DE3152635A1

DE3152635A1 - P-anisol enthaltendes biozid, verfahren zu seiner herstellung und seine verwendung

Info

Publication number: DE3152635A1
Application number: DE813152635T
Authority: DE
Inventors: Kent R Edwards
Original assignee: HB Fuller Co
Current assignee: HB Fuller Co
Priority date: 1980-12-19
Filing date: 1981-12-17
Publication date: 1983-02-24
Also published as: SE8204721L; GB2101134B; WO1982002201A1; BR8108926A; SE8204721D0; EP0067212A4; EP0067212A1; SE449097B; GB2101134A; NL8120501A; JPS57502127A; US4402971A

Description

R53541

PCT/US 81/01682

Anmelder: H.B. FULLER COMPANY

2267 Como Avenue

St. Paul, Minnesota 55108, USA

p-Anisol enthaltendes Biozid, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung

Technisches Anwendungsgebiet

Diese Erfindung betrifft eine neue Klasse von praktisch reinen bioziden Nichtsteroid-Verbindungen, die in der Natur in unreiner oder kombinierter Form als Teil eines von Algenausgeschiedenen Toxins vorkommen. Ein Aspekt dieser Erfindung betrifft eine neue biozide Verbindung mit einer Struktur, die noch nicht genau bekannt ist, von der jedoch angenommen wird, daß sie mehrere unterscheidende Reste oder funktioneile Gruppierungen aufweist einschließlich einer in p-Stellung gebundenen Anisolgruppe, eines gesättigten Jf -Lactons, einer aliphatischen Hydroxylgruppe und eines chlorierten aromatischen Kerns (Ringes). Gemäß einem weiteren Aspekt betrifft diese Erfindung biozide (einschließlich antibiotische) Zusammensetzungen, die ein Biozid gemäß dieser Erfindung enthalten.

Beschreibung des Standes der Technik

Seit Anfang dieses Jahrhunderts ist man ständig und in immer größerem Umfange auf der Suche nach neuen bioziden'Verbindungen (einschließlich Antibiotika, die in gewissem

-ι-

•j Sinne als Biozide wirksam sind gegenüber Microorganismen und in vivo verabreicht werden). Viele Gebiete der Biologie haben Beiträge zu diesen Forschungen geliefert. Ein derartiger Beitrag kam kürzlich von einem Botaniker, der die Fähigkeit bestimmter Species von blaugrünen Algen, die in Seen wachsen, untersuchte, wirkungsvoller mit ihren besser ausgestatteten Algennachbarn zu konkurrieren. Der Botaniker Dr. Charles Mason züchtete einen "Ausstrich" einer Species von blaugrünen Algen in einem abgedeckten Glasschälchen und füqte dann als zweite Species Scytonema hoffmanii als "Kreuzausstrich'¹ hinzu. N_ach einer Woche trat am Schnittpunkt der Ausstriche eine klare Zone auf, die anzeigte, daß die zweite Algenspecies die erste abgetötet hatte. D. h. einige dieser blaugrünen Algen-Species überleben durch Abtötung benachbarter Kolonien anderer Species, die sie inhibieren könnten. Masons Entdeckung ließ vermuten, daß ein gegenüber blaugrünen Algen aktives Toxin in der Natur von bestimmten Species der Algen selbst gebildet werden kann. Diese Entdeckung von "in natürlicher Weise" synthetisierten Toxinert kann ein sehr willkommener Beitrag sein. Das Toxin wird in der Natur gebildet, so daß es wahrscheinlich biologisch abbaubar ist und theoretisch sollte keine Anreicherung in der Umwelt auftreten, auch dann nicht, wenn es wiederholt vom Menschen angewendet wird, beispielsweise durch kontinuierliche Behandlung von Seen und Flüssen.

Derzeit ist bekannt, daß das von Mason entdeckte Scytonema-Toxin ηicht-mutagen ist und wahrscheinlich nicht dazu neigt, erwünschten Pflanzen und Tieren zu schaden. Die Aktivität dieses Toxins gegenüber mehreren blaugrünen Algenspecies wurde durch verschiedene Tests bestätigt und in der wissenschaftlichen Literatur beschrieben. Einige Untersuchungen lassen auch die Möglichkeit einer anderen nützlichen antibiotischen Aktivität vermuten.

