DE3010790A1 - Verfahren zur herstellung von immobilisiertem, staerke abbauendem enzym und reaktionsprodukt mit dem immobilisierten enzym - Google Patents
Verfahren zur herstellung von immobilisiertem, staerke abbauendem enzym und reaktionsprodukt mit dem immobilisierten enzymInfo
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Description
Verfahren zur Herstellung von immobilisiertem, Stärke abbauendem Enzym und Reaktionsprodukt mit dem immobilisierten Enzym
Die Erfindung betrifft Verfahren zur Herstellung von immobilisiertem
Enzym, insbesondere immobilisiertem,Stärke abbauendem Enzym und das Reaktionsprodukt mit dem immobilisierten Enzym.
Immobilisierte Enzyme oder unlöslich gemachte Enzyme stellte man bisher mit verschiedenen Methoden her, wie z.B. durch
Binden an einen Trägerstoff, durch Einschließen und durch Vernetzen. Es wurde jedoch keine Produktion von immobilisiertem,
Stärke abbauendem Enzym in großem Maßstab durchgeführt, und man verwendete kein immobilisiertes, Stärke abbauendes Enzym
zur Herstellung von Reaktionsprodukten aus stärkeartigem bzw. stärkehaltigem bzw. amylartigem (amylaceous) Stoff, weil
seine Restaktivität nach der Immobilisierung im allgemeinen aufgrund der Rückbildungbzw. Retrogradation der stärkehaltigen
Substratlösung mit einem Gehalt an hochmolekularen Subntnnzen und/oder der erforderlichen hohen Konzentration in der
Subfitratlösung im allgemeinen gering ist.
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Es wurden Verfahren zur Herstellung von immobilisiertem, üt;ärk<;
abbauendem Enzym und ein Reaktionsprodukt mit dem immobilisirrten
Enzym untersucht· Man entwickelte das erfindungsnemäßc Verfahren,
das sich von üblichen Immobilisierungsmethoden unterscheidet, die eine direkte Kopplung des natürlichen Enzymproteins
umfassen, wobei man gemäß dem erfindungsgemäßen Verfahren zur Herstellung eines immobilisierten, Stärke abbauenden
Enzyms mit hoher Stärkeabbauaktivität in Lösung ein Stärke abbauendes Enzym mit einem Modifizierungsmittel derart
modifiziert, daß man das Enzym nicht wesentlich bzw. hochfrrvid i r;
bzw. dauerhaft (im folgenden der Kürze haibor: nicht, d,'iu<
>rh;i M.) unlöslich macht, und danach das modifizierte Enzym auf einon
Trägerstoff adsorbiert. Die Erfindung beruht ferner auf dor Feststellung, daß man eine technische Herstellung des Reaktionsproduktes
mit diesem erfindungsgemäßen Enzym leicht durchführen kann, indem man eine Substratlösung mit einem Gehalt an
stärkehaltigem Stoff der Wirkung des immobilisierten Enzyms unterwirft.
Verwendbare Stärke abbauende Enzyme gemäß der Erfindung sind
beispielsweise Cyclodextringlueanotransferase (E.C. 2.4.1.19),
die den G-lycosylrest der Stärke oder eines partiellen Stärkehydrolysates überträgt, und alpha-Amylase (E.C. 3.2.1.1), ß-
Amylase (E.C. 3.2.1.2), Glucoamylase (E.C. 3.2.1.3), Pullulanase
(E.C. 3.2.1.41) und Isoamylase (E.C. 3.2.1.68), die
glucosidische Bindungen hydrolysieren. Verwendbare Enzymzube
reitungen gemäß der Erfindung wählt man aus einer Gruppe aus, die rohe Enzyme von Mikroorganismen, Tieren und Pflanzen, und
ihre gereinigten und partiell gereinigten Zubereitungen umfaßt.
Verwendbare Modifizierungsmittel sind jene, die Stärke abbauendes Enzymprotein in einer Weise vernetzen und/oder modifizieren,
daß man das Enzym durch die Modifizierunnsreaktion π ich L
dauerhaft unlöslich macht, und zwar ohne unnötige Enzyminaktivierung,
wobei diese Modifizierungsmittel einen oder mehrere; funktionelle Reste aufweisen, die mit einem oder mehreren bestimmten
Resten des Enzymproteins reagieren. Funktionelle Reste, die mit einem bzw. mehreren bestimmten Resten dos Enz.yrc-
Hayashibara-P23O28O 030047/0632 BAD ORIGINAL
proteine reagieren können, sind beispielsweise Diazo-, Carboxyl-, Säufeanhydrid-, Säureazid-, Säurehalogenid-, Isocyanat-, Isothiocyanat-,
Carbodiimid-, Imidocarbonat-, Thioamid-, Maleinimid-,
Formyl- und Methylolreste, Halogenatome und SuIfonylchloridreste.
Geeignete monofunktionelle Reagenzien bzw. Modifizierungsmittel
gemäß der Erfindung sind beispielsweise Monoaldehydverbindungen,
wie z.B. Acetaldehyd, Propionaldehyd, Butyraldehyd, Oetylaldehyd,
Lauraldehyd bzw. Laurinaldehyd, Oleylaldehyd, Benzaldehyd, p-Nitrobenzaldehyd
und Naphthaldehyd, und Acylierungsmittel, wie
z.B. Bernsteinsäureanhydrid, Maleinsäureanhydrid und H-Acetoxysuccinimid.
Wenn man das letzte Reagenz verwendet, kann man einen Acetylrest in das Enzymprotein einführen, indem man das
Enzym mit einem wasserlöslichen Carbodiimid anstelle von N-Acetoxysuccinimid
in Gegenwart von Essigsäure behandelt.
Verwendbare bifunktionelle Reagenzien bzw. Modifizierungsmittel
sind beispielsweise Diisocyanatverbindungen, wie z.B. Hexamethylendiisocyanat,
und Tolaol-2,4-diisocyanat, Dialdehydverbindungen,
wie z.B. Glyoxal, Glutaraldehyd und Succindialdehyd,
Diazoverbindungen, wie z.B. Bisazobenzidin. Zusätzlich zu den genannten Reagenzien sind auch N,N'-ÄthylenbismaIeinimid und
wasserlösliche Carbodiimide erfindungsgemäß verwendbar.
Verwendbare polyfunktionelle Reagenzien bzw. Modifizierungsmittel
gemäß der Erfindung sind beispielsweise Cyanurchlorid, Dialdehydstärke und Dialdehydpullulan.
