DE3490527C2

DE3490527C2 -

Info

Publication number: DE3490527C2
Application number: DE3490527A
Authority: DE
Inventors: Ueda Nagoya Aichi Jp Ryuzo; Ohta Nagoya Aichi Jp Kazuo
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1983-11-09
Filing date: 1984-03-23
Publication date: 1993-08-26
Anticipated expiration: 2004-03-24
Also published as: WO1985002188A1; DE3490527T; GB8517441D0; JPH0340B2; JPS60231699A; GB2163178A; US4855235A; GB2163178B

Description

Technisches Gebiet

Die Erfindung betrifft die in den Ansprüchen 1 bis 7 angegebenen monoklonalen Antikörper, die ein in menschlichen Leukozyten vorkommendes Antigen erkennen, sowie ein Verfahren zu ihrer Herstellung nach den Ansprüchen 8 und 9.

Stand der Technik

Durch kürzlich entwickelte Zell-Kultur-Verfahren wurde es möglich, monoklonale Antikörper gegen T-Zellen, B-Zellen und ihre einzelnen Subgruppen von menschlichen Lymphozyten herzustellen. Die einzelnen Zellgruppen wurden allmählich aufgeklärt; vgl. E. L. Reinherz et al., Cell 19 (1980), 821; K. A. Foon et al., Blood, Bd. 60 (1982), 1.

Funktionelle Zell-Subgruppen menschlicher Lymphozyten wurden unter Verwendung monoklonaler Antikörper, wie diese Subgruppen erkennen, aufgeklärt. Ferner wurden ihre Abnormalitäten bei verschiedenen Erkrankungen allmählich aufgeklärt.

Offenbarung der Erfindung

Als Ergebnis eingehender Untersuchungen zur Auffindung monoklonaler Antikörper, die geeignet sind zur Diagnose verschiedener Erkrankungen hämopoetischer Organe usw. haben die Erfinder monoklonale Antikörper gegen die in Leukozyten vorliegenden Antigene sowie gegen Erwachsenen-T-Zell-Leukämie (ATL) gefunden und die vorliegende Erfindung gemacht.

Die vorliegende Erfindung wird nachstehend im einzelnen erläutert.

Die vorliegende Erfindung stellt monoklonale Antikörper gegen die in Leukozyten und ATL-Virus (ATLV) vorliegenden Antigene zur Verfügung.

Die monoklonalen Antikörper der Erfindung schließen diejenigen ein, die mit Tp120, TsA, Ts145, Lp95, LsA, ATV19a und ATV19b bezeichnet werden.

Tp120 reagiert mit den meisten Zellen der T- Zell-Fraktion peripherer Blutlymphozyten, und sie erkennen die sogenannten T-Zellen (panT).

Die Antikörper von TsA und Ts145 erkennen Antigene, die in einigen Zellen der T-Zell-Fraktion und T-Subgruppen-Antigenen vorliegen.

Lp95 erkennt Pan-Leukozyten-Antigen und reagiert mit allen diesen Leukozyten, während Ls70 und LsA mit Monozyten und einigen anderen Leukozyten reagiert und Leukozyten-Subgruppen- Antigene erkennt.

Tp120 erkennt panT-Antigene. Tp120 reagiert mit T₂-Lymphom und ATL, die reife T-Zelltumore sind. Weiterhin reagiert Tp120 mit chronischer lymphatischer Leukämie vom B-Zell-Typ (B-CLL) (Tabelle VI).

TsA reagiert mit T-ALL, LL und mit reifen T-Zellentumoren, wie T₂-Lymphom, ATL usw.

Ts145 reagiert kaum mit peripheren Lymphozyten, geht jedoch charakteristisch eine spezifische Reaktion mit T-Zellstämmen ein, die längere Zeit in Gegenwart von IL-2 kultiviert worden sind.

Lp95 reagiert mit den meisten Leukozyten sowie auch mit praktisch allen Fällen von Leukämie und Lymphom.

