DE2743704A1

DE2743704A1 - L- oder dl-phenylglycine enthaltende arzneimittel

Info

Publication number: DE2743704A1
Application number: DE19772743704
Authority: DE
Inventors: Ian Thompson Dr Barnish; Peter Edward Dr Cross; John Christopher Dr Danilewicz; Malcolm Dr Morville
Original assignee: Pfizer Inc
Current assignee: Pfizer Inc
Priority date: 1976-09-28
Filing date: 1977-09-28
Publication date: 1978-03-30
Also published as: IE46491B1; NZ185173A; FR2365340A1; PH14867A; LU78177A1; GR69785B; PT67080B; PT67080A; BE859151A; ZA775433B; DE2743704C2; IE771967L; IL52942A; AU2883977A; HK69380A; NL7710518A; AU502041B2; JPS5341432A; US4148920A; CA1082600A

Description

DR. A. VAN DERWERTH DR. FRANZ LEDERER REINER F. MEYER

DlPL-ING. (1934-1974) DIPL.-CHEM. DIPL-ING.

8000 MÜNCHEN 80 LUCILE-GRAHN-STRASSE

TELEFON: (089) 47 2947 TELEX: 524624 LEDER D TELEGR.: LEDERERPATENT

13. September 19 PLC. 257 (PC. 5838)

Pfizer Corporation,

Calle 15 1/2, Avenida Santa Isabel, Colon / Panama

L- oder DL-Phenylglycine enthaltende Arzneimittel

Me Erfindung bezieht sich auf bestimmte L- oder DL-(racemische)Phenylglycine und ihre Verwendung in Arzneimitteln zur Behandlung von Erkrankungen und Zuständen, die sich durch herabgesetzten Blutstrom, verminderte Sauerstoffzufuhr und herabgesetzten Kohlenhydrat-Stoffwechsel im kardiovaskulären System auszeichnen, wie z.B. Herz-Ischämie (insbesondere Angina pectoris und Herzmuskelinfarkt), Herzversagen, zerebrale Insuffizienz oder andere Krankheiten mit Störungen des Kohlenhydrat-Stoffwechsels, wie z.B. Fettleibigkeit und Diabetes.

Erfindungsgemäß werden Arzneimittel zur Verfugung gestellt, die die L- oder DL-(racemische) Form einer Verbindung der Formel '

Γ _Λ

/CH-COR¹

(D

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enthalten, worin R H oder CH₅ und R¹ NH₂, OH ist oder eine Carbonsäureestergruppierung vervollständigt, oder deren pharmazeutisch annehmbares Salz, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger, wobei das Mittel in Einheitsdosierung (wie nachfolgend definiert) vorliegt.

Vervollständigt R eine Carboxylestergruppe, ist diese

2 2 vorzugsweise eine Gruppe der Formel -OR , wobei R eine Cj-C^Alkylgruppe, eine gegebenenfalls durch C.-C,-Alkyl, C₁-C.-Alkoxy oder Halogen substituierte Phenylgruppe oder eine arylsubstituierte C.-C.-Alkylgruppe ist, wobei die Arylgruppe eine gegebenenfalls durch C₁-C.-Alkyl, C₁-C,-Alkoxy oder Halogen substituierte Phenylgruppe ist. In dieser Beschreibung steht der Ausdruck*"Halogen" für Chlor, Brom oder Jod.

Pharmazeutisch annehmbare Salze von Verbindungen der Formel (I) können Additionssalze mit Säuren sein, die pharmazeutisch annehmbare Ionen enthalten, z.B. das Hydrochlorid, das Hydrobromid, Sulfat oder Bisulfat, Phosphat oder saure Phosphat, Acetat, Maleat, Fumarat, Lactat, Tartrat, Citrat, GIuconat, Succinat, p-Toluolsulfonat und Carbonat. Pharmazeutisch annehmbare Salze von Verbindungen der Formel (I), worin R OH ist, können auch Salze mit pharmazeutisch annehmbaren Kationen sein, z.B. die Natrium-, Kalium-, Calcium- und Ammoniumsalze, und Salze mit Aminen oder Aminosäuren, z.B. die Salze mit Arginin, Meglumin, Äthanolamin oder Cholin.

Das bevorzugte Phenylglycin der Formel (I) ist L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin. D(-)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin ist praktisch unwirksam, und die L(+)-Form der Verbindung ist daher beträchtlich wirksamer als die DL-(racemisehe) Form in der gleichen Dosierung.

