DE102017100522A1 - Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren zur Verunreinigungsanalyse unter Verwendung von Flüssigkeitschromatographie mit Extinktions- und Verdampfungslichtstreuungsdetektion - Google Patents
Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren zur Verunreinigungsanalyse unter Verwendung von Flüssigkeitschromatographie mit Extinktions- und Verdampfungslichtstreuungsdetektion Download PDFInfo
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- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8872—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample impurities
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
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Abstract
Verfahren und Systeme zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren für die Flüssigkeitschromatographie unter Verwendung von sowohl Detektion auf der Basis der molaren Konzentration als auch Detektion auf der Basis der Massenkonzentration sind hierin beschrieben. Ein Verfahren beinhaltet das Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors für eine Verbindung auf der Basis des Verhältnisses einer molarbasierten Peakfläche für die Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Verbindung und auf der Basis des Verhältnisses einer molarbasierten Peakfläche für eine Referenzverbindung dividiert durch den Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung.
Description
- VERWANDTE ANMELDUNG
- Diese Anmeldung beansprucht die Priorität der vorläufigen US-Patentanmeldung Nr. 62/277,789 mit dem Titel „Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren zur Verunreinigungsanalyse unter Verwendung von Flüssigkeitschromatographie mit Extinktions- und Verdampfungslichtstreuungsdetektion“, eingereicht am 12. Januar 2016, die hierin durch Bezugnahme in ihrer Gesamtheit aufgenommen ist.
- TECHNISCHES GEBIET
- Die vorliegende Offenbarung betrifft allgemein die Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren für Verbindungen in einer chromatographischen Analyse unter Verwendung von Detektion auf der Basis der molaren Konzentration in Kombination mit Detektion auf der Basis der Massenkonzentration.
- HINTERGRUND
- Arzneimittelprodukte und Arzneimittelsubstanzen werden Forced-Degradation-Studien unterzogen, in denen die Stabilität der Arzneimittelsubstanzen und der Arzneimittelprodukte unter extremen Bedingungen getestet werden, um den Abbauweg des pharmazeutischen Wirkstoffs („active pharmaceutical ingredient“, API) zu verstehen und zu verstehen, welche Verunreinigungen Abbauprodukte sind und welche nicht mit dem Arzneimittel zusammenhängen. In derartigen Studien ist eine Massenbilanz kritisch, um Abbauwege zu verstehen und sicherzustellen, dass alle Verunreinigungen berücksichtigt werden. Die Massenbilanz ist die praktische Anwendung des Gesetzes der Massenerhaltung – die Gesamtmasse der verbrauchten Reaktanten muss der Gesamtmasse gebildeter Produkte entsprechen – auf chemische Synthese und Abbau. In Bezug auf die Arzneimittelstabilität und assoziierte Analysen definiert die International Conference on Harmonization (ICH) die Massenbilanz als „den Vorgang des Addierens des Assaywerts und der Spiegel von Abbauprodukten, um zu sehen, wie nahe zu 100 % des Ausgangswerts diese sich aufaddieren, unter Berücksichtigung der analytischen Fehlertoleranz“. Während einer Forced-Degradation-Studie müssen Verunreinigungen, speziell Abbauprodukte, summiert und in Bezug auf den API gemessen werden. Wenn die Zusammensetzung der abgebauten Probe unter Verwendung eines chromatographischen Analysesystems gemessen wird, kann die Reaktionsfähigkeit des Detektors des Analysesystems auf den API sich von der Reaktionsfähigkeit des Detektors auf die Verunreinigungen unterscheiden. Dies kann zu fehlerhaften Ergebnissen für Messungen der Konzentrationen der Verunreinigungen führen, was zu entsprechenden Fehlern bei der Rückgewinnung für die Massenbilanz führt.
- Eine Technik, die zum Korrigieren in Bezug auf Unterschiede bei der Detektorreaktionsfähigkeit auf den API und auf Verunreinigungen verwendet wird, beinhaltet das Erzeugen von Kalibrierkurven für den API und jede Verunreinigung auf dem analytischen System unter Verwendung von Proben mit bekannten Konzentrationen des API und jeder Verunreinigung (z. B. bekannte Konzentrationen von Standards). In einer Kalibrierkurve wird die Steigung der Detektorreaktion im Vergleich zur Konzentration für jede Verbindung (z. B. für den API und für jede Verunreinigung) bestimmt. Diese Steigung wird als der Reaktionsfaktor für die Verbindung bezeichnet. Ein relativer Reaktionsfaktor kann für jede Verunreinigung als der Reaktionsfaktor der Verunreinigung dividiert durch den Reaktionsfaktor des API berechnet werden. Dieser relative Reaktionsfaktor kann dann dazu verwendet werden, in Bezug auf den Unterschied bei der Detektorreaktionsfähigkeit zwischen dem API und den Verunreinigungen zu korrigieren. Da die relativen Reaktionsfaktoren von den Besonderheiten des eingesetzten chromatographischen Verfahrens (z. B. Säule, Gradient, mobile Phasen usw.) abhängen, sollten dieselben Bedingungen, die zur Bestimmung des RRF verwendet werden, für die anschließende Massenbilanzanalyse verwendet werden. Obwohl diese kalibrierkurvenbasierte Technik zur Bestimmung eines relativen Reaktionsfaktors etabliert und zuverlässig ist, sind Standards mit bekannten Konzentrationen der Verunreinigungen nicht immer verfügbar. Diese kalibrierkurvenbasierte Technik zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren ist außerdem zeitaufwändig, da sie das Messen mehrerer unterschiedlicher Proben mit bekannten Konzentrationen des API und der Verunreinigungen erfordert, um die Kalibrierkurven zu erzeugen. Eine andere Technik zur Korrektur in Bezug auf Unterschiede bei der Detektorreaktionsfähigkeit auf den API und auf Verunreinigungen beinhaltet das Isolieren der Verunreinigungen aus einer Probe und dann das Verwenden der Verunreinigungen als Standards beim Erzeugen der Kalibrierkurven.
- Kernspinresonanz („nuclear magnetic resonance", NMR) kann dazu verwendet werden, relative Reaktionsfaktoren zu bestimmen, um in Bezug auf Unterschiede bei der Detektorreaktionsfähigkeit zu korrigieren. NMR ist nahezu universell, quantitativ auf einer molaren Basis und etabliert; sie weist jedoch zahlreiche Nachteile auf (z. B. ist sie teuer und detektiert nur Verbindungen in verhältnismäßig hohen Konzentrationen). Des Weiteren erfordert sie eindeutige Protonenresonanzen und unterscheidet möglicherweise nicht zwischen eng verwandten Molekülen.
- Angesichts der Bedeutung von Stabilitätsstudien für Pharmazeutika und der genauen Quantifizierung von Mengen von API und Verunreinigungen besteht Bedarf an einem Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren zur Detektion von Substanzen in einer chromatographischen Trennung, das nicht den oben beschriebenen Nachteilen unterliegt.
- ZUSAMMENFASSUNG
- Allgemein betrifft die vorliegende Offenbarung Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren (RRF) unter Verwendung von Detektion auf der Basis der molaren Konzentration und Detektionsverfahren auf der Basis der Massenkonzentration und Massenbilanzverfahren, die derartige relative Reaktionsfaktoren einsetzt.
- In einem Gesichtspunkt beinhaltet ein Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Probe, die eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Probe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten Probe, um eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer ersten Probe, die eine Referenzverbindung enthält. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten ersten Probe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten ersten Probe, um eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer zweiten Probe, die eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten zweiten Probe, um eine molarbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer massenbasierten Detektion an der getrennten zweiten Probe, um eine massenbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet das Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein Verfahren zur Bestimmung relativer Konzentrationen einer Referenzverbindung und einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen in einer Testprobe das Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen gemäß den hierin beschriebenen Verfahren. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung der Testprobe. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Testprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine zusätzliche Verbindung auf die molarbasierte Peakfläche für die zusätzliche Verbindung, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe zu erhalten. Das Verfahren beinhaltet das Bestimmen der relativen Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe auf der Basis der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung und der korrigierten molarbasierten Peakfläche für jede zusätzliche Verbindung.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein Verfahren zur Bestimmung von Konzentrationen einer Referenzverbindung und einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen in einer Testprobe das Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen gemäß den hierin beschriebenen Verfahren. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung der Testprobe. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Testprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet das Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine zusätzliche Verbindung auf die molarbasierte Peakfläche für die zusätzliche Verbindung, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede zusätzliche Verbindung in der Testprobe zu erhalten. Das Verfahren beinhaltet das Bestimmen der relativen Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe auf der Basis der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung und der korrigierten molarbasierten Peakfläche für jede zusätzliche Verbindung. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Referenzprobe, die eine bekannte Konzentration der Referenzverbindung enthält. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der Referenzprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung in der Referenzprobe zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Vergleichen der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung in der Referenzprobe mit der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung in der Testprobe, um Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe aus den bestimmten relativen Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe zu erhalten.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein Verfahren zur Durchführung einer Massenbilanz für eine abgebaute Probe, die einen pharmazeutischen Wirkstoff (API) und eine oder mehrere Verunreinigungen enthält, das Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren Verunreinigungen gemäß den hierin beschriebenen Verfahren, wobei die Referenzverbindung der API ist und die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen die eine oder die mehreren Verunreinigungen sind. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Ausgangsprobe, die nicht Abbaubedingungen unterzogen wurde. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Ausgangsprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der Ausgangsprobe zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet das Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen auf die molarbasierte Peakfläche für die Verunreinigung, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede Verunreinigung in der Ausgangsprobe zu erhalten. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer abgebauten Testprobe, wobei die abgebaute Testprobe eine Testprobe, die den API enthält, ist, die zuvor Abbaubedingungen unterzogen wurde. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten abgebauten Testprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine Verunreinigung auf die molarbasierte Peakfläche für die Verunreinigung, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der abgebauten Testprobe zu erhalten. Das Verfahren beinhaltet das Vergleichen der Summe der korrigierten molarbasierten Peakflächen der einen oder der mehreren Verunreinigungen und der molarbasierten Peakfläche des API für die abgebaute Probe mit der Summe der korrigierten molarbasierten Peakflächen der einen oder der mehreren Verunreinigungen und der molarbasierten Peakfläche des API für die Ausgangsprobe, um eine prozentuale Rückgewinnung zu erhalten.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein Verfahren zur Bestimmung relativer Konzentrationen eines pharmazeutischen Wirkstoffs (API) und einer oder mehrerer Verunreinigungen in einer Testprobe das Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren verwandten Verunreinigungen unter Verwendung gemäß hierin beschriebenen Verfahren, wobei es sich bei der Referenzverbindung um den API handelt, die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen die eine oder die mehreren Verunreinigungen sind, die Detektion auf der Basis der molaren Konzentration eine extinktionsbasierte Detektion ist und die Detektion auf der Basis der Massenkonzentration eine Verdampfungslichtstreuungsdetektion („evaporative light scattering detection", ELSD) ist. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung der Testprobe. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer Extinktionsdetektion an der getrennten Testprobe, um eine Extinktionspeakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren verwandten Verunreinigungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine Verunreinigung auf die Extinktionspeakfläche für die Verunreinigung, um eine korrigierte Extinktionspeakfläche für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der Testprobe zu erhalten. Das Verfahren beinhaltet das Bestimmen der relativen Konzentrationen des API und der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der Testprobe auf der Basis des Extinktionspeaks des API und der korrigierten Extinktionspeakfläche für jede Verunreinigung.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein Verfahren zur Bestimmung von Konzentrationen eines pharmazeutischen Wirkstoffs (API) und einer oder mehrerer verwandten Verunreinigungen in einer Testprobe das Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren verwandten Verunreinigungen gemäß hierin beschriebenen Ausführungsformen, wobei es sich bei der Referenzverbindung um den API handelt, die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen die eine oder die mehreren Verunreinigungen sind, die Detektion auf der Basis der molaren Konzentration eine extinktionsbasierte Detektion ist und die Detektion auf der Basis der Massenkonzentration eine Verdampfungslichtstreuungsdetektion (ELSD) ist. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung der Testprobe. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer Extinktionsdetektion an der getrennten Testprobe, um eine Extinktionspeakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren verwandten Verunreinigungen zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet das Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine Verunreinigung auf die Extinktionspeakfläche für die Verunreinigung, um eine korrigierte Extinktionspeakfläche für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der Testprobe zu erhalten. Das Verfahren beinhaltet das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Referenzprobe, die eine bekannte Konzentration des API enthält. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer Extinktionsdetektion an der Referenzprobe, um eine Extinktionspeakfläche für den API in der Referenzprobe zu bestimmen. Das Verfahren beinhaltet das Vergleichen der Extinktionspeakfläche des API in der Referenzprobe mit der Extinktionspeakfläche des API in der Testprobe, um Konzentrationen des API und der einen oder der mehreren verwandten Verunreinigungen in der Testprobe aus den bestimmten relativen Konzentrationen des API und der einen oder der mehreren verwandten Verunreinigungen in der Testprobe zu erhalten.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein nichtflüchtiges computerlesbares Medium, das computerausführbare Anweisungen zum Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren speichert, Anweisungen zum Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für eine Referenzverbindung und für jede einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten Probe. Die Anweisungen beinhalten Anweisungen zum Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten Probe. Die Anweisungen beinhalten außerdem Anweisungen zum Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen, wobei der relative Reaktionsfaktor für eine zusätzliche Verbindung auf dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung basiert.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein nichtflüchtiges computerlesbares Medium, das computerausführbare Anweisungen zum Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren speichert, Anweisungen zum Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für eine Referenzverbindung aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten ersten Probe. Die Anweisungen beinhalten Anweisungen zum Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten ersten Probe. Die Anweisungen beinhalten Anweisungen zum Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten zweiten Probe. Die Anweisungen beinhalten Anweisungen zum Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten zweiten Probe. Die Anweisungen beinhalten außerdem Anweisungen zum Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen, wobei der relative Reaktionsfaktor für eine zusätzliche Verbindung auf dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung basiert.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein System eine Flüssigkeitschromatographiesäule, die dazu konfiguriert ist, eine flüssigkeitschromatographische Trennung einer Probe, die eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält, durchzuführen, einen Detektor auf der Basis der molaren Konzentration und einen Detektor auf der Basis der Massenkonzentration. Das System beinhaltet außerdem ein Detektionsmodul auf der Basis der molaren Konzentration, das von einem oder mehreren Prozessoren in einer Verarbeitungsvorrichtung ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Probe unter Verwendung des Detektors auf der Basis der molaren Konzentration durchzuführen, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das System beinhaltet ein Detektionsmodul auf der Basis der Massenkonzentration, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten Probe unter Verwendung des Detektors auf der Basis der Massenkonzentration durchzuführen, um eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das System beinhaltet ein Modul für relative Reaktionsfaktoren, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird. Das Modul für relative Reaktionsfaktoren ist zu Folgendem konfiguriert: Berechnen eines ersten Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu einem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung; Berechnen eines zweiten Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu einem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung und Berechnen eines relativen Reaktionsfaktors für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des ersten Verhältnisses und des zweiten Verhältnisses.
