich notwendige gemischte immunosuppressive Therapie (z. B. Arzneimittelumstellung), z. B. bei Patienten, welche eine besonders starke nephrotoxische Reaktion zeigen, erheblich reduzieren.

Obschon andere Cyclosporine als Cyclosporin A bedeutend geringere toxische z. B. nephrotoxische Nebeneffekte als Cyclosporin A zeigen oder sogar ganz frei von solchen Nebenwirkungen sein könnten, würden Mittel, um diesem Problem entgegenzutreten, dort wo Organtoxizität in Zusammenhang mit klinischer Anwendung von Bedeutung ist oder sein könnte, ebenfalls einen bedeutenden Gewinn darstellen. Aehnliche Ueberlegungen, wie oben für die Cyclosporine angeführt, treffen auch zu für andere immunosuppressive Wirkstoffe. Verabreichung führt zu Nebeneffekten, z. B. Toxizitätsproblemen, Lymphom, Gewichtsverlust u. s. w.

Erfindungsgemäss wurde nun überraschenderweise gefunden, dass die immunosuppressive Wirkung von immunosuppressiven Verbindungen, z. B. Cyclosporinen, besonders Cyclosporin A, in unerwarteter und vorteilhafter Weise durch Verabreichung zusammen mit den Verbindungen der Erfindung, gesteigert wird. Besonders wurde gefunden, dass das nebeneinander Verabreichen von immunosuppressiven Wirkstoffen und den Verbindungen der vorliegenden Erfindung unerwarteterweise eine immunosuppressive Wirkung hervorruft, grösser als die Summe der Wirkungen der Einzelkomponenten (super-additiver Synergismus).

Das nebeneinander Verabreichen der Verbindungen der Erfindung und der immunosuppressiven Wirkstoffe ermöglicht deshalb ein wesentliches Herabsetzen der Konzentration des immunosuppressiven Wirkstoffes, welche sonst notwendig ist, um eine immunosuppressive Wirkung z. B. bei Abstossung eines Organtransplantats, bei Behandlung von Autoimmunkrankheiten sowie von Entzündungen mit einer eine Autoimmunkomponente vorweisenden Aetiologie, zu erreichen.

Als Folge der ermöglichten Dosisreduzierung des immunosuppressiven Wirkstoffes bietet die vorliegende Erfindung den bedeutenden Vorteil, Nebeneffekte wie Organschäden, hervorgerufen durch Verabreichung von immunosuppressiven Wirkstoffen bei immunosuppressiver Therapie, zu verhindern oder zu reduzieren.

Dementsprechend bezieht sich die vorliegende Erfindung auf ein Verfahren:

• 1. zum Hervorrufen einer Immunosuppression, z. B.
  • 1.1. zur Verhinderung einer Transplantatabstossung, z. B. bei Empfängern von Organtransplantaten,
    z. B. von einem der oben erwähnten spezifischen Typen oder
  • 1.2. zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten, z. B. zur Behandlung einer der oben erwähnten spezifischen Autoimmunkrankheiten, oder
• 2. zur Behandlung von Entzündungskrankheiten, besonders von Entzündungen mit einer eine Autoimmunkomponente vorweisende Aetiologie, z. B. Arthritis oder rheumatischen Erkrankungen, oder
• 3. zur Behandlung von protozoischen Infektionen, z. B. Behandlung der Malaria,
  bei einer Person, welche eine derartige Behandlung braucht, welches Verfahren dadurch gekennzeichnet ist, dass man dieser Person eine wirksame Menge
  • a) eines immunosuppressiven Wirkstoffes, z. B. eines Cyclosporins, z. B. Cyclosporin A oder Cyclosporin G und
  • b) eine Verbindung der Erfindung verabreicht.

