DE3200662A1

DE3200662A1 - Neue nitrosoharnstoffderivate

Info

Publication number: DE3200662A1
Application number: DE19823200662
Authority: DE
Inventors: Tetsuo Musashino Tokyo Suami
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1981-01-12
Filing date: 1982-01-12
Publication date: 1982-08-26
Also published as: DE3200662C2; FR2497800B1; JPS57116043A; GB2091261B; GB2091261A; US4452814A; FR2497800A1; CA1186686A

Description

SUAMI .: .""· .**. ,: .*"..·*. P 1365-DE

J/UUoD - 7 -

BESCHREIBUNG

Die Erfindung betrifft neue Nitrosoharnstoffderivate mit großer Inhibitorwirkung gegenüber Leukämie und Tumoren, Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen und ihre pharmazeutische Verwendung.

Es wurden zahlreiche Verbindungen vorgeschlagen, die Leukämie und Tumore wirkungsvoll inhibieren sollen, wozu auch Nitrosoharnstoffderivate zählen. Zu bekannten Nitrosoharnstoffderivaten zählt Streptozotocin N-(N'-Methyl-N¹-nitrosocarbamoyl)-D-glucosamin und dessen Derivate wie Methylglucosaminid (z.B. US-PS 3 577 406 und US-PS 3 767 640); diese Verbindungen sind jedoch hinsichtlich ihrer nicht ausreichenden Wirksamkeit gegenüber Leukämie und Tumoren und/oder wegen unerwünschter Nebenwirkungen unbefriedigend. Zu einer anderen Klasse Nitrosoharnstof f derivaten zählen Halogenalkylnitrosoharnstoffe, wobei ein typischer Vertreter der 1,3-bis(2-Chloräthyl)-1-nitrosoharnstof f (abgekürzt BCNU) ( siehe beispielsweise A.Goldin et al, Cancer Chemotherapy Rept., 4_0, 57 (1964) und T.P.Johnston et al., Journal of Medicinal Chemistry £, 892-911 (1966)) ist.

Es wurde ebenfalls über die Synthese und die chemischen und pharmakologischen Eigenschaften einer ganzen Reihe von Nitrosoharnstoffen berichtet; in diesem Zusammenhang wurden als hochinteressante Verbindungen Glycosylderivate von Nitrosoharnstof fen (beispielsweise US-PS 4 086 415, US-PS 4 157 439 und US-PS 4 220 643) und hydroxy-substituierte Cyclohexylderivate von Nitrosoharnstoffen (beispielsweise US-PS 4 180 655) vorgeschlagen. Die in diesem Zusammenhang interessanteste Verbindung ist 1-(2-Chloräthyl)-3-(ß-D-glucopyranosyl)-1-nitrosoharnstoff (abgekürzt GANU) sowie 1-(2-Chloräthyl)-3-(1,3/2N-dihydroxycyclohexyl)-1-nitrosoharnstoff (abgekürzt als DONU), wobei beide dieser Verbindungen ein breites Spektrum Antitumoraktivität gegen verschiedene Arten experimenteller Leukämie und Tumoren mit positiver Perspektive für wirksamen Einsatz

SUAMI ': .;,■! -..·'-: P 1365-DE

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zur chemotherapeutischen Behandlung von Krebs in der Humanmedizin.

Erfindungsgemäß wurden nunmehr drei Nitrosoharnstoffderivatgruppen gefunden, die überaus hohe Inhibitoraktivität gegenüber Leukämie und Tumoren bei gleichzeitig niederer Toxizität aufweisen, wie in in. vivo Versuchen gefunden wurde.

Erfindungsgemäß betrifft die erste Gruppe neuer Nitrosoharnstoffderivate Verbindungen der Formel (I):

1 R³R⁴
R¹ ^

NCOCHNCONCH₀Ch₀X- " (I)

R²^ '
^R NO

12 4
in der R , R und R gleich oder verschieden sein können und für Wasserstoff, eine Alkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Alkanoyl- und/ oder eine heterocyclische Gruppe, R für den Rest an einem c<Kohlenstoffatom einer «^.-Aminosäure, und X für Chlor, Fluor oder Brom stehen.

Bei der zuvor gegebenen Definition für R bedeutet die Formulierung "der Rest an dem oC-Kohlenstof f atom einer oL-Aminosäure" eine Gruppe, die eine Aminosäure bildet, wenn sie mit einem Kohlenstoffatom verbunden ist, an die eine Aminogruppe, eine Carboxylgruppe und ein Wasserstoffatom gebunden sind. So bedeutet die Gruppe R einen solchen Rest einer <A-

5 -CH-

Aminosäure, der auftritt oder sich ableiten läßt, wenn die o( Aminogruppe und die ©(-Carboxylgruppe von dem Molekül der ·< Aminosäure entfernt werden. Beispielsweise kann die Gruppe R

-CH-die Formel H

-CH-, nämlich -CH₂-

besitzen; diese ist aus Glycin abgeleitet, indem die Amino- und Carboxylgruppe vom Glycinmolekül entfernt wird; oder sie kann die Formel CH₀

I ³
-CH-

suAMi ·: * : : *: ·,.* -p;1365-de

"■ Q —

besitzen, die in gleicher Weise vom Alanin abgeleitet ist, oder die Formel:

CH,

die in gleicher Weise vom Phenylalanin abgeleitet ist, oder die Formel:

CH₀OH
I ²
-CH-

die vom Serin abgeleitet ist, oder die'Formel:

CH₀CONH₀
I ^{2 2}
-CH-

die vom Asparagin abgeleitet ist, usw. Zu typischen Vertretern solcher Reste R zählen solche am o6-Kohlenstoffatom von Glycin, Alanin, Phenylalanin, Sarcosin, Serin, Tryptophan, Prolin, Methionin, Cystein, Tyrosin, Valin, Leucin, Isoleucin, Threonin, Asparaginsäure, Asparagin, Glutaminsäure, Glutamin, Lysin, Hydroxylysin. Histidin und Arginin.

Als zweite Gruppe neuer Nitrosoharnstoffderivate gelten erfindungsgemäß Verbindungen der Formel (II):

R¹

^ I

NCO(CH₀) NCONCH₀CH₀X (II)

„^, & η ι δ /.

^R NO

in der R¹ , R², R⁴ und X die angegebene Bedeutung haben und wobei η 2 oder 3 ist.

Als dritte Gruppe neuer Nitrosoharnstoffderivate werden erfindungsgemäß Verbindungen gemäß Formel (III) zur Verfügung gestellt:

V *

SUAMI ·: - ; ·"'; -; ·.„·« :Ρ 1365-DE

- 10 -

OH
Π NHCCH₀NHCNCH₉CH₉Ci

\| Il ^ IH

O ΟΝΟ

(III)

NHAc

in der Ac für eine Alkanoylgruppe steht.

12 4

In den Formeln (I) und (II) stehen P. , R und R vorzugsweise für niedere Alkylgruppen mit 1 bis * r.ohlenstoff atomen, wie Methyl-, Äthyl-, Propyl- und Butylgruppen, unsubstituierte oder mit niederen Alkylgruppen (vorzugsweise Methylgruppe), einer niederen Alkoxygruppe (vorzugsweise Methoxygruppe) oder Halogen (vorzugsweise Chlor) substituierte Phenylgruppen, Arakylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen im Alkylrest, insbesondere die Phenylalkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen im Alkylrest; niedere Alkanoylgruppen mi:: 1 bis 4 Kohlenstoffatomen im Alkylrest (insbesondere Acetyl), sowie Furyl-, Thienyl-, Pyridyl-, Pyrimidyl-, Imidazolyl- und Acridinylgruppen und ähnliche.

Erfindungsgemäß können die Nitrosoharnstoffderivate gemäß Formel (I) auf zwei verschiedenen Wegen hergestellt werden. Im ersten Weg wird eine Verbindung der Formel (IV):

R³R⁴

^R\ ι i

NCOCHNH (IV)

R^

in der R , R , R und R die zuvor gegebene Bedeutung besitzen, mit p-Nitrophenyl N-(2-haloäthyl)-N-nitrosocarbamat bei Temperaturen von 0 bis 50⁰C in einem geeigneten Lösungsmittel wie ■ Tetrahydrofuran umgesetzt.

Der zweite Weg besteht in der Umsetzung einer Verbindung

SUAMI ·· ♦*"; "; -; -""."'Ί ^ρ 1365-DE

- 11 -

der Formel (V):

_R1 R³R⁴

NCOCHNCONHCh₀CH₀X (V)

12 3 4
in der R , R , R , R und X die vorgegebene Bedeutung besitzen, mit einem Nitrosierungsmittel in einem geeigneten Lösungsmittel. Alle üblichen Nitrosierungsmittel, wie Natriumnitrit, Stickstofftrioxid, Stickstofftetroxid, Nitrosylchlorid und ähnliche sind verwendbar. Zu geeigneten Lösungsmitteln für diese Reaktion zählen organische Lösungsmittel wie Ameisensäure, Essigsäure und ähnliche. Die Reaktionstemperatur kann normalerweise im Bereich von 0° bis 8O⁰C liegen.

