DE202005021489U1 - Zusammmensetzung für die Synthese von phosphitylierten Verbindungen - Google Patents
Zusammmensetzung für die Synthese von phosphitylierten Verbindungen Download PDFInfo
- Publication number
- DE202005021489U1 DE202005021489U1 DE202005021489U DE202005021489U DE202005021489U1 DE 202005021489 U1 DE202005021489 U1 DE 202005021489U1 DE 202005021489 U DE202005021489 U DE 202005021489U DE 202005021489 U DE202005021489 U DE 202005021489U DE 202005021489 U1 DE202005021489 U1 DE 202005021489U1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- composition according
- phosphoramidite
- mmol
- synthesis
- activator
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 23
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 46
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title description 45
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 claims abstract description 23
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical group CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 75
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 41
- WIKNOSQXZNVMEG-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1h-imidazol-1-ium;2,2,2-trifluoroacetate Chemical group C[NH+]1C=CN=C1.[O-]C(=O)C(F)(F)F WIKNOSQXZNVMEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 26
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 claims description 22
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- -1 diisopropylamino group Chemical group 0.000 claims description 17
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 17
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical group CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 14
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 12
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 11
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 10
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 9
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 9
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N Adenosine Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 8
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000004404 heteroalkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 5
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 claims description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexen-1-yl)cyclohexan-1-one Chemical compound O=C1CCCCC1C1=CCCCC1 GVNVAWHJIKLAGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 claims description 3
- 101150065749 Churc1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100038239 Protein Churchill Human genes 0.000 claims description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004366 heterocycloalkenyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000000592 heterocycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 3
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims description 3
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 3
- MUJAPBLBQIDQSQ-CCUFREDKSA-N [(2r,3s,4r,5r)-5-(2-amino-6-oxo-3h-purin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxyphosphonamidous acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)N)O[C@H]1N1C(N=C(N)NC2=O)=C2N=C1 MUJAPBLBQIDQSQ-CCUFREDKSA-N 0.000 claims description 2
- UJDCEDHAHYYZHY-UHFFFAOYSA-N aminophosphonous acid;1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound NP(O)O.O=C1C=CNC(=O)N1 UJDCEDHAHYYZHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims 2
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 claims 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 26
- RKVHNYJPIXOHRW-UHFFFAOYSA-N 3-bis[di(propan-2-yl)amino]phosphanyloxypropanenitrile Chemical compound CC(C)N(C(C)C)P(N(C(C)C)C(C)C)OCCC#N RKVHNYJPIXOHRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 21
- KJUGUADJHNHALS-UHFFFAOYSA-N 1H-tetrazole Chemical compound C=1N=NNN=1 KJUGUADJHNHALS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 238000005731 phosphitylation reaction Methods 0.000 description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 8
- DVWBIEBJOQSVAE-UHFFFAOYSA-N 3-benzyl-1h-imidazol-3-ium;2,2,2-trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F.C=1C=CC=CC=1C[NH+]1C=CN=C1 DVWBIEBJOQSVAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 7
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 6
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 5
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- 231100000647 material safety data sheet Toxicity 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WOOCBCNEULTVLH-UHFFFAOYSA-N 1-methylimidazole;1-methyl-1h-imidazol-1-ium;2,2,2-trifluoroacetate Chemical compound C[NH+]1C=CN=C1.CN1C=CN=C1.[O-]C(=O)C(F)(F)F WOOCBCNEULTVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JNJFONBBNLVENC-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazole;trifluoromethanesulfonic acid Chemical compound C1=CNC=N1.OS(=O)(=O)C(F)(F)F JNJFONBBNLVENC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SEYILVDPIQPEAP-HBNTYKKESA-N 2-amino-9-[(2r,4s,5r)-5-[[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxymethyl]-4-hydroxyoxolan-2-yl]-3h-purin-6-one Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[Si](C)(C)C(C)(C)C)O[C@H]1N1C(NC(N)=NC2=O)=C2N=C1 SEYILVDPIQPEAP-HBNTYKKESA-N 0.000 description 2
- QWTBDIBOOIAZEF-UHFFFAOYSA-N 3-[chloro-[di(propan-2-yl)amino]phosphanyl]oxypropanenitrile Chemical compound CC(C)N(C(C)C)P(Cl)OCCC#N QWTBDIBOOIAZEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 5-(hydroxymethyl)cytosine Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1CO RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 2
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 2
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 2
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000002360 explosive Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 125000001981 tert-butyldimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([H])(C([H])([H])[H])[*]C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- WKKCYLSCLQVWFD-UHFFFAOYSA-N 1,2-dihydropyrimidin-4-amine Chemical compound N=C1NCNC=C1 WKKCYLSCLQVWFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IWYHWZTYVNIDAE-UHFFFAOYSA-N 1h-benzimidazol-1-ium;trifluoromethanesulfonate Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F.C1=CC=C2NC=NC2=C1 IWYHWZTYVNIDAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 2'-deoxyguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YKBGVTZYEHREMT-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 2-Oxohexane Chemical compound CCCCC(C)=O QQZOPKMRPOGIEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 2-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1Cl ISPYQTSUDJAMAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFIBTBBTJWHPQV-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-n-(6-oxo-3,7-dihydropurin-2-yl)propanamide Chemical compound N1C(NC(=O)C(C)C)=NC(=O)C2=C1N=CN2 CFIBTBBTJWHPQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXGKKIPUFAHZIZ-UHFFFAOYSA-N 5-benzylsulfanyl-2h-tetrazole Chemical compound C=1C=CC=CC=1CSC=1N=NNN=1 GXGKKIPUFAHZIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 5-ethylsulfanyl-2h-tetrazole Chemical compound CCSC=1N=NNN=1 GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 1
- 0 CO*(*=C)ON Chemical compound CO*(*=C)ON 0.000 description 1
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 1
- MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N Crotonoside Natural products C1=NC2=C(N)NC(=O)N=C2N1[C@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MIKUYHXYGGJMLM-GIMIYPNGSA-N 0.000 description 1
- NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N D-guanosine Natural products C1=2NC(N)=NC(=O)C=2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O NYHBQMYGNKIUIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241001282153 Scopelogadus mizolepis Species 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 125000005600 alkyl phosphonate group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 230000027832 depurination Effects 0.000 description 1
- 238000006642 detritylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940120124 dichloroacetate Drugs 0.000 description 1
- JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N dichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)Cl JXTHNDFMNIQAHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N dithiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 125000004170 methylsulfonyl group Chemical group [H]C([H])([H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124276 oligodeoxyribonucleotide Drugs 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- UQZZQHGRZPTZME-UHFFFAOYSA-N oxazaphospholidine Chemical class C1CPNO1 UQZZQHGRZPTZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XNLICIUVMPYHGG-UHFFFAOYSA-N pentan-2-one Chemical compound CCCC(C)=O XNLICIUVMPYHGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000005642 phosphothioate group Chemical group 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000440 toxicity profile Toxicity 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M triflate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SDEOFVDNFIWADU-UHFFFAOYSA-N trioxaphosphetan-4-amine Chemical class NP1OOO1 SDEOFVDNFIWADU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
- C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
- C07D233/58—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring nitrogen atoms
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J31/00—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds
- B01J31/02—Catalysts comprising hydrides, coordination complexes or organic compounds containing organic compounds or metal hydrides
- B01J31/0234—Nitrogen-, phosphorus-, arsenic- or antimony-containing compounds
- B01J31/0271—Nitrogen-, phosphorus-, arsenic- or antimony-containing compounds also containing elements or functional groups covered by B01J31/0201 - B01J31/0231
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
- C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
- C07F7/02—Silicon compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/06—Pyrimidine radicals
- C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
- C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Zusammensetzung,
enthaltend eine Verbindung, die Enolate bilden kann, und ein Phosphoramidit.
