IT8322931A1 - Supplemento per terreni nutritivi per la coltivazione di campylobacter jejuni - Google Patents
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Description
Descrizione di un'invenzione industriale avente titolo:
SUPPLEMENTO PER TERRENI NUTRITIVI PER LA COLTIVAZIONE DI CAMPYLOBACTER JEJUNI,'
R I A S S U N T O
Il supplemento destinato a terreni nutritivi hatteriologici, che consente una coltivazione particolarmente selettiva di Campylobacter .je.juni , contiene cefoperazone come sostanza antimicrobica attiva, associata opportunamente con rifampioina e preferibilmente anche con anfotericina B e colistina. Con questo supplemento la crescita di Campylobacter .je.juni non viene praticamente compromessa, mentre la.crescita di altri batteri viene significativamente impedita. A questo modo viene sostanzialmente facilitato l'isolamento e il riconoscimento del Campylobacter .je.juni su un terreno nutritivo battermologico.
D E S C R I Z I O N E
La presente invenzione riguarda un supplemento per terreni nutritivi per la coltivazione selettiva di Campylobacter je.juni , supplemento che contiene almeno una sostanza attiva .
E' noto da pochi anni che il genere batterico Campylohacter ha una funzione importante nel provocare la gastroenterite. In particolare la specie Campylohacter faetus sottospecie jejuni,chiamata qui di seguito in breve Campylobnoter ,1e juni, fu scoperta come particolarmente pericolosa per gli uomini e molti animali. Esiste pertanto una necessit?, a scopo di diagnosi e/o di studio di medicamenti e di resistenza, di coltivare selettivamente il Campylohacter jejuni.
Per impedire il pi? possibile che in un terreno nutritivo batteriologico si sviluppino, oltre il Campylobacter .je.juni, sostanzialmente anche altri microorganismi, si sono gi? mescolate al terreno nutritivo usato talune sostanze attive come antimicrobici, verso le quali il Campylobacter je.juni presenta una resistenza pi? elevata rispetto ad altri microorganismi. Sono noti supplementi da.mescolare ai terreni nutritivi, che contengono p.es. una o pi? delle seguenti sostanze attive come antimicrobici: polimicina, rifampicina, trimetoprim, actidione, oolistina, bacitracina, novobiocina, cicloeximide, cefazolina, anfoterioina.
La presente invenzione ha per scopo di procurare un supplemento del tipo detto Bopra, la cui azione selettiva a favore del Campylobacter .-jejuni sia considerevolmente superiore a quella dei supplementi di questo tipo finora conosciuti.
Il supplemento secondo l'invenzione, col quale si ? ottenuto 10 scopo indicato, si differenzia dai noti supplementi del tipo sopra accennato per il fatto che come sostanza attiva come antimiorobico ? presente il cefoperazone.
Finora il cefoperazone non ? mai stato usato come sostanza attiva nei supplementi per terreni nutritivi, per la coltivazione selettiva del Campylobacter .je.juni. Si ? dimostrato che il cefoperazone ? in grado di esercitare un'azione antimicrobica selettiva particolarmente marcata nel senso desiderato.
11 supplemento dell'invenzione contiene vantaggiosamente come sostanze attive come antimicrobici, oltre il cefoperazone, anche la rifampicina e preferibilmente anche l'anfotericina B e la colistina.
Secondo un ulteriore aspetto dell'invenzione il supplemento viene usato in miscela con un terreno nutritivo batteriologioo per la coltivazione selettiva del Campylobacter .je.juni in modo tale che per 1 mi di miscela totale siano presenti circa 10 y.g di rifampicina e circa 15 di cefoperazone ed eventualmente anche circa 2 ug di anfotericina B e circa 10 U.I. di oolistina. Una tale composizione oonsente un'ottima crescita di Campylobacter .je.juni, mentre la crescita della flora acoompagnante indesiderata ? significativamente inibita. In questo modo l'isolamento dell'agente patogeno Campylobacter .je.juni viene sostanzialmente facilitato.
Una buona solubilit? in acqua ? un ulteriore vantaggio del supplemento secondo l?invenzione.
A semplice titolo di esempio l'invenzione viene qui appresso descritta pi? dettagliatamente:
Esempio 1
A un comune terreno batteriologico nutritivo, consistente di 1 litro di Agar Columbia e 50 mi di sangue di pecora, si mescol? un supplemento contenente 3 parti in peso di cefoperazone e 2 parti in peso di rifampicina. La concentrazione venne scelta in modo tale che per 1 mi di miscela totale fossero presenti circa 15 di cefoperazone e oirca 10 ^ig di rifampicina. Questa miscela di terreno nutritivo ? qui di seguito designata "1?A".