LsA reagiert hauptsächlich mit Monozyten und T-Zellen, jedoch nicht mit T-Zellymphom. Es reagiert aber in hohem Ausmaß mit monozytischer Leukämie.

ATV19a- und ATV19b-Antikörper sind monoklonale Antikörper gegen die P19-Komponente des ATLV-Proteins. Sie erkennen charakteristisch Antigene, die in sich von ATLX-ableitenden Zuchtstämmen vorliegen, wie MT-1, MT-2 usw., und in ATL-Leukämiezellen, die kurze Zeit in Gegenwart von IL-2 gezüchtet worden sind.

ATV19a und ATV19b erkennen Peptide mit einem Molekulargewicht von 19×10³, die Viruspartikel-Proteine sind, und sie eignen sich zur Diagnose von ATL.

Die biologische Aktivität der monoclonalen Antikörper der Erfindung ist in den Beispielen 6 bis 13 gezeigt. Ein gemischter Maus-Hämadsorptionstest M-MHA, der in den Beispielen verwendet wird, wird nach folgender Methode durchgeführt, wobei die Anwesenheit oder Abwesenheit der Anhaftung von Markerzellen an Zielzellen untersucht wird, hergestellt durch Ablagerung einer Einzelschichtkultur oder von suspendierten Zellen auf eine Mikroplatte. Die Markerzelle wird durch Umsetzung von Schaferythrozyten mit Maus-Anti-Schaferythrozyten-Antikörpern und anschließende Umsetzung mit Kaninchen-Anti-Maus-Immunglobulin-Serum hergestellt.

Gemischter Maus-Hämadsorptionstest (M-MHA)

Der M-MHA wird nach einer Modifikation der Methode von Espmark und Fagreus (Acta. Pathol. Microbiol. Second. Suppl., Bd. 154 [1962], 258 bis 262) durchgeführt.

Die Markerzellen werden folgendermaßen hergestellt. Eine zweiprozentige Suspension von gewaschenen Schaferythrozyten wird mit einem gleichen Volumen einer 1000fachen Verdünnung von Maus-Anti-Schaf-Erythrozyten-Antikörper (hergestellt durch Immunisierung von BALB/c-Mäusen mit Schaferythrozyten) während 45 Minuten bei 24°C umgesetzt und sodann gewaschen. Die erhaltenen Schaferythrozyten werden als zweiprozentige Suspension mit einem gleichen Volumen einer 200fachen Verdünnung von Kaninchen-Anti-Maus-Immunoglobulin 45 Minuten bei 24°C umgesetzt und sodann zweimal gewaschen. Eine zweiprozentige Suspension der erhaltenen Schaferythrozyten wird als Markererythrozyten für den M-MHA verwendet.

Eine Methode für den M-MHA besteht in der Umsetzung der nachzuweisenden Zellen mit Hybridoma-Zellen, Kulturüberstand oder der Ascitesflüssigkeit von mit dem Hybridom geimpften BALB/c- Mäusen oder sich von BALB/c-ableitenden nackten Mäusen während 45 Minuten bei 24°C, Abtrennung der Antikörper durch Waschen, Umsetzung der Zellen mit 0,2% Marker-Scahf-Erythrozyten während 45 Minuten bei 24°C, vorsichtiges Waschen der Zellen mit einer Phosphat-gepufferten physiologischen Kochsalzlösung (PBS) und anschließendem Nachweis des Vorliegens oder der Abwesenheit von Rosettenbildung der Markererythrozyten unter einem Lichtmikroskop.

Die indirekte Fluoreszenz-Antikörpermethode (Cytoplasma- Fluoreszenz-Antikörper-Methode (Cy-IF) oder Membran- Fluoreszenz-Antikörper-Methode (M-IF)) wird folgendermaßen durchgeführt.

Cytoplasma-Fluoreszenz-Antikörper-Methode

Als Markerzellen werden 1-5×10⁴ Zielzellen verwendet, die auf einem Objektträger mit 95% während 10 Minuten fixiert worden sind und bei -70°C aufgehoben werden.

