DE19631189A1 - Neuartige kationische Amphiphile für den liposomalen Gentransfer - Google Patents

Neuartige kationische Amphiphile für den liposomalen Gentransfer

Info

Publication number
DE19631189A1
DE19631189A1 DE19631189A DE19631189A DE19631189A1 DE 19631189 A1 DE19631189 A1 DE 19631189A1 DE 19631189 A DE19631189 A DE 19631189A DE 19631189 A DE19631189 A DE 19631189A DE 19631189 A1 DE19631189 A1 DE 19631189A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
cf3coo
ch3coo
cationic lipids
mmol
general formula
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE19631189A
Other languages
English (en)
Inventor
Manfred Prof Dr Schneider
Oliver Dipl Chem Keil
Regina Dr Rer Nat Reszka
Detlef Groth
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Original Assignee
Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft filed Critical Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Priority to DE19631189A priority Critical patent/DE19631189A1/de
Priority to PCT/DE1997/001669 priority patent/WO1998005678A2/de
Priority to AT97936602T priority patent/ATE330964T1/de
Priority to US09/230,842 priority patent/US6268516B1/en
Priority to JP10507485A priority patent/JP2000515861A/ja
Priority to DE59712683T priority patent/DE59712683D1/de
Priority to EP97936602A priority patent/EP0923600B1/de
Publication of DE19631189A1 publication Critical patent/DE19631189A1/de
Priority to US09/898,333 priority patent/US6489495B2/en
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers
    • A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes or liposomes coated or grafted with polymers comprising non-phosphatidyl surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids or non-phosphatidyl liposomes coated or grafted with polymers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C237/00—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups
    • C07C237/02—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C237/04—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C07C237/12—Carboxylic acid amides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by amino groups having the carbon atoms of the carboxamide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated having the nitrogen atom of at least one of the carboxamide groups bound to an acyclic carbon atom of a hydrocarbon radical substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/20—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/04—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C07C279/14—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0055—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the 17-beta position being substituted by an uninterrupted chain of at least three carbon atoms which may or may not be branched, e.g. cholane or cholestane derivatives, optionally cyclised, e.g. 17-beta-phenyl or 17-beta-furyl derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0072—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 the A ring of the steroid being aromatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Die Erfindung betrifft kationische Lipide der allgemeinen Formel I,
wobei n = 2,3,4,6,8 und m = 2,3,6,8 sein kann und R₁ = H, CH₃, CH₂CH₂OH; R₂ = H, CH₃, CH₂CH₂OH, (CH₂)₃N⁺(R₁)₃, R₃ einen geradkettigen, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Rest C₇-C₂₁, Z = CH₂, O, NH, Y = CH₂, O, NH und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet;
kationische Lipide der Formel II,
wobei R₁einen aliphatischen, aromatischen oder heteroaliphatischen α-C-Atom -Substituenten der α-Aminosäuren Glycin, Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Phenylalanin, Tyrosin, Prolin, Hydroxyprolin, Serin, Threonin, Cystein, Cystin, Methionin, Tryptophan, Arginin, Lysin, Ornithin, Histidin, R₂ einen geradkettigen, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Rest C₇-C₂₁, X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO, Y = CH₂, O, NH und Z = CH₂, O, NH bedeutet;
kationische Lipide der allgemeinen Formel III,
wobei R₁ = H, CH₃, (CH₂)₃NH₂⁺X⁻(CH₂)₃NH₃⁺X⁻ , R₃ = H, (CH₂)₃NH₃⁺X⁻ , R₂ einen geradkettigen, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Rest C₇-C₂₁ und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet;
kationische Lipide der allgemeinen Formel IV,
wobei n = 1-4 sein kann und R einen geradkettigen, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Rest C₇-C₂₁, Y = CH₂, O, NH, Z = CH₂, O, NH und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet;
kationische Lipide der allgemeinen Formel V,
wobei n = 2,3,4,6,8 und m = 2,3,6,8 sein kann und R₁ = H, CH₃, CH₂CH₂OH; R₂ = H, CH₃, CH₂CH₂OH, (CH₂)₃N⁺(R₁)₃ und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet;
kationische Lipide der allgemeinen Formel VI,
wobei R₁ = H, CH₃, (CH₂)₃NH₂⁺X⁻(CH₂)₃NH₃⁺X⁻, (CH₂)₃NH₃⁺X⁻, R₂= H, (CH₂)₃NH₃⁺X⁻ und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet;
kationische Lipide der allgemeinen Formel VII,
