DE3324593A1

DE3324593A1 - Zusammensetzung und verfahren zur stabilisierung radioaktiv markierter verbindungen mittels thiocarbonylierter diaethylentriamine

Info

Publication number: DE3324593A1
Application number: DE19833324593
Authority: DE
Inventors: Nathan R. Marshfield Mass. Tzodikov
Original assignee: New England Nuclear Corp
Current assignee: PerkinElmer Health Sciences Inc
Priority date: 1982-07-12
Filing date: 1983-07-07
Publication date: 1984-02-02
Also published as: FR2536998A1; GB2123412A; US4411881A; GB2123412B; JPS5924257A; CA1205070A; FR2536998B1; CH655853A5; JPH0211105B2; DE3324593C2; GB8316714D0

Description

NEW ENGLAND NUCLEAR CORPORATION, 549 Albany Street,

Boston, MA 02118 / USA

Zusammensetzung und Verfahren zur Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen mittels thxocarbonylierter Diäthylentriamine

Die Erfindung betrifft die Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen wie Aminosäuren und Nucleoside und betrifft insbesondere bestimmte thiocarbonylierte Amine, die zur Stabilisierung solcher radioaktiv markierter Verbindungen ve rwendet werden können.

Eine steigende Zahl radioaktiv markierter Verbindungen wird in der Forschung für die medizinische Diagnose und auf zahlreichen anderen Gebieten verwendet. Die radiolytische Zersetzung solcher Verbindungen ist jedoch ein dauerndes Problem geblieben. Ohne Zusatz einer Art von Stabilisator kann eine Lösung einer solchen Verbindung wegen Zersetzung innerhalb von Wochen oder eines kürzeren Zeitraums unbrauchbar werden. Diese radiolytische Zersetzung solcher Verbindungen ist ausgiebig untersucht wore¹ η. Ein Überblick über die Radiochemie von Aminosäuren wird beispielsweise in

einem Artikel von J. Liebster und J. Kopeldova in Radiation Biol», _1_, 157 (1964) gegeben, und die Selbstzersetzung radioaktiv markierter Verbindungen wird in Atomic Energy Review, K), 3-66 (1972) erörtert.

Obschon bestimmte spezielle Verbindungen zur Stabilisierung vorgeschlagen wurden, bestehen die Probleme noch fort. Der zweitgenannte Artikel gibt einen Überblick über die der Selbstzersetzung zugrundeliegenden Ursachen und Mechanismen, "die sehr komplex und in einigen Fällen nicht genau bekannt sind" (a.a.O., S. 3). Nach der Erörterung der Hauptmechanismen, unter denen die Zersetzung abläuft, wird auf S. 36 der Veröffentlichung allgemein festgestellt, daß Puffer wie Ammoniumbicarbonat zur Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen beitragen, daß aber Sorge dafür getragen werden muß, daß sichergestellt ist, daß der gewählte Puffer die spätere Verwendung der markierten Verbindung nicht stört. Phosphatpuffer würden beispielsweise Phosphorylierungsreaktionen stören. Andere Verbindungen, die verschiedentlich vorgeschlagen worden sind, sind auf S. 35 aufgeführt, und zwar u.a. Benzylalkohol, Glycerin, Cysteamin und Natriumformiat. Von jeder dieser Verbindungen wird jedoch die Schwierigkeit ihrer Entfernung als nachteilig berichtet. Eine andere erwähnte Verbindung ist Äthanol, von dem es heißt, es wirke bei vielen Verbindungen. Tatsächlich aber sensibilisiert Äthanol in einigen Fällen bestimmte Nucleoside für die Strahlungszersetzμng, und es hat sich somit gezeigt, daß es kein universelles Allheilmittel ist. Darüber hinaus muß das Äthanol, wenn es die Reaktion stört, bei der die radioaktiv markierte Verbindung verwendet werden soll, durch Verdampfen entfernt werden, was wiederum zur Zersetzung beiträgt.

Verschiedene Verbindungen werden in der Veröffentlichung

^OJ in Atomic Energy Review (a.a.O.) zur Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen, die oxidationsempfindlich sind, vorgeschlagen, und zwar u.a. Antioxidantien wie butyliertes Hydroxytoluol, butyliertes Hydroxyanisol und

-y Ϊ'

] Mercaptoäthanol. Die Unterdrückung oar Autoxidation ganz allgemein durch bestimmte Amine ist im Stand der Technik ebenfalls beschrieben, obgleich sie nicht zum Zwecke der Verwendung bei radioaktiv markierten Verbindungen erwähnt ist. Neuere Übersichten über die Heir-mng der Autoxidation stellen die folgenden Veröffentlichungen dar: R. Stroh, "Autoxidation", S.1O49, in: "Methoden der Organischen Chemie" (Houben-Weyl), herausgegeben von E. Müller und 0. Bayer, Vol. IV/Ib Oxidation II., Georg Thieme Verlag, 1975; und "Encyclopedia of Chemical Technology", Kirk-Othmer, Interscience Publishers, New York. Die Verwendbarkeit von sekundären Dialkylaminen mit voller a-p-nb^titution (d.h., daß sie keine Wasserstoffatome an u«n dem Stickstoff benachbarten Kohlenstoffatomen tragen) und sekundären Diarylaminen (auch ohne α-Wasserstoffatome) als Antioxidantien ist bekannt. Dagegen ist die Verwendung von primären, sekundären und tertiären Aminen, welche a-Wasserstoffatome enthalten, in diesem Zusammenhang nicht bekannt und es wurde tatsächlich angenommen, daß solche Amine hierfür unwirksam sind. Solche Antioxidantien besitzen viele der gleichen Nachteile wie die oben erwähnten anderen Verbindungen, wobei noch hinzukommt, daß sie im allgemeinen in den Lösungsmitteln unlöslich sind, die zum Lösen und Aufbewahren radioaktiv markierter Verbindungen, die für biologische Untersuchungen bestimmt sind, verwendet werden.