Als primärer Antikörper werden 25 µl Hybridoma-Zellkultur- Überstand oder die Ascitesflüssigkeit von mit Hybridomazellen geimpftem BALB/c-Mäusen oder sich von BALB/c-Mäusen ableitenden nackten Mäusen für eine Umsetzung bei 4°C oder 25°C während 30 Minuten verwendet. Nach dem Waschen mit PBS wird zur Umsetzung während 30 Minuten bei 25°C ein 20- bis 40fach verdünntes Fluoreszenz-markiertes Kaninchen-Maus-Immunglobulin GAM als sekundärer Antikörper verwendet. Das Ergebnis der Umsetzung wird durch Beobachtung des Vorliegens oder der Abwesenheit von Fluoreszenz unter einem Fluoreszenzmikroskop festgestellt.

Membran-Fluoreszenz-Antikörper-Methode

50 µl von 5×10⁵ Zielzellen/ml und 50 µl eines Hybridoma- Zellkultur-Überstandes oder Ascitesflüssigkeit von mit Hybridomazellen beimpften BALB/c-Mäusen oder sich von BALB/c- Mäusen ableitenden nackten Mäusen werden zur Umsetzung bei 4°C oder 25°C während 30 Minuten verwendet. Nach dem Waschen mit PBS wird ein 20- bis 40fach verdünntes Fluoreszenz- markiertes Kaninchen-Maus-Immunglobulin GAM als sekundärer Antikörper zur Umsetzung bei 25°C während 30 Minuten verwendet. Das Ergebnis der Umsetzung wird durch Beobachtung des Vorliegens oder der Abwesenheit von Fluoreszenz unter einem Fluoreszenzmikroskop bestimmt.

Die monoklonalen Antikörper der Erfindung können durch Immunisierung von Mäusen mit ATL-Zellen, ATLV-produzierenden MT-2-Zellen-ATL-Virus (ATLV) isoliert aus MT-2, Mischkultur- Lymphozyten, Protein-A-(PA)-aktivierten Lymphozyten usw., Gewinnung der Milzzellen und Züchtung der Hybridomazellen hergestellt werden, die durch Fusion der Milzzellen mit Maus- Myelomzellen erhalten worden sind.

Die Herstellung der Hybridomazellen kann nach der Methode von Ueda et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, Bd. 78 (1981), 5122 bis 5126, erfolgen. Diese Methode ist eine Modifikation der Methode von Milstein, Nature, 256 (1975), 495 bis 497. Zur Immunisierung können z. B. Mäuse des Stammes BALB/c, F1-Mäuse, die sich vom Stamm BALB/c ableiten, sowie Mäuse anderer Arten verwendet werden.

Zur Immunisierung werden 10⁷- bis 10⁸-Zellen oder 50 bis 500 µg Virus pro Maus (4 bis 8 Wochen alt, 20 bis 30 g) 2- oder 3mal in einem Abstand von 2 bis 5 Wochen verwendet. Die Züchtung der Mäuse und die Entnahme der Milzzellen wird in üblicher Weise durchgeführt.

Als Myelomzellen können beispielsweise MOPC-21 NS/1 (Nature, Bd. 256 [1975], 495-497), SP2/0-Ag14 (Nature, Bd. 277 [1979], 131-133), S 195/5, XXO. BU. 1 (J. Exp. Med., Bd. 148, [1978], 313 bis 328) verwendet werden. Die Milzzellen und Myelomzellen werden in einem Mengenverhältnis von 1 : 1 bis 10 : 1 miteinander vermischt. Die Fusion wird in einer Phosphatpufferlösung (pH 7,2 bis pH 7,4) durchgeführt, die etwa 0,85% NaCl, 10 bis 20 Volumenprozent Dimethylsulfoxid und Polyäthylenglykol vom Molekulargewicht 1000 bis 6000 enthält.

Zur Fusion werden die vereinigten Zellen 1 bis 3 Minuten bei 35 bis 37°C inkubiert.

