DE2660445C2 - Vorrichtung zur quantitativen Analyse der Antigenkonzentration einer Probenlösung unter Verwendung eines Immunoadsorbens - Google Patents

Description

Die Radioimmunoanalyse, wie z. B. in der DE-OS 12 833 beschrieben, stellt eine Analysentechnik dar, die auf der Affinität eines Antigens an Antikörper-Molekülen beruht. Danach werden Standardkurven aus Werten abgeleitet, die aus einer Anzahl Proben gewonnen werden, die jeweils

a) die gleiche Konzentration an markiertem Antigen und

b) unterschiedliche bekannte Konzentrationen an unmarkiertem Antigen aufweisen.

Die Antigene werden mit einem radioaktiven Isotop als Indikator (Tracer) markiert. Die Probe wird in einer Kontaktkammer mit einer örtlich festgelegten Masse von für die Antigene spezifischen Antikörpern (Immunoadsorbens) in Kontakt gebracht, um eine Bindung eines Teils der markierten und unmarkierten Antigene an den Antikörpern zu bewirken. Das freie Antigen wird von der örtlich festgelegten Masse von Antikörpern und dem daran gebundenen Antigen getrennt, und dann wird mittels eines geeigneten Detektors, etwa eines Gamma- oder Betastrahlendetektors, der Prozentgehalt von gebundenem oder freiem markiertem Antigen oder von beidem bestimmt. Dieser Vorgang wird für eine Anzahl Proben mit verschiedenen bekannten Konzentrationen an unmarkierten Antigenen wiederholt, und die Ergehnisse werden aufgezeichnet. Normalerweise nimmt die relative Menge des an den Antikörper gebundenen Tracer-Antigens mit zunehmender Konzentration des Gesamtantigens ab. Nachdem die Standardkurven aufgestellt sind, werden sie zur Bestimmung der Konzentration von Antigen in den zu analysierenden Proben verwendet.

Bei der eigentlichen Analyse wird die Probe, in der die Antigenkonzentration bestimmt werden soll, mit einer bekannten Menge Tracer-Antigen vermischt. Das Tracer-Antigen ist das gleiche Antigen, dessen Vorkommen in der Probe bekannt ist, das aber durch ein geeignetes radioaktives Isotop markiert worden ist Die Probe mit dem Tracer wird dann in Kontakt mit dem Antikörper bebrütet Danach kann nach Trennung des freien vom gebundenen Antigen das in der Probe verbliebene freie Antigen oder das am Immunoadsor-

:o bens gebundene Antigen in einem geeigneten Detektor gezählt werden. Dann wird aus der Standardkurve die Konzentration von Antigen in der untersuchten Probe bestimmt Das Immunoadsorbens wird jeweils durch Lösen der Bindung der Antigene an den Antikörpern zur Wiederbenutzung für eine quantitative Analyse regeneriert, indem es von einem Lösungsmittel durchspült wird.

Die Anwendung eines wiederbenutzbaren Immunoadsorbens setzt Langzeiteigenschaften voraus, welche die Reproduzierbarkeit der Wirkung des Immunoadsorbens gewährleistet. Erforderlich ist, daß das Immunoadsorbens düs Antigen für jeden Versuch stöchiometrisch freigibt Außerdem ist sicherzustellen, daß das Immunoadsorbens nicht austrocknet und sich so packen läßt, daß die Strömungsverhältnisse durch die Masse während der Nutzungsdauer des Immunoadsorbens den Anforderungen entspricht. Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine Durchflußkammer für ein solches wiederbenutzbares Immunoadsorbens zu schaffen, die unterstützend im Sinne der Aufrechterhaltung der geforderten Eigenschaften des Immunoadsorbens wirkt. Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß mit einer Vorrichtung nach dem Patentanspruch 1 gelöst. Weiterbildungen der Erfindung sind in den Unteransprüchen beschrieben.

Die erfindungsgemäße Vorrichtung findet zweckmäßig in einer automatisch arbeitenden Anlage zur Radioimmunoanalyse nach der o. g. DE-OS 24 12 833 Anwendung. Ein mit der Vorrichtung vorteilhaft verwendetes, wiederbenutzbares Immunoadsorbens ist in der Stammanmeldung DE-OS 26 12 948 beschrieben. Die Erfindung wird nachfolgend anhand der beigefügten Zeichnung näher erläutert, die einen Axialschnitt einer erfindungsgemäßen Vorrichtung zeigt.