In der US-PS 3 876 550 sind Schmiermittelzusammensetzungen beschrieben, bei denen die Antioxidans- und Rostschutzeigenschaften solcher Schmiermitte!zusammensetzungen verbessert werden. Die Kombination an Zusätzen schließt Alkylendithiocarbamat ein, enthält aber keinen Hinweis auf die Verwendung solcher Verbindungen als Stabilisatoren für radioaktiv markierte Verbindungen.

*" V.S. Etlis et al., "Synthesis and Anti-Radiation Properties of Polymeric Dithiocarbamates", Kh iko-Farmatsevticheskii Zhurnal, Vol. 10, no. 4, S. 33-45, April (1976) beschreibt die Synthese und Herstellung von wasserlöslichen polymeren

Natrium- und Ammoniumdithiocarbamaten, weist darauf hin, daß diese Verbindungen als Strahlungsprotektoren verwendet werden können und berichtet über Tests mit solchen Verbindungen an Mäusen zum Schutz gegen Bestrahlung mit Co (1000 R, Intensität 26-30 R/s). Es gibt jedoch keinen Hinweis darauf, daß diese Verbindungen irgendeine Aktivität als Stabilisatoren radioaktiv markierter Verbindungen besitzen.

J. Barnes et al., Eur. J. Med. Chem. - Chimica Therapeutica, Nov. Dec. (1975) -10, No. 6, S. 619-622, beschreibt Natriumsalze von Alkenbisdithiocarbamaten und Aminoalkyldithiocarbamidsäuren zur Verwendung als Strahlenschutzmittel. Die Verbindungen wurden an Mäusen als Radio-Protektoren getestet. Besondere Aufmerksamkeit wird der Verbindung Nr. 11 in Tabelle 1 auf S. 620 geschenkt, deren Herstellung auf S. 621 in den Absätzen, die unmittelbar der Tabelle 2 folgen, beschrieben wird. Es wird angenommen, daß die Struktur der Verbindung 11 nicht korrekt wiedergegeben worden ist. Die Anwendung irgendeiner der dort beschriebenen Verbindungen zur Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen und Lösungen ist in Barnes et al. weder offenbart noch vorgeschlagen.

in der US-Patentanmeldung 105 272, die am 19. Dezember 1979 eingereicht wurde, und in der US-Patentanmeldung 178 609, die am 15. August 19 80 eingereicht wurde, ist die Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen beschrieben,

wobei Lösungen solcher Verbindungen eine Verbindung mit on
^ου einem im wesentlichen unlöslichen "Rückgrat" zugegeben wird, vorzugsweise ein Harz wie beispielsweise ein *Ionenaustauscherharz, an das eine quaternäre Ammoniumgruppe gebunden ist, oder ein wasserlösliches primäres, sekundäres oder tertiäres aliphatisches Amin, das die beab-35

sichtigte Verwendung für die bestimmte, radioaktiv markierte, zu stabilisierende Verbindung nicht stört.

] Die Erfindung betrifft ein Verfahrer zur Stabilisierung einer Lösung einer radioaktiv marki rten Verbindung, wobei dieser Lösung ein thiocarbonyliertes Diäthylentriamin wie beispielsweise N,N-bis-(2-Aminoäthyl)-dithiocarbamidsäure 5 oder Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin ind deren Salze zugegeben wird. Die Erfindung betrifft a^ch eine Lösung einer radioaktiv markierten Verbindung, die mit einer solchen Verbindung in Berührung gehalten wird, sowie - als gewerbliches Erzeugnis - eine versiegelte Phiole, die eine solche Lösung enthält.

Diese thiocarbonylierten Diäthylentriair^np können zur Stabilisierung von Lösungen einer bxext gefächerten Menge markierter Verbindungen verwendet werden, einschließlich von z.B. Aminosäuren, Nucleotiden, Nucleosiden, Kohlenhydraten, Arzneimitteln, Lipiden, Steroiden und dergleichen, die mit Tritiui
markiert sind.

14 ?S i,? 1?^ 111 die mit Tritium, C, S, P₁ I, I und dergleichen

Radioaktiv markierte Verbindungen können erfindungsgemäß durch verdünnte Lösungen eines Derivats der Diäthylentriamindithiocarbamidsäure oder eines ihrer löslichen Salze stabilisiert werden. Das Derivat der Diäthylentriamindithiocarbamidsäure kann leicht hergestellt werden durch Umsetzen von Diäthylentriamin mit Schwefelkohlenstoff. B ^sonders bevorzugte erfindungsgemäße Stabilisatoren sind Ν,Ν-bis(2-Aminoäthyl)-dithiocarbamidsäure, Di(2-dithiocarbamy läthyl) -amin, sowie deren Salze, z.B. die Natrium-, Kalium- und Ammoniumsalze.