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Die Erfindung dient der Behandlung eines Tieres, den Menschen eingeschlossen, mit einer Krankheit oder einem Zustand, die bzw. der vermindertem Blutfluß, verminderter Sauerstoff-Verfügbarkeit oder herabgesetztem Kohlenhydrat-Stoffwechsel im kardiovaskulären System zuzuschreiben ist, oder mit einer anderen Krankheit oder einem Zustand, woran eine Störung des Kohlenhydrat-Stoffwechsels beteiligt ist, bei der dem Tier eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I) oder deren pharmazeutisch annehmbares Salz oder ein Arzneimittel, das eine solche Verbindung oder deren Salz zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger enthält, verabreicht wird. Das Arzneimittel liegt bevorzugt in Form einer Einheitsdosierung vor.

Der hier verwendete Ausdruck "Einheitsdosierung" steht für eine körperliche Einheit mit einer individuellen Menge der aktiven Komponente in Verbindung mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger, wobei die Menge an aktiver Komponente so ist, daß wenigstens eine Einheit oder ein abtrennbarer Anteil einer Einheit für eine einzelne therapeutische Verabreichung erforderlich ist. Im Falle abtrennbarer Einheiten, wie z.B. Spalttabletten, kann wenigstens ein abtrennbarer Anteil, wie die Halte oder ein Viertel der Einheit alles sein, was für eine einzelne therapeutische Verabreichung erforderlich ist. Natürlich umfaßt der Ausdruck "Einheitsdosierung" nicht reine Lösungen, es sei denn, wenn die Lösungen in einnehmbaren Behältern verpackt sind, z.B. in weichen Kapseln, oder so hergestellt wurden, daß sie sich für parenterale Verabreichung, z.B. in für parenterale Injektion geeignetenFläschchen für die Lösung, eignen.

Die Verbindungen der Formel (i) sind bekannte Verbindungen. Verfahren zur Herstellung der DL-Verbindungen und ihre nach-

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folgende Aufspaltung in die D- und L-Form sind gut bekannt (vgl. z.B. GB-PS 1 423 822). Bisher jedoch wurde für die L-Porm der Verbindungen weder eine medizinische noch anderweitige Verwendung oder für die DL- oder racemische Form irgendeine medizinische Verwendung vorgeschlagen.

Die Verbindungen der Formel (i) können Patienten im Gemisch mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger, der unter Berückeicht igung des beabsichtigten Anwendungsweges und pharmazeutischer Standardpraxis ausgewählt ist, oder darin gelöst verabreicht werden.

Beispielsweise können sie oral in Form von Tabletten oder Kapseln mit einer Binheitsdosierung der Verbindung der Formel (I) zusammen mit solchen Exzipientien v/ie Maisstärke, Calciumcarbonat, Dicalciumphosphat, Alginsäure, Lactose, Magnesiumstearat, "Primojel" oder Talcum verabreicht werden. Die Tabletten v/erden typischerweise durch gemeinsames Granulieren der Besta^ !teile und Komprimieren der anfallenden Mischung zu Tabletten der gewünschten Größe hergestellt. Die Kapseln werden typischerweise durch gemeinsames Granulieren der Bestandteile und Einfüllen in harte Gelatinekapseln der geeigneten Größe eingefüllt, die diese Bestandteile aufnehmen.

Die Verbindungen können auch parenteral verabreicht werden, z.B. durch intramuskuläre, intravenöse oder subkutane Injektion. Für parenterale Verabreichung v/erden sie am besten in Form einer sterilen wässrigen Lösung verwendet, die andere gelöste Stoffe enthalten kann, z.B. genügend Salze (Natriumacetat, Natriumlactat, Natriumsuccinat oder Natriumchlorid) oder Dextrose (z.B. 5 % wasserfreie Dextrose-Injektion BP), um die Lösung isotonisch zu machen. Auch kann ein pharmazeutisch annehmbares organisches Lösungsmittel, wie Polyäthylenglykol oder Äthanol, einen Teil des V/assers

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ersetzen. Ferner kann ein Antioxidans,wie Natriummetabisulfit, vorhanden sein, typischerweise in einer Menge von bis zu 0,1 Gewichtsprozent.

