DE2343570A1

DE2343570A1 - Pharmazeutische mittel zur oralen verabreichung

Info

Publication number: DE2343570A1
Application number: DE19732343570
Authority: DE
Inventors: Angel S Arambulo; Deam H Ferris
Original assignee: University of Illinois
Current assignee: University of Illinois
Priority date: 1972-08-30
Filing date: 1973-08-29
Publication date: 1974-03-14
Also published as: JPS535371B2; CA1023266A; NL7312032A; JPS4962618A; FR2197576A1; AR197158A1; AU5949773A; FR2197576B1; PH10296A; GB1440214A

Description

Die Erfindung betrifft allgemein die orale Verabreichung biologischer Substanzen an !Eieren und besonders eine neue Dosisform für eine orale Vaccine (oral zu verabreichenden Impfstoff) zum Schutz von Sehweinen gegen 1'GE₀

Die übertragbare Gastroenteritis (Magendarmentzündung), die üblicherweise als TGE bezeichnet wird, ist eine stark ansteckende Virenerkrankung, die Schweine jeden Alterg befällt. Während die Krankheit bei allen Schweinen schwer ist, ist sie besonders gefährlich für junge Schweine, bei denen sie zu schwerem Brechen, Diarrhöe und Gewichtsverlust und folglich einer hohen Mortalitätsquote führt. Die Krankheit ist seit vielen Jahren bekannt, aber das Auftreten und die Schwere der Erkrankungen scheinen zuzunehmen. Zur Zeit geht

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die Anzahl von Schweinen, die jährlich mit 'XGE infiziert werden, in die Millionen und der durch die. verheerende^V/irkung der Krankheit für den Landwirt auftretende wirtschaftliche Verlust ist sehr schwer.

Der Mechanismus der Übertragung an TGE ist nicht vollständig klar, obwohl Vögel, Nagetiere und wilde Fleisch- . fresser als Träger vermutet werden. Die Isolierung von infizierten Schweinen von jedem anderen tierischen.Leben hat sich als unwirksam zur Bekämpfung der Krankheitsübertragung erwiesen, was möglicherweise ein Hinweis dafür ist, daß die Übertragung durch'menschlichen Kontakt oder durch die Luft erfolgt« ■ - . .- _:

Alle Versuche, die Übertragung von TGB zu verhindern oder zu kontrollieren, haben sich bis heute als Fehlschlag oder als nicht ausreichend wirksam für die praktische Anwendung erwiesen. Zu den Methoden, die zur Bekämpfung der Krankheit bei Abwesenheit irgendwelcher sonstigen· Methoden versucht worden sind, gehört das Verfüttern von virulenten TGE Viren durch den ^andwirt an trächtige Schweine in der Hoffnung, daß ausreichend Antikörper in der Milch gebildet werden, um den säugenden Ferkeln, eine gewisse Immunität zu verleihen. Obwohl dieses Verfahren tatsächlich die Krankheit teilweise eindämmt, ist es aus den folgenden Gründen nicht zufriedenstellend. Die infizierte Sau neigt mehr zum Verwerten oder zur Bildung einer nicht ausreichenden Menge an'HiTcIr, in der· der Antikörpergehalt gering sein kann« Außerdem kann die Infektion übertragen werden auf andere, vorher nicht infizierte Herden oder bestehen bleiben oder sie kann zu einer epidemisch auftretenden TGE in der Herde führen oder zu einer fortgesetzten Störung in einem Zuchtprogramm (farrowing prjgram) Selbstverständlich ist das Verfahren, trächtige Säue

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mit virulenten TGE Viren zu infizieren, nicht nur unangemessen als Verfahren zur Bekämpfung der Übertragung der Krankheit unter Ferkeln, sondern auch gefährlich und führt zu Krankheiten· ·

