CH655853A5

CH655853A5 - Zusammensetzung und verfahren zur stabilisierung radioaktiv markierter verbindungen mittels thiocarbonylierter diaethylentriamine.

Info

Publication number: CH655853A5
Application number: CH3825/83A
Authority: CH
Inventors: Nathan R Tzodikov
Original assignee: Du Pont
Priority date: 1982-07-12
Filing date: 1983-07-12
Publication date: 1986-05-30
Also published as: FR2536998A1; GB2123412A; US4411881A; GB2123412B; JPS5924257A; CA1205070A; FR2536998B1; JPH0211105B2; DE3324593A1; DE3324593C2; GB8316714D0

Description

Die Erfindung betrifft eine Zusammensetzung zur Stabi-io lisierung radioaktiv markierter Verbindungen, wie Aminosäuren und Nucleoside mittels bestimmten thiocarbonylier-ten Aminen, die zur Stabilisierung solcher radioaktiv markierter Verbindungen verwendet werden können.

Eine steigende Zahl radioaktiv markierter Verbindungen i5 wird in der Forschung für die medizinische Diagnose und auf zahlreichen anderen Gebieten verwendet. Die radiolyti-sche Zersetzung solcher Verbindungen ist jedoch ein dauerndes Problem geblieben. Ohne Zusatz einer Art von Stabilisator kann eine Lösung einer solchen Verbindung wegen Zer-20 setzung innerhalb von Wochen oder eines kürzeren Zeitraums unbrauchbar werden. Diese radiolytische Zersetzung solcher Verbindungen ist ausgiebig untersucht worden. Ein Überblick über die Radiochemie von Aminosäuren wird beispielsweise in einem Artikel von J. Liebster und J. Kopeldo-25 va in Radiation Biol., 1, 157 (1964) gegeben, und die Selbstzersetzung radioaktiv markierter Verbindungen wird in Ato-mic Energy Review, 10, 3-66 (1972) erörtert.

Obschon bestimmte spezielle Verbindungen zur Stabilisierung vorgeschlagen wurden, bestehen die Probleme noch 30 fort. Der zweitgenannte Artikel gibt einen Überblick über die der Selbstzersetzung zugrundeliegenden Ursachen und Mechanismen, «die sehr komplex und in einigen Fällen nicht genau bekannt sind» (a.a.O., S. 3). Nach der Erörterung der Hauptmechanismen, unter denen die Zersetzung abläuft, 35 wird auf S. 36 der Veröffentlichung allgemein festgestellt, dass Puffer wie Ammoniumbicarbonat zur Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen beitragen, dass aber Sorge dafür getragen werden muss, dass sichergestellt ist, dass der gewählte Puffer die spätere Verwendung der markierten 40 Verbindung nicht stört. Phosphatpuffer würden beispielsweise Phosphorylierungsreaktionen stören. Andere Verbindungen, die verschiedentlich vorgeschlagen worden sind,

sind auf S. 35 aufgeführt, und zwar u.a. Benzylalkohol, Gly-cerin, Cysteamin und Natriumformiat. Von jeder dieser Ver-45 bindungen wird jedoch die Schwierigkeit ihrer Entfernung als nachteilig berichtet. Eine andere erwähnte Verbindung ist Äthanol, von dem es heisst, es wirke bei vielen Verbindungen. Tatsächlich aber sensibilisiert Äthanol in einigen Fällen bestimmte Nucleoside für die Strahlungszersetzung, und es so hat sich somit gezeigt, dass es kein universelles Allheilmittel ist. Darüber hinaus muss das Äthanol, wenn es die Reaktion stört, bei der die radioaktiv markierte Verbindung verwendet werden soll, durch Verdampfen entfernt werden, was wiederum zur Zersetzung beiträgt.

55 Verschiedene Verbindungen werden in der Veröffentlichung in Atomic Energy Review (a.a.O.) zur Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen, die oxidationsemp-findlich sind, vorgeschlagen, und zwar u.a. Antioxidantien wie butyliertes Hydroxytoluol. butyliertes Hydroxyanisol 60 und Mercaptoäthanol. Die Unterdrückung der Autoxida-tion ganz allgemein durch bestimmte Amine ist im Stand der Technik ebenfalls beschrieben, obgleich sie nicht zum Zwek-ke der Verwendung bei radioaktiv markierten Verbindungen erwähnt ist. Neuere Übersichten über die Hemmung der Au-65 toxidation stellen die folgenden Veröffentlichungen dar: R. Stroh, «Autoxidation», S. 1049, in: «Methoden der Organischen Chemie» (Houben-Weyl). herausgegeben von E. Müller und O. Bayer, Vol. IV Ib Oxidation II., Georg Thieme

3

655 853

Verlag, 1975; und «Encyclopedia of Chemical Technology», Kirk-Othmer, Interscience Publishers, New York. Die Verwendbarkeit von sekundären Dialkylaminen mit voller cc-Substitution (d.h., dass sie keine Wasserstoffatome an den dem Stickstoff benachbarten Kohlenstoffatomen tragen) und sekundären Diarylaminen (auch ohne a-Wasserstoffato-me) als Antioxidantien ist bekannt. Dagegen ist die Verwendung von primären, sekundären und tertiären Aminen, welche a-Wasserstoffatome enthalten, in diesem Zusammenhang nicht bekannt und es wurde tatsächlich angenommen, dass solche Amine hierfür unwirksam sind. Solche Antioxidantien besitzen viele der gleichen Nachteile wie die oben erwähnten anderen Verbindungen, wobei noch hinzukommt, dass sie im allgemeinen in den Lösungsmitteln unlöslich sind, die zum Lösen und Aufbewahren radioaktiv markierter Verbindungen, die für biologische Untersuchungen bestimmt sind, verwendet werden.