Solche parenteralen Zusammenstellungen können nach herkömmlichen Methoden hergestellt werden. Beispielsweise kann bei einer typischen Arbeitsweise, bei der eine succinathaltige intravenöse Rezeptur hergestellt wird, eine 0,2-molare Lösung von Bernsteinsäure mit einer 0,2-molaren Lösung vor Natriumhydroxid gemischt werden, um eine Lösung vom pH5 zu ergeben. Die Verbindung der Formel (i) v/ird dann typischerweise in der Succinatlösung in einer Menge von 1-2 Gew./ Vol.-5-j gelöst. Die anfallende Lösung wird dann nach der Methode B.P. 1973 durch Filtrieren durch ein bakteriendichtes Filter unter aseptischen Bedingungen "in sterile Behälter sterilisiert, um so dem Sterilitätstest des Anhangs 121, 3.?. 1973, zu genügen.

Andererseits können stabile parenterale Zusammenstellungen auf der Grundlage isotonischer Salzlösung hergestellt v/erden, indem nacheinander ein Antioxidans, z.B. Natriumbisulfit, und Natriumchlorid in mit Stickstoff gespültem Wasser zu einer etwa 0,1 m Natriumchloridlösung gelöst, die Verbindung der Formel (I) in Lösung in einer Menge von 1-2 Gew./Vol.-% gelöst und der pH mit 0,1 η Salzsäure auf etwa 4 eingestellt v/ird. Die Lösung wird dann sterilisiert und, wie bereits beschrieben, in Behälter eingefüllt.

Geeignete Behälter sind beispielsweise sterile Glasfläschchen geeigneter Größe für die Aufnahme des gewünschten Volumens an Lösung, das typischerweise eine oder mehrere Einheitsdosen der Verbindung der Formel (i) umfaßt. Die Verbindungen der Formel (i) können auch durch Infusion einer parenteralen Zusammenstellung, wie oben beschrieben, in eine Vene verabreicht werden.

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Für orale oder parenterale Verabreichung bei menschlichen Patienten liegt die Dosierungsmenge der L-Form einer Verbindung der Formel (I) bei 0,5 bis 10, eher noch bei 2 bis 5 mg/kg für einen typischen Erwachsenen (50 - 70 kg), bis zu fünfmal täglich. So enthalten Tabletten oder Kapseln im allgemeinen 25 bis 500 mg der aktiven Verbindung, von denen eine oder mehrere bis zu fünfmal täglich oral genommen werden. Dosierungseinheiten für parenterale Verabreichung enthalten 25 bis 700 mg der aktiven Verbindung in 5 - 20 ml Lösung. Ein typisches Fläschchen ist daher ein 50 ml-Fläschchen mit 5 bis 35 mg der aktiven Verbindung pro ml in 30 bis 50 ml Lösung. Die zu erwartende Dosismenge der DL-(racemischen) Form der Verbindungen liegt natürlich höher als die der L-Form.

Selbstverständlich wird auf jeden Fall der Arzt die tatsächliche Dosis bestimmen, die für den einzelnen am besten geeignet ist, und sie schwankt mit dem Alter, dem Gewicht und der Reaktion des Patienten. Die oben genannten Dosen sind beispielhaft für den Durchschnittspatienten.

Natürlich gibt es Einzelfälle, bei denen höhere oder niedere Dosisbereiche angebracht sind.

Die hohe Brauchbarkeit der Verbindungen der Formel (i) zur Behandlung von Krankheiten oder Zuständen, die sich durch herabgesetzten Blutfluß, Sauerstoffverfügbarkeit oder Kohlenhydrat-Stoffwechsel im kardiovaskulären System auszeichnen, oder von anderen Krankheiten oder Zuständen, bei denen eine Störung des Kohlenhydrat-Stoffwechseis vorliegt, ergibt sich aus ihrer Fähigkeit,

(1) die Oxydation von Glucose und/oder Pyruvat durch isolierte Rattenmuskelpräparate in vitro zu steigern,

(2) den Anteil der aktiven Form des Enzyms Pyruvatdehydrogenase (PDH) in Organen von Tieren in vivo zu steigern,

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= ^X5 27A3704

(5) den Sauerstoffbedarf zu senken und den relativen Verbrauch von Kohlenhydrat- und Lipid-Stoffwechselprodukten durch das Herz eines anästhesierten Hundes mit einem Herzschrittmacher in Gegenwart oder Abwesenheit eines Isoprenalin-Stimulu3 zu beeinflussen und

(4) die Blutglucosegehalte bei durch chemische Schädigung des Pankreas diabetisch gemachten Tieren zu senken.

