DE19540669A1

DE19540669A1 - Interferon-Zusammensetzung

Info

Publication number: DE19540669A1
Application number: DE19540669A
Authority: DE
Inventors: Charanjit Rai Behl; Aruna Sudhir Railkar; Navnit Hargovindas Shah
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1994-11-03
Filing date: 1995-10-31
Publication date: 1996-05-09
Also published as: IT1275802B1; ITMI952202A1; FR2726470A1; FR2726470B1; ITMI952202A0; JPH08208510A

Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf verbesserte, nicht parenterale Zusammensetzungen zur Verabreichung von Interferon.

Interferone sind natürlich auftretende artspezifische Proteine, die von verschiedenen Zellen durch Induktion mit Viren, doppelsträngigen RNAs, anderen Polynukleotiden, Antigenen und Mitogenen produziert werden. Interferone zeigen vielfältige biologische Aktivitäten, wie antivirale, antiproliferative, immunomodulierende und antizelluläre Funktionen. Mindestens drei verschiedene Typen von Humaninterferonen sind in Bezug auf ihre antiviralen, anti-Wachstums und natürliche Killerzellen aktivierende Aktivitäten identifiziert und charakterisiert worden. Sie werden von Leukozyten, Lymphozyten und Fibroblasten produziert und jeweils als α-, γ- und β-Interferone klassifiziert. Eine große Anzahl von Abarten der drei Typen von Humaninterferonen ist ebenfalls bekannt. Diese "nativen" Interferone können nach herkömmlichen Methoden in Zellkultur produziert, isoliert und gereinigt werden, wie zum Beispiel im U.S. Patent Nr. 4,503,035 beschrieben. Proteine oder Polypeptide, die eine vergleichbare biologische Aktivität zu nativem Interferon aufweisen, können ebenfalls unter Verwendung rekombinanter Technologie hergestellt und unter Verwendung herkömmlicher Technologie gewonnen und gereinigt werden, wie zum Beispiel in den U.S. Patenten Nr. 4,816,566 und 4,810,645 beschrieben. Für die Zwecke dieser Erfindung bezieht sich der Ausdruck "Interferon" auf natives Interferon, Proteine und Polypeptide, die eine vergleichbare biologische Aktivität wie natives Interferon aufweisen wie auch auf Interferone, die an ein Polymer konjugiert sind (angebundenes Interferon). Am meisten bevorzugt für die Zwecke dieser Erfindung ist Interferon α, insbesondere Interferon α-2a.

Interferon wird normalerweise durch Schleimhautgewebe schlecht in den Blutstrom absorbiert und ist daher von begrenztem oder keinem praktischen Wert wenn es über einen anderen Weg als parenteral verabreicht wird. Die biologische Verfügbarkeit von Interferon ist in gegenwärtigen Systemen zur nicht parenteralen, insbesondere oralen Verabreichung, im allgemeinen bei oder nahe 0%. Die Verabreichung dieses schwer zu absorbierenden Arzneimittels wird im allgemeinen durch intravenöse oder intramuskuläre Injektionen durchgeführt.

Die Zusammensetzungen gemäß der vorliegenden Erfindung erhöhen das Ausmaß der Absorption von Interferon durch Schleimhautgewebe wie die gastrointestinalen und rektalen Membranen in den Blutstrom und fördern somit die biologische Verfügbarkeit von Interferon, das sonst im allgemeinen nicht durch Schleimhautgewebe absorbiert wird, wobei sie die therapeutische Effektivität von Interferon erhöhen. Es ist die einzigartige Zusammensetzung des Absorptions-Verbesserungs- Systems, die zu den überragenden Ergebnissen führt.

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf eine pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend:

a) eine therapeutisch wirksame Menge von Interferon;
b) eine absorptionsverbessernde Menge von einem absorptionsverbessernden System, einschließend:
- (1) von ungefähr 1 Gew.-% bis ungefähr 20 Gew.-% des absorptionsverbessernden Systems einer Verbindung der Formel: CH₃(CH₂)₁₀CH₂(OCH₂CH₂)_nOHworin n einen Mittelwert von 12 hat;
- (2) von ungefähr 1 Gew.-% bis ungefähr 20 Gew.-% des absorptionsverbessernden Systems eines pharmazeutisch verträglichen Salzes von mindestens einer von Capryl- oder Caprinsäure und
c) von ungefähr 0 Gew.-% bis ungefähr 90 Gew.-% einer Verbindung der Formel worin n 6 oder 8 ist.

Die erste Komponente des verbessernden Systems (Komponente (b) (1)) ist das Produkt einer Veretherungsreaktion zwischen Laurylalkohol und Polyoxyethylenglykol.

Laureth-12, der die CTFA-Bezeichnung PEG-(12)-Laurylether hat, ist im Handel erhältlich und auch bekannt als MACOL® LA-12, hergestellt von Mazer Chemicals Company, Gurnee, Illinois; Alkasurf® LAN-12, hergestellt von Alkaril; Carsonon® L-12, hergestellt von Lonza und Ethosperse® LA-12, hergestellt von Glyco.