Die Verbindungen gemäß Formel (I), die auf einem dieser beiden Wege hergestellt wurden, können aus der Reaktionslösung leicht abgetrennt und in üblicher Weise einschließlich mittels eines Ionenaustauscherharzes, Säulenchromatographie und/oder Umkristallisieren mit einem organischen Lösungsmittel gereinigt werden.

Die Nitrosoharnstoffderivate gemäß Formel (II) können erfindungsgemäß in gleicher Weise wie die Verbindungen gemäß Formel (I) hergestellt werden. So können sowohl die erste als auch der zweite Weg zur Herstellung von Verbindungen gemäß Formel (I) zur Herstellung der Verbindungen gemäß der Formel (II) unter der Voraussetzung beschritten werden, daß die Ausgangsverbindungen gemäß Formeln (IV) und (V) durch Verbindungen der Formeln (VI) und (VII) ersetzt werden:

R¹

^R\ I

NCO(CH ) NH (VI)

NCO(CH„) NCONHCH₉CH₀X (VII)

_2/ ^{2 n}

SUAMI -° .". .*'. ·■ ."..*·. P 1365-DE

- 12 -

wobei R , R , R , X und η die zuvor gegebene Bedeutung besitzen.

In Formel (III) ist Ac vorzugsweise eine niedere Alkaloylgruppe mit l bis 4 Kohlenstoffatomen im Alkylrest, insbesondere 5 die Acetylgruppe.

Die Nitrosoharnstoffderivate gemäß Formel (III) können erfindungsgemäß auf folgendem Weg hergestellt werden:

¹⁵ κ DAo / Hydrierung ' |\Υ^Α0 / mit N-geschütztem

OAc

katalvtische . / . . M Peptisierung

mit N-c Glycin

NHAc NHAc

(VIII) 20

SUAMI

P 1365-DE

- 13 -

rOAc

OAc

AcO

NIiCCH₂NHZ

OH

NHAc ■η NHCCH₀NHZ ν ι H ^ά ^V| O

OH-Schutz-

spaltung

(X) NHAc (XI)

N-Schutzarunptqnabspaltung

NHAc (XII)

NO

Base

_Γ0Η

r—o.

OH

HO

NHAc (III)

O ΟΝΟ

(Z=Benzyloxycarbony !gruppe)

SUAMi »r, ,··. .··. .: .·*..*·. ρ 1365-de

- 14 -

Die katalytische Hydrierung des Azidderivats (VIII) zu der Aminoverbindung (IX) kann in üblicher Weise beispielsweise in Gegenwart von Raney-Nickel im Methanol durchgeführt werden.

Bei der folgenden Peptisierung des Aminoderivats (IX) kann das N-geschützte Glycin vorzugsweise in Form eines aktiven

Esters verwendet werden, der durch Umsetzung des N-geschützten Glycins mit N-Hydroxysuccinimid in Gegenwart von Dicyclohexylcarbodiimid (DCC) in einem geeigneten Lösungsmittel in geeigneter Weise hergestellt wird. Die Peptisierung, bzw. die Peptidbildung geschieht durch Umsetzung des Aminoderivats (IX) mit dem aktiven Ester bei einer Temperatur im Bereich von 0° bis 50⁰C in Gegenwart einer Base, wie Triäthylamin, Ν,Ν-Dimethylamin
und/oder Monoäthylamin in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, Methanol, Äthanol und/oder Dioxan und führt zur Verbindung (X).

Die Abspaltung der OH-Schutzgruppe der Verbindung (X) kann in üblicher Weise, beispielsweise durch Umsetzung der Verbindung mit Natriummethoxidin einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden. Nachfolgend kann die Abspaltung der N-Schutzgruppe Z (Benzyloxycarbonylgruppe) der Verbindung (XI) in üblicher Weise, beispielsweise durch katalytische Hydrierung in Gegenwart von Palladiumschwarz unter Bildung der Verbindung (XII) erfolgen.

Die Endstufe der Peptisation kann erreicht werden durch Umsetzung der Verbindung (XII) mit p-Nitrophenyl N-(2-chloräthyl)-N-nitrosocarbamat bei einer Temperatur von 0° bis 5O⁰C in Gegenwart einer Base wie Triäthylamin in einem geeigneten Lösungsmittel wie Tetrahydrofuran zu der Verbindung (III).

Die Isolierung der Verbindung (III) aus der Reaktionslösung und ihre Reinigung kann in analoger Weise wie bei der
Herstellung der Verbindungen (I) und (II) beschrieben, erfolgen .

Zu geeigneten Nitrosoharnstoffderivaten gemäß Formel (I) zählen:

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— 15 —

N- {Ν¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] glycinamid; N- JN'-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoyl] sarcosinamid; N-JN'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -L-phenylalaninamid; N- JN'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -L-tyrosinamid; N- JN'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -L-valinamid; N- [n¹- (2-Chloräthyl) -N¹ -nitrosocarbamoyl] -DL-leucinamid; N- [n'-(2-Chloräthyl) -N' -nitrosocarbamoyl] -L-serinamid; N- |n'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -L-methioninamid; und N- [n '-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl[-prolinamid.

Zu geeigneten Beispielen von Nitrosoharnstoffderivaten gemäß Formel (II) zählen:

N- JN¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -ß-alaninamid; und N- [n¹ - (2-Chloräthyl) -N' -nitrosocarbamoyl] -^"-aminobuttersäureamid. Ein typisches Beispiel für die Nitrosoharnstoffderivate gemaß Formel (III) ist 2-Acetamid-1-[[[[(2-chloräthyl)nitrosoaminojcarbonyljglycyIJ amino] -1,2-dideoxy-ß-D-glucopyranose.

Die antileukämisehe Aktivität eines typischen erfihdungsgemäßen Nitrosoharnstoffderivats gemäß Formel (I) wurde hinsichtlich Leukemia L 1210 bei Mäusen untersucht; Einzelheiten

werden im folgenden beschrieben.

Verbindung

N- [N¹ - (2-Chloräthyl) -N¹ -nitro.socarbamoyl] glycinamid.

Tiere

Männliche BDF₁ Mäuse, etwa 7 Wochen alt und mit einem Gewicht von 22 - 1 g wurden in Gruppen von 5 Tieren je Versuch eingesetzt.

Tumorzellen

Leukemia-L 1210-Zellen wurden intraperitonäal in einer Konzentration von 1x10 Zellen/0,05 ml/Maus eingeimpft.

Methode
Die Testverbindung wurde in einer physiologischen Salzlö-

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,"P. 1365-DE

- 16 -

10

sung gelöst; es wurde eine Serie von Lösungen vorbestimmter Konzentrationen hergestellt; jeweils 0,1 ml jeder Lösung wurde jeder Maus intraperitonäal einmal täglich/ beginnend 24 Stunden nach Einimpfen der Tumorzellen, in drei aufeinanderfolgenden Tagen verabreicht. Die antileukämische Aktivität der Testverbindung wurde anhand der Überlebenstage und prozentualer Erhöhung der Lebensdauer gemessen. Der prozentuale Anstieg der Lebensdauer (ILS) wurde wie folgt berechnet:

ILS (%) =

T-C

χ 100

15 20 25

T: Mittlere Anzahl der Uberlebenstage der behandelten Tiere C: Mittlere Anzahl der Überlebenstage der unbehandelten Tiere

Der Kontrollversuch wurde in gleicher Weise wie die Testversuche mit der Ausnahme durchgeführt, daß 0,1 ml der physiologischen Salzlösung anstelle der Lösung der Testverbindung verabreicht wurde.

Die Versuchsergebnisse werden in der folgenden Tabelle wiedergegeben.

30

Dosis der Verbindung (mg/kg)	Mittlere Anzahl der Überlebens tage behandelt/Vergleich	ILS (%)
16	>60,0/7,7	>679,2
8	^60,0/7,7	>679,2
2	14,0/7,7	81 ,8
1	10,6/7,7	37,7
0,5	10,2/7,7	32,5

35

Die Versuchsergebnisse zeigen deutlich, daß die erfindungsgemäßen neuen Nitrosoharnstoffderivate hohe ILS-Werte bei sehr geringer Dosis ohne Auftreten von Ascites aufweisen; es kann hieraus gefolgert werden, daß sie in der Humanmedizin zur chemo-

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therapeutischen Behandlung von leukämischen und Tumorerkrankungen geeignet sind.

Die Nitrosoharnstoffderivate gemäß Formeln (I), (II) und (III) gemäß Erfindung sind desweiteren durch ihre geringe Toxizität gekennzeichnet. In der folgenden Tabelle wird die akute Toxizität einiger typischer· Vertreter der Verbindungen gemäß Formel (I) mit Hilfe des LDj-Q-Wertes aufgezeigt, wobei diese Verbindungen intraperitonäal (i.p.) oder intravenös (i.v.) männlichen BDF..-Mäusen im Alter von etwa 6 Wochen verabreicht und die Beobachtungen nach Ablauf von 21 Tagen gemäß der Litchfield-Wilcoxon-Methode durchgeführt wurden:

Verbindung ^LD50

i.p. i.v.

