DE2537129C3 - Reaktive unsymmetrische, einen Digoxin- bzw. Digitoxinrest enthaltende Dicarbonsäureester, Verfahren zu deren Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Testreagentien - Google Patents

Reaktive unsymmetrische, einen Digoxin- bzw. Digitoxinrest enthaltende Dicarbonsäureester, Verfahren zu deren Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Testreagentien

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DE2537129C3 DE2537129A DE2537129A DE2537129C3 DE 2537129 C3 DE2537129 C3 DE 2537129C3 DE 2537129 A DE2537129 A DE 2537129A DE 2537129 A DE2537129 A DE 2537129A DE 2537129 C3 DE2537129 C3 DE 2537129C3
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Description

in der Ri einen Digoxin- oder einen Digitoxinrest, R2 und R3 je einen Alkoxyrest mit 1 bis 3 C-Atomen oder zusammen ein Sauerstoffatom, X den Cyanomethyloxy-, Succinimid-N-oxy-, N-Methylpyridiniumoxy-, 2,4-Dinitrophenoxy-, den 2,4,5-Trichlorphenoxy-, Pentachlorphenoxy-, Phenylthio-, p-Nitrophenoxy-, p-Nitrophenylthio-, den Piperidyl-N-oxy-, Phthalimid-N-oxy- oder den Benztriazol-N-oxy-Rest und η die Zahl 2,3,4 oder 5 bedeutet.
2. Reaktiver Dicarbonsäureester nach Anspruch 1, wobei R2 und R3 je eine Methoxygruppe, X den Cyanomethyloxy-, Succinimid-N-oxy-, 2,4,5-Trichlorphenoxy- oder den Benztriazol-N-oxy-Rest und π die Zahl 2 oder 3 bedeutet.
3. Verfahren zur Herstellung der reaktiven Dicarbonsäureester gemäß einem der Ansprüche 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß ein Monoorthotrimethyl-, -triäthyl- oder -tripropylester einer Dicarbonsäure mit 4 bis 7 C-Atomen in Form ihres Alkalisalzes in Gegenwart eines Kronenäthers oder Kryptates in einem polaren oder unpolaren aprotischen organischen Lösungsmittel mit einer reaktiven, den Rest X enthaltenden Verbindung, z. B. mit Chloracetonitril, einem Hydroxysuccinimidsulfonat, N-Hydroxybenztriazoltosylat oder -trifluormethylsulfonat oder mit 2,4,5-Trichlorphenylsulfonat, und anschließend mit Digoxin oder Digitoxin in Gegenwart von p-Toluolsulfonsäure umgesetzt wird.
4. Verwendung der reaktiven Dicarbonsäureester gemäß einem der Ansprüche 1 und 2 zur Herstellung von Reagentien zur Untersuchung von Herzglykosiden (Digitalisglykosiden) in wäßriger oder physiologischer Lösung durch Umsetzung der Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 mit einer mindestens eine Aminogruppe enthaltenden Verbindung.
5. Verwendung der reaktiven Dicarbonsäureester nach Anspruch 4 zur Herstellung von Reagentien durch Umsetzung der Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 mit einem radioaktiv markierbaren Amin, vorzugsweise mit einem mit 125J markierbaren Amin.
6. Verwendung der reaktiven Dicarbonsäureester nach Anspruch 5 zur Herstellung von Reagentien durch Umsetzung der Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 und 2 mit einem jodierbaren Aminosäure-Derivat.
7. Verwendung der reaktiven Dicarbonsäureester nach Anspruch 4 zur Herstellung von Reagentien durch Umsetzung der Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 und 2 mit einem Protein, vorzugsweise mit einem biologisch aktiven Protein.
8. Verwendung der reaktiven Dicarbonsäureester nach Anspruch 7 zur Herstellung von Reagentien durch Umsetzung der Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 und 2 mit Rinderserumalbumin
(RSA), Edestin oder Polylysin zu Iinmunogenen.
9. Verwendung der reaktiven Dicarbonsäureester nach Anspruch 7 zur Herstellung von Reagentien durch Umsetzung der Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 und 2 mit einem enzymatisch aktiven Protein.
10. Verwendung der reaktiven Dicarbonsäureester nach Anspruch 9 zur Herstellung von Reagentien durch Umsetzung der Verbindungen gemäß einem der Ansprüche 1 und 2 mit Peroxidase (POD).