Andere Versuche, die übertragung von TGE zu bekämpfen, uafaßten die Anwendung modifizierter lebender Viren, die angeb- lieh nicht virulent waren oder abgeschwächte TGE Viren zum Impfen von trächtigen Säuen wieder in der Erwartung, daß Antikörper durch die Milch auf die Ferkel übertragen wür den. Derartige Verfahren haben sich ähnlich als unwirksam zur Bekämpfung der Krankheit erwiesen. Da junge Ferkel immunologisch unreif sind, können sie nicht direkt als Reaktion auf einen Impfstoff schützende Antikörper bilden. Folglich sind, da TGE für neugeborene Ferkel innerhalb eines Zeitraumes von 24 h nach der Geburt tötlich sein kann, die Ferkel für TGE anfällig im Falle, daß die trächtige Sau nicht ausreichend Antikörper oder ausreichend Milch gebildet hat, um den Ferkelwurf zu schützen. Außerdem erfordert jedes Verfahren, das nur auf einer .Impfung der trächtigen Säue beruht, um denaV'urf der Ferkel eine Immunität zu verleihen, daß die Impfungen kontinuierlich durchgeführt werden, selbst wenn kein. Anzeichen für ein Ausbrechen von TGE vorliegt. Ein Schutz von Ferkeln von einer nicht geimpften Sau war bis jetzt unmöglich.

Im weitesten Sinne betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Verabreichung einer über die Darmzotten wirksamen bzw. resorbierbaren aktiven biologischen Substanz an Tiere , d.h. einer biologisch wirksamen Substanz, die durch die Darmzotten des Dünndarms resorbiert werden kann, um eine gewünschte Wirkung zu erzielen^durch Verabreichung der biologischen Substanz oral in Form von enteralen, d.h. darmlöslich überzogenen Teilchen mit einer geregelten maximalen Größe. Das

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erfindungsgemäße Verfahren ist besonders anwendbar auf biologische Substanzen, die gegenüber den Magensekreten des Tieres empfindlich sind oder von der Körperwärme abgebaut werden können. Dif erfindungsgemäß angewandten biologischen Substanzen werden in einer Dosisform zubereitet, umfassend feste Teilchen, bestehend aus der biologischen Substanz alleine oder aus einem phyeiologisch geeigneten festen Träger auf oder in dem die biologische Substanz abgeschieden ist, wobei die Teilchen eine kritische maximale Größe besitzen und einem darmlöslichen Überzug zum Schutz gegen Abbau durch Berührung mit den Magensekreten des Tieres. Es hat sich gezeigt, daß durch eine Begrenzung der Größe der Teilchen die Passage durch das Ventil des Magenausgangs des Tieres in den Dünndarm in so kurzer Zeit erfolgt, daß Übliche darmlösliche überzüge geeignet sind, um einen Abbau durch die Magensaft oder eine Zerstörung der Wirksamkeit, die von der Körperwärme des Tieres herrühren kann, wenn die Teilchen zu lange im Tiermagen bleiben, verhindert werden kann.

Der Ausdruck "biologische Substanz", wie er hier verwendet wird, bezeichnet Substanzen, die Tieren verabreicht werden wegen der Wirkung, die sie auf Prozesse ausüben, die zu einer Immunität in dem Tier führen, wie Vaccine bzw. Impfstoffe, Viren, Toxine, Antigene, Antikörper und ähnliches.

Die Erfindung beruht zum Teil auf der Feststellung, daß die Zeit, die Teilchen in dem Tiermagen verweilen, bevor sie durch den Magenausgang in den Dünndarm gelangen, von der Teilchengröße abhängt. Pur jede bestimmte Tierart gibt es eine kritische maximale Teilchengröße oberhalb der die Retentionszeit in dem Magen schnell zunimmt und unterhalb der die Retentionszeit minimal ist. Zum Beispiel wurde bestimmt, daß bei Schweinen,während Perlen, die ungefähr kugelförmig sind und

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einen Durchmesser von weniger als ungefähr 2,0 mm und vorzugsweise weniger als ungefähr 1,5 nun besitzen, innerhalb vernünftig kurzer Zeiträume aus dem Magen durch den Magenausgang in den Darm gelangen, d„h. in Zeiten von 1,5 h oder darunter,größere Teilchen Zeiten in dem Magen bleiben, die mit einer zunehmenden Größe deutlich zunehmen.» Zum Beispiel können Perlen mit einem Durchmesser von 3 mm bis zu 2 Tagen im Magen von Schweinen bleiben. Es wurde ferner gefunden, daß die darmlöslichen Überzüge, die üblicherweise zum Überziehen von Tabletten verwendet^ werden, in vivo zu Schutzzeiten führen, die sehr viel geringer sind als diejenigen, wie sie aus Versuchen mit den gleichen Tabletten in vitro in simulierten Magensäften zu erwarten wären« Polglich ist es, um die Wirksamkeit darmlöslich überzogener an die DarmafctenCvilliarly) zu verabreichter biologischer Substanzen, die gegenüber Wärme oder Magensekrete empfindlich sind, sicherzustellen, erfindungsgemäß" wichtig, daß die maximale Größe der verwendeten Teilchen begrenzt ist»