Hinsichtlich der Reaktionsbedingungeu kann man beliebige Bedingungen
anwenden, sofern sie keine unnötige Enzyminaktivierung
während der Modifizierungsreaktion verursachen, und sofern sie
die Reaktion in einer Weise bewirken, daß das Enzym nicht dauerhaft unlöslich gemacht wird. Im allgemeinen sind die
nachstehenden Bedingungen bevorzugt, die für das Enzym sicher sind bzw. das Enzym stabilisieren: Die Modifizierungsreaktion
führt man, ohne das Enzym dauerhaft
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unlöslich zu machen, mit einer Stärke abbauenden Enzymlösunp
mit einer Konzentration von etwa 0,01 bis 5 $ (Gewicht/Volumen)
und einem Modifizierungsmittel in einer Konzentration von etwa 0,001 bis 5 i" (Gewicht/Volumen) bei einem pH-Wert im Bereich
von etwa 3 bis 10 und einer Temperatur im Bereich von etwa 0 bis 80 0C 0,1 bis 50 h lang durch. In diesem Pail kann man eine
ausreichende Menge eines Enzymstabilisators, wie z.B. ein Subnfcr-r
oder Salz, zugeben und die Inaktivierung des Enzyms während d<u-Modifizierung
verhüten.
Die Modifizierung eines Stärke abbauenden Enzyms, ohne daß das
Enzym dauerhaft unlöslich gemacht wird, bedeutet gemäß der Erfindung, daß man die Modifxzierungsreaktion derart einstellt,
daß die Reaktionsmischung mit einem Gehalt an modifiziertem Enzym durchscheinend oder leicht wolkig erscheint (keino Niederschlagsbildung)
.
Geeignete Trägerstoffe gemäß der Erfindung sind beispielsweise Aktivkohle, poröses Glas, japanischer saurer Ton, Bleicherde
bzw. Bleichton, Kaolinit, Aluminiumoxid, Kieselgel, Bentonit, Keramik, Hydroxylapatit, Calciumphosphatgel, Stärke, Amylose,
Pullulan, Dextran, Cellulose, poröse Mischpolymerharze und ihre Derivate.
Bevorzugte poröse Mischpolymerharze sind jene, die nicht-ioniach
sind und fähig sind,Enzymprotein zu adsorbieren, und die man
durch Mischpolymerisation von Styrolmonomerem und Methylstyrol-,
Nitrostyrol-, Styry!halogenid-, Acrylnitril-, Vinylacetat-,
Vinylchlorid-, Divinylbenzol-, Butadien- oder Isopuren- bzw. Isoprenmonomerem hergestellt hat. Geeignete handelsübliche
Mischpolymerharze sind Amberlite XAD-1, XAD-2, XAD-4, XAD-7,
XAD-8, XAD-9, XAD-11 und XAD-12 (von RÖhm & Haas Co.,
Philadelphia, Pennsylvania, USA); Dia ion HP-10, HP-20, HP-30, HP-40 und HP-50(von Mitsubishi Chemical Industries ltd.,
Tanashi, Tokyo, Japan) und Imac Syn-42, Syn-44 und Syn-46 (von Industrie de Maatshappily activate N.V., Amsterdam, Niederlande).
Zum Adsorbieren und Immobilisieren eines Stärke abbauenden
Enzyms, das man derart modifiziert hat, daß man das Enzym
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nicht dauerhaft unlöslich1 ..gemacht.Jxat-,..auf einem der genannten
Trägerstoffe bringt man eine Reaktionsmischung mit einem Gehalt an modifiziertem Enzym, vorzugsweise jedoch eine Lösung mit
einem Gehalt an modifiziertem Enzym, mit dem Trägerstoff in
Berührung, nachdem man das modifizierte Enzym dialysiert und/ oder ausgesalzen hat und einen Überschuß an nicht umgesetztem
Modifizierungsmittel entfernt hat.
Bezüglich der Arbeitsmethoden zum Inberührungbringen von modifiziertem,
Stärke abbauendem Enzym mit dem Trägerstoff kann man eine beliebige Arbeitsmethode anwenden, sofern man dabei das
modifizierte Enzym auf dem Trägerstoff ohne unnötige Inaktivierung des Enzyms adsorbiert und dadurch immobilisiert: Beispielsweise,
indem man einen Trägerstoff zu einer Lösung mit einem Gehalt an modifiziertem Enzym zugibt oder einen Trägerstoff in
eine Säule packt und danach die Lösung durch die Säule durchleitet und das modifizierte Enzym adsorbiert und immobilisiert.
Dadurch, daß der Gehalt an adsorbiertem Stärke abbauendem Enzym
im Bereich von etwa 0,001 bis 50 Gew.-^ d.s.b. liegt, und insbesondere
die Menge auf etwa 1 Gew.-% d.s.b. oder mehr leicht ansteigt, wenn man ein poröses Mischpolymerharz verwendet, kann
man ein immobilisiertes Enzym mit einer extrem hohen spezifischen
Aktivität erzielen.
Das derart erhaltene immobilisierte, Stärke abbauende Enzym
verwendet man im allgemeinen unter den nachstehenden enzymatisch wirksamen technischen Bedingungen: Man läßt die Lösung
eines amy!artigen Substrates mit einem Gehalt an Stärke oder
teilweise hydrolysierter Stärke mit einer Konzentration von etwa
5 bis 50 Gew.-% und einem D.E.-Wert unterhalb von etwa 70 mit
dem immobilisierten, Stärke abbauenden Enzym bei einem pH-Wert
von etwa 3 bis 10 und einer Temperatur von etwa 20 bis 80 0C
etwa 0,1 bis 1000 h lang in Berührung kommen. Die partiell hydro Iy sierte Stärke kann man durch Verflüssigen eines Stärkebreis
nach üblichen Methoden erhalten, z.B. durch Behandeln mit einer Säure oder einem verflüssigenden Enzym.
Obwohl das modifizierte Enzym physikalisch gebunden ist, wenn man das immobilisierte Enzym gemäß der Erfindung hergestellt hat,
ist die Adsorptionskraft sehr stark, und demgemäß beobachtet
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man keinerlei Auslaufen des adsorbierten Enzyms aus dem Träger-Stoff
sogar während einer Reaktion unter Anwendung einer hohen Konzentration der Substratlösung.
Bezüglich der Arbeitsweise im Reaktionsgefäß mit dem immobilisierten
Enzym kann man eine kontinuierliche Arbeitsweise mit einem Säulensystem oder ein chargenweises System anwenden, wobei
die Gewinnung des immobilisierten Enzyms viel einfacher ist, und beide Methoden sind erfindungsgemäß anwendbar.