Description
- Gebiet der Erfindung
- Die vorliegende Erfindung betrifft eine Zusammensetzung für Methoden zur Herstellung von phosphitylierten Verbindungen unter Verwendung von spezifischen Aktivatoren, insbesondere zur Synthese von Phosphoramiditen.
- Hintergrund der Erfindung
- Oligonukleotide sind Schlüsselverbindungen in der Biowissenschaft, die auf verschiedenen Gebieten wichtige Rollen haben. Sie werden z.B. als Sonden auf dem Gebiet der Genexpressions-Analyse, als Primer in der PCR oder für die DNA-Sequenzierung verwendet.
- Darüberhinaus gibt es auch eine Vielzahl von potentiellen therapeutischen Anwendungen einschließlich z.B. Antisense-Oligonukleotiden.
- Eine Vielzahl von chemischen Modifikationen wurde in Oligonukleotiden eingeführt, um deren Nützlichkeit für die Diagnose, als Forschungsagenzien und als therapeutische Mittel zu erhöhen, beispielsweise zur Stabilisierung gegen Nukleasen.
- Die Synthese von Oligonukleotiden kann erzielt werden unter Verwendung von sowohl Lösungsphasen- als auch Festphasen-Methoden. Die gegenwärtig bevorzugte Methode ist die Festphasen-Synthese, bei der ein Oligonukleotid auf einem festen Träger hergestellt wird und das Oligonukleotid durch die sequentielle Addition von Nukleotiden wächst.
- Die wachsende Anzahl von Anwendungen erfordert größere Mengen an Oligonukleotiden; daher gibt es ein anhaltendes Bedürfnis für die Entwicklung von verbesserten synthetischen Methoden.
- Für eine allgemeine Übersicht siehe z.B. „Antisense – From Technology to Therapy" Blackwell Science (Oxford, 1997).
- Ein prominenter Typ von Bildungsblöcken bei der Synthese von Oligonukleotiden sind Phosphoramidite; vgl. z.B. S.L. Beaucage, M.H. Caruthers, Tetrahedron Letters 1859 (1981) 22. Diese Phosphoramidite von Nukleosiden, Desoxyribonukleosiden und Derivaten von beiden sind kommerziell erhältlich. Bei der normalen Festphasen-Synthese werden 3'-O-phosphoramidites verwendet, aber bei anderen synthetischen Prozeduren werden auch 5'-O- und 2'-O-Phosphoramidite verwendet. Ein Schritt bei der Herstellung von diesen Nukleosid-Phosphoramiditen ist das Phosphitylieren der (geschützten) Nukleoside. Es ist meistens üblich, die im Nukleosid anwesende Hydroxylgruppe und Aminogruppen und andere funktionelle Gruppen vor dem Phosphitylieren der verbleibenden 3'-, 5'- oder 2'-O-Hydroxylgruppen zu schützen. Mehrere Routen sind für die Herstellung der monomeren (Nukleoside) und polymeren (Nukleotide oder Oligonukleotide) Phosphoramidite bekannt. Die bekannten Methoden resultieren sehr häufig in Problemen der Chemie oder Sicherheit. Für die Verwendung dieser Chemie für größere „Eintopf" („batch")-Synthesen (100 kg-1000 kg) muss die Kosteneffizienz erhöht werden.
- Traditionell wird die Phosphitylierung von Nukleosiden durchgeführt durch Behandlung der geschützten Nukleoside mit einem phosphitylierenden Reagenz wie z.B. Chlor-(2-cyanoethoxy)-N,N-diisopropylaminophosphin, das sehr reaktiv ist und keinen Aktivator benötigt, oder 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (Bis-phos- oder Bis-amidit-Reagenz), das einen Aktivator benötigt.
- Der herkömmlich am häufigsten bei der Phosphitylierungsreaktion verwendete Aktivator ist 1H-Tetrazol.
- Es gibt inhärente Probleme bei der Verwendung von 1H-Tetrazol, insbesondere wenn eine Synthese in größerem Maßstab durchgeführt wird. Beispielsweise ist bekannt, dass 1H-Tetrazol explosiv und toxisch ist. Entsprechend dem Materialsicherheitsdatenblatt („material safety data sheet", MSDS) kann 1H-Tetrazol (1-H-Tetrazol, 98%) bei Einatmung, Einnahme oder Absorption durch die Haut hindurch gesundheitsschädlich sein.
- Außerdem ist 1H-Tetrazol teuer. Selbst bei einer Synthese in großem Maßstab hat es eine beträchtliche Einwirkung auf die Herstellungskosten der Oligonukleotide.
- Das MSDS stellt auch fest, dass, 1H-Tetrazol explodieren kann, wenn es über seinen Schmelzpunkt von 155°C hinaus erhitzt wird und kann sehr empfindliche explosive metallische Verbindungen bilden. Im Falle der Synthese in großem Maßstab in einem Kessel würde 1H-Tetrazol eine wesentliche Gefahr für den Menschen und seine Umgebung darstellen.
- Zusätzlich ist bekannt, dass 1H-Tetrazol während seiner Lagerung, Verwendung und Beseitigung eine besondere Handhabung erfordert.
- 1-H-Tetrazol und die verwandten Derivate, z. B. 5-Ethylthio-1H-tetrazol, 5-Benzylthio-1H-tetrazol haben auch das Potential für eine Zersetzung des Zielmoleküls. Daher wurde in verschiedenen Publikationen über die Spaltung der säureempfindlichen Schutzgruppe berichtet (Krotz et al, Tetrahedron Letters, 1997, 38, 3875).
- Unabsichtliche Deprotektionen [Entschützungen] der säureempfindlichen Schutzgruppe sind auch bei der Verwendung von Chlor-(2-Cyanoethoxy)-N,N-diisopropylaminophosphin bekannt. Neben der Tendenz zur Spaltung der verwendeten Schutzgruppen wird dieses Phosphitylierungsreagenz in größeren Mengen des 3'-3'-Isomeren resultieren. Die resultierenden Amidite müssen durch einen zeit- und kostenaufwendigen Chromatographie-Schritt gereinigt werden.
- Insbesondere bei der Verwendung für die Phosphitylierung von oligomeren Phosphoramiditen resultierten die bekannten Methoden zumeist in Zersetzung oder komplexen Mischungen des Zielmoleküls und von Nebenprodukten.
- Die Verwendung von bis-Phos mit bestimmten Aktivatoren ist im Allgemeinen für monomere Nukleosidamidite bekannt, aber im Falle von Oligonukleotiden machte die geringe Reaktivität diese Näherung sehr kompliziert.
- Die niedrige Reaktivität resultierte auch in einer langen Reaktionsdauer (2-6 Stunden). Die Vermeidung der langen Reaktionszeit wird die Verwendung eines großen Überschusses an Phosphitylierungsmittel und Aktivator erfordern. Am Ende wird diese Art der Reaktionsführung auch zusätzliche Reinigungsschritte erfordern.
-
EP 0 906 917 A2 und Hayakawa et al., J. Am. Chem. Soc. 120 (1998) 12395-12401 offenbaren die Verwendung von Imidazoliumtriflat zur Synthese von Phosphoramiditen. Ausbeute und Reinheit der beschriebenen Synthese konnten nicht wiederholt werden. - Außerdem wird die Anwendung des Verfahrens von Hayakawa mit der Verwendung eines Aktivators einhergehen, der getrennt hergestellt, isoliert und gereinigt wurde. Nach der Reinigung des wasserempfindlichen Aktivators ist es notwendig, diesen Aktivator unter vollständig trockenen Bedingungen aufzubewahren.
- Die Empfindlichkeit und die niedrige Reaktivität dieses Aktivators werden in einer komplizierten Handhabung resultieren, welche für die Synthese von Amiditen in großem Maßstab schwierig ist.
- In allen Experimenten mit diesem Aktivator von Hayakawa müssen die resultierenden Amidite in einem kostenintensiven Chromatographie-Schritt gereinigt werden.