Das Polyethylenglykol in Laureth-12 ist typischerweise ein Material mit mittlerem bis hohem Molekulargewicht, das bevorzugt ein Molekulargewicht-Zahlenmittel von 600 hat.

Die zweite Komponente des verbessernden Systems (Komponente (b) (2)) ist eines oder mehrere der Salze von Caprylsäure (CH₃(CH₂)₆COOH) und Caprinsäure (CH₃(CH₂)₈COOH).

In Übereinstimmung mit dieser Erfindung können die pharmazeutisch verträglichen Salze von einer oder beiden von Caprin- und Caprylsäure oder Mischungen davon verwendet werden und sie sind von der Erfindung eingeschlossen. Die Salze können in herkömmlicher Weise unter Verwendung bekannter Techniken durch Reagierenlassen der Säure mit einer Base, die ein nicht toxisches, pharmakologisch und pharmazeutisch annehmbares Kation hat, hergestellt werden. Im allgemeinen ist jede Base, die ein Salz mit der Carbonsäure bildet und deren pharmakologische Eigenschaften keinen nachteiligen physiologischen Effekt verursachen, wenn sie von einem warmblütigen Tier eingenommen oder diesem anderweitig verabreicht wird, geeignet. Somit schließen solche Basen zum Beispiel Alkalimetall- und Erdalkalimetallhydroxide oder -carbonate ein, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Calciumhydroxid, Kaliumcarbonat und dergleichen. Besonders bevorzugt für diese Erfindung sind Natriumsalze, hauptsächlich wegen ihrer leichten Verfügbarkeit, und Kaliumsalze. Natriumcaprylat ist am bevorzugtesten.

Es ist auch bevorzugt, daß die erfindungsgemäße Formulierung ein C₈-C₁₀-Triglycerid der Formel:

worin n 6 oder 8 ist, umfaßt.

Dieses Triglycerid wird von Huls America unter der Marke Miglyol®-812 und von Stephan Company unter der Marke Neobee® M5 hergestellt.

Die pharmazeutische Zusammensetzung dieser Erfindung kann in praktisch jeder Dosisform abgegeben werden, die für eine nicht parenterale Verabreichung, bevorzugt oral oder rektal, geeignet ist. Zum Beispiel können die pharmazeutischen Zusammensetzungen oral über eine flüssigkeitsaufnehmende Arzneimittel abgabevorrichtung abgegeben werden. Geeignete orale Abgabesysteme für diese Erfindung schließen die in den U.S. Patenten Nr. 5,198,229 und 5,223,265 beschriebenen ein.

Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können auch rektal in Form von herkömmlichen "Mikroklistieren" abgegeben werden, unter Verwendung rektaler Vorrichtungen wie einer Spritze oder anderer im Stand der Technik bekannter Vorrichtungen. Beispiele für Mikroklistiere werden in Martindale, The Extra Pharmacopoeia, 30. Auflage, (The Pharamaceutical Press, London, 1993) beschrieben (siehe die Beschreibungen für verschiedene Zusammensetzungen für Microlax, Microlet und Relaxit auf Seiten 1696, 1697 bzw. 1797). Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können auch rektal in Form eines Zäpfchens abgegeben werden, das in Übereinstimmung mit herkömmlichen Verfahren hergestellt werden kann.

Die pharmazeutischen Zusammensetzungen dieser Erfindung können eine Emulsion sein oder sie können mit Wasser oder einer wäßrigen Lösung mischbar sein.

Im Falle einer Emulsion kann die pharmazeutische Zusammensetzung auch einen Emulgator umfassen. Geeignete Emulgatoren schließen jeden herkömmlichen Emulgator ein, der die Bildung der Emulsion unterstützt und der den Bereich der Temperatur, der Konzentration, etc., über den die Emulsion dispergiert bleibt, ausdehnt und allgemein die Stabilität der Emulsion erhöht. Ein Beispiel für einen bevorzugten Emulgator ist das Monoglycerid von Stearinsäure, hergestellt von Henkel Corporation unter der Marke Monumul® 90-25.

Im Falle einer Zusammensetzung, die mit Wasser mischbar ist, kann die pharmazeutische Zusammensetzung auch mindestens einen hydrophilen Träger umfassen, der in der Lage ist, die wasserlöslichen Substanzen aufzulösen. Beispiele sind PEG 400 und Glycerin.

Zusätzlich zu den obengenannten grundlegenden Bestandteilen können die pharmazeutischen Zusammensetzungen auch Proteaseinhibitoren einschließen. Proteasen sind Enzyme, die die Spaltung innerer Peptidbindungen in einem Protein katalysieren. Ein Beispiel für Proteaseinhibitoren ist Aprotinin.

Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können auch Chelatbildner einschließen. Ein Beispiel für einen Chelatbildner ist Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) und Salze davon.