N- ]n'-(2-ChloräthyI)-N'-nitroso-

carbamoyl] glycinamid 21,2 22,4

N- JN'-(2-Chloräthyl)-N'-nitroso-

carbamoyl] sarcosinamid 392,0 426,6

N- |N'-(2-Chloräthyl)-N'-nitroso-

carbamoylj prolinamid 219,6 195,4

Erfindungsgemäß wird ebenfalls eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verfügung gestellt, die therapeutisch wirksame Mengen eines Nitrosoharnstoffderivates gemäß Formel (I), (II) und/oder (III) zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichem Träger, Verdünnungsmittel oder üblichen Arzneimittelträger enthält.

Die pharmazeutische Zusammensetzung kann in an sich bekannter Verabreichungsform zur oralen Verabreichung oder zur Injektion für Menschen, oder in geeigneter Form zu oraler, In-

SUAMI ., „·\ .··, ,; ,*\ p-3 365-DE

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jektion- oder intraperitonäaler Verabreichung für Tiere vorliegen. Geeigneter Weise liegt deshalb die pharmazeutische Zusammensetzung als Losung in einer Ampulle, in Kapselform, Tablettenform, Pulvergranulat oder ähnlicher Form für orale Verabreichung oder zur Injektion vor.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind allein oder in Verbindung mit anderen an sich bekannten therapeutischen Zugaben geeignete Mittel zur Behandlung von leukämischen und Tumorerkrankungen bei Mensch und Tier, wobei dieses Mittel in geeigneten Zeitabständen dem Patienten in geeigneten therapeutischen Dosen verabreicht· wird. Die tatsächlich zu verabreichende Menge hängt von der jeweiligen einzelnen Verbindung, der verwendeten Zusammensetzung, der Art der Verabreichung der vorausgesehenen Dauer der Verabreichung und anderen Variablen ab. Natürlich spielen auch die dem Fachmann geläufigen Einflüsse der Konstitution des Patienten, wie Alter, Körpergewicht, Geschlecht, Ernährung, Metabolismus und Excretion, Sensitivität, und Art und Umfang der Erkrankung eine Rolle. Die zu verwendende Dosierung kann sich der Fachmann in Kenntnis der aufgezählten Parameter leicht erarbeiten.

Im folgenden wird anhand von Beispielen die Herstellung der erfindungsgemäßen Nitrosoharnstoffderivate sowie die Herstellung der Ausgangs- und Zwischenprodukte beschrieben.

BEISPIEL 1

Herstellung von N- [n¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyi] glycinamid

H₀NCCH₀NH₀ H₀NCCh₀NHCNCH₀CH₀CI

Δ it Δ Δ Δ \\ Δ u ι Δ Δ

" " "ΙΟ O ΟΝΟ

Glycinamidhydrochlorid (200 mg , 1,81 mmol) wurden in Wasser (10 ml) gelöst. Der Lösung wurde Amberlite IRA-400 (OH -Form), ein stark basisches Anionenaustauscherharz von Rohm % Haas (5,4 ml) zugesetzt und die Mischung 15 Minuten

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gerührt/ um die Dehydrochlorierung zu bewirken.

Nach Abfiltern des Harzes wurd e das Filtrat im Vakuum zu einem öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde in Methanol (3 ml) gelöst und tropfenweise mit einer Lösung von p-Nitrophenyl-N-(2-chloräthyl)-N-nitrosocarbamat (520 mg, 1,05 Mol je Mol Ausgangsverbindung) in Tetrahydrofuran (7 ml) in der Dunkelheit unter Rühren versetzt. Nach 30 Minuten wurde die Reaktionslösung dünnschichtchromatographisch mit einem Fintwickler auf Chloroform/Methanolbasis (5:1 Volumenverhältnis), analysiert, vrobei die Bildung eines Kondonsationsproauktes durch Ausbildung eines einzelnen Flecks mit einem Rf-Wert von 0,62 bestätigt wurde. Die Reaktionslösung wurde dann im Vakuum zu einem tief gelben öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch über Silicagel (Wakogel C-300, 5 g, ein Produkt der Wako Pure Chemical Co., Ltd.) mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Äthanolbasis (8:1 Volumenverhältnis) gereinigt, wobei das Eluat aus der Silicagelsäure in Fraktionen gesammelt und die Fraktionen, die das gewünschte Produkt ent- . hielten, vereinigt und zu einem schwachgelben öligen Rückstand (350 mg) konzentriert wurden. Der Rückstand wurde aus Äthyläther kristallisiert, anschließend mit Äthanol gewaschen und ergab N-[N*-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoy^ glycinamid (275 mg) als schwachgelbe prismenartige Kristalle. Ausbeute 72,9%; Schmelzpunkt 125-126°C (Zersetzung)

Elementaranalyse:

Berechnet für C₅H₉N₄O₃Cl, MW = 208,611:

C: 28,79, H: 4,25, N: 26,86, Cl: 17,00% Gefunden: C: 29,00, H: 4,35, N: 26,56, Cl: 17,35%

BEISPIEL 2

Herstellung von N- JN¹ - (2-Chloräthyl) -N' -nitrosocarbamoylj sarcosinamid

CH I

, OCHo

I ³ Il I ³

ClCH₀CH₀NHCNCH₀COnH₀ ClCH_oCH_oNCNCH_oC0NH_o

22,22 2 2|22

O NO

l> B * *

suAMi *: " : : : *: )j?"I3S5-de

- 20 -

N-[n¹-(2-Chloräethyl)carbamoyIJ sarcosinamid (100 mg, 0,516 mmol) wurden in 99%iger Ameisensäure (0,7 ml) unter Eiskühlung gelöst, und langsam mit Natriumnitr.it· (53,4 mg, 1,5 Mole je Mol Ausgangsverbindung) versetzt; die Mischung wurde zur Vervollständigung der Reaktion weitere 30 Minuten gerührt. Dann wurde Amberlite IR-120 (H -Form), ein stark saures Kationenaustauscherharz von Röhm & Haas (1 ml) und Methanol (1 ml) der gebildeten Reaktionsmischung zugesetzt und 10 Minuten gerührt. Nach Abfiltrieren des Harzes wurde die Reaktionslösung im Vakuum zu einem öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch über Silicagel (Wakogel C-300) mit einem Entwicklersystem auf Toluol-Äthanolbasis (3:1 Volumenverhältnis) gereinigt, wobei das Eluat in Fraktionen gesammelt und die Fraktionen, die das Hauptprodukt enthielten, vereinigt und im Vakuum zu N-(n'-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoyljsarcosinamid (62 mg) als weißer kristalliner Rückstand konzentriert. Ausbeute 53,9%; Schmelzpunkt 86-88°C (Zers.)

Elementaranalyse:

Berechnet für C₆H₁₁N₄O₃Cl, MW = 222,637:

C: 32,37, H: 4,98, N: 25,17, Cl: 15,93 % gefunden: C: 32,14, H: 4,88, N: 24,81, Cl: 16,18 %

BEISPIEL 3:

Herstellung von 2-Acetamido-1-ΓΓίΎ (2-chloräthyl)nitrosoamine! carbonyl] glycylj aminoj-1,2-dideoxy-ß-D-glucopyranose

	P OH	O	HO	O NHCCH₀NH₀
	j—O NHCCH₂I
/	?^h 7 °		iH )
k	H NHCOCH,		NHCOCH₅
HO

(XI) (XII)

NHCCH₀NHCNCh₉CH₉C^ . _l( 2 „, 2 2

O ΟΝΟ

HO
NHCOCH₅

(III)

Verbindung (XI) (210 mg, 0,51 mmol), die gemäß A.Yamamoto et al (Chem. Pharm. Bull. IJL (1965) 1036) hergestellt wurde, wurde in Methylcellosolve (15 ml) gelöst; die Lösung wurde katalytisch in Gegenwart von Palladiumschwarz (25 mg) unter einem Anfangswasserstoffdruck von 3,52 kg/cm² (50 psi) über Nacht zur Bildung der- freien Aminover&indung (XII) hydriert.