- Jedoch war in allen Fällen das Ergebnis der Phosphitylierungsreaktion unvollständig und ineffizient, und daher ist ein Reinigungsschritt immer ein wesentliches Erfordernis.
- Die Phosphitylierung von empfindlichen Oligonukleotiden endete zumeist in einer Zersetzung.
- Die Ausbeuten und Reinheit der beschriebenen Synthese konnten nicht wiederholt werden, weil die verwendeten Imidazoliumtriflate einen hohen nukleophilen Charakter und eine hohe hygroskopische Tendenz haben. Diese Eigenschaften werden im Endergebnis zu wesentlichen Mengen an Zersetzung und Hydrolyse führen. Die beschriebenen Aktivatoren wurden in ihrer reinen Form isoliert und verwendet.
- Diese Methode für die Synthese von Amiditen erfordert eine Flash-Chromatographie zur Reinigung der Zielverbindung.
- Zusätzlich verwendete Hayakawa die Verbindung zur Bildung der Internukleotid-Bindung (Kondensation des Amidits mit einem Nukleosid).
- Hayakawa et al., J. Org. Chem. 61 (1996) 7996-7997 offenbaren die Verwendung von Benzimidazoliumtriflat zur Kondensation eines Phosphoramidits mit einem Nukleosid.
- Hayakawa et al., J. Am. Chem. Soc. 123 (2001) 8165-8176 offenbaren die Verwendung von Säure/Azol-Komplexen zur Kondensation eines Phosphoramidits mit einem Nukleosid.
- Arnold et al., Collect. Czech. Chem. Commun. 54 (1989) 523-532 offenbaren eine automatisierte Chloridit- und Amidit-Synthese von Oligodesoxyribonukleotiden und unter anderem die Verwendung von 1-Methylimidazol bei der Kondensation eines Phosphoramidits mit einem Nukleosid.
- Zusammenfassung der Erfindung
- Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, eine Zusammensetzung für eine Methode zur Herstellung von phosphitylierten Verbindungen bereitzustellen, die zumindest einige der Nachteile des Standes der Technik überwindet.
- Es ist eine weitere Aufgabe der Erfindung, einen Aktivator bereitzustellen, der im Vergleich zu Aktivatoren aus dem Stand der Technik verbesserte Eigenschaften aufweist.
- Es ist eine weitere Aufgabe der Erfindung, eine Aktivator/Additiv-Mischung bereitzustellen, die im Vergleich zu Aktivatoren aus dem Stand der Technik verbesserte Eigenschaften aufweist. In einem Aspekt stellt die vorliegende Erfindung eine Methode zur Herstellung einer phosphitylierten Verbindung zur Verfügung, welche den Schritt beinhaltet:
- – Umsetzen einer Hydroxyl enthaltenden Verbindung mit einem phosphitylierenden Mittel in der Gegenwart eines Aktivators mit der Formell worin R = Alkyl, Cycloalkyl, Aryl, Aralkyl, Heteroalkyl, Heteroaryl R1, R2 = entweder Wasserstoff oder bilden zusammen einen 5- oder 6-gliedrigen Ring X1, X2 = unabhängig entweder N oder CH Y = H oder Si(R4)3, mit R4 = Alkyl, Cycloalkyl, Aryl, Aralkyl, Heteroalkyl, Heteroaryl B = deprotonierte Säure.
- Der Aktivator kann in stöchiometrischer oder katalytischer Menge (3 bis 50 Mol%, vorzugsweise 10 bis 30 Mol%) oder im Überschuss (bis zu 300 Mol%) verwendet werden.
-
- Die Herstellung dieser Aktivatoren ist beispielsweise in Hayakawa et al, J. Am. Chem. Soc. 123 (2001) 8165-8176 beschrieben.
- In einer Ausführungsform wird der Aktivator in Kombination mit einem Additiv verwendet. Additive können unter der deprotonierten Form der Verbindungen mit der Formel I und anderen heterocyclischen Basen wie z.B. Pyridin ausgewählt werden. Geeignete Verhältnisse zwischen dem Aktivator und dem Additiv sind 1:1 bis 1:10.
- In einer bevorzugten Ausführungsform kann der Aktivator gemäß eines „in situ"-Verfahrens hergestellt werden. In diesem Fall wird der Aktivator nicht isoliert, was zu verbesserten Ergebnissen der Reaktion führte. Die Hydrolyse oder Zersetzung des Zielmoleküls wird unterdrückt.
- Für eine hohe Ausbeute bei der Phosphitylierung in 3'- und/oder 5'-Position von Oligonukleotiden (Di-, Tri-, Tetra-, Penta-, Hexa-, Hepta- und Oktamere) ist die „in situ"-Herstellung des Aktivators und die Kombination mit einem Additiv bevorzugt.
- Wie oben beschrieben, ist die Phosphitylierung besonders nützlich für die Synthese von Oligonukleotiden und die Baustein-Phosphoramidite. Daher umfasst die Hydroxyl enthaltende Verbindung in einer bevorzugten Ausführungsform einen Zuckerteil, z.B. ein Nukleosid oder ein daraus abgeleitetes Oligomer. Derartige Nukleoside sind z.B. Adenosin, Cytosin, Guanosin und Uracil, Desoxyadenosin, Desoxyguanosin, Desoxythymidin, Desoxycytosin und Derivate hiervon, die optional Schutzgruppen umfassen.
- Die Methode der vorliegenden Erfindung ist besonders nützlich für die Phosphitylierung von Oligonukleotiden (Di-, Tri-, Tetra-, Penta-, Hexa-, Hepta- und Oktamere). Derartige phosphitylierte Oligonukleotide werden z.B. für die Synthese von großen Oligonukleotiden durch ein Fragment-Kondensations-Konzept verwendet.
- Normalerweise werden sie an deren heterocyclischer Funktionalität und an ihren Hydroxyl enthaltenden Gruppen geschützt, außer an derjenigen, die phosphityliert werden soll. Typischerweise werden als Schutzgruppen für die 5'-OH-Gruppe Dimethoxytrityl, Monomethoxytrityl oder Silyl enthaltende Schutzgruppen (z.B. TBDMS) verwendet, wodurch die Phosphitylierung der 3'-OH-Gruppe ermöglicht wird.
- Die 3'-OH-Gruppe kann ebenfalls mit einer Schutzgruppe (LEV, TBDMS usw.) geschützt werden und das entschützte 5'-OH wird die 5'-O-Phosphitylierung von Nukleosiden oder Nukleotiden ermöglichen.
- Die Methoden der Phosphitylierung können mit identischen Ergebnissen für die Synthese von 3'- oder 5'-Phosphoramiditen verwendet werden.
- Das resultierende Zielmolekül der Phosphitylierungsreaktion ist in einer Ausführungsform ein Phosphoramidit und hat die Struktur: Z stellt eine Abgangsgruppe z.B. CH3, C2H5, CH2C6H5, -CH2CH2CN, -CH2CH=CHCH2CN, para-CH2C6H4CH2CN, -(CH2)2-5N(H)COCF3, -CH2CH2Si(C6H5)2CH3 oder -CH2CH2N(CH3)COCF3 dar und worin R3 Alkyl mit 1 bis ungefähr 6 Kohlenstoffatomen ist; oder R3 ist ein Heterocycloalkyl oder Heterocycloalkenyl-Ring, der von 4 bis 7 Atome enthält, und bis zu 3 Heteroatome hat, die unter Stickstoff, Schwefel und Sauerstoff ausgewählt sind, und „Verbindung" ist der Rest der Hydroxy enthaltenden Verbindung, d.h. ein Nukleosid, Nukleotid oder ein Oligonukleotid.
- In diesem Fall ist das P(III)-Atom mit zwei Sauerstoffatomen (oder bildet zwei P-O-Bindungen) und einem Stickstoffatom, das zu einer Aminogruppe gehört, vorzugsweise Diisopropylamin, Diethylamin oder andere sekundäre Amine, verbunden.