Jede Menge erfindungsgemäßer Stabilisatorverbindungen ist vorteilhaft im Hinblick auf die Verhütung der Zersetzung radioaktiv markierter Verbindungen. Vorzugsweise liegt die stabilisierende Verbindung jedoch in Konzentrationen im *" Bereich von etwa O_rl niMolar bis etwa 100 mMolar vor, je nach der speziellen Aktivität der radioa! iv markierten Verbindung, der Konzentration der radioaktiv markierten Verbindung in der Lösung und dei*. speziellen Radioisotop, das

] zur Markierung verwendet wurde. Im allgemeinen wird eine Konzentration des Stabilisierungsmittels bevorzugt, die

2 3

das 10 bis 5x10 -Fache der Konzentration der markierten Verbindung ausmacht. Eine mit Tritium markierte Verbindung mit einer spezifischen Aktivität von 100 Ci/mMol und einer Konzentration von 1 mCi/ml enthält z.B. vorzugsweise eine Stabilisatorkonzentration im Bereich von etwa 10 bis etwa

3
20 mMol ( ein 10 -fächer Überschuß). Wenn die verwendete

32
Markierungssubstanz P ist, was zu einer spezifischen Aktivität von 1000 Ci/mMol bei einer Konzentration von 10 mCi/ml führt, ist, ganz entsprechend, eine Konzentration von 10 bis 20 mMo3^1des Stabilisators bevorzugt, d.h. ein 10 -fächer Überschuß.

Das erfindungsgemäße Verfahren kann mit jedem Lösungsmittel durchgeführt werden, das üblicherweise zur Aufbewahrung radioaktiv markierter Verbindungen verwendet wird, wie beispielsweise Wasser, Äthanol, Gemische aus Wasser und Äthanol in jedem Verhältnis, verdünnte Mineral- und organische Säuren sowie andere solche an sich bekannten Lösungsmittel. Einige der Diäthylentriamin-Derivate, die erfindungsgemäß verwendet werden können, bewirken jedoch keine Stabilität bei niedrigem pH. Beispielsweise ist die Verwendung von Ν,Ν-bis(2-Aminoäthylen)-dithiocarbamidsäure und Di ^-thiocarbamyläthyl) amin infolge Instabilität bei pH-Werten von weniger als 6 begrenzt. Deshalb wird im allgemeinen ein pH-Wert von 6 oder mehr bevorzugt.

Die Erfindung kann dazu benutzt werden, die Zersetzung von radioaktiv markierten Verbindungen zu verhindern, die mit irgendeinem der Radionuclide, die hierzu verwendet werden,

14 32 markiert worden sind, einschließlich Tritium, C, P,

P, S sowie der verschiedenen Radioisotope des Iods, einschließlich I und I.
35

Die radioaktiv markierte Verbindung kann jede dieserVerbindungen sein, die der radiolytischen Zersetzung unterliegen, beispielsweise radioaktiv markierte Aminosäuren,

332A593

Catecholamine, Nucleotid-Triphosphate , Nucleoside, Proteine, Peptide, Kohlenhydrate, Arzneimittel Lipide, Fettsäuren, Steroide und dergleichen.

Typische Beispiele dieser Art von Verbindungen, die unter den Ausdruck "Arzneimittel" fallen, l. .nd: (+) eis, trans-[2-C]-Abszisinsäure; Acetaminophen; N-[9- C]-Acetyl-2-aminofluoren; Acetyl-concanavalin A; N- [2-Aminoäthyl-2- H]

14 -Acetyl-5-methoxytryptamin; [Carboxyl- C ]-Acetylsalicyl-

säure; [¹²⁵I ]-Glycoproteid-a-Säure; ACTH; [¹²⁵I ]-(Human-} -

125 Adrenocorticotropes Hormon; ADTN; [ I ]-Rinder se rumalbumin; Allylnormetazocin; Alprenolol; Amethopterin· p-[3,5- H]-Aminoclonidin; 2-:- [5,8- H ]-Amino-6,?-dihydroxy-1,2,3,4-

14 tetrahydronaphthalin; iDiraethylamin- *C ]-Aminopryrin;

3-[5-¹⁴C]-Amino-1,2,4-triazol; D-[³H(G)]-Ämphetaminsulfat; [Tyrosyl-3,5- H(N)]-Angiotensin 111 (4-L-isoleucin; [Tyrosyl-3,5- H(N)]-Angiotensin 11 (5-L-isoleucin; [Tyrosyl- I ]-(monoiodiert)-Angiotensin 11 (5-L-isoleuciri); [Tyrosyl- I]-(monoiodiert)-Angiotensin 1 (5-L-isoleucin} [N-Methyl- C]-Antipyrin; L- (-)- [8 ,9- H ]-Apomorphin; L-[1- C ]-Ascorbinsäure; y-[ C (U) ]-Benzolhexachlorid; [ C(U) ]-Benzidin; [1,3,6- H !-Benzo La]pyren; Rinderserumalbumin; [2,3-Prolyl-3,4-³H(N) ]-Bradykinin; [(8-Tyrosyl-¹²⁵I]-Bradykinin (8-tyrosin)-triacetat; [¹²⁵I ]-a-Bungarotoxin; [1-methyl-¹⁴C ]-Cof fein; Capsaicin; DL-[3,6- H(N) ΙΟ arazolol; ^Öichloracetyl-1,2 C!-Chloramphenicol; [Ring-3- Cl-Chloroquin-di-p-phosphatsalz; [Benzol-Ring- Ή 1~ -Chlorpromazin-Hydrochlorid; [4- H I-Clonidin-Hydrochlorid; laevo-jBenzoyl-3,4- H(N) HCocain; I H(G) 1-Coenzym A;