Zusätzlich können die pharmazeutischen Zusammensetzungen auch human Serumalbumin einschließen, eine sterile Zubereitung von Serumalbumin, die durch Fraktionierung von Blut von gesunden menschlichen Spendern erhalten wird, wobei nicht weniger als 96% seines Gesamtvolumens das Protein Albumin ist.

Wenn sie in Form eines Zäpfchens abgegeben wird, kann die pharmazeutische Zusammensetzung einen geeigneten Zäpfchen- Grundbestandteil einschließen. Geeignete Zäpfchen- Grundbestandteile schließen jeden herkömmlichen Zäpfchen- Grundbestandteil ein, wie die, die man in Remington′s Pharmaceutical Sciences, 18. Auflage, Herausgeber: A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA 1990 findet. Beispiele für geeignete Zäpfchen-Grundbestandteile schließen, ohne einschränkend zu sein, die folgenden ein: Kakaobutter; Fettsäureglyceride wie Pflanzenöl, einschließlich Kokosnuß- oder Palmkernöl, das durch Veresterung, Hydrierung und Fraktionierung modifiziert ist; glycerisierte Gelatine; Polyethylenglycol; ein nichtionisches oberflächenaktives Mittel wie Polyoxyethylensorbitfettsäureester und Polyoxyethylenstearat. Am meisten bevorzugt sind Mischungen aus Mono-, Di- und Triglyceriden von natürlichen gesättigten C_12-18-Fettsäuren mit einer geraden Anzahl von Kohlenstoffatomen. Besonders geeignet und bevorzugt sind die Grundbestandteile von Huls America mit dem Handelsnamen Witepsol®.

Die relativen Anteile der Bestandteile der erfindungsgemäßen Zusammensetzung können variiert werden, um eine optimale Absorption zu erreichen, in Abhängigkeit von dem gewählten Interferon, der Verabreichungsform der erfindungsgemäßen Formulierung und der Reizungs-Tolerierbarkeit des Patienten. Für Interferon α-2a kann die Gewichtszusammensetzung folgenden Bereich aufweisen:

a) ungefähr 1 × 10⁶ IU/ml bis ungefähr 2 × 10⁸ IU/ml Interferon, bevorzugt ungefähr 2 × 10⁷ IU/ml bis ungefähr 1 × 10⁸ IU/ml, am bevorzugtesten ungefähr 5 × 10⁷ IU/ml;
b) (1) ungefähr 1% bis ungefähr 20% Laureth-12, bevorzugt ungefähr 3% bis ungefähr 15% und am bevorzugtesten ungefähr 6% bis ungefähr 12%)
b) (2) ungefähr 1% bis ungefähr 20% von dem Salz von Capryl-/Caprinsäure, bevorzugt ungefähr 3% bis ungefähr 15% und am bevorzugtesten ungefähr 5% bis ungefähr 10%.

Die pharmazeutische Zusammensetzung kann auch ungefähr 0% bis ungefähr 90% Miglyol-812 einschließen, bevorzugt 20% bis ungefähr 60% und am bevorzugtesten ungefähr 50%.

In einer bevorzugten Ausführungsform ist das Salz der Capryl-/ Caprinsäure Natriumcaprylat, das in der oben angegebenen Formulierung mit dem oben angegebenen Gewichtsprozent vorhanden ist.

Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen liegen in Form von Dosierungsformen als flüssige Emulsion oder Lösung vor. Die Formulierung kann durch herkömmliche Methoden in ein orales oder rektales Abgabesystem wie die oben beschriebenen gefüllt werden.

Bevorzugt liegt die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung in Form einer "Einheitsdosis" vor. Der Ausdruck "Einheitsdosis" wird hierin im herkömmlichen Sinn verwendet und bedeutet eine einfache Anwendung oder Verabreichung des Arzneimittels an die behandelte Person in einer Menge wie unten angegeben. Es versteht sich, daß die Menge in einer Einheitsdosis oder Kapsel gegeben werden kann oder alternativ in vielfachen von zwei oder mehr solcher Dosiseinheiten, wobei sich die gesamte Menge auf die genannte Arzneimittelmenge für den gegebenen Zeitraum aufaddiert.

Beispiele

Um die gastrointestinale und rektale Membranabsorption von Interferon zu bewerten, wurden in vivo Tests mit den erfindungsgemäßen Formulierungen ebenso wie mit einer Vergleichsformulierung durchgeführt. Das Verfahren und die Ergebnisse werden im folgenden beschrieben.

Beispiel 1 In vivo - Ratten - Dickdarm Herstellung der Formulierungen

Zur Herstellung der nicht erfindungsgemäßen Formulierung 1 wurde eine wäßrige Interferon α-2a Lösung mit einer Konzentration von ungefähr 14,2 × 10⁸ IU/ml gepuffert bei ungefähr pH 5 (Interferon-Hauptlösung), zu Wasser zugegeben, das human Serumalbumin enthielt.

