DE3029149C2 - Behälter zum Identifizieren von Mikroorganismen - Google Patents

Behälter zum Identifizieren von Mikroorganismen

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Description

45
Die Erfindung bezieht sich auf einen Behälter zum Identifizieren von Mikroorganismen gemäß dem Oberbegriff des Patentanspruchs 1.
Um Mikroorganismen zu identifizieren, ist es im allgemeinen notwendig, folgende Verfahrensschritte durchzuführen: Isolieren der Mikroorganismen mittels eines Isolationsmediums, Okulieren dieser in mehr als Arten von Bestätigungsmedien mit reinen isolierten Bakterien, Kultivieren dieser in einem Inkubator bei 37°C für 24 bis 48 h und dann Feststellen der biochemischen Eigenschaften der zu untersuchenden Bakterien. Entsprechend ist eine aseptische Operation notwendig, um das Medium mit einem komplizierten Vorgang zum Identifizieren der so kultivierten Mikroorganismen zu präparieren.
Aus der DE-AS 12 20083 ist ein Behälter der eingangs genannten Art bekannt, der eine einfache und schnelle Prüfung biochemischer Reaktionen an Bakterien zuläßt Dies soll insbesondere dann möglich sein, es wenn eine der verschiedenen, in Substratlösungen befindlichen Bakterienkulturen mit einer größeren Anzahl von Reagenzien gleichzeitig geprüft werden sollen. Das bekannte Gefäß besteht aus mindestens einer, vorzugsweise aus sehr vielen Kammern, wobei jede Kammer aus mehreren, längs einer gemeinsamen Mittellinie liegenden Teilkammern zusammengesetzt ist Die Teilkammem bzw. die Trennwände zwischen den Teilkammern sind derart angeordnet und ausgebildet, daß beim Schwenken der Kammer um eine zur Mittellinie der Teilkammem senkrechte Achse zunächst der Inhalt der obersten Kammer in die benachbarte fließt dann der Inhalt dieser Kammer zusammen mit dem der ersten genannten Kammer in die nächstfolgende usw. fließt Ein solcher Behälter gestattet die in der ersten Teilkammer zusammen mit einer Substratlösung eingebrachte Bakterienkultur nacheinander mit verschiedenen, getrennt aufgewahrten Reagenzien zu mischen, und zwar in einer gewünschten Reihenfolge, und so die jeweils gewünschte Prüfung in kürzester Zeit durchzuführen. Gemäß dieser Methode befinden sich die verschiedenen Reagenzien in einzelnen Teilkammem, so daß sich die Reagenzien miteinander vermischen und so in der nächsten und übernächsten Kammer ebenfalls verfälschte Verhältnisse herrschen und daher die Testergebnisse nicht mehr exakt sind. Außerdem ist die Handhabung des Behälters sehr schwierig, da beim ersten Kippvorgang darauf geachtet werden muß, daß nur ein Überwechseln in die nächste Teilkammer und nicht bereits in die übernächste Teilkammer erfolgt
Demgegenüber besteht die Aufgabe der Erfindung darin, einen Behälter zum Identifizieren von Mikroorganismen zu schaffen, mit dem fehlerlos und bei einfacher Handhabung die Mikroorganismen mit den biochemischen Eigenschaften derselben in kurzer Zeit identifiziert werden können.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch einen Behälter entsprechend dem kennzeichnenden Teil des Patentanspruchs 1 gelöst
Gemäß dieser Lösung ist längs der Kippachse eine gemeinsame Kammer vorgesehen, in der sich die zu untersuchende bakterielle Suspension befindet Dieser gemeinsamen Zelle sind eine Reihe von Einzelzellen zugeordnet in denen sich jeweils ein unterschiedliches Reagenz befindet Die gemeinsame Kammer und die einzelnen Zellen sind über die Scheitelbarrierenpassagen miteinander verbunden, welche jeweils aus einem von der gemeinsamen Kammer aus ansteigenden Annäherungskanal, einem Scheitel und einer nach unten gerichteten Passage besteht Es kann somit durch eine einzige, einfach zu handhabende Kippbewegung sehr schnell ein und dieselbe bakterielle Suspension mit einer Vielzahl von Reagenzien in Verbindung gebracht werden, wobei in jedem Falle gewährleistet ist daß die bakterielle Suspension in die einzelnen Zellen gelangt
Der Okuliervorgang mit der bakteriellen Suspension kann durch eine einfache und einzige Manipulation erfolgen. Dabei kann die bakterielle Suspension gleichmäßig und in einem glatten Vorgang verteilt werden, so daß die bakterielle Suspension gleichmäßig in die einzelnen Zellen verzweigt werden kann.
Weitere vorteilhafte Ausgestaltungen der Erfindung ergeben sich aus den Unteransprüchen.