[Ring C, Methoxy-¹⁴C !-Colchicin; [Ring C, Methoxy-³H 3-Col-

3 125

chicin? [ H(G) !-Con can aval in A; [ I !-Con can aval in A; N-[Acetyl- H!acetyliertes Concanavalin A; 5-[2- c!-Cyclo-

Q *3

hexenyl-3,5-dimethylbarbitursäwre; N -[Adenin-2,8- Hi-Cyclo-

Λ A O

hexyladenosin; [Ring-4- C !-Cyclophosphamid; [4- H !-Cytooc 3

chalasin B; [ H(G) !-Daunomycin; Daunorubicin; Desipramin; [2,4,6,8- H y-Desmethylimipramin-Hyc -ochlorid; Diazepam; 2- ( [2,6-Dichloro-4-amino]phenylimino) -imidazolin; 1,3- [Phenyl-4- H ]-Diäthyl-8- )heny!xanthin;

laevo-LPropyl-1,2,3- Hl-Dihydroalprenolol-Hydrochlorid;

3
laevo-[Ring, Propyl- H(N)J-Dihydroalprenolol-Hydrochlorid;

[Nonanamid-6,7,9- H(N)]-Dihydroalprenolol;[9,10- H(N)]-

Dihydro-a-ergocryptin; [N-methyl- H]-Dihydromorphmn;

3 3

a-[8,10- H]-Dihydropicrotoxihin;[21,22- H]-Dihydrosbrychnin;

Dilantin; (WB4101)-2-[Phenoxy-3- H(N)]-E,6-Dimethoxypheno-

1 4 xyäthyl]aminoäthyl-1 , 4-benzodi-oxan; 1 ,1 2-[Dimethyl- C]-

Dimethylbenz(a)anthracen; (-)-5-[Buty1-2,3,4- H]-(1,3-

1 4 Dimethylbutyl)-5-äthylbarbitursäure; N,N-[Methyl- C]-1 4 Dimethylhydrazin-Dihydrochlorid; N,N-[ C(U)]-Dinitroso-

piperazin; [2-Methyl- H]-L(+)-cis-Dioxolan; 5,5-[4- C]-Diphenylhydantoin; 5,5-[Phenyl-4- H(N)]-Diphenylhydantoin;

(-)-DMBB und (+)-DMBB; [Benzol-Ring- H ]-Domperidon;

3 3

[Methyl- H]-Doxepin; [Tyrosyl-3,5- H]-Enkephalinamid (2-D-Alanin-5L-methionin); [Tyrosyl-3,5³H(N)]-Enkephalin (2-D-Alanin-5-D-leucin) ; [Tyrosyl-3 ,5-³H (N) ]-Enkephalin

125
(5-L-Leucin); [ I]-Enkephalin (5-L-Leucin); [Tyrosyl-3,5-³H(N)]-Enkephalin (5-L-Methionin);[¹²⁵I]-

125
Enkephalin (5-L-Methionin); [ I]-Epidermis-Wachstums-

faktor; [Äthyl-2- Hl-Äthyl-ß-carbolin-S-carboxylat;

Xthylketazocin; [9- H]-Äthylketocyclazocin; 5-[Ring-2- Cl-Äthyl-5-(l-methylbutyl)barbitursäure; N-[Äthyl-1-¹⁴Cl-

Äthyl-N-nitrosoharnstoff; 5-[Ring-2- C]-Äthyl-5-phenyl-

3
barbitursäure; 5-[ H(G)]-Äthyl-5-phenylbarbitursäure; [¹²⁵l]-Fibronectin; [Methyl-³H]-Flunitrazepam; 5-[6-¹⁴C]-

3 125

Fluorouracil;[Äthylen- H]-Flurazepam; [ l]-Gelatin; [3,4-³H(N)!-Gibberellin A₁; [¹²⁵I]-(monoiodiert)-Glucagon; Gonadotropin freisetzendes Hormon; [ H(G)]-Haloperidol; l1-¹ cJ-Halothan; I ³H(G) J-Heparin-Natriumsalz; 2,4,5,2'.,i4',5'-[¹⁴C(U) ]-Hexabrombiphenyl; [^{1 4}C (U) ]-Hexachlorbenzol; 2,4,5,2',4',5'-[¹C(U)]-Hexachlorbiphenyl;

[Glycin-1- C]-Hippuryl-L-histidyl-L-leucin;[Ring, Methy-

O -ι or

lengruppen- H(N) ]-Histamin-Dihydrochlorid; [ I ]-Human-

125
Chorionic-Gonadotropin; [ I ]-Human-Wachstumshormon; p-[³H(G) ]-Hydroxyacetanilid; p- [7-³H ]-Hydroxybenzyliso-

125
proterenol; [ I ]-Hydroxybenzylpindolol; C 125,211;

[2,4,6,8- H]-Imipramin-Hydrochlorid; t N-Methyl- H ]-Imipra-

12 5
min-Hydrochlorid; t I]-(monoiodiertes)-Schweineinsulin;

] 4-[N-Methyl- C]-Iodoantipyrin; 4-\ ²⁵I]-Iodoantipyrin;

131 125

4-[ I]-Iodoantipyrin; [ I ]-Iodoh/droxybenzylpindolol;

3 14

[ Hj-Isoguvacin-Hydrochlorid; [ C]-Isosorbid-dinitrat;