Die Erfindung betrifft reaktive unsymmetrische, einen Digoxin- bzw. Digitoxinrest enthaltende Dicarbonsäureester, die zur Herstellung von Reagentien zur Untersuchung von Herzglykosiden (Digitalisglykosiden) geeignet sind, ein Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung.
Bei den Methoden zur Untersuchung von Digitalisglykosiden, insbesondere zur Messung des pharmakologischen Spiegels an solchen Glykosiden, handelt es sich um immunologische Tests in wäßriger oder physiologischer Lösung, z. B. im Plasma, Serum und Urin. Solche
-to Immuntests für die Bestimmung von Digitoxin und Digoxin sind bekannt. So wird nach dem aus G. C. Oliver, B. M. Parker, D. L Brasfield und C.W.Parker, »The Measurement of Digitoxin in Human Serum by Radioimmunoassa«, J. Clin. Investig.
.15 47, 1035 (1968), bekannten Verfahren eine bestimmte Menge eines mittels immunologischer Standardverfahren hergestellteil Antidigitoxinserums mit einer wäßrigen oder physiologischen Lösung, deren Digitoxingehalt bestimm ί werden soll, also z. B. mit Testplasma, -serum oder -urin, oder mit einer Standdarddigitoxinlösung jeweils zusammen mit einer konstanten Menge Digitoxigenin umgesetzt, das entweder radioaktiv markiert oder an ein Enzym gebunden ist, und zwar jeweils so, daß die antigenen Eigenschaften unverändert erhalten bleiben. Nach der Inkubation des Gemisches wird das mit dem Antikörper verbundene Digitoxin bzw. Digitoxigenin von freiem Digitoxin bzw. Digitoxigenin abgetrennt und die Radioaktivität oder die Enzymaktivität gemessen. Das Reagens, also das radioaktiv markierte oder an ein Enzym gebundene Digitoxigenin, ist ein mit einem Peptid, einer Aminosäure oder einem Aminosäureester kondensiertes 3-O-Succinyl-digitoxigenin, das durch Umsetzung von Digitoxigenin mit Bernsteinsäureanhydrid hergestellt wird.
Aus der DT-OS 21 42 422 ist ein analoges, ebenfalls auf Immuntests beruhendes Verfahren zur Bestimmung von Digoxin bekannt, bei dem das entsprechende Reagens aus Digoxigenin, dem 12-Hydroxydigitoxigenin, ebenfalls durch Succinylierung, bei der die
ho OH-Gruppe in 12-Stellung geschützt werden muß, und anschließende Kondensation mit einem Peptid, einer Aminosäure oder einem Aminosäureester hergestellt wird. Es ist auch bekannt, das succinylierte Genin zur Antikörperherstellung als Antigen an ein Protein, z. B.
hs an Rinderserumalbumin (RSA), zu binden.
Da der Komplex des Antikörpers mit dem Genin weniger stabil als der entsprechende Komplex mit dem vollständigen Herzglykosid ist, wurde ebenfalls bereits
vorgeschlagen, das Herzglykosid Ober den endständigen Zuckerrest mit einer Aminosäure oder einem Protein zu kondensieren. So ist es aus V. P. Butler und J.P.Chen, Proa Nat. Acad. Sei. U.S, 57, 71 (1966), bekannt, den endständigen Digitoxose-Rest mittels Perjodat zu oxidieren und anschließend mit einem Protein, wie RSA, zum Immunogen zu kondensieren. Aus der DT-OS 23 31 922 ist dasselbe Verfahren, jedoch zur Herstellung jodierbarer Digoxin-Aminosäure- und -Peptidderivate, bekannt