In der US-PS 3 876 550 sind Schmiermittelzusammensetzungen beschrieben, bei denen die Antioxidans- und Rostschutzeigenschaften solcher Schmiermittelzusammensetzungen verbessert werden. Die Kombination an Zusätzen schliesst Alkylendithiocarbamat ein, enthält aber keinen Hinweis auf die Verwendung solcher Verbindungen als Stabilisatoren für radioaktiv markierte Verbindungen.

V.S. Etlis et al., «Synthesis and Anti-Radiation Properties of Polymerie Dithiocarbamates», Khimiko-Farmatsevti-cheskii Zhurnal, Vol. 10, no. 4, S. 33-45, April (1976) beschreibt die Synthese und Herstellung von wasserlöslichen polymeren Natrium- und Ammoniumdithiocarbamaten, weist daraufhin, dass diese Verbindungen als Strahlungsprotektoren verwendet werden können und berichtet über Tests mit solchen Verbindungen an Mäusen zum Schutz gegen Bestrahlung mit 60Co (1000 R, Intensität 26-30 R/s). Es gibt jedoch keinen Hinweis darauf, dass diese Verbindungen irgendeine Aktivität als Stabilisatoren radioaktiv markierter Verbindungen besitzen.

J. Barnes et al., Eur. J. Med. Chem. - Chimica Therapeu-tica, Nov. Dec. (1975)-10, No. 6, S. 619-622, beschreibt Natriumsalze von Alkenbisdithiocarbamaten und Aminoal-kyldithiocarbamidsäuren zur Verwendung als Strahlenschutzmittel. Die Verbindungen wurden an Mäusen als Radio-Protektoren getestet. Besondere Aufmerksamkeit wird der Verbindung Nr. 11 in Tabelle 1 auf S. 620 geschenkt, deren Herstellung auf S. 621 in den Absätzen, die unmittelbar der Tabelle 2 folgen, beschrieben wird. Es wird angenommen, dass die Struktur der Verbindung 11 nicht korrekt wiedergegeben worden ist. Die Anwendung irgendeiner der dort beschriebenen Verbindungen zur Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen und Lösungen ist in Barnes et al. weder offenbart noch vorgeschlagen.

In den US-Patenten Nr. 4 358 474 und 4 390 517 ist die Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen beschrieben, wobei Lösungen solcher Verbindungen eine Verbindung mit einem im wesentlichen unlöslichen «Rückgrat» zugegeben wird, vorzugsweise ein Harz wie beispielsweise ein Ionenaustauscherharz, an das eine quaternäre Ammoniumgruppe gebunden ist, oder ein wasserlösliches primäres, sekundäres oder tertiäres aliphatisches Amin, das die beabsichtigte Verwendung für die bestimmte, radioaktiv markierte, zu stabilisierende Verbindung nicht stört.

Die Erfindung betrifft eine Lösung einer radioaktiv markierten Verbindung, die mit einer solchen Verbindung in Berührung gehalten wird, sowie - als gewerbliches Erzeugnis -eine versiegelte Phiole, die eine solche Lösung enthält.

Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Stabilisierung einer Lösung einer radioaktiv markierten Verbindung, wobei dieser Lösung ein thiocarbonyliertes Diäthylentriamin wie beispielsweise N,N-bis-(2-Aminoäthyl)-dithiocarbamid-

säure oder Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin und deren Salze zugegeben wird.

Diese thiocarbonylierten Diäthylentriamine können zur Stabilisierung von Lösungen einer breit gefächerten Menge 5 markierter Verbindungen verwendet werden, einschliesslich von z.B. Aminosäuren, Nucleotiden, Nucleosiden, Kohlenhydraten, Arzneimitteln, Lipiden, Steroiden und dergleichen, die mitTritium, 14C, 3SS, 32P, 125I, 131I und dergleichen markiert sind.

io Radioaktiv markierte Verbindungen werden erfindungs-gemäss durch verdünnte Lösungen eines Derivats der Di-äthylentriamindithiocarbamidsäure oder eines ihrer löslichen Salze stabilisiert. Das Derivat der Diäthylentriamindi-thiocarbamidsäure kann leicht hergestellt werden durch Um-15 setzen von Diäthylentriamin mit Schwefelkohlenstoff. Besonders bevorzugte erfindungsgemässe Stabilisatoren sind N,N-bis(2-Aminoäthyl)-dithiocarbamidsäure, Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin, sowie deren Salze, z. B. die Natrium-, Kalium- und Ammoniumsalze.