1 4
[Carbonyl- Cl-Lidocain-Hydrochlorid; Lindan; LSD; [Pyroglutamyl-3,4-H]-Luteinisierende^c Hormon freisetzendes

1 25
Hormon; [ I]-Luteinisierendes Hormon freisetzendes Hormon;

[N-Methyl-³H]-Lysergsäure-diäthylamid; [L-Prolin -2,3,4,5-³H] -Melanotropin-Freisetzung inhibierendes Hormon; Melatonin;

3
Mepyramin; laevo-[1- H]-Methadon-Hydrobromid; [L-Glutamyl-3,4-H]-Methotrexat; Methscopolamin; [Methyl- H ]-Methyi-ßcarbolin-3-carboxylat; 3-[6- C]-Methylcholanthren;

ο 203

N- [Methyl- H ]-Methyl-D-asparaginsäure; [ InJ J-Methylqueck-

1 A

silberchlorid; N-[Methyl- cl-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin; N-[Methyl- cl-Methyl-N'-nitroso-p-toluolsulfonamid; N-[Methyl- C 1-Methyl-N-nitrosoharnstoff; N-[Methyl- H ]-Methyl-N-nitrosoharnstoff; L-N -1-[Adenin-2,8H,äthyl-2-H ]-Methyl-2-phenyläthyladenosin; Methyl-N-vanillyl-nonanamid; 2-Methyl-4-trimethylammoniumethyl-1,3-dioxolan-iodid; [N-Methyl- H ]-Mianserin-Hydrochlorid; MIF; [N-Methyl- H !-Morphin; MTX; [Methylen -³H(N) ]-Muscimol; [N-Allyl-2, 3-³H]-Naloxon; [3 ,11-Tyrosyl-3 ,5-³H (N) ]-Neurotensin; [Pyrrolidin-2- C]-Nicotin; DL- [Pyrrolidinyl- H (N)] Nicotin; [Ring- H ]-Nipecotinsäure; [5-Methyl- H ]-Nitrendipin; N- [Äthyl-1-¹⁴C]-Nitrosodiäthylamin; N- [Methyl-^{1 4}C ]-Nitrosodimethylamin; N-[ Äthy1-1- C ]-Nitrosoäthylmethylamin; N..trosomethylharnstoff; N¹ [Pyrrolidin-2- C ]-Nitrosonornicotin; N-[2,6- C ]-Nitrosopiperidin; N-[2,5,- C]-Nitrosopyrrolidin; N-Methyl-scopolamin; [ Methyl- H ]-0xotremorin-M-Acetat; D-[1 - C I-Pantothensäure-Natriumsalz; Paracetamol; [Phenyl- C ]-Parathion; [phenyl-3, benzyl- H 3-P^Pargylin-Hydrochlorid; Pentobarbital; [Piperidyl-3,4- H (N) ]-Phencyclidin; Phenobarbital; [phenoxy- H(N)] -Phenoxybenzamin-Hydrochlorid; Phenylisopropyladenosin; Phenytoin; [20-³H(N) ]-Phorbol-12,13-dibutyrat; [20-³H(N)] -Phorbol-12-

° myristat-13-acetat; [Ring- H ]-Piperiin-4-sulfonsäure;

3 125 125

[Turoyl-5- H]-Prazosin; [ I ]-Humai Prolactin; [ I ]-Ratten-Prolactin; Prolyl-leucyl-crlycinamid; L-[ 4- H ]-Propranolol; [Propyl-2,3- H ]-Propyx -ß-carbolin-3-carboxylat;

L-(-)[N-propyl- H(N)]-Propylnorapomorphin; [Pyrindinyl-5-

3 3

H]-Pyrilamin; L-[Benzil-4,4- H(N)]-Chinuclidinyl-benzilat;

[Methyl- H]-Rauwolscin; [Benzoyl- H(G)]-Reserpin; Reverse T3; [N-Methyl- H]-RO5-4 864; [7-¹⁴C]-Salicylsäure; [N-Methyl- H] -Scopolamin-methyl-chlorid; [N-Allyl-2,3-³H3-SXF-10,047; [ l]-monoiodiertes Cl-Tyrosin) Soraatostatin; |Benzol-Ring-³H|- Spiperon; Spiroperidol; [ iJ-Substanz P (8-L-Tyrosin);

3 3 fi

N-[propionat-2,3- H]-Succinimidyl-propionat; [ sJ-Sulfanilsäure; [ s]-Taurin; [7- H(N)]-Tetracyclin (freie Base); 4,5,6,7-[5,7-³H]-(THIP)-Tetrahydroisoxazolo(5,4-c)pyridin- -3-ol; [8- C]-Theophyllin; E I1-thyreotropes Hormon (human); tL-Prolin -2,3,4,5- H(N) ]-Thyrotropin freisetzendes Hormon; tL-Histidyl-4- H(N),L-prolyl-3,4- H(N)]-

Thyrotropin freisetzendes Hormon (3-Methyl-histidin ); [ I]-(monoiodiertes)-Thyrotropin freisetzendes Hormon;

L-[¹²⁵I!-Thyroxin; tMethyl-³H]-(C 125,211)-Tiotidin;

125 Trifluor-2-bromchloräthan; L-3,5,3'-[ 11-Triiodothyronin; L-ß^'/S'-E i]-(Reverse T3)-Triiodothyronin; dextro-[13¹-H(N)]-Tubocurarinchlorid; Valium (Warenzeichen von Hoffmann-LaRoche); [ I]-Vasopressin(8-Arginin ); [1-³H(N)!-Vitamin A₁(all-trans); WB-4101; Xylocain;

3
[Methyl- H!-Yohimbin.