Da Digoxin gegenüber Säuren und Laugen außerordentlich empfindlich ist, entsteht das Digoxin-Aminosäure-Derivat unter den drastischen Bedingungen des zuletzt genannten Verfahrens nur in einer Ausbeute von 10% d.Th. Derselbe Nachteil einer geringen Ausbeute entsteht auch bei der Umsetzung mit einem Protein, wobei jedoch noch hinzu kommt, daß eine Reinigung des Digoxin Protein-Derivates nicht mehr, wie im Falle des niedermolekularen Aminosäure-Derivates, möglich ist, so daß das auf diese Weise erhaltene Immunogen noch Nebenprodukte, wie z. B. isomerisiertes Digoxin, enthält. Ein weiterer Nachteil dieses bekannten Verfahrens zur Herstellung eines Digoxin-Reagenses ist die irreversible Veränderung des endständigen Zuckerrestes im Digoxinmolekül sowie dessen direkte Verknüpfung mit dem Protein oder der Aminosäure. Hierdurch werden die sterischen Verhältnisse innerhalb des Digoxinmoleküls verändert, was wiederum die Genauigkeit des mit diesem Molekül als Reagens durchgeführten Tests beeinflußt, bei dem ja letzten Eudes der Antikörperkomplex dieses Moleküls mit dem Antikörperkomplex des freien Digoxins verglichen wird.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, diese Nachteile zu vermeiden und Verbindungen zu schaffen, die es ermöglichen, Digitalisglykoside, wie z. B. Digoxin oder Digitoxin, ohne deren molekulare Struktur zu verändern, über eine »Brücke« mit mindestens eine Aminogruppe enthaltenden Verbindungen, z. B. Aminen, Aminosäure-Derivaten oder Proteinen, zu kondensieren, also Verbindungen zu schaffen, die zur Herstellung von Reagentien zur Untersuchung von Herzglykösiden geeignet sind.
Diese Aufgabe wird gemäß der Erfindung durch reaktive unsymmetrische Dicarbonsäureester der allgemeinen Formel
R1O
R2- C — (CH2),,- CO — X
gelöst, in der Ri einen Digoxin- oder einen Digitoxinrest, R2 und R3 je einen Alkoxyrest mit 1 bis 3 C-Atomen oder zusammen ein Sauerstoffatom, X den Cyanomethyloxy-, Succinimid-N-oxy-, N-Methylpyridiniumoxy-, 2,4-Dinitrophenoxy-, den 2,4,5-TrichIorphenoxy-, Pentachlorphenoxy-, Phenylthio-, p-Nitropnenoxy-, p-Nitrophenylthio-, den Piperidyl-N-oxy-, Phthalimid-N-oxy- oder den Benztriazol-N-oxy-Rest und π die Zahl 2, 3, 4 oder 5 bedeutet.
Die Aufgabe wird ferner gemäß der Erfindung durch ein Verfahren zur Herstellung der so charakterisierten erfindungsgemäßen reaktiven Dicarbonsäureester gelöst, das dadurch gekennzeichnet ist, daß ein Monoorthotrimethyl-, -triäthyl- oder -tripropylester einer Dicarbonsäure mit 4 bis 7 C-Atomen in Form ihres Alkalisalzes in Gegenwart eines Kronenäthers oder Kryptates in einem polaren oder unpolaren aprotischen organischen Lösungsmittel mit einer reaktiven, den Rest X enthaltenden Verbindung, z. B. mit Chloracetonitril, einem Hydroxysuccinimidsulfonat, N-Hydroxybenztriazoltosylat oder -trifluormethylsulfonat oder mit 2,4,5-Trichlorphenylsulfonat, und anschließend mit Digoxin oder Digitoxin in Gegenwart von p-Toluolsulfonsäure umgesetzt wird.
Gegenstand der Erfindung sind somit z. B. folgende reaktive Dicarbonsäureester der obengenannten allgemeinen Formel:
Digoxin-4"'-succinyl-cyanomethylester,
Digoxin-4"'-glutarylcyanomethyJester,
Digoxin^^-glutaryl-hydroxysuccinimidester.
Digitoxin-4'"-adipinyl-hydroxysuccinimidester,
Glutarsäure-co-digitoxin-V'-yl-co-ortho-
dimethylester-tü'-cyanomethylester,
Digoxin-4'"-succinyl-2,4,5-trichlorphenylester,
Digitoxin-4'"-succinyl-2,4,5-trichlor-
phenylester,
Digoxin-4'"-glutaryl-2,4,5-trichlor-
phenylester,
Digitoxin^^-glutaryl-benztriazol-N-yl-ester,
Digoxin-4"'-pimelinyl-cyanomethyl-ester,
Digoxin-4'"-pimelinyl-hydroxysuccinimidester,
Digoxin-4'"-pimelinyl-2,4,5-trichlor-
phenylerter,
Digoxin^^-pimelinyl-benztriazol-N-yl-ester,
Digitoxin-4'"-pimelinyl-hydroxysuccin-
imidester,
Digitoxin-4'"-pimelinyl-2,4,5-trichlor-
phenylester,
Digitoxin-4'"-pimelinyl-benztriazol-N-yl-ester,
Pimelinsäure-a>-digitoxin-4'"-yl-tü-orthodiäthylester-ci)'-2,4,5-trichlorpheny]ester.