Nach Entfernung des Katalysators durch Filtrieren wurde die Reaktionslösung im Vakuum zu einem weißen schmierigen Rückstand konzentriert. Dieser wurde in Methanol (7 ml) suspendiert, wo zu Triäthylamin (25,8 mg, 0,5 Mol je Mol Ausgangsverbindung) zugesetzt wurde; dann wurde eine Lösung von p-Nitrophenyl-N-(2-chloräthyl)-N-nitrosocarbamat (419 mg, 3 Mol je Mol Ausgangsverbindung) in Tetrahydrofuran (7 ml) tropfenweise

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• t · * ν c w

- 22 -

über einen Zeitraum von etwa 15 Minuten unter Rühren in der Dunkelheit zugesetzt. Die Mischung wurde bei Zimmertemperatur zur Vervollständigung der Reaktion weitere drei Stunden gerührt; Dann wurde die Reaktionslösung dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (3:1 Volumenverhältnis) analysiert, wodurch die Anwesenheit eines Hauptflecks mit einem Rf-Wert von 0,37 für das gewünschte Produkt mit UV Absorption bestätigt wurde, wobei ein zweiter Fleck mit einem Rf-Wert von 0,18 für ein Nebenprodukt und ein schwacher Fleck des Ausgangsprodukts auftraten. Die Reaktionslösung wurde dann bei Zimmertemperatur im Vakuum zu einem tiefgelben öligen Rückstand konzentriert, der dann mit Methanol/Isopropyläther in üblicher Weise zu einem schwachgelben festen Rückstand behandelt wurde. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch über Silicagel (Wakogel C-300, 10 g) mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Äthanolbasis (8:1 Volumenverhältnis) und dann mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (4:1 Volumenverhältnis) gereinigt, wobei die Zugabe mit Chloroform/Methanol (2:1 Volumenverhältnis) erfolgte. Fraktionen mit dem Rf-Wert 0,37 mit einer UV Absorption wurden vereinigt, im Vakuum konzentriert und aus Aceton/A'thylacetat zu der gewünschten Verbindung (III) (96 mg) ausgefällt.
Ausbeute 45,7%; Schmelzpunkt: 122"C

Spezifische Drehung £«0 ²⁰ + 34,5° (c 0,4, Methanol);

Elementaranalyse:

Berechnet für C₁₃H₂₂N₅O₃Cl; MW = 411,803:

C: 37,91, H: 5,39, N: 17,01, Cl: 8,61% Gefunden: C: 37,88, H: 5,72, N: 16,62, Cl: 8,23%

BEISPIEL 4

Herstellung von N-JN'-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoyljß-alaninamid
35

SUAMI ,: .'*. ."*. .: ·*&■ .Ϊ3·65-ΟΕ

(1) N-Benzyloxycarbonyl-ß-alaninnmid

HCl·H₂NCH₂CH₂COOCH₃ Z-NHCH₂C

(Z = Benzyloxycarbony!gruppe)

ß-Alaninmethylesterhydrochlorid (1,0 g, 7,16 itimol) wurde in Wasser (3,5 ml) gelöst, und mit Chloroform (40 ml) und einer 33%igen Lösung Benzyloxycarbonylchlorid in Toluol (4,5 ml) versetzt ; dann wurde tropfenweise eine wässrige 2n-Natriumcarbonatlösung (16,5 ml) unter kräftigem Rühren und Eiskühlung zugesetzt. Die gebildete Mischung wurde bei diesen Bedingungen weitere 30 Minuten gehalten und dann zur Vervollständigung der Reaktion weitere 30 Minuten bei Zimmertemperatur.

Die Reaktionsmischung setzte sich in verschiedenen Schichten ab. Die wässrige Schicht wurde mit Chloroform gewaschen (2 χ 10 ml). Die Chloroformschichten wurden vereinigt und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach Entfernung des Natriumsulfats wurde der Chloroformextrakt im Vakuum zu Methyl-N-benzyloxycarbonyl-ß-alaninat in Form eines öligen Rückstands konzentriert und getrocknet. Der Rückstand wurde in mit Araoniakgas gesättigtem Methanol (20 ml) bei 0⁰C gelöst; die gebildete Lösung wurde 5 Tage verschlossen bei Zimmertemperatur stehengelassen.

Die Reaktionslösung wurde dann dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Benzol/Äthanolbasis (9:1 VoIumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,48 für Methyl-N-benzyloxycarbonylß-alaninat verschwand,und daß ein Hauptfleck mit einem Rf-Wert von 0,14 für die gewünschte Verbindung und ein zweiter Fleck mit einem Rf-Wert von 0,35 für geringe Mengen eines Nebenprodukts auftraten. Die abgeschiedenen kleinen prismenartigen Kristalle wurden als gewünschte Verbindung durch Filtrieren abgetrennt (795 mg). Das Filtrat wurde konzentriert und dann in einem Kühlschrank aufbewahrt und ergab weitere 494 rag gewünschter Verbindung als Sekundärkrista]Ie.

Gesamtausbeute: 1,289 g; Ausbeute: 81,0%;

Schmelzpunkt: 164-165⁰C;

Elementaranalyse:

Berechnet für C₁₁H₁₄N₂O₃, MW = 222,238:

C: 59,45, H: 6,35, N: 12,61% Gefunden: C: 59,67, H: 6,41, N: 12,44%

(2) N- [Ν¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -ß-alaninamid

Z-NHCH₂CH₂CONH₂₂₂₂₂₂

0 '

^IU no

Die in Stufe (1) erhaltene Verbindung (300 mg, 1,35 mmol) wurde in Methylcellosolve (10 ml) gelöst; die Lösung wurde katalytisch in Gegenwart von Palladiumschwarz (30 mg) unter

2 einem Ausgangswasserstoffdruck von 3,52 kg/cm (50psi) über Nacht kalalytisch hydriert.

Nach .Entfernung des Katalysators durch Filtrieren wurde das FiItrat in Vakuum zu einem öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde in Methanol (3 ml) gelöst, wo zu Triäthylamin (68 mg) zugesetzt wurde; dann wurde tropfenweise über einen Zeitraum von etwa 5 Minuten unter Rühren und in Dunkelheit eine Lösung von p-Nitrophenyl-N-(2-chloräthyl)-N-nitrosocarbamat (443 mg, 1,2 Mol je- Mol Ausgangsverbindung) in Tetrahydrofuran (5 ml) zugesetzt. Die Mischung wurde bei Zimmertemperatur zur Vervollständigung der Reaktion für weitere 60 Minuten gerührt. Die Reaktionslösung wurde dann dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/ Methanolbasis (7:1 Volumenverhältnis) analysiert, wobei bestätigt wurde, daß praktisch ausschließlich eine einzige Verbindung mit einem Fleck mit einem Rf-Wert von 0,40 und mit UV Absorption gebildet worden war.

Die Reaktionslösung wurde in Vakuum zu einem tiefgelben öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch über Silicagel (Wakogel C-300, 15 g) mit einem Entwicklersvsteni auf Chloroform/Äthanolbasis (8:1 Vo-

- 25 -

lumenverhältnis) gereinigt. Die Fraktionen mit Gehalt an der gewünschten Verbindung wurden vereinigt und im Vakuum zu einem schwachgelben öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde aus Äthyläther zu der gewünschten Verbindung (176 mg) kristallisiert.

Ausbeute: 58,6%; Schmelzpunkt: 95-97°C (Zers.);

Elementaranalyse:

Berechnet für C₆H₁₁N₄O₃Cl, MW = 222,637

C: 32,37, H: 4,98, N: 25,17, Cl: 15,93% Gefunden: C: 32,14, H: 4,96, N: 24,95, Cl: 16,07%

BEISPIEL 5:

Herstellung von N- N¹-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoyl (Jf-aminobuttersäureamid

(1) N-Benzyloxycarbonyl-£-aminobuttersäureamid HCl·H₂NCH₂CH₂CH₂COOCH₃-^Z-NHCH₂CH₂Ch₂CONH₂

Methyl- J"-aminobutyrathydrochlorid (1,5 g, 9,76 mmol) wurde gemäß Beispiel 4 (1) zu Methyl-N-benzyloxycarbonyl- aminobutyrat als öligem Rückstand benzoyloxycarbonyliert. Der Rückstand wurde in einem ammoniakgasgesättigten Methanol (30 ml) bei 0⁰C gelöst; die Lösung wurde 5 Tage bei Zimmertemperatur verschlossen gehalten.

Die Reaktionslösung wurde dann dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Benzol/Äthanolbasis (9:1 Volumenverhältnis) analysiert; es wurde bestätigt, daß der Fleck bei Rf gleich 0,50 für Methyl-N-benzyloxycarbonylj- -aminobutyrat verschwand, und daß ein Hauptfleck mit einem Rf-Wert von 0,12 für die gewünschte Verbindung und ein zweiter Fleck mit einem Rf-Wert von 0,39 für geringe Mengen eines Nebenproduktes auftraten.

Die Reaktionslösung wurde im Vakuum zu einem weißen kristallinen Rückstand konzentriert, der mit einer geringen . Menge Methanol versetzt wurde, und die gebildete aewünschte Verbindunq abf i 1 Ir jcr Ij ctj wurden 1 , 4'Ί <.\ erhall.en.

SUAMI - .*". ."*- .: .P.13"65-DE

.f f. ₉ t. i. * * _w

- 26 -

Ausbeute 62,9%; Schmelzpunkt: 128-130⁰C;

Elementaranalyse:

Berechnet für C₁₂H₁₆N₂O₃, MW = 236,264:

C: 61 ,00, H: 6,83, N: 11,86% Gefunden: C: 61,43, H: 7,10, N: 11,73%

(2) N-[n¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyj- ^-aminobuttersäureamid

O
ZNHCH₂CH₂Ch₂CONH₂—^CICH₂CH₂NCNHCH₂Ch₂CH₂CONH₂

■ NO

Die in Stufe (1) erhaltende Verbindung (300 mg, 1,27 mmol) wurde in Methylcellosolve (10 ml) gelöst; die Lösung wurde in Gegenwart von Palladiumschwarz (30' mg) unter einem Ausgangs-

2
wasserstoff druck von 3,52 kg/cm (50 psi) über Nacht katalytisch hydriert.