-
- In diesem Fall hat das P(III)-Atom Bindungen zu drei Sauerstoffatomen (drei P-O-Bindungen bildend) und keine Bindung mit dem Stickstoff.
- Im Allgemeinen kann das Phosphitylierungsmittel das gleiche sein wie bei den Phosphitylierungsreaktionen unter Verwendung von 1H-Tetrazol.
- In einer bevorzugten Ausführungsform hat es die Formel in der Z eine Abgangsgruppe wie z.B. CH3, C2H5, CH2C6H5, -CH2CH2CN, CH2CH=CHCH2CN, para-CH2C6H4CH2CN, -(CH2)2-5N(H)COCF3, CH2CH2Si(C6H5)2CH3 oder -CH2CH2N(CH3)COCF3 darstellt und R1 und R2 sind unabhängig sekundäre Aminogruppen N(R3)2, worin R3 ein Alkyl mit von 1 bis ungefähr 6 Kohlenstoffatomen ist; oder R3 ist ein Heterocycloalkyl- oder Heterocycloalkenylring, der von 4 bis 7 Atome enthält, und bis zu 3 Heteroatome hat, die unter Stickstoff, Schwefel und Sauerstoff ausgewählt sind.
- Ein typisches phosphitylierendes Mittel ist 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-Tetraisopropylphosphordiamidit.
- Andere bevorzugte phosphitylierende Reagentien sind Oxazaphospholidin-Derivate wie sie beschrieben sind in N. Ok et al., J. Am. Chem. Soc. 2003, 125, 8307 bis 8317, das hierin durch Bezugnahme enthalten ist. Dieses phosphitylierende Mittel ermöglicht die Synthese von Oligonukleotiden, worin die Internukleotid-Bindung auf eine stereoselektive Weise zu Phosphothioaten umgewandelt werden kann. Derartige diastereoselektiv hergestellte internukleoditische Phosphothioat- Verknüpfungen haben eine viel versprechende Auswirkung auf die Verwendung von Phosphothioaten als Antisense-Arzneimittel.
- Geeignete Beispiele für deprotonierte Säuren B- sind Triflat, Trifluoracetat, Dichloracetat, Mesyl, Tosyl, o-Chlorphenolat. Säuren mit einem pKa unterhalb von 4,5 sind bevorzugt. Vorzugsweise haben sie eine geringe Nukleophilie.
- In einer Ausführungsform wird die Reaktion in Gegenwart von Molekülsieben oder anderen Wasser bindenden Reagentien durchgeführt. Im Allgemeinen sollte Wasser während der Reaktion ausgeschlossen oder durch ein ausgewähltes Trockenmedium fixiert sein.
- Es ist entweder möglich, den Aktivator der vorliegenden Erfindung mit dem phosphitylierenden Mittel zu kombinieren und die Hydroxyl-Komponente später hinzuzufügen. Es ist auch möglich, den Aktivator mit der Hydroxyl enthaltenden Verbindung zu kombinieren und das phosphitylierende Mittel anschließend hinzuzufügen.
- Im Falle der Verwendung eines Additivs wird der Aktivator mit der Hydroxy-Komponente gemischt, bevor das phosphitylierende Mittel hinzu gegeben wird.
- Für die „in situ"-Erzeugung des Aktivators wird die ausgewählte Säure vorzugsweise nach der Zugabe des Additivs bei einer kontrollierten Reaktionstemperatur hinzu gegeben.
- Das phosphitylierende Mittel kann vor oder nach der Zugabe der ausgewählten Säure hinzugefügt werden.
- In Bezug auf die Zugabe von Säure und phosphitylierendem Mittel kann die Nukleosid-Komponente am Ende oder zu Beginn zugefügt werden.
- In einer bevorzugten Ausführungsform werden die entsprechende Base des Aktivators, die Hydroxyl enthaltende Verbindung und das phosphitylierende Mittel vereinigt und die Säure wird hinzugefügt, um die Reaktion zu starten.
- Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist die Verwendung eines Aktivators mit der Formel I worin
R = Alkyl, Cycloalkyl, Aryl, Aralkyl, Heteroalkyl, Heteroaryl
R1, R2 = entweder Wasserstoff oder bilden zusammen einen 5- oder 6-gliedrigen Ring
X1, X2 = unabhängig entweder N oder CH
Y = H oder Si(R4)3, mit R4 = Alkyl, Cycloalkyl, Aryl, Aralkyl, Heteroalkyl, Heteroaryl
B = deprotonierte Säure
als einem Aktivator zur Phosphitylierung von Hydroxyl enthaltenden Verbindungen mit einem phosphitylierenden Mittel. - Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist die Kombination des Aktivators und einer nicht protonierten Base (Additiv), welche ein Gleichgewicht zwischen beiden Spezies bilden wird. Das resultierende Gleichgewicht zeigt im Vergleich zu Aktivatoren aus dem Stand der Technik verbesserte Eigenschaften.
- Insbesondere in Verbindung mit der Verwendung von Aceton wird der Aktivator/Katalysator nicht die bekannten Nebenreaktionen (Zersetzung oder Bildung des 3'-3'- oder 5'-5'-Homologen) zeigen. Aceton hat auch die Fähigkeit, Edukte und Reagentien aufzulösen.
- Gemäß dem Stand der Technik führt im Falle von längeren Reaktionszeiten die Freisetzung von Diisopropylamin und die Gegenwart von aktiviertem Bis-Phos zu einer Zersetzung der Zielverbindung (Detritylierung, CE-Spaltung, Depurinisierung oder Spaltung von anderen Schutzgruppen). Die Gegenwart von Aceton und die spezifische Formulierung des Aktivators reduziert diese Tendenzen.
- Die Gegenwart von Aceton dämpft die Aktivität jeglicher Menge an Diisopropylamin (DIPA), das während der Phosphitylierungsreaktion freigesetzt wird. Dies kann mit ähnlichen Resultaten (keine Zersetzung) für die Phosphitylierung von kürzeren und längeren Oligonukleotiden herangezogen werden. Andere Ketonverbindungen mit der Formel Rx-C(=O)-Ry, worin Rx und Ry unabhängig C1-C6-Alkyl sind oder zusammen ein Cycloalkyl bilden, können ebenso benutzt werden, solange sie in der Lage sind, Enolate in der Gegenwart von z.B. Aminen bilden und eine CH2-Gruppe in der α-Stellung haben.
- Zusätzlich erlaubt die Verwendung von Aceton eine längere Reaktionszeit, ohne das die 5'-O-Schutzgruppe gespalten wird. In beiden Fällen wird die Verwendung von Aceton die verschiedenen Schutzgruppen schützen und die bekannte Tendenz zur Depurinisierung vermeiden.
- Aceton hat auch ein besseres Toxizitätsprofil und verbesserte Umwelteigenschaften verglichen mit z.B. Acetonitril und ist nicht teuer.
- Eine weitere Aufgabe ist daher die Verwendung von Aceton als einem Reaktionsmedium oder Co-Lösungsmittel bei der Synthese von Phosphoramiditen.
- Die Kombination des Aktivators mit einer bestimmten Menge an Additiven unterstützt eine höhere Effizienz des Phosphitylierungsverfahrens von längeren und empfindlichen Oligonukleotiden (3' oder 5' entschützt).
- Typischerweise nimmt die Reaktivität des Reagenz zu, um die Synthese nach 2-5 Minuten zu beenden.
- Indem die hierin beschriebenen Methoden verwendet werden, erübrigt sich ein weiterer Reinigungsschritt.
- Die resultierenden Monomer- und Oligomeramidite können für die Synthese von Oligonukleotiden in Festphase und in Lösungsphase verwendet werden.