Die Erfindung wird in der nachfolgenden Beschreibung der in den Zeichnungen rein schematisch dargestellten Ausführungsbeispiele näher erläutert Es zeigt
F i g. 1 eine perspektivische Ansicht eines am Deckel teilweise aufgebrochenen dargestellten Behälters,
F i g. 2 eine teilweise vergrößerte Draufsicht auf den
in F i g. 1 dargestellten Behälterkörper und
Fig.3 eine Schnittansicht des Behälterkörpers entlang der Linie IH-III in Fig. 2.
Der in den Figuren dargestellte Behälter besteht aus einem rechtwinkligen, dünnen, kastenförmigen Behälterkörper 1 und einem Deckel Z Eine 2elle 3 für eine bakterielle Suspension ist längs des Behälterkörpers 1 an einer Seite desselben ausgebildet Eine Anzahl von kleinen Zellen 4 sind senkrecht zur Zelle für die bakterielle Suspension ausgebildet jede der kleinen Zellen 4 steht über eine Scheitelbarrierenpassage S mit der Zelle 3 für die bakterielle Suspension in Verbindung. Der Behälterkörper 1 besteht aus Kunststoff, wie beispielsweise Vinylchlorid, Polypropylen oder dgl. und ist durch Vakuum- oder Druckformen eines Kunststoff- is flächenmaterials mit einer Dicke von weniger als 0,5 mm oder dgl. hergestellt Es sollte festgestellt werden, daß für den Fall, daß das Flächenmaterial dicker als 03 mm ist, die jeweiligen Zellen und die Passagen nicht scharfkantig ausgebildet sind, damit die bakterielle Suspension korrekt bzw. genau durchfließen kann.
Es sind eine Vielzahl von Trennbarrieren 6 vorgesehen, die in der Zelle 3 in Richtung auf die kleinen Zellen 4 verlaufen, um vorzugsweise die bakterielle Suspension durch die Scheitelbarrierenpassage 5 in die jeweilige kleine Zelle 4 überzuführen.
Entsprechend der Darstellung in F i g. 2 und 3 ist jede der Scheitelbarrierenpassage 5 schmaler ausgebildet als die Breite der schmalen Zellen 4 und besteht aus einem Annäherungskanal 8, welcher mit einem vorbestimmten konstanten Gradient von der Zelle 3 für bakterielle Suspension ansteigt, einem Scheitel 7, welcher am höchsten Punkt der ansteigenden Annäherungspassage 8 ausgebildet ist, und aus einer U-förmigen nach unten gerichteten Passage 9, weiche längs der Scheitelbarrierenpassage 5 vom Scheitel 7 bis zum Boden gekrümmt verläuft und mit dem Boden der kleinen Zelle 4 am untersten Ende derselben in U-Form zusammenfällt, um eine Gegenströmung der bakteriellen Suspension zu verhindern, wie dies aus dem Schnitt in senkrechter Richtung ersichtlich ist
Obwohl die Passage 9 von direkt unterhalb des Scheitels 7 am Boden in U-Fonn gebogen ist (siehe F i g. 3), so kaiiii ..ie ebenso mit einer flachen oder schräg verlaufenden Nut mit einem rechtwinkligen Boden versehen sein, welche vom Scheitel 7 zur kleinen Zelle 4 verläuft, die von einem ein wenig unterhalb des Scheitels 7 liegenden Abschnitt gekrümmt verläuft, so daß der Boden des gekrümmten Abschnittes im Querschnitt eine U-Form aufweist
Die kleine Zelle 4 der zuvor beschriebenen Art ist bemerkenswert schmäler als die Zelle 3 für bakterielle Suspension. Wenn jedoch die kleine Zelle 4 so tief ausgebildet ist wie die Zelle 3 für bakterielle Suspension, kann die bakterielle Suspension glatt und gleichmäßig in ss den kleinen Zellen 4 verteilt werden und geeignet gehandhabt werden, sogar wenn der Behälterkörper 1 aufrecht steht Obwohl im wesentlichen in der Mitte jeder kleinen Zelle 4 zum Einfüllen einer Reagenz eine flache Ausnehmung 10 ausgebildet ist, ist dies nicht immer notwendig. Als Reagenz kann für die Durchführung biochemischer Versuche ein sterilisiertes Reagenz im Trockenzustand verwendet werden. Es wird in die kleinen Zellen gefüllt wonach der gesamte Behälter gassterilisiert wird.