- In einem anderen Gesichtspunkt beinhaltet ein System ein Chromatographiesteuermodul, das von einem oder mehreren Prozessoren in einer Verarbeitungsvorrichtung ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine flüssigkeitschromatographische Trennung einer Probe, die eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält, unter Verwendung einer Flüssigkeitschromatographiesäule zu steuern. Das System beinhaltet außerdem ein Detektionsmodul auf der Basis der molaren Konzentration, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Probe unter Verwendung eines Detektors auf der Basis der molaren Konzentration zu steuern, und dazu konfiguriert ist, eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das System beinhaltet ein Detektionsmodul auf der Basis der Massenkonzentration, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten Probe unter Verwendung eines Detektors auf der Basis der Massenkonzentration zu steuern, und dazu konfiguriert ist, eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Das System beinhaltet außerdem ein Modul für relative Reaktionsfaktoren, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird. Das Modul für relative Reaktionsfaktoren ist zu Folgendem konfiguriert: Berechnen eines ersten Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu einem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung; Berechnen eines zweiten Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu einem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung und Berechnen eines relativen Reaktionsfaktors für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des ersten Verhältnisses und des zweiten Verhältnisses.
- In einigen Ausführungsformen beinhaltet das System außerdem ein Massenbilanzmodul, das dazu konfiguriert ist, eine Massenbilanz in der Probe auf der Basis der molarbasierten Peakflächen in der Probe für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen und der relativen Reaktionsfaktoren für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen.
- Ausführungsformen können eines oder mehrere der folgenden Merkmale beinhalten.
- In einigen Ausführungsformen hängt der relative Reaktionsfaktor für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen (RRFzus_Verb) von dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (Molare_Flächezus_Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (log(Massen-Flächezus_Verb)) dividiert durch das Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (Molare_FlächeRef-Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (log(Massen-FlächeRef-Verb)) ab. In einigen Ausführungsformen wird der relative Reaktionsfaktor für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen durch die folgende Gleichung beschrieben:
- In einigen Ausführungsformen ist die Detektion auf der Basis der molaren Konzentration eine Absorptionsspektroskopie im ultravioletten-sichtbaren Spektralbereich.
- In einigen Ausführungsformen ist die Detektion auf der Basis der Massenkonzentration eine Verdampfungslichtstreuungsdetektion („evaporative light scattering detection“, ELSD).
- In einigen Ausführungsformen beinhaltet die flüssigkeitschromatographische Trennung eine Hochdruckflüssigkeitschromatographie.
- In einigen Ausführungsformen beinhaltet die chromatographische Trennung eine Ultrahochdruckflüssigkeitschromatographie („ultra-high performance liquid chromatography“, UHPLC).
- In einigen Ausführungsformen ist die Referenzverbindung ein pharmazeutischer Wirkstoff („active pharmaceutical ingredient", API) und die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen sind eine oder mehrere Verunreinigungen.
- In einigen Ausführungsformen ist die chromatographische Trennung isokratisch.
- KURZE BESCHREIBUNG DER FIGUREN
- Die Zeichnungen sollen die hierin gelehrten Lehren veranschaulichen und sollen nicht relative Größen und Dimensionen zeigen oder den Schutzumfang von Beispielen oder Ausführungsformen einschränken. In den Zeichnungen werden dieselben Nummern überall in den Zeichnungen für referenzähnliche Merkmale und Komponenten mit ähnlicher Funktion verwendet.
-
1 stellt schematisch ein flüssigkeitschromatographisches System, das Orthogonaldetektoren beinhaltet, zur Ausübung einiger hierin beschriebener Ausführungsformen dar. -
2 stellt schematisch ein anderes flüssigkeitschromatographisches System, das Orthogonaldetektoren beinhaltet, zur Ausübung einiger hierin beschriebener Ausführungsformen dar. -
3 ist ein Graph der Extinktionspeakfläche im Vergleich zur Konzentration zur Analyse von mehreren Proben mit unterschiedlichen bekannten Konzentrationen eines API und von Verunreinigungen, die zur herkömmlichen Kalibrierkurvenbestimmung von RRF verwendet werden. -
4 ist ein Detail des Graphen von3 . -
5A ist ein Graph von Extinktionspeaks für einen API und Verunreinigungen. -
5B ist ein Graph von normierten Extinktionspeaks für einen API und Verunreinigungen. -
6A ist ein Graph von Extinktionspeakdaten für verschiedene Konzentrationen einer Verbindung. -
6B ist ein Graph von Verdampfungslichtstreudetektor-Peakdaten (ELSD-Peakdaten) für verschiedene Konzentrationen einer Verbindung. -
6C ist ein Graph der Konzentration im Vergleich zur Peakfläche für Extinktionsdaten und ELSD-Daten. -
7A ist ein Graph des Logarithmus der Peakfläche im Vergleich zum Logarithmus der Konzentration für ELSD-Daten für einen API. -
7B ist ein Graph des Logarithmus der Peakfläche im Vergleich zum Logarithmus der Konzentration für ELSD-Daten für Verunreinigungen. -
8 beinhaltet Extinktionschromatogramme für eine Ausgangsprobe, die einen API enthält, und Proben nach 3 Tagen und 5 Tagen von erzwungenem Abbau („Forced Degradation“). -
9 beinhaltet grafische Darstellungen von Fenstern in einer chromatographischen Softwareumgebung zum Bestätigen einer Peakreinheit. -
10 beinhaltet zwei Teilbildschirmfotos, die RRF-Berechnungen in einer Softwareumgebung gemäß einigen Ausführungsformen veranschaulichen. -
11 beinhaltet Tabellen, die beispielhafte Massenbilanzberechnungen auf der Basis von Forced-Degradation-Daten gemäß einigen Ausführungsformen zeigen. -
12 beinhaltet ein Diagramm, das die Massenbilanzberechnungsergebnisse gemäß einigen Ausführungsformen veranschaulicht. -
13 beinhaltet Chromatogramme von einem PDA-Detektor (oben), einem ELSD (Mitte) und einem Massendetektor (unten) gemäß einigen Ausführungsformen. -
14 stellt schematisch einen Abbauweg von Glimepirid dar. -
15A beinhaltet eine ELSD-Kalibrierkurve für eine mit Glimepirid verwandte Verbindung. -
15B beinhaltet eine lineare Log-Log-Anpassung für eine ELSD-Kalibrierkurve für eine mit Glimepirid verwandte Verbindung. -
16 beinhaltet Chromatogramme für einen beschleunigten erzwungenen Abbau der Glimepirid-Arzneimittelsubstanz durch Säurehydrolyse zu 1 Stunde bei 80 °C. Die gestapelte Aufzeichnung von UV- (oben) und ELSD-Chromatogrammen (unten) zeigt die Unterschiede der Reaktion für Verunreinigungen sowie die Arzneimittelsubstanz. -
17 beinhaltet Chromatogramme für eine Säurehydrolyse der Glimepirid-Arzneimittelsubstanz zu 5 Tagen. Das UV-Chromatogramm (228 nm) (oben) zeigt das Vorliegen einer verwandten Verbindung B (B) und einer verwandten Verbindung C (C) sowie der Arzneimittelsubstanz, Glimepirid (API). Das MS-Gesamtionenchromatogramm (MS-TIC) (unten) zeigt das Vorliegen eines zusätzlichen Peaks, der vor der verwandten Verbindung B eluiert. Das Massenspektrum für diesen Analyten zeigt eine vorherrschende m/z von 114,1, was dem in der Abbaureaktion gebildeten Nebenprodukts oder 4-Methylcyclohexylamin entspricht. -
18 beinhaltet Spektren von Peaks in einem MS-Gesamtionenchromatogramm (MS-TIC) für die verwandten Verbindungen B (oben) und C (Mitte) und den API (unten) unter Säurehydrolyse der Glimepirid-Arzneimittelsubstanz zu 5 Tagen. Die Verunreinigungen und der API lagen vorwiegend als Na+-Addukte unter den für die Analyse verwendeten Bedingungen vor. -
19 beinhaltet Chromatogramme für eine Oxidation der Glimepirid-Arzneimittelsubstanz durch Azobisisobutyronitril (AIBN) zu 5 Tagen. Das UV-Chromatogramm (228 nm) (oben) zeigt das Vorliegen einer verwandten Verbindung B (B) und einer verwandten Verbindung C (C) sowie der Arzneimittelsubstanz, Glimepirid (API). Das MS-Gesamtionenchromatogramm (MS-TIC) (unten) zeigt das Vorliegen von drei zusätzlichen Peaks, die vor der verwandten Verbindung B eluieren. Das Massenspektrum für die ersten zwei partiell getrennten Peaks zeigte eine vorherrschende m/z von 114,1, was den cis- und trans-Isomeren des in der Abbaureaktion gebildeten Nebenprodukt oder 4-Methylcyclohexylamin entspricht. Der dritte Peak ist ein Produkt der AIBN-Oxidation (m/z 177,1)-*-, wie durch die Analyse der Kontrolle belegt. -
20 beinhaltet Chromatogramme einer Basenhydrolyse der Glimepirid-Arzneimittelsubstanz zu 1 Tag. Die Probe baute zu mehreren Abbauprodukten ab. Während beide verwandten Verbindungen B (B) vorliegen, wurden auch mehrere zusätzliche Produkte gebildet. -
21 beinhaltet einen Massenspektren-SIR-Kanal (SIR = „Single Ion Recording", Einzelionenmessung) m/z 114,1 von einer sauren Hydrolyse (links) und einer Oxidation (rechts) der Glimepirid-Arzneimittelsubstanz. Die saure Hydrolyse erzeugt ein einziges Isomer, dessen Peakfläche im Zeitablauf zunimmt. Die Oxidation erzeugte zwei Isomere, deren Fläche ebenfalls mit der Zeit zunahm. -
22 ist ein Diagramm eines beispielhaften Systems, das für eine Implementierung einer beispielhaften Ausführungsform der vorliegenden Offenbarung geeignet ist. -
23 ist ein Bild einer Anzeige eines Zusammenfassungsteils eines beispielhaften Massenbilanzberichts gemäß einigen Ausführungsformen. - AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG BESTIMMTER AUSFÜHRUNGSFORMEN
- Einige hierin beschriebene Verfahren setzen sowohl Detektion auf der Basis der molaren Konzentration als auch Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an einer chromatographisch getrennten Probe ein, um relative Reaktionsfaktoren für eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen zu bestimmen. Eine Kombination einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration und einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration kann als Orthogonaldetektion beschrieben werden. Einige hierin beschriebene Verfahren, die Orthogonaldetektion zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren einsetzen, vermeiden das Erfordernis einer Isolierung der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen, um Kalibrierkurven zu erzeugen, und vermeiden ein zusätzliches Testen und Experimentieren, die zur Erzeugung von Kalibrierkurven erforderlich sind.
- Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff „Referenzverbindung“ auf eine Verbindung, mit der die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen in Bezug auf eine Detektorreaktion verglichen werden. In einigen Ausführungsformen kann die Referenzverbindung ein Standard sein, der einer Probe zugegeben wird. In einigen Ausführungsformen ist die Referenzverbindung ein pharmazeutischer Wirkstoff („active pharmaceutical ingredient“, API). In einigen Ausführungsformen könnte die Referenz ein Standard in einer Lebensmittelprobe oder Probe eines natürlichen Produkts (z. B. ein Einfachzuckerlebensmittel oder Catechin in der Analyse von Teeblättern).
- In Forced-Degradation-Studien wird ein Arzneimittelprodukt oder eine Arzneimittelsubstanz, das bzw. die einen API enthält, verschiedenen Typen von Abbaubedingungen unterzogen, einschließlich Säurehydrolyse, Basenhydrolyse, Oxidation oder thermische Abbaubedingungen. Die folgende Tabelle führt Beispiele verschiedener Abbaubedingungen auf.
Abbautyp Proben Bedingungen Säurehydrolyse 0,1M HCl 40 °C für 1, 3, 5, 7 Tage Basenhydrolyse 0,1M NaOH 40 °C für 1, 3, 5, 7 Tage Oxidation 3 %-iges H2O2 25 °C für 1, 3, 3,5, 7 Tage Thermisch Erhitzen - Die Analyse in den Forced-Degradation-Studien bindet die Massenbilanz ein. Bei der Massenbilanz werden die Gesamtmengen des API und aller Reaktanten vor dem Abbau und nach dem Abbau gemessen, um zu sehen, wie nahe zu 100 % des Ausgangswerts die Assaywerte und die Abbauniveaus sich aufaddieren. Während der Massenbilanz müssen Verunreinigungen, speziell Abbauprodukte, summiert und in Bezug auf den API gemessen werden. Wenn das Abbauprodukt in einem Spiegel vorliegt, der höher als eine spezifizierte Meldeschwelle (z. B. eine Meldeschwelle von 0,05 % bis 0,1 %) ist, muss spezifisch das Abbauprodukt identifiziert oder relativiert werden. Zu den kritischen Faktoren, die sich auf die Massenbilanzmessung auswirken, zählen Koelution, Misslingen des Erkennens von Verunreinigungen, schlechte Rückgewinnung der Verunreinigung oder der Elternverbindung und Reaktionsfaktorunterschiede zwischen dem API und den Verunreinigungen.
- Verunreinigungen können durch Vergleichen der Analysereaktion der Verunreinigungen auf die eines Referenzstandards oder einer Arzneimittelsubstanz gemessen werden; die Analysereaktion des Detektors oder Analysesystems auf die Verunreinigung kann sich jedoch von der Analysereaktion des Detektors oder Analysesystems auf den Referenzstandard oder den API unterscheiden. Dementsprechend werden relative Reaktionsfaktoren und Korrekturfaktoren dazu verwendet, diesen Unterschied der Analysereaktion auf die Verunreinigung und auf den Referenzstandard oder den API handzuhaben. Die Richtlinien „ICH Impurity Testing Guidelines“ spezifizieren, dass ein relativer Reaktionsfaktor (RRF) von mehr als 1,2 oder weniger als 0,8 im Allgemeinen auf Massenbilanzberechnungen angewendet werden sollte. Für genaue und detaillierte Massenbilanzberechnungen kann es jedoch wünschenswert sein, auch RRF anzuwenden, die in den Bereich von 1,2 bis 0,8 fallen.
- Einige Detektionstechniken sind proportional zu der molaren Konzentration einer Verbindung in einer Probe. Zu Beispielen derartiger Techniken auf der Basis der molaren Konzentration zählen ultraviolett-sichtbare (UV-Vis) Extinktion, Chemilumineszenz-Stickstoff-Detektor (CNLD), radiochemische Detektion, Kernspinresonanz („nuclear magnetic resonance“, NMR) und Massenspektrometrie (MS). Andere Techniken weisen Reaktionen auf, die am besten durch die Massenkonzentration einer Verbindung in einer Probe approximiert werden. Zu Beispielen von Detektoren auf der Basis der Massenkonzentration zählen Verdampfungslichtstreudetektoren („evaporative light scattering detectors", ELSD) und Charged-Aerosol-Detektoren (CAD).
- Berechnungen des absoluten Massenbilanzdefizits (AMBD) können unter Verwendung von Molen oder Gramm vorgenommen werden. Das Einsetzen einer Technik auf der Basis der molaren Konzentration zum Verfolgen von Molen anstelle von Gramm in Massenbilanzberechnungen ermöglicht es, Abbaurouten zu verfolgen, ohne alle reaktiven Spezies und Abbauprodukte messen zu müssen.
- Wenn eine Verbindung (z. B. ein API oder eine Verunreinigung) in einer Probe erkannt wird, ist ein Reaktionsfaktor (RF) die Detektorreaktion dividiert durch die Konzentration der Verbindung in der Probe, was der Steigung für die Verbindung in einer herkömmlichen Kalibrierkurve entspricht und durch die folgende Gleichung beschrieben werden kann.
- Herkömmlich ist ein RRF für eine Verbindung als der RF für die Verbindung (z. B. eine Verunreinigung) dividiert durch den RF für die Referenzverbindung (z. B. der API und oder ein Standard) definiert, was der Kalibrierkurvensteigung für die Verbindung dividiert durch die Kalibrierkurvensteigung für die Referenzverbindung entspricht, wie in der folgenden Gleichung gezeigt.
- Eine derartige obige Analyse erfordert die Verwendung von mehreren Kalibrierproben mit bekannten Konzentrationen der Referenzverbindung und etwaiger zusätzlicher Verbindungen, für die RRF benötigt werden. Diese Kalibrierproben sind zur Erzeugung der Kalibrierkurven erforderlich, um die erforderlichen Steigungen zu bestimmen. Das Kalibrierkurvenverfahren zur Bestimmung von RRF erfordert das Testen von mehreren Proben und setzt voraus, dass Proben mit bekannten Konzentrationen der zusätzlichen Verbindungen verfügbar sind.
- Hierin beschriebene Verfahren setzen molarbasierte und massenbasierte Detektionstechniken ein, um RRF zu bestimmen, ohne die Erzeugung von herkömmlichen Kalibrierkurven zu erfordern. Einige hierin beschriebene Verfahren ermöglichen die Bestimmung von RRF auf der Basis des Testens einer einzigen Probe. Des Weiteren erfordern hierin beschriebene Verfahren keine mehreren Proben mit unterschiedlichen bekannten Konzentrationen einer Referenzverbindung und von zusätzlichen Verbindungen, um RRF für die zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen.
- In einigen Ausführungsformen beinhaltet ein Verfahren zur Bestimmung von RRF das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Probe, die eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält. Wie hierin verwendet, bezieht sich der Begriff zusätzliche Verbindung auf eine beliebige Verbindung, bei der es sich nicht um die Referenzverbindung handelt. In einigen Ausführungsformen ist die flüssigkeitschromatographische Trennung eine Hochdruckflüssigkeitschromatographie. In einigen Ausführungsformen ist die flüssigkeitschromatographische Trennung eine Ultrahochdruckflüssigkeitschromatographie.
- Eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration (z. B. UV-Vis-Extinktion) wird an der getrennten Probe durchgeführt, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Eine Detektion auf der Basis der Massenkonzentration (z. B. ELSD) wird ebenfalls an der getrennten Probe durchgeführt, um eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen.
- Ein RRF wird für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung bestimmt.
- In einigen Ausführungsformen hängt der relative Reaktionsfaktor für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen (RRFzus_Verb) von dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (Molare_Flächezus_Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (log(Massen-Flächezus_Verb)) dividiert durch das Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (Molare_FlächeRef-Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (log(Massen-FlächeRef-Verb)) ab.
- In einigen Ausführungsformen wird der relative Reaktionsfaktor für eine zusätzliche Verbindung durch die folgende Gleichung beschrieben:
- In einigen Ausführungsformen wird der relative Reaktionsfaktor für eine zusätzliche Verbindung durch die folgende Gleichung beschrieben:
- Die obigen Gleichungen 3 und 4 für RRF setzen voraus, dass ein Korrekturfaktor, der zu einer Peakfläche multipliziert wird, um eine korrigierte Peakfläche zu erzeugen, gleich 1/RRF ist.
- Einige definieren den RRF selbst als den Korrekturfaktor, der zu einer Peakfläche multipliziert wird, um eine korrigierte Peakfläche zu erzeugen. Mit dieser alternativen Definition des RRF wäre der RRF stattdessen proportional zu dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (Molare_FlächeRef_Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (log(Massen-FlächeRef_Verb)) dividiert durch das Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (Molare_Flächezus_Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (log(Massen-Flächezus_Verb)).
- In der oben beschriebenen Ausführungsform zum Bestimmen des RRF werden die molarbasierte Peakfläche und die massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung auf der Basis derselben Probe bestimmt, wie sie zum Bestimmen der molarbasierten Peakflächen und der massenbasierten Peakflächen für die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen verwendet wird. In einigen anderen Ausführungsformen können mehrere unterschiedliche Proben eingesetzt. In einem anderen Verfahren wird eine flüssigkeitschromatographische Trennung beispielsweise durchgeführt, um eine erste Probe, die eine Referenzverbindung enthält, zu trennen. Eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration wird an der getrennten ersten Probe durchgeführt, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung zu bestimmen. Eine Detektion auf der Basis der Massenkonzentration wird an der getrennten ersten Probe durchgeführt, um eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung zu bestimmen. Eine flüssigkeitschromatographische Trennung wird durchgeführt, um eine zweite Probe, die eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält, zu trennen. Eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration wird an der getrennten zweiten Probe durchgeführt, um eine molarbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Eine Detektion auf der Basis der Massenkonzentration wird an der getrennten zweiten Probe durchgeführt, um eine massenbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen.
- Ausführungsformen beinhalten außerdem Verfahren zur Bestimmung relativer Konzentrationen einer Referenzverbindung und einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen. RRF werden für die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen unter Verwendung einer der hierin beschriebenen Verfahren bestimmt. Eine flüssigkeitschromatographische Trennung wird an der Testprobe durchgeführt. Eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration wird an der getrennten Testprobe durchgeführt, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. Für jede zusätzliche Verbindung wird der relative Reaktionsfaktor für die zusätzliche Verbindung auf die molarbasierte Peakfläche für die zusätzliche Verbindung angewendet, um eine korrigierte molar-/massenbasierte Peakfläche für jede zusätzliche Verbindung in der Testprobe zu erhalten.
- Für gemäß der obigen Gleichung 3 oder 4 definierte RRF würde eine korrigierte molar-/massenbasierte Peakfläche für eine zusätzliche Verbindung durch Multiplizieren der molarbasierten Peakfläche, die für die zusätzliche Verbindung in der Testprobe gemessen wurde, mit einem Korrekturfaktor von 1/RRFzus_Verb erhalten. Für die alternative Definition von RRF, in der der RRF als proportional zu dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung dividiert durch das Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung definiert ist, würde eine korrigiert molar-/massenbasierte Peakfläche für eine zusätzliche Verbindung durch Multiplizieren der molarbasierten Peakfläche, die für die zusätzliche Verbindung in der Testprobe gemessen wurde, mit dem RRF für die zusätzliche Verbindung erhalten.
- Nachdem die korrigierten molarbasierten Peakflächen für alle zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe bestimmt wurden, können die molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und die korrigierten molarbasierten Peakflächen für die zusätzlichen Verbindungen kombiniert werden, um die relativen Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe zu bestimmen. Spezifisch würden die molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und die korrigierten molarbasierten Peakflächen für die zusätzlichen Verbindungen addiert werden, um eine gesamte korrigierte molarbasierte Peakfläche zu erhalten. Die relative Konzentration der Referenzverbindung in der Testprobe ist die molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung dividiert durch die gesamte korrigierte molarbasierte Peakfläche. Die relative Konzentration jeder zusätzlichen Verbindung in der Testprobe ist die korrigierte molarbasierte Peakfläche für die zusätzliche Verbindung dividiert durch die gesamte korrigierte molarbasierte Peakfläche.
- In einigen Ausführungsformen kann das oben beschriebene Verfahren zur Bestimmung relativer Konzentrationen einer Referenzverbindung und einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen zur Verwendung beim Bestimmen von Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen modifiziert werden. Spezifisch kann das Verfahren weiterhin das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Referenzprobe, die eine bekannte Konzentration der Referenzverbindung enthält, und das Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der Referenzprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung in der Referenzprobe zu bestimmen, beinhalten. Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe können durch Vergleichen der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung in der Referenzprobe mit der bekannten Konzentration der Referenzverbindung in der Referenzprobe und der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung in der Testprobe bestimmt werden.
- In einigen Ausführungsformen ist die Referenzverbindung ein API und die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen sind eine oder mehrere Verunreinigungen. In einigen Ausführungsformen ist die chromatographische Trennung isokratisch.