Gemäß der Zeichnung weist die Vorrichtung 25 ein Gehäuse 27 auf, das der einfacheren Herstellung wegen Zylinderform hat. In dem Gehäuse 27 ist eine Kammer 30 vorgesehen, die das lmmunadsorbens 32 enthält, das als partikelförmiges Material gezeichnet ist. Das

so Immunoadsorbens wird in der Kammer von einem porösen Stopfen 34 gehalten, dessen Poren kleiner sind als die das Immunoadsorbens bildenden Partikel. Ein Auslaß 36 ist vorgesehen, durch den ein durch die Kammer strömendes, durch einen Einlaß 38 eintretendes Material wieder austreten kann. Der poröse Stopfen 34 sitzt fest in dem Tragkörper, der aus Polypropylen oder einem anderen Kunststoff bestehen kann. Die Kammer kann beispielsweise 3 mm Durchmesser und 6 mm Länge haben, während der poröse Stopfen 3 mm im Durchmesser und in der Länge mißt und eine Porenweite von 10 μ hat.

In der Einlaßbahn befinden sich Filterelemente 41 und 43 in Form eines 400 mesh Nylonsiebes, das an einer Filterscheibe 43 anliegt, die vorzugsweise aus Polytetrafluoräthylen besteht und die Form eines Filzes mit höchstens 10 μ Porengröße hat.

Wie sich aus der Zeichnung ergibt läuft die Kammer 30 nach beiden Seiten in erweiterte Endabschnitte 46

bzw. 47 aus, die die Form von Sackbohrungen haben, die jeweils einen eingepreßten Stopfen 48 bzw. 49 aufnehmen. In jedem Stopfen befindet sich eine Sackbohrung 51 bzw. 53 und, wie der Zeichnung zu entnehmen ist, ein Durchlaß. An den der Kammer 30 zugewandten Enden sind an dem Stopfen konisch sich erweiternde Ausnehmungen 56 bzw. 57 sowie eine Ringschulter vorgesehen, in die eine O-Ringdichtung eingelegt ist· die O-Ringe bilden eine Dichtung an den jeweils zugeordneten Enden der Sackbohrungen in dem Tragkörper 27.

Der Stopfen 49 hält die Filter 41 und 43 an ihrem Platz gegen die Unterlage, wobei das Netz das Eindringen des Filzes in die konische Ausnehmung 57 verhindert.

Der Anschluß der Vorrichtung erfolgt an den Abschlußstopfen 48,49 und deren Bohrungen 51,53. Die Vorrichtung stellt ein einheitliches Bauteil mit einem für den jeweiligen Versuch spezifischen Immunoadsorbens dar. Außer Gebrauch kann die Vorrichtung mit dem Immunoadsorbens bei 4° C aufbewahrt werden.

Die Vorrichtung weist am Einlaßende für die Kammer einen sich öffnenden Konus 57 auf, der dazu dient, die Strömung über das Bett des partikelförmigen Immunoadsorbens in der Kammer 30 aufzufächern. Die kegelförmige öffnung 56 wirkt wie ein Kollektor für das heraustretende Material, während der Stopfen 48 den porösen Stopfen 34 in der Kammer hält.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen

Claims (4)

Patentansprüche:

1. Vorrichtung zur quantitativen Analyse der Antigenkonzentration einer Probenlösung mit einer in einer Kammer örtlich festgelegten Masse von Partikeln, an die für bestimmte Antigene spezifische Antikörper gebunden sind (Immunoadsorbens), und mit einem Kammereinlaß und einem Kammerauslaß für den Durchfluß einer Probenflüssigkeit bzw. einer Spülflüssigkeit durch die Kammer, dadurch gekennzeichnet, daß die Kammer (30) in einem Zylindergehäuse (27) zwischen zwei Stopfen (48, 49) angeordnet ist, die in gegenüber der Kammer erweiterten Bohrungen (46, 47) des Gehäuses sitzen und eine Einlaßbohrung bzw. eine Auslaßbohrung mit jeweils an ,den der Kammer zugewandten Enden sich konisch erweiternden Ausnehmungen (56, 57) besitzen, und daß als Halterung für den immunoadsorbens (32) ein poröser Stopfen (34) in der Kammer angeordnet ist.

2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Poren in dem Trägerstopfen (34) kleiner als der Durchmesser der genannten Partikel ist.

3. Vorrichtung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Poren in dem Trägerstopfen (34) höchstens 10 Mikron weit sind.

4. Vorrichtung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, gekennzeichnet durch eine Filteranordnung (41, 43) zwischen der Einlaßbohrung und dem Immunoadsorbens (32).