Wenn das Reagenz getrocknet wird, dann ist ein Trockenheißgebläse zu bevorzugen. Für den Fall eines pulvrigen Reagenz wird PVP (Polyvinylpyrrolidon) in geeigneter Menge mit dem Reagenz vermischt um dadurch zu verhindern, daß das Reagenz beim Trocknungsprozeß zerstreut oder ausgeblasen wird Der den Behälterkörper 1 abdeckende Deckel 2 ist transparent und ist mit einer Vielzahl von Ausschnitten 11 versehen, um den Deckel zu ergreifen, wenn der Behälterkörper abgestellt und benutzt werden soll. Auf oder seitlich der jeweiligen kleinen Zellen 4 des Behälterkörpers 1 können die Reagenzien kennzeichnende Zahlen oder Symbole sein. Diese können außerdem auch an der Seite des Behälterkörpers 1 angebracht sein. Schließlich besteht auch eine Möglichkeit das Symbol auf dem Deckel 2 an entsprechender Stelle anzubringen. Bei der Verwendung des so konstruierten Behälters werden die Reagenzien für die biochemischen Versuche von vorneherein in den kleinen Zellen untergebracht Dann wird reines, zu untersuchendes Isolat, welches in einer geeigneten Konzentration in einer Salzlösung suspendiert ist, in eine Zelle für bakterielle Suspension 3 in spezifizierter Menge eingegeben, wobei der Behälter i horizontal gehalten wird, um das Niveau der bakteriellen Suspension in der Zelle 3 für die bakterielle Suspension gleichförmig zu halten. Dann wird der gesamte Behälterkörper 1 so geneigt daß die bakterielle Suspension zum oberen Ende der Zelle 3 gelangt, wo die ausgehöhlte Zelle für die Suspension hoch ist um dadurch die bakterielle Suspension über die Scheitelbarrierenpassagen 5 in die jeweiligen kleinen Zellen 4 zu überführen.
Der Deckel 2 kann auf dem Behälterkörper 1 aufgebracht werden, nachdem die bakterielle Suspension eingebracht wurde. Allerdings kann der Deckel auch nach dem Okulieren aufgebracht werden. Dann wird die bakteriengeimpfte Substanz durch herkömmliches Verfahren kultiviert und gezüchtet um dadurch entsprechend dem Typ der biochemischen Eigenschaften zu reagieren. Dabei wird der auftretende Farbwechsel beobachtet. Dieser Behälterkörper kann exakt die biochemischen Eigenschaften der Bakterien ohne Fehler in kurzer Zeit identifizieren.
Wenn dieser Behälterkörper 1 verwendet wird, wird die Zelle 3 für bakterielle Suspension mit einem hydrophilen oberflächenaktiven Mittel beschichtet Ein hydrophobes oberflächenaktives Mittel oder Siliconöl oder dgl. wird auf die Scheitelbarrierenpassage aufgebracht um dadurch eine gleichförmige Verteilung der bakteriellen Suspension in die kleinen Zellen zu erreichen. Wenn der Behälterkörper 1 geneigt wird, kann dieses hydrophobe Mittel verhindern, daß die Suspension aus der kleinen Zelle 4 in die Zelle 3 für bakterielle Suspension zurückfließt Wenn eine oberflächenaktive reagierende Reagenzlösung, gelöst in Alkohol, eingefüllt wird und der Alkohol verdunstet, so verbleibt das oberflächenaktive Mittel. Die Verteilung der bakteriellen Suspension in den kleinen Zellen kann dadurch weiterhin verbessert werden. Wenn das oberflächenaktive Mittel in der bakteriellen Suspension gelöst wird und das hydrophile Oberflächenmittel auf der Scheitelbarrierenpassage aufgebracht wird, können die besten Resultate erzielt werden.
Für den Fall einer anaeroben bakteriellen Suspension werden die kleinen Zellen 4 an ihrer Oberseite durch einen transparenten Film abgedichtet, und der Behälterkörper 1 wird vertikal gestellt um dadurch flüssiges Paraffin auf die bakterielle Suspensionslösung aufzubringen und die Bakterien in anaeroben Zustand zu kultivieren, während der vertikale Zustand aufrechter-
halten wird und in diesem Zustand eine Untersuchung durchgeführt wird.
Das Beispiel des Behälterkörpers mit zehn kleinen Zellen wird nun verglichen hinsichtlich der Menge der verteilten bakteriellen Suspension (die Menge der eingeimpften bzw. okulierten Bakterien).
In der nachfolgenden Tabelle bezeichnet das Bezugszeichen A den Wert der kleinen Zelle und den Zellen für bakterielle Suspension, beschichtet <mit Triton X405 (hergestellt von Röhm & Haas Company) auf der Scheitelbarrierenpassage und die kleinen Zellen beschichtet mit Siliconöl auf der Barrierenpassage der Seite der kleinen Zelle.