2o Jede Menge erfindungsgemässer Stabilisatorverbindungen ist vorteilhaft im Hinblick auf die Verhütung der Zersetzung radioaktiv markierter Verbindungen. Vorzugsweise liegt die stabilisierende Verbindung jedoch in Konzentrationen im Bereich von etwa 0,1 mMolarbis etwa 100 mMolar 25 vor, je nach der speziellen Aktivität der radioaktiv markierten Verbindung, der Konzentration der radioaktiv markierten Verbindung in der Lösung und dem speziellen Radioisotop, das zur Markierung verwendet wurde. Im allgemeinen wird eine Konzentration des Stabilisierungsmittels bevor-30 zugt, die das 102 bis 5 x 103-Fache der Konzentration der markierten Verbindung ausmacht. Eine mit Tritium markierte Verbindung mit einer spezifischen Aktivität von 100 Ci/mMol und einer Konzentration von 1 mCi/ml enthält z. B. vorzugsweise eine Stabilisatorkonzentration im Bereich 35 von etwa 10 bis etwa 20 mMol (ein 103-facher Überschuss). Wenn die verwendete Markierungssubstanz 32P ist, was zu einer spezifischen Aktivität von 1000 Ci/mMol bei einer Konzentration von 10 mCi/ml führt, ist, ganz entsprechend, eine Konzentration von 10 bis 20 mMol/1 des Stabilisators 40 bevorzugt, d.h. ein 103-facher Überschuss.

Das erfindungsgemässe Verfahren kann mit jedem Lösungsmittel durchgeführt werden, das üblicherweise zur Aufbewahrung radioaktiv markierter Verbindungen verwendet wird, wie beispielsweise Wasser, Äthanol, Gemische aus 45 Wasser und Äthanol in jedem Verhältnis, verdünnte Mineral- und organische Säuren sowie andere solche an sich bekannten Lösungsmittel. Einige der Diäthylentriamin-Deri-vate, die erfindungsgemäss verwendet werden können, bewirken jedoch keine Stabilität bei niedrigem pH. Beispiels-50 weise ist die Verwendung von N,N-bis(2-Aminoäthylen)-dithiocarbamidsäure und Di(2-thiocarbamyläthyl)amin infolge Instabilität bei pH-Werten von weniger als 6 begrenzt. Deshalb wird im allgemeinen ein pH-Wert von 6 oder mehr bevorzugt.

ss Die Erfindung kann dazu benutzt werden, die Zersetzung von radioaktiv markierten Verbindungen zu verhindern, die mit irgendeinem der Radionuclide, die hierzu verwendet werden, markiert worden sind, einschliesslich Tritium, 14C, 32P, 33P, 35S sowie der verschiedenen Radioisotope des Iods, 60 einschliesslich 125I und ,31I.

Die radioaktiv markierte Verbindung kann jede dieser Verbindungen sein, die der radiolytischen Zersetzung unterliegen, beispielsweise radioaktiv markierte Aminosäuren, Catecholamine, Nucleotid-Triphosphate, Nucleoside, Pro-65 teine, Peptide, Kohlenhydrate, Arzneimittel, Lipide, Fettsäuren, Steroide und dergleichen.

Typische Beispiele dieser Art von Verbindungen, die unter den Ausdruck «Arzneimittel» fallen, sind:

655 853

( ±) eis, trans-[2-14C]-Abszisinsäure;

Acetaminophen; N-[9-14C]-Acetyl-2-aminofluoren; Acetyl-concanavalin A;

N-[2-Aminoäthyl-2-3H]-Acetyl-5-methoxytryptamin; [Carboxyl-14C]-Acetylsalicylsäure; ['2 5I]-Glycoproteid-a-Säure; ACTH; [125I]-(Human-)-Adrenocorticotropes Hormon; ADTN; ['2 5I]-Rinderserumalbumin; Allylnormetazocin;

Alprenolol; Amethopterin; p-[3,5-3H]-Aminoclonidin;

2-:-[5,8-3H]-Amino-6,7-dihydroxy-l,2,3,4-tetrahydronaphthalin;

[Dimethylamin-14C]-Aminopryrin;

3-[5-14C]-Amino-1,2,4-triazol; D-[3H(G)]-Amphetaminsulfat; [Tyrosyl-3,5-3H(N)]-Angiotensin 111 (4-L-isoleucin; [Tyrosyl-3,5-3H(N)]-Angiotensin 11 (-L-isoleucin; [Tyrosyl-12SI]-(monoiodiert)-Angiotensin 11

(5-L-isoleucin);

[Tyrosyl-12SI]-(monoiodiert)-Angiotensin 1

(5-L-isoleucin);

[N-Methyl-14C]-Antipyrin; L-(-)-[8,9-3H]-Apomorphin; L-[l-14C]-Ascorbinsäure; y-[,4C(U)]-Benzolhexachlorid; [14C(U)]-Benzidin; [l,3,6-3H]-Benzo[a]pyren; Rinderserumalbumin;

[2,3-Prolyl-3,4-3H(N)]-Bradykinin; [(8-Tyrosyl-125I]-Bra<iykinin (8-tyrosin)-triacetat; P 25I]-a-Bungarotoxin; [1 -methyl-14C]-Coffein;

Capsaicin; DL-[3,6-3H(N)]-Carazolol; [Dichloracetyl-1,214C]-Chloramphenicol; [Ring-3-14C]-Chloroquin-di-p-phosphatsalz; [Benzol-Ring-3H]-Chlorpromazin-Hydrochlorid; [4-3 H]-Clonidin-Hydrochlorid;

laevo-[Benzoyl-3,4-3H(N)]-Cocain; [3H(G)]-Coenzym A; [Ring C, Methoxy-14C]-Colchicin;

