DE3238819C2 - - Google Patents

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft einen Nährboden zur selek­ tiven Züchtung von Campylobacter faetus subsp. jejuni, wel­ cher als Zusatz mindestens eine antimikrobiell wirksame Substanz enthält.

Seit wenigen Jahren ist bekannt, daß die Bakteriengattung Cam­ pylobacter bei der Verursachung von Gastroenteritis eine be­ deutende Rolle spielt. Insbesondere die Species Campylobacter faetus subsp. jejuni, kurz Campylobacter jejuni genannt, wurde als für Menschen und manche Tiere besonders ge­ fährlich entdeckt. Es besteht daher ein Bedürfnis, zum Zwecke der Diagnose und/oder der Medikamenten- bzw. Resistenzprüfung Campylobacter jejuni selektiv zu züchten.

Um möglichst zu vermeiden, daß auf einem bakteriologischen Nährboden außer Campylobacter jejuni noch andere Mikroorganis­ men sich wesentlich vermehren, hat man schon dem benutzten Nährboden gewisse antimikrobiell wirksame Substanzen beigemischt, gegen welche Campylobacter jejuni eine im Vergleich mit ande­ ren Mikroorganismen erhöhte Resistenz zeigt. Bekannt sind Nährböden, die zum Beispiel eine oder mehrere der folgenden antimikrobiell wirksamen Substanzen enthalten: Polymycin, Rifampicin, Trimethoprim, Actidion, Colistin, Bacitracin, Novobiocin, Cycloheximid, Cephazolin, Amphotericin.

Der vorliegenden Erfindung liegt nun die Aufgabe zugrunde, einen Nährboden der eingangs genannten Art zu schaffen, des­ sen selektive Wirkung zu Gunsten von Campylobacter jejuni beträchtlich besser ist als bei bisher bekannten Nährböden dieser Art.

Der erfindungsgemäße Nährboden, mit welchem die gestellte Auf­ gabe gelöst worden ist, unterscheidet sich von bekannten Nähr­ böden der eingangs genannten Art dadurch, daß als antimikro­ biell wirksame Substanz Cefoperazon vorhanden ist.

Bisher ist Cefoperazon als antimikrobiell wirksame Substanz in Nährböden zur selektiven Züchtung von Campylobacter jejuni noch nie verwendet worden. Es hat sich gezeigt, daß Cefopera­ zon eine besonders ausgeprägte selektive antimikrobielle Wir­ kung im gewünschten Sinne auszuüben vermag.

Zweckmäßig enthält der erfindungsgemäße Nährboden an anti­ mikrobiell wirksame Substanzen außer Cefoperazon noch Rifam­ picin und vorzugsweise auch noch Amphotericin B und Colistin.

Der bakteriologische Nährboden wird gemäß weiterer Ausgestal­ tung der Erfindung für die selektive Züchtung von Campylobac­ ter jejuni in der Weise hergestellt, daß auf je 1 ml Gesamt­ mischung 15 µg Cefoperazon und 10 µg Rifampicin und gegebenenfalls zusätzlich noch 2 mg Amphotericin B und 10 I. E. Colistin kommen. Eine solche Zusammensetzung erlaubt ein sehr gutes Wachstum von Campylobacter jejuni, wäh­ rend das Wachstum der unerwünschten Begleitflora signifikant gehemmt ist. Hierdurch wird die Isolation der pathogenen Er­ reger Campylobacter jejuni wesentlich erleichtert.

Eine gute Löslichkeit in Wasser ist ein weiterer Vorteil der erfindungsgemäß verwendeten antimikrobiell wirksamen Substan­ zen.

Nachstehend wird die Erfindung näher erläutert:

Beispiel 1

Zu einem gebräuchlichen bakteriologischen Nährboden, bestehend aus 1 Liter Columbia Agar und 50 ml Schafsblut, wurde ein Zu­ satz hinzugemischt, der 3 Gew.-Teile Cefoperazon und 2 Gew.- Teile Rifampicin enthielt. Die Konzentration wurde derart ge­ wählt, daß auf je 1 ml Gesamtmischung etwa 15 µg Cefoperazon und etwa 10 µg Rifampicin kamen. Diese Nährbodenmischung ist im folgenden mit "1-A" bezeichnet.