- Einige Ausführungsformen beinhalten ein Verfahren zur Durchführung einer Massenbilanz für eine abgebaute Probe, die einen API und eine oder mehrere Verunreinigungen enthält. Das Verfahren beinhaltet das Bestimmen von RRF für die eine oder die mehreren Verunreinigungen unter Verwendung von hierin beschriebenen Verfahren, wobei die Referenzverbindung der API ist und die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen die eine oder die mehreren Verunreinigungen sind. Das Verfahren beinhaltet außerdem das Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Ausgangsprobe, die nicht Abbaubedingungen unterzogen wurde. Eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration wird an der getrennten Ausgangsprobe vorgenommen, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Ausgangsprobe zu bestimmen. Der RRF für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen wird auf die molarbasierte Peakfläche für die zusätzliche Verbindung angewendet, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede zusätzliche Verbindung in der Ausgangsprobe zu erhalten. Eine flüssigkeitschromatographische Trennung wird an einer abgebauten Testprobe durchgeführt, wobei die abgebaute Testprobe eine Testprobe, die den API enthält, ist, die zuvor Abbaubedingungen (z. B. Säurehydrolyse, Basenhydrolyse, Oxidation oder thermische Abbaubedingungen) unterzogen wurde. Eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration wird an der getrennten abgebauten Testprobe durchgeführt, um eine molarbasierte Peakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen zu bestimmen. Für jede der Verunreinigungen wird der relative Reaktionsfaktor auf die molarbasierte Peakfläche für die Verunreinigung angewendet, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für die Verunreinigung in der abgebauten Testprobe zu erhalten. Die Summe der korrigierten molarbasierten Peakflächen der einen oder der mehreren Verunreinigungen und der molarbasierten Peakfläche des API für die abgebaute Probe wird mit der Summe der korrigierten molarbasierten Peakflächen für die eine oder die mehreren Verunreinigungen und der molarbasierten Peakfläche des API für die Ausgangsprobe verglichen, um eine prozentuale Rückgewinnung zu erhalten.
- In einigen Ausführungsformen wird eine molarbasierte Konzentrationsdetektion mit einem UV-Vis-Extinktionsdetektor (z. B. einem Photodioden-Array-Detektor (PDA-Detektor)) durchgeführt und die massenbasierte Konzentrationsdetektion wird mit einem ELSD-Detektor durchgeführt.
1 stellt schematisch ein chromatographisches Analysesystem10 zur Durchführung einiger der hierin beschriebenen Verfahren dar. Das System10 beinhaltet eine Pumpe12 , einen Injektor14 , der auch als ein Sample-Manager beschrieben werden kann, ein Säulenkompartiment16 , das eine chromatographische Säule beinhaltet, einen PDA-Detektor18 und einen ELSD-Detektor20 . Die Pumpe12 beginnt einen Fluss zu der Säule in dem Säulenkompartiment16 . Der Injektor14 injiziert die Probe und die Trennung erfolgt in der Säule. Der PDA-Detektor18 , ein Detektor auf der Basis der molaren Konzentration, erkennt Analyten auf der Basis von Extinktionskoeffizienten. Der ELSD-Detektor20 , ein Detektor auf der Basis der Massenkonzentration, erkennt Analyten auf der Basis der Partikelgröße. -
2 stellt schematisch ein anderes chromatographisches Analysesystem22 zur Durchführung von hierin beschriebenen Verfahren dar. Das System22 beinhaltet eine Pumpe12 , einen Injektor14 , ein Säulenkompartiment16 , das eine chromatographische Säule beinhaltet, einen PDA-Detektor18 und einen ELSD-Detektor20 . Das System22 beinhaltet außerdem eine isokratische Pumpe24 , die die getrennte Probe zwischen dem ELSD-Detektor20 und einem Massendetektor26 unter Verwendung eines Splitters aufteilt. Da sowohl der ELSD-Detektor20 als auch der Massendetektor26 destruktive Messtechniken einsetzen, fungiert die isokratische Pumpe24 als eine Makeup-Flow-Pumpe. - Eines oder beide des Systems
10 und des Systems22 können weiterhin ein Chromatographiedatensystem (nicht gezeigt) beinhalten. Ein Beispiel eines derartigen Chromatographiedatensystems ist die Chromatographiedatensoftware EMPOWER3 der Waters Technologies Corporation in Milford, MA, USA. - Einige Ausführungsformen beinhalten ein nichtflüchtiges computerlesbares Medium, das computerausführbare Anweisungen zum Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren gemäß hierin beschriebenen Verfahren speichert. In einigen Ausführungsformen beinhalten die Anweisungen Anweisungen zum Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für eine Referenzverbindung und für jede einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten Probe. Die Anweisungen beinhalten außerdem Anweisungen zum Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten Probe. Die Anweisungen beinhalten weiterhin Anweisungen zum Bestimmen eines RRF für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen, wobei der relative Reaktionsfaktor für eine zusätzliche Verbindung auf dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung basiert.
- In einigen Ausführungsformen beinhalten die Anweisungen Anweisungen zum Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für eine Referenzverbindung aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten ersten Probe. Anweisungen zum Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten ersten Probe sind ebenfalls beinhaltet. Anweisungen zum Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten zweiten Probe sind beinhaltet. Anweisungen zum Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten zweiten Probe sind ebenfalls beinhaltet. Anweisungen zum Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen sind beinhaltet, wobei der relative Reaktionsfaktor für eine zusätzliche Verbindung auf dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung basiert.
- In einigen Ausführungsformen können die computerausführbaren Anweisungen Anweisungen sein, die innerhalb einer Chromatographiedatensoftware ausführbar sind, die auf einer Datenverarbeitungsvorrichtung oder einem Datenverarbeitungssystem ausgeführt wird, die bzw. das mit einem Chromatographieanalysesystem assoziiert ist. In einigen Ausführungsformen können die computerausführbaren Anweisungen Anweisungen sein, die innerhalb einer Chromatographiedatensoftware ausführbar sind, die auf einer Datenverarbeitungsvorrichtung oder einem Datenverarbeitungssystem ausgeführt wird, die bzw. das nicht mit einem Chromatographieanalysesystem assoziiert ist. Die Anweisungen können beispielsweise zumindest zum Teil als ein Schablonenprojekt in der Chromatographiedatensoftwareumgebung EMPOWER
3 implementiert sein. Als ein anderes Beispiel können die Anweisungen zumindest zum Teil als ein oder mehrere benutzerdefinierte Felder in der Chromatographiedatensoftwareumgebung EMPOWER3 implementiert sein. Beispiele von benutzerdefinierten Feldern, die in einigen Ausführungsformen eingesetzt werden können, beinhalten, sind jedoch nicht darauf beschränkt: ein Feld, das den Logarithmus der Fläche eines Peaks berechnet; ein Feld, das das Verhältnis der Peakfläche aus einem molarbasierten Detektionskanal (z. B. UV-Vis) für eine Verunreinigung zu dem Logarithmus der Peakfläche aus einem massenbasierten Detektionskanal (z. B. ELSD) für die Verunreinigung dividiert durch das Verhältnis der der Peakfläche aus dem molarbasierten Detektionskanal (z. B. UV-Vis) für die Referenz (z. B. API) zu dem Logarithmus der Peakfläche aus dem massenbasierten Detektionskanal (z. B. ELSD) für die Referenz berechnet; ein Feld, das die Summe der gesamten Fläche der Peaks in einem Probenchromatogramm zu der Summe der gesamten Fläche von Peaks in einem Referenzchromatogramm multipliziert mit 100 berechnet; ein Feld, das die Fläche eines beliebigen bekannten Peaks durch den relativen Reaktionsfaktor dividiert, um korrigierte Peakflächen zu erhalten; und ein Feld, das die Summe der gesamten korrigierten Fläche der Peaks in einem Probenchromatogramm mit der Summe der gesamten korrigierten Fläche der Peaks in einem Referenzchromatogramm multipliziert mit 100 vergleicht. - Die verschiedenen Arbeitsvorgänge von hierin beschriebenen beispielhaften Verfahren können zumindest zum Teil durch einen oder mehrere Prozessoren durchgeführt werden, die vorübergehend dazu konfiguriert (z. B. durch Software) oder permanent dazu konfiguriert sind, die relevanten Arbeitsvorgänge durchzuführen. Ganz gleich ob vorübergehend oder permanent konfiguriert können derartige Prozessoren prozessorimplementierte Module bilden, die dahingehend arbeiten, eine oder mehrere Arbeitsvorgänge oder Funktionen durchzuführen. Die Module, auf die hierin verwiesen wird, können in einigen beispielhaften Ausführungsformen prozessorimplementierte Module umfassen.
- Auf ähnliche Weise können die hierin beschriebenen Verfahren zumindest zum Teil prozessorimplementiert sein. Mindestens einige der Arbeitsvorgänge eines Verfahrens können beispielsweise durch einen oder mehrere Prozessoren oder prozessorimplementierte Module durchgeführt werden. Die Leistung von bestimmten der Arbeitsvorgänge kann unter dem einen oder den mehreren Prozessoren verteilt werden, sich nicht nur in einer einzigen Maschine befinden, sondern über eine Reihe von Maschinen genutzt werden. In einigen beispielhaften Ausführungsformen können der Prozessor oder die Prozessoren sich an einem einzigen Ort (z. B. innerhalb einer Laborumgebung, einer Büroumgebung oder als eine Serverfarm) befinden, während die Prozessoren in anderen Ausführungsformen über eine Reihe von Orten verteilt sein können.
- Der eine oder die mehreren Prozessoren können auch dahingehend arbeiten, die Leistung des relevanten Arbeitsvorgangs in einer „Cloud-Computing“-Umgebung oder als eine „Software as a Service“ (SaaS) zu unterstützen. Mindestens einige der Arbeitsvorgänge können beispielsweise von einer Gruppe von Computern (als Beispiele von Maschinen, einschließlich Prozessoren) durchgeführt werden, wobei diese Arbeitsvorgänge mittels eines Netzwerks (z. B. das Internet) und mittels einer oder mehrerer adäquater Schnittstellen (z. B. API) zugänglich sind.
- Beispielhafte Ausführungsformen können in digitalen elektronischen Schaltkreisen oder in Computerhardware, -firmware oder -software oder in Kombinationen dieser implementiert werden. Beispielhafte Ausführungsformen können unter Verwendung eines Computerprogrammprodukts implementiert werden, beispielsweise eines Computerprogramms, das fassbar in einem Informationsträger verkörpert ist, beispielsweise in einem maschinenlesbaren Medium zur Ausführung durch ein Datenverarbeitungsgerät oder zur Steuerung des Betriebs dieses, beispielsweise ein programmierbarer Prozessor, ein Computer oder mehrere Computer.
- Ein Computerprogramm kann in einer beliebigen Form einer Programmiersprache geschrieben sein, einschließlich kompilierter oder interpretierter Sprache, und kann in einer beliebigen Form genutzt werden, einschließlich als ein eigenständiges Programm oder als ein Modul oder eine andere Einheit, die zur Verwendung in einer Datenverarbeitungsumgebung geeignet ist. Ein Computerprogramm kann dazu genutzt werden, auf einem Computer oder auf mehreren Computern an einem Standort oder verteilt über mehrere Standorte und durch ein Kommunikationsnetzwerk miteinander verbunden ausgeführt zu werden.
- In beispielhaften Ausführungsformen können Arbeitsvorgänge durch einen oder mehrere programmierbare Prozessoren durchgeführt werden, die ein Computerprogramm ausführen, um Funktionen durch Arbeiten an Eingabedaten und Erzeugen einer Ausgabe durchzuführen. Verfahrensarbeitsvorgänge können auch durch logische Spezialschaltkreise (z. B. ein FPGA oder ein ASIC) durchgeführt werden oder ein Gerät von beispielhaften Ausführungsformen kann als solche implementiert werden.
- Das Datenverarbeitungssystem kann Clienten und Server beinhalten. Ein Client und ein Server sind im Allgemeinen voneinander entfernt und interagieren in der Regel durch ein Kommunikationsnetzwerk. Die Beziehung von Client und Server entsteht aufgrund von Computerprogrammen, die auf den jeweiligen Computern laufen und eine Client-Server-Beziehung zueinander aufweisen. In Ausführungsformen, die ein programmierbares Datenverarbeitungssystem nutzen, wird man zu schätzen wissen, dass sowohl Hardware- als auch Softwarearchitekturen eine Berücksichtigung erfordern. Spezifisch wird man zu schätzen wissen, dass die Wahl, ob eine bestimmte Funktionalität in permanent konfigurierter Hardware (z. B. einem ASIC), in vorübergehend konfigurierter Hardware (z. B. einer Kombination von Software und einem programmierbaren Prozessor) oder einer Kombination von permanent und vorübergehend konfigurierter Hardware implementiert werden soll, eine Designwahl sein kann.