[Ring C, Methoxy-3H]-Colchicin;

[3H(G)]-Concanavalin A; [12SI]-Concanavalin A; N-[Acetyl-3H]acetyliertes Concanavalin A; 5-[2-14C]-Cyclohexenyl-3,5-dimethylbarbitursäure; N8-[Adenin-2,8-3H]-Cyclohexyladenosin; [Ring-4-14C]-Cyclophosphamid;

[4-3H]-Cytochalasin B;

[3H(G)]-Daunomycin; Daunorubicin; Desipramin;

[2,4,6,8-3 H]-Desmethylimipramin-Hydrochlorid; Diazepam; 2-([2,6-Dichloro-4-amino]phenylimino)-imidazolin; l,3-[Phenyl-4-3H]-DiäthyI-8-phenylxanthin; laevo-[Propyl-l,2,3-3H]-Dihydroalprenolol-Hydrochlorid; laevo-[Ring, Propyl-3H(N)]-Dihydroalprenolol-

Hydrochlorid; [Nonanamid-6,7,9-3H(N)]-Dihydroalprenolol; [9,10-3 H(N)]-Dihydro-a-ergocryptin;

[N-methyl-3 H]-Dihydromorphin; a-[8,10-3 H]-Dihydropicrotoxinin; [21,22-3H]-Dihydrostrychnin; Dilantin; (WB4101)-2-[Phenoxy-3-3H(N)]-[2,6-Dimethoxyphenoxy-

äthyljaminoäthyl-1,4-benzodi-oxan;

1,12-[Dimethyl-' 4C]-Dimethylbenz(a)anthracen; ( — )-5-[Butyl-2,3,4-3H]-( 1,3-Dimethylbutyl)-5-äthyl-

barbitursäure; N,N-[Methyl-14C]-Dimethylhydrazin-Dihydrochlorid; N,N-[I4C(U)]-Dinitrosopiperazin;

[2-Methyl-3H]-L( )-cis-Dioxolan; 5,5-[4-14C]-Diphenylhydantoin; 5,5-[Phenyl-4-3H(N)]-Diphenylhydantoin;

( —)-DMBB und ( + )-DMBB; [Benzol-Ring-3H]-Domperi-don;

[Methyl-3 H]-Doxepin;

[Tyrosyl-3.5-3H]-Enkephalinamid (2-D-Alanin-5L-methio-nin);

[Tyrosyl-3,53H(N)]-Enkephalin (2-D-Alanin-5-D-Leucin); [T yrosyl-3,53 H( N)]-Enkephalin (5-L-Leucin); [I25I]-Enkephalin (5-L-Leucin); [Tyrosyl-3,5-3H(N)]-Enkephalin (5-L-Methionin); s [!25I]-Enkephalin (5-L-Methionin); [12 51]-Epidermis-Wachstumsfaktor; [Äthyl-2-3H]-Äthyl-ß-carbolin-3-carboxylat; Äthylketazocin;_[9-3H]-Äthylketocyclazocin; 5-[Ring-2-14C]-Äthyl-5-( 1 -methylbutyl)barbitursäure; io N-[Äthyl-1 -I4C]-Äthyl-N-nitrosoharnstoff; 5-[Ring-2-14C]-Äthyl-5-phenylbarbitursäure; 5-[3H(G)]-Äthyl-5-phenylbarbitursäure;

[I25I]-Fibronectin; [Methyl-3H]-Flunitrazepam; 5-[6-14C]-Fluorouracil; [Äthylen-3 H]-Flurazepam; i5 [I25I]-Gelatin; [3,4-3H(N)]-Gibberellin A,; ['2 s I]-(monoiodiert)-Glucagon;

Gonadotropin freisetzendes Hormon;

[3H(G)]-Haloperidol; [l-14C]-Halothan; [3H(G)]-Heparin-Natriumsalz; 20 2,4,5-2',4',5'-[14C(U)]-Hexabrombiphenyl; [14C(U)]-Hexachlorbenzol; 2,4,5,2',4',5'-[14C(U)]-Hexachlorbiphenyl; [Glycin-2-I4C]-Hippuryl-L-histidyl-L-leucin;

[Ring, Methylengruppen-3 H(N)]-Histamin-Dihydrochlorid; 25 E12 5I]-Human-Chorionic-Gonadotropin; [■2 5I]-Human-Wachstumshormon;

p-[3H(G)]-Hydroxyacetanilid; p-[7-3H]-Hydroxybenzyliso-proterenol;

[12SI]-Hydroxybenzylpindolol; C 125,211; 30 [2,4,6,8-3H]-Imipramin-Hydrochlorid; [N-Methyl-3H]-Imipramin-Hydrochlorid; [ 2 51]-(monoiodiertes)-Schweineinsulin; 4-[N-Methyl-14C]-Iodoantipyrin; 4-[125I]-Iodoantipyrin; 4-Î1311]-Iodoantiyprin;

35 ['2 5I]-Iodohydroxybenzylpindolol;

