DE1648850A1

DE1648850A1 - Verfahren zum Trocknen und Konservieren von Elektrophoresezwecken dienenden Gel-Filmen

Info

Publication number: DE1648850A1
Application number: DE19671648850
Authority: DE
Inventors: Juhos Eva Th
Original assignee: Beckman Instruments Inc
Current assignee: Beckman Coulter Inc
Priority date: 1966-11-09
Filing date: 1967-11-07
Publication date: 1971-10-28
Also published as: GB1168888A; US3523863A; SE355302B

Description

ι uaif iiil'ii-yisiiuvu n~i-.-

Patentanwalt

MUNCHEN-SOLLN

Franz-Hals-Straße 21

Telefon 796213

BI,: 2159 München, 6. November 1967

Dr. H./sch

Beckrnan Instruments, Inc.

2500 Ear "bor. Boulevard Fullerton, California Y. St. A.

Verfahren sum Trocknen und Konservieren von Elektrophoresezwecken dienenden Gel-Filmen

Priorität; 9. Nov. 1966; V.St.Ao; US-Ser. Nr. 593 036

ürfindung betrifft Träger von Slektrophoreseaufaeichnun-.^en una insbesondere das Trocknen und Konservieren von GeI-I?ilnen, welche elektrophoretisch^ Aufzeichnungen, sog. ZLektrophercgramme, aufweisen, die während elektrophoretischer i'ießzyklen gebildet wurden.

Elektrophorese besteht aus der Wanderung von Teilchen in einem elektrolytischen Trägermedium unter dem Einfluß einea elektrischen Feldes. Man verwendet diese Erscheinung, um

1098U/1293

Bayerische Vereinebank München 820993

BH 2159 - 2 -

chemisch ähnliche Teilchen zu trennen, aie unterschiedliche elektrische"Qberflächeneigenscheften aufweisen. In Anbetracht der unterschiedlichen elektrischen lix {enüchaf ten in υ die Beweglichkeit der verschiedenen !Typen "ela--.ener Partikel unter dem Einfluß eines elektrischen Z?elc-.es unterschiedlich. Partikel, die dieselben elektrischen Eigenschaften haben, wandern gemeinsam in besonderen identifizierbaren Bahnen.

Für die Zwecke elektrophoretischer Untersuchungen, hat man verschiedene xrägermedien, Lösungen, in einer Pufferlösung gesättigte Papierstreifen oder gelähnliche oubetanzen, wie Agar u. dgl., verwendet. In der jüngscen Zeit werden Acrylamide, eine synthetische gelartige Substanz, die Kehr Erektionen als die üblichen Slektfophoreseraittel zu verarbeiten gestattet, verwendet. 3ei einer Anwendungsform ;;e:jte^r_t diese T-elsubstanz aus einer !Mischung von zwei 1-Ion: r.eren, nämlich Akrylamid und 11-, JT-Hethylenbisakrylamid. ',*«":.ώ. nan geeignete Katalysatoren einer solchen Lischung hinzugibt, ergibt sich eine Polymerisation und eine -.nix Que verbindungen verbundene Reaktion, die su einem 3-el führt. I/as ^eI ist stabil, widerstandsfähig, transparent und vollständig unlöslich in ".fässer, es ist inert gegenüber den !..eisten Chemikalien und nichtionischen Substanzen» Die Konzentration der beiden Monomere bestimmt die Porengrcße de.; sich ergebenden G-els und daher seine molekulare Siebvirkung. Akrylamidgele können auf Bestellung für bestimmte Jypen zu

109844/1293

BAD ORIGINAL

trennender una aufzulesender Partikel bestimmter Ilclekular- - r c Z- e Ii e rge a t e 111 wenden.

Jline ν* eitere nütnliche Eigenschaft ve η Akryiasiidgelen lie-τι darin, da." a_'_e ,rebildete und entwickelte elektrophoretische Aufzeichnung unbegrenzt stabil ist sowohl in hydrierter als auch in dehydrierter ?orx. Ein aus einem derartigen Gel bestehendes 31:-.xt kann ohne Verformung des 31ektrophoreseuustert? aehvariert werden, und der sich dann ergebende dünne ?ilc ist zur die Analyse und lagerung als ein !Belegexemplar beider geeignet als ein dickes wasserhaltiges Sei. 3eir„ üehyarieren indessen bildet das JeI in nicht bestimmbarer Jei^e eine faltige Ilasse, und daher ergibt sich die Λην;enduii.c besonderer Yerarbeitungstechniken. Die allgemeine fechnik zw\ trocknen von Selblättem ist seitraubend und verlangt in der Hegel mehr als drei Stunden, in manchen ?ällen sogar 24 Stunden.