Die blaugrüne Algizid-Aktivität wäre an sich ein mehr als ausreichender Grund für die Verwendung dieses Toxins in einem kommerziellen Maßstab. Seit vielen Jahren sind Wasserquellen und Seen und Flüsse befallen von unerwünschten Effekten, die durch eine Vielzahl von blaugrünen Algen einschließlich der Species des Genus Anabaena hervorgerufen werden. Es hat sich gezeigt/ daß das Scytonema-Toxin von Mason aktiv ist gegenüber verschiedenen unerwünschten Algenorganismen, darunter auch einigen dieser Anabaena-Species.

Dieses Scytonema-Toxin hat die Fähigkeit, ein Antibiotikum zu liefern, das die Bekämpfung von blaugrünen Algen unterstützen könnte, die sich in tropischen Ländern in Wasserquellen bzw. -Vorräten anreichern und sogar Trinkwasserrohrleitungen verstopfen. Die Entdeckung von Dr. Mason und seiner Mitarbeiter hat mehrere Fragen ausgeworfen. Handelt es sich dabei um eine oder mehr verschiedene chemische Verbindungen, die aus dem Scytonema-Toxin isoliert werden können? Wenn nicht, welches ist der chemische oder biologische Mechanismus, der bewirkt, daß dieses Toxin so aktiv ist?

wenn eine oder mehr chemische Verbindungen aus dem Toxin isoliert werden können, sind diese Verbindungen in Abwesenheit der biologischen Umgebung,in der sie entstehen, aktiv?

Die pharmazeutische Industrie hat bereits eine große Er^ fahrung mit Bakterien und Fungi, die antibiotische Substanzen bilden. Solche "natürlichen" Antibiotika haben sich wahrscheinlich in der Natur entwickelt, um diesefcMicroorganismen einen Vorteil an dem Ort ihres natürlichen Vorkommens gegenüber konkurrierenden Organismen zu verschaffen. Die Entdeckung von Dr. Mason in Bezug auf das Scytonema-Toxin scheint eine gewisse Analogie gegenüber dieser Erfahrung mit Bakterien und Fungi aufzuweisen; die Menge der derzeit verfügbaren Informationen über Algentoxine oder -antibiotika ist jedoch so gering, daß mehr Beweise erforderlich sind, um auf eine Analogie zu konventionellen Antibiotika schließen zu können.

Zusammenfassung der Erfindung

Es wurde nun gefunden/daß mindestens ein Algenbiozid oder ° -antibiotikum aus einem Algenzellenmaterial isoliert werden kann auf eine Weise, die seine biologische Aktivität aufrecht erhält oder verbessert, wobei man eine definierte chemische Verbindung erhält, die gewünschtenfalls mit pharmazeutischen Streckmitteln, Hilfsstoffen und dergleichen kombiniert werden kann zur Erzielung eines brauchbaren chemischen Agens für die Bekämpfung bzw. Kontrolle von, unter anderem Organismen, blaugrünen Algen (Cyano-Bakterien) . Auf diese Weise kann mindestens eine chemische Verbindung in praktisch reiner Form isoliert werden und diese Verbindung hat die gewünschte biozide Aktivität. Die Isolierung dieser Verbindung schließt nicht die Möglichkeit aus, daß noch weitere brauchbare chemische Verbindungen in den Scytonema vorliegen können, auch in einer unreinen oder kombinierten Form. Die verfügbaren Beweise bestätigen jedoch, daß die erfindungsgemäß isolierte und gereinigte einzelne chemische Verbindung von sich aus eine ausgezeichnete biozide Aktivität, d. h. in Abwesenheit zusätzlicher chemisch aktiver Verbindungen, aufweist.

^5 Die biozid aktive Verbindung der Erfindung hat in ihrer praktisch reinen Form die Summenformel C₂-H _0 Cl. Das Molekulargewicht der Verbindung, bestimmt durch Massenspektroskopie, beträgt etwa 430, was anzeigt, daß die Struktur der Verbindung kein Vielfaches der oben genannten

³^ C₂₃-Formel ist. Es gibt nur sehr wenig bekannte Verbindungen mit 23 Kohlenstoffatomen, 23 Wasserstoffatomen, 6 Sauerstoffatomen und 1 Chloratöm und von diesen sehr wenigen Verbindungen ist mindestens eine ein Steroid. Die erfindungsgemäße biozide Verbindung ist jedoch kein Steroid.