Weil die thermische Stabilität und pH-Stabilität des immobilisierten,Stärke
abbauenden Enzyms, das man erfindungsgemäß hergestellt hat, durch die Immobilisierung im Vergleich zu den
Stabilitäten des natürlichen Enzyms beträchtlich erhöht sind, und seine Halbwertszeit im Bereich von mehreren zehn bis mehreren
hundert Stunden liegt, kann man das immobilisierte, Stärke abbauende
Enzym vorteilhaft zur technischen Herstellung von Reaktionsprodukten
aus stärkehaltigen Stoffen verwenden.
Ferner kann man den Trägerstoff leicht zurückgewinnen und wiederholt
verwenden. Wenn das immobilisierte Enzym mit verschiedenen
Mikroorganismen verunreinigt ist und seine Aktivität abnimmt, kann man den Trägerstoff leicht wiedergewinnen, weil
man die Verunreinigungen, wie z.B. proteinartige Substanzen, leicht aus dem Reaktorsystem durch Auswaschen des immobilisierten
Enzyms mit polaren lösungsmitteln, z.B. Aceton, Methanol oder Äthanol, oder mit einer alkalischen oder sauren Lc'sun- ir:
einer Konzentration von etwa 0,1 bis 5 η entfernen kann. Das zurückgewonnene Harz kann man natürlich wiederholt als Trägerstoff
zum Immobilisieren von Enzym verwenden.
Die Erfindung betrifft also Verfahren zur Herstellung von immobilisiertem
Enzym, insbesondere immobilisiertem, Stärke abbauendem Enzym und das Reaktionsprodukt mit dem immobilisierten
Enzym.
Insbesondere beruht die Erfindung auf der Peststellung, daß man
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ein immobilisiertes, Stärke abbauendes Enzym mit einer hohen Aktivität zum Stärkeabbau leicht erhalten kann, indem man in
Lösung ein Stärke abbauendes Enzym mit einem Modifizierungsmittel
derart modifiziert, daß das Enzym nicht dauerhaft unlöslich gemacht wird, und das modifizierte Enzym auf einem
Trägerstoff adsorbiert. Die erfindungsgemäßen Verfahren beruhen
ferner auf der Feststellung, daß man Reaktionsprodukte aus stärkehaltigen Stoffen leicht mit dem immobilisierten?Stärke abbauenden
Enzym herstellen kann.
Nachstehend wird die Erfindung durch Versuche und Beispiele
näher erläutert.
Versuch 1: Herstellung eines Stärke abbauenden Enzyms:
In 1500 1 eines sterilisierten flüssigen Mediums mit einem Gehalt an 2,5 % (Ge wicht/Volumen) löslicher Stärke, 0,5 f° (Gewicht/
Volumen) Maiswasser, 0,3 % (Gewicht/Volumen) Ammoniumnitrat,
0,1 i» (Gewicht/Volumen) K2HPO., 0,05 $>
(Gewicht/Volumen) MgSO^. 7H2O und 0,5 % (Gewicht/Volumen) CaCO* impfte man Bacillus
stearothermophilus TC-91, EERM-P Nr. 2225, kultivierte die
Mischung bei 50 0G 72 h lang unter Rühren und aeroben Bedingungen.
Die Kulturbrühe zentrifugierte man danach und erhielt eine überstehende Flüssigkeit mit einer Cyclodextringlucanotransferase-Aktivität
(Aktivität glucosidischer Transferase) von 120 Einheiten/ml (wie sie gemäß der nachstehenden Untersuchungsmethode
definiert sind). Die überstehende Flüssigkeit kühlte man auf 4 0C ab und salzte das Enzym in der überstehenden Flüssigkeit
durch Zugabe von Ammoniumsulfat bis zu einer Sättigung von 60 "Jo aus. Danach sammelte man den erhaltenen Niederschlag. Den
gesammelten Niederschlag löste man in einer geringen Menge Wasser, dialysierte gegen Wasser über Nacht und lyophilisierte
danach zu Pulver. Der so erhaltene pulverförmige Niederschlag wies eine spezifische Aktivität von etwa 230 Einheiten/mg Protein
auf ,die Gesamtaktivitätsausbeute betrug
etwa 80 "/<> bezogen auf die · überstehende. Flüssigkeit
der Kulturbrühe.
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Die Aktivität der Cyclodextringlucanotransferase (die Aktiv!t'r'ü;
der glucosidischen Transferase) wurde folgendermaßen untersucht:
Zu 2 ml einer Lösung von alpha-Cyclodextrin (1 Gew.-f») gab
man 2 ml einer Saccharoselösung (2,5 Gew.-^) und eine vorgegebene
Menge Enzymlösung bis zu einem Endvolumen von 4,5 ml. Die Mischung inkubierte man bei 40 0C für einen vorgegebenen
Zeitraum und nahm 0,5 ml der Reaktionsmischung als Probe. Danach gab man zur Reaktionsmischung 0,1 ml einer Lösung mit
einem Gehalt an technischer Glucoamylase (5 Einheiten) und inkubierte bei dieser Temperatur weitere 1 h lang und zersetzte
alle Oligosaccharide mit alpha-1,4-Bindung mit Ausnahme von
alpha-Cyclodextrin zu Glucose. Die freigesetzte Glucoee bestimmte man mit der Somogyi-Nelson-Methode.
Eine Einheit von Cyclodextringlucanotransferase-Aktivität wird als die Menge an Enzym definiert, die 1 yu Mol alpha-Cyclodextrin
pro min unter den genannten Bedingungen hydrolysiert.
Versuch 2: Modifizierung eines Stärke abbauenden Enzyms:
Ein Pulver von Cyclodextringlucanotransferase, die man gemäß
der Methode von Versuch 1 hergestellt hatte, löste man in einem 0,05 M Acetatpuffer (0,05 Mol/l) mit einem pH-Wert von
6,0 und einem Gehalt an 0,02 M Calciumchlorid (0,02 Mol/l) und
erhielt eine Stärke abbauende Enzymlösung mit einer Proteinkonzentration von 0,2 i° (Gewicht/Volumen). Zu gleichen Teilen
von je 4 ml der genannten Lösung gab man eine wässerige Glutaraldehydlösung, erhielt eine Konzentration von 1, 5, 10, 20,
50, 80, 100, 150 bzw. 200 Gew.-% Protein, unterwarf danach die erhaltenen Lösungen der Modifizierungsreaktion bei Raumtemperatur
1 h lang unter sanftem Rühren. Danach dialysierte man die Reaktionsmischungen gegen Wasser weitere 5 h lang und entfernte
überschüssigen nicht umgesetzten Glutaraldehyd, und man untersuchte
die Aktivitäten der dialysierten Lösungen und. bestimmte die Akivifcätsausbeuto (Prozent) bezogen auf
<\nr. eingesetzte natürliche Enzym. Die Ergebnisse sind in Zeile Λ
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der Tabelle gezeigt. Einen Vergleichsversuch führte man auf
gleiche Weise mit der Ausnahme durch, daß man die wässerige Glutaraldehydlösung durch Wasser ersetzte. Das Aussehen der
Lösungen mit einem Gehalt an modifiziertem Enzym ist in Zeile B
der Tabelle beschrieben.
