DE1272627T1 - Verfahren und vorrichtung zur plasmidgewinnung mit hilfe von ultrafiltration - Google Patents

Verfahren und vorrichtung zur plasmidgewinnung mit hilfe von ultrafiltration

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Claims (24)

Ol 922 922.8 MILLIPORE CORPORATION PATENTANSPRÜCHE
1. Verfahren zur Gewinnung von Plasmiden oder sonstiger DNA, das die Stufen
(a) Zerstören der Zellwände zum Freilegen der Zeilkomponenten, die Plasmide oder sonstige DNA umfassen;
(b) Filtern der Zellkomponenten durch eine oder mehrere Membranen, das aus der aus Mikrofiltration, Grobfiltration und Kombinationen derselben bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und Gewinnen des Filtrats;
(c) Filtern des Filtrats von (b) durch eine oder mehrere Ultrafiltrationsmembranen derart, dass die Plasmide oder sonstige DNA als zurückgehaltenes Material auf der oberen Oberfläche von einer oder mehreren Ultrafiltrationsmembranen verbleiben; und
(d) Gewinnen der Plasmide oder sonstigen DNA von der oberen Oberfläche der Ultrafiltrationsmembran
umfasst.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Zellwände durch ein basisches Lyseverfahren zerstört und über eine oder mehrere Membranen mit einem nominellen Porengrößenbereich von etwa 0,1 ]xm bis etwa 50 pm und eine oder mehrere Ultrafiltrationsmembranen mit einer nominellen Molekulargewichtsgrenze von etwa 3000 Dalton bis etwa 300 Kilodalton abfiltriert werden.
3. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Filtrationsstufen (b) und (c) durch ein Verfahren, das aus der Gruppe von Zentrifugation und konstanter Druckdifferenz und Kombinationen derselben ausgewählt ist, ausgeführt werden.
4. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Stufen (b) und (c) durch eine positive konstante Druckdifferenz ausgeführt werden.
5. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Stufen (b) und (c) durch eine negative konstante Druckdifferenz ausgeführt werden.
6. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Stufe (b) durch ein Verfahren, das aus der Gruppe von Zentrifugation und positiver konstanter Druckdifferenz ausgewählt ist, ausgeführt wird, und die Stufe (c) durch eine negative konstante Druckdifferenz ausgeführt wird.
7. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die eine oder mehreren Mikrofiltrationsmembranen aus einem Material gebildet sind, das aus der Gruppe von natürlichen oder synthetischen Polymeren, Keramiken und Metall ausgewählt ist, und die Ultrafiltrationsmembran bzw. die Ultrafiltrationsmembranen aus einem Material gebildet sind, das aus der Gruppe von Polysulfonen, Polyethersulfonen, Polyphenylsulfonen, Polyarylsulfonen, Polyvinylidenfluorid, Cellulose und Cellulosederivaten ausgewählt ist.
8. Verfahren nach Anspruch 1, wobei eine oder mehrere Mikrofiltrations- und eine oder mehrere Ultrafiltrationsmembranen eine Porenmorphologie von einer Oberfläche zur anderen aufweisen, die ausgewählt ist aus der Gruppe von einem symmetrischen, asymmetrischen, isotropen Bereich mit anschließendem asymmetrischen Bereich, divergierenden asymmetrischen Bereichen derart, dass die kleinste Pore der Membran in der Tiefe der Struktur liegt, und konvergierenden asymmetrischen Bereichen derart, dass die kleinste Pore sich auf einer Oberfläche befindet und die Porengröße beim Zusammenlaufen der zwei asymmetrischen Schichten kleiner als die Poren in jeder
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DE/EP 1 272-627 TI
der beiden benachbarten asymmetrischen Schichten ist.
9. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Filtrationsstufen (b) und (c) eine positive konstante Druckdifferenz verwenden.
10. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Filtrationsstufe (b) eine positive konstante Druckdifferenz verwendet und die Stufe (c) eine negative konstante Druckdifferenz verwendet.
11. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Filtrationsstufe
(b) eine negative konstante Druckdifferenz verwendet und die Filtrationsstufe (c) eine positive konstante Druckdifferenz verwendet.
12. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Filtrationsstufen
(b) und (c) eine negative konstante Druckdifferenz verwenden.
13. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Filtrationsstufen (b) und (c) nacheinander durchgeführt werden.
14. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Filtrationsstufen (b) und (c) gleichzeitig durchgeführt werden.
15. Vorrichtung zur Gewinnung von Plasmiden, die ein oberes Filter mit einer oder mehreren Membranen, die aus der Gruppe von Mikrofiltrationsmembranen und Grobmembranen ausgewählt sind, und ein unteres Filter mit einer oder mehreren Ultrafiltrationsmembranen, wobei das obere Filter sich oberhalb und angrenzend an das untere Filter befindet, und eine Vorrichtung zum Anlegen von einer oder mehreren treibenden Kräften an das obere und untere Filter zum Bewirken einer Filtration umfasst.
16. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei die Filter flüssigkeitsdicht miteinander verbunden sind.
17. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei das eine oder die mehreren Mittel zum Bewirken einer treibenden Kraft eine konstante Druckdifferenz ist.
18. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei das eine oder die mehreren Mittel zum Bewirken einer treibenden Kraft ein positiver Druck ist.
19. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei das eine oder die
mehreren Mittel zum Bewirken einer treibenden Kraft ein negativer Druck ist.
20. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei das eine oder die mehreren Mittel zum Bewirken einer treibenden Kraft eine positive konstante Druckdifferenz ist.
21. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei das eine oder die mehreren Mittel zum Bewirken einer treibenden Kraft eine negative konstante Druckdifferenz ist.
22. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei das eine oder die mehreren Mittel zum Bewirken einer treibenden Kraft eine an das obere Filter angelegte positive Kraft und eine an das untere Filter angelegte negative Kraft sind.
23. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei das eine oder die mehreren Mittel zum Bewirken einer treibenden Kraft nacheinander an das obere Filter und dann das untere Filter angelegt werden.
24. Vorrichtung nach Anspruch 15, wobei das eine oder die mehreren Mittel zum Bewirken einer treibenden Kraft gleichzeitig an das obere und untere Filter angelegt werden.
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