Bakterielle Suspension 0 B 0,18 A C
A 0 0,17 Salzlösung mit Salzlösung mit
kleine Zelle 0 0,20 oberflächenaktivem oberflächenaktivem
Nr. Salzlösung 0,10 Salzlösung 0,19 Mittel (ml) Mittel (ml)
0,50 0,21 ± 0,16 + 0,19
1 (ml) 0,50 (ml) 0,20 + 0,18 + 0,19
2 0,40 + 0,20 + 0,20 + 0,19
3 — 0,10 ± 0,19 + 0,22 + 0,20
4 - 0 + 0,18 + 0,19 + 0,20
5 — 0 + 0,21 + 0,21 + 0,20
6 til 2,00 + 2,00 ± 0,17 + 0,20
7 w + + 0,21 + 0,20
8 Ht 1,60 + 1,93 + 0,18 + 0,21
9 - + + 0,20 + 0,19
10 - + 2,00 2,00
Verteilte — +
Menge 1,92 1,97
Entdeckte
Menge
Anmerkung: +; positiv; -; negativ;
Wie aus der Tabelle ersichtlich ist, war im Vergleich damit, daß der Behälterkörper aus Kunststoff besteht und mit oberflächenaktivem Mittel und Siliconöl beschichtet ist, die okulierte Menge der bakteriellen Suspension irregulär, und zwar infolge des nicht behandelten Behälterkörpers, um durch die irreguläre Menge eine Kultivierfähigkeit des Behälterkörpers zu bewirken. Andererseits stellte sich ein stabiles und überragendes Kulturergebnis der Bakterien ein, wenn der Behälterkörper mit dem oberflächenaktiven Mittel und dem Si'iconöl beschichtet wurde und die Menge der okulierten Bakteriensuspension der physiologischen Salzlösung ein oberflächenaktives Mittel enthielt
Beim Fall C, wenn die Abwärtspassage der Scheitelbarrierenpassage einen H-förmigen Boden hat, kann die Beschichtung mit Siliconöl darauf weggelassen werden.
obwohl das gleiche Ergebnis erzielt wird.
Aus der vorstehenden Beschreibung ergibt sich, daß, da der Behälterkörper dazu verwendet wird, die Schritte des Eingehens vo'bestimmter Mengen einer bakteriellen Suspension in die Zelle für bakterielle Suspension durchzuführen, wobei der Trogkörper horizontal gehalten und dann mit einem Ende geneigt wird, um dadurch die jeweiligen kleinen Zellen über die Scheitelbarrierenpassagen durch einen gemeinsamen Vorgang zu okulieren, die Bakterien bei abgedecktem Behälter kultiviert werden, um dadurch die Diskriminierung der biochemischen Eigenschaften der Bakterien oder Mikroorganismen entsprechend der Art der biochemischen Eigenschaften in den kleinen Zellen in kurzer Zeit zu bewirken.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims (5)

Patentansprüche:
1. Behälter zum Identifizieren von Mikroorganismen, mit einem von einem durchsichtigen Deckel abdeckbaren, aus Glas oger Kunststoff bestehenden Behälterkörper, in dem mehrere Zellen ausgebildet sind, von denen mindestens zwei über eine Scheiteltrennwand miteinander verbunden sind und zur Aufnahme einer bakteriellen Suspension bestimmt sind, wobei eine Vielzahl von die Reagenzien to aufnehmenden Zellen nebeneinander angeordnet sind, dadurch gekennzeichnet, daß die Vielzahl von die Reagenzien aufnehmenden Zellen (4) über Scheitelbarrierenpassagen (S), die aus ansteigenden Annäherungskanälen (8), Scheitel (7) und nach unten gerichteten Passagen (9) bestehen, mit einer allen diesen Zellen (·«) gemeinsamen, die bakterielle Suspension aufnehmenden Zeile (3) verbunden sind.
2. Behälter nach Anspruch !,.dadurch gekenn- M zeichnet, daß eine an der Seite der jeweiligen kleinen Zellen (4) ausgebildete schräge Passage (9) der Scheitelbarrierenpassage (5) im Querschnitt U-förmig ausgebildet ist
3. Behälter nach Anspruch 1, dadurch gekenn- 2s zeichnet, daß ein Annäherungsabschnitt (8) der Scheitelbarrierenpassage (5) eine Trennbarriere (6) trägt
4. Behälter nach den Ansprüchen 1 und/oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die schräge Fläche (8) der Scheitelbarrierenpassage (5) auf der Seite der Zelle (3) der bakteriellen Suspension mit einem hydrophilen oberflächenaktiven Mittel beschichtet ist und daß ein hydrophobes oberflächenaktives Mittel und/oder Siliconöl auf der gegenüberliegenden schrägen Fläche (9) der Scheitelbarrierenpassage (5) auf der Seite der kleinen Zelle (4) aufgegeben ist
5. Behälter nach mindestens einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß jede kleine Zelle (4) mit zumindest einer flachen Ausnehmung (10) versehen ist
DE3029149A 1979-11-06 1980-07-31 Behälter zum Identifizieren von Mikroorganismen Expired DE3029149C2 (de)

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