wobei m = 2-6 sein kann und Y eine Gruppe N(R)₃⁺X⁻ mit R = H, CH₃, (CH₂)₂OH oder eine Gruppe NH-C(NH₂⁺X⁻)NH₂ mit X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet; kationische Lipide der allgemeinen Formel VIII,
wobei Y eine Gruppe N(R)₃⁺X⁻ mit R = H, CH₃, (CH₂)₂OH oder eine Gruppe NH-C(NH₂⁺X⁻ )NH₂ mit X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet;
kationische Lipide der allgemeinen Formel IX und X,
wobei n = 2,3,4,6,8 und m = 2,3,6,8 sein kann und R₁ = H, CH₃, CH₂CH₂OH; R₂ = H, CH₃, CH₂CH₂OH, (CH₂)₃N⁺(R₁)₃, R = H, CH₃, (CH₂)₂OH, Y eine Gruppe Carbonyl (= O (Östron)) oder eine Gruppe OH (Östradiol), Z eine Gruppe N(R)₃⁺X⁻ mit R = H, CH₃, (CH₂)₂OH oder eine Gruppe NH-C(NH₂⁺X⁻)NH₂ und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
Kationische Lipide der allgemeinen Formel I-X sind geeignete Reagenzien für den liposomalen Gentransfer (Transfektion). Anwendungsgebiete derartiger Transfektionsreagenzien liegen in der Medizin und in der Gentechnik.
Das Einbringen genetischen Materials in eukaryontische Zellen ist ein grundlegendes Verfahren zum Studium biologischer Funktionen und von zunehmender Bedeutung für die gentherapeutische Behandlung verschiedener Erkrankungen, von denen die Tumoren an erster Stelle zu nennen sind.
Man unterscheidet hierbei biologische, physikalische und physikochemische Methoden für den Transfer von DNA, RNA und Proteinen in die Zielzelle [Wagner J, Madry, H., Reszka, R (1995). In vivo gene transfer: focus on the kidney. Nephrol. Dial.Transplant 10 : 1801-1807 Zhu J, Zhang L, Hanisch U-K, Felgner PL,. Reszka R (1996). In vivo gene therapy of experimental brain tumors by continuous administration of DNA-liposome complexes. Gene Therapy 3 : 472-476, Kiehntopf; M., Brach MA & Hermann F (1995). Gentherapie in der Onkologie: Perspektiven, Chancen und Risiken. Onkologie 18 (Sonderheft): 16-26]. Physikalische Methoden wie Elektroporation und Mikroinjektion sind nur für den ex vivo und in vitro Transfer geeignet. Die sogenannte "Jet"- Injektions-Methode läßt sich darüberhinaus auch für den in vivo Gentransfer anwenden (Leber, Haut). Physikochemische Methoden wie Kalziumphosphatpräzipitationstechnik (KPP)- und DEAE-Dextran-Transfektion, sind auf in vifro und ex vivo Anwendungen begrenzt. Der zur Zeit in einer Reihe von klinischen Studien (Phase I/II) erprobte retrovirale Gentransfer mit Hilfe virusproduzierender Zellen ist durch eine längeranhaltende, aber relativ niedrige Genexpression in sich teilende Zellen gekennzeichnet. Problematisch beim retroviralen Gentransfer ist vor allem die Entwicklung einer spezifischen Immunantwort gegen die implantierten virusproduzierenden Helferzellen, die Möglichkeit der Generierung replikationskompetenter Viren und die Gefahr einer Aktivierung von zellulären Onkogenen bzw. Inaktivierung von Suppressorgenen als Resultat der zufälligen Lokalisation der Geninsertion. Die notwendigen umfangreichen zellbiologischen und medizinischen Vorarbeiten und die aufwendigen Sicherheitsvorkehrungen lassen hohe Kosten bei der klinischen Anwendung des retroviralen Gentransfers erwarten.
Vektoren auf der Basis von Adenoviren sind ebenfalls aussichtsreiche Gentransfervehikel. Diese erreichen hohe Transfektionsraten auch in sich nicht teilendem Gewebe. Da die DNA nicht in das Genom integriert wird, ist die Dauer der Fremdgenexpression begrenzt und einer wiederholten Anwendung in vivo steht die starke spezifische Immunantwort des Wirtsorganismus bei wiederholten Applikationen entgegen.
Der liposomal vermittelte Gentransfer hat dagegen in den letzten Jahren auch für in vivo Anwendungen an Bedeutung gewonnen. Die Genkonstrukte lassen sich entweder in die
Liposomen verkapseln oder werden mit der Membran assoziiert. Liposomale Präparationen zeichnen sich durch eine einfache Handhabung, geringe Immunreaktivität und damit wiederholbare Anwendbarkeit bei niedrigem Sicherheitsrisiko für Anwender und "Empfänger" aus. Noch am Anfang steht die Anwendung von Immunoliposomen als Transportvehikel für genetisches Material.
Ein ebenfalls interessanter Ansatz ist die Verwendung fusogener Liposomen, die in ihrem Inneren einen Komplex aus DNA und Kernprotein (HMG I) tragen [Kaneda, Iwai, K., Uchida, T(1989). Increased expression of DNA cointroduced with nuclear protein in adult rat liver
Science 243, 375-378, Kaneda Y, Kato, K., Nakanishi, M., Uchida, T.(1996) Introduction of plasmid DNA and nuclear protein into cells by using erythrocyte ghosts, liposomes, and Sendai virus. Methods-Enzymol. 221 : 317-327].
Seit einigen Jahren werden kationische Liposomen für den Transfer von DNA (Felgner PL, Gadek TR, Holm M et al. (1987). Lipofection: a highly efficient, lipid-mediated DNA transfection procedure. Proc Natl Acad Sci USA 84 : 7413-7417, Felgner JH, Kumar R, Sridhar CN et al. (1994). Enhanced gene delivery and mechanism studies with a novel series of cationic lipid formulations. J Biol Chem 269 : 2550-2561), Antisense-Oligomeren, Proteinen und Ribozymen mit Erfolg eingesetzt. DNA wird dabei über elektrostatische Wechselwirkungen mit der Membran der Liposomen assoziiert und über einen bisher noch unvollständig verstandenen Mechanismus in die Zielzelle transferiert. Die Transferrate in vitro ist dabei in Abhängigkeit von der Zellinie mit der Effizienz des retroviralen Gentransfer vergleichbar. Zur Zeit befinden sich die ersten kationischen Liposomen/DNA/Komplexe [DMRIE/DOPE und DOTMA/DOPE (Lipofectin, Gibco BRL USA) sowie DC-Chol/DOPE] in einer klinischen Phase I/II Prüfung (Gao, X., Huang, L. (1995) Cationic liposome-mediated gene transfer. Gene Therapy 2 : 710-722).