- Der Aktivator oder die Aktivator/Additiv-Kombination ist besonders nützlich bei der Synthese von Adenosinphosphoramidit, Cytosinphosphoramidit, Guanosinphosphoramidit und Uracilphosphoramidit, Desoxyadenosinphosphoramidit, Desoxyguanosinphosphoramidit, Desoxythymidinphosphoramidit, Desoxycytosinphosphoramidit wie auch Oligonukleotidphosphoramiditen mit der Formel Xn, worin jedes X ausgewählt ist unter A, dA, C, dC, G, dG, U, dT und n = 2 bis 30, vorzugsweise 2 bis 12, mehr bevorzugt 2 bis 8 oder 2 bis 6 und Derivate hiervon, die Schutzgruppen umfassen.
- Wie es hierin verwendet wird, umfassen Oligonukleotide auch Oligonukleoside, Oligonukleotidanaloga, modifizierte Oligonukleotide, Nukleotidmimetika („nucleotide mimetics") und ähnliche in der Form von RNA und DNA. Im Allgemeinen umfassen diese Verbindungen ein Rückgrat von verbundenen monomeren Untereinheiten, in denen jede verbundene monomere Untereinheit direkt oder indirekt mit einer heterocyclischen Baseneinheit verbunden ist. Die Verknüpfungen, welche die monomeren Untereinheiten, die monomeren Untereinheiten und die heterocyclischen Baseneinheiten verbinden, können von variabler Struktur sein, so dass es eine Vielzahl von Motiven für die resultierenden Verbindungen gibt.
- Im Stand der Technik bekannte Modifizierungen sind die Modifizierung der heterocyclischen Basen, der Zucker oder der Verknüpfungen, welche die monomeren Untereinheiten verbinden. Variationen von Internukleotid-Verknüpfungen sind z.B. in der
WO 2004/011474 , beginnend auf Seite 11 unten, beschrieben, die hierin durch Inbezugnahme enthalten sein soll. - Typische Derivate sind Phosphorthioate, Phosphordithioate, Methyl- und Alkylphosphonate und Phosphonacetoderivate.
- Weitere typische Modifikationen sind beim Zuckerteil. Entweder ist die Ribose durch einen unterschiedlichen Zucker ersetzt oder ein oder mehrere der Positionen sind mit anderen Gruppen wie z.B. F, O-alkyl, S-Alkyl, N-Alkyl substituiert. Bevorzugte Ausführungsformen sind 2'-Methyl und 2'-Methoxyethoxy. Alle diese Modifikationen sind im Stand der Technik bekannt.
- In Hinblick auf den Teil der heterocyclischen Base gibt es eine Vielzahl von anderen synthetischen Basen, die im Stand der Technik benutzt werden, wie z.B. 5-Methylcytosin, 5-Hydroxymethylcytosin, Xanthin, Hypoxanthin, 2-Aminoadenin, 6- oder 2-Alkylderivate von Adenin und Guanin, 2-Thiouracyl. Solche Modifikationen sind auch in der
WO 2004/011474 , beginnend auf Seite 21, offenbart. - Wenn sie bei der Synthese verwendet werden, haben diese Basen normalerweise Schutzgruppen, z.B. N-6-Benzyladenin, N-4-Benzylcytosin oder N-2-Isobutyrylguanin. Im Allgemeinen müssen alle reaktiven Gruppen, die nicht in einer weiteren Reaktion reagieren sollen, geschützt werden, insbesondere die Hydroxylgruppen des Zuckers.
- In Ausführungsformen bezogen auf die Synthese von Oligonukleotidphosphoramidit ist es nützlich, die Reaktion in der Gegenwart von Aceton oder anderen Ketonen durchzuführen, wie z.B. Aceton, Butanon, Pentanon, Hexanon, Cyclohexanon, die entweder als solche als Reaktionsmedium benutzt werden können oder als ein Co-Lösungsmittel für andere Lösungsmittel.
- Die Erfindung wird weiter anhand der folgenden nicht einschränkenden Beispiele erklärt.
- Beispiel 1
- Synthese von 5'-O-DMTr-T-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 5,0 g 5'-O-DMTr-T-3'-OH (9,2 mmol, 1,0 Äquivalente) und 2,34 g Methylimidazoliumtrifluoracetat (11,9 mmol, 1,3 Äquivalente) werden in 100 ml Dichlormethan aufgelöst und 3 g Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt und die Mischung für 10 Minuten gerührt. 3,8 ml 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'- Tetraisopropylphosphordiamidit (11,9 mmol, 1,3 Äquivalente) werden hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 2 Stunden vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 95%
- Beispiel 2
- Synthese von 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von Benzylimidazoliumtrifluoracetat
- 322 mg Methylimidazoliumtrifluoracetat (1,64 mmol, 1,05 Äquivalente) und 1,0 g 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-OH (1,56 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 10 ml Dichlormethan aufgelöst und 500 mg Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt. 30 Minuten später werden 0,52 ml 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-Tetraisopropylphosphordiamidit (1,64 mmol, 1,05 Äquivalente) und 0,1 ml Aceton zu der gerührten Lösung hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 30 Minuten vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 74 %
- Beispiel 3
- Synthese von 5'-O-DMTr-dCBz-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von Methylimidazoliniumtrifluoracetat
- 9,51 g 5'-O-DMTr-dCBz-3'-OH (15 mmol, 1.0 Äquivalente) werden in 80 ml Aceton und 80 ml Acetonitril aufgelöst. 6,17 g Methylimidazoliumtrifluoracetat (32 mmol, 2,1 Äquivalente) und 9,64 g 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-Tetraisopropylphosphordiamidit (32 mmol, 2,1 Äquivalente) werden zu der gerührten Lösung hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 30 Minuten vollständig. 500 ml Ethylacetat werden hinzugefügt, die Lösung zweimalig mit 250 ml NaHCO3-Lösung und mit 250 ml Kochsalz-Lösung extrahiert. Die organische Schicht wird mit MgSO4 getrocknet und bis zur Trockenheit eingedampft. Der Rückstand wird in 40 ml Dichlormethan aufgelöst, 250 ml Pentan werden hinzu gegeben, Überstehendes wird abdekantiert und der Rückstand wird unter reduziertem Druck getrocknet, um einen farblosen Schaum zu bilden. Ausbeute (12,0 g, 14,4 mmol): 96%, Reinheit (bestimmt mittels HPLC): 93%.
- Beispiel 4
- Synthese von 5'-O-DMTr-dABz-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von Benzylimidazoliumtrifluoracetat
- 38 mg Benzylimidazoliumtrifluoracetat (0,14 mmol, 1,5 Äquivalente) werden in 5 ml Acetonitril aufgelöst und 300 mg Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt. 145 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-Tetraisopropylphosphordiamidit (0,46 mmol, 5,0 Äquivalente) werden hinzugefügt. 30 Minuten später werden 61 mg 5'-O-DMTr-dABz-3'-OH (0,09 mmol, 1,0 Äquivalente) zugefügt und die Lösung über Nacht gerührt. Die Reaktion is nach 17 Stunden vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 91%.
- Beispiel 5
- Synthese von 5'-O-DMTr-dCBz-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung einer katalytischen Menge von Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 500 mg 5'-O-DMTr-dCBz-3'-OH (0,79 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 18 ml Dichlormethan und 1 ml DMF aufgelöst, 3 g Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt. 50 mg Methylimidazoliumtrifluoracetat (0,17 mmol, 0,2 Äquivalente) und 276 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (0,87 mmol, 1,1 Äquivalente) werden zu der gerührten Lösung hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 24 Stunden vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 89%.
- Beispiel 6
- Synthese von 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung einer katalytischen Menge von Benzylimidazoliumtrifluoracetat
- 5 mg Benzylimidazoliumtrifluoracetat (0,02 mmol, 0,2 Äquivalente) werden in 5 ml Acetonitril aufgelöst und 300 mg Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt. 145 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-Tetraisopropylphosphordiamidit (0,46 mmol, 5,0 Äquivalente) werden zu der gerührten Lösung hinzugefügt. 1 Stunde später werden 60 mg 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-OH (0,09 mmol, 1,0 Äquivalente) zugefügt und die Lösung über Nacht gerührt. Die Reaktion ist nach 48 Stunden vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 90%.