Versuch 3: Immobilisierung eines modifizierten,Stärke abbauenden
Enzyms:
Zu jeder Lösung des dialysierten modifizierten Enzyms, die man
gemäß Versuch 2 hergestellt hatte, gab man 1 g (Naßgewicht)
Mischpolymerharz Diaion HP-20 als Trägerstoff, adsorbierte das modifizierte Enzym und stellte immobilisiertes, Stärke abbauendes
Enzym her. Man untersuchte die Aktivitäten des Nichtadsorbierten
(non-adsorbed activities) und bestimmte den Immobilisierungsgrad
($) jedes Systems. Die Ergebnisse sind in Zeile C
der Tabelle gezeigt. Die Scheinaktivität der immobilisierten
Stärke abbauenden Enzyme untersuchte man und bestimmte die Aktivitätsausbeute (%) bezogen auf das eingesetzte natürliche
Enzym. Die Ergebnisse sind in Zeile C der Tabelle gezeigt.
Wie aus den Ergebnissen der Tabelle ersichtlich ist, ist es zur Herstellung eines immobilisierten, Stärke abbauenden Enzyms
mit einer hohen Scheinaktivität notwendig, daß man ein Stärke abbauendes Enzym derart modifiziert, daß man das Enzym
nicht dauerhaft unlöslich macht, aber es auf einem Trägerstoff adsorbiert und immobilisiert. Obwohl ein natürliches immobilisiertes
Enzym ebenfalls einen Immobilisierungsgrad von 100 % erzielte, stellte man nur eine viel geringere Scheinaktivität
des erhaltenen immobilisierten Enzyms fest. Ferner verminderte die Steigerung der Modifizierungsreaktion auf ein Niveau, bei
dem man das Enzym dauerhaft unlöslich gemacht hatte, die Aktivitätsausbeute und halbierte den Immobilisierungsgrad. Demgemäß
wurde die Scheinaktivität des erhaltenen immobilisierten Enzyms extrem vermindert.
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| a1 | (S) | 0 | 0,004 | 0,02 | 0,04 0, | 100 | ■ ■ V^ p^ ^** ^B* ^tf * 4 W | 08 | 0,2 | 0,32 | 0,4 0,6 | "0,8 |
| b1 | 0 | 1 | 5 | 10 | 64 | 97 | 20 | 50 | 80 | 100 150 | 200 | |
| A | 100 | 100 | 100 | 98 | 73 | 95 | 90 | 86 | 73 41 | 19 | ||
| B | (S) | ΡΓΓτ ^* /^ f*i *yy | ||||||||||
| (S) | wolkig | J.M_LBU.6i ~ schlag |
||||||||||
| C | 100 | 1(70 | 95 | 93 | 91 | 89 76 | 53 | |||||
| D | 1,6 | 38 | 81 | 78 | 75 | 61 29 | 8,2 | |||||
worin a1 (% Gewicht/Volumen) die Glutaraldehydkonzentration
($ Ge wicht/Volumen), b1 (Gew.-%) die Menge an zugegebenem
Glutaraldehyd pro Enzymprotein (Gew.-^), A ($) die Aktivitätsausbeute {$>) des modifizierten und dialysierten Enzyms, B das
Aussehen der Lösung mit einem Gehalt an modifiziertem und
dialysiertem Enzym, C (#) den Immobilisierungsgrad des geprüften
modifizierten und dialysierten Enzyms bedeuten;
(Gesamtaktivität vor der Adsorption)-(Aktivität in der _ überstehenden !Flüssigkeit)
und D ($) die Aktivitätsausbeute des immobilisierten Enzyms bezogen
auf das eingesetzte natürliche Enzym bedeutet.
Zur Modifizierung eines Stärke abbauenden Enzyms derart , daß man das Enzym nicht dauerhaft unlöslich macht, sollte man
eine äquivalente oder viel geringere Menge an Modifizierungsmittel
je nach den Reaktionsbedingungen verwenden, wie
z.B. Proteinkonzentration, Reaktionstemperatür und Reaktionszeit.
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Beispiel 1: Immobilisierte Oyclodextringlucanotransferase:
Ein Pulver von Bacillus-Cyclodextringlucanotransferase, das man
gemäß der Methode von Versuch 1 hergestellt hatte, löste, man in 0,05 M Acetatpuffer (0,05 Mol/l) mit einem pH-Wert von 6,0
und einem Gehalt an 2 mM Calciumchlorid (2 mMol/1) und erhielt
eine Enzymlösung von 0,4- $ (Gewicht/Volumen). Zu 100 ml lösung
gab man eine wässerige Glutaraldehydlösung, erhielt eine Konzentration von 0,5 i° (Gewicht/Volumen), hielt die erhaltene
Mischung bei Raumtemperatur 2 h lang und bewirkte die Modifizierungsreaktion.
Danach gab man zur Reaktionsmischung 10 g (Naßgewicht) Mischpolymerharz Diaion HP-30, adsorbierte das
modifizierte Enzym, wusch das Produkt mit Wasser und erhielt eine immobilisierte Cyclodextringlucanotransferase.
Die Gesamtaktivitätsausbeute des so erhaltenen immobilisierten
Enzyms betrug etwa 77 % bezogen auf das eingesetzte Enzym.
Die immobilisierte Cyclodextringlucanotransferase war für verschiedene
Anwendungen brauchbar. Beispielsweise konnte man sie vorteilhaft zur Herstellung von Cyclodextrin oder verschiedenen
Zuckern, z.B. Glycosylsaccharose, Glycosyllactose, Glycosylriboflavin,
Glycosyläsculin, Glycosylrutin und Glycosylsteviosid
aus den jeweiligen Mischungen von partiellem Stärkehydrolysat und einer Verbindung der aus den Zuckerakzeptoren Saccharose,
Lactose, Riboflavin, Äsculin, Rutin und Steviosid bestehenden Gruppe herstellen. In diesen Fällen betrug die Halbwertszeit
der immobilisierten Cyclodextringlucanotransferase bei einer
Reaktionstemperatur von etwa 60 0C etwa 800 h.