Kationische, amphiphile Moleküle, bestehend aus einem Lipidteil (Steroid- oder Diglycerid- Gerüst) und einer positiv geladenen Kopfgruppe (Ammonium-Ionen) sind in der Lage, entweder spontan oder nach Zusatz eines Hilfslipids (Dioleoylphosphatidylethanolamin (DOPE)) Liposomen auszubilden. DNA wird dabei über elektrostatische Wechselwirkungen mit der Membran der Liposomen assoziiert und über einen bisher noch unvollständig verstandenen Mechanismus in die Zielzelle transferiert.
Für einen möglichst effizienten in vitro und in vivo Gentransfer sollten die zur Generierung der Liposomen verwendeten kationischen Lipide die folgenden Kriterien erfüllen:
  • 1. Sie sollten nicht toxisch und biologisch abbaubar sein und keine Immunreaktionen hervorrufen
  • 2. Sie sollten möglichst effizient mit der DNA komplexieren, diese vor Abbaureaktionen schützen und hohe Transferraten aufweisen
  • 3. Sie sollten Zellen rezeptorspezifisch transfizieren
  • 4. Sie müssen leicht und in größeren Mengen synthetisiert werden können.
Sowohl die Syntheseverfahren als auch die Moleküle selbst der bislang in der Literatur beschriebenen kationischen Amphiphile weisen eine Reihe von Nachteilen auf. Die Synthese der kommerzialisierten Transfektionsreagenzien DOTMA (Lipofektin), DOGS und DOSPA verläuft über viele Stufen mit zum Teil sehr geringen Ausbeuten und die Aufreinigung der Produkte erfordert eine aufwendige säulenchromatographische Reinigung. Bei vielen Verbindungen wie z. B. DOTMA, DMRIE und DOSPA sind die kationischen Kopfgruppen mit langkettigen Fettalkoholen über Etherbindungen verknüpft, welche eine sehr schlecht biologische Abbaubarkeit und somit eine hohe Toxizität des Moleküls zur Folge haben.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zu Grunde, neuartige kationische Lipide zu finden, welche im Vergleich mit den bislang bekannten Verbindungen höhere Gentransferraten und geringere Toxizitäten aufweisen. Weiterhin liegt der Erfindung die Aufgabe zu Grunde, Verfahren zu finden, welche die Synthese der kationischen Lipide in wenigen Reaktionsstufen und mit hohen Ausbeuten ermöglicht.
Diese Aufgaben wurde gemäß den Ansprüchen I-IX gelöst. Mit den neuartigen kationischen Lipiden der Formeln I-XI werden Verbindungen zur Verfügung gestellt, die den Anforderungen der Aufgabenstellung entsprechen. So wird z. B. in Abbildung 2-6 an unterschiedlichen Tumorzellinien gezeigt, daß die aus den Lipiden SP-Chol, O-Chol, Put-Chol und DOSGA und dem Helferlipid Dioleoylphosphatidylethanolamin (DOPE) (in den beschriebenen molaren Verhältnissen) hergestellten Liposomen im Vergleich zu DC- Chol/DOPE Vesikel deutlich höher transfizieren in Abwesenheit von Serum. An der Ratten- Kolonkarzinomlinie CC531 (Abb. 3) transfizieren SP-Chol und O-Chol/DOPE signifikant höher als DC-Chol/DOPE bei einem 5%igem Serumanteil. Besonders überraschend sind die in Abb. 5 und 6 gezeigen hohen Transferraten, die unter Verwendung von DOSGA/DOPE-Liposonien bei einem 5%igem Serumanteil an humanen und Rattenglioblastomzellen (N64, F98) gewonnen wurden. Auch sind SP-Chol/DOPE-Liposomen in serumhaltigen Medium sehr gut geeignet, humane Brusttumorzellen (MaTu) zu transfizieren (Abb. 1) Zuordnung der Lipide:
Lipide
Verbindungsklasse
DC-Chol
1β[N-(N′,N′-Dimethylaminoethan)-carbamoyl]cholesterol
Sp-Chol V Beispiel 4
Put-Chol VII Beispiel 4
O-Chol VI Beispiel 5
DOSGA IV Beispiel 3
Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen erfolgt gemäß den beigefügten Schemata.
Schema I beschreibt das Verfahren zur Herstellung neuartiger kationischer Lipide mit 1,3- Diglycerid-Grundgerüst an denen die kationische Kopfgruppe über einen Carboxylat-Spacer angeknüpft ist.
Schema II beschreibt das Verfahren zur Synthese 1,3-Diglycerid-modifizierter Aminosäuren.
Schema III beschreibt das Verfahren zur Synthese 1,3-Diglycerid-modifizierter Guanidin- Derivate.
Schema IV beschreibt das Verfahren zur Synthese neuartiger Cholesterol-Derivate mit biogenen Aminen als kationischen Kopfgruppen.
Schema V beschreibt das Verfahren zur Synthese Aminosäure-modifizierter Cholesterol- Derivate.
Schema VI beschreibt das Verfahren zur Synthese Glucosamin-modifizierter Cholesterol- Derivate.
Schema VII beschreibt das Verfahren zur Synthese kationisch-modifizierter Oestradiol- Derivate.
Schema VIII beschreibt das Verfahren zur Synthese kationisch-modifizierter Oestron- Derivate.