Die erfindungsgemäßen stabilisierenden Verbindungen sind besonders wirksam in bezug auf beispielsweise radioaktiv markiertes Methionin, Deoxyguanidintriphosphat und Enkephalin.

Üblicherweise werden radioaktiv markierte Verbindungen in geschlossenen Phiolen gewerblich vertrieben, die eine Lösung der speziellen radioaktiv markierten Verbindung enthalten. Die stabilisierende Verbindung wird einfach einer Lösung der radioaktiv markierten Verbindung zugefügt, die üblicherweise in einer sterilisierten versiegelten "³^ Phiole vertrieben wird, woraus die stabilisierte Verbindung mittels einer Spritze entnommen wird.

] Die Erfindung wird anhand der folgen 3en Beispiele weiter erläutert, welche nur beispielhafte ^usführungs- und Anwendungsformen der Erfindung darstellen.

Beispiel 1 - Stand der Technik

S-Methionin wurde mit verschiedenen bekannten Stabilisatoren aufbewahrt, und die radiochemische Reinheit wurde in Abhängigkeit von der Zeit gemessen. Das Methionin stammte aus Standard-Partien des Produkts "NEN G-OO9H" (NEN = New England Nuclear) mit 10 mCi/ml in wäßrigem, 10 m-molarem 2-Mercaptoäthanol mit eine" spezifischen Aktivität von mehr als 1000 Ci/mMol. Die radiochemische Reinheit wurde mittels einer Hochdruck-Flüssigchromatographie (HPLC)-Trennung von den Verunreinigungen bestimmt, wonach die die Säule verlassende Radioaktivität quantisiert wurde. Die aufgeführten Reinheitswerte stellen den Durchschnitt von jeweils drei Beladungen und Reinheitsbestimmungen dar. Die Tabellen 1-3 zeigen die Stabilisierung, die durch bekannte Stabilisatoren bei den angegebenen Temperaturen erreicht wird.

Tabelle 1 - Lagerung bei -20 C

Probe

Verc leich

Tris.HCl pH 7

(1 molar)

Ausgangs Reinheit

95

Anzahl Durchschnittl. Durchschnittl. Tage Reinheit (%) Änderung der

Reinheit (%)

89 78 95 93

17 0 2

Tabelle 2 - Lagerung bei 4°C

Probe Ausgangs-	Anzahl	Durchschnittl	.Durchs chnittl.
Reinheit	Tage	Reinheit (%)	Änderung der
(%)			Reinheit (%)
Vergleich 92	5	71	21
	11	57	35
	13	53	39
Polyäthylen- 92	6	84	8
imin
mittl.Moleku	11	76	16
largewicht: 75,000;	13	68	24
75 mMolar in
Stickstoff

O,

Tabelle 3 - Lagerung bei -20 C

Vergleich	92	7	80	6
		29	71	21
Tris-HCl (pH 7; 50	mMo3ar) 92	7	88	5
		29	29	12

Beispiel 2 Herstellung von thiocarbony1iertem Diäthylentriamin

Zu einer Lösung von Diäthylentriamir 'DETA) (1,8 ml, 18 mMol) in wäßrigem NH.OH (1,5%, 20 ml) wurde unter Rühren Schwefelkohlenstoff (2 ml, 33 mMol) zugegeben. Die erhaltene, aus 2 Phasen bestehende Suspension wurde 4 Stunden gerührt, dann mit Wasser (10 ml) verdünnt und filtriert, was rohes, thiocarbonyliertes Diäthylentriamin als weißen Feststoff ergab. Das Rohmaterial wurde mit Isopropanol ( 2 χ 100 ml) gewaschen und über Nacht unter Vakuum ( 'G i:/20 mm) getrocknet, wobei das thiocarbonylierte Diäthylentriamin (1,83 g; Schmelzpunkt 120-12i°) zurückblieb. Das Material wurde mittels eines IR (KBr)-Spektrums aufgrund der Bande

-1

bei 1460-1470 cm (Br,S), welche das Dithiocarbamat anzeigt, charakterisiert. Das C-Kernreso nanzspektrum (d6-DMS0) zeigte Reso nanzen bei 203,3, 182,9, 182,6 ppm (Verschiedung nach kleineren Feldern in bezug auf Tetra-™ methylsilan), die Dithiocarbamat anzeigen. Das UV-Spektrum (H₂O) bestätigte die vorstehenden Annahmen.

Analyse:

Gefunden: C: 29,24 H: 6,48 N: 18,34 S: 41,42

Las Material scheint ein Gemisch aus Diäthylentriamindithiocarbamiäsäure-Derivaten zu sein, die durch 1:1- und 2:1-Addition von Schwefelkohlenstoff an DETA gebildet wurden und zu einem durchschnittlichen Molekulargewicht

von 217 führten. Eine 4,5 mg/ml enthaltende Zusammensetzung stellt somit eine Lösung mit einer Konzentration von 20 mMol dar.

Das Material ist nur wenig löslich in H„O und bei saurem

-γ- is.