Unter Berücksichtigung der synergetischen Interaktion der Komponenten a) und b) hinsichtlich ihrer Immunosuppression sollen die Mengen von a) und b), welche erforderlich sind für das oben unter 1) beschriebene spezielle Verfahren oder wenn es einen Zustand mit einer eine Autoimmunkomponente vorweisenden Aetiologie betrifft, gemäss dem speziellen oben unter 2) beschriebenen Verfahren, zusammen eine immunosuppressiv wirksame Menge darstellen. Falls eine restliche Organtoxizität oder andere Nebeneffekte des immunosuppressiven Wirkstoffs in Betracht kommen [z. B. trotz niedriger Dosierung von a) als Folge der Verabreichung von b)], sollte die erforderliche Menge von b) reichen, um solche restliche Toxizität zu verringern.

Für die speziellen, oben unter 2. und 3. definierten Verfahren, wird die erforderliche Menge a) eine antiphlogistisch wirksame Menge (für 2.) bzw. eine antiprotozoisch wirksame Menge (für 3.) enthalten und die erforderliche Menge b) wird eine solche Menge sein, die ausreicht, um eine Organtoxizität, sonst auftretend mit und zurückzuführen auf a), herabzusetzen.

Es ist offenbar, dass die vorliegende Erfindung auch betrachtet werden kann als ein Verfahren zur Verminderung der Organtoxizität, z. B. der Lebertoxizität oder besonders der Nierentoxizität einer Verbindung a) [d. h. zur Verminderung der Organschaden, z. B. Leber- oder besonders Nierenschaden, herbeigeführt durch eine Verbindung a)] bei einer Person, welche therapeutisch mit a) behandelt wird, welches Verfahren durch die Verabreichung der Verbindung b) gekennzeichnet ist.

Die synergetische Interaktion zwischen immunosuppressiven Wirkstoffen, z. B. Cyclosporin A, und den Verbindungen der Erfindung, z. B. Verbindung A, hinsichtlich ihrer immunosuppressiven Wirksamkeit kann in klinischen Versuchen und in Testmodellen bei Tieren, z. B. in der "localised graft-versus-host"-Reaktion bei der Ratte, durchgeführt gemäss der Methode, beschrieben von Ford et al., in Transplanatation 10, 258-266 (1970), gezeigt werden. In diesem Test führt die Behandlung mit einem immunosuppressiven Wirkstoff, z. B. einem Cyclosporin wie Cyclosporin A, zusammen mit einer Verbindung der Erfindung (wobei die Behandlung mit der Verbindung der Erfindung vor der Inokulation der Stimulatorzellen eingeleitet wird) zu einer Hemmung der "graft-versus-host"-Reaktion, welche grösser ist als die Summe der Aktivitäten, welche bei individueller Verabreichung beobachtet werden. Zusätzlich zeigt die Kombination von a) und b) eine Abnahme des Antikörpertiters gegenüber Schaferythrocyten in dem oben erwähnten Test I. Verabreichung von 36 mg/kg/Tag Cyclosporin A s. c. mit 0,1 mg/kg/Tag der Verbindung A führt zu einer 62,6%-igen Abnahme des IgM-Titers und einer 79,1%-igen Abnahme von IgG-Titers. Die Kombination von Cyclosporin A (60 mg/kg/Tag p. o.) und Verbindung C (0,1 mg/kg/Tag p. o.) führt zu einer Abnahme von 63% des IgM-Titers.

Geeignete Dosierungen für andere Verbindungen der Erfindung können anhand ihrer relativen Wirksamkeit als Prolaktinsekretionshemmer bestimmt werden.
Beispiele für solche Dosierungen liegen zwischen ca. 0,1 und 10 mg/kg/Tag s. c.

Ein weiterer Test zur Veranschaulichung der immunosuppressiven Wirksamkeit der Kombination wird nachfolgend beschrieben.

Test 6: Implantation eines neonatalen Herzgewebes in das Ohr bei der Maus

In diesem in vivo Test wurde die Zeitdauer bis zur Abstossung eines implantierten neonatalen Herzgewebes durch die Verbindung der Erfindung verlängert.