Zur Herstellung der erfindungsgemäßen Formulierungen 2 und 3 wurde eine Lösung von Natriumcaprylat in Wasser (wäßrige Phase) zu einer Mischung von Laureth-12, wahlweise mit Monomul® 90-25 und Miglyol® 812 (Ölphase) bei 60-65°C unter Schütteln gefolgt von Verwirbeln zugegeben. In einem zweiten Reagenzglas wurde eine Mischung enthaltend Interferon-Hauptlösung, human Serumalbumin, Aprotinin und EDTA hergestellt. Zu der Mischung des zweiten Reagenzglases wurde die Emulsion der Ölphase und der wäßrigen Phase bei ungefähr 35-40°C zugegeben und die erhaltene Mischung wurde verwirbelt.

Die Formulierungen werden in der nachfolgenden Tabelle 1 angegeben:

Tabelle 1

Obwohl Interferon α-2a in den oben genannten Zusammensetzungen verwendet wurde, versteht es sich, daß dieses durch andere Interferone in geeigneten Mengen innerhalb des Wissens eines Fachmanns in diesen und anderen hierin beschriebenen Zusammensetzungen ausgetauscht werden kann.

Verabreichung der Kontrollformulierung 1 und der erfindungsgemäßen Formulierungen 2 und 3

Erwachsene weibliche Sprague-Dawley Ratten, die jeweils ungefähr 300-400 g wogen, ließ man für 24 Stunden fasten und narkotisierte sie mit Ketamin-HCl und Xylazin bei einer Dosis von 80 mg/kg beziehungsweise 10 mg/kg. Jeder Ratte wurde ein Einschnitt von ungefähr 3 cm vertikal durch die Bauchmittellinie gemacht, um die Dickdarmwand freizulegen. Die Kontrollformulierung 1 und die erfindungsgemäßen Formulierungen 2 und 3 wurden mit einer Dosis von 20 MIU (20 × 10⁶ IU) durch Injektion mit einer Spritze in die Wand des aufsteigenden Dickdarmschenkels 1 bis 2 cm entfernt vom Blinddarm verabreicht.

Verabreichung der Formulierung 1 über den subcutanen Weg

Zum Zweck der Bestimmung der relativen biologischen Verfügbarkeit wurde eine 3-20 mU Dosis der Formulierung 1 durch Injektion mit einer Spritze als ein Bolus in eine Tasche, die durch Falten der Haut im Rücken-Halsbereich von narkotisierten Ratten erzeugt wird, subcutan (s.c.) verabreicht. Fig. 1 zeigt die Daten für die Fläche unter der Kurve für Formulierung 1 s.c. verabreicht als eine Funktion der Dosis.

Bestimmung der Konzentration von Interferon im Plasma

Die Konzentration von Interferon im Plasma wurde nach verschiedenen Zeitabständen nach Verabreichung des Interferon über Formulierung 1 und erfindungsgemäße Formulierungen 2 und 3 bestimmt. 0,6 ml Blutproben wurden unter Verwendung der Orbitalplexus-Technik vor der Verabreichung des Interferons und nach 0,25, 0,50, 1, 2, 4 und 5 Stunden nach Verabreichung genommen und dann zentrifugiert, um das Serum abzutrennen, wonach das Plasma abgezogen und bis es analysiert wurde eingefroren wurde. Nach jeder genommenen Blutprobe, außer vor der Verabreichung des Interferons und 15 Minuten nach Verabreichung, wurden 0,5 ml einer normalen physiologischen Kochsalzlösung (0,9%) intraperitonial injiziert.

Analyse der Plasmaproben

Die Interferon-Konzentrationen im Plasma wurden unter Verwendung des Enzym Immuno Assay (EIA)-Kits von Roche Diagnostic Systems, Basel, Schweiz bestimmt.

Das Assay Verfahren war wie folgt:

Vorratsstandard

1 ml destilliertes Wasser wurde zu einer Ampulle, die 2500 IU lyophilisiertes Interferon α-2a enthielt, zugegeben. Die Ampulle wurde durch mehrmaliges Umdrehen vorsichtig geschüttelt.

Standards für die Eichkurve

Die EIA-Röhrchen wurden mit 200 IU, 100 IU, 50 IU, 25 IU und 12,5 IU pro ml markiert. In das erste Röhrchen (mit 200 IU/ml markiert) wurden 920 ml und in den Rest der Röhrchen 500 ml human Serumalbumin (HSA) gegeben. 80 ml des Vorratsstandards wurden zu dem ersten Röhrchen gegeben und vorsichtig gemischt. Von diesem Röhrchen wurden 500 ml Lösung in das zweite Röhrchen (mit 100 IU/ml markiert) überführt und vorsichtig gemischt. Dieses Verfahren der aufeinanderfolgenden Verdünnungen wurde mit jedem der verbleibenden Röhrchen wiederholt und man erhielt Konzentrationen von 200 IU, 100 IU, 50 IU, 25 IU und 12,5 IU/ml.