Die reaktiven Dicarbonsäureester gemäß der Erfindung sind zur Herstellung von Reagentien zur Untersuchung von Digitalisglykosiden im Rahmen immunologischer Tests der eingangs genannten Gattung hervorragend geeignet. Jeder dieser Carbonsäureester kann entweder mit einer radioaktiv markierbaren, mindestens eine Aminogruppe enthaltenden Verbindung, z. B. mit einer mit 125J jodierbaren aminogruppenhaltigen Verbindungen, wie Tyramin, Histidin, Tyrosin und Tyrosin-äthylester, umgesetzt werden, wobei man einen Tracer erhält, oder mit einem biologisch aktiven Protein zur Herstellung von Antikörpern, z. B. mit Rinderserumalbumin, und jede der erfindungsgemäßen Verbindungen kann schließlich auch mit einem enzymatisch aktiven Protein zu einem Reagenz für den ELISA-Test kondensiert werden. Mit der Erfindung werden also Verbindungen zur Verfugung gestellt, die zur Herstellung von in ihrem chemischen Aufbau gleichartigen Reagentien geeignet sind, wobei jedoch mit diesen Reagentien die Messung ganz verschiedener Größen, nämlich der Antikörperaktivität, der Enzymaktivität und der Radioaktivität, ermöglicht wird.
Ein weiterer Vorteil der erfindungsgemäßen Verbindungen besteht darin, daß deren Hydrophilie dem jeweiligen Verwendungszweck durch die Wahl des
ft5 oj'-Esters, also durch die Wahl zwischen Dicarbonsäureester, der angegebenen allgemeinen Formel, in der X entweder einen Cyanomethyl- oder den Succinimid-N-oxy-, den N-Methylpyridiniumoxy-, den 2,4-Dinitro-
phenoxy-, den 2,4,5-Trichlorphenoxy-, den Pentachlorphenoxy-, den Phenylthio-, den p-Nitrophenoxy-, den p-Nitrophenylthio-, den Piperidyl-N-oxy-, den Phthalimid-N-oxy- oder den Benztriazol-N-oxy-Rest bedeutet, angepaßt werden kann, wobei ζ. B. die Cyanomethylester-Derivate meist hydrophiler ak die entsprechenden Hydroxysuccinimidester-Derivatesind.
Ein weiterer Vorteil der erfindungsgemäßen Verbindungen besteht darin, daß sie an Trägersubstanzen, z. B. an Molekularsieben, aber auch auf Polystyrol, fixiert und im Rahmen der Affinitätschromatographie eingesetzt werden können, vor allem an hydrophilen, aminogruppenhaltigen Gelen, Molekularsieben od. dgl. Diese gelgebundenen Substanzen dienen als Immunadsorbentien, also zur Reinigung von Antikörpern.
Weiterbildungen des Verfahrens zur Herstellung der reaktiven Dicarbonsäureester gemäß der Erfindung bestehen darin, daß als polares oder unpolares aprotisches organisches Lösungsmittel Benzol oder Chloroform verwendet wird, und darin, daß als Hydroxysuccinimidsulfonat das Methylsulfonat oder das p-Toluolsulfonat des Hydroxysuccinimids verwendet wird.
Als Ausgangsmaterial zur Herstellung der reaktiven Dicarbonsäureester dient ein Monoorthotrimethyl-, truthyl- oder -tripropylester einer Dicarbonsäure mit 4 bis 6 C-Atomen in Form ihres Alkali' alzes, z. B. Glutarsäure-monoorthotrimethylester.