In einer Methode wurde bei C 57 BL-Mäusen (H-2^b) an der Ohrbasis ein kleiner Schnitt gemacht. Eine stumpfe oder feine Pinzette wurde benützt um die Deckhaut vom Knorpelgewebe zu trennen und so einen kleinen Hohlraum zu bilden. Eine Hälfte des Herzens einer 1 bis 2 Tage alten Balb/c-Maus (H-2^d) wurde dann in den Ohrbeutel implantiert. Das Ueberleben des Herzimplantats wurde 6 Tage nach der Implantation und nachfolgend jede Woche mit an beiden Seiten des Implantats angebrachten Mikroelektroden überwacht. Ein Dynograft-Rekorder wurde zur Aufzeichnung der vom Implantat ausgehenden elektrischen Aktivität benützt.

Als Endpunkt des Ueberlebens des Implantats wurde der Zeitpunkt des Erlöschens der elektrischen Aktivität genommen. Unbehandelte Tiere stiessen das Implantat nach 8 1/2 Tagen ab.

In diesem Modell wurde angenommen, dass eine wirksame Immunosuppression eingetreten war, falls die Zeitdauer bis zur Abstossung mindestens bis 17 Tage verlängert wurde. Die Zeitdauer bis zur Abstossung des Herz-allografts wurde durch die Verbindungen der Erfindung bei Verabreichung einer Dosis von 0,05 bis 0,5 mg/kg s. c. zusammen mit Cyclosporin A (18 mg/kg/Tag), verlängert. Mit Verbindung A bei einer Dosierung von 0,05 mg/kg/Tag s. c. waren 50% der Herz-allografts in einer Gruppe von 10 Tieren am 17. Tag noch aktiv.

Erfindungsgemäss können der immunosuppressive Wirkstoff und die Verbindung der Erfindung separat und zu verschiedenen Zeitpunkten im Laufe der Behandlung oder im wesentlichen zusammen verabreicht werden. So kann die Behandlung mit den Verbindungen der Erfindung vor der Behandlung mit dem immunosuppressiven Wirkstoff oder nach Beginn der Behandlung mit dem immunosuppressiven Wirkstoff, z. B. nachdem eine Abnahme der Krankheit erreicht worden ist, eingeleitet werden. Die vorliegende Erfindung muss daher so aufgefasst werden, dass sie alle solche Behandlungsvarianten umfasst und der Ausdruck "nebeneinander Verabreichen" soll dementsprechend interpretiert werden.

Bei Ausführung der erfindungsgemässen Methode kann ein Anfangen der Verabreichung der Verbindungen gemäss der Erfindung vor Behandlung mit dem immunosuppressiven Wirkstoff in einigen Fällen und abhängig z. B. vom Ziel der Therapie mit dem immunosuppressiven Wirkstoff und der körperlichen Verfassung des zu behandelnden Patienten, besonders vorteilhaft sein.

So kann ein Anfangen der Behandlung mit einer Verbindung der Erfindung bis zu 7 Tagen oder mehr vor der Behandlung mit dem immunosuppressiven Wirkstoff eine zusätzliche und vorteilhafte praeprotektive Wirkung gegen die Nebeneffekte des immunosuppressiven Wirkstoffs, z. B. gegen Organtoxizität, wie Nierentoxizität, erbringen.

Als Alternative können die Immunosuppressiva in normalen Dosen mit den Verbindungen der Erfindung verabreicht werden und z. B. die Cyclosporindosis während einigen Wochen, z. B. ein Monat nach Anfang der Therapie mit der Verbindung der Erfindung, herabgesetzt werden.

Die bei Ausführung der erfindungsgemässen Methode zu verabreichenden Dosen variieren selbstverständlich und sich abhängig von z. B. dem verwendeten Cyclosporin, der Art der Verabreichung, der zu behandelnden Erkrankung (z. B. ob die Behandlung eine Immunosuppression oder etwas anderes beabsichtigt, und im Falle der Immunosuppression, ob die Verwendung für Organtransplantation, Knochenmarktransplantation oder für die Behandlung von Autoimmunkrankheiten vorgesehen ist), sowie von der erwünschten Wirkung. Zusätzlich wird die Dosierung im allgemeinen eine individuelle Anpassung für jeden Patienten brauchen, damit über längere Zeit eine geeignete Konzentration des Arzneimittels im Serum hergestellt werden kann, z. B. durch anfängliche Verabreichung einer täglichen Start- oder "Aufladungs"-dosis und nachfolgende Anpassung der Dosis (im allgemeinen Herabsetzung der Dosis) in Uebereinstimmung mit der Konzentration im Serum, z. B. wie bestimmt durch ständige RIA-Messungen.