Beispiel 2: Immobilisierte alpha-Amyläse:
Eine technische Aspergillus-alpha-Amylase (DEUAZYME von Nagase
& Co., Ltd., Osaka, Japan) löste man in Wasser und erhielt eine Proteinkonzentration von 0,15 % (Gewicht/Volumen). Zu 50 ml
der Lösung gab man 2 ml 1 M Acetatpuffer (1 Mol/l) mit einem pH-Wert von 6,0 mit einem Gehalt an 300 mg 1-Cyclohexyl-3-(2-
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morpholinäthyl^carbodiimidmetho-p-toluolsulfonat, hielt die
erhaltene Lösung bei Raumtemperatur 4 h lang und dialysierte
gegen Wasser weitere 5 h lang. Zur aialysierten modifizierten
Enzymlösung gab man 5 g (Naßgewicht) Mischpolymerharz Amberlite XAD-1, rührte die Mischung sanft über Nacht bei dieser Temperatur
und erhielt eine immobilisierte alpha-Amylase.
Die .Gesamtalctivitätsausbeute bezogen, auf das eingesetzte
natürliche Enzym betrug etwa 60 $>. In diesem Fall untersuchte
man die Enzymaktivität auf folgende Weise:
Zu 2 ml einer Substratlösung, bestehend aus einem 0,1 M Acetatpuffer
(0,1 Mol/l) mit einem pH-Wert von 6,0, und einer sauer teil-hydrolysierten ' wachsartigen Maisstärke bzw. Kornstärke
(waxy corn starch) in einer Konzentration von 5 Gew.-% und mit einem D.E.-Wert von 50 gab man eine vorgegebene Menge
an Enzym und erhielt ein Endvolumen von 2,5 ml. Danach inkubierte
man die Mischung bei 40 0C 10 min lang und bewirkte die
enzymatische Reaktion. Die freigesetzten Zucker untersuchte man
auf Basis von Glucose gemäß der Somogyi-Nelson-Methode.
Eine Einheit an Enzymaktivität definierte man als die Menge an
Enzym, die 1 yuMol reduzierende Zucker (auf Basis von Glucose)
pro min unter den genannten Bedingungen erzeugt.
Die so erhaltene immobilisierte alpha-Amylase war für verschiedene
Anwendungen brauchbar. Beispielsweise war das Produkt bei
der Herstellung von Maissirup, Glucose oder Maltose aus stärkehaltigem
Stoff geeignet und zeigte eine Halbwertszeit von etwa 400 h bei einer Reaktionstemperatur von etwa 60 0C.
Beispiel 3: Immobilisierte ß-Amylase:
Eine ß-Amylasezubereitung, die man auf übliche Weise aus entfetteten
Sogabohnen extrahiert una ausgesalzen hatte, löste man in einem 0,5 M Phosphatpuffer (0,5 Mol/l) mit einem pH-Wert
von 7,0 und mit einem Gehalt von 0,01 M Maltose (0,01 Mol/l)
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und erhielt eine Proteinkonzentration von 0,1 i>
(Gewicht/Volumen) Zu 50 ml Lösung gab man 20 ml einer Acetonlösung von Cyanurchlorid
(0,1 io Gewicht/Volumen), hielt die Mischung 3 h lang
bei 4 0C, wobei man ein Absinken des pH-Wertes verhütete , und
dialysierte danach gegen Wasser weitere 5 h lang. Zu der Reaktionsmischung gab man 5 g (Naßgewicht) Mischpolymerharz Dia ion
HP-10, rührte die erhaltene Mischung sanft bei 4°C über Nacht und erhielt eine immobilisierte ß-Amylase.
Die Gesamtaktivitätsausbeute äes immobilisierten Enzyms betrug
etwa 68 $> bezogen auf" das ; eingesetzte natürliche Enzym.
Die Enzymaktivität untersuchte man auf gleiche Weise wie in
Beispiel 2.
Die immobilisierte ß-Amylase war für verschiedene Anwendungen
brauchbar. Insbesondere war sie zur Herstellung von konzentriertot
Maltosesirup oder Maltose aus stärkehaltigem Stoff geeignet und
zeigte eine Halbwertszeit von etwa 200 h bei einer Reaktionstemperatur von etwa 50 0C.
Beispiel 4: Immobilisierte Glucoamylase:
Eine technische Aspergillus-Glucoamylase-XL 128 (von Nagase
& Co., Ltd., Osaka, Japan) verdünnte man mit einem 0,02 M Acetatpuffer
(0,02 Mol/l) mit einem pH-Wert von 5,0 und erhielt eine Proteinkonzentration von 0,15 % (Gewicht/Volumen). Zu
50 ml der Lösung gab man 20 ml einer Dioxanlösung von Toluol-2,4-diisocyanat
(0,3 $ Gewicht/Volumen), hielt die erhaltene
Lösung über Nacht bei 4 0C und dialysierte danach gegen Wasser
weitere 5 h lang. Danach gab man zu der Lösung mit einem Gehalt an modifiziertem Enzym 5 g (Naßgewicht) Mischpolymerharz Imac
Syn-46, rührte sanft über Nacht bei 4 0C, wusch das Produkt
mit Wasser und erhielt immobilisierte Glucoamylase.
Die Gesamtaktivitätsausbeute betrug bezogen auf das
eingesetzte natürliche Enzym etwa 70 $. Die Glucoamylaseaktivität
untersuchte man auf gleiche Weise wie in Beispiel 2 mit der Ausnahme, daß man den pH-Wert der Substratlösung auf
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4»5 einstellte.
Das Produkt war für verschiedene Anwendungen geeignet. Insbe sondere war die so erhaltene immobilisierte Glucoamylase zur
Herstellung von Glucose oder Sirup mit einem hohen Zuckergehalt geeignet und zeigte eine Halbwertszeit von etwa 300 h bei einer
Reaktionstemperatur von etwa 50 0C.
Eine technische rohe Aerobacter-Pullulanase (von Haya3hibarn
Biochemical Laboratories, Inc., Okayama, Japan) löste man in einem 0,02 M Phosphatpuffer (0,02 Mol/l) mit einem pH-Wert von
7,5 und erhielt eine wässerige Lösung mit einer Proteinkonzentration von 0,15 % (Gewicht/Volumen). Danach gab man zu 50 ml
der Lösung 25 ml einer Dioxanlösung von Hexamethylendiisocyanat (0,1 $>
Gewicht/Volumen), hielt die Mischung bei Raumtemperatur 3 h lang und dialysierte danach gegen Wasser weitere 5 h lang.