Es hat sich gezeigt, daß es erfindungsgemäß möglich ist sowohl erwachsene Schweine wie auch neugeborene Ferkel gegen

die verheerenden Wirkungen von TGE zu schützen, durch Verab_

.chten reichung einer Dosisform von abgeschwä/ TGE Viren, umfassend Mikroperlen, d.h. Perlen mit einem Durchmesser von weniger als 2,0 mm und vorzugsweise weniger als 1,5 mm, wobei die

chte Perlen eine getrocknete abgeschwä/TGE Virusvaccine enthalten, die nach üblichen Verfahren hergestellt worden ist. Die .Mikroperlen sind mit einem üblichen darmlöslichen Überzug versehen, der geeignet ,ist, die Mikroperlen in dem Magen des Tieres mindestens ungefähr 2 h zu schützen, eine Zeit, in der die meisten ,Perlen den Magenausgang passiert haben und in; den Dünndarm gelangt,sind, wo sich der darmlösliche Überzug schnell löst und der Impfstoff zur Hesorpfcion durch die Zotten im

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Dünndarm frei wird» Wenn sie erwachsenen Schweinen auf diese Weise verabreicht wird, führt die Vaccine zur Bildung von Antikörpern in dem Tier, die das Tier wirksam gegen eine Infektion durch TGE schützen. Im Falle von neugeborenen Ferkeln, die immunologisch unreif sind, scheint der Mechanismus abzuhängen von einer Störung der Absorption und Replikation des TGE Virus in den Darmzotten des Tieres durch die Vaccine und nicht auf einer wirklichen, immunologischen Reaktion. In jedem Falle und ungeachtet der Tatsache, ob diese Hypothese richtig ist, bleibt die Tatsache bestehen, daß neugeborene Schweine durch orale Verabreichung der darmlöslich überzogenen Mikroteilchen von verdünnter TGE Virusvaccine erfindungsgemäß wirksam gegen TGE geschützt werden können»

Das spezielle angewandte Verfahren zur Verabreichung der darmlöslich überzogenen Mikroteilehen von TGE an Schweine ist nicht kritisch. Es ist nur wichtig, daß die einzelnen Teilchen frei sind, um einzeln durch den Darmausgang gehen zu könnene Folglich können die darmlöslich überzogenen Mikroteiichen mit dem Tierfutter in einer ausreichenden Konzentration vermischt werden, die sicherstellt, daß das Tier eine ausreichende Menge des Impfstoffes aufnimmt, um einen Schutz sicherzustellen. So können für junge Ferkel die Mikroteilchen mit nasser Jungtiernahrung oder viskosen flüssigen Futtermitteln, wie sie üblicherweise für Jungferkel angewandt werden, vermischt werden» Für etwas ältere Schweine können die Mikroteilchen mit dem Anfangsbrei vermischt werden und bei noch älteren Schweinen können sie in die trockne Nahrung, die an die Tiere verfüttert wird, eingemischt werden. Da jedoch das Zumischen der Teilchen zu dem Tierfutter eine gewisse Ungenauigkeit bezüglich der Menge des aufgenommenen Futters einschließt, ist es bevorzugt, daß eine bekannte Menge der Hikroteilchen direkt in den Magen des Tieres gebracht wird. Bei einem derartigen Verfahren können schnell lösliche Gelatine-

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kapseln oder ähnlicheβ, enthaltend eine bekannte Menge darmlöslich Überzogener Mikrotellchen, angewandt werden· Die Kapseln lösen sich schnell in dem Tiermagen, wobei sie die einzelnen darmlöslich überzogenen Hikroteilchen für die Fassage durch den Magenausgang in den Dünndarm freisetzen« Da es möglich ist, daß der Mageninhalt den Durchgang durch den Magenausgang (Pförtner) stört, ist es bevorzugt» daS der Magen des Tieres leer 1st, wenn die Vaccine verabreicht wird, obwohl das nicht wesentlich ist, da es sich gezeigt hat, daß die Mikroteilchen schnell durch den Pförtner hindurchgehen, selbst wenn der Magen voll ist.