Zur Selektion der fusionierten Zellen (Hybridomazellen) werden die Zellen selektiert, die in einem Basalmedium wachsen, das 1,3 bis 1,4 mg/dl Hypoxanthin, 18 bis 20 µg/dl Aminopterin, 375 bis 400 µg/dl Thymidin, 50 bis 100 µg/ml Streptomycin, 50 bis 100 Einheiten Penicillin, 3,5 bis 4,0 g/Liter Glutamin und 10 bis 20% fötales Kälberserum enthält.

Als Basalmedium kann z. B. RPMI1640-Medium oder Eagles MEM- Medium verwendet werden, das im allgemeinen zur Züchtung von tierischen Zellen benutzt wird.

Die Clonierung der fusionierten Zellen (Hybridoma-Zellen) muß mindestens dreimal nach der Grenzverdünnungsmethode durchgeführt werden.

Durch Züchtung der Hybridomazellen in gleicher Weise wie die übliche Züchtung von tierischen Zellen kann der Antikörper der Erfindung in einem Medium erzeugt werden. Beispielsweise wird bei der Züchtung von 2-5×10⁶ Hybridomazellen in einer Kulturflasche, die 10 bis 20 ml RPMI1640- Medium mit einem Gehalt von 50 bis 100 µg/ml Streptomycin, 50 bis 100 Einheiten/ml Penicillin, 3,5 bis 4,0 g/Liter Glutamin und 10 bis 20% fötalem Kälberserum in Gegenwart von 95% CO₂ und 5% O₂ bei 35 bis 37°C während 3 bis 7 Tagen der Antikörper in das Kulturmedium ausgeschieden und dort angereichert.

Bei der Transplantation der Hybridomazellen in die Bauchhöhle von Pristan-behandelten nackten Mäusen oder BALB/c- Mäusen und ihrer Vermehrung wird der Antikörper der Erfindung in der Ascitesflüssigkeit angesammelt. In diesem Fall werden 0,5 bis 1 ml Pristan (2,6,10,14-Tetramethylpentadecan) in die Bauchhöhle dieser Mäuse injiziert. Nach 2 bis 3 Wochen werden 5-10×10⁶ Hybridomazellen transplantiert. Gewöhnlich beginnt nach 7 bis 10 Tagen die Bildung von Ascitesflüssigkeit, die entnommen wird.

ATLV wird als Immunogen zur Herstellung der monoklonalen Antikörper ATV19a und ATV19b verwendet.

ATL-Zellen werden als Immunogen zur Herstellung von TsA verwendet, während ein Gemisch von gezüchteten Lymphozytenzellen als Immunogen zur Herstellung Tp120, Lp95 und LsA verwendet wird. Zur Herstellung von Ts145 wird als Immunogen PA-aktivierte Lymphozyten verwendet.

Die Antigenspezifität dieser monoklonalen Antikörper wird auf die in den Beispielen 6 bis 13 erläuterte Weise bestätigt.

Die monoklonalen Antikörper der Erfindung gehören zu folgenden Antikörperklassen: Tp120 und Lp95 gehören zur Klasse IgG2a, TsA zur Klasse IgM und sämtliche anderen zur Klasse IgG1. Das Molekulargewicht wird nach der Immunpräzipitationsreaktion durch Markierung mit [³H]-Glucosamin bestimmt.

Das Tp120-Antigen hat ein Molekulargewicht von 120 000 Dalton in HUT120-Zellen.

Bei der Molekulargewichtsbestimmung durch Immunpräzipitationsreaktion durch Markierung mit ¹²⁵J zeigt das Ts145- Antigen ein Molekulargewicht von 145 000 in NK3.3-Zellen.

Bei der Molekulargewichtsbestimmung durch Markierung mit ³⁵S-Methionin zeigt das Lp95-Antigen ein Molekulargewicht von 95 000 Dalton in HUT102-Zellen.