Zu der Lösung mit einem Gehalt an modifiziertem Enzym gab man
5 g (Naßgewicht) Mischpolymerharz Diaion HP-30 und rührte sanft über Nacht bei Raumtemperatur. Das Produkt wusch man mit V/a ο ο or
und erhielt immobilisierte Pullulanase.
Die Gesamtaktivitätsausbeute betrug etwa 55 $ bezogen
auf das eingesetzte natürliche Enzyms. In diesem Fall untersuchte man die Enzymaktivität auf gleiche Weise wie in
Beispiel 2.
Das Produkt war für verschiedene Anwendungen brauchbar. Bei
spielsweise war es zur Herstellung von Maltosesirup oder Maltose aus stärkehaltigem Stoff geeignet und zeigte eine Halbwertszeit
von etwa 300 h bei einer Reaktionstemperatur von etwa 50 C.
Eine technische gereinigte Pseudomonas-Isoamylase (von Hayashi-
bara Biochemical Laboratories, Inc., Okayama, Japan) löste man in einem 0,1 M Aoetatpuffer (0,1 Mol/l) mit einem pH-Wert von
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4,5 und erhielt eine Proteinkonzentration von 0,1 fo (Gewicht/
Volumen). Zu 50 ml der lösung gab man 10 ml einer wässerigen Glutaraldehydlösung (0,5 $>
Gewicht/Volumen), hielt die erhaltene
Lösung bei Raumtemperatur 2 h lang, gab danach 25 g (Naßgewicht)
poröses Glas zu, rührte sanft über Nacht bei 4 0C und erhielt immobilisierte Isoamylase.
Die Gesamtaktivitätsausbeute betrug etwa 65 % bezogen auf
das eingesetzte natürliche Enzym. Die Enzymaktivität untersuchte
man wie in Beispiel 4.
Die immobilisierte Isoamylase war für verschiedene Anwendungen
geeignet. Beispielsweise war sie zur Herstellung von Maissirup
bzw. Kornsirup, Glucose, Sirup mit einem hohen Malto3egehalt
oder Maltose geeignet und zeigte eine Halbwertszeit von etwa 200 h bei einer Reaktionstemperatür von etwa 50 0C.
Beispiel 7: Herstellung eines Sirups mit einem Gehalt an Oligoglucosylfructosid:
Man führte die Verflüssigung von 20 1 eines Breis von Tapiokastärke
(28 Gew.-%) mit einem technischen Verflüssigungsenzym
NEOSPITASE (von Nagase & Co., Ltd., Osaka, Japan) bis zu einem
D.E.-Wert von etwa 7,0 auf übliche Weise durch, erwärmte die verflüssigte Stärkelösung auf 120 0C, inaktivierte das in der
Lösung vorhandene Enzym, entfärbte bei 80 bis 90 0C und filtrierte.
Danach stellte man eine Substratlösung her, indem man Saccharose und Calciumchlorid in dem Piltrat auflöste, das
eine Konzentration von etwa 24 Gew.-^ aufwies, und erhielt eine
Saccharosekonzentration von etwa 12 Gew.-% und eine Calcium-Chloridkonzentration
von etwa 10 M (10 Mol/l).
Man führte eine kontinuierliche Reaktion mit einem Säulensystem
durch, das aus einer Kunststoffsäule bestand, die man mit 20 g
immobilisierter Cyclodextringlucanotransferase gepackt hatte,
welche man gemäß der Methode von Beispiel 1 hergestellt hatte,
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und führte dabei die Substratlösung durch die Säule mit einer Raumgeschwindigkeit von etwa 6 Betten bzw. Schichten pro Stunde
(6 beds/hour), bei einem pH-V/ert von 6,5 und 65 0C. Das
Eluat reinigte man durch Entfärben mit einer Säule, die mit
gekörnter Aktivkohle gepackt war, und Entionisieren mit einer
Ionenaustauschersäule, die man mit Ionenaustauschern der U-Form und der OH-Form gepackt hatte.
Die gereinigte Lösung engte man unter vermindertem Druck ein und erhielt einen Sirup mit einem Wassergehalt von etwa 20 Gew.-'/'
in einer Ausbeute von etwa 93 $> d.s.b.
Das Produkt war ein farbloser, durchscheinender, geruchloser und nicht kristalliner sirupartiger Süßstoff mit einer relativ
hohen Viskosität, hohen Süße und mildem Geschmack. Weil der Hauptbestandteil des Produktes Oligoglucosylfructosid war, war
er vorteilhaft als wenig karieserzeugender Süßstoff für Nahrungsmittel und Getränke und zur Verbesserung ihrer Eigenschaften
geeignet.
Beispiel 8: Herstellung eines Siruppulvers mit einem Gehalt an Oligoglucosylfructosid:
10 1 einer Reaktionsmischung, die man gemäß der Methode von Beispiel
7 hergestellt hatte, kühlte man auf 50 0C, führte sie
durch eine Kunststoffsäule, die man mit 20 g immobilisierter
alpha-Amylase gepackt hatte, welche man gemäß der Methode von
Beispiel 2 hergestellt hatte, mit einer Raumgeschwindigkeit von etwa 10 Betten/h und bewirkte eine weitere enzymatisch^ Reaktion
und setzte die Viskosität auf etwa 2/3 herab. Das Eluat reinigte man auf gleiche Weise wie in Beispiel 7»
engte unter vermindertem Druck ein, sprühtrocknete und erhielt ein Siruppulver mit einem Feuchtigkeitsgehalt von etwa 2 Gew.-^
in einer Ausbeute von etwa 90 % d.s.b.
Das Produkt war ein weißer, farbloser, nicht kristalliner und leicht wasserlöslicher pulverförmiger Süßstoff mit einer hohen
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10,
Süße. Zusätzlich zu den genannten Eigenschaften war das Produkt,
weil sein Hauptbestandteil Oligoglucosylfructosid war,
vorteilhaft als wenig karieserzeugender Süßstoff für Nahrungsmittel
und Getränke und zur Verbesserung ihrer Eigenschaften geeignet.
Beispiel 9: Herstellung eines Siruppulvers mit einem Gehalt · an Cyclodextrin:
Die Verflüssigung von 45 1 eines Breis von Maisstärke bzw.