-
22 veranschaulicht ein beispielhaftes Blockdiagramm, das ein System1500 darstellt, das zur Implementierung von einigen beispielhaften Ausführungsformen der vorliegenden Offenbarung geeignet ist. In beispielhaften Ausführungsformen kann das System1500 zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren eine Flüssigkeitschromatographiesäule1503 zur Durchführung einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Probe, die eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält, beinhalten. Das System1500 kann außerdem ein Netzwerk1501 , einen Detektor1505 auf der Basis der molaren Konzentration und einen Detektor1507 auf der Basis der Massenkonzentration beinhalten. Das System1500 kann außerdem in einigen Ausführungsformen einen oder mehrere Prozessoren1509 oder Server beinhalten, die dazu konfiguriert sind, computerlesbare Anweisungen und/oder Software auszuführen, wie ein Chromatographiesteuermodul1524 , ein Detektionsmodul1511 auf der Basis der molaren Konzentration, ein Detektionsmodul1513 auf der Basis der Massenkonzentration, ein Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren, ein RRF-Berichterstattungsmodul1518 , ein Massenbilanzmodul1520 und ein Massenbilanzberichterstattungsmodul. Man wird zu schätzen wissen, dass die Modulfunktionalität als eine höhere oder kleinere Anzahl von Modulen als veranschaulicht kombiniert oder aufgeteilt werden kann und dass derselben Prozessor oder Server ein oder mehrere Module hosten könnte. In einer beispielhaften Ausführungsform kann das System1500 eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der zusätzlichen Verbindungen durch Ausführen des Detektionsmoduls1511 auf der Basis der molaren Konzentration bestimmen, um eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Probe unter Verwendung des Detektors1505 auf der Basis der molaren Konzentration durchzuführen. Das System1500 kann außerdem eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der zusätzlichen Verbindungen durch Ausführen des Detektionsmoduls1513 auf der Basis der Massenkonzentration bestimmen, um eine Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten Probe unter Verwendung des Detektors1507 auf der Basis der Massenkonzentration durchzuführen. Das System1500 kann außerdem das Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren ausführen, um einen relativen Reaktionsfaktor für jede der zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen. In einer beispielhaften Ausführungsform errechnet das Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren ein erstes Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung. Das Modul für relative Reaktionsfaktoren kann außerdem ein zweites Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung errechnen. Sobald das erste Verhältnis und das zweite Verhältnis errechnet wurden, kann das Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren den relativen Reaktionsfaktor für jede der zusätzlichen Verbindungen auf der Basis von zumindest zum Teil dem ersten Verhältnis und dem zweiten Verhältnis errechnen. In einigen Ausführungsformen kann das Massenbilanzmodul1520 eine Ausgabe von dem molarbasierten Detektionsmodul1511 und dem Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren dazu verwenden, eine Massenbilanz für eine Probe durchzuführen. - Das Kommunikationsnetzwerk
1501 kann das Internet, ein Intranet, ein LAN („Local Area Network“, lokales Netzwerk), ein WAN („Wide Area Network“, Weitbereichsnetzwerk), ein MAN („Metropolitan Area Network", Metropolennetzwerk), ein drahtloses Netzwerk, ein optisches Netzwerk und dergleichen beinhalten, ist jedoch nicht darauf beschränkt. In einigen Ausführungsformen können die Chromatographiesäule1503 , der Detektor1505 auf der Basis der molaren Konzentration, der Detektor1507 auf der Basis der Massenkonzentration, der Prozessor1509 und die Datenbank1519 Anweisungen über das Kommunikationsnetzwerk1501 aneinander übertragen. - In einigen Ausführungsformen kann das System
1500 zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren außerdem eine oder mehrere Datenbanken1519 zum Speichern beliebiger geeigneter Informationen beinhalten, die dazu erforderlich sind, beispielhafte Ausführungsformen der hierin gelehrten Verfahren und Systeme zu implementieren. Eine Datenbank1519 kann beispielsweise die molarbasierten Peakflächen1521 für die Referenzverbindung und für jede der zusätzlichen Verbindungen sowie die massenbasierten Peakflächen1523 für die Referenzverbindung und für jede der zusätzlichen Verbindungen speichern. Die Datenbank1519 kann außerdem das erste Verhältnis1525 und das zweite Verhältnis1527 , die von dem Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren errechnet wurden, sowie die relativen Reaktionsfaktoren1529 für jede der zusätzlichen Komponenten speichern. Die Datenbank1519 kann außerdem Informationen speichern, die für die Massenbilanz und Massenbilanzergebnisse1530 verwendet werden. - Das System
1500 zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren kann außerdem in einigen Ausführungsformen ein Berichterstattungsmodul1518 für relative Reaktionsfaktoren beinhalten. Das Berichterstattungsmodul1518 für relative Reaktionsfaktoren kann dazu konfiguriert sein, einen Bericht zu erzeugen, der verschiedene Metriken umfasst, die von dem System1500 berechnet wurden. Das Berichterstattungsmodul1518 für relative Reaktionsfaktoren kann beispielsweise einen Bericht erzeugen, der die molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der zusätzlichen Verbindungen, die massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der zusätzlichen Verbindungen, das erste Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung, das zweite Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung und den relativen Reaktionsfaktor für jede der zusätzlichen Verbindungen umfasst. In einigen Ausführungsformen kann das Berichterstattungsmodul1518 für relative Reaktionsfaktoren dazu konfiguriert sein, Berichte1531 relativer Reaktionsfaktoren in der Datenbank1519 zu speichern oder die Berichte1531 relativer Reaktionsfaktoren durch Übertragen einer Kopie der Berichte an einen Benutzer auszugeben. Wie man zu schätzen wissen wird, kann das Berichterstattungsmodul1518 für relative Reaktionsfaktoren durch denselben oder einen anderen Prozessor als das Detektionsmodul1511 auf der Basis der molaren Konzentration, das Detektionsmodul1513 auf der Basis der Massenkonzentration und das Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren ausgeführt werden. - In einigen Ausführungsformen beinhaltet das System außerdem das Massenbilanzmodul
1520 , das Massenbilanzberechnungen auf der Basis von Daten von einer nicht abgebauten Referenzprobe, Daten, die von einer abgebauten Probe erhalten wurden, und berechneten relativen Reaktionsfaktoren durchführt. In einigen Ausführungsformen beinhaltet das System außerdem ein Massenbilanzberichterstattungsmodul1522 , das dazu konfiguriert ist, einen Massenbilanzbericht1533 in der Datenbank1519 zu speichern, einen Massenbilanzbericht1533 anzuzeigen oder einen Massenbilanzbericht1533 an einen Benutzer zu übertragen. Wie man zu schätzen wissen wird, kann das Massenbilanzberichterstattungsmodul1522 durch denselben oder einen anderen Prozessor als das Detektionsmodul1511 auf der Basis der molaren Konzentration, das Detektionsmodul1513 auf der Basis der Massenkonzentration, das Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren und das Berichterstattungsmodul1518 für relative Reaktionsfaktoren ausgeführt werden.23 beinhaltet ein Bild einer Anzeige eines Zusammenfassungsteils eines beispielhaften Massenbilanzberichts. - In einer beispielhaften Ausführungsform kann ein Benutzer mit dem System
1500 zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren interagieren, um ein individuell angepasstes Systemprojekt zu erzeugen. In einer derartigen Ausführungsform kann das individuell angepasste Systemprojekt computerausführbare Anweisungen beinhalten, die die verschiedenen Systemmodule1511 ,1513 ,1517 ,1518 dazu auffordern, eine oder mehrere der oben beschriebenen Funktionen durchzuführen. Ein Benutzer kann beispielsweise ein individuell angepasstes Systemprojekt erzeugen, das das System1500 anweist, eine flüssigkeitschromatographische Trennung einer bestimmten Probe durchzuführen. Nach der Trennung der Probe in eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen und der Detektion der getrennten Probe kann das individuell angepasste Systemprojekt das Detektionsmodul1511 auf der Basis der molaren Konzentration anweisen, die molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der zusätzlichen Verbindungen zu errechnen. Auf ähnliche Weise kann das individuell angepasste Systemprojekt das Detektionsmodul1513 auf der Basis der Massenkonzentration anweisen, die massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der zusätzlichen Verbindungen zu errechnen. Das individuell angepasste Systemprojekt kann außerdem das Modul1517 für relative Reaktionsfaktoren auffordern, den relativen Reaktionsfaktor für jede der zusätzlichen Verbindungen zu errechnen, wie oben beschrieben. In einigen Ausführungsformen kann das individuell angepasste Systemprojekt außerdem das Berichterstattungsmodul1518 für relative Reaktionsfaktoren und/oder das Massenbilanzberichterstattungsmodul1520 auffordern, einen Bericht zu erzeugen und auszugeben, wie oben beschrieben. - Das Massenbilanzmodul
1520 und das Massenbilanzberichterstattungsmodul1522 können besonders von Nutzen sein, wenn eine Stabilitätsanalyse durchgeführt wird, um gesetzlichen Auflagen zu genügen, da sie eine zuverlässige und vorhersehbare Verfolgung von erhaltenen Daten und eine Analyse, die für die Massenbilanz durchgeführt wurde, bereitstellen. - Die vorliegende Erfindung wird als Nächstes mittels der folgenden Beispiele beschrieben. Die Verwendung dieser und anderer Beispiele an beliebiger Stelle in der Spezifikation ist jedoch nur veranschaulichend und schränkt den Schutzumfang und die Bedeutung der Erfindung oder einer beliebigen beispielhaft dargestellten Form in keiner Weise ein. Die Erfindung ist nicht auf hierin beschriebene, beliebige bestimmte bevorzugte Ausführungsformen beschränkt. Viele Modifikationen und Variationen der Erfindung können Fachmännern offensichtlich sein und können ohne Abweichen von ihrem Gedanken und Schutzumfang vorgenommen werden. Die Inhalte aller Referenzen, Patente und veröffentlichten Patentanmeldungen, die überall in dieser Anmeldung zitiert werden, einschließlich der Figuren, sind hierin durch Bezugnahme aufgenommen.
- BEISPIEL 1
- Die Erfinder nahmen eine Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren (RRF) und der Massenbilanz für den Abbau einer Arzneimittelsubstanz, spezifisch Glimepirid, unter Verwendung von sowohl einem herkömmlichen Verfahren zur Bestimmung von RRF, das die Erzeugung von Kalibrierkurven unter Verwendung von Proben mit bekannten Konzentrationen der Verbindungen von Interesse erfordert, als auch unter Verwendung eines Verfahrens zur Bestimmung eines RRF gemäß hierin beschriebenen Ausführungsformen vor.
- Die Erfinder nahmen eine Säurehydrolyse von Glimepirid vor, das die chemische Formel (C24H34N4O5S), 1-[[4-[2-[(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-3-pyrrolin-1-carboxamido)ethyl]phenyl]sulfonyl]-3-trans-(4-methylcyclohexyl)harnstoff], ein Molekulargewicht von 490,62 und einen pKa-Wert von 4,32 aufweist. Die chemische Struktur von Glimepirid erscheint im Folgenden.
- Glimepirid ist ein antidiabetisches Sulfonylharnstoff-Medikament mit einer maximalen Tagesdosis von 8 mg. Es ist eine saure Verbindung, die in Methanol zu 0,5 mg/mL löslich ist. Das Glimepirid baute in zwei verwandte Verbindungen ab, die mit Verbindung B, (3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-N-(4-sulfamoylphenethyl)-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1-carboxamid), und Verbindung C, (((4-(2-(3-Ethyl-4-methyl-2-oxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-1- carboxamido)ethyl)phenyl)sulfonyl)carbaminsäuremethylester), gekennzeichnet wurden. Proben der verwandten Verbindung B und der verwandten Verbindung C wurden für Kalibrierproben für eine herkömmliche RRF-Analyse bezogen. Die Strukturen der verwandten Verbindung B und der verwandten Verbindung C sind im Folgenden gezeigt.
- Versuchsvorrichtung und -bedingungen
- Die Kontrollen und die Proben, die einer Säurehydrolyse unterzogen wurden, wurden den folgenden Bedingungen ausgesetzt.
Proben Bedingungen API-Kontrolle RT und 40 °C für 1, 3, 5, 7 Tage Säure-Kontrolle RT und 40 °C für 1, 3, 5, 7 Tage Säurehydrolyse RT und 40 °C für 1, 3, 5, 7 Tage - Die Proben wurden unter Verwendung eines Ultrahochdruckflüssigkeitschromatographiesystems, spezifisch des Systems ACQUITY UPLC H-Class der Waters Technologies Corporation, analysiert. Das System beinhaltete Photodioden-Array-(PDA) und ELSD-Detektoren, einen Quadrupol-Massendetektor, spezifisch den Detektor Qda der Waters Technologies Corporation, und Lösungsmittel- und Säulenmanager. Der PDA-Detektor wurde als ein Detektor für UV-Vis-Extinktion verwendet. Eine Ultrahochdruckflüssigkeitschromatographiesäule mit einer Teilchengröße von 1,7 µm und Säulenabmessungen von 2,1 × 50 mm, spezifisch die Säule ACQUITY UPLC BEH C18 der Waters Technologies Corporation, wurde verwendet. Der isokratische Lösungsmittelmanager wurde mit einer Flussrate von 0,3 mL/min und mit 0,1%-iger Ameisensäure in Methanol als einem Lösungsmittel verwendet. Die folgenden Einstellungen wurden für die PDA- und ELSD-Detektoren verwendet.