Glutarsäure-monoorthotrimethylester wird hergestellt, indem in eine Mischung aus 37,3 g Cyanobuttersäureäthylester und 12 ml absol. Methanol unter Eiskühlung 10,7 g HCl eingeleitet werden. Nach 5-tägigem Stehen im Kühlschrank kristallisiert Glutar-
rid langsam aus. Es wird mit absol. Äther viermal digeriert und unter Luftausschluß abgesaugt und über KOH getrocknet. Zu dem so erhaltenen Imidoestersalz wird unter Luft- und Feuchtigkeitsausschluß ein Überschuß von Methanol gegeben. Zi nächst gehen die Kristalle in Lösung, dann, nach 12stündigem Stehen bei Raumtemperatur, beginnt langsam die Ausscheidung von Ammoniumchlorid. Man läßt noch weitere 48 Std. stehen und vervollständigt dann die Ausfällung durch Zusatz der dreifachen Menge Äther. Dann wird abfiltriert, eingeengt und in absol. Äther aufgenommen, erneut abfiltriert und wieder eingeengt. Der zurückbleibende Glutarsäure-iü-ortho-trimethylester-ciV-äthylester wird anschließend destilliert (Kp.0.05 = 55 bis 60 Grad C). Die Ausbeute über diese ersten beiden Stufen beträgt 41 % d. Th.
Dieselbe Verbindung, also Glutarsäure-to-orthotrimethylester-w'-äthylester, erhält man — allerdings in geringerer Ausbeute —, indem in entsprechender Weise ein Überschuß von Methanol zu Glutarsäure-w-imido-O-methylester-tü'-äthylester-tetrafluoroborat gegeben wird, das durch Umsetzung von Glutarsäureäthylesteramid mit Trimethyloxonium-tetrafluoroborat zugänglich ist.
Der Glutarsäure-io-orthotrimethylester-co'-äthylester wird in 50 ml Aceton gelöst und mit der äquivalenten Menge KOH in 10 ml H2O versetzt und 3 Std. bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird das Aceton und die Hauptmenge des Wassers abgezogen und mit absol. Methanol versetzt. Beim Einengen fällt das Kaliumsalz des Glutarsäure-monoorthotrimethylesters aus, das am Hochvakuum getrocknet wird und als Ausgangsmaterial zur Herstellung reaktiver Dicarbonsäureester eemäß der Erfindung dient.
Beispiel I
A) Glutarsäure-oj-orthotrivnethylesterot'-cyanometbylester
In 20 ml Chloroform werden äquivalente Mengen des Kaliumsalzes des Glutarsäure-monoorthotrimethylesters mit Chloracetonitril und einer katalytischen Menge eines Kronenäthers oder eines Kryptates versetzt und 8 Tage lang bei Raumtemperatur gerührt.
Von ausgefallenem Nytriumchlorid wird abgetrennt, und die Lösung wird mit Natriumdicarbonat ausgeschüttelt, getrocknet und eingeengt Der Cyanomethylester bleibt als farbloses öl zurück.
B) Digoxin-4'"-glutaryl-cyanomethylester
Zu 2 3 des gemäß A) hergestellten Glutarsäure-ω-θΓ-
thotrimethylester-(o'-cyanomethy!esters in 20 ml absol.
THF werden 100 mg p-Toluolsulfonsäure und 1,5 g Digoxin gegeben. Das Digoxin geht unter Rühren bei Raumtemperatur langsam in Lösung. Nach 6 Stunden wird die Lösung mit 4 ml 0,1 n-HCI auf pH 2 gebracht, dann wird eine halbe Stunde weitergeriihrt und schließlich mit 0,1 n-NaOH auf pH 6 gebracht. Dann
2s wird eingeengt, in absol. Äthanol aufgenommen und wieder eingeengt. Aus dem zurückbleibenden öl kristallisiert die Verbindung langsam in der Kälte aus. Es wird aus Essigester/Petroläther umkristallisiert. Fp.: 170 bis 180° C (Zersetzung).
Analyse:
Berechnet: C 61,5, H 7,4, N 1,5;
gefunden: C 61,46, H 7,79, N 1,17.