Kornstärke (etwa 30 Gew.-^) führte man mit Säure bis zu einem
D.E.-Wert von etwa 10 auf übliche Weise durch, kühlte die verflüssigte
Stärkelösung rasch auf eine Temperatur von etwa 80 bis 90 0C ab, neutralisierte gleichzeitig auf einen pH-Wert
von 6,0, entfärbte danach mit Aktivkohle und kühlte auf 65 0G.
Eine kontinuierliche enzymatisch^ Reaktion mit einem Säulensystem,
das aus einer Säule aus rostfreiem Stahl bestand, die mit 50 g immobilisierter Cyclodextringlucanotransferase gepackt
war, die man gemäß der Methode von Beispiel 1 hergestellt hatte, führte man durch, indem man die genannte Lösung durch die Säule
mit einer Raumgeschwindigkeit von etwa 3 Betten/h leitete. .
Das Eluat reinigte man, engte unter vermindertem Druck ein, sprühtrocknete wie in Beispiel 8 und erhielt
ein Dextrinpulver mit einem Feuchtigkeitsgehalt von etwa 1 Gew.-, mit einer Ausbeute von etwa 90
<fo d.s.b.
Das Produkt war ein weißes, geruchloses und leicht wasserlösliches
Pulver. Weil das Produkt etwa 20 % Cyclodextrin d.s.b. enthielt,
war es vorteilhaft als aromahaltendes Mittel (flavourlocking agent), Stabilisierungsmittel, Füllstoff und Trägerstoff
für Nahrungsmittel, Getränke, Geschmackstoffe, Kosmetika und Medikamente geeignet.
Beispiel 10: Herstellung eines Pulvers für Sirup mit niederer Viskosität:
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Eine Substratlösung stellte man her, indem man 50 1 eines Brein
von Maisstärke bzw. Kornstärke (etwa 35 Gew.-^) mit Säure bia :-.u
einem D.E.-Wert von etwa 20 auf übliche Weise verflüssigte, rauch
auf etwa 80 bis 90 0C abkühlte, gleichzeitig auf einen pH-Wert
von 5,0 neutralisierte, mit Aktivkohle entfärbte und auf 50 0C
abkühlte.
Eine kontinuierliche enzymatische Reaktion mit einem Säulensystem,
das aus einer Säule aus rostfreiem Stahl bestand, die mit 150 g immobilisierter Isoamylase gepackt war, die man gemäß der
Methode von Beispiel 6 hergestellt hatte, führte man durch, indem man die genannte Lösung durch die Säule mit einer Paumpeschwindigkeit
von etwa 1 Bett/h durchleitete.
Die Analyse des Eluats zeigte, daß die Viskosität der Substratlösung auf etwa 1/2 durch die Reaktion abgenommen hatte,
obwohl ein leichter Anstieg des D.E.-Wertes auftrat.
Das Eluat reinigte man, engte . unter vermindertem
Druck ein, sprühtrocknete wie in Beispiel 8 und erhielt ein Dextrinpulver mit einem Feuchtigkeitsgehalt von etwa 2 Gew.-^
mit einer Ausbeute von etwa 90 $ d.s.b.
Das Produkt war ein weißes, geruchloses und leicht wasserlösliches
Siruppulver. Weil das Produkt fast geschmacklos war, aber eine niedere Viskosität aufwies, war es vorteilhaft als Stabilisierungsmittel,
Füllmittel und Bindemittel für Nahrungsmittel und Getränke geeignet.
Beispiel 11: Herstellung eines Maltosesirups:
Eine Substratlösung stellte man her, indem man 100 1 eines Breis von Kartoffelstärke (etwa 15 Gew.-5^) mit Säure bis zu einem
D.E.-Wert von etwa 4 auf übliche Weise verflüssigte, auf eine
Temperatur von etwa 80 bis 90 0C abkühlte, auf einen pH-Wert
von 6,0 gleichzeitig neutralisierte, mit Aktivkohle entfärbte und rasch auf 50 0C abkühlte.
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Eine kontinuierliche enzymatische Reaktion mit einem Säulensystem,
das aus einer Kunststoffsäule bestand, die mit 200 g
immobilis ist er ß-Amylase und 100 g immobilisierter Pullulanase
gepackt war, die man gemäß den Methoden der Beispiele 3 bzw. 5 hergestellt hatte, führte man durch, indem man die genannte
Substratlösung durch die Säule mit einer Raumgeschwindigkeit
von etwa 2 Betten/h durchleitete.
Das Eluat reinigte man und engte unter vermindertem
Druck wie in Beispiel 7 ein und erhielt einen durchscheinenden Maltosesirup mit einem Wassergehalt von etwa 25 Gew.-^ in
einer Ausbeute von etwa 95 $> d.s.b.
Weil das Produkt ein Sirup mit einem Maltosegehalt von etwa
83 fo d.s.b. und einer geringen Süße war und relativ leicht
zur Kristallisation neigte, bevorzugte man ihn als schwach süßendes Mittel. . Man kann also die zu starke Süße von
beliebigen Nahrungsmitteln und Getränken, die auf eine zu starke Verwendung von Saccharose zurückgeht, proportional mittel:
des Produkte auf eine gewünschte Süße ohne irgendeine Veränderung ihrer Eigenschaften herabsetzen.
Beispiel 12: Herstellung eines Pulvers von kristalliner Maltose:
Eine kontinuierliche enzymatische Reaktion mit einem Säulensy-3tem,
das aus einer Kunststoffsäule bestand, die man mit 200 g
immobilisierter alpha-Amylase gepackt hatte, die man gemäß der
Methode von Beispiel 2 hergestellt hatte, führte man durch, indem man 500 1 einer Substratlösung, die man gemäß der Methode
von Beispiel 11 hergestellt hatte, durch die Säule bei einer Raumgeschwindigkeit von etwa 5 Betten/h durchleitete.
Die Reaktion steigerte den Maltosegehalt der Lösung auf 86 fo
d.s.b.
Das Eluat reinigte man gleich wie in Beispiel 8,
engte auf einen Wassergehalt von etwa 30 Gew.-?& ein, setzte das
Konzentrat in eine Kristallisiervorrichtung ein, gab kristalline
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Maltose bis zu einer Endkonzentration von 2 $ zu, kühlte danach
unter Rühren von 40 bis 25 0C im Verlauf von 2 d ab und erhielt
eine Füllmasse mit einem Gehalt an kristalliner Maltose von etwa 43 $>
d.s.b.