Im allgemeinen jedoch werden, falls eine immunosuppressive Behandlung verlangt wird (d. h. wenn es eine Steigerung der Aktivität durch die gemeinsam verabreichte Verbindung der Erfindung gibt), befriedigende Resultate bei Verabreichung in einem Dosisbereich von ca. 1 bis ca. 25 mg/kg/Tag (z. B. für Cyclosporin A von ca. 5 bis ca. 15 mg/kg/Tag) p. o. auf einmal oder in Teildosen 2 bis 3 mal pro Tag, erreicht. Falls eine i. v. Verabreichung verlangt wird, z. B. eine Verabreichung durch Infusion (beispielsweise in der Anfangsphase der Behandlung) sind im allgemeinen niedrigere Dosierungen, z. B. im Bereich von ca. 0,5 bis ca. 5,0 mg/kg/Tag (z. B. für Cyclosporin A von ca. 1 bis ca. 3 mg/kg/Tag als Anfangsdosis oder bis ca. 2 mg/kg/Tag als Erhaltungsdosis) erforderlich.

Bei Behandlung für nicht-immunosuppressive Ziele erhält man befriedigende Resultate bei Verabreichung in einem Dosisbereich von ca. 5 bis ca. 50 mg/kg/Tag (z. B. für Cyclosporin A von ca. 10 bis ca. 20 mg/kg/Tag während der Anfangsphase der Therapie und Herabsetzung zu einer Erhaltungsdosis von ca. 5 bis ca. 10 mg/kg/Tag) p. o. auf einmal oder in Teildosen 2 bis 3 mal pro Tag. Falls eine i. v. Verabreichung verlangt wird, z. B. Verabreichung durch Infusion (z. B. in der Anfangsphase der Behandlung) sind im allgemeinen niedrigere Dosierungen, z. B. im Bereich von ca. 1 bis ca. 10 mg/kg/Tag (z. B. für Cyclosporin A von ca. 3 bis ca. 5 mg/kg/Tag für die Anfangsdosis bis ca. 2,5 mg/kg/Tag für eine Erhaltungsdosis) erforderlich.

Bei Ausführung der erfindungsgemässen Methode werden die zu verabreichenden Dosen der Verbindungen der Erfindung ebenfalls variieren und sind abhängig von der relativen Wirksamkeit der ausgewählten Verbindung als Prolaktinskretionshemmer, von der Art der Verabreichung, von der angewendeten Cyclosporintherapie (z. B. ob eine immunosuppressive oder eine andere Cyclosporindosierung erforderlich ist) und von der Art des verwendeten Cyclosporins. Die Verabreichung kann enteral (z. B. oral) oder parenteral (z. B. i. m.) erfolgen oder die Verbindung kann als Retardform verabreicht werden. Die Dosen für die Verbindungen der Erfindung, z. B. für Verbindung C, sind wie oben für die alleinige Therapie angegeben.

Für die Verbindung A liegt eine geeignete Tagesdosis für orale Verabreichung im Bereich von ca. 0,1 bis ca. 1 mg/kg/Tag, auf einmal oder in Teildosen 2 oder 3 mal pro Tag verabreicht.
Orale und parenterale Dosierungsformen für die Cyclosporine, z. B. Cyclosporin A, und für die Verbindungen der Erfindung, geeignet bei Ausübung der erfindungsgemässen Methode sind an sich bekannt, z. B. aus der UK Patentanmeldung GB 20 15 339 und sind im Handel erhältlich.

Bevorzugte Indikationen sind u. a. Transplantationen, Diabetes Typ I, Uveitis posterior, rheumatiode Arthritis und nephorotisches Syndrom.