[3H]-Isoguvacin-Hydrochlorid; [14C]-Isosorbid-dinitrat; [Carbonyl-14C]-Lidocain-Hydrochlorid; Lindan; LSD; [PyrogIutamyl-3,4-H]-Luteinisierendes Hormon freisetzendes Hormon; 40 ['2^-Luteinisierendes Hormon freisetzendes Hormon; [N-Methyl-3H]-Lysergsäure-diäthylamid; [L-Prolin-2,3,4,5-3H]-Melanotropin-Freisetzung inhibierendes Hormon;

Melatonin; Mepyramin; 45 laevo-[l-3H]-Methadon-Hydrobromid; [L-Glutamyl-3,4-3H]-Methotrexat;

Methscopolamin;

[Methyl-3H]-Methyl-ß-carbolin-3-carboxylat; 3-[6-14C]-Methylcholanthren; so N-[Methyl-3H]-Methyl-D-asparaginsäure; [203Hg]-Methylquecksilberchlorid; N-[Methyl-I4C]-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidin; N-[Methyl-I4C]-Methyl-N'-nitroso-p-toluolsulfonamid; N-[Methyl-14C]-Methyl-N-nitrosoharnstoff; 55 N-[Methyl-3H]-Methyl-N-nitrosoharnstoff;

L-N6-l-[Adenin-2,8H,äthyl-2-3H]-Methyl-2-phenyl-

äthyladenosin;

Methyl-N-vanillyl-nonanamid;

2-Methyl-4-trimethylammoniumethyl-1,3-dioxolan-iodid; 60 [N-Methyl-3H]-Mianserin-Hydrochlorid; MIF;

[N-Methyl-3H]-Morphin; MTX; [Methylen-3H(N)]-Musci-mol;

[N-Allyl-2.3-3H]-Naloxon; [3,1 l-Tyrosyl-3,5-3H(N)]-Neurotensin; 65 [Pyrrolidin-2-14C]-Nicotin;

DL-[Pyrrolidinyl-3H(N)]-Nicotin; [Ring-3H]-Nipecotinsäure; [5-Methyl-3H]-Nitrendipie; N-[Athyl-1 -14C]-Nitrosodiäthylamin;

655 853

N-[Methyl-14C]-Nitrosodimethylamin;

N-[Äthyl-1 -14C]-Nitrosoäthy lmethylamin;

Nitrosomethylharnstoff;

N'[Pyrrolidin-2-14C]-Nitrosonornicotin;

N-[2,6-14C]-Nitrosopiperidin;

N-[2,5,-14C]-Nitrosopyrrolidin;

N-Methyl-scopolamin;

[Methyl-3H]-Oxotremorin-M-Acetat;

D-[l -14C]-Pantothensäure-Natri umsalz; Paracetamol;

[Phenyl-14C]-Parathion; [Phenyl-3 ,benzyl-3 H]-

P-Pargylin-Hydrochlorid;

Pentobarbital; [Piperidyl-3,4-3H(N)]-Phencyclidin; Phénobarbital;

[Phenoxy-3H(N)]-Phenoxy-benzamin-Hydrochlorid; Phenylisopropyladenosin; Phenytoin; [20-3H(N)]-Phorbol-12,13-dibutyrat; [20-3 H(N)]-Phorbol-12-myristat-13-acetat; [Ring-3H]-Piperiin-4-sulfonsäure;

[Turoyl-5-3H]-Prazosin; [12SI]-Human-Prolactin; [12SI]-Ratten-Prolactin; Prolyl-leucyl-glycinamid; L-[4-3 H]-Propranolol;

[Propyl-2,3-3H]-Propyl-ß-carbolin-3-carboxylat; L-(—)-[N-propyl-3 H(N)]-Propylnorapomorphin; [Pyrindinyl-5-3 H]-Pyrilamin; L-[Benzil-4,4-3H(N)]-Chinuclidinyl-benziIat;

[Methyl-3 H]-Rauwolscin; [Benzoyl-3H(G)]-Reserpin; Reverse T3; [N-Methyl-3H]-R05-4864; [7-14C]-Salicylsäure;

[N-Methyl-3H]-Scopolamin-methyl-chlorid; [N-Allyl-2,3-3H]-SXF-10,047; [125I]-monoiodiertes(l-Tyrosin)Somatostatin; [Benzol-Ring-3H]-Spiperon; Spiroperidol;

[12SI]-Substanz P (8-L-Tyrosin); N-[propionat-2,3-3H]-Succinimidyl-propionat; [3 6S]-Sulfanilsäure; [3 6S]-T aurin;

[7-3H(N)]-Tetracyclin (freie Base); 4,5,6,7-[5,7-3H]-(THIP)-Tetrahydroisoxazolo(5,4-c) pyridin-3-ol;

[8-14C]-Theophyllin; [12SI]-thyreotropes Hormon (human); [L-Prolin-2,3,4,5-3H(N)]-Thyrotropin freisetzendes Hormon;

[L-Histidyl-4-3H(N),L-prolyl-3,4-3H(N)]-Thyrotropin freisetzendes Hormon (3-Methyl-histidin2);

20

['25I]-(monoiodiertes)-Thyrotropin freisetzendes Hormon; L-[12SI]-Thyroxin; [Methyl-3H]-(C 125,21 l)-Tiotidin; T rifluor-2-bromchloräthan;

L-3,5-3'-[12 51]-T riiodothyronin; s L-3,3',5'-[I25I]-(ReversetT3)-Triiodothyronin;

dextro-[ 13'-3 H(N)]-T ubocurarinchlorid;

Valium (Warenzeichen von Hoffmann-LaRoche); [125I]-Vasopressin(8-Arginin);

[1-3H(N)]-Vitamin At (ali-trans); WB-4101; Xylocain; io [Methyl-3H]-Yohimbin.

