DE1568025A1 - Verfahren zur Herstellung von Equilin - Google Patents

Description

Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung von Equilin, einem gut bekannten und wirksamen, natürlich vorkommenden Östrogen. Es ist ein besonderer Vorteil der vorliegenden Erfindung, dass Equilin in sehr guten Ausbeuten aus leicht erhältlichen Ausgangsmaterialien hergestellt werden kann.

Bei dem erfindungsgemässen Verfahren wir das Equilin hergestellt durch mikrobiologische Umwandlung von 5(10),7-Östradien-5,17-dion, das in der älteren Patentanmeldung A 51 876 IVb/12 ο beschrieben ist; oder von 3,17ß-Dihydroxy~ 5(1O),7-östradien oder von 17ß-Hydroxy-5(10),7-Östradien-3-on, wobei die beiden letztgenannten Verbindungen in der US-Patentschrift 2 930 805 beschrieben sind.

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Die ο Den genannte mikrobiologische Umwandlung kann bewirkt werden durch gewisse Bakxerienarten wie Bacterium, Mycobacterium, Oornyebacterium oder Nocardia, mit Corneybacuerium simplex ATGG 6946, Nocardia corallina ATGC 9y^, Bacterium cyclooxidans ATGG 12673, Nocardia restrictus ATGG 148871 Nocardia corallina ATCC 13259, Mycobacterium rhodochrus ATCC 4273, Nocardia canicruria 17896, und Nocardia erythropolis ATCC 17895, welches die bevorzugten Mikroorganismen sind. In der Praxis wird die oben genannte mikrobiologische Umwandlung durchgeführt, indem man eine der drei 5(10),7-Ostradienderivate, die oben erwähnt sind, als Substrate inkubiert mit lebenden, wachsenden oder im Ruhezustand befindlichen Kulturen der oben genannten Mikroorganismen; dann trennt man die Bakterienkultur-Masse von der Nährlösung ab durch Filtration oder Zentrifugieren, extrahiert die Nährlösung mit einem nicht mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittel wie z.B. Athylendichlorid, verdampft das Lösungsmittel und reinigt und isoliert dann das Eq.uilin durch Chromatographie oder Kristallisation oder durch eine Kombination dieser beiden Methoden,,

Die folgenden Ausführungsformen und Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern.

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Beispiel 1

250 ml-Erlenmeyerlcolben werden mit 50 ml einer Nähry lösung versetzt mit einem pH-V/ert von ungefähr 6,5 C hergestellt aus 20 g käuflichem(flukopräparat "Cerelose", 20 g Proteinhydrolysat "Edamin" und 5"g Maisquellwasser auf 1000 ml mit destilliertem Wasser aufgefüllt) und dann mit Corynebacterium simplex ATUC 6946 geimpft und bei 25°C 4-2 h lang inkubiert, Nach erneuter Impfung der Kultur und weiterer Inkubation über 24 h wira eine Probe von 25 mg 5 (10),7-Östradien-3,17-dion in Aceton gelöst und der Kultur hinzugefügt, um eine Endkonzentration von 0,5 mg pro ml zu ernalten,-die Mischung wird 3 bis 48 h inkubiert, danach werden die proben"mit; Äthylenchlorid extrahiert und der erhaltene Extrakt zur Trockene unter Stickstoff eingedampft. Der getrocknete Extrakt wird in Chloroform/Methanol 1:1 aufgelöst und das Equilin', ' das mit-einer authentischen Probe identisch ist, wird aureh Chromatographie oder durch Kristallisation isoliert,.

in gleicher »'eise kann Equilin erhalten werden, wenn man .das . 5Π0), i'-wstraaien-3» 17-dion durch 3» 17ß-Dihydroxy-5^ 10; ,7-ostradien oder I7ß-Hydroxy-5(_I1^IJ) ,7-Ustradien-^-on ersetzt, mit denselben luikroorganismen inkubxert und dann wie oben ai-^eöeben ai'beitet. ^

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BAD ORIGINAL

ebenso kann Equilin erhalten werden, wenn man die folgenden Mikroorganismen verwendet: Nocardia corallina ATOG 999, Bacterium cyclooxidans ATOC 12675» Nocardia restrictus ATCC 14887, Nocardia oorallina ATCC 13259, Myoobacterium rhodochrus ATCC 4273» Nocardia canticruria ATCC 17896, oder Nocardia erythropolis ATCC 17895 für Corynebacterium simplex und diese mit einer der drei genannten 5(10),7-Östradienderivate inkubiert und dann in derselben Weise aufarbeitet.

Beispiel 2

Eine Kultur von Corynebacterium simplex ATCC 6946 wird inkubiert bei 25°C über 42 h in der in Beispiel 1 beschriebenen Nährlösung. Die Kultur wird dann zentrifugiert, um die Nährlösung zu entfernen und erneut suspendiert in o,o3 molarem Phosphatpuffer vom pH 7,0. Die resultierende Zellsuspension beim pH 7»0 wird mit einer Lösung von 1 mg 5(10),7-Östradien-3,17-dion auf 1 ml Aceton versetzt·

Die Mischung wird inkubiert bei 25⁰C über 18 bis 42 h, dann extrahiert mit Äthylenchlorid und der erhaltene Extrakt chromatographiert. Das erhaltene Equilin wiiamit einer authentischen Probe identifiziert· In gleicher Weise kann Equilin erhalten werden, wenn man eines der anderen genannten 5(1O),7-Östradienderivate benutzt und in entsprechender Weise verfährt.

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Ebenso kann Equilin erhalten werden, indem man irgendeine Art der oben genannten Mikroorganismen benutzt und einen der drei Ausgangsstoffe mit diesen Mikroorganismen inkubiert»

Patentansprüche

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Claims (2)

DR.ING. F. WUESTIIOFF DIPL. ING. G. PULS SCHWEIOERSTHASSE r β Q f) O C DR.B.V.PJECIIMANN >? tklifo» 88 08 51 I <«> U U U 4. yj PATENTANWÄLTE !■noTECTPATKNT München 1A-32 007 Patentansprüche

1. · Verfahren zur Herstellung von Equilin, dadurch gekennzeichnet , daß man 5(10),7-Östradien-3,17-dion oder 3,17ß-Dihydroxy-5(10),7-Östradien oder 17ß-Hydroxy-5(10),7-Östradien-3-on als Substrat einer mikrobiologischen Umwandlung unterwirft, indem man diese in einer Nährlösung mit lebenden Kulturen von Mikroorganismen der Arten: Bacterium, Mycοbacterium, Corynebacterium und Nocardia inkubiert»

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß man als Mikroorganismen Corynebacterium simplex ATCC 6946, Nocardia corallina ATOC 999, Bacterium cyclooxidans ATCC 12673, Nocardia restrictus ATCC 14887, Nocardia corallina ATCC 13259, Mycobacterium rhodochrus ATCC 4273, Nocardia canicruria ATCC 17896 und Nocardia erythröpolis ATCC 17895 verwendet.

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