Aktivität bei Tests zu (1) zeigt die hohe Brauchbarkeit der Verbindungen bei der Behandlung von Herz-Ischämie, Herzversagen, cerebraler Insuffizienz, Altersdiabetes oder Fettleibigkeit an.

Aktivität bei Tests zu (2) zeigt ferner die hohe Brauchbarkeit bei der Behandlung dieser Krankheiten oder Zustände an, und insbesondere zeigt die Aktivität in einem Tierherzen in vivo die Brauchbarkeit bei der Behandlung von Herz-Ischämie und Herzversagen an . Aktivität bei Tests zu (3) zeigt ferner die hohe Brauchbarkeit bei der Behandlung von Herz-Ischämie und Herzversagen an. Aktivität bei Tests zu (4) zeigt ferner die hohe Brauchbarkeit bei der Behandlung von Diabetes an.

Die Herstellung von Einheitsdosierungen gemäß der Erfindung wird durch die folgenden Beispiele veranschaulicht:

Beispiel 1

12,0 g Eisessig und 16,4 g wasserfreies Natriumacetat wurden jeweils in 1000 ml frisch destilliertem V/asser zu 0,2 m Lösungen gelöst. 148,0 ml der Essigsäurelösung wurden dann mit 352,0 ml'Natriumacetatlösung gemischt und das Gemisch mit frisch destilliertem V/asser auf 1000 ml aufgefüllt.

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10,0 g (0,056 Mol) L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin wurden dann zugesetzt, und die anfallende 1 gew./vol.-Soige Lösung von L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin hatte einen pH von 5. Sie wurde dann nach der Methode BP 1973 durch Filtrieren durch ein geeignetes bakteriendichtes Filter unter aseptischen Bedingungen in sterile Behälter sterilisiert, so daß dem Sterilitätstest des Anhangs 121, BP 1973, genüge getan war. Geeignete Behälter sind sterile 50 ml-Glasfläschchen, die nach Pullen mit 30 ml der fertigen Lösung 300 mg des aktiven Bestandteils enthalten.

Beispiel 2

23»62 g Bernsteinsäure und 8 g Natriumhydroxid wurden jeweils in 1000 ml frisch destilliertem V/asser zu 0,2 m Lösungen gelöst. 250 ml der Bernsteinsäurelösung wurden dann mit 267,0 ml der Natriumhydroxidlösung gemischt und die Mischung mit frisch destilliertem Wasser auf 1000ml gebracht. 10,0 g (0,056 Mol) L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin wurden dann zugesetzt, und die anfallende 1 gew./vol.-iiige Lösung von L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin hatte einen pH von 5. Sie wurde dann wie in Beispiel 1 sterilisiert. Sterile 50 ml-Glasfläschchen enthalten nach Füllen mit 40 ml der fertigen Lösung 400 mg des aktiven Bestandteils.

Beispiel 3

21,0 g Zitronensäure^-Monohydrat wurden in 200 ml einer 0,1 m Lösung von Natriumhydroxid in frisch destilliertem Wasser gelöst, und die anfallende Lösung wurde mit frisch destilliertem und gekühltem Wasser auf 1000 ml aufgefüllt. 963,0 ml dieser Lösung wurden dann mit einer 0,1 m Lösung von Salzsäure in Wasser auf 1000 ml aufgefüllt. Dann wurden 10,0 g (0,056 Mol) L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin zu einer 1 gew./vol.-Joigen Lösung mit einem End-pH von 5 bei

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23 C zugegeben, die darauf v/ie in Beispiel 1 sterilisiert wurde. Sterile 50 ml-Glasfläschchen enthalten nach Füllen mit 50 ml der fertigen Lösung 500 mg des aktiven Bestandteils.

Beispiel 4

750 ml frisch destilliertes Wasser wurden mit Stickstoff gespült, und dann wurden 6,0 g Natriumchlorid, 300 mg NatriummetaMsulfit (B.?.) und 15 g L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)-glycin nacheinander zugesetzt und zum Lösen gerührt. Der pH-Wert wurde dann mit 0,1 η Salzsäure auf etwa 4,0 eingestellt, die Lösung mit frisch destilliertem V/asser auf 1 1 aufgefüllt und mit 0,1 η HCl erneut auf pH 4,0 ± 0,35 eingestellt, um eine stabile, 1,5 gew./vol.-?4ige isotonische Salzlösung der aktiven Verbindung zu ergeben. Diese wurde v/ie in Beispiel 1 sterilisiert und in sterile 50 inl-Glasfläschchen gefüllt, die nach dem Füllen mit 50 ml der Lösung jeweils 750 mg des aktiven Bestandteils enthielten. Über der Lösung wurde ständig ein Stickstoffpolster aufrechterhalten, und die Fläschchen wurden vor und nach dem Füllen mit Stickstoff gespült.