Die erfindungsgemässen stabilisierenden Verbindungen sind besonders wirksam in bezug auf beispielsweise radioaktiv markiertes Methionin, Deoxyguanidintriphosphat und Enkephalin.

15 Üblicherweise werden radioaktiv markierte Verbindungen in geschlossenen Phiolen gewerblich vertrieben, die eine Lösung der speziellen radioaktiv markierten Verbindung enthalten. Die stabilisierende Verbindung wird einfach einer Lösung der radioaktiv markierten Verbindung zugefügt, die üblicherweise in einer sterilisierten versiegelten Phiole vertrieben wird, woraus die stabilisierte Verbindung mittels einer Spritze entnommen wird.

Die Erfindung wird anhand der folgenden Beispiele wei-25 ter erläutert, welche nur beispielhafte Ausführungs- und Anwendungsformen der Erfindung darstellen.

Beispiel 1 - Stand der Technik

35S-Methionin wurde mit verschiedenen bekannten Sta-30 bilisatoren aufbewahrt, und die radiochemische Reinheit wurde in Abhängigkeit von der Zeit gemessen. Das Methionin stammte aus Standard-Partien des Produkts «NEN G-009H» (NEN = New England Nuclear) mit 10 mCi/ml in wässrigem, 10 m-molarem 2-Mercaptoäthanol mit einer spe-35 zifischen Aktivität von mehr als 1000 Ci/mMol. Die radiochemische Reinheit wurde mittels einer Hochdruck-Flüssig-chromatographie (HPLC)-Trennung von den Verunreinigungen bestimmt, wonach die die Säule verlassende Radioaktivität quantisiert wurde. Die aufgeführten Reinheits-40 werte stellen den Durchschnitt von jeweils drei Beladungen und Reinheitsbestimmungen dar. Die Tabellen 1-3 zeigen die Stabilisierung, die durch bekannte Stabilisatoren bei den angegebenen Temperaturen erreicht wird.

Tabelle 1 - Lagerung bei -20°C

Probe

Ausgangs-

Anzahl

Durchschnittl.

Reinheit

Tage

Reinheit (%)

Änderung der

Reinheit (%)

Vergleich

95

3

89

6

21

78

17

Tris. HCl

95

3

95

0

pH 7 (1 molar)

21

93

2

Tabelle 2 •

- Lagerung bei 4~C

Probe

Ausgangs-

Anzahl

Durchschnittl.

Reinheit

Tage

Reinheit (%)

Änderung der

(%)

Reinheit (%)

Vergleich

92

5

71

21

11

57

35

13

53

39

Polyäthylenimin

92

6

84

8

mittl. Molekulargewicht:

11

76

16

75,000; 75 mMolar

13

68

24

in Stickstoff

655 853

6

Tabelle 3 - Lagerung bei -20 C

Vergleich

Tris-HCl

(pH 7; 50mMolar)

92 92

7

29 7

29

Beispiel 2

Herstellung von thiocarbonyliertem Diäthylentriamin

Zu einer Lösung von Diäthylentriamin (DETA) (1,8 ml, 18 mMol) in wässrigem NH4OH (1,5%, 20 ml) wurde unter Rühren Schwefelkohlenstoff (2 ml, 33 mMol) zugegeben. Die erhaltene, aus 2 Phasen bestehende Suspension wurde 4 Stunden gerührt, dann mit Wasser (10 ml) verdünnt und filtriert, was rohes, thiocarbonyliertes Diäthylentriamin als weissen Feststoff ergab. Das Rohmaterial wurde mit Isopro-panol(2 x 100 ml) gewaschen und über Nacht unter Vakuum (40 C/20 mm) getrocknet, wobei das thiocarbonylier-te Diäthylentriamin (1,83 g; Schmelzpunkt 120-121) zurückblieb. Das Material wurde mittels eines IR (KBr)-Spek-trums aufgrund der Bande bei 1460-1470 cm-1 (Br,S), welche das Dithiocarbamat anzeigt, charakterisiert. Das 13C-Kernresonanzspektrum (d6-DMSO) zeigte Resonanzen bei 203,3,182,9,182,6 ppm (Verschiedung nach kleineren Feldern in bezug auf Tetramethylsilan), die Dithiocarbamat anzeigen. Das UV-Spektrum H20) bestätigte die vorstehenden Annahmen.

80 71 88 29

Analyse:

Gefunden: C: 29,24

6 21 5 12

H: 6,48 N: 18,34 S: 41,42

10

Das Material scheint ein Gemisch aus Diäthylentriamin-dithiocarbamidsäure-Derivaten zu sein, die durch 1:1- und 2 : 1-Addition von Schwefelkohlenstoff an DETA gebildet wurden und zu einem durchschnittlichen Molekulargewicht 15 von 217 führten. Eine 4,5 mg/ml enthaltende Zusammensetzung stellt somit eine Lösung mit einer Konzentration von 20 mMol dar.