Unabhängig von den speziellen .angewandten Verfahren zur Verabreichung der erfindungsgemäßen Mikrokapseln an Schweine, ist es bevorzugt, daß die Sosis mit dem unten angegebenen Schema übereinstimmt, um einen angemessenen Schutz gegen TGE zu erreichen. Da die Virenstämme in der Konzentration variieren können, variiert die genaue Dosis mit der speziellen biologischen Substanz, die angewandt wird. Im allgemeinen nimmt die Dosis jedoch mit dem Alter der Schweine, wie folgt, zu.

Alter der Ferkel Dosis, 10^ (Wochen) ?£^{webe Kultur}

<2 1-100

2-6 2-1000

. ' trächtige Säue 100-100 000

Um einen maximalen Schutz zu erreichen, ist es bevorzugt, daß die oben angegebene Dosis nach einem Intervall von ungefähr 2 V/ochen wiederholt wird.

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Daß die Größe der Teilchen für ihre Retentionszeit in dem Schweinemagen kritisch ist, wird durch die Daten der Tabelle I gezeigt. Diese Daten stammen aus Versuchen, bei denen Makrokapseln mit verschiedenem Volumen (0,5 bis 20 cm ) enthaltend Stahlperlen mit einem Durchmesser von 3 mm im Ganzen Tieren verschiedener QTu&en verabreicht wurden. Es wurden Röntgenaufnahmen in Abständen von 15 min von den Tieren gemacht, sowohl von der rechten Seite als auch entweder vom Rücken oder vom Bauch, üblicherweise das letztere, um zu zeigen, ob sich die Kapsel gelöst hatte und wenn, ob die Perlen noch, im Magen waren. In jedem Falle hat es sich gezeigt, daß die darmlöslich überzogene Kapsel sich in weniger als 2,5 h im Magen löste und daß die Stahlperlen, die freigesetzt wurden, wenn sich die Kapsel im Magen löste, 5 h bis 2 Tage im Magen blieben. Die darmiöslichen Überzüge, die hierbei verwendet wurden, waren Sdaellack und Celluloseacetatphthalat (CAP), ein handelsübliches Produkt, daß speziell zur Herstellung darmlöslicher Überzüge verkauft wird und das hergestellt worden ist durch Umsetzung eines Teilacetatesters von Cellulose mit Phthalsäureanhydrid. Die in Tabelle I angegebenen Ergebnisse zeigen, daß die darmlöslichen Überzüge nicht wirksam waren zum Schutz einer Kapsel gegen Lösung im Schweinemagen über eine Zeit von mehr als 2,5 h höchstens und in vielen Fällen über eine wesentlich kürzere Zeit. Es hat sich auch gezeigt, daß Perlen mit einem Durchmesser von 5 mm mindestens 5 h und maximal, 48 h im Magen zurückgehalten wurden, unabhängig davon, ob der Magen leer oder voll war, wenn die Kapseln verabreicht wurden.

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Tabelle I Passage von darmlb'slich überzogenen Makrokapseln, durch den Schweinemagen

Überzug Füllung Gewicht der Zustand des

Schweine Magens

Lösung Zeit Ort	Magen	Retentionszeit im Magen (h)	N) CO J>- CO cn O
(H) 2,5 .	Il	12
2	tt	10
2	Il	12
1,75	It	10
1,5	It	12
1,8		10
1,25	Il	8
1,25	ti	9
1,25	M .	8
1,5	Il tt	9
1,5 1,6	5 7

O
CO
OO

20οία Kapsel 10 cts. Schellack Perlen 27,2 kg

3 nun

20 » Kapsel 10 ctso " "

2 » " 10 cts. ^M. »

2 " , " 10 cts. '· "

0,5" " 10 cts. " ··

0,5» " 10 cts. » . "

0,5" "

0,5» »

0,5" "

0,5" . "

0,5» "

6	CtSo	GAP
6	cts.	CAP
6	cta.	CAP
6	cts.	CAP
10	cts.	CAP
10	cts.	CAP

(60 lbs)	leer
20,4 kg (45 lbs)	voll
20,4 kg (45 lbs) 13,6 kg (30 lbs)	voll leer
20,4 kg (45 lbs)	leer
20,4 kg (45 lbs)	voll
15,9 kg (35 lbs)	voll
11,4 kg (25 lbs)	leer
11,4 kg (25 lbs)	leer
20,4 kg (45 lbs)	leer
27,2 kg (60 lbs)	leer
27,2 kg (60 lbs)	voll