Zusammenfassend kann festgestellt werden, das es nunmehr möglich ist, durch die beschriebenen Verfahren unter kostengünstigen Bedingungen und unter Verwendung preiswerter Chemikalien Transfektionsreagenzien zu synthetisieren, welche eine unerwartet hohe Gentransferrate und eine gute biologische Abbaubarkeit aufweisen.
Die Erfindung soll nachfolgend durch Ausführungsbeispiele näher erläutert werden.
Ausführungsbeispiele Beispiel 1 Herstellung von 2-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-ammoniumtetraazadecan))-1,3-dioleoyloxy­ propan-tri-trifluoracetat I
247 µl (1 mmol) 1,3-Dibenzyloxy-2-propanol wurden mit 7 ml einer 20%igen Lösung von Phosgen in Toluol versetzt und 48 h bei RT gerührt. Nach dieser Zeit wurde überschüssiges Phosgen mit Argon ausgetrieben und der Ansatz zu einer Lösung von 302 mg (0.6 mmol) N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-spermin und 300 µl Triethylamin in 5 ml Methylenchlorid zugetropft und für 4 h bei RT gerührt. Anschließende Säulenchromatographische Reinigung (Kieselgel 60) ergaben 375 mg (47%) 2-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetraazadecan))-1,3- dibenzyloxy-propanol (zähes Öl).
670 mg (0.84 mmol) 2-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetraazadecan))-1,3- dibenzyloxy-propanol wurden daraufhin in 25 ml Ethanol gelöst, mit 150 mg Pd/C (5%) versetzt und 24 h hydriert. Nach Absaugen des Katalysators erhielt man 520 mg (100%) 2- (N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetraazadecan))-1,3-propantriol (zähes Öl).
472 mg (0.76 mmol) 2-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetraazadecan))-1,3-propantriol- wurden mit 452 mg (1.6 mmol) Ölsäure, 334 mg (1.62 mmol) DCC und 20 mg DMAP in 30 ml Methylenchlorid gelöst und 24 h bei RT gerührt. Anschließende Säulenchromatographische Reinigung (Kieselgel 60) ergaben 457 mg (52%) 2-(N⁵- carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetraazadecan))-1,3-dioleoyloxy-propa-n (zähes Öl).
200 mg (0.17 mmol) 2-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetrazzadecan))-1,3- dioleoyloxy-propan wurden mit 3 ml TFA/CH₂Cl₂ (1 : 1) versetzt und 30 min bei RT gerührt. Der Ansatz wurde mit 10 ml Dioxan verdünnt und im Hochvakuum vom Lösungsmittel befreit. Man erhielt 202 mg (99%) 2-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-ammoniumtetraazadecan))- 1,3-dioleoyloxy-propan-tri-trifluoracetat I (zähes, farbloses Öl).
Beispiel 2 Herstellung von 2-L-Alanyl-(1,3 dioleoyloxy)propylamid-trifluoracetat II
4 mmol (756 mg) Boc-L-alanin (M = 189.21) und 4.3 mmol (436 mg 600 µl) Triethylamin (M = 101.19, d = 0.726), wurden in 10 ml abs. Tetrahydrofuran gelöst und mit Aceton/N₂ (fl.) auf -10°C abgekühlt. Nun wurden 4 mmol (320 µl) Chlorameisensäuremethylester (M = 94.50, d 1.228) zugegeben und 30 min bei 0°C gerührt. Nach Zugabe von 5 mmol (456 mg) 2- Amino-1,3-propandiol (M = 91.11) wurde noch 1 h bei Raumtemperatur gerührt. Nach Entfernen des Tetrahydrofurans am Rotationsverdampfer wurden 50 ml Ethylacetat zugegeben. Die organische Phase wurde mit 5 ml ges. NaHCO₃-Lösung und 10 ml ges. NaCl- Lösung gewaschen und über Na₂SO₄ getrocknet. Nach Einrotieren im Wasserstrahlvakuum wurden letzte Lösungsmittelreste im Ölpumpenvakuum entfernt. Man erhielt 332 mg (32%) 2-BOC-L-Alanyl-(1,3-dihydroxy)propylamid (farbloses Öl).
2.28 mmol (598 mg) 2-BOC-L-Alanyl-(1,3-dihydroxy)propylamid, 5.70 mmol (1.610 g) Ölsäure (M = 282.47), 5.70 mmol (1.176 g) Dicyclohexylcarbodiimid (M = 206.33) und 0.23 mmol (28 mg) Dimethylaminopyridin (M = 122.17) gelöst in 40 ml abs. CH₂Cl₂ wurden 12 h bei RT gerührt. Anschließende Reinigung des Rohprodukts durch Säulenchromatographie (Kieselgel 60) ergab 1.450 g (80%) 2-BOC-L-Alanyl-(1,3-dioleoyloxy)propylamid.
0.89 mmol (702 mg) 2-BOC-L-Alanyl-(1,3-dioleoyloxy)propylamid wurden mit 6 ml TFA/CH₂Cl₂ (1 : 1) versetzt und 30 min bei RT geführt. Der Ansatz wurde mit 10 ml Dioxan verdünnt und im Hochvakuum vom Lösungsmittel befreit. Man erhielt 712 mg (99%) 2-L- Alanyl-(1,3-dioleoyloxy)propylamid-trifluoracetat II.
Beispiel 3 Herstellung von 2-(Guanidino-β-alanyl)-1,3-dioleoyloxypropylamid-hydrochlorid III
1.892 g (10 mmol) N-BOC-β-alanin wurden analog zu Beispiel 2 zu 2-BOC-β-Alanyl-1,3- dioleoyloxypropylamid (15% über beide Stufen) umgesetzt. 500 mg (0.64 mmol) 2-BOC-P- Alanyl-1,3-dioleoyloxypropylamid wurden mit 3 ml TFA/CH₂Cl₂ (1 : 1) versetzt und 30 min bei RT gerührt. Der Ansatz wurde dann mit 50 ml Methylenchlorid verdünnt und mit zwei mal 5 ml ges. NaHCO₃-Lösung extrahiert. Die über Natriumsulfat getrocknete organische Phase wurde am Rotationsverdampfer vom Lösungsmittel befreit und der Rückstand mit 103 mg (0.7 mmol) 1-H-Pyrazol-1-carboxamidin-hydrochlorid und mit 120 µl (0.7 mmol) DIEA in 20 ml DMF gelöst und über Nacht bei RT gerührt. Anschließende Reinigung des Rohprodukts durch Säulenchromatographie (Kieselgel 60) ergab 480 mg (98%) 2-(Guanidino­ β-alanyl)-1,3-dioleoyloxypropylamid-hydrochlorid III (zähes Öl).
Beispiel 4 Herstellung von 3β-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-ammoniumtetraazadecan))-cholesterol-tri­ hydrochlorid V