PDA ELSD Wellenlängenbereich: 210–400 nm Gas: 25 psi Auflösung: 3,6 nm Zerstäubermodus: Abkühlen Ausgewählte Wellenlängen: 228 und 254 nm, Auflösung von 4,8 nm Zerstäubertemperatur: 55 °C Zeitkonstante: Normal ung: 350 Steiger Abtastrate: 20 Punkte/s atenrate: 10 pps D - Der Massendetektor wurde mit einem Massenbereich von 100–600, einer Cone-Spannung von 5 V, einer Abtastrate von 5, einer Kapillarspannung von 1,4 kV verwendet. Single-Ion-Recording (SIR, Einzelionenmessung) wurde mit den Werten in der im Folgenden gezeigten Tabelle durchgeführt. SIR-Parameter
Name Masse (Da) Polarität Cone-Spannung (V) 1 Glimep. +N 513,60 Positiv 10 2 Glimep. 490,60 iv Posit 10 3 Verw. Verb. 374,20 Positiv 10 4 B Verw. Verb. 432,20 Positiv 10 5 C HMS 114,00 Positiv 10 - Isokratische und Gradientenverfahren wurden zur Trennung von Verunreinigungen entwickelt, das isokratische Verfahren wurde jedoch bevorzugt, da ein Ändern der Lösungsmittelzusammensetzung die Reaktion und die Größe der Tröpfchen in der ELSD beeinträchtigen kann. Die mobile Phase A war 0,1%-ige (v/v) Ameisensäure in Wasser. Die mobile Phase B war 0,1%-ige (v/v) Ameisensäure in Acetonitril. Die Säulentemperatur war 30 °C. Das Injektionsvolumen war 2 µL. Die Flussrate war 0,8 mL/min. Die isokratischen Tests beinhalteten 60 % mobile Phase A und 40 % mobile Phase B. Die Bedingungen für die Gradiententests sind im Folgenden aufgeführt. Das System weist eine quaternäre Pumpe mit vier Kanälen auf; es wurden jedoch nur die Kanäle A und B verwendet, was der Grund dafür ist, dass die C- und D-Werte in der folgenden Tabelle null sind.
Zeit (min) % A % B % C % D Kurve Anfang 95,0 5,0 0,0 0,0 Anfang 5,00 5,0 95,0 0,0 0,0 6 6,50 5,0 95,0 0,0 0,0 6 6,51 95,0 5,0 0,0 0,0 6 - Berechnung von RRF unter Verwendung herkömmlicher Steigungen von Kalibrierkurven
- Die Erfinder berechneten RRF unter Verwendung des herkömmlichen Verfahrens, das das Messen von Standards beinhaltete, um die Steigungen von Kalibrierkurven zu bestimmen, wie im Folgenden beschrieben. Die Standards wurden für die Verunreinigungen (d. h. die verwandte Verbindung B und die verwandte Verbindung C) und für den API (d. h. Glimepirid) erworben. Proben mit verschiedenen bekannten Konzentrationen der Verunreinigungen und des API wurden unter Verwendung des PDA-Detektionssystems analysiert, um Kalibrierkurven zu erzeugen. Unter Verwendung des PDA wurden Spektren des API und der verwandten Verunreinigungen verglichen, um eine geeignete Wellenlänge zur Analyse auszuwählen.
3 zeigt Graphen mit Kalibrierkurven, spezifisch Graphen der PDA-Fläche im Vergleich zur Konzentration für Glimepirid, die verwandte Verbindung B und die verwandte Verbindung C.4 ist ein Detail des Graphen von3 . Wie oben angemerkt, ist ein Reaktionsfaktor (RF) das Verhältnis der Detektorreaktion (z. B. die Peakfläche) einer Verbindung (z. B. eine Standardverbindung, eine Referenzverbindung, ein API oder eine Verunreinigung) zu der Konzentration der Verbindung in der Probe, die gemäß der obigen Gleichung 1 analysiert wird. - In dem herkömmlichen Verfahren zur Bestimmung eines RRF ist der RRF für eine Verbindung der RF der Verbindung dividiert durch den RF einer Referenzverbindung, der für dieses Beispiel der RF der Verunreinigung dividiert durch den RF des API wäre. In Bezug auf Kalibrierkurven wäre dies die Steigung der Kalibrierkurve für die Verunreinigung dividiert durch die Steigung der Kalibrierkurve für den API, was durch die folgende Gleichung dargestellt ist.
-
5A ist ein Graph, der tatsächliche Reaktionen des PDA auf den API und die Verunreinigungen zeigt.5B ist ein Graph von normierten Reaktionen des API und der Verunreinigungen bei der Wellenlänge 228 nm. - Die Trennbedingungen und die ausgewählte Wellenlänge änderten den RRF, der für die Verunreinigungen bestimmt wurde. Die Tabelle im Folgenden zeigt, wie die Trennbedingungen isokratisch oder per Gradient sind und die Wellenlänge, die für die Extinktionsdetektion ausgewählt wurde, die RRF-Faktoren beeinträchtigte, die unter Verwendung des herkömmlichen Kalibrierkurvenverfahrens bestimmt wurden.
Wellenlänge (nm) Trennbedingungen RRF Verw. Verbindung B RRF Verw. Verbindung C 228 Isokratisch 1,36 1,1 228 Gradient 1,24 1,06 254 Isokratisch 1,24 1,08 254 Gradient 1,4 1,14 - Beispielhafte Berechnungen für das isokratische Verfahren bei 228 nm erscheinen im Folgenden:
- Die Wellenlänge 228 nm wurde für eine weitere Analyse ausgewählt; die Reaktionen des API und der Verunreinigungen hätten jedoch bei einer anderen einzigen Wellenlänge (z. B. 254 nm) beurteilt werden können. Für eine weitere Analyse wurde das isokratische Verfahren eingesetzt, da ein Ändern der Lösungsmittelzusammensetzung die Reaktion und die Größe der Tröpfchen in der ELSD beeinträchtigen könnte.
- Berechnung eines RRF unter Verwendung von molarbasierter und massenbasierter Detektion
- Vor dem Beschreiben beispielhafter Bestimmungen von RRF unter Verwendung von molarbasierten und massenbasierten Detektionstechniken gemäß hierin beschriebenen Ausführungsformen. Ein inkorrektes Verfahren zur Bestimmung von RRF auf der Basis von Orthogonaldetektionstechniken wird behandelt. Wenn berücksichtigt wird, wie Orthogonaldetekion zu verwenden ist, um RRF zu bestimmen, ohne Kalibrierkurven einzusetzen, kann angenommen werden, dass ein RRF, der auf der Basis von Orthogonaldetektion berechnet wird, das Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für eine Verbindung, wie der PDA-Peakfläche für eine Verunreinigung (PDA_FlächeVerunreinigung), zu der massenbasierten Peakfläche für die Verbindung, wie der ELSD-Peakfläche für die Verunreinigung (ELSD_FlächeVerunreinigung) dividiert durch das Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung, wie der PDA-Peakfläche für den API (PDA_FlächeAPI), zu der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung, wie der ELSD-Peakfläche für den API (ELSD_FlächeAPI) wäre. Dies wird durch den folgenden Ausdruck dargestellt, der nicht korrekt ist.
- Die Erfinder erkannten, dass die obige Gleichung den RRF nicht genau bestimmt.
6A ist ein Graph von PDA-Peaks als Reaktion auf unterschiedliche Konzentrationen einer Verbindung und6B ist ein Graph von ELSD-Peaks als Reaktion auf unterschiedliche Konzentrationen einer Verbindung. Die PDA- und ELSD-Reaktionen skalieren nicht auf dieselbe Weise mit der Konzentration. Dies ist in6C deutlich gezeigt, die ein Graph mit Markierungen ist, die auf die Konzentration in Abhängigkeit von der Fläche unter dem Peak für das PDA und die ELSD hinweisen. Während das PDA eine lineare Reaktion für die Konzentration im Vergleich zur Peakfläche zeigt, demonstriert die ELSD eine logarithmische Reaktion. Die Verwendung der obigen inkorrekten Gleichung für einen RRF, die annimmt, dass die ELSD eine lineare Reaktion zwischen der Peakfläche und der Konzentration zeigt, bringt RRF-Werte hervor, die von denen wesentlich abweichen, die mit dem herkömmlichen Kalibrierkurvenverfahren zur Bestimmung eines RRF erhalten werden. Um diesen Punkt zu veranschaulichen, berechneten die Erfinder RRF-Werte unter Verwendung dieser inkorrekten Gleichung und die Daten, die sie bei zwei unterschiedlichen Wellenlänge, 228 nm und 254 nm, erhielten, mit den in der Tabelle im Folgenden gezeigten Ergebnissen.RRF-Bestimmungen unter Verwendung der inkorrekten Gleichung 228 nm 254 nm Menge RRF der verw. Verbindung B RRF der verw. Verbindung C Menge RRF der verw. Verbindung B RRF der verw. Verbindung C 50 0,37 0,49 50 0,36 0,48 125 0,37 0,46 125 0,36 0,46 250 0,37 0,48 250 0,41 0,25 - Als ein veranschaulichender Vergleich wurde der RRF für die Verbindung B bei 228 nm unter Verwendung des herkömmlichen Kalibrierkurvenverfahrens als 1,36 bestimmt und wurde unter Verwendung dieser inkorrekten Gleichung als 0,37 bestimmt. Als ein anderer veranschaulichender Vergleich wurde der RRF für die Verbindung C bei 254 nm unter Verwendung des herkömmlichen Kalibrierkurvenverfahrens als 1,08 bestimmt und wurde unter Verwendung dieser inkorrekten Gleichung als zwischen 0,25 und 0,48 bestimmt.
- Der Erfinder bestimmte, dass die ELSD-Peakdaten eine logarithmische Reaktion zeigen.
7A ist ein Graph des Logarithmus der ELSD-Peakflächendaten in Abhängigkeit von dem Logarithmus der Konzentration für den API Glimepirid.7B ist ein Graph des Logarithmus der ELSD-Peakflächendaten in Abhängigkeit von dem Logarithmus der Konzentration für Verunreinigungen, die verwandte Verbindung B und die verwandte Verbindung C. Beide Graphen beinhalten lineare Anpassungen an die logarithmischen Daten, wobei R2-Werte nahe 1 sind, was darauf hinweist, dass die logarithmischen Daten durch eine lineare Funktion gut angepasst sind. - Die Erfinder bestimmten ein genaues Verfahren zur Bestimmung von RRF unter Verwendung von Orthogonaldetektionstechniken. Für dieses Beispiel bestimmten die Erfinder einen RRF für eine Verunreinigung auf der Basis des Verhältnisses der PDA-Peakfläche für die Verunreinigung (PDA_FlächeVerunreinigung) zu dem Logarithmus der ELSD-Peakfläche für die Verunreinigung (ELSD_FlächeVerunreinigung) dividiert durch das Verhältnis der PDA-Peakfläche für den API (PDA_FlächeAPI) zu dem Logarithmus der ELSD-Peakfläche für den API (ELSD_FlächeAPI). Dies wird in der folgenden Gleichung ausgedrückt.
- Die RRF wurden unter isokratischen Bedingungen bei sowohl 228 nm als auch 254 nm unter Verwendung der obigen RRF-Gleichung 6 berechnet, wobei die Ergebnisse in der Tabelle im Folgenden gezeigt sind.
RRF-Bestimmungen gemäß beispielhaften Verfahren 228 nm 254 nm Menge RRF der verw. Verbindung B RRF der verw. Verbindung C Menge RRF der verw. Verbindung B RRF der verw. Verbindung C 50 1,25 1,10 50 1,24 1,09 125 1,22 1,09 1,24 1,09 125 250 1,09 1,06 250 1,22 1,10 - Ein Vergleich der RRF, die unter Verwendung beispielhafter Verfahren bestimmt wurden, mit den RRF, die unter Verwendung herkömmlicher Kalibrierkurvenverfahren bestimmt wurden, veranschaulicht die großen Korrelationen zwischen den zwei Verfahren. Angesichts dessen, dass die Verwendung des herkömmlichen Kalibrierkurvenverfahrens gut etabliert war, weisen diese Ergebnisse darauf hin, dass die hierin beschriebenen Verfahren zur Bestimmung eines RRF unter Verwendung von Verhältnissen der PDA-Peakfläche zu der logarithmischen ELSD-Peakfläche eine Bestimmung eines RRF in einer einzigen Analyse ermöglichen.
- Abbau und Massenbilanz
- Eine Säurehydrolyse wurde an der Arzneimittelsubstanz (dem API) Glimepirid über 5 Tage bei 40 °C vorgenommen.