Bei der Molekulargewichtsbestimmung nach der Immunoblott- Methode zeigen sowohl ATV19a als auch ATV19b das gleiche Molekulargewicht von 19 000 Dalton wie der Viruspartikelbestandteil von ATLV.

Die Molekulargewichte der Antigene (TsA und LsA) konnten bis jetzt noch nicht bestimmt werden.

Immunpräzipitationsreaktion

Zielzellen (MT-2, MT-1 und HUT102) werden mit [³H]-Glucosamin markiert. Zur Markierung werden die Zellen in RPMI1640- Kulturmedium mit 15 µCi/ml ³H-Glucosamin (38 Curies/mMol) während 35 bis 40 Stunden gezüchtet.

Die Zielzellen HUT102 werden mit ³⁵S-Methionin markiert. Zur Markierung werden die Zellen in RPMI1640-Kulturmedium, das 500 µCi/ml ³⁵S-Methionin enthält, 8 Stunden gezüchtet. 5×10⁷ NK3.3-Zielzellen werden mit 0,5 µCi Na¹²⁵J in Gegenwart von 200 µg Jodogen markiert.

Diese markierten Zellen werden mit 0,1 bis 1 Volumenprozent NP-40 solubilisiert. Der Zellextrakt (1-10×10⁵ cpm) wird mit 1 bis 10 µl monoklonalen Antikörpern bei 4°C während 6 bis 12 Stunden umgesetzt. Danach werden die Zellen mit 5 bis 20 µl Kaninchen-anti-Maus-Immunglobulin als sekundärem Antikörper während 30 Minuten bei 4°C und eine weitere Stunde bei 4°C mit Staphylococcus aureus (Cowan-I-Stamm) umgesetzt. Es werden Immunpräzipitate erhalten. Die Präzipitate werden durch SDS- Polyacrylamid-Gelelektrophorese analysiert.

Immunoblott-Methode (H. Towin et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, Bd. 76 [1979], 4350)

Die Entwicklung wird durch Polyacrylamid-Gelelektrophorese durchgeführt. Die einzelnen Peptide werden auf eine Nitrocellulosemembran übertragen. Die Peptide werden mit einem monoklonalen Antikörper sowie als sekundärem Antikörper mit ¹³¹J-markiertem Anti-Maus-Immunoglobulin-Antikörper umgesetzt. Es folgt eine fluorographische Bestimmung.

Die monoklonalen Antikörper der Erfindung sind in den Aufsätzen des 42. Kongresses der Japan Cancer Society, S. 100, Nr. 290, und Symposium VI₂₃, Nr. 23, veröffentlicht von der Japan Cancer Society am 25. September 1983, beschrieben.

ATV-W26a und ATV-W26b entsprechen ATV19a und ATV19b der vorliegenden Beschreibung. LP-94, TP-W67 und TP-120, die in der Zusammenfassung der Japan Immunological Society, veröffentlicht am 10. November 1983, beschrieben sind, entsprechen Lp95, TsA und Tp120 in der vorliegenden Beschreibung.

Beste Ausführungform der Erfindung.

Beispiel 1 Herstellung der monoklonalen Antikörper ATV19a und ATV19b

Viruspartikel-Proteinfraktionen aus dem Kulturüberstand des ATL-abgeleiteten gezüchteten Stammes MT-2 (Gann, Bd. 71 [1980], 155) wurden als Immunogen verwendet (H. Yoshida et al., Primary and tertiary structure of nucleic acids and cancer research, M. Miwa et al., EDS, Japan, Sci. Soc. Press, Tokyo, 1982, S. 255 bis 294).