610 mg (1.2 mmol) N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-spermin wurden in 10 ml Methylenchlorid gelöst und mit 674 mg (1.5 mmol) Cholesterolchlorformiat und mit 210 µl (1.5 mmol) NEt₃ versetzt. Der Ansatz wurde für 4 h bei RT gerührt und anschließend säulenchromatographisch gereinigt. Man erhielt 570 mg (52%) 3β-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC- tetraazadecan))-cholesterol (farbloser Schaum). 275 mg (0.3 mmol) 3β-(N⁵-carbamoyl- (N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetrs-decan))-cholesterol wurden mit 6 ml MeOH (10 mmol HCl enthaltend) versetzt, 30 min bei RT gerührt und im Hochvakuum vom Lösungsmittel befreit. Man erhielt 205 mg (94%) 3β-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-ammoniumtetraazadecan))- cholesterol-tri-hydrochlorid V (farbloser Feststoff). Auf analoge Weise wurde ausgehend von BOC-Putrescin 3β-(N-Ammonium-N′-carbamoyl-1,4-diaminobutan)-cholesterol-hydrochlorid- VII (farbloser Feststoff) synthetisiert.
Beispiel 5 Herstellung von 3β-Ornithyl-cholesterol-dihydrochiorid VI
997 mg (3 mmol) Di-BOC-Ornithin wurden in 40 ml Methylenchiorid gelöst, mit 1.16 g (3 mmol) Cholesterol, 640 mg (3.1 mmol) DCC, 50 mg DMAP versetzt, und 24 h bei RT gerührt. Es wurde vom ausgefallenen Dicyclohexylharnstoff abfiltriert im Vakuum eingeengt und der Rückstand aus 5 ml Hexan umkristallisiert. Man erhielt 1.62 g (77%) 3β-di-BOC- Ornithyl-cholesterol (farbloser Feststoff). 190 mg (0.27 mmol) 3β-di-BOC-Ornithyl- cholesterol wurden mit 6 ml MeOH (enthielt 10 mmol HCl) versetzt und 60 min bei RT gerührt. Nach Entfernen des Lösungsmittels im Hochvakuum erhielt man 146 mg (94%) 3β- Ornithyl-cholesterol-dihydrochlorid VI (farbloser Feststoff).
Beispiel 6 Herstellung von 6-(3β-Carboxycholesteroyl)-glucosamin-hydrochlorid VIII
279 mg (1 mmol) N-BOC-Glucosamin wurden in 8 ml Pyridin gelöst, mit 449 mg (1 mmol) Cholesterylchlorformiat versetzt und für 24 h bei RT gerührt. Daraufhin wurde im Hochvakuum Pyridin entfernt, in 50 ml Ether aufgenommen und mit 0.01 n HCl extrahiert. Die organische Phase wurde vom Lösungsmittel befreit und der Rückstand säulenchromatographisch (Kieselgel 60) gereinigt. Man erhielt 210 mg (30%) 6-(3β- Carboxycholesteroyl)-N-BOC-glucosamin (farbloser Feststoff). 100 mg (0.15 mmol) 6-(3β- Carboxycholesteroyl)-N-BOC-glucosamin wurden mit 3 ml ml MeOH (enthielt 5 mmol HCl) versetzt und 60 min bei RT gerührt. Nach Entfernen des Lösungsmittels im Hochvakuum erhielt man 95 mg (99%) 6-(3β-Carboxycholesteroyl)-glucosamin-hydrochlorid VIII (farbloses, zähes Öl).
Beispiel 7 Herstellung von 3-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-ammoniumtetraazadecan))-oestradiol-tri­ hydrochlorid IX
216 mg (0.8 mmol) Östron wurden in 10 ml Dioxan gelöst, mit 241 µl (2 mmol) Diphosgen und 152 µl (1.2 mmol) Dimethylanilin versetzt und 12 h bei RT gerührt. Daraufhin wurde im Hochvakuum eingeengt und der Rückstand in 15 ml Methylenchlorid gelöst. Die so erhaltene Lösung wurde zu einer Lösung von 300 mg (0.6 mmol) N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-spermin und 277 µl (2 mmol) Triethylamin in 5 ml Methylenchlorid zugetropft und 4 h bei RT gerührt. Anschließende säulenchromatographische Reinigung ergab 290 mg (61%) 3-(N⁵-carbamoyl- (N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetraazadecan))-oestron (zähes Öl).
220 mg (0.28 mmol) 3-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetraazadecan))-oestron wurden daraufhin in 5 ml Dioxan gelöst und mit 37 mg (0.96 mmol) Natriumborhydrid versetzt. Nach 2 stündigem Rühren bei RT wurde der Ansatz mit 0.1 N HCl auf pH 6 gebracht und drei mal mit je 50 ml Methylenchlorid extrahiert. Die organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet und am Rotationsverdampfer vom Lösungsmittel befreit. Man erhielt 219 mg (96%) 3-(N⁵-carbamoyl-(N¹,N¹⁰,N¹⁴-tris-BOC-tetraazadecan))-oestradiol (farbloser Schaum). Die Verbindung wird analog dem Beispiel 4 mit MeOH/ HCl zu 3-(N⁵-carbamoyl- (N¹,N¹⁰,N¹⁴-ammoniumtetraazadecan))-oestradiol-tri-hydrochlorid IX umgesetzt.
Beispiel 8 Herstellung von 3-(N,N-dimethylammoniumethylendiamin-N′-carbamoyl)oestron- hydrochlorid X
541 mg (2 mmol) Östron wurden in 20 ml Dioxan gelöst, mit 603 µl (5 mmol) Diphosgen und 380 µl (3 mmol) Dimethylanilin versetzt und 12 h bei RT gerührt. Daraufhin wurde im Hochvakuum eingeengt und der Rückstand in 15 ml Methylenchlorid gelöst. Diese Lösung wurde mit 800 µl (7.3 mmol) N,N-Dimethylaminoethylendiamin versetzt, 4 h bei RT gerührt und dann mit 100 ml Methylenchlorid verdünnt. Es wurde fünf mal mit je 20 ml 0.01 N HCl extrahiert, die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet und vom Lösungsmittel befreit. Anschließende säulenchromatographische Reinigung (Kieselgel 60) ergab 573 mg (68%) 3-(N,N-dimethylammoniumethylendiamin-N′-carbamoyl)-oestron-hydrochlo-rid X (farbloser Feststoff).
Schema I
Schema II
Schema III
Schema IV
Schema V
Schema VI
Schema VII
Schema VIII