Diese Verbindung hat einen Schmelzpunkt innerhalb des Bereiches von etwa 48 bis etwa 55° C und löst sich in m_ äthylather leicht auf. Durch verschiedene analytische Methoden einschließlich der kernmagnetischen Resonanz (NMR), der Infrarotspektroskopie und der Massenspektroskopie wurde die Anwesenheit mindestens der folgenden funktioneilen Gruppen nach-gewiesen:

a) einer in p-Stellung gebundenen Anisol-Gruppe,
b) eines gesättigten v--Lactons,

c) einer aliphatischen Hydroxylgruppe,

d) einer Methylenbrticke,

e) eines an einen aromatischen Kern (Ring) !gebundenen Chloratoms und

f) eines Isopropyl-Substituenten in einer

asymmetrischen Umgebung.

Das derzeit bevorzugte Verfahren zur Herstellung der Verbindung umfaßt das Extrahieren des bioziden Materials aus einem aktiven Bestandteil von Scytonema gp.oder ' seinem Wachstumsmedium mit einem flüssigen organischen Lösungsmittel, wie Diäthyläther, und die Durchführung mindestens eines chromatografischen TrennVorganges, vorzugsweise einer Vielzahl solcher Vorgänge, mit dem dabei erhaltenen Extrakt.

Obgleich die Verbindung in Wasser praktisch unlöslich ist, kann die Verbindung in einer Ätherlösung leicht aufbewahrt, versandt und verteilt werden. Die Verbindung ist in solchen Lösungen stabil und sie ist auch bei Normaltemperaturen und mäßig erhöhten Temperaturen stabil. Kristalle der Verbindung können mit konventionellen inerten pulverförmiger Materialien, wie z. B. Talk und anderen festen,teilchenförmigen pharmazeutischen Streckmitteln,verdünnt (gestreckt) werden.

Detaillierte Beschreibung der Erfindung

Die verfügbaren analytischen Beweise zeigen an, daß die p-Anisolgruppe über eine-CH=Brücke an das gesättigte Y -°

Lacton gebunden ist. Dieses f-Lacton hat eine ungewöhnliche Struktur, die ein oder vielleicht auch zwei Chirozentren (asymmetrische oder optisch aktive Zentren) aufweisen kann. Eines der Kohlenstoffatome des γ-Lactons weist, wie angenommen wird, einen Hydroxyl-Substituenten auf, was den Nachweis eines aliphatischen OH erklärt. Es wird angenommen, daß ein weiterer Substituent, der sich an dem V-Lacton befindet, ein Isopropyl-Substituent in einer asymmetrischen Umgebung ist. Es wird angenommen, daß dieser

Isopropyl-Substituent an das Kohlenstoffatom gebunden ist, 15

das den Hydroxyl-Substituenten trägt. Das Y*-Lacton scheint über eine Methylenbrücke an eine kondensierte Ringstruktur gebunden zu sein. Es wird angenommen, daß diese kondensierte Ringstruktur ein disubstituiertes 1,3-Benzodioxol

(d. h. ein disubstituiertes 1,2-Methylen-dioxylbenzol) 20

umfaßt, wobei einer der Substituenten die Methylenbrücke und der andere das Chloratom ist.

Die Stellung dieser Substituenten seheirt die folgende zu

sein: die p-Stellung der Anisol-Gruppen ist über die 25

-CH=Brücke an das Kohlenstoffatom in f-Stellung

zu der Carbonylgruppe des Lactons gebunden. Das β -Kohlenstoffatom des Lactons ist, wie angenommen wird, durch die Hydroxylgruppe und die Isopropylgruppe substituiert. Das

0< -Kohlenstoffatom ist, wie angenommen wird, über die 30

Methylenbrücke an das kondensierte Ringsystem gebunden.

Das Chloratom des Chlorbenzolringes ist, wie angenommen wird, in o-Stellung an das Kohlenstoffatom des Benzolringes gebunden, der an die Methylenbrücke gebunden ist,

es sind aber auch andere Positionen möglich. Ein Dioxol-35

ring scheint in benachbarten Positionen an den Chlorbenzolring ankondensiert zu sein, was zu der Benzodioxol-Struktur führt.

Das P-Anisol und die funktionellen Gruppen des Dioxols können die leichte Löslichkeit dieser Verbindung in Diäthyläther erklären.