Beispiel 5

Jedes der obigen Beispiele 1 bis 4 wird unter Verwendung der zweifachen Menge an DL-(racemischem) 2-(4-Hydroxyphenyl)glycin des L( + )-Isomeren v/iederholt, um Lösungen zu ergeben, die die doppelte Konzentration an aktivem Bestandteil enthielten.

Beispiel 6

Nachfolgend sind typische Rezepturen für Tabletten oder Kapseln angegeben, die L-(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin als

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aktiven Bestandteil enthalten:

mg/Tablette oder Kapsel

Aktiver Bestandteil Lactose Maisstärke

Mikrokristalline Cellulose ("Avicel")

Glycin Feines SiO₂ ("Aerosil")

Magnesiumstearat⁺

A	5	B	C	D	E
500	595 -	100	100	25	25
30	170	-	220	-
60	80	-	105	-
-	-	170	-	220
-	-	80	-	105
-	0,35	0,35	0,35	0,35
3	3	3	3
• · ψ ·	353,35	• # ·

⁺9:1-Gemisch mit Natriumlaurylsulfat

Für die Rezepturen A, B und D werden die Bestandteile gründlich zusammengemischt und dann entweder direkt in harte Gelatinekapseln geeigneter Größe gefüllt oder granuliert und zu Tabletten der gewünschten Größe komprimiert. Für die Rezepturen C und E v/erden die Bestandteile gründlich zusammengemischt und gepreßt.

Die Stücke werden zu körnigem Material gebrochen und dann entweder in Kapseln geeigneter Größe gefüllt oder direkt zu Tabletten der gewünschten Größe komprimiert.

Bei den Rezepturen A, B und D kann die Lactose durch gleiche Mengen Calciumcarbonat oder Dicalciumphosphat ersetzt werden.

Beispiel 7

Beispiel 6 wird unter Verwendung der gleichen Menge an DL-(racemisehern) 2-(4-Hydroxyphenyl)glycin wie der des L( + )-

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Isomeren wiederholt. Natürlich müssen für eine einzelne
therapeutische Verabreichung doppelt so viel Kapseln oder Tabletten dieses Beispiels eingenommen werden wie von den Tabletten oder Kapseln des Beispiels 6.

Beispiel 8

Die Beispiele 1 bis 4 und 6 werden unter Verwendung äquimolar.er Mengen der folgenden Verbindungen anstelle von
L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin wiederholt:

L(+)-2-(4-Methoxyphenyl)glycin

lie thyl-L (+ ) -2- (4-hydroxyphenyl) gly cinat

Isopropyl-L(+)-2-(4-hydroxyphenyl)glycinat

2-Iie thylbutyl-L( +) -2- («4-hydroxyphenyl )glycinat

L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycinamid

Beispiel 9

Die Beispiele 5 und 7 werden unter Verwendung äquimolarer !!engen an DL-(racemischen) Verbindungen des Beispiels 8 ansteile von DL-Cracen'ischem) 2-(4-Hydroxyphenyl)glycin wiederholt.

Es kann von Vorteil sein, erfindungsgemäße Tabletten mit
einem enterischen Überzug zu beschichten, d.h. einem Überzug aus einem Material wie Celluloseacetat-Phthalat oder
Hydroxypropylmethylcellulosephthalat, der sich nicht im
Magen, sondern im Darm auflöst, und in der Tablettenzusammensetzung ein den Zerfall förderndes Material, z.B. Natriumbicarbonate und eine eßbare Säure, wie Weinsäure, einzuarbeiten, um Desaktivierung des aktiven Bestandteils im Magen und/oder Darmtrakt zu vermeiden und die Konzentration des aktiven Bestandteils im Blut zu steigern.

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Es kann auch wünschenswert sein, Tabletten mit einem Zuckerüberzug zu beschichten, um den Geschmack zu verbessern.