Die Ürfiiidun-r betrifft ein Verfahren zur Behandlung eines wasserhaltigen, ein Iilektropherograrcm enthaltenden 3-elträgers und kennzeichnet sich dadurch, äa-3 ein Schichtkörper durch Einlegen des Beiblattes zwischen durchsichtigen und durchlässigen l.erabranen gebildet wird, die wesentlich weniger zu Schrumpfung neigen als das 3-elblatt, und dai3 dieser Schichtkörper getrocknet wird, während die i-Iembranen unter gleichmäßiger Spannung gehalten werden.

109844/1293

BM 2159 _ 4 -

Ein erfindungsgemäßes Elektropherogramm kennzeichnet sich durch einen eine elektrophoretisch^ Aufzeichnung tragenden G-elfilm zwischen zwei durchsichtigen Membranen, deren Oberflächen mit den Oberflächen des Films verbunden sind.

Ein Ausfiihrungsbeispiel der Erfindung ergibt sich aus der nachfolgenden Beschreibung im Zusammenhang mit den Figuren. Von den Figuren zeigen:

Figur 1 eine perspektivische Darstellung eines

Elektrophorese-Gelblattes erfindungsgemäß zwischen zwei durchsichtigen Membranen;

Figur 2 eine Draufsicht auf eine 'Trockenvorrichtung gemäß einer Ausführungsform der Erfindung;

Figur 3 eine Ansicht entsprechend der Schnittlinie 3-3 der ?.ig. 2.

In Fig. 1 besteht der Schichtkörper 10 aus dem Beiblatt 12, das ein Slektropherogramm 14 aufweist und zwischen zwei Membranen 16 und 18 angeordnet ist, deren Oberfläche etwas größer als das G-elblatt ist. Das Beiblatt 12 wird zweckmäßigerweise in der Mitte der Membranen 16 und 18 angeordnet, so daß die Ränder der Membranen über die Kanten des Gelblattes hinausragen.» Das Blatt 12 ist zunächst wasserhaltig infolge der Gelbildung und in Anbetracht des Eintauchens in verschiedene Puffersubstanzen und Farbmittel,

109844/1293

BAD ORIGINAL

BIi 2159 - 5 -

die bei dem elektrophoretischen Vorgang benutzt werden; dadurch hat das Blatt ursprünglich eine Dicke τοη ungefähr 3 mm. Die Membranen 16 und 18 bestehen aus einem durchsichtigen und feuchtigkeitsdurchlässigen Material und haben

en Schrumpfungseigenschaften, die verträglich mit den/des G-elmaterials sind. Es eignet sich beispielsweise nichtfeuchtigkeitsbeständiges , nichtheißversiegelungsfähiges Cellophan. Derartige Cellophansorten schrumpfen, wenn sie zuvor mit Wasser gesättigt wurden, jedoch ist ihr Schrumpfungsvermögen sehr viel geringer als das des Gels. 3in mit gutem Erfolg benutzbares, nichtfeuchtigkeitsbeständiges Cellophan ist das DuPont-300-PD-Cellophan.

Über die ebenen Oberflächen des Schichtkörpers 10 werden warne Luftströmungen geleitet, und dadurch wird das Gelblatt 12 schnell getrocknet, und die Feuchtigkeitsdämpfe durchsetzen die porösen Kembranen 16 und 18 und gelangen ( in die freie atmosphäre. Um Faltenbildungen und Verzerrungen der Membranen 16 und 18 beim Trocknen zu vermeiden, werden die Kembranen am Rand eingespannt gehalten während des Schrumpfprozesses. Nach vollständigem Austrocknen hat der geschichtete Film nur mehr eine Dicke von etwa 0,3 0,4 mm, uni die Membranen und der Gelfilm sind innig miteinander verbunden. Nach dem Zuschneiden der itandteile der I-Ieiiibranen 16 und L8 kann das Elektrophero.rramm optisch un-

109844/1293

BM 2159 - 6 -

tersucht werden, und der PiIm kann für spätere Verwendung aufbewahrt werden.