Claims (9)

1. Kationische Lipide der allgemeinen Formel I, wobei n = 2,3,4,6,8 und m = 2,3,6,8 sein kann und R₁ = H, CH₃, CH₂CH₂OH; R₂ = H, CH₃, CH₂CH₂OH, (CH₂)₃N⁺(R₁)₃, R₃ einen geradkettigen, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Rest C₇-C₂₁, Z = CH₂, O, NH, Y = CH₂, O, NH und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
2. Kationische Lipide der Formel II, wobei R₁ einen aliphatischen, aromatischen oder heteroaliphatischen α-C-Atom- Substituenten der α-Aminosäuren Glycin, Alanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Phenylalanin, Tyrosin, Prolin, Hydroxyprolin, Serin, Threonin, Cystein, Cystin, Methionin, Tryptophan, Arginin, Lysin, Ornithin, Histidin, R₂ einen geradkettigen, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Rest C₇-C₂₁, X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO, Y = CH₂, O, NH und Z = CH₂, O, NH bedeutet.
3. Kationische Lipide der allgemeinen Formel III, wobei R₁ = H, CH₃, (CH₂)₃NH₂⁺X⁻(CH₂)₃NH₃⁺X⁻, R₃ = H, (CH₂)₃NH₃⁺X⁻, R₂ einen geradkettigen, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Rest C₇-C₂₁ und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
4. Kationische Lipide der allgemeinen Formel IV, wobei n = 1-4 sein kann und R einen geradkettigen, gesättigten oder ungesättigten aliphatischen Rest C₇-C₂₁, Y = CH₂, O, NH, Z = CH₂, O, NH und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
5. Kationische Lipide der allgemeinen Formel V, wobei n = 2, 3, 4, 6, 8 und m = 2, 3, 6, 8 sein kann und R₁ = H, CH₃, CH₂CH₂OH; R₂ = H, CH₃, CH₂CH₂OH, (CH₂)₃N⁺(R₁)₃ und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
6. Kationische Lipide der allgemeinen Formel VI, wobei R₁ = H, CH₃, (CH₂)₃NH₂⁺X⁻(CH₂)₃NH₃⁺X⁻, (CH₂)₃NH₃⁺X⁻, R₂= H, (CH₂)₃NH₃⁺X⁻ und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
7. Kationische Lipide der allgemeinen Formel VII, wobei m = 2-6 sein kann und Y eine Gruppe N(R)₃⁺X⁻ mit R = H, CH₃, (CH₂)₂OH oder eine Gruppe NH-C(NH₂⁺X⁻)NH₂ mit X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
8. Kationische Lipide der allgemeinen Formel VIII, wobei Y eine Gruppe N(R)₃⁺X⁻ mit R = H, CH₃, (CH₂)₂OH oder eine Gruppe NH-C(NH₂⁺X⁻ )NH₂ mit X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
9. Kationische Lipide der allgemeinen Formel IX und X, wobei n = 2,3,4,6,8 und m = 2,3,6,8 sein kann und R₁ = H, CH₃, CH₂CH₂OH; R₂ = H, CH₃, CH₂CH₂OH, (CH₂)₃N⁺(R₁)₃, R = H, CH₃, (CH₂)₂OH, Y eine Gruppe Carbonyl (= O (Östron)) oder eine Gruppe OH (Östradiol), Z eine Gruppe N(R)₃⁺X⁻ mit R = H, CH₃, (CH₂)₂OH oder eine Gruppe NH-C(NH₂⁺X⁻)NH₂ und X = Cl, Br, I, CH₃COO, CF₃COO bedeutet.
DE19631189A 1996-08-02 1996-08-02 Neuartige kationische Amphiphile für den liposomalen Gentransfer Withdrawn DE19631189A1 (de)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19631189A DE19631189A1 (de) 1996-08-02 1996-08-02 Neuartige kationische Amphiphile für den liposomalen Gentransfer
PCT/DE1997/001669 WO1998005678A2 (de) 1996-08-02 1997-08-01 Neuartige kationische amphiphile für den liposomalen gentransfer
AT97936602T ATE330964T1 (de) 1996-08-02 1997-08-01 Neuartige kationische amphiphile für den liposomalen gentransfer
US09/230,842 US6268516B1 (en) 1996-08-02 1997-08-01 Cationic amphiphilic lipids for liposomal gene transfer
JP10507485A JP2000515861A (ja) 1996-08-02 1997-08-01 リポソーム遺伝子導入用の新規な陽イオン性両親媒性脂質
DE59712683T DE59712683D1 (de) 1996-08-02 1997-08-01 Neuartige kationische amphiphile für den liposomalen gentransfer
EP97936602A EP0923600B1 (de) 1996-08-02 1997-08-01 Neuartige kationische amphiphile für den liposomalen gentransfer
US09/898,333 US6489495B2 (en) 1996-08-02 2001-07-03 Cationic amphiphiles for liposomal gene transfer