- Beispiel 7
- Synthese von 5'-O-DMTr-T-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung einer katalytischen Menge von Benzylimidazoliumtrifluoracetat
- 50 mg Benzylimidazoliumtrifluoracetat (0,18 mmol, 0,18 Äquivalente) und 500 mg 5'-O-DMTr-T-3'-OH (0,92 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 28 ml Dichlormethan aufgelöst und 3 g Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt. 350 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-Tetraisopropylphosphordiamidit (1,0 mmol, 1,1 Äquivalente) werden zu der gerührten Lösung hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 25 Stunden vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 90%.
- Beispiel 8
- Synthese von 5'-O-DMTr-T-P(S)-dCBz-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 100 mg 5'-O-DMTr-T-P(S)-dCBz-3'-OH (0,10 mmol, 1,0 Äquivalente) und 24,4 mg Methylimidazoliumtrifluoracetat (0,11 mmol, 1,1 Äquivalente) werden in 10 ml Dichlormethan aufgelöst, 200 mg Molekularsieb 4Å werden hinzugefügt. 32 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (0,10 mmol, 1,0 Äquivalente) werden zu der gerührten Lösung hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 24 Stunden vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 60%.
- Beispiel 9
- Synthese von 5'-O-DMTr-dCBz-P(S)-dGiBu-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 100 mg 5'-O-DMTr-dCBz-P(S)-dGiBu-3'-OH (0,09 mmol, 1,0 Äquivalente) und 17,8 mg Methylimidazoliumtrifluoracetat (0,09 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 10 ml Dichlormethan aufgelöst, 200 mg Molekularsieb 4Å werden hinzugefügt. 28 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (0,09 mmol, 1,0 Äquivalente) werden zu der gerührten Lösung hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 3 Stunden beendet. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 56%.
- Beispiel 10
- Synthese von 5'-O-DMTr-dGiBu-P(O)-dGiBu-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 106 mg 5'-O-DMTr-dGiBu-P(O)-dGiBu-3'-OH (0,10 mmol, 1,0 Äquivalente) und 30 mg Methylimidazoliumtrifluoracetat (0,15 mmol, 1,5 Äquivalente) werden in 10 ml Aceton aufgelöst, 500 mg Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt. Nach 30 Minuten werden 34 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (0,11 mmol, 1,1 Äquivalente) zu der gerührten Lösung hinzugefügt. Die Reaktion ist vollständig nach 4 Stunden. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 55%.
- Beispiel 11
- Synthese von 5'-O-DMTr-T-P(S)-dCBz-P(S)-T-P(S)-dCBz-P(S)-dCBz-P(S)-dCBz-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 10 mg 5'-O-DMTr-T-P(S)-dCBz-P(S)-T-P(S)-dCBz-P(S)-dCBz-P(S)-dCBz-3'-OH (3,6 μmol, 1,0 Äquivalente) und 1,4 mg Methylimidazoliumtrifluoracetat (7,2 μmol, 2,0 Äquivalente) werden in 0,5 ml Aceton und 0,5 ml Acetonitril aufgelöst, 50 mg Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt. Nach 30 Minuten werden 5,8 μl 2-Cyanoethyl- N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (18,1 μmol, 5,0 Äquivalente) zu der gerührten Lösung hinzugefügt. Die Reaktion ist vollständig nach 5 Stunden. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 71%.
- Beispiel 12
- Synthese von 5'-O-DMTr-dT-3'-O-phosphoramidit über die „in situ"-Erzeugung von N-Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 1,00 g 5'-O-DMTr-dT-3'-OH (1,84 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 2 ml Dichlormethan und 2 ml Aceton aufgelöst. 300 mg N-Methylimidazol (3,68 mmol, 291 μl, 2,0 Äquivalente) und 665 mg 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-Tetraisopropylphosphordiamidit (2,21 mmol, 700 μl, 1,2 Äquivalente), gefolgt von 1,00 g Molekularsieb 3Å werden hinzugefügt. Zu dieser gerührten Suspension werden tropfenweise 230 mg Trifluoressigsäure (2,02 mmol, 159 μl, 1,1 Äquivalente) in 1 ml Dichlormethan gegeben. Die Reaktion ist nach 3 Stunden vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 99%
- Beispiel 13
- Synthese von 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-O-phosphoramidit über die „in situ"-Erzeugung von N-Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 1,00 g 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-OH (1,56 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 2 ml Dichlormethan und 2 ml Aceton aufgelöst. 255 mg N-Methylimidazol (3,11 mmol, 247 μl, 2,0 Äquivalente) und 563 mg 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (1,87 mmol, 593 μl, 1,2 Äquivalente), gefolgt von 1,00 g Molekularsieb 3Å, werden hinzugefügt. Zu dieser gerührten Lösung werden 195 mg Trifluoressigsäure (1,72 mmol, 135 μl, 1,1 Äquivalente) in 1 ml Dichlormethan tropfenweise hinzugefügt. Die Reaktion ist vollständig nach 5 Stunden. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 88%.
- Beispiel 14
- Synthese von 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung einer N-Methylimidazoliumtrifluoracetat-N-Methylimidazol-Mischung
- 1,00 g 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-OH (1,56 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 2 ml Dichlormethan und 2 ml Aceton aufgelöst. 2,00 g Molekularsieb 3Å, 367 mg N-Methylimidazoliumtrifluoracetat (1,87 mmol, 1,2 Äquivalente) und 383 mg N-Methylimidazol (4,68 mmol, 371 μl, 3,0 Äquivalente) werden hinzu gegeben, gefolgt von 563 mg 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (1,87 mmol, 593 μl, 1,2 Äquivalente). Die Reaktion ist vollständig nach 20 Minuten. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 90%.
- Beispiel 15
- Synthese von 5'-O-DMTr-dCBz-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung einer N-Methylimidazoliumtrifluoracetat-N-Methylimidazol-Mischung
- 1,00 g 5'-O-DMTr-dGiBu-3'-OH (1,56 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 2 ml Dichlormethan und 2 ml Aceton aufgelöst. 2,00 g Molekularsieb 3Å, 367 mg N-Methylimidazoliumtrifluoracetat (1,87 mmol, 1,2 Äquivalente) und 383 mg N-Methylimidazol (4,68 mmol, 371 μl, 3,0 Äquivalente) werden hinzugegeben, gefolgt von 563 mg 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (1,87 mmol, 593 μl, 1,2 Äquivalente). Die Reaktion ist vollständig nach 20 Minuten. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 90%.
- Beispiel 16
- Synthese von 5'-O-DMTr-dCBz-P(O)-dABz-3'-O-phosphoramidit über die „in situ"-Erzeugung von Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 100 mg 5'-O-DMTr-dCBz-P(O)-dABz-3'-OH (90,7 μmol, 1,0 Äquivalente) werden in 200 μl Dichlormethan und 200 μl Aceton aufgelöst. 15 mg N-Methylimidazol (180 μmol, 14 μl, 2,0 Äquivalente) und 54,6 mg 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (181 μmol, 57 μl, 2,0 Äquivalente), gefolgt von 100 mg Molekularsieb 3Å, werden hinzugefügt. Zu dieser gerührten Suspension werden tropfenweise 100 μl einer 1M-Lösung von Trifluoressigsäure in Dichlormethan hinzugefügt. Die Reaktion ist vollständig nach 30 Minuten. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 90%.
- Beispiel 17
- Synthese von 5'-O-phosphoramidit-dT-P(O)-dGiBu-P(O)-dGiBu-3'-O-Lev unter Verwendung von N-Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 2,0 g 5'-HO-dT-P(O)-dGiBu-P(O)-dGiBu-3'-O-Lev (1,6 mmol, 1,0 Äquivalente) wurden in 80 ml Aceton aufgelöst, 500 mg Methylimidazoliumtrifluoracetat (2,5 mmol, 1,56 Äquivalente) und 4,0 g Molekularsieb 3Å wurden hinzugefügt. 2,76 ml 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (2,62 g, 8,7 mmol, 5 Äquivalente) wurden hinzugefügt und nach 30 Minuten Rühren wurde das Phosphoramidit durch Hinzufügung von 300 ml n-Heptan ausgefällt. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 72%.