Per confronto con lo stato della tecnica si prepar? una seconda miscela di terreno nutritivo designata qui di seguito "1-B", che aveva la seguente composizione: 1 litro di agar Columbia, 50 mi di sangue di peoora e un supplemento finora considerato particolarmente selettivo, contenente per 1 mi di miscela totale, 25 U.I. di bacitracina, 50 ug di cicloesimide, 10 U.I. di colistina, 15 di cefazolina e 5ug di novobiocina.
759 dischi Petri sterili furono caricati con la miscela di terreno nutritivo 1-A e lo stesso numero di dischi Petri con la seconda miscela di terreno nutritivo 1-B. Quindi tutti i dischi, nel modo abituale per le esperienze batteriologiche, furono incubati con campioni delle stesse feci umane, dopo di che tutti i dischi furono lasciati a s? a 37?C in un'atmosfera di 85% di azoto* 10$ di anidride carbonica e 5> %i ossigeno.
Dopo 20 ore in 55 disohi (= 7,24%) con il terreno nutritivo 1-A e in 56 dischi (= 7,37%)ocn il terreno nutritivo 1-B si pot? rilevare la presenza del Campylobacter .je.juni.
Pertanto con il supplemento secondo l'invenzione contenuto nella miscela di terreno nutritivo 1-A si otteneva praticamente la stessa buone crescita di Campylobacter .je.iuni che col noto supplemento contenuto nella seconda miscela di terreno nutritivo 1-B. Si notarono per? differenze nella crescita della flora accompagnante. Soltanto in 65$ dei dischi si pot? notare una,crescita egualmente forte della flora accompagnante nelle miscele di terreno nutritivo 1-A e 1-B. Il 15% dei dischi presentavano un'aumentata crescita della flora accompagnante sulla miscela di terreno nutritivo 1-A, mentre nel 20% dei dischi era riconoscibile un aumentato sviluppo della flora accompagnante sul secondo terreno nutritivo 1-B. Gli isolamenti eseguiti in modo usuale conducevano, per quanto riguarda la flora accompagnante, ai seguenti risultati: sulla miscela di terreno nutritivo 1-A il 10$ dei dischi mostrava dopo il primo isolamento una pi? forte orescita di flora accompagnante, il 3$ dopo due isolamenti e il 2$ dopo tre isolamenti, particolarmente batteri di lieviti e di E.coli.
Sulla miscela di terreno di coltura 1-B, invece, dopo il primo isolamento il 13%, dopo due isolamenti il 3% e dopo tre isolamenti il 4% di tutti i dischi presentava una crescita maggiore di flora accompagnante, specialmente cocchi e pseudomonas.
Si rileva che nella miscela di terreno nutritivo 1-A contenente il supplemento dell'invenzione i germi patogeni di Campylohacter .je.juni possono essere isolati dalla flora accompagnante meglioche nella miscela di terreno nutritivo 1-B contenente il supplemento noto, perch? evidentemente il supplemento dell'invenzione esercita un'azione antimicrohica maggiore sulla flora accompagnante rispetto al supplemento noto, senza compromettere la crescita del Campylohacter.
Esempio 2
A un terreno batteriologico consistente di 1 litro di agar Columbia e 50 mi di sangue di pecora, si mescol? un supplemento che conteneva, secondo l'invenzione, come sostanze antimicrobiche attive, cefoperazone, rifampicina, anfo terioina B e colistina.La concentrazione era tale che per 1 mi di miscela totale erano presenti circa 15 yg di cefoperazone, 10 ug di rifampicina, 2 ug di anfotericina B e 10 U.I. di colistina. Questa miscela di terreno di coltura ? designata qui di seguito "2-A".
Per confronto con lo stato della tecnica si us? di nuovo la nota miscela di terreno di coltura 1-B accennata nell?esempio 1.
1570 dischi Petri sterili furono caricati con la miscela di terreno di coltura 2-A e lo stesso numero di dischi Petri sterili con la nota miscela di terreno di coltura 1-B. Tutti i dischi vennero quindi incubati nel solito modo con campioni di feci umane, dopo di che si lasciarono a riposo tutti i dischi in un'atmosfera di 85$ di azoto, 10$ di anidride carbonica e 5% di ossigeno.
Dopo 18 ore si pot| constatare la crescita del Campylobacter .je.juni in 148 dischi (= 9,42$) con la miscela di terreno di coltura 2-A e in 146 dischi (= 9,29$) con la nota miscela di terreno di ooltura 1-B. Pertanto il supplemento dell'invenzione contenuto nella miscela di terreno di coltura 2-A non ha alcuna azione inibente sulla crescita del Campylobacter ,je.juni, in confronto col noto supplemento nella miscela di terreno di coltura 1-B.