Herstellung der reinen Verbindung

Die derzeit bevorzugte Species für die biosynthetische Herstellung der Verbindung ist Scytonema hoffmanii, ein Organismus, der in der Kultursammlung der Universität von Texas 15

bereits seit langer Zeit hinterlegt ist. Die Hinterlegungs-Nummer bei der Universität von Texas ist 1581.

Forscher haben gezeigt, daß diese bevorzugte Species in großen Mengen gezüchtet werden kann,vgl.z.B. Facets of Fresh-

water 5:1 (1980) .Das dabei erhaltene Zellenmaterial kann unter Anwendung irgendeiner geeigneten konventionellen Methode (mechanisch^durch Ultraschall und dergl.) zu Zellfragmenten aufgebrochen werden. Die Zellbruchstücke werden dann

herauszentrifugiert und die zurückbleibende Flüssigkeit 25

wird lyophilisiert. Dieses lyophilisierte Material wird

mit Diäthyläther behandelt, um ein Konzentrat zu extrahieren, von dem gefunden wurde, daß es die erfindungsgemäße biozide Verbindung enthält. Dieses Konzentrat (nachstehend als "Ätherextrakt" bezeichnet) ist selbst aktiv, 30

da es sich dabei um das lyophilisierte Material handelt.

Der Ätherextrakt wird dann unter Anwendung der Dünnschichtchrommatographie (TLC) chrom'atographiert, wobei das bevorzugte TLC-Medium Silikagel ist, das' in Form einer 35

Schicht auf eine Glasplatte aufgebracht wird, wobei eine

typische SilikageiSchichtdicke in der Größenordnung von 2000 μπι liegt. Wenn der Ätherextrakt auf der Platte zuerst mit Aceton und dann mit Chloroform entwickelt wird, findet man durch TLC deutliche aktive Banden; es können aber auch viele andere einzelne Lösungsmittel oder Mischungen oder Folgen von Lösungsmitteln verwendet werden, wie aus den anschließend diskutierten Löslichkeiten hervorgeht. Die aktiven Banden werden dann einer Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie (HPLC) unterworfen, die zur Isolierung

IQ einer einzelnen aktiven Verbindung führt. Diese einzelne Komponente ist eine neuartige chemische Verbindung - die erfindungsgemäße Verbindung. Diese Verbindung weist eine hohe biozide Aktivität auf und scheint in dem bevorzugten Scytonema in verhältnismäßig großen Mengen, verglichen mit einigen anderen Verbindungen, die leichter isoliert werden können und ebenfalls aktiv sind, vorhanden zu sein. Der Grad der Schwierigkeit der Isolierung der erfindungsgemäßen Verbindung stellt, wie angenommen wird, keine Schwierigkeit bei ihrer Herstellung in kommerziellem Maßstäbe dar und es wird angenommen, daß das höhere Pruduktionsniveau der Verbindung durch den Organismus ein eindeutiger Vorteil bei der kommerziellen Herstellung darstellt.

Wie oben angegeben, ist die erfindungsgemäß hergestellte neue Klasse von praktisch reinen bioziden fcJicht-Steroid-Verbindungen in Diäthyläther leicht löslich. Ihre Löslichkeit in CCIw CHCl₀, CH,- COCH., CH-COCH-, und CH_OH '4 3 3 3 33 3

ist gut, jedoch weniger ausgeprägt. In Hexan wurde nur eine partielle Löslichkeit festgestellt. Diese Klasse von Verbindungen scheint, wenn sie nicht modifiziert worden ist zur Einführung von hydrophilen Eigenschaften, in Wasser praktisch unlöslich zu sein. Die Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen scheint etwas beständig zu sein gegen thermischen Abbau bei Temperaturen oberhalb des Schmelzpunktes der Verbindungen (beispielsweise oberhalb