S-Methionin wurde in Lösung mit dem thiocarbonylierten Diäthylentriamin aufbewahrt, und die radiochemische Reinheit wurde in Abhängigkeit von der Zeit, wie im Beispiel 1, gemessen. Die Tabellen 4 und 5 zeigen die Wirksamkeit der

erfxndungsgemaßen Verbindung in bezug auf die Stabilisierung .

Tabelle 4 - Lagerung bei -20°C

10	Probe Ausgangs- Reinheit	15	Tricin (pH 7; 88 25 mMolar	Anzahl Tage	Durchschnittl. Reinheit (%)	Durchschnittl. Änderung der Reinheit (%)
Vergleich 189	Thiocarbony- 92 liertes Diäthylen- 20 triamin (4,5 mg/ml; pH7)	6	86	3
	26	78	11
6 26	OO VD 00 OO	0 2
6 26	92 90	0 2

Tabelle 5 - Lagerung bei 4 C

25	Probe Ausgangs- Reinheit %	Anzahl Tage	Durchschnittl. Reinheit (%)	Durchschnittl. Änderung der Reinheit (%)
Ο/Ί	Vergleich 94	2 4 7	77 64 48	17 30 46
30	Thiocarbony- 94 liertes Diäthylen triamin (pH 7)	2 4 7	94 93 91	0 1 3
35	Tricin (pH 7; 93 25 mMoüar	2 4 7	84 77 70	9 16 23

Die Tabellen 4 und 5 zeigen die Vervendung von thiocarbonylierten Diäthylentriaminen zur wirk^- amen Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen. Weil der rasche Abbau

35
des S-Methionins ein beschleunigt ablaufendes Modell für den radiolytischen Abbau radioaktiv markierter Verbindungen in Lösung darstellt, ist „ .iocarbonyliertes Diäthylentriamin nützlich für die Stabilisierung anderer radioaktiv markierter Verbindungen wie jener, die oben aufgeführt sind.
10

Beispiel 3

Herstellung von Natrium-N,N-bis- (2-aiainoäthyl) -dithiocarbamat

Zu einer Lösung von DETA (9 ml, 88 mMol) in 15%-äthanolischer Natriumhydroxid-Lösung (50 ml) bei -5 C wurde tropfenweise unter Rühren und unter einer Stickstoffatmosphäre Schwefelkohlenstoff (10 ml, 167 mMol) zugegeben. Die Lösung wurde gelb, und es wurden weitere 50 ml Äthanol unter fortgesetztem Rühren bei -5 C zugegeben, bis ein Niederschlag ausfiel. Man ließ das Reaktionsgemisch sich auf 25°C erwärmen, wobei das Rühren 16 Stunden lang fortgesetzt wurde. Der Niederschlag wurde gesammelt,

nc O

^zo mit Isopropanol gewaschen und im Vakuumofen bei 40 C 22 Minuten getrocknet, was 3,6 g (20%) Ausbeute mit einem Schmelzpunkt von 122-124°C ergab.

IR (KBr) 1480 cm" .

¹H-NMR (NaOD/D₂O) ppm ^4.09 (t, 1, J = 7 Hz); 2,95 (t, 1, J = 7 Hz)

¹³C-NMR (NaOD/D₂O) ppm <f 21 1,63 (C=S); 57,12; 38,84 UV (pH 8) max 29 3, 258 nm

Analyse (C₁-H₁ ~N .,S₉Na)
^{b 1J J} ^z

berechnet: C 29,70 H 6,44 N 20,79 S 31,68 gefunden : C 30,13 H 6,61 K ^Ί0,09 S 34,67

Beispiel 4

Thiocarbonyliertes Diäthylentriamin und Natrium-N,N-bis-(2-aminoäthyl)-dithiocarbamat wurden in verschiedenen Konzentrationen zur Stabilisierung von Lösungen von (5-L-Methionin) [..H] -Enkephalin verwendet, einem Peptid, von [ P]-Deoxyguanidin-triphosphat, einem Nucleotidtriphosphat, und von [ S]-Methionin, einer Aminosäure. Die radiochemischen Reinheiten wurden wie in Beispiel 1

"IO bestimmt durch HPLC und Quantisierung mittels eines der Säule nachgeschalteten Radioaktivitäts-Durchfluß-Monitors. Die aufgeführten Reinheitsdaten stellen einen Durchschnitt dreier Proben und dreier einzelner Reinheitsbestimmungen dar. Die Tabellen 6-8 zeigen die Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen in bezug auf die Stabilisierung.

	4°C	Durchschnittl. Reinheit (%)	Ca-³²P],
Tabelle 6	Anzahl Tage	9 <9 0
Lagerung von Deoxyguanidin-triphosphat	1 3 9
20 800 Ci/Mol		88 75 20	Durchschnittl. Änderung der Reinheit (%)
12,8 mCi/ml bei	1 3 9	88 84 53	81 >81 90
Probe Ausgangs- Reinheit %	1 3 9	88 83 70
²⁵ Vergleich 90	1 3 9		2 15 70
Natrium-N,N- bis-(2-amino- äthyD-dithio- 30 carbamat		2 6 37
5 mMolar 90		2 7 20
10 mMolar 90 35
20 mMolar 90

i Tabelle 7

Lagerung von [ si-Methionin; 1üO4 Ci/inMol, 10 mCi/ml, 10 mCi/ml bei 4°C

5 Probe Ausgangs- Anzahl Durchschn?ttl. Durchschnxttl Reinheit Tage Reinheit ) Änderung der % Reinheit (%)

Vergleich	10	Thiocarbo-	15	Thiocarbo-	88	3	72	16
		nyliertes	nyliertes		5	64	24
Diäthylen-	Diäthylen-		10	47	41
triamin	triamin		14	39	49
(20mMoiar)	(lOmMolar) 20	86	3	86	0
Thiocarbo-		5	86	0
nyliertes		10	85	1
Diäthylen-		14	83	3
triamin
(5 mMolar)
83	3	82	1
	5	82	1
	10	81	2
	14	81	2

81	3	80	1
	5	80	1
	10	77	4
	14	74	7

^ Tabelle 8

Lagerung von (5-L-Methionin) L H]-Enkephalin,
50 Ci/mMol bei -10°C

Probe Ausgangs- Anzahl Durchschnittl. Durchschnittl.