Überzug

0,5 cm Kapsel 10 cts. CAP

10 cts. CAP

^ ⁺ Cellulose-acetat-phthalat

FUllung	Gewicht der Schweine	Zustand des Magens	lösung Zeit Ort	Magen	Retentionszeit im Ma^en (h)
			00	t! Il
Perlen '3 mm 0	159 kg (350 lbs)	gefüttert	1,5	Il	48
η It	159 kg (350 lbs) 182 kg (400 lbs)	leer voll	1,5 1,5	36 36
ti	182 kg (400 lbs)	leer	1,6	24

CO t» CO VjJ

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Ähnliche Ergebnisse wurden erhalten mit anderen Tieren einschließlich Hunden und Welpen, Katzen, Opossum, Skunk, Kaninchen, Ratte, Meerschweinchen, Gerbil, Fuchs und Waschbär. Obwohl die maximal erlaubte Teilchengröße von Art zu Art etwas variierte, zeigte es sich, daß in jedem Falle eine kritische maximale Teilchengröße existierte oberhalb der die Durchgangszeit durch den Pförtner schnell zunahm.

Ähnlich wurden darmlöslich überzogene Makrokapseln auch an Meerschweinchen und Opossums verfüttert. Es zeigte sich, daß der darmlösliche Überzug eine Lösung der Kapsel im Magen des Opossum 3»5 bis 4,5 h lang verhinderte, aber im Magen von Meei^schweinchen die Kapsel innerhalb von 1 h aufging, was zeigt, daß CAP als darmlöslicher Überzug besser geeignet ist im Magensaft von Opossum als in dem von Schweinen oder Meerschweinchen. Diese mangelnde Übereinstimmung der Lösungszeit solcher darmlöslich überzogener Makrokapseln führt jedoch zu der Möglichkeit des Wärmeabbaus des Kapselinhalts, selbst dann, wenn der darmlösliche Überzug in Takt bleibt. Die Anwendung darmlöslich überzogener Kapseln, die verhältnismäßig groß sind, ist daher kein günstiges Verfahren zur Verabreichung eines wärmeempfindlichen biologischen Mittels an den Zwölffingerdarm (Duodenum) eines Tieres.

Die Schwierigkeiten, die aus den in Tabelle I angegebenen Daten hervorgehen, werden durch das erfindungsgemäße Verfahren vermieden, bei dem darmlöslich überzogene Mikrokapseln angewandt werden, die leicht durch den Magen des Tieres in den Dünndarm hindurchgehen, bevor eine Zerstörung durch den Magensaft oder ein Wärmeabbau eintreten kann_o Es hat sich gezeigt, daß die Form der Mikrokapseln einen gewissen Einfluß auf die Geschwindigkeit der Passage durch den Magenausgang hat, wobei

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Kugeln mit der geringsten Schwierigkeit hindurchgehen. sind Mikroteilchen mit einer ungefähr kugeligen Form erfindungsgemäß bevorzugt·

Die Geschwindigkeit, mit der darmlöslich überzogene Mikrokapseln durch den Hagen eines Schweines in den Dünndarm hindurchgehen, wird durch die in Tabelle II angegebenen Daten gezeigte In federn Falle wurde dem Tier eine schnell lösliche Gelatinekapsel verfüttert, enthaltend Mikroteilchen von Bariumsulfat, die mit einem darmlöslichen Überzug von CAP versehen waren. In den in der Tabelle angegebenen Zeiten (30 bis 90 min) waren die meisten der Perlen von dem Magen in den Dünndarm gelangt und hatten sich gelöst. Die verhältnismäßig wenigen Perlen, die in dem Magen der Tiere blieben, waren noch in Takt·

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Tabelle II Durchgang von Überzogenen Mikroperlen durch, den Magen von. Schweinen in den

Zwölffingerdarm. ' ^;· [

Überzug Füllung Gewicht des

Schweines .