55° C) und die Aktivität kann Temperaturen von bis zu 200° C überleben. Diese thermische Stabilität kann mit Vorteil bei der großtechnischen Herstellung der Verbindung aus einem Wachstumsmedium ausgenutzt werden. So enthält beispielsweise das Wachstumsmedium in der Regel eine große Menge Wasser. Dieses Wasser kann unter Vakuum abgestreift werden, das Abstreifverfahren ist jedoch bei Temperaturen unterhalb 40° C ziemlich unwirksam. Bei Temperaturen oberhalb 40° C oder sogar 50 C kann die Herabsetzung des Wassergehaltes wirksamer durchgeführt werden und der Wassergehalt kann innerhalb eines vernünftig kurzen Zeitraumes bis auf einen geringen Prozentsatze seines ursprünglichen Wertes herabgesetzt werden. Dieser hochkonzentrierte wässrige Rückstand aus dem Wachstumsmedium kann dann lyophilisiert, mit Äther extrahiert und chromatographiert (z. B. durch TLC und anschließend durch HPLC) werden, um das erfindungsgemäße p-ft.nisol enthaltende Biozid zu isolieren. Bekanntlich kann die ,Chromatographie in kommerziellem Maßstab und mit vernünftigen Abtrennungsraten durchgeführt werden bei Verwendung von großen chromatographisehen Kolonnen, in denen große Mengen Material gehandhabt werden können. Die leichte Löslichkeit des Biozids in Äther kann mit Vorteil ausgenutzt werden, wenn reine Kristalle der Verbindung erwünscht sind. In kristalliner oder einer anderen festen Form kann eine biozid wirksame Menge der Verbindung mit einem biozid: inaktiven. Streckmittel (Verdünnungsmittel) kombiniert werden, bei dem es sich entweder um einen Feststoff (wie z. B. Talk oder andere pharmazeutisch brauchbare Streck- bzw. Verdünnungsmittel) oder um eine Flüssigkeit (z. B. Äther oder andere organische Lösungsmittel) handeln kann. In einer konzentrierten oder verdünnten Form kann die erfindungsgemäße Verbindung ohne sichtbare Veränderung bei Temperaturen unter Raumtemperatur oder im gefrorenen Zustand aufbewahrt werden, um ihre Aktivität wei-

ter zu schützen. Die Fähigkeit, im gelösten Zustand ohne sichtbare Veränderung bei Temperaturen unter 10° C aufbe-

-r/M·

wahrt werden zu können,steht in gewissem Gegensatz zu dem Verhalten des Zell_extrakts, bei dem Niederschläge auftraten , wenn er bei 3 bis 5° C gelagert wurde oder Einfrier-Auftau-Zyklen unterworfen wurde. Ohne an irgendeine Theorie gebunden zu sein, wird angenommen, daß die festgestellten Niederschläge proteinartiger Natur waren und einen Teil der erfindungsgemäß angestrebten bioziden Aktivität mitgenommen haben können.

Bei Temperaturen oberhalb 40 C wurde ein gewisser Verlust an Aktivität im Falle des Zellextrakts festgestellt. Ohne an eine Theorie gebunden zu sein, wird angenommen, daß andere Verbindungen als das erfindungsgemäße, p-Anisol enthaltende Biozid bei der Einwirkung solcher Temperaturen abgebaut oder umgewandelt oder zerstört werden und daß die p-Anisol-Verbihdung selbst nicht schwerwiegend beeinträchtigt wurde.

Die Multiringstruktur des erfindungsgemäßen, p-Änisol enthaltenden Biozids erinnert, wie derzeit angenommen wird, vage an andere antibiotische oder biozide Verbindungen, es sei jedoch erneut darauf hingewiesen, daß die vorliegende Erfindung an keine derartige Theorie gebunden ist. Wahrscheinlich können durch vorsichtige Herstellung von Analogien zu anderen Bioziden und Antibiotika Beiträge zu Theorien bezüglich der Funktion dieser Verbindungen allgemein geliefert werden.

Der vorläufige Arnes-Test zeigt, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen nicht-karzi'no'gensind. Andere biologische Untersuchungen haben die Aktivität gegenüber blaugrünen Algen von mehr als einer Species, eine offensichtliche bakterizide Aktivität und eine offensichtliche algizide Aktivität gegenüber grünen Algen, die im Gegensatz zu blaugrünen Algen echte Pflanzen darstellen, gezeigt.

Die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen und ihrer sie enthaltenden Zusammensetzungen umfaßt die Behandlung von Wasservorräten bzw. -quellen, Swimmingpools, Wasserrohrleitungssystemen, Filtriervorrichtungen, Aquarien und Verdampfungstürmen. Zu den Wasservorräten bzw. -quellen, die behandelt werden können, gehören Seen, Flüsse (Ströme) und dergleichen. Wie bereits weiter oben angegeben, scheint die Aktivität gegenüber Anapaena-Organismen nachgewiesen zu sein und die Bekämpfung bzw. Kontrolle von Anabaena flos aguae kann von besonders großer kommerzieller Bedeutung se in ·