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19631189A DE19631189A1 (de) 1996-08-02 1996-08-02 Neuartige kationische Amphiphile für den liposomalen Gentransfer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE19631189A1 true DE19631189A1 (de) 1998-02-05

Family

ID=7801565

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE19631189A Withdrawn DE19631189A1 (de) 1996-08-02 1996-08-02 Neuartige kationische Amphiphile für den liposomalen Gentransfer
DE59712683T Expired - Fee Related DE59712683D1 (de) 1996-08-02 1997-08-01 Neuartige kationische amphiphile für den liposomalen gentransfer

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE59712683T Expired - Fee Related DE59712683D1 (de) 1996-08-02 1997-08-01 Neuartige kationische amphiphile für den liposomalen gentransfer

Country Status (6)

Country Link
US (2) US6268516B1 (de)
EP (1) EP0923600B1 (de)
JP (1) JP2000515861A (de)
AT (1) ATE330964T1 (de)
DE (2) DE19631189A1 (de)
WO (1) WO1998005678A2 (de)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020193580A1 (en) * 1995-12-15 2002-12-19 Mitchell Lloyd G. Methods and compositions for use in spliceosome mediated RNA trans-splicing
FR2797188A1 (fr) * 1999-08-04 2001-02-09 Univ Paris Nord Laboratoire De Composes lipidiques cationiques et leurs utilisation pour le transfert de substances d'interet therapeutique chargees negativement
RU2233834C2 (ru) * 2002-05-21 2004-08-10 Московская государственная академия тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова Катионные димерные амфифилы в качестве агентов трансфекции и способ их получения
US7906122B2 (en) 2003-06-18 2011-03-15 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jersusalem Sphingoid polyalkylamine conjugates for Hepatitis B virus vaccination
AU2004246904B2 (en) 2003-06-18 2010-02-04 Biolab Ltd. Sphingolipids polyalkylamine conjugates for use in transfection
US20050095280A1 (en) * 2003-10-15 2005-05-05 Michalakis Savva Single-component pH-sensitive liposomes of reduced solid-to-liquid phase transition temperatures
US20050084522A1 (en) * 2003-10-15 2005-04-21 Michalakis Savva Cationic lipids for nuclei acid delivery
KR101954912B1 (ko) 2009-07-09 2019-03-08 노보솜 베르발퉁스 게엠베하 이미노 지질을 포함하는 양쪽성 리포좀
ES2745373T3 (es) 2011-10-18 2020-03-02 Dicerna Pharmaceuticals Inc Lípidos catiónicos de amina y uso de los mismos
CZ201220A3 (cs) * 2012-01-13 2013-07-17 Ústav organické chemie a biochemie Akademie ved CR, v.v.i. Lipopolyaminy sperminového typu pro konstrukci liposomálních transfekcních systému
CN105037491A (zh) 2015-06-04 2015-11-11 大连民族学院 一类丙烷基阳离子肽脂质及其合成方法和应用
CN104987360A (zh) * 2015-06-04 2015-10-21 大连民族学院 一类双烷氧酰胺烷基阳离子肽脂质及其合成方法和应用
EP4423108A1 (de) * 2021-10-29 2024-09-04 ModernaTX, Inc. Lipidamine
WO2023076598A1 (en) * 2021-10-29 2023-05-04 Modernatx, Inc. Lipid amines
US20250250227A1 (en) * 2022-02-28 2025-08-07 Shenzhen Shenxin Biotechnology Co., Ltd. Amino lipid compound, preparation method therefor, composition thereof and use thereof
WO2024032754A1 (zh) * 2022-08-12 2024-02-15 上海蓝鹊生物医药有限公司 含氮链状化合物、其制备方法、包含其的组合物和应用
EP4683906A1 (de) * 2023-03-22 2026-01-28 Shanghai Circode Biomed Co., Ltd Lipidverbindungen, lipidnanopartikel und pharmazeutische zusammensetzungen
WO2025262460A1 (en) 2024-06-21 2025-12-26 BioNTech SE Lipid compositions for nucleic acid delivery