Ztit bis zur Ort der Lösung !lösung ·

Überzogene Mikrokapseln mit einem Maximaldurchmesser von 1,5 mm

CAP

* Überzogene Mikrokapseln CAP „_» mit einem Maximaldurch- . «< messer von 1,5 mm

-*' Überzogene Mikrokapseln CAP mit einem Mäximaldurch-""*. messer von 1,5 mm

■ Überzogene Mikrokapseln CAP

mit einem Kaximaldurch- ' ■" messer von 1,5 mm

Üherzogene Mikrokapseln CAP mit einem Maximaldurchmesser von 1,5 mm

Überzogene Mikrokapseln CAP mit einem Maximaldurchmesser von 1,5 mm

Bariumsulfat (15 lbs)

6,8 kg

Bariumsulfat (30 lbs)

13,6 kg

Bariumsulfat (30 lbs)

13,6 kg¹.

Barium-sulfat ( 60 lbs)

27,2 kg

Barium-sulfat ( 60 lbs)

27,2 kg

Barium-sulfat (300 lbs )

136 kg

30 min-

45 min

30 min

90 min

30 min

50 min

Dünndarm ,	I
Dünndarm	, I
Dünndarm
Dünndarm
Dünndarm	23435 1A-43
Dünndarm ■

Cellulose-acetat-phthalat

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Das Verfahren zum Schutz von jungen Ferkeln durch Impfen von trächtigen Säuen mit Hilfe des erfindungsgemäßen Impfstoffes geht aus den Daten der Tabelle III hervor. Bei diesen Versuchen wurden trächtige Säue einen Monat vor der Geburt der Ferkel mit einem abgeschv/ä/TGE Virus in Form darmlöslich überzogener Mikroperlen (Durchmesser v/eniger als 1,5 mm) enthalten in einer schnell löslichen Kapsel geimpft« Die Mikroperlen umfaßten Zuckerperlen einer geeigneten Größe, auf die der TGE Virus, der durch übliche Verfahren einer Reihenpassage durch ein Gewebekulturraedium und anschließend Gefriertrocknen im Vakuum verdünnt v/orden war, absorbiert war» Bei dem Versuch wurden, der Sau auch Injektionen in die Milchdrüse mit dem abgeschwächten Virus verabreicht, während bei Versuch 4 eine pathogene Porm von TGE Virus (,Z-1) angewandt wurde. Zum Vergleich wurde eine nicht geimpfte Sau und eine Gruppe von 1 Tage alten Ferkeln herangezogen. Bei jedem Versuch wurden die von der geimpften Sau geborenen Ferkel mit Z-1 Virus belastet. Die Ergebnisse zeigen, daß die Impfung der trächtigen Sau einen guten Schutz ergab, obwohl einige wenige der Jungferkel leichte Krankheit ssympfconte zeigten. Wenn die orale Impfung verbunden wurde mit einer Injektion in die erhielten-die Ferkel einen vollständigen Schutz gegen eine starke Einwirkung des Virus.

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Tabelle III Impfung von trächtigen Säuen nit TG-E Virus In darmlöslich überzogenen Mikroperlen«

Versuch Nr.	Versuchs tier	Vaccine Typ (D	Anzahl der Viren bela ten Ferkel	mit ste-
1	trächtige Sau	M-108 · abgeschwächt	10
2		M-108 «	8
3	ti	M-108 "(2)	7
4	t!	Z-1 pathogen	8

Anzahl der erkrankten Ferkel

Anzahl der gestorbenen Ferkel

Überlebende

2
O

O
O
O

100

100 100 100

Vergleichstiere

5 6

trächtige Sau

1 Tag alte Dam

Ferkel nicht geimpft

0 0

(1) Die Menge der Vaccine betrug ungefähr 10' TO IDcq» verabreicht in schnell löslichen Kapseln

(2) In jede Milchdrüse wurden auch 5 x 10 TO IDc₀ von M-108 abgeschwächten Viren indiziert.

(3) Die Dosis,/der die Ferkel belastet wurden, betrug 10* LD^₀ von Z-1 Virus·

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Die Impfung einer trächtigen Sau, wie sie in den in Tabelle III angegebenen Versuchen durchgeführt wurde , erfordert, daß die trächtige Sau ausreichend lange vor der Geburt geimpft wird, um die Bildung von Antikörpern zu ermöglichen. Da nicht vorher gesagt werden kann, ob ein aktiver Befall von TGE in der Herde zur Zeit der Geburt vorliegt, muß jede trächtige Sau routinemäßig geimpft werden, um einen Schutz der Ferkel zu erreichen.