Beispiel
15

Die überstehende Flüssigkeit, die beim Abzentrifugieren der Zellbruchstücke von Scytonema hoffmanii (Universität Texas 1581) erhalten wurde, wurde lyophj,lisiert und mit Diäthyläther extrahiert. Der Ätherextrakt wurde auf einer 2000 um dicken SilIkageIschicht auf Glas unter Verwendung von Aceton und Chloroform als Lösungsmittel entwickelt. Aus den aktiven Banden der TLC unter Verwendung von HPLC wurden etwa 2 mg reine Verbindung erhalten. Diese 2 mg-Proben wurden unter Anwendung der Infrarotspektroskopie, der Massenspektroskopie und der NMR mit hoher Auflösung analysiert. Die Protonen-NMR und die Massenspektr.oskopie bestätigten, daß das Molekulargewicht innerhalb des Bereiches von 430 bis 431 lag und die Summenformel C₂₃H₂₃O₆Cl. Die Infrarotspektroskopie bestätigte die An-

Wesenheit einer Hydroxylgruppe,offensichtlich einer einzelnen OH-Gruppe. Die NMR-Daten zeigten die Anwesenheit einer speziellen Isopropylgruppe, in der die beiden Methylgruppen, die an das dritte Kohlenstoffatom gebunden waren, nicht äquivalent waren und offensichtlich in einer asymmetrisehen Umgebung vorlagen. Das NMR-Spektrum zeigte ferner, daß eine Methocfty-Gruppe an einem aromatischen Ring in einer p-Position vorlag. Das Infrarotspektrum zeigte ferner die Möglichkeit einer )f -Lactongruppe und die Anwesenheit von

mindestens drei Ringen in dem Molekül einschließlich des Lactons.

Weitere Proben der Verbindung wurden einer C-13 NMR-Spektroskopie unterworfen, wobei zusätzliche Strukturdaten erhalten wurden, wie sie hier angegeben sind.

Das Wachstumsmedium, in dem sich das Zellmaterial befand, das die oben genannte 2 mg-Probe lieferte, enthielt, wie gefunden wurde, auch sehr geringe Mengen des erfindungsgemäßen p-Anisol-Biozids. Offenbar scheidet das Scytonema geringe Mengen dieser Verbindung ab oder erlaubt anderweitig, daß die Verbindung aus der Zellumgebung entweicht.

Auf der Basis aller in diesem Beispiel angegebenen analytischen Daten wurde für die Verbindung dieses Beispiels die folgende Strukturformel vorgeschlagen:

Claims

R53541 -f-

PCT/ÜS 81/01682 Anmelder: H.B. FULLER COMPANY

2267 Como Avenue

St. Paul, Minnesota 55108, USA

PATENTANSPRÜCHE

(1./Im wesentlichen reine, diäthylätherlösliche, biozide

Nichtsteroid-Verbindung C₂₃H₂₃OgCl mit einem Molekulargewicht von etwa 4 30 und einem Schmelzpunkt innerhalb des Bereiches von etwa 48 bis etwa 55 C, die mindestens die folgenden funktioneilen Gruppen enthält:

a) eine in p-Stellung gebundene Anisolgruppe,

b) ein gesättigtes "y-Lacton,

c) eine aliphatische Hydroxylgruppe,

d) eine Methylenbrücke,

e) ein Chloratom , substituiert an einem aromatischen Kern (Ring), und

f) einen Isopropyl-Substituenten in einer asymmetrischen Umgebung.
2. Verbindung nach Anspruch 1, die isoliert worden ist aus einem von der Species Scytonema hoffmanii produzierten Toxin.
3. Verbindung der Formel

Cl

1
4. Verfahren zur Herstellung der Verbindung gemäß Anspruch 1, das die folgenden Stufen umfaßt:

a) Extrahieren des von einer Species des Genus Scytonema gebildeten bioziden Materials mit

5 einem flüssigen organischen Lösungsmittel und

b) Durchführen mindestens eines chroma tographigchen Trennverfahrens mit dem dabei erhaltenen

Extrakt.

10
5. Biozide Menge der Verbindung gemäß Anspruch 1 in Kombination mit einem .biozid inaktiven Streckmittel.
6. Verfahren zum Inhibieren des Wachstums von blaugrünen Algen, bei dem die Algen der Zusammensetzung gemäß Anspruch 15 5 ausgesetzt werden.