Assay Anordnung für Standards und Proben

100 Mikroliter der Standards und Proben wurden doppelt in die bestimmten EIA-Röhrchen überführt. In die 0 IU/ml Röhrchen wurden 100 ml HSA-Puffer zugegeben. Zu den EIA-Röhrchen, die die Standards in HSA-Puffer enthielten, wurde 100 ml von interferonfreiem Serum zugegeben, wohingegen zu den EIA- Röhrchen, die die Proben in Serum enthielten, 100 ml HSA-Puffer zugegeben wurde.

Zu all diesen Röhrchen wurden 500 ml anti- Interferonperoxidaselösung aus dem Interferon-Assay-Kit zugegeben und vorsichtig gemischt. Eine Perle (überzogen mit monoklonalem anti-Interferon-Antikörper) wurde in jedes Röhrchen gegeben. Alle Röhrchenständer wurden mit Aluminiumfolie abgedeckt und zur Inkubation für 18 bis 24 Stunden im Dunkeln bei Raumtemperatur gelagert.

Nach dem Inkubationszeitraum wurden die Perlen in den EIA- Röhrchen mit Wasser unter Verwendung einer COBAS- Waschvorrichtung gewaschen. Nach dem Waschen wurden 250 ml eines farbentwickelnden Substrats zugegeben und man ließ für 30 Minuten inkubieren. Sofort nach 30 Minuten wurde 1 ml eines stoppenden Reagenzes zu jedem Röhrchen zugegeben, gemischt und die Extinktion der entwickelten Farbe wurde bei 492 nm unter Verwendung eines COBAS-EIA-Photometers gemessen. Aus der Extinktion wurde die Interferonmenge in der Probe unter Verwendung der Steigung der Standardkurve berechnet.

Tests und Datenanalyse

Der Gehalt im Plasma wurde als Funktion der Zeit für Formulierung 1 und die erfindungsgemäßen Formulierungen 2 und 3 aufgetragen, wie in Fig. 2 und 3 gezeigt. Unter Verwendung eines Computersystems wurde die Fläche unter der Kurve ("FUK") für Formulierung 1 und die erfindungsgemäßen Formulierungen 2 und 3 bestimmt.

Fig. 1 zeigt die Daten, die nach der s.c. Verabreichung verschiedener Dosen unter Verwendung von Formulierung 1 erhalten wurden.

Die biologische Verfügbarkeit wurde dann wie folgt berechnet:

Die Ergebnisse werden in Tabelle 2 gezeigt.

Durchschnitt % relative biologische Verfügbarkeit
Zusammensetzung
0
Kontrollformulierung 1
18,3	erfindungsgemäße Formulierung 2
22,6	erfindungsgemäße Formulierung 3

Die Daten zeigen, daß die erfindungsgemäßen Formulierungen 2 und 3, wenn nicht parenteral verabreicht, der nicht erfindungsgemäßen Formulierung 1, wenn nicht parenteral verabreicht, in Bezug auf die relative biologische Verfügbarkeit überlegen waren.

Beispiel 2 In vivo - Ratten - Emulsion - rektal Herstellung der Formulierungen

Die nicht erfindungsgemäße Formulierung 1 wurde wie in Beispiel 1 hergestellt.

Um die erfindungsgemäßen Formulierungen 4 und 5 herzustellen wurde eine Lösung von Natriumcaprylat in Wasser (wäßrige Lösung) zu einer Mischung von Laureth-12 mit Monomul® 90-25 in Miglyol® 812 (Ölphase) bei 60-65°C unter Schütteln gefolgt von Verwirbeln zugegeben. In einem zweiten Reagenzglas wurde eine Mischung enthaltend die Interferon-Hauptlösung, human Serumalbumin, Aprotininlösung und EDTA hergestellt. Zu der Mischung des zweiten Reagenzglases wurde die Emulsion der Ölphase und der wäßrigen Phase bei ungefähr 35-40°C zugegeben und die erhaltene Mischung wurde verwirbelt.

Die nicht erfindungsgemäße Formulierung 1 und die erfindungsgemäßen Formulierungen 4 und 5 werden in der nachfolgenden Tabelle 3 gezeigt:

Tabelle 3

Verabreichung der Formulierung 1 über den s.c. Weg

Wie in Beispiel 1 beschrieben.

Verabreichung der nicht erfindungsgemäßen Kontrollformulierung 1 und der erfindungsgemäßen Formulierungen 4 und 5

Erwachsene weibliche Sprague-Dawley Ratten, die jeweils ungefähr 300-400 g wogen, ließ man für 24 Stunden fasten und narkotisierte sie mit Ketamin-HCl und Xylazin bei einer Dosis von 80 mg/kg bzw. 10 mg/kg. Interferon wurde mit einer Dosis von 3 MIU (3 × 10⁶ IU) durch Injektion der nicht erfindungsgemäßen Kontrollformulierung 1 und der erfindungsgemäßen Formulierungen 4 und 5 mit einer extemporären rektalen Vorrichtung 2-3 cm in das Rektum verabreicht.

Bestimmung der Konzentration von Interferon im Plasma

Die Konzentration von Interferon im Plasma, einschließlich der Assay Verfahrensschritte, wurde wie in Beispiel 1 bestimmt.