Fig. 2 und 3 zeigen eine Vorrichtung, die zum Halten des Schichtkörpers verwendet werden kann und dem Zweck dient, während des Trocknens die ßandpartie einzuspannen. Die Vorrichtung besteht aus zwei ringförmigen Rafcmenteilen 2C und 22, die öffnungen 24 und 26 haben. Es ist eine rahaenförmige Vorrichtung gezeigt, es kann jedoch ebensogut ein rechteckiger Rahmen verwendet werden. Die Außenteile der liahinen 20 und 22 haben ringsherum verlaufende Nuten 28 und 3ö, und es können den Zwecken der Halterung dienende elastische O-Ringe 32 und 34 aufgesetzt werden. Die Ringe 32 und 34 halten die Membranen 16 und 18 in ihrer richtigen La~e, so daß die llembranen über den öffnungen 24 und 26 resp&nnt sind. Eine derartige rahmeni'crmige Vorrichtung :eetsttet es, die Kembranen einer geringen Vorspannung zu unterwerfen, so daß die Hembranen bein Trocknen gespannt gehalten sind.

Geeignete illanunermitxel werden verwendet, urr. αϊ:, -iah^e 20 unc 22 zusammenzuhalten, wobei die Keile 36 .te sur „"irkun^r gebrachten Kräfte bezeichnen. I>ie Rar. dp arulen der llembranen 16 und IB sind zwischen den Rahmenteil en e in^esp-.nnu und werden so beim l'rocknen gehalten. In-.'.nbetri-.cht der C"f.inunsren 24 und 26 sind die beiden 3eicen des ochl^htkc

1 098 A4/1233

BlI 2159 - 7 -

der Luft ausgesetzt, und Strömungen warmer lnift, die durch die Pfeile 53 und 4C angedeutet sind, werden aufgeblasen auf die Oberflächen des Schichtkörpers.

Patentansprüche;

8*0

109844/ 1?9 3

Claims

311 2159 - 8 - Patentansprüche

1. Verfahren zum Behandeln eines wasserhaltigen, ein iilektropherogramni tragenden Gelkörpers, d ad u r c h gekennzeichnet , daß ein Schichtkörper durch Einlegen des Gelblattes zwischen zwei durchsichtige, feuehtigkeitsdurcrlässige Lembranen, deren bchrumpfungsoaß geringer ist als das des Gels, gebildet wird und daß, während die I-ier-ibranen unter gleichmäßiger Spannung gehalten werden, der Schichtkörper getrocknet wird.

2. Verfahren nach Anspruch 1," dadurch gekennzeichnet , daß die Membranen aus feuchüem, nichtfeuchtigkeitsdichtem Cellophan bestehen.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Austrocknung durch Aufblasen warmer Luft beschleunigt wird.

4. Für die Zwecke der Konservierung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3 behandelter Gelfilm mit einer elektrophoretischen Aufzeichnung, dadurch gek en η ζ e i c h η e t , daß der Film zwischen zwei oberflächlich mit dem ^iIm verklebten durchsichtigen Membranen eingeschlossen ist.

1 0 9 8 A /, I 1 2 9 3 ^BAD ORIGINAL

1648B5Q

BM 2159 - 9 -

5. Gelfilm nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß die Membranen aus it-··
f euchtigkeitsdurchlässigein. Cellophan bestehen,

6. Vorrichtung zum Konservieren von G-elfilmen für die
Zwecke der Ausübung des Verfahrens nach Anspruch 1, 2 oder 3, dadurch gekennzeichnet, daß die Vorrichtung aus zwei Rahmenteilen (20, 22) besteht und Nuten (2S) am Außenrand der rcahmenteile (20, 22) vorgesehen sind, in denen mittels elastischer Ringe (32, 34) die Membranränder befestigbar sind, und daß Klammermittel vorgesehen sind, um die beiden Rahmenteile zusammenzuhalten.

109844/1293

Leerseite