Zum Vergleich mit dem Stand der Technik wurde eine zweite, im folgenden mit "1-B" bezeichnete Nährbodenmischung zubereitet, welche die nachstehende Zusammensetzung aufwies: 1 Liter Co­ lumbia Agar, 50 ml Schafsblut und ein als bisher besonders se­ lektiv beurteilter Zusatz, der je 1 ml Gesamtmischung 25 I.E. Bacitracin, 50 µg Cycloheximid, 10 I.E. Colistin, 15 µg Cepha­ zolin und 5 µg Novobiocin enthält.

759 sterile Petrischalen wurden mit der Nährbodenmischung 1-A und die gleiche Anzahl sterile Petrischalen wurden mit der zweiten Nährbodenmischung 1-B belegt. Anschließend wurden sämt­ liche Schalen in der bei bakteriologischen Untersuchungen üb­ lichen Weise mit Proben eines und desselben menschlichen Stuhls inkubiert, wonach man alle Schalen bei 37°C in einer Atmosphäre aus 85% Stickstoff, 10% Kohlendioxid und 5% Sauerstoff ruhen ließ.

Nach 20 Stunden konnte in 55 Schalen (= 7,24%) mit der Nähr­ bodenmischung 1-A und in 56 Schalen (= 7,37%) mit der Nähr­ bodenmischung 1-B das Vorliegen von Campylobacter jejuni fest­ gestellt werden. Somit wurde mit dem in der Nährbodenmischung 1-A enthaltenen Zusatz gemäß der Erfindung praktisch das gleich gute Wachstum von Campylobacter jejuni erzielt wie mit dem in der zweiten Nährbodenmischung 1-B enthaltenen bekannten Zusatz. Unterschiede zeigten sich aber im Wachstum der begleitenden Flora.

Lediglich in 65% der Schalen konnte ein etwa gleich starkes Wachstum der begleitenden Flora auf den Nährbogengemischen 1-A und 1-B festgestellt werden. 15% aller Schalen zeigten ein vermehrtes Wachstum der begleitenden Flora auf dem Nährboden­ gemisch 1-A, während 20% aller Schalen ein erhöhtes Wachstum der begleitenden Flora auf dem zweiten Nährboden 1-B erkennen ließen.

Die in der üblichen Weise vorgenommenen Isolationen führten bezuglich der begleitenden Flora zu den folgenden Ergebnissen: Auf der Nährbodenmischung 1-A zeigten nach der ersten Isola­ tion 10%, nach zwei Isolationen 3% und nach drei Isolationen 2% aller Schalen ein stärkeres Wachstum von begleitender Flo­ ra, vornehmlich Hefe- und E. coli-Bakterien. Auf der Nährboden­ mischung 1-B hingegen zeigten nach der ersten Isolation 13%, nach zwei Isolationen 3% und nach drei Isolationen 4% aller Schalen ein stärkeres Wachstum von begleitender Flora, vornehm­ lich Kokken und Pseudomonas.

Man erkennt, daß auf dem den erfindungsgemäßen Zusatz enthal­ tenden Nährbodengemisch 1-A die pathogenen Keime Campylobacter jejuni besser von der begleitenden Flora getrennt werden können als auf dem den bekannten Zusatz enthaltenden Nährbodengemisch 1-B, weil offensichtlich der erfindungsgemäße Zusatz eine stär­ kere antimikrobielle Wirkung auf die begleitende Flora ausübt als der bekannte Zusatz ohne das Wachstum von Campylobacter zu beeinträchtigen.

Beispiel 2

Zu einem bakteriologischen Nährboden, bestehend aus 1 Liter Columbia Agar und 50 ml Schafsblut, wurde ein Zusatz hinzuge­ mischt, der erfindungsgemäß als antimikrobiell wirksame Sub­ stanzen Cefoperazon, Rifampicin, Amphotericin B und Colistin enthielt. Die Konzentration war derart, daß auf je 1 ml Gesamt­ mischung etwa 15 µg Cefoperazon, 10 µg Rifampicin, 2 µg Ampho­ tericin B und 10 I.E. Colistin kamen. Diese Nährbodenmischung ist im folgenden mit "2-A" bezeichnet.

Zum Vergleich mit dem Stand der Technik wurde wieder die im Beispiel 1 erwähnte bekannte Nährbodenmischung 1-B verwendet.

1570 sterile Petrischalen wurden mit der Nährbodenmischung 2-A und die gleiche Anzahl sterile Petrischalen wurden mit der be­ kannten Nährbodenmischung 1-B belegt. Anschließend wurden sämt­ liche Schalen in der üblichen Weise mit Proben eines mensch­ lichen Stuhls inkubiert, wonach man alle Schalen in einer Atmo­ sphäre aus 85% Stickstoff, 10% Kohlendioxid und 5% Sauer­ stoff bei 37°C ruhen ließ.