- Beispiel 18
- Synthese von 5'-O-phosphoramidit-dCBz-P(O)-dABz-3'-O-Lev unter Verwendung von N-Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 1,0 g 5'-HO-dCBz-P(O)-dABz-3'-O-Lev (1,1 mmol, 1,0 Äquivalente) und 326 mg Methylimidazoliumtrifluoracetat (1,66 mmol, 1,5 Äquivalente) wurden in 8 ml Aceton und 10 ml Dichlormethan aufgelöst und 2,0 g Molekularsieb 3Å wurden hinzugefügt. 700 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (664 mg, 2,2 mmol, 2 Äquivalente) wurden hinzugefügt und nach 1 Stunde Rühren wurde das Phosphoramidit durch Zugabe von 50 ml n-Heptan ausgefällt. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 78%.
- Beispiel 19
- Synthese von 5'-O-phosphoramidit-T-P(O)-dCBz-P(O)-dCBz-P(O)-dCBz-3'-O-Lev unter Verwendung von N-Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 1,0 g 5'-HO-T-P(O)-dCBz-P(O)-dCBz-P(O)-dCBz-3'-O-Lev (11,6 μmol, 1,0 Äquivalente) und 4,3 mg N-Methylimidazoliumtrifluoracetat (22 μmol, 1,9 Äquivalente) wurden in 2 ml Aceton aufgelöst und 40 mg Molekularsieb 3Å wurden hinzugefügt. 15 μl 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (14 mg, 47 μmol, 4 Äquivalente) wurden hinzugefügt und nach 1 Stunde Rühren wurde das Phosphoramidit durch Zugabe von 3 ml n-Heptan ausgefällt. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 86%.
- Beispiel 20
- Synthese von 5'-O-TBDPS-dT-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von N-Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 510 mg 5'-O-DMTr-dT-3'-OH (1,06 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 20 ml Aceton aufgelöst und 251 [mg] N-Methylimidazoliumtrifluoracetat (1,27 mmol, 1,2 Äquivalente), 1,0 g Molekularsieb 3Å und 383 mg 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (403 μl, 1,27 mmol, 1,2 Äquivalente) werden unter Rühren hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 30 Minuten vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 88%.
- Beispiel 21
- Synthese von 5'-O-TBDMS-dGiBu-3'-O-phosphoramidit unter Verwendung von N-Methylimidazoliumtrifluoracetat
- 1 mg 5'-O-TBDMS-dGiBu-3'-OH (2,21 mmol, 1,0 Äquivalente) werden in 20 ml Aceton aufgelöst und 875 [mg] N-Methylimidazoliumtrifluoracetat (4,42 mmol, 2 Äquivalente), 2,0 g Molekularsieb 3Å und 3,33 g 2-Cyanoethyl-N,N,N',N'-tetraisopropylphosphordiamidit (3,5 ml, 11 mmol, 5 Äquivalente) werden unter Rühren hinzugefügt. Die Reaktion ist nach 30 Minuten vollständig. Ausbeute (bestimmt mittels HPLC): 88%.
Claims (25)
- Zusammensetzung, enthaltend eine Verbindung, die Enolate bilden kann, und ein Phosphoramidit.
- Zusammensetzung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung Enolate in der Gegenwart von Aminen bilden kann.
- Zusammensetzung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass das Amin ein sekundäres Amin ist.
- Zusammensetzung nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Amin Diisopropylamin ist.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung, die Enolate bilden kann, ein Keton der Formel Rx-C(=O)-Ry ist, worin Rx und Ry unabhängig C1-C6-Alkyl sind oder miteinander ein Cycloalkyl bilden.
- Zusammensetzung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Keton Aceton ist.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass das Phosphoramidit die folgende Struktur aufweist: in der Z eine Abgangsgruppe bedeutet, R3 ein C1-C6-Alkyl oder ein Heterocycloalkyl- oder Heterocycloalkenyl-Ring ist, der von 4 bis 7 Atome und bis zu 3 aus Stickstoff, Schwefel und Sauerstoff ausgewählte Heteroatome enthält, und „Verbindung" der Rest einer Hydroxy enthaltenden Verbindung ist.
- Zusammensetzung nach Anspruch 7, in der Z aus CH3, C2H5, CH2C6H5, -CH2CH2CN, -CH2CH=CHCH2CN, para-CH2C6H4CH2CN, -(CH2)2-5N(H)COCF3, -CH2CH2Si(C5H5)2CH3 oder -CH2CH2N(CH3)COCF3 ausgewählt ist
- Zusammensetzung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass Z -CH2CH2CN ist.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 7 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass N(R3)2 eine von einem sekundären Amin abgeleitete Aminogruppe ist.
- Zusammensetzung nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass N(R3)2 eine Diisopropylaminogruppe ist.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 7 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass „Verbindung" den Rest eines Nukleosids, Nukleotids oder Oligonukleotids bezeichnet.
- Zusammensetzung nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass der Rest mindestens eine Schutzgruppe enthält.
- Zusammensetzung nach Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass die Schutzgruppe eine 5'-O-Schutzgruppe ist.
- Zusammensetzung nach Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, dass die 5'-O-Schutzgruppe eine Dimethoxytritylgruppe ist.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 15, dadurch gekennzeichnet, dass das Phosphoramidit aus der Gruppe bestehend aus Adenosinphosphoramidit, Guanosinphosphoramidit, Uracilphosphoramidit, Desoxyadenosinphosphoramidit, Desoxyguanosinphosphoramidit, Desoxythymidinphosphoramidit, Desoxycytosinphosphoramidit und aus Oligonukleotidphosphoramiditen der Formel Xn, in der jedes X aus A, dA, C, dC, G, dG, U und dT ausgewählt ist und n 2 bis 30 bedeutet, ausgewählt ist.
- Zusammensetzung nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass n von 2 bis 6 beträgt.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass sie ein Reaktionsmedium zur Herstellung von Phosphoramiditen ist.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass sie zusätzlich ein Lösungsmittel ausgewählt aus Acetonitril und Dichlormethan enthält.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass sie zusätzlich einen Aktivator der Formel enthält, in der R = Alkyl, Cycloalkyl, Aryl, Aralkyl, Heteroalkyl, Heteroaryl R1, R2 = entweder Wasserstoff sind oder zusammen einen 5- oder 6-gliedrigen Ring bilden, X1, X2 = unabhängig entweder N oder CH, Y = H oder Si(R4)3, mit R4 = Alkyl, Cycloalkyl, Aryl, Aralkyl, Heteroalkyl, Heteroaryl, B = deprotonierte Säure ist.
- Zusammensetzung nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass der Aktivator N-Methylimidazoliumtrifluoracetat ist.
- Zusammensetzung nach Anspruch 20 oder 21, dadurch gekennzeichnet, dass sie zusätzlich eine nicht protonierte Base als Additiv enthält.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 22, dadurch gekennzeichnet, dass sie zusätzlich ein Trocknungsmedium enthält.
- Zusammensetzung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, dass das Trocknungsmedium ein Molekularsieb ist.
- Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 24, zur Oligonukleotidsynthese.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US63615204P | 2004-12-15 | 2004-12-15 | |
EP04106599.6 | 2004-12-15 | ||
US60/636,152 | 2004-12-15 | ||
EP04106599 | 2004-12-15 | ||
PCT/EP2005/056815 WO2006064039A1 (en) | 2004-12-15 | 2005-12-15 | Synthesis of phosphitylated compounds using a quaternary heterocyclic activator |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE202005021489U1 true DE202005021489U1 (de) | 2008-05-08 |
Family
ID=34930059
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE202005021489U Expired - Lifetime DE202005021489U1 (de) | 2004-12-15 | 2005-12-15 | Zusammmensetzung für die Synthese von phosphitylierten Verbindungen |
DE202005021488U Expired - Lifetime DE202005021488U1 (de) | 2004-12-15 | 2005-12-15 | Mischung aus einem Aktivator und einem Additiv zur Herstellung von phosphitylierten Verbindungen |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE202005021488U Expired - Lifetime DE202005021488U1 (de) | 2004-12-15 | 2005-12-15 | Mischung aus einem Aktivator und einem Additiv zur Herstellung von phosphitylierten Verbindungen |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20100081802A1 (de) |
EP (1) | EP1828218B1 (de) |
JP (1) | JP2008524163A (de) |
KR (1) | KR20070090019A (de) |
CN (1) | CN101103040B (de) |
AU (1) | AU2005315631A1 (de) |
BR (1) | BRPI0519072A2 (de) |
CA (1) | CA2590221A1 (de) |
DE (2) | DE202005021489U1 (de) |
IL (1) | IL183738A (de) |
MX (1) | MX2007007298A (de) |
RU (1) | RU2440364C2 (de) |
WO (1) | WO2006064039A1 (de) |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4500707A (en) * | 1980-02-29 | 1985-02-19 | University Patents, Inc. | Nucleosides useful in the preparation of polynucleotides |
US4458066A (en) * | 1980-02-29 | 1984-07-03 | University Patents, Inc. | Process for preparing polynucleotides |
US4668777A (en) * | 1981-03-27 | 1987-05-26 | University Patents, Inc. | Phosphoramidite nucleoside compounds |
US4973679A (en) * | 1981-03-27 | 1990-11-27 | University Patents, Inc. | Process for oligonucleo tide synthesis using phosphormidite intermediates |
JPH1180185A (ja) * | 1997-09-05 | 1999-03-26 | Res Dev Corp Of Japan | オリゴヌクレオチドの化学合成法 |
US6274725B1 (en) * | 1998-06-02 | 2001-08-14 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Activators for oligonucleotide synthesis |
JP4709959B2 (ja) * | 2001-06-14 | 2011-06-29 | 国立大学法人東京工業大学 | ヌクレオシドホスホロアミダイト化合物 |
JP2003012690A (ja) * | 2001-07-03 | 2003-01-15 | Mitsui Chemicals Inc | 置換イミダゾール誘導体又は置換ベンズイミダゾール誘導体を用いたヌクレオチドの製造法 |
GB0224316D0 (en) * | 2002-10-18 | 2002-11-27 | Syngenta Participations Ag | Chemical compounds |
-
2005
- 2005-12-15 CN CN2005800466852A patent/CN101103040B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2005-12-15 DE DE202005021489U patent/DE202005021489U1/de not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-15 JP JP2007546065A patent/JP2008524163A/ja active Pending
- 2005-12-15 US US11/721,593 patent/US20100081802A1/en not_active Abandoned
- 2005-12-15 RU RU2007126807/04A patent/RU2440364C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2005-12-15 BR BRPI0519072-0A patent/BRPI0519072A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2005-12-15 DE DE202005021488U patent/DE202005021488U1/de not_active Expired - Lifetime
- 2005-12-15 MX MX2007007298A patent/MX2007007298A/es active IP Right Grant
- 2005-12-15 KR KR1020077016163A patent/KR20070090019A/ko not_active Application Discontinuation
- 2005-12-15 EP EP05850457.2A patent/EP1828218B1/de active Active
- 2005-12-15 AU AU2005315631A patent/AU2005315631A1/en not_active Abandoned
- 2005-12-15 CA CA002590221A patent/CA2590221A1/en not_active Abandoned
- 2005-12-15 WO PCT/EP2005/056815 patent/WO2006064039A1/en active Application Filing
-
2007
- 2007-06-07 IL IL183738A patent/IL183738A/en not_active IP Right Cessation
-
2012
- 2012-02-07 US US13/367,558 patent/US20120316328A1/en not_active Abandoned
-
2013
- 2013-06-20 US US13/922,901 patent/US20130281682A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2440364C2 (ru) | 2012-01-20 |
US20120316328A1 (en) | 2012-12-13 |
WO2006064039A1 (en) | 2006-06-22 |
MX2007007298A (es) | 2007-10-19 |
DE202005021488U1 (de) | 2008-05-08 |
BRPI0519072A2 (pt) | 2008-12-23 |
US20130281682A1 (en) | 2013-10-24 |
IL183738A0 (en) | 2007-09-20 |
KR20070090019A (ko) | 2007-09-04 |
RU2007126807A (ru) | 2009-01-27 |
EP1828218A1 (de) | 2007-09-05 |
EP1828218B1 (de) | 2014-04-30 |
AU2005315631A1 (en) | 2006-06-22 |
IL183738A (en) | 2012-12-31 |
US20100081802A1 (en) | 2010-04-01 |
CN101103040B (zh) | 2012-06-13 |
CA2590221A1 (en) | 2006-06-22 |
JP2008524163A (ja) | 2008-07-10 |
CN101103040A (zh) | 2008-01-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP1801114B1 (de) | Polynukleotid mit Phosphatmimetikum | |
EP0152459B1 (de) | Verfahren zur herstellung von oligonucleotiden | |
DE60034354T2 (de) | Verbindungen zum schutz von hydroxylgruppen und ihre anwendung | |
DE69632456T2 (de) | Nukleinsäuresynthese unter verwendung von mittels licht abspaltbaren schutzgruppen | |
DE69725866T2 (de) | Festphasen-synthese | |
DE69724218T2 (de) | Universale feste träger und verfahren zu ihrer verwendung | |
EP0818460B1 (de) | Festphasensynthese von Oligonucleotiden | |
DE60103145T2 (de) | Verfahren zur herstellung von phoshphorothioate triestere | |
WO2000061594A2 (de) | Nucleosid-derivate mit photolabilen schutzgruppen | |
DE602005001414T2 (de) | Photolabile Schutzgruppen | |
EP1858909B1 (de) | Oligonukleotidsynthese | |
DE202005021489U1 (de) | Zusammmensetzung für die Synthese von phosphitylierten Verbindungen | |
DE19915867A1 (de) | Nucleosid-Derivate mit photolabilen Schutzgruppen | |
EP0475443B1 (de) | Verfahren zur chemischen Synthese von Oligonukleotiden | |
US5726301A (en) | CAC H-phosphonate and its use in the synthesis of oligonucleotides | |
DE19952113A1 (de) | Nucleosid-Derivate mit photolabilen Schutzgruppen | |
DE3606394A1 (de) | Neue ribonucleoside, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung | |
DE69726276T2 (de) | In situ herstellung von nukleosid-phosphoramiditen und ihre verwendung in der oligonukleotidsynthese | |
CA2685515A1 (en) | Synthesis of oligonucleotides | |
DE10152147A1 (de) | Verfahren zum Aufbringen von Nukleosiden und/oder Nukleotiden auf funktionalisierten Oberflächen sowie Verfahren zur Bestimmung von Kopplungsausbeuten bei der Synthese von Nukleotiden | |
DE10003631A1 (de) | Maskenfreie Nucleosid-Derivate mit 3`-O-photolabilen Schutzgruppen von o-Nitrobenzyl-Typ zur Synthese von "inversen" DNA-Chips | |
DE19745708A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Oligonucleotidsequenzen | |
DE3407671A1 (de) | Ein eine nucleotidverbindung enthaltendes praeparat und verfahren zu seiner herstellung |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R207 | Utility model specification |
Effective date: 20080612 |
|
R150 | Utility model maintained after payment of first maintenance fee after three years |
Effective date: 20090109 |
|
R151 | Utility model maintained after payment of second maintenance fee after six years |
Effective date: 20120105 |
|
R152 | Utility model maintained after payment of third maintenance fee after eight years |
Effective date: 20131219 |
|
R071 | Expiry of right |