Das erfindungsgemäße Verfahren erübrigt eine routine^- mäßige Impfung auf diese Weise, da die Ferkel bei der Geburt geschützt werden können, wenn zu der Zeit in der Herde TGE auftritt. Obwohl der vollständigste Schutz erreicht wird, wenn man sowohl die Sau (einschließlich Injektion in die Milchdrüse) impft, als auch die jungen Ferkel, ist eine Behandlung der Ferkel allein ebenfalls wirksam, wie aus Tabelle IV hervorgeht, in der die Ergebnisse angegeben sind, die man beim Impfen von Jungferkeln erzielt, die von nicht geimpften Säuen geboren sind· In Tabelle IV werden auch die Ergebnisse^

die man beim Verfüttern eines flüssigen Impfstoffes, d_oh. der nicht darmlöslich überzogen ist, eines abgeschwächten IGE Virus erhäl^fc, verglichen mit denen, die erhalten worden sind mit den erfindungsgemäßen darmlöslich überzogenen Mikroteilchen. Y/ie aus den Werten der Tabelle hervorgeht, war der nicht überzogene abgeschwächte Virus sowohl gegen leichte (Versuche 1, 2 und 5) als auch gegen schwere (Versuche 8 und 9) Beiast/ unwirksam. Im Gegensatz dazu führte der darmlöslich überzogene Impfstoff (Versuche 3» 4» 6, 10 und 11) in jedem Falle zu einem Schutz der Jungferkel in den meisten Fällen ohne daß irgendwelche Zeichen von Krankheit auftraten·

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Tabelle IY

Vergleich der Störung durch abgeschwächtsn P-108 TGE Virus in flüssiger Form und darmlöslich überzogenen P-108 Virus auf Schweine, die/pathogenen TGE Viren be-r-

lastet wurden.

O	Versuch	Alter der	Anzahl	Schützender	Impfstoff
OO _Λ	Nr.	Schweine (Tage)		Form	-,Menge 10^TC ID₅₀
*mmA* *>.	1	2	2	flüssig^	1
	2	2	cm	flüssig	5
	3	.' 2	2	darmlöslich s überzogen** '	1
	4	W	2	darmlöslich überzogen	2
	VJl	CVl	2	flüssig	5
	6	2	2	darmlöslich überzogen	2
	7	2	cvi	Placebo

Belastung

Zeit nach Menge, infi- Nachder Belastung

der Impfung zierende Dosis beobachtete Symp-

(h)" · (PID) tome

Ergebnis

24
24
24
24
48
48
48

100 100 100 100 100 100 100

28	Diarrhö, -» Brechen, Tod "^
30	Diarrhö, ' Brechen, Tod
48	weicher Kot, Überleben
keine	Überleben
30	schwere Diarrhö, 1/2 überlebte
keine	Überleben
24	Brechen, ■ *** Diarrhö, Tod -^

(1) Flüssigkeit von P.K. Zellkultur mit einem Titer von ungefähr '1Cr TG ID₅₀ pro cnr

(2) Pelletisierte Mikroteilchen in einer Kapsel (nicht überzogen) mit einem Titer von ungefähr

10⁵ TC ID_KO pro Kapsel, pu mit

(3) Die Schweine wurden/einem lyophilisierten und rekonstituierten Z-1 Virus belastet. .

Ver such Alter der Nr.

Schweine (Tage)

Anzahl Sohützender Impfstoff

•z Menge Form 10"TC ID _cn

Belastung Ergebnis

Zeit nacH Menge, infi- Nach der BeIasder Impfung zierende Dosis tung beobach-

(h) (PID) tete Symptome

9 10

11 12

3 3

flüssig

2 flüssig

2 darmlöalicjhs überzogen^ '

2 darmlöslich überzogen

2 Placebo

10 000

10 000 10 000

10 000

48	Brechen, Diarrhö, Tod
48 und 72	Diarrhö, Tod
48	1 Schwein leichte Diarr hö, 2. Schwein keine, beide überlebten
keine	Überleben
18	Brechen, Diarrhö, Tod
3 pro cm .