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4368190A (en) * 1980-04-17 1983-01-11 Merck & Co., Inc. Immunologically active dipeptidyl 4-O-,6-O-acyl-2-amino-2-deoxy-D-glucose derivatives and methods for their preparation
FR2551758B1 (fr) * 1983-08-16 1986-01-31 Anvar Derives de muramyl-peptides et de steroides ayant des proprietes d'activation des macrophages
JPS617292A (ja) * 1984-06-20 1986-01-13 Japan Atom Energy Res Inst 制癌剤を結合させたエストラサイト系化合物を製造する方法
LU85757A1 (fr) * 1985-02-04 1986-09-02 Univ Catholique Louvain Derives nouveaux de la l-dopa,procedes pour leur preparation et compositions pharmaceutiques concernant de tels composes
NL9201440A (nl) * 1992-08-11 1994-03-01 Univ Leiden Triantennaire clusterglycosiden, hun bereiding en toepassing.
WO1995004030A1 (en) * 1993-08-02 1995-02-09 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Therapeutic compound - fatty acid conjugates
FR2726764B1 (fr) * 1994-11-14 1997-01-31 Pasteur Merieux Serums Vacc Adjuvant pour composition vaccinale
US6071890A (en) * 1994-12-09 2000-06-06 Genzyme Corporation Organ-specific targeting of cationic amphiphile/DNA complexes for gene therapy
RU2166512C2 (ru) * 1995-01-16 2001-05-10 Коммонвелт Сайентифик Энд Индастриал Рисерч Организейшн Конъюгаты терапевтического соединения с жирной кислотой
DE19521412A1 (de) * 1995-06-14 1996-12-19 Boehringer Mannheim Gmbh Neue kationische und polykationische Amphiphile, diese enthaltende Reagenzien und deren Verwendung

Also Published As

Publication number Publication date
US6489495B2 (en) 2002-12-03
WO1998005678A2 (de) 1998-02-12
ATE330964T1 (de) 2006-07-15
DE59712683D1 (de) 2006-08-03
EP0923600A2 (de) 1999-06-23
WO1998005678A3 (de) 1999-02-25
US6268516B1 (en) 2001-07-31
US20020007073A1 (en) 2002-01-17
EP0923600B1 (de) 2006-06-21
JP2000515861A (ja) 2000-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0923600A2 (de) Neuartige kationische amphiphile für den liposomalen gentransfer
EP1478652B1 (de) Komponenten fur die herstellung amphoterer liposomen
CA2237316C (en) Complex cationic lipids
DE69324367T2 (de) Kationische lipide
EP0883602B1 (de) Lipidverbindungen
AU707947B2 (en) Novel amide-based cationic lipids
DE69815075T2 (de) Dimere kationische lipide auf dicystinbasis
DE69707870T2 (de) Quartäre cytofectine
EP0835238B1 (de) Neue kationische und polykationische amphiphile, diese enthaltende reagenzien und deren verwendung
DE69828045T2 (de) Verbindungen, ihre herstellung und ihre verwendung für den transfer von nucleinsäuren in zellen
TW201713614A (zh) 可離子化化合物及組合物、與其用途
DE69329069T2 (de) Verfahren zur Herstellung von Lipid-Konjugaten
CN118265692B (zh) 一种碳核阳离子脂质
JP2024546431A (ja) Ｒｎａ送達のためのイオン化可能なカチオン性脂質
DE19607686A1 (de) Neue metabolisierbare Lipopolyamine, deren Darstellung und Anwendung
EP0900281A1 (de) Zusammensetzung für die transfektion höherer eukaryotischer zellen
DE69531402T2 (de) Kationische transport-reagenzien
EP1003711B1 (de) Neue lipopolyamine, deren darstellung und anwendung
DE69804302T2 (de) Kationische mittel zur transfektion von nukleinsäuren
EP0783515B1 (de) Schutz- bzw. ankergruppen und deren verwendung (carbamide)
DE60127848T2 (de) T-Butoxycarbonylaminoethylamin für die Synthese von PNA-Monomereinheiten, Aminosäurederivaten, Zwischenprodukten davon und Verfahren für deren Herstellung
DE19834683A1 (de) Neue Lipopolyamine, deren Darstellung und Anwendung
DE10064870B4 (de) Schwefelhaltige Amphiphile für den Transfer von biologisch aktiven Molekülen in Zellen
JPH0426662A (ja) アミノ酸アシル誘導体及びその製造法
CA2446951C (fr) Derives lipidiques de polythiouree

Legal Events

Date Code Title Description
8110 Request for examination paragraph 44
8172 Supplementary division/partition in:

Ref document number: 19655272

Country of ref document: DE

Kind code of ref document: P

Q171 Divided out to:

Ref document number: 19655272

Country of ref document: DE

Kind code of ref document: P

8130 Withdrawal