8 zeigt das anfängliche Chromatogramm und zwei anschließende Chromatogramme zu 3 Tagen und zu 5 Tagen. Zwei Abbauverunreinigungen lagen vor, die mit verwandte Verbindung B und verwandte Verbindung C gekennzeichnet wurden. Um eine adäquate Trennung und keine Koelutionen sicherzustellen, wurde die Peakreinheit unter Verwendung eines Massenanalysefensters beurteilt.9 beinhaltet die PDA-Peakreinheit und Massenanalysefenster in der Datenanalysesoftware EMPOWER 3, die dazu verwendet wurde, die Peakreinheit zu beurteilen. - Die RRF wurden für die zwei Verunreinigungen berechnet und der Kehrwert des RRF wurde als ein Korrekturfaktor für jede Verunreinigung verwendet, um eine korrigierte Peakfläche für die Verunreinigung gemäß der folgenden Gleichung zu bestimmen.
- In EMPOWER 3 entsprach das mit „Verunreinigung-RRF“ benannte Feld dem Korrekturfaktor, so dass der Kehrwert des RRF für die Verunreinigung in dieses Feld eingegeben wurde.
10 beinhaltet zwei Teilbildschirmfotos, die die Korrekturfaktoren veranschaulichen, die angewendet werden, um korrigierte PDA-Peakflächen in der Software EMPOWER 3 zu berechnet. - Eine Referenzprobe wurde mittels HPLC laufen gelassen und die gesamte korrigierte PDA-Peakfläche wurde für die Referenzprobe wie im Folgenden beschrieben bestimmt. Der Korrekturfaktor des Kehrwerts des RRF für eine Verunreinigung wurde dazu verwendet, eine korrigierte PDA-Peakfläche für jede Verunreinigung in der Referenzprobe zu bestimmen. Die gesamte korrigierte PDA-Peakfläche war die Summe der korrigierten PDA-Peakfläche für jede Verunreinigung und der PDA-Peakfläche für den API Glimepirid. Dieser gesamte korrigierte PDA-Peak ist der Wert, der dazu verwendet wird, eine prozentuale Rückgewinnung zu berechnen.
Gesamte korrigierte Peakfläche = PeakflächeAPI + ΣVerunreinigungenKorrigierte PeakflächeVerunreinigung (8) - Die abgebauten Proben wurden mittels HPLC laufen gelassen und der Korrekturfaktor des RRF-Kehrwerts für eine Verunreinigung wurde dazu verwendet, eine korrigierte PDA-Peakfläche für jede Verunreinigung in jeder abgebauten Probe zu erhalten. Für jede abgebaute Probe wurde eine gesamte korrigierte PDA-Peakfläche als die Summe der korrigierten PDA-Peakflächen für die Verunreinigungen und der PDA-Peakfläche für den API berechnet. Die prozentuale Rückgewinnung war die gesamte korrigierte PDA-Peakfläche für die abgebaute Probe dividiert durch den gesamten korrigierten Peak für die Referenzprobe, wie in der Gleichung im Folgenden angegeben.
- Jede Peakfläche wurde auf der Basis des Durchschnitts von drei unterschiedlichen Injektionen der Probe bestimmt. Die Tabellen in
11 zeigen beispielhafte Berechnungen der Massenbilanz auf der Basis der Versuchsdaten. - Die Ergebnisse der Berechnungen der molaren Massenbilanz von Daten aus den Forced-Degradation-Studien unter Verwendung des RRF, der gemäß hierin beschriebenen Ausführungsformen berechnet wurde, sind in der Tabelle im Folgenden zusammengefasst und sind in einem Diagramm in
12 grafisch dargestellt. Die prozentualen Rückgewinnungen reichten von 99 bis 102,4 %.n = 3 Referenzprobe T = 0 1 Tag 3 Tage 5 Tage 7 Tage Menge 238,4 236,1 2 39,0 2 42,7 2 39,1 2 44,1 Absolutes Massenbilanzdefizit 2,3 –0,6 –4,3 –0,7 –5,7 % der Rückgewinnung 99,0 100,2 101,8 100,3 102,4 - Das für die Analyse verwendete Chromatographiesystem beinhaltete Massendetektion sowie UV-Vis-Extinktionsdetektion und ELSD. Obwohl die Massendetektion für die Bestimmung der RRF nicht erforderlich war, war die Massendetektion zum Bereitstellen zusätzlicher Informationen in Bezug auf Abbauwege von Nutzen. Es ermöglichte weiterhin eine Basenmassenkennzeichnung, um die Peakbestätigung zu unterstützen.
13 beinhaltet Chromatogramme von allen drei Detektoren, nämlich dem PDA-Detektor, dem ELSD-Detektor und dem Massendetektor. Der Massendetektor ermöglicht außerdem die Detektion von Analyten, die kein Chromophor aufweisen. FIG. zeigt den Abbauweg von Glimepirid. Der Massendetektor identifizierte einen Extrapeak, der einem zusätzlichen Molekül (einem Nebenprodukt) entsprach, das an dem Abbauweg beteiligt war und das nicht mit dem PDA oder der ELSD beobachtet werden konnte, da es kein Chromophor beinhaltete. - Fazit
- RRF wurden für Verunreinigungen auf der Basis eines Verhältnisses der PDA-Peakfläche für die Verunreinigung zu dem Logarithmus der ELSD-Peakfläche für die Verunreinigung dividiert durch das Verhältnis der PDA-Peakfläche für den API zu dem Logarithmus der ELSD-Peakfläche für den API bestimmt. Die durch dieses Verfahren bestimmten RRF stimmten mit RRF überein, die unter Verwendung des herkömmlichen Kalibrierkurven- und Standardverfahrens berechnet wurden. Die mit dem Verfahren der Erfinder bestimmten RRF wurden erfolgreich für die Massenbilanz in einer Forced-Degradation-Studie des API Glimepirid verwendet. Im Gegensatz zu den RRF, die unter Verwendung des herkömmlichen Kalibrierkurven- und Standardverfahren bestimmt wurden, erfordern die mit dem Verfahren der Erfinder berechneten RRF nicht das Beziehen von Standards für den API und jede Verunreinigung und mehrere Kalibrierläufe mit Proben mit unterschiedlichen bekannten Konzentrationen von jedem. Im Gegensatz zu dem herkömmlichen Kalibrierkurvenverfahren zur Bestimmung von RRF kann das Verfahren des Erfinders zur Bestimmung eines RRF unter Verwendung von Tests bestimmt werden, die eine Orthogonaldetektion mit sowohl einem Detektor auf der Basis der molaren Konzentration (z. B. einer UV-Vis-Extinktion) als auch einem Detektor auf der Basis der Massenkonzentration (z. B. ELSD) beinhaltet, die an einer einzigen Probe vorgenommen wird.
- BEISPIEL 2
- In Beispiel 2 nahmen die Erfinder eine andere Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren (RRF) und der Massenbilanz für den Abbau von Glimepirid unter Verwendung von sowohl einem herkömmlichen Verfahren zur Bestimmung von RRF, das die Erzeugung von Kalibrierkurven unter Verwendung von Proben mit bekannten Konzentrationen der Verbindungen von Interesse erfordert, als auch unter Verwendung eines Verfahrens zur Bestimmung eines RRF gemäß hierin beschriebenen Ausführungsformen vor. Nach Durchführen von Beispiel 1 bestimmten die Erfinder, dass der Extrapeak in den Massenspektroskopiedaten, der einem zusätzlichen Molekül (einem Nebenprodukt) entsprach, das an dem Abbauweg beteiligt war und das nicht mit dem PDA oder der ELSD beobachtet werden konnte, 4-Methylcyclohexylamin war. In Beispiel 2 bezogen die Erfinder dieses zusätzliche Molekül in die Analyse ein und nahmen in dem Vergleich mit der herkömmlichen RRF-Technik eine detailliertere Abbauanalyse vor.
- Versuchsvorrichtung und -bedingungen
- Das Chromatographiesystem war ein Ultrahochdruckflüssigkeitschromatographiesystem, spezifisch ein System ACQUITY UPLC H-Class mit einer Pumpe (ACQUITY Quaternary Solvent Manager (QSM)), einem Injektor (ACQUITY Flow Through Needle (FTN) Autosampler) und einem Säulenmanager (ACQUITY Column Manager). Der Autosampler wurde mit einer 50-µL-Erweiterungsschlaufe konfiguriert. Die Dichtungswaschlösung war Wasser:Methanol (90:10), das Spüllösungsmittel war Methanol und das Nadelwaschlösungsmittel war 0,1%-ige (v/v) Ameisensäure in Wasser:Acetonitril (30:70). Die Detektion wurde mit einem Photodioden-Array-Detektor (ACQUITY UPLC PDA, einem Verdampfungslichtstreudetektor (ACQUITY UPLC ELSD) und einem Massendetektor (ACQUITY QDa) (Waters, Milford, MA, USA) durchgeführt. Der Eluensflussweg wurde von der Säule zu einem dreifachen statischen T-Stück (geteilte Strömung von 1:10), das in einer sekundären Pumpe (ACQUITY Isocratic Solvent Manager (ISM)) beherbergt war, gelotet. Die Leitung von der Säule zu dem T-Stück war 22,5 Zoll einer Leitung mit einem ID von 0,004 Zoll. In dem ersten Teilstrom wurde ein Teil des Flusses mit 16 Zoll einer Quarzglasleitung mit einem ID von 100 µm zu dem PDA und dann seriell zu dem ELS-Detektor mit 12 Zoll einer PEEK-Leitung mit einem ID von 0,004 Zoll umgeleitet. Der Fluss von dem isokratischen Lösungsmittelmanager wurde in den zweiten Splitter eingebracht und der letzte Teil des Flusses wurde mittels der Detektorsonde (250 mm) zu dem Massenspektrometer umgeleitet. Das Chromatographiedatensystem war Empower 3 FR3 (Waters, Milford, MA, USA). Der erzwungene Abbau („Forced Degradation“) wurde unter Verwendung eines Wasserbads (Isotemp), das von Fisher Scientific erworben wurde, durchgeführt.
- Die Trennung von Glimepirid und den verwandten Verbindungen B und C wurde auf einer Säule ACQUITY UPLC HSS T3 C18 von 2,1 mm × 50 mm und 1,8 µm (Waters Corporation) unter isokratischen Bedingungen erzielt. Die mobile Phase war 0,1%-ige (v/v) Ameisensäure in Wasser:Acetonitril (60:40) mit einer Flussrate von 0,8 mL/min. Die Säulentemperatur war 30 °C mit Vorerhitzung der mobilen Phase. Das Injektionsvolumen war 4 µL. Die PDA-Einstellungen beinhalteten eine Wellenlänge von 228 nm, eine Abtastrate von 20 Punkten pro Sekunde. Der ELSD wurde auf einen Gasdruck von 25 psi, der Zerstäuber in den Abkühlmodus, die Driftröhrentemperatur auf 55 °C und die Steigerung auf 100 mit einer Datenrate von 10 Punkten pro Sekunde eingestellt. Die Makeup-Pumpe wurde zur späteren Säulenzugabe von Lösungsmittel unter Verwendung des ISM mit einer Flussrate von 0,3 mL/min mit 0,1%-iger (v/v) Ameisensäure in Methanol verwendet. Der Massendetektor (ACQUITY QDa, Waters Corp., USA) nutzte positive Elektrospray-Ionisation (ESI+) mit einer auf 5 V eingestellten Cone-Spannung. Die Kapillarspannung war 1,4 kV und die Abtastrate war 5 Punkte pro Sekunde. Der gesammelte Massenbereich war 100–600 Da, wobei zusätzliche SIR-Kanäle (SIR = Single Ion Recording, Einzelionenmessung) gleichzeitig für die folgenden m/z gesammelt wurden = 114,1 Da, 374,6 Da, 432,2 Da und 513,7 Da. Die SIR-Kanäle wurden mit einer Cone-Spannung von 5 V gemessen.
- Proben- und Standardherstellung
- Standards wurden für eine herkömmliche RRF-Bestimmung mittels LC-PDA hergestellt. Eine Lösung von Glimepirid und verwandte Verunreinigungen wurden jeweils einzeln in einer Konzentration von 0,4 mg/mL in Methanol hergestellt. Alle Proben wurden für 10 Minuten beschallt, um ein vollständiges Lösen sicherzustellen. Dann wurden Arbeitsstandards durch Verdünnen der Stammlösung mit Wasser:Methanol (25:75) hergestellt. Für Glimepirid (API) wurden einzelne Kalibrierstandards in dreifacher Ausführung zu 0,05 % (w/w), 0,1 %, 0,3 %, 0,4 %, 0,5 %, 1 %, 10 %, 20 %, 40 % und 100 % der Probenkonzentration von 0,250 mg/mL hergestellt. Standards der verwandten Verbindung B und der verwandten Verbindung C wurden einzeln in dreifacher Ausführung zu 0,05 %, 0,1 %, 0,3 %, 0,4 %, 0,5 %, 1 %, 10 %, 20 % und 40 % von 0,250 mg/mL hergestellt. Die benannte Reinheit von Glimepirid war 99,6 % und die jeder verwandten Verbindung war 100 %.