Das Material ist nur wenig löslich in H20 und bei sau-20 rem pH.

35S-Methionin wurde in Lösung mit dem thiocarbony-lierten Diäthylentriamin aufbewahrt, und die radiochemische Reinheit wurde in Abhängigkeit von der Zeit, wie im 25 Beispiel 1, gemessen. Die Tabellen 4 und 5 zeigen die Wirksamkeit der erfindungsgemässen Verbindung in bezug auf die Stabilisierung.

Tabelle 4 - Lagerung bei -20°C

Probe

Ausgangs-

Anzahl

Durchschnittl. Durchschnittl.

Reinheit (%)

Tage

Reinheit (%)

Änderung der

Reinheit (%)

Vergleich

89

6

86

3

26

78

11

Tricin (pH 7;

88

6

88

0

25 mMolar

26

86

2

Thiocarbonyliertes

92

6

92

0

Diäthylentriamin

26

90

2

(4,5 mg/ml; pH7)

Tabelle 5

- Lagerung bei 4 C

Probe

Ausgangs-

Anzahl

Durchschnittl. Durchschnittl.

Reinheit (%)

Tage

Reinheit (%;

i Änderung der

Reinheit (%)

Vergleich

94

2

77

17

4

64

30

7

48

46

Thiocarbonyliertes

94

2

94

0

Diäthylentriamin (pH7)

4

93

1

7

91

3

Tricin (pH 7;

93

2

84

9

25 mMolar

4

77

16

7

70

23

Die Tabellen 4 und 5 zeigen die Verwendung von thio-

60

Beispiel 3

carbonylierten Diäthylentriaminen zur wirksamen Stabilisierung radioaktiv markierter Verbindungen. Weil der rasche Abbau des 3SS-Methionins ein beschleunigt ablaufendes Modell für den radiolytischen Abbau radioaktiv markierter Verbindungen in Lösung darstellt, ist thiocarbonyliertes Diäthylentriamin nützlich für die Stabilisierung anderer radioaktiv markierter Verbindungen wie jener, die oben aufgeführt sind.

Herstellung von Natrium-N,N-bis-(2-aminoäthyl)-dithiocarbamat Zu einer Lösung von DETA (9 ml, 88 mMol) in 15%-äthanolischer Natriumhydroxid-Lösung (50 ml) bei — 5 C 65 wurde tropfenweise unter Rühren und unter einer Stickstoffatmosphäre Schwefelkohlenstoff (10 ml, 167 mMol) zugegeben. Die Lösung wurde gelb, und es wurden weitere 50 ml Äthanol unter fortgesetztem Rühren bei — 5 C zugegeben.

7

655 853

bis ein Niederschlag ausfiel. Man Hess das Reaktionsgemisch sich auf 25 C erwärmen, wobei das Rühren 16 Stunden lang fortgesetzt wurde. Der Niederschlag wurde gesammelt, mit Isopropanol gewaschen und im Vakuumofen bei 40 C 22 Minuten getrocknet, was 3,6 g (20%) Ausbeute mit einem Schmelzpunkt von 122-124 C ergab.

IR(KBr) 1480 cm"1.

^-NMR (Na0D/D20) ppm 5 4.09 (t, 1, J = 7 Hz); 2,95 (t, 1, J = 7 Hz)

"C-NMR (Na0D/D20) ppm 5 211,63 (C = S); 57,12; 38,84

UV (pH 8) max 293,258 nm Analyse (CsH13N3S,Na)

berechnet; C 29,70" H 6,44 N 20,79 S 31,68 gefunden: C 30,13 H 6,61 N 20,09 S 34,67

io

15

Beispiel 4

Thiocarbonyliertes Diäthylentriamin und Natrium-N,N-bis-(2-aminoäthyl)-dithiocarbamat wurden in verschiedenen Konzentrationen zur Stabilisierung von Lösungen von (5-L-Methionin) [3H]-Enkephalin verwendet, einem Peptid, von [3sP]-Deoxyguanidin-triphosphat, einem Nucleotidtriphos-phat, und von [35S]-Methionin, einer Aminosäure. Die radiochemischen Reinheiten wurden wie in Beispiel 1 bestimmt durch HPLC und Quantisierung mittels eines der Säule nachgeschalteten Radioaktivitäts-Durchfluss-Monitors. Die aufgeführten Reinheitsdaten stellen einen Durchschnitt dreier Proben und dreier einzelner Reinheitsbestimmungen dar. Die Tabellen 6-8 zeigen die Wirksamkeit der erfin-dungsgemässen Verbindungen in bezug auf die Stabilisierung.

Tabelle 6

Lagerung von Deoxyguanidin-triphosphat [a-32P], 800 Ci/Mol 12,8 mCi/ml bei 4 C

Probe

Ausgangs-

Anzahl

Durchschnittl.

Reinheit (%)

Tage

Reinheit (%)

Änderung der

Reinheit (%)

Vergleich

90

1

9

81

3

<9

>81

9

0

90

Natrium-N, N-bis-(2-amino-

äthyl)-dithiocarbamat

5 mMolar

90

1

88

2

3

75

15

9

20

70

10 mMolar

90

1

88

2

3

84

6

9

53

37

20 mMolar

90

1

88

2

3

83

7

9

70

20

Tabelle 7

Lagerung von [3S

S]-Methionin; 1004 Ci/mMol, 10mCi/ml, 10mCi/ml bei 4°C

Probe

Ausgangs-

Anzahl

Durchschnittl.