Tests und Datenanalyse

Fig. 4 zeigt einen Plot der Konzentration im Plasma als eine Funktion der Zeit für die nicht erfindungsgemäße Kontrollformulierung 1 und die erfindungsgemäßen Formulierungen 4 und 5. Die relative biologische Verfügbarkeit wurde wie in Beispiel 1 berechnet.

Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 gezeigt.

Durchschnitt % relative biologische Verfügbarkeit
Zusammensetzung
0
nicht erfindungsgemäße Kontrollformulierung 1
19,5	erfindungsgemäße Formulierung 4
21	erfindungsgemäße Formulierung 5

Die Daten zeigen, daß die erfindungsgemäßen Formulierungen 4 und 5, wenn nicht parenteral verabreicht, der Kontrollformulierung 1, wenn nicht parenteral verabreicht, in Bezug auf die relative biologische Verfügbarkeit überlegen waren.

Beispiel 3 In vivo - Kaninchen - Emulsion - rektal Herstellung der Formulierung 1 und erfindungsgemäßer Formulierung 4

Die erfindungsgemäße Formulierung 4 wurde wie in Beispiel 2 hergestellt.

Die nicht erfindungsgemäße Formulierung 1 und die erfindungsgemäße Formulierung 4 werden in nachfolgender Tabelle 5 gezeigt:

Tabelle 5

Verabreichung der nicht erfindungsgemäßen Kontrollformulierung 1 und der erfindungsgemäßen Formulierung 4

Neuseeländische weiße Kaninchen ließ man für 24 Stunden fasten und narkotisierte sie mit Ketamin-HCl und Xylazin bei einer Dosis von 35 mg/kg bzw. 10 mg/kg. Für die erfindungsgemäße Formulierung 4 wurde Interferon bei einer Dosis von 20 MIU (20 × 10⁶ IU) unter Verwendung einer extemporären rektalen Vorrichtung 2-3 cm in das Rektum verabreicht.

Verabreichung der Formulierung 1 über den s.c. Weg

Gleich wie in Beispiel 1, außer daß die Interferondosis 10 mU war.

Bestimmung der Konzentration von Interferon im Plasma

Blutproben wurden aus der aurikulären zentralen Arterie nach vorbestimmten Zeitabschnitten entnommen. Die Konzentration von Interferon im Plasma, einschließlich der Assay- Verfahrensschritte, wurde wie in Beispiel 1 bestimmt.

Tests und Datenanalyse

Fig. 5 zeigt die Konzentration im Plasma als eine Funktion der Zeit für die subcutan verabreichte nicht erfindungsgemäße Formulierung 1. Fig. 6 zeigt die Konzentration im Plasma als eine Funktion der Zeit für die rektal verabreichte erfindungsgemäße Formulierung 4. Unter Verwendung eines Computersystems wurde die Fläche unter der Kurve ("FUK") für die subcutan ("s.c.") verabreichte Formulierung 1 und die nicht parenteral verabreichte Formulierung 4 bestimmt. Die relative biologische Verfügbarkeit der nicht erfindungsgemäßen Kontrollformulierung 1 und der erfindungsgemäßen Formulierung 4 wurde dann wie folgt berechnet:

Die Ergebnisse werden in Tabelle 6 unten gezeigt.

Durchschnitt % relative biologische Verfügbarkeit
Zusammensetzung
0
nicht erfindungsgemäße Kontrollformulierung 1
10	erfindungsgemäße Formulierung 4

Die Daten zeigen, daß die erfindungsgemäße Formulierung 4, wenn nicht parenteral verabreicht, der nicht erfindungsgemäßen Kontrollformulierung 1, wenn nicht parenteral verabreicht, in Bezug auf die relative biologische Verfügbarkeit überlegen war.

Beispiel 4 In vivo - Ratten - nicht wäßrig - Dickdarm Herstellung der Formulierungen

Zur Herstellung der erfindungsgemäßen Formulierung 6 wurde Laureth-12 zu Miglyol® 812 zugegeben und auf 35°C bis 40°C erwärmt. Natriumcaprylat wurde durch Erwärmen in einer Mischung von Caprylsäure und Labrasol, ein gesättigtes, polyglykolisiertes C₈-C₁₀-Glycerid, aufgelöst. Aprotinin und Interferonlösung wurden zu der vorstehenden Lösung bei Raumtemperatur zugegeben, gefolgt von der Zugabe von Miglyol® 812- und Laureth-12-Lösung unter Rühren.

Zur Herstellung der erfindungsgemäßen Formulierung 7 wurde Natriumcaprylat in einer Mischung von Caprylsäure und Miglyol® 812 bei einer Temperatur von 50-60°C aufgelöst. In einer zweiten Ampulle wurde der Emulgator Lecithin und Laureth-12 geschmolzen und gemischt, gefolgt von der Zugabe von Interferon- und Aprotininlösungen bei ungefähr 30°C. Die Mischung aus Natriumcaprylat, Caprylsäure und Miglyol® 812 wurde unter Rühren zu der zweiten Ampulle zugegeben.