Nach Entfernung des Katalysators durch Filtrieren wurde das Filtrat im Vakuum zu einem öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde in Methanol (3 ml) gelöst, zu dem Triäthylamin (64 mg, 0,5 Mol je Mol Ausgangsverbindung) zügesetzt wurde; dann wurde eine Lösung von p-Nitrophenyl-N-(2-chloräthyl)-N-nitrosocarbamat (417 mg, 1,2 Mol je Mol Ausgangsverbindung) in Tetrahydrofuran (5 ml) tropfenweise über· 5 Minuten unter Rühren in Dunkelheit zugesetzt. Die Mischung wurde zur. Vervollständigung der Reaktion weitere 60 Minuten bei Zimmertemperatur gerührt. Die Reaktionslösung wurde dann dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (7:1 Volumenverhältnis) analysiert; es wurde bestätigt, daß im wesentlichen eine einzige Verbindung mit einem Fleck bei Rf gleich 0,3 9 mit UV-Absorption gebildet worden war.

Die Reaktionslösung wurde im Vakuum zu einem tiefgelben öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch über Silicagel (Wakogel C-300, 15 g) mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Äthanolbasis (8:1 VoIumenverhältnis) gereinigt. Fraktionen mit Gehalt an dem ge-

SUAMI -; - ; ; *; ',Ρ,-1365-DE

wünschten Produkt wurden vereinigt und im Vakuum zu einem hellgelben kristallinen festen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde mit Äthylether gewaschen und ergab 190 mg der gewünschten Verbindung.

Ausbeute: 63,2%; Schmelzpunkt: 102-103,5⁰C (Zers.); Elementaranalyse:
Berechnet für C₇H₁₃N₄O₃Cl, MW = 236,663:

C: 35,52, H: 5,54, N: 23,68, Cl: 14,98% Gefunden: C: 35,83, H: 5,58, N: 23,82, Cl: 14,65% 10

BEISPIEL 6:

Herstellung von N- JJN¹ - (2-Chloräthyl) -N'-nitrosocarbamoylJ L-phenylalaninamid

(1) N-£N'-(2-Chloräthyl)carbamoyljf-L-phenylalaninamid

CH₀CHCONH₀
2, 2

NH₂

—^ (O)—CH₀-CHCONH₀

NHCNHCH₀CH₀C/ Il . ^

L-Phenylalaninamid (ein handelsübliches Produkt von Sigma Chemical Co.; 400 mg, 2,44 mmol) wurde in Methanol (6 ml) gelöst,zu der dann tropfenweise 2-Chloräthylisocyanat (0,24 ml, 1,2 Mol je Mol Ausgangsverbindung) bei Zimmertemperatur unter Rühren zugegeben wurden; dann wurde die Mischung unter diesen Bedingungen zur Vervollständigung der Reaktion für weitere 20 Minuten gehalten.

Die Reaktionslösung wurde dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (7:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierdurch wurde bestätigt, daß der Fleck bei Rf gleich 0,21 für die Auscjangsverbindung ver-

SUAMI

.-P. „-r3jS5-DE

schwand und ein einzelner Fleck mit einem Rf-Wert von 0,42 für das gewünschte Produkt auftrat.

Die Reaktionslösung wurde im Vakuum zu einem weißen kristallinen festen Rückstand konzentriert; der Rückstand wurde dann mit Isopropanol gewaschen und ergab 553 mg der gewünschten Verbindung.
Ausbeute: 84,1%; Schmelzpunkt 158-160⁰C;

|V) I² + 3,0° (c 0,54, Methanol); Elementaranalyse:
Berechnet für C₁-H₁ ,KUO₀Cl, MVJ = 269,729:

C: 53,43, H: 5,98, N: 15,58," Cl: 13,15% Gefunden: C:53,49, H: 6,02, N: 15,34, Cl: 12,90%

(2) N- [ß' - (2-Chloräthyl) -N ' -nitrosocarbamoylj -L-phenylälanihamid

10 20

CH₀CHCONH₀ ²I ² NHCNHCH₀CH₀C^ Il ² ^l 0

25

NHCNCH_OCH_OC«

III ^{2 2} ONO

Die in Stufe (1) erhaltene Verbindung (400 mg, 1,48 mmol) wurde in 99%iger Ameisensäure (3 ml) gelöst,zu der dann Natriumnitrit (113 mg, 1,1 Mol je Mol Ausgangsverbindung) über etwa 5 Minuten unter Rühren und Eiskühlung zugesetzt wurden; die Reaktionsmischung wurde unter diesen Bedingungen zur Vervollständigung der Reaktion für weitere 30 Minuten gehalten.

SUAMI -· · _: · _: ·; ·.,*·· P 1365-DE

— 29 —

Die Reaktionslösung wurde dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (9:1 Volumenverhältnis) analysiert; es wurde hierbei bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,33 für die Ausgangsverbindung verschwand und üin einzelner Fleck mit einem Rf-Wert von 0,51 für das gewünschte Produkt, das UV-Absorption zeigte, auftrat.

Dann wurde Amberlite IR-120 (II⁺-Form) (5 ml), das in Methanol suspendiert war, der Reaktionslösung zugesetzt und die Mischung für 20 Minuten gerührt. Nach Entfernung des Harzes durch Filtrieren wurde das Filtrat im Vakuum konzentriert und anschließend azeotrop mit Äthanol zu einem kristallinen festen Rückstand destilliert. Der Rückstand wurde mit Methyläther gewaschen und ergab 310 mg der gewünschten Verbindung.

Ausbeute: 70,0%; Schmelzpunkt: 113-115⁰C (Zers.);

Z°<_7²D ~ ³⁰'⁶° <^c 0,36, DMF);

Elementaranalyse:
Berechnet für C₁₂H₁₅N₄O₃Cl, MW = 298,729:

C: 48,24, H: 5,06, N: 18,76, Cl: 11,87% Gefunden: C: 47,94, H: 5,01, N: 18,44, Cl: 11,58%

BEISPIEL 7:

Herstellung von N-/ N¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L-tyrosinamid

(1) N-/~N'-(2-Chloräthyl)carbamoyi7-L-tyrosinamid

CH₂CHCONH₂

—*■ HO-X O V-CH₀CHCONiL, V'./ ^d\

NHCNHCH₀CH₀Ci

Il

SUAMI .: .". .·*. .: .*'..'T8 1365-DE

- 30 -

L-Tyrosinamid (handelsübliches Produkt von Sigma Co.; 400 mg, 2,22 mmol) wurde in Methanol (8 ml) gelöstι dann wurden
tropfenweise 2-Chloräthylisocyanat (0,22 ml) bei Zimmertemperatur unter Rühren zugesetzt; während dessen schieden
sich einige Minuten nach dem Beginn der Zugabe weiße Kristalle aus. Nach 20 Minuten wurde die überstehende Flüssigkeit dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf
Chloroform/Methanolbasis (7:1 Volumenverhältnis) analysiert;
hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von

0,09 für die Ausgangsverbindung verschwand und ein einzelner
Fleck mit einem Rf-Wert von 0,24 für das gewünschte Produkt
auftrat.

Der abgesetzte weiße kristalline Festkörper wurde abfiltriert und mit heißem Methanol gewaschen; hierbei handelte es sich um die erste Fraktion der gewünschten Verbindung (296 mg). Das Filtrat wurde im Vakuum konzentriert und ergab eine weiße feste Masse, die mit heißem Methanol gewaschen wurde und eine zweite Fraktion der gewünschten Verbindung (252 mg) ergab.
Gesamtausbeute: 548 mg; Ausbeute: 86,4%; Schmelzpunkt

187-189°C (Zers.); l'oij²² + 0,4° (c 0,5, DMF);
Elementaranalyse:

MW = 285,729:

N: 14,71, Cl: 12,41% N: 14,47, Cl: 12,10%

(2) N-/ N'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl7-L-tyrosinamid

HO -/ Q V-CH₀CHCONHp
\_/ I

-_n NHCNHCH₀CH₀C^

"Il ^ ^

^{1 Ho} -\ O )- CH₂CHCONH₂

,_c NHCNCH₀CH₀Ci;

j, 2 2

ONO

Berechnet	für	^C1	2^H1	6^N3	°3	Cl,
	C:	50,	44,	H:	5	,64
Gefunden:	C:	50,	18,	H:	5	,68

SUAMI ; ,- . : : : . „**P 1.365-DE

- 31 -

Die in Stufe (1) erhaltene Verbindung (200 mg, 0,64 mmol) wurde in 99%iger Ameisensäure (1,5 ml) gelöst, wo zu dann Natriumnitrit (48,6 mg, 1,1 Mol je Mol Ausgangsverbindung) über etwa 5 Minuten unter Rühren und Eiskühlung zugesetzt würde. Die Reaktionsmischung wurde dann zur Vervollständigung der Reaktion unter diesen Bedingungen für weitere 30 Minuten gehalten; während dieser Zeit verfärbte sich diese Mischung deutlich rötlich-braun.

Die Reaktionslösung wurde dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (7:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,24 für die Ausgangsverbindung verschwunden war und ein Hauptfleck bei Rf gleich 0,48 für das gewünschte Produkt, das UV-Absorption besaß, auftrat; gleichzeitig trat ein zweiter Fleck mit einem Rf-Wert von 0,68 für ein Nebenprodukt, das ebenfalls UV-Absorption aufwies, auf.