Diese Proteinfraktionen (Proteinmenge 0,45 mg) werden 6mal einem Gefrier-Auftau-Zyklus unterworfen. Dieser Zyklus besteht aus dem raschen Einfrieren in Trockeneis enthaltendem Äthanol und Auftauen in einem auf 37°C eingestellten thermostatisierten Behälter kurz vor der Immunisierung. Sodann werden sie mit 0,02 ml kompletten Freundschen Adjuvans vermischt und zur Immunisierung in den Rücken einer BALB/c-Maus (8 Wochen alt, 24 g) gespritzt. Die Immunisierung wird 4mal in einem Abstand von 4 Wochen durchgeführt. Am 4. Tag nach der letzten Impfung wird die Maus getötet. Die Milz wird in üblicher Weise entnommen, und es wird eine Zellsuspension hergestellt.

Sodann werden 10⁸ suspendierte Milzzellen und 2×10⁷ Maus- Myeloma-MOPC-21NS/1-Zellen in 0,2 ml Phosphat-gepufferter physiologischer Kochsalzlösung (PBS), die 42 Gewichtsprozent/ Volumen Polyäthylenglykol (Molekulargewicht 4000) und 15 Volumenprozent Dimethylsulfoxid (nach der Methode von Ueda et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, Bd. 78 [1981], 5122 bis 5126) fosioniert.

Fusionierte Zellen werden in HAT-Medium (RPMI1640-Medium [pH 7,2] mit 1,36 mg/dl Hypoxanthin, 19,1 mg/dl Aminopterin, 387 µg/dl Thymidin, 100 µg/ml Streptomycin, 100 Einheiten/ml Penicillin, 2 mMol Glutamin und 10% fötalem Kälberserum) nach der Methode von Uedat et al. selektiert.

Drei auf diese Art und Weise erhaltene fusionierte Zellen werden dreimal nach der Grenzverdünnungsmethode cloniert. Die erhaltenen drei Clone werden auf die nachstehend geschilderte Weise gezüchtet. Es werden Stämme erhalten, die erhebliche Mengen an monoklonalen Antikörpern bilden, die spezifisch mit ATL-verwandten Antigenen reagieren. Es werden 5×10⁶ Hybridomazellen in einem 150-ml-Kolben in Gegenwart von 95% CO₂ und 5% O₂ während 7 Tagen bei 37°C in 15 ml RPMI1640-Medium gezüchtet, das 100 µg/ml Streptomycin, 100 Einheiten/ml Penicillin, 3,8 g/Liter Glutamin und 10% fötales Kälberserum enthält.

Die monoklonalen Antikörper, die von den auf diese Weise erhaltenen Zellstämmen ATV19a und ATV 19b erzeugten Antikörper wurden mit ATV19a und ATV19b bezeichnet.

Die Zellinien wurden in die Bauchhöhle einer Maus transplantiert und gezüchtet. Dabei wurden jeweils 3 bis 10 mg/Liter ATV19a und ATV19b gebildet. 0,5 ml Pristan wird in die Bauchhöhle einer Maus injiziert. 3 Wochen später werden 5×10⁶ Hybridomazellen in die Bauchhöhle transplantiert. 10 Tage danach wird die Ascitesflüssigkeit gesammelt.

Beispiel 2 Herstellung des monoklonalen Antikörpers TsA

Zunächst wird eine Maus durch subkutane Gabe von 10⁷ ATL- Zellen immunisiert, die aus dem peripheren Blut eines ATL- Patienten isoliert worden waren. 3 Wochen später wird eine zweite Immunisierung in gleicher Weise durchgeführt. Eine dritte Immunisierung wird durch Injektion von 10⁷ ATL-Zellen in die Bauchhöhle durchgeführt. Vier Tage später wird die immunisierte Maus getötet, und die Milzzellen werden entnommen und der Zellfusion unterworfen. Auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 wird der monoklonale Antikörper TsA erhalten.

Beispiel 3 Herstellung der monoklonalen Antikörper Tp120, Lp95 und LsA

Am 4. Tag einer Mischkulturzüchtung werden Lymphozyten gesammelt und gewaschen. Eine Maus wird zunächst durch subkutane Gabe von 5×10⁶ der erhaltenen Zellen immunisiert. 3 Wochen später wird in gleicher Weise eine zweite Immunisierung durchgeführt. Eine dritte Immunisierung wird durch Injektion von 10⁷ Zellen in die Bauchhöhle durchgeführt. 4 Tage später wird die immunisierte Maus getötet, und die Milzzellen werden entnommen und der Zellfusion unterworfen. Auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 werden die vorstehend genannten monoklonalen Antikörper erhalten.