Die nicht erfindungsgemäße Formulierung 1 und die erfindungsgemäßen Formulierungen 6 und 7 werden in der folgenden Tabelle 7 gezeigt:

Tabelle 7

Verabreichung der Formulierung 1 über den s.c. Weg

Gleich wie in Beispiel 1 beschrieben.

Verabreichung der nicht erfindungsgemäßen Kontrollformulierung 1 und der erfindungsgemäßen Formulierungen 6 und 7

Gleich wie in Beispiel 1 beschrieben.

Bestimmung der Konzentration von Interferon im Plasma

Tests und Datenanalyse

Fig. 7 zeigt einen Plot der Konzentration im Plasma als eine Funktion der Zeit für die erfindungsgemäße Formulierung 6. Fig. 8 zeigt einen Plot der Konzentration im Plasma als eine Funktion der Zeit für die erfindungsgemäße Formulierung 7. Die relative biologische Verfügbarkeit wurde wie in Beispiel 1 berechnet.

Die Ergebnisse werden in Tabelle 8 gezeigt.

Durchschnitt % relative biologische Verfügbarkeit
Zusammensetzung
0
nicht erfindungsgemäße Kontrollformulierung 1
9,2	erfindungsgemäße Formulierung 6
4,9	erfindungsgemäße Formulierung 7

Die Daten zeigen, daß die erfindungsgemäßen Formulierungen 6 und 7, wenn nicht parenteral verabreicht, der Formulierung 1, wenn nicht parenteral verabreicht, in Bezug auf die relative biologische Verfügbarkeit überlegen waren.

Beispiel 5 In vivo - Ratten - wäßrig - Dickdarm Herstellung der Formulierungen

Zur Herstellung der erfindungsgemäßen Formulierung 8 wurden PEG 400, Glycerin, Laureth-12 und Natriumcaprylat erhitzt, bis das Natriumcaprylat vollständig aufgelöst war (60-70°C). Interferonlösung, human Serumalbuminlösung und Aprotininlösung wurden nach Abkühlung der obigen Lösung auf Raumtemperatur zugegeben. Die resultierende Lösung wurde dann verwirbelt.

Zur Herstellung der erfindungsgemäßen Formulierung 9 wurden Laureth-12 und Natriumcaprylat durch Erwärmen auf 40°C in Wasser gelöst. Nach Abkühlen der obigen Mischung auf Raumtemperatur wurden Interferonlösung, Aprotininlösung, human Serumalbuminlösung und EDTA zu dieser zugegeben und gemischt.

Die nicht erfindungsgemäße Kontrollformulierung 1 und die erfindungsgemäßen Formulierungen 8 und 9 werden in der Tabelle 9 unten gezeigt:

Tabelle 9

Verabreichung der Formulierung 1 über den s.c. Weg

Gleich wie in Beispiel 1 beschrieben.

Verabreichung der Kontrollformulierung 1 und der erfindungsgemäßen Formulierungen 8 und 9

Gleich wie in Beispiel 1 beschrieben.

Bestimmung der Konzentration von Interferon im Plasma

Tests und Datenanalyse

Fig. 9 zeigt einen Plot der Konzentration im Plasma als eine Funktion der Zeit für die erfindungsgemäße Formulierung 8. Fig. 10 zeigt einen Plot der Konzentration im Plasma als eine Funktion der Zeit für die erfindungsgemäße Formulierung 9. Die relative biologische Verfügbarkeit wurde wie in Beispiel 1 berechnet.

Die Ergebnisse werden in Tabelle 10 gezeigt.

Durchschnitt % relative biologische Verfügbarkeit
Zusammensetzung
0
nicht erfindungsgemäße Kontrollformulierung 1
4,1	erfindungsgemäße Formulierung 8
6,1	erfindungsgemäße Formulierung 9

Die Daten zeigen, daß die erfindungsgemäßen Formulierungen 8 und 9, wenn nicht parenteral verabreicht, der Kontrollformulierung 1, wenn nicht parenteral verabreicht, in Bezug auf die relative biologische Verfügbarkeit überlegen waren.

Beispiel 6

Zur Erläuterung wird nachfolgend eine geeignete Zäpfchenformulierung in Übereinstimmung mit dieser Erfindung dargelegt. Während Interferon α-2a, das bevorzugte Interferon für diese Erfindung, zur Erläuterung dieser Formulierungen verwendet wird, sollte es so verstanden werden, daß andere Interferone in geeigneten Mengen eingesetzt werden können.

Zäpfchen-Dosisform
Interferon-Hauptlösung\|0,02 ml
Witepsol H15	1000 mg
Laureth-12	90 mg
Natriumcaprylat	60 mg
Miglyol® 812	280 mg

Die obige Dosisform kann wie folgt hergestellt werden:
Erhitze die Basis auf ungefähr 40-45°C. Füge Laureth-12, Natriumcaprylat und Miglyol® 812 zu und mische, um eine gleichmäßige Mischung zu erhalten. Kühle die Mischung auf 35°C. Füge die Interferonlösung zu und mische gut. Gieße die Mischung in Zäpfchenformen und kühle zum Festwerden als Zäpfchen.