Verbindungen der Formel (I) wurden nach den folgenden Tests auf ihr Vermögen hin untersucht, die Oxydation von Glucose und/oder Pyruvat zu steigern:

(1) (a) Diaphragma-Gewebe wird von Ratten erhalten, die mit * - einer fettreichen Diät gefüttert wurden, die der von Zaragoza und Pelber (Horm. We tab. Res. 1970,;?, 323) beschriebenen "Diät B" glich. Die Pyruvat-Oxydation durch ein solches Gewebe wird durch Messung der Geschwindigkeit des Einbaus von C aus mit C markiertem Pyruvat in Kohlendioxid in vitro ermittelt, wie von Bringolf beschrieben (Eur. J. Biochem, 1972, 26, 360). Die Pyruvat-Oxydationsgeschwindigkeit v/ird um 50 - 75 /3 herabgesetzt, verglichen mit der durch Diaphragma-Gewebe von mit Normaldiät gefütterten Ratten. V/ird dem Medium L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)-glycin zugesetzt, zeigt es sich, daß dieses die Pyruvat-Oxydation durch Diaphragma-Gewebe von fettgefütterten Ratten in dosisabhängiger Weise stimuliert. Die Schutzkonzentration für eine solche Stimulation ist etv/a 0,25 mmolar, und eine maximale Stimulation von 170 % v/ird bei Konzentrationen von 4 mmolar und darüber erzielt. I>(-)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin hat keinen wesentlichen Einfluß auf die Pyruvat-Oxydation durch Diaphragma-Gewebe von fettgefütterten Ratten bei Konzentrationen bis zu 4 mT-lol, während die DL-(racemisehe) Verbindung etwa die Hälfte der Wirkung des L(+)-Isomeren besitzt.

Das Ausmaß der Stimulation durch andere Verbindungen der Formel (i) bei einer Konzentration von 0,5 mliol ist in der folgenden Tabelle wiedergegeben:

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Verbindung

Stimulierung

L(+)-2-(4-Me thoxypheny1)glycin

Me thyl-L( +) -2- (4-hydroxyphenyl) glycinat

Isopropyl-L(+)-2-(4-hydroxyphenyl)glycinat

3-Methvlbutyl-L(+)-2-(4-hydroxy phenyl") glycinat j

L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycinamid I

79 39

34 32 51

(1) (b) Die Geschwindigkeit der Glucose-Oxydation durch isolierte Herzen von ausgehungerten oder verhungerten Ratten v/ird in einem mit Sauerstoff versorgten Perfusionskreislaufsystem gemessen, indem die Geschwindigkeit des Einbaus von C aus mit

C markierter Glucose in Kohlendioxid unter Anwendung der Methode ähnlich der von Morgan et al. (J. Bioi. Chem. 1961.236, 253) und von Handle et al. (Biochera. J. 1964,93., 652) beschriebenen gemessen v/ird. Das Perfusat enthält Glucose, Palmitat, Insulin und Rinder-Serumalbumin. Die Normalgeschwindigkeit der Glucose-Oxydation ergibt sich zu 1,27 -0,32 μΐΐοΐ/h (Durchschnitt von 9 Beobachtungen). Wird in das Perfusat L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin in einer Konzentration von 2 mmolar eingebracht, v/ird die Oxydationsgeschwindigkeit auf 4,77 ί 1,53 μΜοΙ/h (Durchschnitt von 9 Beobachtungen) erhöht. D(-)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin hat keinen wesentlichen Einfluß auf die Oxydationsgeschwindigkeit, wenn es in der gleichen Konzentration in das Perfusat gebracht wird.

Die Fähigkeit der Verbindungen der Formel (I) zur Erhöhung des Anteils der aktiven Form des Pyruvatdehydrogenase-Enzyms wurde im folgenden Test gemessen:

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(2) Hit fettreicher Diät v/ie in Tests (1) (a) gefütterte Ratten v/erden entweder mit Placebo oder mit der Verbindung der Formel (I) durch subkutane oder intravenöse Injektion oder durch orale Verabreichung behandelt, und zu verschiedenen Zeiten nach der Behandlung werden die Rattenherzen entfernt und homogenisiert, unter Bedingungen, die Änderungen im Anteil des Pyruvatdehydrogenase-Enzyms in aktiver Form auf einem Minimum hält, wie von Whitehouse und Rändle (Biοehem. J. 1973, 134,651) beschrieben. Die Gesamtmenge des vorhandenen Enzyms (PDHt) und die Menge, die in aktiver Form vorliegt (FDHa) v/erden ähnlich der Methode ermittelt, die von Taylor et al. (J. Biol. Chem. 1973, 248, 73\ beschrieben wurde. Es zeigt sich, daß der Vorgang des fettreichen Fütterns das Verhältnis von PDKa/PPHt von einem Normalwert von etwa 0,7 auf einen Wert im Bereich von 0,05 bis 0,2 senkt. Die Behandlung von fett gefütterten Ratten mit L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin, parenteral oder oral, erhöht dieses Verhältnis in dosisabhängiger V/eise, wobei die Schutzdosen für diesen Einfluß 0,05 rallol/kg durch intravenöse Injektion und im Bereich von 0,1 bis 0,2 ruMol/kg durch subkutane Injektion oder durch orale Verabreichung liegen. Durch Dosen von 0,6 mMol/kg und darüber wird das Verhältnis auf einen Wert im Bereich von 0,8 bis 1,0 erhöht (d.h. über dem für Ratten bei normaler Diät).

D(-)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin hat sehr geringen Einfluß bei Dosen bis zu 1,2 mMol/kg, während die DL-(racemische) Verbindung, wenngleich sie gewisse Aktivität zeigt, nur den halben oder weniger als den halben Einfluß des L(+)-Isomeren bei gleichen Dosismengen hat.

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Die durch andere Verbindungen der Formel (I) bei einer Dosismenge von 0,6 mnol/kg bev/irkte Erhöhung des I^JDHa/.PDHt-Verhältnisses ist in der folgenden Tabelle wiedergegeben:

Verbindung	Art der Ver abreichung	enyl) 3 P<	(D	?DHa/PDHt- Verhältnis	Verbin dung
Iiethyl-L( + )-2-(4-hy phenyl)glycinat				Placebo	0,69 0,42
droxy- s ρ	C. ,0.		0,13 0,13	0,51
5-hiethylbutyl-L( + )-2- s (4-hydroxypheny1)glycinat	.C.		0,05	0,93 0,91
L (+)-2-(4-Hyuroxyph glycinainid	.0.		0,16 0,16

(D

s.c. = subkutan, p.o. = oral

Die Fähigkeit der Verbindungen der Formel (I) zur Senkung
des Sauerstoffbedarfs und zur Beeinflussung der relativen
Verwertung von Kohlenhydrat- und Lipid-Stoffwechselprodukten im Kerzen ist durch i-essen des Einflusses der Verbindungen
auf den Blutfluß im Herzmuskel und den Stoffwechsel in mich-

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ternen, anästhesierten Beagle-Hunden mit geschlossener Brust durch Einführen eines Katheters ermittelt, um gleichzeitige Probennahme von Koronarsinus- und arteriellem Blut zu ermöglichen. Die Durchblutung des Koronarsinus wird durch die von Aukland et al. (Circulation Res. 1964, 1_4, 164) beschriebene Y/asserstoffgastechnik gemessen. Das Herz wird elektrisch auf 155 Schläge pro Minute gebracht, und die hämodynamischen Parameter (Blutdruck, linker Ventrikulardruck und dessen erste Ableitung) werden kontinuierlich aufgezeichnet. Eontrollmessungen der Koronardurchblutung erfolgen, und in 40 min-Abständen werden Blutproben genommen, sov/ohl bei einem unbehandelten Tier als auch bei dem gleichen Tier mit einer Infusion an Isoprenalin (60 ng/kg/min), was sov/ohl die Herzkontraktion stimuliert als auch die Gehalte freier Fettsäure im Plasma erhöht. Die Verbindung der Formel (I) wird dann intravenös verabreicht, und wieder erfolgen Messungen und werden Proben 40 und 90 min später genommen. Die Blutproben von Arterien- und Koronarsinus v/erden auf Oxyhämoglobin-, Pyruvat- und freien Fettsäure (FFS)-Gehalt analysiert, dabei bilden die Unterschiede zwischen denen des arteriellen und des Koronarsinus-Blutes, multipliziert mit der Koronadurchblutung, ein naß für den Sauerstoffverbrauch, die Pyruvat-Aufnahme und FFS-Aufnahme durch den Herzmuskel.