Beispiel 4 Herstellung des monoklonalen Antikörpers Ts145

Periphere Blutlymphozyten werden in Gegenwart von 10 µg/ml Protein A (PA) während 3 Tagen gezüchtet. Die aktivierten Lymphozyten werden gesammelt. Nach dem Waschen der Zellen wird eine Maus zunächst durch subkutane Gabe von 5×10⁶ der erhaltenen Zellen immunisiert. 3 Wochen später wird in gleicher Weise eine zweite Immunisierung durchgeführt. Sodann wird eine dritte Immunisierung durch Injektion von 10⁷ Zellen in die Bauchhöhle durchgeführt. 4 Tage später wird die immunisierte Maus getötet, und die Milzzellen werden entnommen und der Zellfusion unterworfen. Auf die gleiche Weise wie in Beispiel 1 wird der monoklonale Antikörper Ts145 erhalten.

Beispiel 5 Reaktionsfähigkeit des monoklonalen Antikörpers ATV19a gegenüber Zellen verschiedener kultivierter Stämme und menschlicher normaler Blutzellbestandteile

Zur Untersuchung der Reaktion der Zellenoberflächenantigene mit den vorstehend genannten monoklonalen Antikörpern wird der gemischte Maus-Hämadsorptionstest (M-MHA) durchgeführt. Die Reaktion der intraplasmatischen Antigene mit den Antikörpern wird nach der vorstehend beschriebenen indirekten Fluoreszenz-Antikörper-Methode untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengefaßt.

Tabelle I

Beispiel 6

Die Reaktionsfähigkeit des monoklonalen Antikörpers der Erfindung ATV19a gegenüber normalen und malignen haemopoetischen Organzellen wird nach der M-MHA-Methode bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle IV zusammengefaßt.

Tabelle IV

Tabelle IV (Fortsetzung)

Beispiel 7 Reaktionsfähigkeit von 5 Antikörpern, die menschliche Leukozyten differenzierende Antigene gegen normale haemopoetische Organzellen erkennen

Aus Tabelle V geht hervor, daß der Antikörper Tp120 mit 60 bis 80% der peripheren Blut-T-Zellen reagiert, jedoch nicht reagiert mit B-Zellen, Monozyten, Granulozyten usw.

Der Antikörper Tp120 reagiert jedoch nur mit 30 bis 40% der Thymozyten. Beide Antikörper erkennen panT-Zellantigen, haben jedoch eine unterschiedliche Spezifität.

Zwei Antikörper TsA und Ts145 reagieren mit einer Fraktion, die periphere Blut-T-Zellen enthält, reagieren jedoch nicht mit B-Zellen, Monozyten und Granulozyten, und sie erkennen das sogenannte T-Zell-Subgruppen- Antigen. Die Antikörper zeigen eine unterschiedliche Reaktivität gegenüber Thymozyten. Der Antikörper Ts145 reagiert nur mit einem sehr geringen Anteil der Zellen.

Der Antikörper Lp95 reagiert mit praktisch sämtlichen Gruppen der Leukozyten und scheint pan-Leukozyten-Antigen zu erkennen.

Tabelle V

Reaktionsfähigkeit von 5 Antikörpern, die menschliche Leukozyten differenzierende Antigene erkennen, gegenüber normalen haemopoetischen Organzellen

Beispiel 8 Reaktionsfähigkeit von 5 Antikörpern, die menschliche Leukozyten differenzierende Antigene erkennen, gegenüber verschiedenen haemopoetischen Organtumoren

Die Reaktionsfähigkeit gegenüber 60 Fällen verschiedener haemopoetischer Organtumoren werden untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengefaßt.