Reinheit (%)

Tage

Reinheit (%)

Änderung der

Reinheit (%)

Vergleich

88

3

72

16

5

64

24

10

47

41

14

39

49

Thiocarbonyliertes

86

3

86

0

Diäthylentriamin (20 mMolar)

5

86

0

10

85

1

14

83

3

Thiocarbonyliertes

83

3

82

1

Diäthylentriamin (10 mMolar)

5

82

1

10

81

2

14

81

2

Thiocarbonyliertes

81

3

80

1

Diäthylentriamin (5 mMolar)

5

80

1

10

77

4

14

74

7

655 853

8

Tabelle 8

Lagerung von (5-L-Methionin) [3H]-Enkephalin, 50 Ci/mMol bei -IO C

Probe

Ausgangs-Reinheit (%)

Anzahl Tage

Durchschnittl. Reinheit (%)

Durchschnittl. Änderung der Reinheit (%)

Vergleich

99

27

92

7

46

87

12

67

84

15

113

75

24

Thiocarbonyliertes

99

27

98

1

DETA 20 mMolar

47

98

1

68

98

1

113

96

3

Die Strukturformel von N,N-bis(2-Aminoäthyl-dithio-carbamidsäure ist:

S^c-SH

I

H2N-CH2-CH2-N-CH2-CH2-NH2

Die Strukturformel von Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin ist:

20

3 H S

^ I #

C—HN—CH0—CH0—N—CH0-CH0-NH—C / 2 2 2 2 v

HS SH

25

30

40

45

50

55

60

65

Claims

655 853

1. Zusammensetzung, enthaltend in Lösung ein Gemisch aus einer radioaktiv markierten Verbindung und einem thio-carbonylierten Diäthylentriamin als Stabilisierungsmittel.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die radioaktiv markierte Verbindung aus der aus Aminosäuren, Peptiden, Proteinen, Nucleotid-Triphos-phaten, Nucleosiden, Kohlenhydraten, Arzneimitteln, Lipi-den, Catecholaminen, Fettsäuren und Steroiden bestehenden Gruppe ausgewählt ist.

2

PATENTANSPRÜCHE

3. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die radioaktiv markierte Verbindung mit Tritium, 14C, 35S, 32P, ,25I oder I3II markiert ist.

4. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Stabilisierungsmittel in einer Menge von dem 102 bis 5 x 103-Fachen der molaren Konzentration der radioaktiv markierten Verbindung enthalten ist.

5. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Stabilisierungsmittel in einer Menge von 0,1 mMoI/1 bis 100 mMol/I enthalten ist.

6. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Stabilisierungsmitt-i! N,N-bis(2-Aminoäthylen)-dithiocarbamidsäureist.

7. Zusammensetzung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass ihr pH-Wert 6 oder höher ist.

8. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Stabilisierungsmittel Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin ist.

9. Zusammensetzung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass ihr pH-Wert 6 oder höher ist.

10. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass ihr pH-Wert 6 oder höher ist.

11. Kit, bestehend aus einem Behälter und einer darin befindlichen Zusammensetzung gemäss einem der Ansprüche 1 bis 10.

12. Kit nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass der Behälter eine versiegelte Phiole ist.

13. Kit nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Phiole und ihr Inhalt sterilisiert sind.

14. Verfahren zur Stabilisierung einer Lösung einer radioaktiv markierten Verbindung, dadurch gekennzeichnet, dass der gelösten Verbindung ein thiocarbonyliertes Diäthylentriamin als Stabilisierungsmittel zugemischt wird.

15. Verfahren nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass als radioaktiv markierte Verbindung eine Aminosäure, ein Nucleotid-Triphosphat, ein Nucleosid, ein Protein, ein Peptid, ein Kohlenhydrat, ein Arzneimittel, ein Li-pid, ein Catecholamin, eine Fettsäure und/oder ein Steroid verwendet wird.

16. Verfahren nach Anspruch 14 oder 15, dadurch gekennzeichnet, dass als radioaktiv markierte Verbindung eine Verbindung verwendet wird, die mit Tritium, I4C, 35S, 32P, 125I oder I3II markiert ist.

17. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass das Stabilisierungsmittel in einer Menge zugegeben wird, die dem 102 bis 5 x 103-Fachen der molaren Konzentration der radioaktiv markierten Verbindung entspricht.

18. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass das Stabilisierungsmittel in einer Menge von 0,1 mMol/1 bis 0,1 Mol/1 zugegeben wird.

19. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass als Stabilisierungsmittel N,N-bis(2-Aminoäthyl)-dithiocarbamidsäure verwendet wird.

20. Verfahren nach Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, dass der pH-Wert auf 6 oder mehr eingestellt wird.

21. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass als Stabilisierungsmittel Di(2-dithiocarbamyläthyl)-amin verwendet wird.

22. Verfahren nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, dass der pH-Wert 6 oder mehr eingestellt wird, s

23. Verfahren nach einem der Ansprüche 14 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass der pH-Wert auf 6 oder mehr eingestellt wird.