Die Füllmasse sprühte man vom oberen Teil einer Trocknungssäule
durch eine Düse von 1,5 mm Durchmesser mit Hilfe einer Hochdruckpumpe bei einem Druck von 150 kg/cm . Heiße Luft von 85 °ü
führte man vom oberen Ende der Trocknungssäule derart zu, daß man die Charge bzw. das eingesetzte Material auf einem bewegten
Förderer . aus Drahtnetz sammelte, der am unteren Teil der
Säule angeordnet war. Von unterhalb des Förderers blies man warme Luft von 40 0C aufwärts durch den Förderer , während man
die Charge nach und nach aus der Trocknungssäule förderte. Der Förderer arbeitete mit einer Geschwindigkeit, bei der man
40 min brauchte, um das trockene kristalline Pulver vom unteren Teil der Trocknungskolonne zu einer Alterungskolonne zu fördern,
wo man das Produkt mit warmer Luft 6 h lang belüftete und die Kristallisierung und Trocknung vervollständigte, wodurch man
ein Pulver von kristalliner Maltose mit einem Feuchtigkeitsgehalt von etwa 6 Gew.-$ in einer Ausbeute von etwa 85 °/° d.s.b.
erzielte.
Weil das Produkt extrem wenig hygroskopisch war, bestand keine Gefahr
der Verdichtung oder Verfestigung. Ferner war das Produkt als schwach süßendes Mittel , als fermentierbarer Zucker
und als Trägerstoff für Nahrungsmittel, Getränke und Medikamentt
geeignet.
d.s.b. » bezogen auf trockenen Feststoff DE = Dextroseäquivalentwert
Neospitase = a-Amylase von Bacillus subtilis var. biotecus
Die Offenbarung umfaßt auch den parallelen englischen Text.
BAD ORIGINAL
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Claims (10)
1. Verfahren zur Herstellung von immobilisiertem, Stärke
abbauendem Enzym, dadurch gekennzeichnet, daß man in lösung ein Stärke abbauendes Enzym mit einem Modifizierungsmittel
derart modifiziert, daß man das Enzym nicht dauerhaft unlöslich macht, und daß man das modifizierte Enzym
auf einem Trägerstoff adsorbiert.
2. Verfahren zur Herstellung eines Reaktionsproduktθβ auo nL:irkehaltigem
. Stoff, dadurch gekennzeichnet, daß man diesen Stoff der Wirkung des immobilisierten,Stärke abbauenden Enzyms unterwirft,
das man gemäß Anspruch 1 hergestellt hat.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als Stärke abbauende Enzyme alpha-Amylase (E.C. 3.2.1.1),
ß-Amylase (E.C. 3.2.1.2), Glucoamylase (E.C. 3.2.1.3), Pullu- *
lanase (E.C. 3.2.1.41), Isoamylase (E.C. 3.2.1.68) oder Cyclodextringlucanotransferase
(E.G. 2.4.1.19) verwendet.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man die Modifizierungsreaktion mit einer
Lösung eines Stärke abbauenden Enzyms in einer Konzentration von 0,01 bis 5 # (Gew icht/Volumen )und mit einem Mod if izierunpsmittel
in einer Konzentration von 0,001 bis 5 % (Gewicht/Volumen)
in einem pH-Bereich von 3 bis 10 und einem Temperaturbereich von 0 bis 80 0C 0,1 bis 50 h lang durchführt.
5. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man als Modifizierungsmittel mono-, bi- und
polyfunktionelle Reagenzien verwendet, die mit dem Stärke
abbauenden Enzymprotein reagieren.
6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Modifizierungsmittel verwendet, d^n Λ
man aus der aus Diazoverbindungen einschließlich ρ,ρ'-Bisdiazodiphenyl
oder Bisazoverbindungen einschließlich Diazoben- *
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zidin; Säureanhydriden einschließlich von Bernsteinsäureanhydrid
und Maleinsäureanhydrid; Carbonsäuren, Isocyanatverbindungen einschließlich von Hexamethylendiisocyanat und Toluol-2,4-diisocyanat;
Isothiocyanatverbindungen; Thioamiden; Imidverbindungen einschließlich von F-Aeetoxysuccinimid und E",IT-Äthylenbismaleinimid;
Carbodiimiden einschließlich von 1-Cyclohexyl-3-(2-morpholinäthyl)-carbodiimid-metho-p-toluolsulfonat;
Imidocarbonaten; Aldehydverbindungen einschließlich von Acetaldehyd,
Propionaldehyd, Butyraldehyd, Octylaldehyd, lauraldehyd,
Laurinaldehyd, Oleylaldehyd, Benzaldehyd, p-Nitrobenzaldehyd,
Naphthaldehyd, Glyoxal, Glutaraldehyd, Succindialdehyd,
Dialdehydstärke und Dialdehydpullulan; Acetalverbindungen;
Halogenverbindungen und Halogeniden einschließlich Cyanurchlorid und Halogensulfonylverbindungen bestehenden Gruppe
ausgewählt hat.
7. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man Aktivkohle, poröses Glas, japanischen
sauren Ton, Bleicherde, Bleichton, Kaolinit, Aluminiumoxid, Kieselgel, Bentonit, Keramik, Hydroxylapatit, Calciumphosphatgel,
Stärke, Amylose, Pullulan, Dextran, Cellulose, poröäe Mischpolymerharze, und ihre Derivate als Trägerstoffe verwendet.
8. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man poröse Mischpolymerharze verwendet,
die man durch Mischpolymerisation von Styrolmonomerem und
einem oder mehreren Monomeren der nachstehenden Gruppe synthetisiert hat: Methylstyrol, ETitrostyrol, Styrylhalogenid, Acrylnitril,
Vinylacetat, Vinylchlorid, Divinylbenzol, Butadien, Isopren und Isopuren.
9. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man das Reaktionsprodukt dadurch herstellt,
daß man eine Lösung eines stärkehaltigen Substrats einer■ Konzentration von 5 bis 50 Gew.-?S, mit einem Gehalt an HtUrIte
oder partiellem Stärkehydrolysat, mit einem D.E.-Wert von weniger
als 70,der Wirkung des genannten Stärke abbauenden Enzyms
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bei einem pH-Wert im Bereich von 5 bis 10 und bei einer Temperatur
im Bereich von 20 bis 80 0C 0,1 bis 1000 h lang aussetzt.
10. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß man als Reaktionsprodukte mit dem genannten
immobilisierten, Stärke abbauenden Enzym Kornsirup, Maissirup,
Glucose, Maltose, Cyclodextrin, Glycosylsaccharose, Glycosyllactose, Glycosylriboflavin, Glycosyläsculin, Glycosylrutin
und Glycosylsteviosid herstellt.
Hayashibara-P230280
030047/0832
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Non-Patent Citations (1)
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| Chemtech, Jan. 74, S. 47-55 * |
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