Reinheit Tage Reinheit (%) Änderung der % Reinheit (%)

Vergleich 99 27 92 7

46 87 12

67 84 15

113 75 24

Thiocarbo- 99 27 98 1

nyliertes 47 98 1

DETA 68 98 1

20 mMoiar 113 96 3

Die Strukturformel von Ν,Ν-bis(2-Aminoäthyl-dithiocarbamidsäure ist:

Die Strukturformel von Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin ist:
30

SHS

C-HN-CH₀-CH₀-N-CH₀-Ch₀-NH-C
/ 2 2 2 2 \

HS SH

Claims

PRIMZi &3 Patentanwälte* ■ 'European "Patdni Attorneys 3324593 München Stuttgart N 704 Bj/g 7. Juli 1983 NEW ENGLAND NUCLEAR CORPORATION Albany Street Boston, MA 02118 / USA P atentans prüche

1. Zusammensetzung, enthaltend ein Gemisch aus einer radioaktiv markierten Verbindung und einem thiocarbonylierten Diathylentriamxn als Stabilisierungsmittel.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die radioaktiv markierte Verbindung aus der aus Aminosäuren, Peptiden, Proteinen, Nucleotid-Triphosphaten, Nucleosiden, Kohlenhydraten, Arzneimitteln, Lipiden, Catecholaminen, Fettsäuren und Steroiden bestehenden Gruppe ausgewählt ist.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die radioaktiv markierte Verbindung

14 ΊΚ "3? 1 9S 131 mit Tritium, '*C, ^DS, P, I oder Ί markiert ist.

4. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 3,

dadurch gekennzeichnet, daß das Stabilisierungsmittel

2 3

in einer Menge von etwa dem 10 bis 5 χ 10 -Fachen der molaren Konzentration der radioaktiv markierten Verbindung enthalten ist.

5. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4,

dadurch gekennzeichnet, daß das Stabilisierungsmittel in einer Menge von etwa 0,1 mMol/1 bis etwa 100 mMol/1 enthalten ist.
5

6. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Stabilisierungsmittel Ν,Ν-bis(2-Aminoäthylen)-dithiocarbamidsäure ist.

7. Zusammensetzung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß ihr pH-Wert etwa 6 oder höher ist.

8. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß das Stabilisierungsmittel Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin ist.

9. Zusammensetzung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß ihr pH-Wert etwa 6 oder höher ist.

10. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, daß ihr pH-Wert etwa 6 oder höher ist.

11. Kit (Reagenssatz), bestehend aus einem Behälter und einer darin befindlichen Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 10.

12. Kit nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß der Behälter eine versiegelte Phiole ist.

13. Kit nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß die Phiole und ihr Inhalt sterilisiert sind.

14. Verfahren zur Stabilisierung einer radioaktiv markieret

ten Verbindung, dadurch gekennzeichnet, daß der Verbindung ein thiocarbonyliertes Diäthylentriamin als Stabilisierungsmittel zugemischt wird.

_ 2_

"J

15. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß als radioaktiv markierte V-- rbindung eine Aminosäure, ein Nucleotid-Triphosphat, ein Nucleosid, ein Protein, ein Peptid, ein Kohlenhydrat, ein Arzneimittel, ein Lipid, ein Catecholamin, eine Fettsäure und/oder ein Steroid verwendet ird.

16. Verfahren nach Anspruch 14 oder 15, dadurch gekennzeichnet, daß als radioaktiv markierte Verbindung

]Q eine Verbindung verwendet wird, die mit Tritium,

14„ 35_O 32„ 125 131 . . . . . C, S, P, I oder I markxert ist.

17. Verfahren nach einem der Ansprache 14 bis 16, dadurch

gekennzeichnet, daß das Stabilisierungsmittel in

2 einer Menge zugegeben wird, die etwa dem 10 bis 5 χ 10 -Fachen der molaren Konzentration der radioaktiv markierten Verbindung entspricht.

18. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 17, dadurch gekennzeichnet, daß das Stabilisierungsmittel in einer Menge von etwa 0,1 inMol/1 bis etwa 0,1 Mol/l zugegeben wird.

19. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß als Stabilisierungsmittel Ν,Ν-bis(2-Aminoäthyl)-dithiocarbamidsäure verwendet wird.

20. Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet,

daß der pH-Wert auf etwa 6 oder mehr eingestellt wird.

21. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß als Stabilisierungsmittel

Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin verwendet wird. 35

22. Verfahren nach Anspruch 21, dr^urch gekennzeichnet, daß der pH-Wert auf etwa 6 oder mehr eingestellt wird.

-A-

■j

23. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 18, dadurch gekennzeichnet, daß der pH-Wert auf etwa 6 oder mehr eingestellt wird.