Beispiel 2
Digoxin-4"'-giutaryl-hydroxysuccinimidester
Zu 2 g des gemäß Beispiel 1 A). jedoch mit dem Methylsulfonat oder dem p-Toluolsulfonat des Hydroxysuccinimids anstelle von Chloracetonitril hergestellten Glutarsäure-o-orthotrimethylester-cij'-hydroxysuccinimidesters in 20 ml absol. THF werden 100 mg p-Toluolsulfonsäure und 1,5 g Digoxin gegeben, und es wird, wie unter Beispiel 1 angegeben, verfahren. Fp.: 125 bis 140°C(Zersetzung).
Analyse:
Berechnet: C 60,5, H 7,35, N 1,4;
gefunden: C 59,89, M 7,51, N 1,24;
so Mit den im folgenden beschriebenen Reaktionen soll — in nur beispielhafter Weise — die vorteilhafte Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung von Reagentien zur Untersuchung von Digitalisglykosiden näher erläutert werden.
Digoxin-4"'-glutaryl-tyramid
0,5 g eines gemäß Beispiel 1 oder 2 hergestellten aktiven Dicarbonsäureesters, 0,082 g Tyramin und 0,082 ml Triäthylamin werden 4 Tage lang bei
ho Raumtemperatur in 20 ml absol. THF gerührt. Das THF wird abgezogen, der Rückstand in Methylenchlorid aufgenommen und zweimal mit 0,1 n-HCI und einmal mit H2O ausgeschüttelt. Die organische Phase wird getrocknet, eingeengt, in Essigester aufgenommen und
(,5 mit Petroläther gefällt. Das so erhaltene kristalline Produkt wird in Essigester gelöst und an einer Silikagel-Säule chromatographiert. Hierbei läuft eine Verunreinigung durch, das reine Produkt wird mit THF
eluiert, das Eluat eingeengt und mit Essigester versetzt. Durch Zugabe von Petroläther kristallisiert reines Digoxin-4'"-glutaryl-tyramid aus (Fp.: 120 bis 1600C [Z.]), das nach radioaktiver Markierung ein ausgezeichnetes Reagenz zur Bestimmung von Digoxin in wäßriger oder physiologischer Lösung darstellt.
Digoxin-Rinderserumalbumin-Konjugat
Zu einer 5%igen Lösung von Rindersenimalbumin in einer wäßrigen K2CO3-Lösung (pH = 8,5) wird eine äthanolische Lösung eines nach Beispiel 1 oder 2 hergestellten aktiven Dicarbonsäureesters zugetropft. Nach mehrtägigem Rühren bei Raumtemperatur fällt ein weißer Niederschlag aus, der abzentrifugiert und mit Essigester gewaschen wird. Sowohi das Zentrifugal ais auch der Rückstand, der in Wasser dispergiert wird, werden 1 Tag lang gegen fließendes Wasser dialysiert Die Lösung des Rückstandes wird sofort gefriergetrocknet. Die Lösung des Zentrifugats wird mit 0,1 η HCI auf pH 7 gebracht und eingeengt und anschließend in Äthanol aufgenommen und auf pH 4,5 gebracht. Dabei fällt ein weiterer Teil des !Conjugates aus. Dieses wird in 10 ml €i,15n-NaHCO3-Lösung aufgenommen und 3 Tage lang gegen fließendes Wasser dialysiert und schließlich gefriergetrocknet.
Analog hierzu werden Edestin- und Polylysin-Digoxin-Kojugate aus den gemäß Beispiel 1 oder 2 hergestellten aktiven Dicarbonsäureester!! hergestellt, die wie das Digoxin-Rinderserumalbumin-Konjugat,
ι ο hervorragende Immunogene darstellen.
Auch die Herstellung eines Peroxidase-Digoxin-Derivates erfolgt analog zu der des Digoxin-Rinderserumalbumin-Konjugats, wobei bei einem Äthanolgehalt der Reaktionslösung von weniger als 20% gearbeitet wird und gegen eine 0,i n-Tris-Fuffer-Lösurig (pH = 6,2) dialysiert wird. Das POD-Digoxin-Derivat stellt ein hervorragendes Enzymtest-Reagens zur Bestimmung von Digoxin dar. Auch die Kondensation an Aminohexyl-Sepharose erfolgt nacli analogen Verfahren.

Claims (1)

Patentansprüche:
1. Reaktive unsymmetrische Dicarbonsäureester der allgemeinen Formel
R1O
R2-C-(CH2Jn-CO-X
R3
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