Dann wurde Amberlite IR-120 (H⁺-Form) (5 ml), das in Methanol suspendiert war, der Reaktionslösung zugesetzt; die Mischung wurde 20 Minuten gerührt; hierbei ergab sich ein tief rot-brauner öliger Rückstand. Der Rückstand wurde säulenchromatographisch über Silicagel (Wako-Gel C-300, 10g) mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (7:1 Volumenverhältnis) gereinigt. Fraktionen mit Gehalt an der gewünschten Verbindung wurden vereinigt, im Vakuum konzentriert und azeotrop mit Äthanol zu einem kristallinen festen Rückstand destilliert. Der Rückstand wurde mit Isopropyläther gewaschen und ergab 113 mg der gewünschten Verbindung. Ausbeute: 51,3%; Schmelzpunkt: 135,5-137⁰C (Zers.); /3<_7 J² - 30,4° (c 0,5, DMF); Elementaranalyse:
Berechnet für C₁₂H₁₅N₄O₄Cl, MW = 314,729:

C: 45,75, H: 4,80, N: 17,80, Cl: 11,27% Gefunden: C: 45,53, H: 4,99, N: 17,57, Cl: 11,45%

suAMi ·: · : : : *: ·..* p_#3365-de

- 32 -

BEISPIEL 8:

Herstellung von N-/ N¹-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoyl7-L-valinamid

(1) N-/ N'-(2-Chloräthyl)carbamoyl7-L-valinamid CH, . CH-

CV I

⁵ NH₀-HCi; ^ NHCNHCH₀CH₉C^ 2 „ <i <i

0

L-Valinamidhydrochlorid (ein handelsübliches Produkt von Sigma Co.; 200 mg, 1,31 mmol) wurde in Methanol (6 ml) gelöst; hierzu wurde dann Amberlite IRA 400 (OH~-Form) (4 ml), suspendiert in Methanol, zugesetzt; die Mischung wurde zur Dehydrochlorierung 20 Minuten gerührt.

Nach Abfiltrieren des Harzes wurde das Filtrat auf ein Volumen von etwa 2 ml konzentriert; hierzu wurden dann tropfenweise 2-Chloräthylisocyanat (0,16 ml, 1,5 Mol je Mol Ausgangs-0 Verbindung) zugesetzt. Nach einigen Minuten schieden weiße Kristalle aus. Nach 20 Minuten wurde die überstehende Flüssigkeit dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (5:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,36 für die Ausgangsverbindung verschwunden war, während ein einzelner Fleck mit einem Rf-Wert von 0,74 für das gewünschte Produkt auftrat.

Die ausgeschiedenen Kristalle wurden abfiltriert und mit Methanol gewaschen; es wurde die erste Fraktion der gewünschten Verbindung (135 mg) erhalten. Das Filtrat wurde im Vakuum zu weißen Kristallen konzentriert; diese wurden aus Methanol umkristallisiert und ergaben die zweite Fraktion der gewünschten Verbindung (114 mg).
Gesamtausbeute: 249 mg; Ausbeute: 85,7%; Schmelzpunkt:

197-199⁰C; C^jV' ^{+ 48}' ⁹° ^(c °'⁴⁵'

SUAMI .: .·*. . ·„ .: r\ ."2 1365-DE

— 33 ~

Elementaranalyse:

Berechnet für CgH₁₆N₃O₂Cl, MW = 221,689;

C: 43,34, H: 7,28, N: 18,96, Cl: 15,99%
Gefunden: C: 43,29, H: 7,15, N: 18,75, Cl: 16,15%
5

(2) Ν-/~Ν·-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoylZ-L-valinamid

CH, CH,

OCHCHCONH, > ^CHCHCONH₀

CH, I ^ CH^ I ²

^D NHCNHCH₀CH₀C^ ^D NHCNCH₀CH₀Ci

„22. _|M 2 2

0 ONO

Die in Stufe (1) erhaltene Verbindung (200 mg, 0,90 mmol) wurde in 99%iger Ameisensäure (1,5 ml) gelöst; dann wurde Natriumnitrit (93 mg, 1,5 Mol je Mol Ausgangsverbindung) über
etwa 5 Minuten unter Rühren und Eiskühlung zugesetzt; die

Reaktionsmischung wurde unter diesen Bedingungen zur Vervollständigung der Reaktion für weitere 30 Minuten gehalten.

Die Reaktionslösung wurde düntischichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (9:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,27 für die Ausgangsverbindung verschwunden war, während gleichzeitig ein einzelner Fleck mit
einem Rf-Wert von 0,50 für das gewünschte Produkt, das UV-Absorption zeigte, auftrat.

Dann wurde Amberlite IR-120 (H -Form) (4 ml), das in Methanol suspendiert war, der Reaktionslösung zugesetzt und die Mischung 20 Minuten gerührt. Nach Abtrennung des Harzes durch Filtrieren wurde das Filtrat im Vakuum unterhalb 30⁰C zu einem fahlgelben kristallinen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde mit Äthyläther gewaschen und ergab 181 mg der gewünschten Verbindung.

B 1365-de

Ausbeute: 80,0%, Schmelzpunkt 115-117°C (Zers.);

M^ ⁺ 60,7° (c 0,6, DMF) ; Elementaranalyse

Berechnet für CgH₁₅N₄O₃Cl, MW = 250,689: C: 38,33, H: 6,83, N: 22,35, Cl: 14,14 Gefunden: C: 38,26, H: 6,55, N: 22,53, Cl: 14,35%

BEISPIEL 9:

Herstellung von N-/ N¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarb amoyl7-DL-leucinamid

(1) N-/~N'-(2-Chloräthyl)carbamoyl7-DL-leucinamid

CH, CH

^D > CHCh₂CHCONH₂ > ₂

CH-2 I CH-z I

NHp-HC* ^D NHCNHCH₀CH₀Ci

„22

DL-Leucinamidhydrochlorid (ein handelsübliches Produkt von Sigma Co.; 200 mg, 1,20 mmol) wurde in Methanol (6 ml) gelöst; dann wurde Amberlite IRA 400 (OH~-Form) (3,6 ml), in Methanol suspendiert, zugegeben und die Mischung für 20 Minuten zur Dehydrochlorierung gerührt.

Nach Abfiltrieren des Harzes wurde das Filtrat auf ein Volumen von etwa 2 ml konzentriert; es wurden tropfenweise 2-Chloräthylisocyanat (0,16 ml, 1,5 Mol je Mol Ausgangsverbindung) bei Zimmertemperatur unter Rühren zugegeben; die Mischung wurde unter diesen Bedingungen für weitere 20 Minuten zur Vervollständigung der Reaktion gehalten.

Die Reaktionslösung wurde dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (5:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierdurch wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,25 für die Ausgangsverbindung ver-

SUAMI .: .". . . .: ,"\P*"1365-DE

- 35 -

schwunden war, während ein einzelner Fleck mit einem Rf-Wert von 0,57 für das gewünschte Produkt auftrat.

Die Reaktionslösung wurde im Vakuum zu einem weißen kristallinen festen Rückstand konzentriert, der aus Äthanol umkristallisiert wurde. Es wurde eine erste Fraktion (196 mg) und eine zweite Fraktion (33 mg) der gewünschten Verbindung erhalten.

Gesamtausbeute: 229 mg; Ausbeute: 80,9%; Schmelzpunkt: 156-158°C;
Elementaranalyse:

Berechnet für C₉H₁₈N₃O₂Cl,- MW = 2 35,715:

C: 45,86, H: 7,70, N: 17,83, Cl: 15,04% Gefunden: C: 46,05, H: 7,67, N: 17,^r>G, Cl: T>,28%

(2) N-/~N'-(2-Chloräthyl)-N^l-nitrosocarbamoyl7-DL-leucinamid

CH, CH,

³SCH-Ch₀CHCONH₀ > -7₀

Ch/ ²I ² CH, ²I

³ NHCNHCH₀CH₀Ci ³ NHCNCH₀CH₂C^ Il ^{2 2} IH

0 ONO

Die in Stufe (1) erhaltene Verbindung (400 mg, 1,70 mmol) wurde in 99%iger Ameisensäure (2,5 ml) gelöst; dann wurde Natriumnitrit (129 mg, 1,1 Mol je Mol Ausgangsverbindung) über etwa 5 Minuten unter Rühren und Eiskühlung zugesetzt; dann wurde die Reaktionsmischung unter diesen Bedingungen für weitere 30 Minuten zur Vervollständigung der Reaktion gehalten. Die Reaktionslösung wurde dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf der Basis von Chloroform/Methanol (9:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,23 für die Ausgangsverbindung verschwunden war, während ein Hauptfleck mit

SUAMI ,;■ „·-, ,··. _ .··. P--1365-DE

- 36 -

einem Rf-Wert von 0,4 9 für das gewünschte Produkt mit UV-Absorption und gleichzeitig ein zweiter Fleck mit einem Rf-Wert von 0,38 für ein Nebenprodukt auftraten.