Nach 18 Stunden konnte in 148 Schalen (= 9,42%) mit der Nähr­ bodenmischung 2-A und in 146 Schalen (= 9,29%) mit der bekann­ ten Nährbodenmischung 1-B die Vermehrung von Campylobacter je­ juni festgestellt werden. Somit hat der in der Nährbodenmischung 2-A enthaltene erfindungsgemäße Zusatz keinen hemmenden Einfluß auf das Wachstum von Campylobacter jejuni, verglichen mit dem bekannten Zusatz in der Nährbodenmischung 1-B.

Noch deutlicher als bei dem Beispiel 1 zeigten sich jedoch Un­ terschiede im Wachstum der begleitenden Flora. Bei 71,6% der Schalen mit der Nährbodenmischung 2-A konnte kein Wachstum von Begleitflora festgestellt werden, wogegen dies lediglich bei 45,7% der Schalen mit der bekannten Nährbodenmischung 1-B der Fall war. Bei den restlichen 28,4% der Schalen mit der Nähr­ bodenmischung 2-A zeigte sich eine begleitende Flora, und zwar im ersten Quadranten bei 23,1%, im zweiten Quadranten bei 3,6% im dritten Quadranten bei 1,0% und im vierten Quadran­ ten bei 0,7% aller Schalen mit der Nährbodenmischung 2-A. Dem­ gegenüber wurde bei 54,3% der Schalen mit dem bekannten Nähr­ bodengemisch 1-B ein Wachstum der Begleitflora festgestellt, und zwar im ersten Quadranten bei 37,6%, im zweiten Quadran­ ten bei 10,0%, im dritten Quadranten bei 2,9% und im vierten Quadranten bei 3,8% aller Schalen mit dem Nährbodengemisch 1-B.

Es leuchtet ein, daß die angestrebte selektive Züchtung von Campylobacter jejuni mit der den erfindungsgemäßen Zusatz ent­ haltenden Nährbodenmischung 2-A erheblich effizienter gelingt als mit der bekannten Nährbodenmischung 1-B, weil der erfindungs­ gemäße Zusatz besser geeignet ist, das Wachstum der Begleit­ flora zu unterdrücken als der bekannte Zusatz.

Der im Beispiel 2 beschriebene Zusatz mit den antimikrobiell wirksamen Substanzen Cefoperazon, Rifampicin, Amphotericin B und Colistin hat sich auch als wirksamer in dem gewünschten Sinn erwiesen als der im Beispiel 1 beschriebene Zusatz, der lediglich Cefoperazon und Rifampicin enthält. Deshalb wird der im Beispiel 2 angegebene erfindungsgemäße Zusatz bevorzugt.

Claims (9)

1. Nährboden zur selektiven Züchtung von Campylobacter faetus subspecies jejuni, welcher als Zusatz mindestens eine anti­ mikrobiell wirksame Substanz enthält, dadurch gekennzeichnet, daß als antimikrobiell wirksame Substanz Cefoperazon vor­ handen ist.

2. Nährboden nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er als antimikrobiell wirksame Substanzen außer Cefo­ perazon noch Rifampicin enthält.

3. Nährboden nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er als antibakteriell wirksame Substanzen außer Cefo­ perazon noch Rifampicin und Amphotericin B enthält.

4. Nährboden nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß er als antibakteriell wirksame Substanzen außer Cefo­ perazon noch Rifampicin, Amphotericin B und Colistin ent­ hält.

5. Nährboden nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß in je 1 ml Gesamtmischung 15 µg Cefoperazon enthalten sind.

6. Nährboden nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß er auf 3 Gew.-Teile Cefoperazon 2 Gew.-Teile Rifampicin enthält.

7. Nährboden nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß in je 1 ml Gesamtmischung 15 µg Cefoperazon und 10 µg Rifampicin enthalten sind.

8. Nährboden nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß er auf 15 Gew.-Teile Cefoperazon 10 Gew.-Teile Rifam­ picin und 2 Gew.-Teile Amphotericin B enthält.

9. Nährboden nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß in je 1 ml Gesamtmischung 10 bis 20 µg Cefoperazon, vorzugsweise 15 µg Cefoperazon, 7 bis 13 µg Rifampicin, vorzugsweise 10 µg Rifampicin, 1 bis 3 µg Amphotericin B, vorzugsweise 2 µg Amphotericin B und 5 bis 15 i.E. Coli­ stin, vorzugsweise 10 i.E. Colistin, enthalten sind.