Der Antikörper Lp95, der das pan-Leukozyten-Antigen erkennt, reagiert mit praktisch sämtlichen haemopoetischen Organ-Tumorzellen. Der Antikörper Tp120, der das pan-T-Antigen erkennt, hat eine unterschiedliche Reaktionsfähigkeit. Andererseits reagiert der Antikörper Tp120 mit T₂-Lymphom-Zellen, einem reifen T-Zellenlymphom, und ATL-Zellen in hohem Ausmaß. Dieser Antikörper reagiert auch mit B-CLL.

Der Antikörper TsA, der das T-Subgruppen-Antigen erkennt, reagiert mit T-ALL und LL sowie mit T₂-Lymphom und ATL.

Der Antikörper Ts145 reagiert mit keinem der T-Zell- Lymphome in hohem Ausmaß.

Der Antikörper LsA reagiert mit normalen Monozyten sowie auch mit akuten monozytischen Leukozyten. Dieser Antikörper reagiert nicht mit T-Zell-Lymphomen, B-CLL usw.

Tabelle VI

Reaktionsfähigkeit von 5 Antikörpern, die menschliche Leukozyten differenzierende Antigene erkennen, gegenüber verschiedenen haemopoetischen Organtumoren

Claims

1. Monoklonaler Antikörper, der ein in menschlichen Leukozyten vorkommendes Antigen erkennt, dadurch gekennzeichnet, daß er mit T₂-Lymphomzellen, ATL-Zellen und B-Zell- Typ chronischen lymphatischen Leukämie-Zellen (B-CLL- Zellen) reagiert.

2. Monoklonaler Antikörper, der ein in menschlichen Leukozyten vorkommendes Antigen erkennt, dadurch gekennzeichnet, daß er mit T-ALL-Zellen, LL-Zellen und reifen T- Zell-Tumorzellen reagiert.

3. Monoklonaler Antikörper, der ein in menschlichen Leukozyten vorkommendes Antigen erkennt, dadurch gekennzeichnet, daß er mit T-Zellinien, die über einen langen Zeitraum in Gegenwart von IL-2 gezüchtet worden sind, kaum aber mit peripheren Lymphozyten reagiert.

4. Monoklonaler Antikörper, der ein in menschlichen Leukozyten vorkommendes Antigen erkennt, dadurch gekennzeichnet, daß er mit den meisten Leukozyten und praktisch allen Leukämie- und Lymphomzellen reagiert.

5. Monoklonaler Antikörper, der ein in menschlichen Leukozyten vorkommendes Antigen erkennt, dadurch gekennzeichnet, daß er mit Monozyten, T-Zellen und monozytischen Leukämiezellen, nicht aber mit T-Zell-Lymphomzellen reagiert.

6. Monoklonaler Antikörper, der ein in menschlichen Leukozyten vorkommendes Antigen erkennt, dadurch gekennzeichnet, daß er mit der P19-Komponente des ATLV-Proteins und mit Antigenen, die in sich von ATL ableitenden Zuchtstämmen sowie in kurzer Zeit in Gegenart von IL-2 gezüchteten ATL-Zellen vorkommen, reagiert.

7. Monoklonaler Antikörper nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß er mit Peptiden reagiert, die ein Molekulargewicht von 19×10³ aufweisen und Viruspartikel- Proteine sind.

8. Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikörper nach einem der Ansprüche 1 bis 7, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Hybridom mit der Fähigkeit zur Herstellung eines monoklonalen Antikörpers nach einem der Ansprüche 1 bis 7 züchtet, sich die in das Kulturmedium sezernierten Antikörper ansammeln läßt und die monoklonalen Antikörper aus dem Kulturmedium abtrennt.

9. Verfahren zur Herstellung monoklonaler Antikörper nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das Hybridom durch Fusion von Maus-Milzzellen, die mit ATL-produzierenden Stämmen, oder ATL und aktivierten Lymmphozyten immunisiert worden sind, mit Maus-Myelomzellen hergestellt wird.