Dann wurde Amberlite IR-120 (H -Form) (6 ml), suspendiert in Methanol, der Reaktionslösung zugesetzt und die Mischung 20 Minuten gerührt. Nach Entfernung des Harzes durch Filtrieren wurde das Filtrat im Vakuum unterhalb 30⁰C zu einem hellgelben öligen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde in einem Excikator einige Tage zum Absetzen der Kristalle aufbewahrt. Die Kristalle wurden mit Isopropyläther gewaschen und ergaben 298 mg der gewünschten Verbindung.

(In einer zweiten und späteren Synthese kann die Kristallisation durch Zugabe von Kristallkeimen erfolgen.) Ausbeute: 66,3%, Schmelzpunkt: 82-84.°C; Elementaranalyse:

Berechnet für C₉H₁₇N₄O₃Cl, MVJ = 264,715:

C: 40,83, H: 6,47, N: 21,17, Cl: 13,39% Gefunden: C: 40,60, H: 6,43, N: 20,98, Cl: 13,20%

BEISPIEL 10:

Herstellung von N-/- N¹ -(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoyl7-L-serinamid

(1) N-/ N ' - ( 2-Chlorät;]iyl) carbamoyl7-T.-5cr.inamid

HOCH₂CHCONh₂ > HOCH₂CHCONh₂

NH₀-HCI NHCNHCH₉CH₉CI

2 ^dZ

0
30

L-Serinamidhydrochlorid (ein handelsübliches Produkt von Sigma Co.; 300 mg, 2,13 mmol) wurde in Methanol (20 ml) gelöst; dann wurde Amberlite IRA 400 (OH~-Form) (6,4 ml), suspendiert in Methanol, zugesetzt; die Mischung wurde dann zum Dehydro-

SUAMI .: .-. . \ ,: .*>-;'; P 1365-DE

chlorieren 20 Minuten gerührt.

Nach Abfiltrieren des Harzes wurde das Filtrat auf ein Volumen von etwa 5 ml konzentriert; dann wurde tropfenweise 2-Chloräthylisocyanat (0,21 ml, 1,2 Mol je Mol Ausgangsverbindung) bei Zimmertemperatur unter Rühren zugesetzt; die Mischung wurde dann unter diesen Bedingungen für weitere 20 Minuten zur Vervollständigung der Reaktion gehalten.

Die Reaktionslösung wurde dunnschxchtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (4:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,1 für die Ausgangsverbindung verschwunden war, während ein einzelner Fleck mit einem Rf-Wert von 0,33 für das gewünschte Produkt auftrat.

Die Reaktionslösung wurde im Vakuum zu einem weißen kristallinen Rückstand konzentriert; dieser wurde dann mit Isopropanol gewaschen und ergab 338 mg der gewünschten Verbindung. Ausbeute: 75,6%; Schmelzpunkt 131-132°C; lÄJ"^ + 35,7° (c 0,6, Methanol);
Elementaranalyse:
Berechnet für CgH₁₂N₃O₃Cl, MW = 290,637:

C: 34,37, H: 5,77, N: 20,05, Cl: 16,91% Gefunden: C: 34,14, H: 5,78, N: 19.80, Cl: 17,13%

(2) N-/~N'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoylJ-L-serinamid 25

HOCH₂CHCONh₂ > HOCH₂CHCONh₂

NHCNHCH₉CH₀Ci NHCNCH₉CH₉Ci „22 „, 2 Z

0 ONO

SUAMI ·; ■ : ; ; ·: - [. --P ;1 365-DE

- 38 -

Die Verblnduny aus Stufe (1) (200 mg, 0,954 mmol) wurde . in 99%iger Ameisensäure (1,5 ml) gelöst; dann wurde Natriumnitrit (72 mg, 1,1 Mol je Mol Ausgangsverbindung) über etwa 5 Minuten unter Rühren und Eiskühlung zugesetzt; die Reaktionsmischung wurde dann weitere 30 Minuten zur Vervollständigung der Reaktion unter diesen Bedingungen aufbewahrt.

Die Reaktionslösung wurde dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (7:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,15 für die Ausgangsverbindung verschwunden war, während ein einzelner Fleck mit einem Rf-Wert von 0,35 für das gewünschte Produkt mit UV-Absorption auftrat.

Dann wurde Amberlite IR-120 (H⁺-Form) (3 ml), suspendiert in Methanol, der Reaktionslösung zugegeben und die Mischung 20 Minuten gerührt. Nach Entfernung des Harzes durch Filtrieren wurde das Filtrat im Vakuum bei 30⁰C konzentriert und anschließend azeotrop mit einer Mischung aus Chloroform/ Methanol (9:1 Volumenverhältnis) destilliert; es wurde ein schwachgelber kristalliner Rückstand erhalten. Dieser Rückstand wurde mit Äthylacetat gewaschen und ergab 151 mg der gewünschten Verbindung.

Ausgbeute: 66,3'fi; Schmelzpunkt 117-120⁰C (Zers.); LKJ^ ⁺ 57,6' (c 0,7, Methanol);
Elementaranalyse:

Berechnet für CgH₁₁N₄O₄Cl, MW = 238,637:

C: 30,20, H: 4,65, N: 23,48, Cl: 14,86% Gefunden: C: 30,43, H: 4,80, N: 23,25, Cl: 15,05%

BEISPIEL 11:

Herstellung von N-/N¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl?" L-methioninamid

(1) N-/N'-(2-Chloräthyl)carbamoyl7-L-methioninamid

SUAMI .: .**. . \ .: .·*..·-. ρ 1365-DE

- 39 -

>CH₃SCH₂CH_?CHC0NH₂

₀.HCI NHCNHCH₉CH₉Ci

2 ^ Δ Δ

L-Methioninamidhydrochlorid (ein handelsübliches Produkt von Sigma Co.; 200 mg, 1,08 mmol) wurde in Methanol (6 ml) gelöst; dann wurde Amberlite IRA 400 (OH~-Form) (3,2 ml), suspendiert in Methanol, zugesetzt und die Mischung für 20 Minuten zur Dehydrochlorierung gerührt.

Nach Abfiltrieren des Harzes wurde das Filtrat auf ein Volumen von etwa 3 ml konzentriert; dann wurde tropfenweise 2-Chloräthylisocyanat (0,11 ml, 1,2 Mol je Mol Ausgangsverbindung) bei Zimmertemperatur unter Rühren zugegeben; die Mischung wurde dann unter diesen Bedingungen zur Vervollständigung der Reaktion für weitere 20 Minuten gehalten.

Die Reaktionslösung wurde dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (5:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,28 für die Ausgangsverbindung verschwunden war, während gleichzeitig ein einzelner Fleck mit einem Rf-Wert von 0,58 für das gewünschte Produkt auftrat.

Die Reaktionslösung wurde im Vakuum zu einem weißen kristallinen festen Rückstand konzentriert. Der Rückstand wurde aus Äthanol umkristallisiert und ergab eine erste Fraktion des qewünschten Produktes (198 ma) und eine zweite Fraktion (39 mq).

Gesamtausbeute: 237 mg; Ausbeute: 86,2%; Schmelzpunkt 150-151⁰C;

/Wq² + 5,2° (c 0,42, Methanol); Elementaranalyse:
Berechnet für C_QH.,N₀O₀ClS, MW = 253,749:

C: 37,86, H: 6,36, N: 16,56% Gefunden: C: 37,71, H: 6,18, N: 16,33%

SUAMI .; , ·. ,-·. _ .-- - P 1365-DE

- 40 (2) N-/~N'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyiy-L-methioninamid

CH^SCH₉CH₉CHCONh₅

NHCNHCH₉CH₉Ce NHCNCH₉CH_?Ci

„22 n, 2 2

0 ONO

Die in Stufe (1) erhaltene Verbindung (700 mg, 2,76 mmol) wurde in 99%iger Ameisensäure (6 ml) gelöst; dann wurde Natriumnitrit (210 mg, 1,1 Mol ie Mol Ausgangsverbihdung) über etwa 5 Minuten unter Rühren und Eiskühlung zugesetzt; dann wurde die Reaktionsmischung unter diesen Bedingungen für weitere 30 Minuten zur Vervollständigung der Reaktion stehengelassen .

Die Reaktionslösung wurde dünnschichtchromatographisch mit einem Entwicklersystem auf Chloroform/Methanolbasis (9:1 Volumenverhältnis) analysiert; hierbei wurde bestätigt, daß der Fleck mit dem Rf-Wert von 0,33 für die Ausgangsverbindung verschwunden war, während ein Hauptfleck mit einem Rf von 0,65 für das gewünschte Produkt mit UV-Absorption zusammen mit einem zweiten Fleck mit einem Rf-Wert von 0,51 für ein Nebenprodukt auftraten.

Dann wurde Amberlite IR-120 (H⁺-Form) (9 ml), suspendiert in Methanol, der Reaktionslösung (die leicht braun aefärbt war) zuaesetzt und die Mischuna 20 Minuten gerührt. Nach Entfernung des Harzes durch Filtrieren wurde das Filtrat im Vakuum bei ■ 30⁰C oder bei niedrigerer Temperatur konzentriert und anschließend azeotrop mit einer Mischung aus Methanol und IsoproDvläther zu einem kristallinen festen Rückstand destilliert. Der Rückstand wurde mit Äthvlather gewaschen und ergab 555 mg der gewünschten Verbindung.