Gewünschtenfalls können kombinierte Dosierungsformulierungen der Verbindungen der Erfindung und der immunosuppressiven Wirkstoffe, z. B. der Cyclosporine, hergestellt werden. Als Basis dafür kann eine Trinklösungsformulierung von Cyclosporin A dienen, nämlich

200  mg Cyclosporin A
  1  ml Labrafil M 1944 CS*/Aethanol-Mischung (40 : 15 v/v)
  0,4 ml Olivenöl oder Maisöl

* Wie in GB 20 15 339 beschrieben

welche eine Verbindung der Erfindung als freie Base, z. B. 0,1 mg der Verbindung A oder 0,005 mg der Verbindung C enthalten kann. Diese Mischung kann als Trinklösung oder eingefüllt in weiche Gelatinekapseln, verwendet werden.

Claims (12)

1. Verwendung von niedermolekularen Chinolinderivaten zur Herstellung von immunosuppressiven pharmazeutischen Zusammensetzungen.

2. Verwendung von niedermolekularen Chinolinderivaten zur Herstellung von für eine immunosuppressive Therapie geeigneten pharmazeutischen Zusammensetzung für gemeinsame Verabreichung mit einem anderen immunosuppressiven Wirkstoff.

3. Verwendung von niedermolekularen Chinolinderivaten zur Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen, geeignet für die gemeinsame Verabreichung mit einem anderen immunosuppressiven Wirkstoff, um die durch den anderen immunosuppressiven Wirkstoff verursachten Nebeneffekte zu verringern.

4. Verwendung gemäss Anspruch 1, 2 oder 3, wobei die pharmazeutische Zusammensetzung für die Behandlung einer der nachfolgenden Krankheiten eingesetzt wird: Arthritis, Multiple Sklerose, Myasthenia gravis oder Psoriasis.

5. Verwendung gemäss einem der vorangehenden Ansprüchen, wobei das niedermolekulare Chinolinderivat ein niedermolekulares Ergolinderivat ist.

6. Verwendung gemäss einem der vorangehenden Ansprüchen, wobei das Chinolinderivat 6-n-Propyl-8α(N,N-diäthylsulfamoylamino)-ergolin I ist.

7. Verwendung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 4,wobei das Chinolinderivat aus den nachstehenden Verbindungen ausgewählt wird
(5R,8S,10R)-2,6-Dimethyl-8α-pivaloylamino-ergolin, (5R,8S,10R)-2-Chloro-6-methyl-8α-pivaloylamino-ergolin, Lisuride (= 3-(9,10-Didehydro-6-methyl-ergolin-8α-yl)-1,1- diäthyl-harnstoff), Pergolide (= 6-n-Propyl-8a-methylmercaptomethyl- ergolin-I), Terguride (= 3-(6-Methylergolin-8α-yl)-1,1-diäthyl- harnstoff), Proterguride (= 3-(6-n-Propyl-ergolin-8α-yl)-1,1-diäthyl- harnstoff), 2-Bromoterguride (= 3-(2-Brom-6-methyl-ergolin-8α-yl)-1,1- diäthylharnstoff), Metergoline (= (+)-N-(Carboxyl-)-1-methyl-9,10- dihydrolysergamine benzyl-ester), Dosergoside (= N-(1S,2R,3E), 2-Hydroxy-1-(hydroxymethyl)-3-heptadecanyl)-6-methylergolin-8-beta- carboxamid), FCE 21336 (= 1-Aethyl-3-(3′-dimethylaminopropyl)-3- (6-allyl-ergolin-8′-beta-carbonyl)-harnstoff) und GYKI-32887 (= 6-Methyl-8-(N-mesyl-N-2-azidoäthyl)ergolen.

8. Verwendung gemäss einem der Ansprüche 2 bis 7, wobei als immunosuppressiver Wirkstoff ein Cyclosporin eingesetzt wird.

9. Verwendung gemäss einem der Ansprüche 2 bis 8, wobei Cyclosporin A als immunosuppressiver Wirkstoff eingesetzt wird.

10. Pharmazeutische Zusammenstellungen enthaltend ein niedermolekulares Chinolinderivat und einen immunosuppressiven Wirkstoff.

11. Verwendung von niedermolekularen Chinolinderivaten als Immunosuppressiva.

12. Gemeinsame Verwendung von niedermolekularen Chinolinderivaten und anderen immunosuppressiven Wirkstoffen als Immunosuppressiva.