Es zeigt sich, daß L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin bei Dosen von 0,02 bis 0,1 mrlol/kg die Herzmuskel-Pyruvat-Aufnahme um wenigstens das 2-fache erhöht, sowohl in Gegenwart als auch in Abwesenheit von Isoprenalin, und zwar für eine Zeit von wenigstens 90 min nach der Verabreichung, im Einklang mit der nachgewiesenen Wirkung als PDH-Stimulator. Gleichzeitig wird die Herzmuskeldurchblutung um bis zu 150 % gesteigert, und der Herzmuskel-Sauerstoffverbrauch fällt um etwa 20 % in Gegenwart von Isoprenalin. Die Herzmuskel-PFS-Aufnähme wird in unterschiedlichem Ausmaß beeinflußt, im allgemeinen aber

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herabgesetzt. Eine Beeinflussung irgendeines der gemessenen hämodynamisehen Parameter tritt nicht ein.

Die Fähigkeit der Verbindungen der Formel (i) zur Herabsetzung der Blutglucosegehalte wurde durch Messen ihres Einflusses auf Blutglucosegehalte bei Ratten ermittelt, in denen !Diabetes durch Behandlung mit Streptozotocin (85 mg/kg) induziert worden war. Vier Tage nach einer solchen Behandlung v/\rd einer Reihe von Ratten 1 mliol/kg der Verbindung durch intraperitoneale Injektion und einer gleichen Anzahl Placebo verabreicht. Die Dosen werden 24 und 48 Stunden später wiederholt. Aue einer Schwanzvene werden unmittelbar vor jeder Dosierung (die 2 h nach dem Entfernen des Tieres vom Futter erfolgt) und 1, 2 und 3 h nach der dritten Dosis Blutproben entnommen. Nach 2 Tagen Behandlung mit L(+)-2~(4-Hydroxyphenyl)glycin (d.h. unmittelbar vor der dritten Dosis mit 1 mHol/kg), findet man, daß die Blutglucosegehalte von 373 ± 8 mg/100 ml auf 356 ± 4 mg/100 ml gefallen sind, verglichen mit einem leichten Anstieg von 373 + 8 mg/100 ml auf 383 ± 10 mg/100 ml für mit Placebo behandelte Tiere. Zwei Stunden nach der dritten Dosis waren die Blutgehalte noch weiter auf einen Kinimalwert von 315 ± 7 mg/100 ml gefallen, verglichen mit einem Wert von 335 ± 7 mg/100 ml für mit Placebo behandelte Tiere (alle Angaben sind Durchschnittswerte von 8 Tieren).

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Claims

Patentanst>rüche

1. Arzneimittel in Einheitsdosierung, enthaltend die L- oder DL-Cracemische) Form einer Verbindung der Formel

NH₂
GH-COR¹

(D,

worin R II oder CH-r und R K¹II₂, OH ist oder zu einer Carbonsäureestergruppe vervollständigt, oder deren pharmazeutisch annehmbares Salz, zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger.

2. Arzneimittel nach Anspruch 1, enthaltend L(+)-2-(4-Hydroxyphenyl)glycin.

3. Arzneimittel nach Anspruch 1, enthaltend DL-Cracemisches) 2-(4-Hydroxyphenyl)glycin.

4. Arzneimittel nach Anspruch 1, enthaltend L(+)-2-(4-Methoxyphenyl)glycin.

5. Arzneimittel nach Anspruch 1, enthaltend L(+)-2-(4-Hydroxypheny1)glycinamid.

6. Arzneimittel nach Anspruch 1, enthaltend eine Verbindung der Formel

CH-COOR²

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ORlGiNAL INSPECTED

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worin R H oder CH, und P. eine C.._ ,--Alkylgruppe eine gegebenenfalls durch C..-C«-Alkyl, C₁ -C.-Alkoxy oder
Halogen substituierte Phenylgruppe oder eine arylsubstituierte C.-C.-Alkylgruppe ist, wobei die Arylgruppe eine gegebenenfalls durch C₁-C₄-AIlCyI, C₁-C₄-AIkOXy
oder Halogen substituierte Phenylgruppe ist.

7. Arzneimittel nach Anspruch 6, enthaltend iiethyl-L(+)-2-(-4-hydroxymethyl)glycinat, Isopropyl-L( + )-2-(4-hydroxyraethyl)glycinat oder 3-Methylbutyl-L(+)-2-(4-hydroxymethy1)glycinat.

8. Arzneimittel nach einem der Ansprüche 1 bis 7 in Form einer Tablette oder Kapsel mit 25 bis 500 mg der Verbindung .

3. Arzneimittel nach einem der Ansprüche 1 bis 7 in Form einer Lösung für parenterale Verabreichung mit 5 bis
35 mg der Verbindung pro ml Lösung.

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