Die Wirksamkeit der durch die vorliegende Erfindung zur Verfügung gestellten Zusammensetzungen wird darüberhinaus durch Fig. 1-10 demonstriert.

Fig. 1 zeigt einen Plot der Fläche unter der Kurve als eine Funktion der Dosis für die subcutane Verabreichung an Ratten von Formulierung 1.

Fig. 2 zeigt einen Plot von Interferonkonzentrationen in Rattenplasma als eine Funktion der Zeit für die Dickdarm- Verabreichung der Kontrollformulierung und der erfindungsgemäßen Formulierung 2.

Fig. 3 zeigt einen Plot der Interferonkonzentrationen in Rattenplasma als eine Funktion der Zeit für die Dickdarm- Verabreichung der erfindungsgemäßen Formulierung 3.

Fig. 4 zeigt einen Plot der Interferonkonzentrationen in Rattenplasma als eine Funktion der Zeit für die rektale Verabreichung der Kontrollformulierung und der erfindungsgemäßen Formulierungen 4 und 5.

Fig. 5 zeigt einen Plot der Interferonkonzentrationen in Kaninchenplasma als eine Funktion der Zeit für die subcutane Verabreichung der Formulierung 1.

Fig. 6 zeigt einen Plot der Interferonkonzentrationen in Kaninchenplasma als eine Funktion der Zeit für die rektale Verabreichung der erfindungsgemäßen Formulierung 4.

Fig. 7 zeigt einen Plot der Interferonkonzentrationen in Rattenplasma als eine Funktion der Zeit für die Dickdarm- Verabreichung der erfindungsgemäßen Formulierung 6.

Fig. 8 zeigt einen Plot der Interferonkonzentrationen in Rattenplasma als eine Funktion der Zeit für die Dickdarm- Verabreichung der erfindungsgemäßen Formulierung 7.

Fig. 9 zeigt einen Plot der Interferonkonzentrationen in Rattenplasma als eine Funktion der Zeit für die Dickdarm- Verabreichung der erfindungsgemäßen Formulierung 8.

Fig. 10 zeigt einen Plot der Interferonkonzentrationen in Rattenplasma als eine Funktion der Zeit für die Dickdarm- Verabreichung der erfindungsgemäßen Formulierung 9.

Claims

1. Pharmazeutische Zusammensetzung umfassend:

a) eine therapeutisch wirksame Menge von Interferon; und
b) eine absorptionsverbessernde Menge von einem absorptions verbessernden System, einschließend:
- (1) von ungefähr 1 Gew.-% bis ungefähr 20 Gew.-% einer Verbindung der Formel: CH₃(CH₂)₁₀CH₂(OCH₂CH₂)_nOHworin n einen Mittelwert von 12 hat;
- (2) von ungefähr 1 Gew.-% bis ungefähr 20 Gew.-% eines pharmazeutisch verträglichen Salzes von mindestens einer von Capryl- oder Caprinsäure und
c) von ungefähr 0 Gew.-% bis ungefähr 90 Gew.-% einer Verbindung der Formel worin n 6 oder 8 ist.

2. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 1, worin die pharmazeutische Zusammensetzung Interferon in einer Menge von ungefähr 1×10⁶ IU/ml bis ungefähr 2×10⁸ IU/ml umfaßt.

3. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2, worin der Bestandteil (b)(2) ein Alkalimetallsalz der Caprylsäure ist.

4. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 3, worin der Bestandteil (b)(2) Natriumcaprylat ist.

5. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1-4, worin das Interferon Interferon α-2a ist.

6. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1-5 umfassend:

a) von ungefähr 1 × 10⁶ IU/ml bis ungefähr 2 × 10⁸ IU/ml Interferon α-2a;
b) eine absorptionsverbessernde Menge eines absorptions verbessernden Systems, umfassend:
- (1) von ungefähr 1 Gew.-% bis ungefähr 20 Gew.-% Polyethylenglykol-12-laurylether;
- (2) von ungefähr 1 Gew.-% bis ungefähr 20 Gew.-% Natriumcaprylat und
c) von ungefähr 0 Gew.-% bis ungefähr 90 Gew.-% einer Verbindung der Formel: worin n 6 oder 8 ist.

7. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 6, umfassend von ungefähr 6 Gew.-% bis ungefähr 12 Gew.-% Polyethylenglykol-12-laurylether.

8. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 6, umfassend von ungefähr 3 Gew.-% bis ungefähr 10 Gew.-% Natriumcaprylat.

9. Pharmazeutische Zusammensetzung gemäß Anspruch 6, umfassend ungefähr 50 Gew.-% einer Verbindung der Formel: worin n 6 oder 8 ist.