Ancor pi? evidentemente che nell'esempio 1 si rilevarono tuttavia differenze nella crescita della flora accompagnante. In 71,6% dei dischi con la miscela di terreno di coltura 2-A non si pot? rilevare alcuna crescita di flora accompagnante, mentre ci? avveniva in 45,7% dei dischi con la nota miscela di terreno di coltura 1-B. Nel restante 28,4% dei dischi con la miscela di terreno di coltura 2-A si presentava una flora accompagnante, nel primo quadrante in 23,1%, nel secondo quadrante in 3,6%, nel terzo quadrante in 1,0$ e nel quarto quadrante in 0,7% di tutti i dischi con la miscela di terreno nutritivo 2-A. Al contrario, in 54,3% %ei dischi con la nota miscela di terreno di coltura 1-B'si not? crescita della flora accompagnante, nel primo quadrante in 37,6$, nel secondo quadrante in 10,0$, nel terzo quadrante in 2,9$ e nel terzo quadrante in 3,8$ di tutti i dischi con la miscela di terreno di coltura 1-B.
E' evidente che la desiderata coltivazione selettiva del Campylohacter .le.junl riesce in modo notevolmente pi? efficiente con la miscela di terreno di coltura 2-A contenente il supplemento dell'invenzione che con la nota miscela di terreno di coltura 1-B, perch? il supplemento secondo l'invenzione ? pi? adatto del supplemento noto per reprimere la crescita della flora accompagnante.
Il supplemento descritto nell'esempio 2 con le sostanze antimicrohiche attive cefoperazone, rifampicina, anfotericina B e colistina si ? anche dimostrato pi? attivo nel senso desiderato del supplemento descritto nell'esempio 1, che contiene soltanto cefoperazone e rifampicina. Perci? il supplemento dell'invenzione indicato nell'esempio 2 ? preferito. L'invenzione comprende tuttavia tutti i supplementi destinati ai terreni nutritivi per la coltivazione selettiva del Campylohacter .je.juni, contenenti cefoperazone ed eventualmente altre sostanze attive come antimicrohioi.
Claims (11)
1. Supplemento per terreni nutritivi per la coltivazione selettiva del Campylpbacter .je.juni, contenente almeno una sostanza attiva come antimicrobioo, caratterizzato dal fatto che come sostanza attiva come antlmicrobico ? presente cefoperazone.
2. Supplemento secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto di contenere come sostanze attive come antimicro? bici, oltre cefoperazone, anche rifampicina.
3. Supplemento secondo la rivendicazione 2, caratterizzato dal fatto di contenere, per 3 parti in peso di cefoperazone, circa 2 parti in peso di rifampicina.
4. Supplemento secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto di contenere come sostanze attive come aritimicrobioi, oltre cefoperazone, anche rifampicina e anfotericina B.
5. Supplemento secondo la.rivendicazione 4, caratterizzato dal fatto di contenere, per 15 parti in peso di cefoperazone, circa 10 parti in peso di rifampicina e circa 2 parti in peso di anfotericina B.
6. Supplemento secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto di contenere come sostanze attive come antibatterici, oltre cefoperazone, anche rifampicina, anfotericina B e colistina.
7. Supplemento secondo-la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto ohe le sostanze attive come antimiorobici sono presenti nelle seguenti proporzioni:
8. Supplemento secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che le sostanze attive come ant'imicr.obici sono presenti circa nelle seguenti proporzioni:
9. Uso del supplemento secondo la rivendicazione 1 in miscela oon un terreno nutritivo batteriologico per la coltivazione selettiva del Campylobacter, caratterizzato dal fatto che per 1 mi di miscela totale si usano circa 15 ug di cefoperazone.
10. Uso del supplemento secondo la rivendicazione 2 in miscela con un terreno nutritivo batteriologico per la coltivazione selettiva del Campylobacter, caratterizzato dal fatto che per 1 mi di miscela totale si usano circa 15 )ig di cefoperazone e circa 10 ug di rifampicina.
11. Uso del sppplemento secondo la rivendicazione 6 in miscela con un terreno nutritivo batteriologico per la coltivazione selettiva del Campylobaoter, caratterizzato dal fatto ohe per 1 mi di miscela totale si usano circa 15 di cefoperazone, circa 10 ug di rifampicina, circa 2 ug di anfotericina B e circa 10 U.I. di colistina.
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