Ausbeute: 71,2%; Schmelzpunkt 95-97°C; /^_7^² + 18,7° (c 0.45, DMF);

SUAMI _: «· P 1365-DE

Elementaranalyse:

Berechnet für CgH₁₅N₄O₃ClS, MW = 282,749:

C: 33,98, H: 5,35, N; 19,82% Gefunden: C: 34,27, H: 5,40, N: 19,63% 5

Wi/fg

Claims

PATENTANWÄLTE

EUROPfAN IVUl III AtIOWN)I

1 IWoI VW.U It [¹AII IIIVI I¹IWI Π U MAtJI)AIAIl-M :, I ti MWI Vl I¹, I ι IWOI¹I 1 N¹

Tetsuo SUAMI

DR. ROLF E. WILHELMS DR. HELMUT KILIAN

Ol IHbI-SlHASSE la

8OOO MÜNCHEN 8O

TELEFON (O 89) 47 4073* TELEX 52 34 67 (wilp-d) TELEGRAMME PATRANS MÜNCHEN TELECOPIER gr 2 (Ο89) 222 Ο66

P 1365-DE

Neue Nitrosohamstoffderivate

Priorität: 12. Januar 1981 - JAPAN - Nr. 2135/81

PATENTANSPRÜCHE

.) Nitrosohams tof fderivate der Formel (I)

I
NCOCHNCONCh₉CH₉X

I
NO

(I)

4

wobei R , R und R gleich oder verschieden sein können und je weils für Wasserstoff, eine Alky!-, Aryl-, Aralkyl-, Alkanoyl

nine hefcorooyki 5.Κ'Ίη· r.ruppo .-.toben; wobei R' dor Reut am -Kohlenstoff a Lom einer oC-Amino:.äuie iüt und X uin Chlor-, L-'

SUAMI „: . \ „*% „: ."·..'*. ^p 1365-DE

O .mm

und/oder Bromatom ist.
2. Nitrosoharnstoffderxvate gemäß Anspruch 1, wobei R der Rest am c*-Kohlenstoffatom einer o^-Aminosäure, nämlich Glycin, Alanin, Phenylalanin, Sarcosin, Serin, Tryptophan, Prolin, Methionin, Cystein, Tyrosin, Valin, Leucin, Isoleucin, Threonin, Asparaginsäure, Asparagin, Glutaminsäure, Glutamin, Lysin, Hydroxylysin, Histidin und Arginin ist.
3. Nitrosoharnstoffderivate nach Anspruch 1, wobei R ,

2 4
R und R gleich oder verschieden sind und für Wasserstoff oder eine niedere Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine unsubstituierte Phenylgruppe oder eine mit einer niederen Alkylgruppe, einer niederen Alkoxygruppe oder Halogen substituierten Phenylgruppe, eine Aralkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen im Alkylrest, eine niedere Alkanoylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen im Alkylrest, eine Furyl-, Thienyl-, Pyridyl-, Pyrimidyl-, Imidazolyl- und/oder Acridinylgruppe stehen.
4. Nitrosoharnstoffderivate nach Anspruch 1, nämlich

N- JN'-(2-Chloräthy1)-N'-nitrosocarbamoyl] glycinamid; N- [N'-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoyl] sarcosinamid; N- (n¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -L-phenylalaninamid; N- [N¹-(2-Chloräthyl)-N¹-nitrosocarbamoyl·]-L-tyrosinamid; N- [n¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -L-valinamid; N- [n¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -DL-leucinamid; N- [Ν¹ - (2-Chloräthyl)-N '-nitrosocarbamoyl]-L-serinamid; N- |n'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl] -L-methioninamid; und N- [n¹-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyl]-prolinamid.
5. Nitrosoharnstoffderivate gemäß Formel (II):

1 R⁴

NCO(CH₀) NCONCH₀CH₀X (II)

,/ 2 η , 2 2

^K NO

SUAMi -:·::;·: ..·* : ρ 1365-de

12 4
wobei R , R und R gleich oder verschieden sein können und

für Wasserstoff oder eine Alkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Alkanoyl- oder eine heterocyklische Gruppe stehen, und wobei η 2 oder 3 1st, und X für Chlor, Fluor und/oder Brom steht. 5
6. Nitrosoharnstoffderivate nach Anspruch 5, wobei R , R und R gleich oder verschieden sein können und für Wasserstoff oder eine niedere Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, eine unsubstituierte Phenylgruppe oder eine mit einer niederen Alkylgruppe, einer niederen Alkoxygruppe oder Halogen substituierte Phenylgruppe, eine Äralkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen im Alkylrest, eine niedere Alkaloylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen im Alkylrest, Furyl-, Thienyl-, Pyridyl-, Pyrimidyl-, Imidazolyl- und/oder Acridinylgruppe stehen.
7. Nitrosoharnstoffderivate nach Anspruch 5, nämlich

N-JN'-(2-Chloräthyl)-N^l-nitrosocarbamoylj -ß-alaninamid; und N- {N'-(2-Chloräthyl)-N'-nitrosocarbamoyi]-Y-aminobuttersäureamid.
8. Nitrosoharnstoffderivate der Formel (III):

|-0I

0 NHGCH₅NHCNCH₀GH₀Ci

Il ² IN ^{2 2} (in)

OH f ° ^om

in der Ac für eine Alkanoylgruppe steht.
9. Nitrosoharnstoffderivate nach Anspruch 8, nämlich 2-Acetamid-1-[f [[ (2-chlor4thyl) nitroso-amino] carbonyl] glycyl] aminoj-1,2-dideoxy-ß-D-glucopyranose.

SUAMI .: ■*. .*\ .: .·*.."·. P 1365-DE
10. Verfahren zur Herstellung von Nitrosoharnstoffderi vaten gemäß Formel (I) oder (II)

iI

NC0CHNC0NCH_oCH_oX (I)

I 2 2

NO

ΐ⁴

_Λη NCO(CH₀) NCONCH₀CH₀X (II)

R²'

^R . NO

wobei R , R und R gleich oder verschieden sein können und jeweils für Wasserstoff, eine Alkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Alkanoyl- oder eine heterocyklische Gruppe, R für den Rest an einem d-Kohlenstoffatom einer (^-Aminosäure stehen, und wobei η 2 oder 3 ist, und wobei X für Chlor/ Fluor und/oder Brom steht, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der Formel (IV) oder (VI):

3 4

„1 RR

\ I I ■

NCOCHNH (IV)

R²

NCO(CH₀) NH (VI)

2^
R^

in der R , R , R , R und η die zuvor gegebene Bedeutung besitzen, mit p-Nitrophenyl N-(2-haloäthyl)-N-nitrosocarbamat umsetzt.
11. Verfahren zur Herstellung von Nitrosoharnstoffderivaten gemäß Formel (I) oder (II) :

SUAMI ·" · : ;**; ·; ■'.'.""; P 1365-DE

. ..·:."-.." Λ '.:■.:[. 3200G62

— 5 —

.1 R³R⁴

NCOCHNCONCh₂CH₂X (I)

NO

NCO(CH₀) NCONCH₀CH₀X (II)

_R ²ⁿ I ²

NO

12 4 wobei R , R und R gleich- oder verschieden sein können und jeweils für Wasserstoff oder eine Alkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Alkanoyl- oder eine heterocyklische Gruppe, R für den Rest an einem o(-Kohlenstoffatom einer c<-Aminosäure stehen, und wobei η 2 oder ist, und wobei X Chlor, Fluor und/oder Brom ist, dadurch gekennzeichnet , daß man eine Verbindung der Formel (V) oder (VII):

NC0CHNC0NHCH_oCH_oX (V)

K⁴

\ I

NCO(CH₀) NCONnCH₀CIl-JX (VII)

in denen R , R , R , R , η und X die zuvor gegebene Bedeutung . besitzen, mit einem Nitrosierungsmittel umsetzt.
12. Pharmazeutische Zusammensetzung mit Gehalt an einer therapeutisch wirksamen Menge eines Nitrosoharnstoffderivats der Formel (I) :

rI ff

NC0CHNC0NCH₀CH_oX (I)

NO

SUAMi .: "*_: .*·· .: ·"-·": ^p 1365-de

12 4
in der R , R und R gleich oder verschieden sein können, und jeweils für Wasserstoff oder eine Alkyl-, Aryl-, Aralkyl-, Alkanoyl- oder eine heterocyklische Gruppe, R für den Rest am ot-Kohlenstoffatom einer cC-Aminosäure und X für Chlor, Fluor und/oder Brom stehen; oder mit Gehalt an einer Verbindung gemäß Formel (II):

1 R⁴

R¹ f

NCO(CH₀) NCONCH₀CH₀X (II)

^ λ η , 2 2

^R NO

12 4
wobei R , R , R und X die zuvor gegebene Bedeutung besitzen

und η 2 oder 3 ist; oder mit Gehalt einer Verbindung gemäß Formel (III) :
15

ρ OH

> 0 NHCCH₂NHCNCH₂CH₂Ci (in)

0 ONO
i\ r~- /
20

HO '

WHAc

in der Ac eine Alkanoylgruppe ist, und in Verbindung mit einem pharmazeutisch verträglichen Trägermaterial, Verdünnungsmittel oder Arzneimittelträger.