(1) Flüssigkeit von P.K. Zellkultur mit einem Titer von ungefähr IO'' TC ID₀

(2) Pelletisiertes läikroteilchen in einer Kapsel (nicht überzogen) mit einem Titer von ungefähr 10⁵ TC ID₅₀ pro Kapsel,

(3) Die Schweine wurden/einem lyophilisierten und rekonstituierten Z-1 Virus, belastet.

vo
I

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Die abgeschwächte orale Vaccine, die erfindüngsgemäß angewandt wird, kann durch Replikation bzw« Vermehrung des TG-E Virus nach Standardverfahren hergestellt werden. Wenn er aus einer tierischen Quelle gebildet werden soll, muß das Tier zunächst mit lebendem aktiven TGE Virus infiziert werden. Hunde, Schweine und andere Tiere, die anfällig sind, können angewandt werden. Das infizierte Gewebe, hauptsächlich der Dünndarm, werden verrieben, homogenisiert, mit einer geeigneten gepufferten Lösung extrahiert und zentrifugiert, um den Virus zu gewinnen. Der extrahierte Virus wird als nächstes mit Hilfe der Saccharose -Dichte - Gradient —Zentrifugation gereinigt. Die Dosis des Virus wird dann auf eine infizierende Dosis von 50 °/> (ID₅₀) standardisiert.

Der gereinigte standardisierte Virus wird dann lyophilisiert (gefriergetrocknet)_o Das Material wird in flache Schalen gegeben und gefriergetrocknet und Feuchtigkeit bei Bedingungen unterhalb des eutektischen Punktes von Wasser eliminiert. Das lyophilisierte Material muß dann an einem trocknen kühlen Ort gelagert werden, woraufhin das in der Masse lyophilisierte Material zu einem feinen Pulver verkleinert wird durch Zerschlagen in einer Hammer- oder Messermühle. Um die Temperatur niedrig zu halten, wird festes Kohlendioxid zusammen mit vermählen.

Das Pelletisieren ist die nächste Stufe. Der pulverisierte abgeschwächte Virus wird auf Non pareil (Zucker)(oder andere physiologisch geeignete feste Träger) mit dem entsprechenden Durchmesser aufgebracht, wobei geeignete Bindemittel und Substanzen, die eine filmförmige Trennschicht bilden, wie Arsensäure —freier Schellack oder Cellulose-acetat-phthalat (CAP) oder andere in geeigneten Lösungsmitteln und Trocknungsmittel verwendet werden. Zu jeder Zeit sollte darauf geachtet werden,

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den Virus nicht höheren Temperaturen auszusetzen.

Obwohl in der Beschreibung hauptsächlich Wert gelegt worden ist auf TG-E, von. der in erster Linie Schweine befallen werden, kann das erfindungsgemäße Verfahren auch auf andere biologische Substanzen, Krankheiten oder Tiere angewandt werden»

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Claims

Patentansprüche

(i). Pharmazeutische Mittel zur oralen Verabreichung, enthaltend gegenüber dem Magensaft und/oder der Körperwärme empfindliche, vom Darm resorbier "bare biologische Substanzen, dadurch gekennzeichnet , daß sie in feinteiliger Form, gegebenenfalls zusammen mit üblichen Füllstoffen und/oder Zusätzen in Form von Mikroteilchen mit einer kritischen maximalen Größe vorliegen, die einzeln mit einem Überzug aus einer im Magensaft unlöslichen, aber im Darm leicht löslichen Substanz überzogen sind.
2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Mikroteilchen ungefähr kugelförmig sind und einen maximalen Durchmesser von weniger als ungefähr 2,0 mm vorzugsweise weniger als ungefähr 1,5 mm besitzen.
3. Mittel nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß der darmlösliche Überzug Cellulose-acetatphthalat ist.
4. Mittel nach Anspruch 3» dadurch gekennzeichnet, daß eine Dosisform der Mikroteilchen mit dem darmlöslichen Überzug enthalten ist in einer Kapsel, die in der Magenflüssigkeit leicht löslich ist·

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5. Mittel nach Anspruch 1 bis 4> dadurch gekennzeichnet , daß die biologische Substanz auf oder in einem physiologisch geeigneten festen feinteiligen Träger absorbiert ist.
6. Mittel naoii Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet , daß die biologische Substanz, ein über die Darmzotten wirksamer, bzw. resorbierbarer, abgeschwächter Virus-Impfstoff ist.
7. Mittel nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß der Impfstoff TGE-Yakzine ist.

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