- Arbeitsstandardlösungen wurden ebenfalls für eine herkömmliche RRF-Bestimmung mittels LC-PDA-ELSD hergestellt. Spezifisch wurden Arbeitsstandardlösungen hergestellt, die alle drei Verbindungen, Glimepirid und die verwandten Verbindungen (B und C), enthielten. Arbeitsstandards wurden in dreifacher Ausführung zu 10 % (w/w), 20 %, 30, % und 50 % von 0,250 mg/mL mit einer Endverdünnungsmittelzusammensetzung von Wasser:Methanol von 25:75 hergestellt.
- Zusätzlich dazu Standards von 4-Methylcyclohexylamin zur Quantifizierung mittels Massenspektrometrie. Spezifisch wurde eine Lösung von 4-Methylcyclohexylamin in einer Konzentration von 0,4 mg/mL in Wasser:Methanol (25:75) hergestellt. Dann wurden Arbeitsstandards durch Verdünnen der Stammlösung mit Wasser:Methanol (25:75) hergestellt. Einzelne Kalibrierstandards wurden in dreifacher Ausführung zu 0,04 % (w/w), 0,2 %, 0,5 %, 1 %, 2 % und 5 % der Probenkonzentration von 0,250 mg/mL hergestellt. Die benannte Reinheit von 4-Methylcyclohexylamin war 99,7 %.
- Ergebnisse und Erörterung
- Ein relativer Reaktionsfaktor, wie durch die USP definiert, ist die Reaktion der Verunreinigung zu der des API. Wie oben angemerkt, verwendet das herkömmliche Verfahren zum Bestimmen des RRF unter Verwendung von LC-UV das Verhältnis der Steigung der Kalibrierkurve der Verunreinigung zu der des API. In diesen Beurteilungen müssen die Konzentrationsbereiche in dem Versuch berücksichtigt werden. In Force-Degradation-Studien besteht das Ziel der Analyse beispielsweise darin, einen Abbau von 10–15 % zu erzielen. Während einer Analyse sollte auch die Detektionsgrenze, die für die Verunreinigungen erforderlich ist, berücksichtigt werden. Typische Verunreinigungsmeldeschwellen sind oftmals 0,05 % des aktiven Pharmazeutikums, die Kalibrierkurven wurden folglich über den Bereich von 0,05 % bis 20 % für die Verunreinigungen und 0,05 % bis 100 % für den pharmazeutischen Wirkstoff getestet.
- Die Kalibrierkurven für Glimepirid und verwandte Verunreinigungen erfüllten Korrelationskoeffizientenwerte (R2) von mehr als 0,995 bei einer angewendeten Gewichtung von 1/x. Das Signal-Rausch-Verhältnis („signal to noise“, S/N) für den niedrigsten Kalibrierpunkt war mehr als 10, was einen Betriebsbereich für die RRF-Bestimmungen nahe legt, der höher als die Quantifizierungsgrenze ist, wie durch die USP definiert.
- Für die PDA-Daten wurden die RRF-Faktoren auf der Basis der Reaktion der Verunreinigung in Bezug auf die der Hauptkomponente unter Verwendung des Verhältnisses der Steigung der Kalibrierkurve für die Verunreinigung zu der des pharmazeutischen Wirkstoffs (siehe die obige Gleichung 2) berechnet.
- Die Kalibrierkurvensteigungen aus den PDA-Daten und die resultierenden berechneten RRF-Werte unter Verwendung herkömmlicher Verfahren erscheinen in der Tabelle im Folgenden. PDA-Kalibrierkurve für Glimepirid und verwandte Verbindungen
Verbindung n Anpassung Gewichtung y Steigung (b) R2 RRF Glimepirid 10 Linear 1/x 3530 16088 0,999391 1,00 Verwandte 9 Linear 1/x –110 21421 0,999167 1,32 Verbindung B Verwandte 9 Linear 1/x 1550 18534 0,999315 1,15 Verbindung C - Um die Durchführbarkeit des Orthogonaldetektionsansatzes zu beurteilen, wurden Arbeitsstandards, die Glimepirid und die verwandten Verbindungen enthielten, auf einem UV-ELSD-System, das seriell verbunden war, laufen gelassen. Die Kalibrierstandards wurden in dreifacher Ausführung zu 10 % (w/w), 20 %, 30 %, 40 % und 50 % des Assaywerts (0,250 mg/mL) hergestellt. Höhere Werte wurden für die Analyse mittels einer UV-ELSD-Kombination aufgrund der Empfindlichkeitseinschränkungen der ELS-Detektion als beim beschriebenen vorhergehenden Verfahren verwendet.
- Die resultierenden Kalibrierkurven zeigten eine nichtlineare Reaktion in der ELSD (
15A ), wobei die Reaktion in dem Verdampfungslichtstreudetektor auf der nichtlinearen Funktion basierte:A = a × mb (10), logA = blogm + loga (11). - Die Log-Log-Transformation der Ergebnisse ermöglicht, eine lineare Kalibrierkurve aufzutragen (
15B ). Unter Anwendung dieses Prinzips auf den zuvor beschriebenen Versuch erzielen die Log-Log-Ergebnisse eine lineare Kalibrierkurve (Tabelle 2). Die linearen Kalibrierkurven für Glimepirid und verwandte Verunreinigungen erfüllten Korrelationskoeffizientenwerte (R2) von mehr als 0,995. Die Kalibrierkurvensteigungen von der Log-Log-Anpassung zu den ELSD-Daten für Glimepirid und die verwandten Verbindungen B und C erscheinen in der Tabelle im Folgenden. ELSD-Kalibrierkurve (Logarithmus-Logarithmus-Anpassung) für Glimepirid und verwandte VerbindungenVerbindung n Anpassung Gewichtung y-Achsen abschnitt (log a) Steigung (b) a R2 Glimepirid 5 Log-Log, linear Keine 2,33 1,69 213 0,996650 Verw. Verb. B 5 Log-Log, linear Keine 3,08 1,55 1202 0,998007 Verw. Verb. C 5 Log-Log, linear Keine 2,90 1,57 794 0,996128 - Die RRF wurden auch unter Verwendung von Orthogonaldetektionstechniken anstelle der Verwendung von Steigungen von Kalibrierkurven berechnet. Unter Verwendung der obigen Gleichung 6 und Daten von sowohl UV- (z. B. PDA) als auch ELSD-Detektion wurden RRF-Reaktionsverhältnisse für die Standards über die Konzentrationsbereiche (10–50 % (w/w)) erhalten. Die erhaltenen Werte sind in der Tabelle im Folgenden gezeigt. Mittels UV-ELSD bestimmte relative Reaktionsverhältnisse
Standardkonzentration (w/w) Probennummer RRF Verw. Verb. B RRF Verw. Verb. C 10 % 1 1,26 1,13 10 % 2 1,23 1,11 10 % 3 1,25 1,11 20 % 4 1,26 1,11 20 % 5 1,23 1,09 20 % 6 1,23 1,10 30 % 7 1,26 1,10 30 % 8 1,25 1,11 30 % 9 1,26 1,11 40 % 10 1,24 1,10 40 % 11 1,24 1,10 40 % 12 1,24 1,11 50 % 13 1,29 1,17 50 % 14 1,26 1,11 50 % 15 1,25 1,11 Mittelwert 1,25 1,11 Stand.-Abw. 0,017 0,018 % RSD 1,34 1,65 - Diese RRF-Werte wurden mit dem zuvor beschriebenen Verfahren unter Verwendung der Steigungen der Kalibrierkurven unter Verwendung von UV-Daten (z. B. PDA-Daten) verglichen, wobei die letzteren als Standard angesehen werden. Die mittleren RRF-Werte, die für die verwandte Verbindung B und die verwandte Verbindung C unter Verwendung der UV-ELSD-Detektion erhalten wurden, waren 1,25 bzw. 1,15. Diese Werte korrelieren recht gut mit den aus den UV-Daten (z. B. PDA-Daten) und dem herkömmlichen Verfahren zur Bestimmung eines RRF bestimmten, spezifisch 1,32 für die verwandte Verbindung B und 1,15 für die verwandte Verbindung C, was auf den Nutzen dieses Ansatzes hinweist.
- Um die Möglichkeit der Verwendung dieses RFF-Ansatzes mit einer abgebauten Arzneimittelsubstanz oder einem API weiter zu untersuchen, wurde eine Säurehydrolyse unter beschleunigten Bedingungen, spezifisch bei 80 °C vorgenommen. Das Ziel dieses Versuchs bestand darin, sowohl Verunreinigungen als auch API in ausreichenden Mengen zu produzieren, um alle Verbindungen durch sowohl die ELS- als auch die PDA-Detektionstechnik zu analysieren. Unter Verwendung der Gleichung 6 und der UV- und ELSD-Peakflächen wurden die RRF für sowohl die verwandte Verbindung B als auch die verwandte Verbindung C berechnet. Darüber hinaus wurden verschiedene Zeitpunkte analysiert, um die Auswirkung der Verunreinigungs-/API-Konzentration auf die Berechnungen zu beurteilen. Die Ergebnisse sind in der Tabelle im Folgenden gezeigt. Mittels LC-PDA-ELSD bestimmte relative Reaktionsfaktoren mit beschleunigtem Abbau der Arzneimittelsubstanz
Zeit (min) Replikate RRF Verw. Verb. B RRF Verw. Verb. C 30 3 0,13 0,42 60 3 0,79 1,30 90 3 1,48 2,34 120 3 1,89 2,09 - Zu 1 Stunde (
16 ) war der RRF für die verwandte Verbindung C mit dem vergleichbar, der unter Verwendung der Steigungen der Kalibrierkurven zu 1 Stunde erhalten wurde (1,30 gegenüber 1,11), während die Ergebnisse für die verwandte Verbindung B wesentlich niedriger waren (0,79 gegenüber 1,25). Bei Erhitzen für 90 min wurde jedoch eine höhere Konzentration der verwandten Verbindung B produziert und der berechnete RRF war mit dem vorherigen Verfahren vergleichbar (1,48 gegenüber 1,25). Die Ergebnisse weisen darauf hin, dass vergleichbare Mengen von sowohl dem API als auch der verwandten Verbindung für diesen Ansatz vorliegen müssen, um einen sinnvollen Wert zur Schätzung des RRF bereitzustellen. Während der Säurehydrolyse von Glimepirid war die verwandte Verbindung C das primäre Abbauprodukt, während die verwandte Verbindung B in niedrigeren Mengen gebildet wurde. Folglich wurde eine ausreichende Konzentration zur zuverlässigen Bestimmung des RRF unter Verwendung dieses Ansatzes für die verwandte Verbindung C früher in dem Abbauvorgang als für die verwandte Verbindung B erreicht. - Diese Ergebnisse demonstrierten die Fähigkeit des LC-PDA-ELS-Orthogonaldetektionsansatzes dazu, die RRF-Verhältnisse von Verunreinigungen zu schätzen, vorausgesetzt, dass die verwandte Verunreinigung in ausreichenden Mengen für eine zuverlässige Detektion in einer ELSD vorliegt. Während eines erzwungenen Abbaus („Forced Degradation“) einer Arzneimittelsubstanz oder eines Arzneimittelprodukts kann es jedoch schwierig sein, die Konzentration von sowohl dem API als auch den Verunreinigungen zur Quantifizierung in dem molar-/massenbasierten Detektor zu erzielen. Des Weiteren können sich nichtchromophore Spezies in einer Arzneimittelsubstanz oder einem Arzneimittelprodukt auf die Trennung und die Quantifizierung in einer ELS-Detektion auswirken und sollten berücksichtigt werden, wenn die Analyse an anderen pharmazeutischen Wirkstoffen durchgeführt wird. Zuletzt kann sich die Bildung von Teilchen mit sehr unterschiedlichen Größen auf die Beziehung des API und der verwandten Verunreinigungen auswirken. Spezifisch wirken sich die Größe(n) und die Form der Teilchen auf die Lichtstreumechanismen aus (Rayleigh-Debye, Mie und Refraktion-Reflexion). Folglich können die Teilchen mit sehr unterschiedlichen Größen keine vergleichbaren Reaktionen oder relative Reaktionen ergeben, die für diese Analysen erforderlich sind.
- Um die Auswirkung, die ein RRF auf die relative Quantifizierung von Verunreinigungen und Massenbilanzberechnungen hat, zu demonstrieren, wurde die Arzneimittelsubstanz Abbaubedingungen ausgesetzt. Über einen Zeitraum von 7 Tagen wurde die Arzneimittelsubstanz sauren, basischen und oxidativen Bedingungen ausgesetzt, mit den Zielen des Erzielens eines Abbaus von ungefähr 10 %, wie mittels UV quantifiziert. Die Proben wurden in 2-Tagesintervallen getestet und mittels UV-ELS und MS analysiert.
- Eine saure Hydrolyse von Glimepirid brachte zwei Verunreinigungspeaks, die verwandte Verbindung B und die verwandte Verbindung C, hervor, von denen festgestellt wurde, dass sie über den Zeitraum zunahmen, wobei 16,69 % Verunreinigungen zu 7 Tagen erzielt wurden.
17 zeigt ein UV-Chromatogramm und ein MS-Gesamtionenchromatogramm (MS-TIC) von einer Säurehydrolyse von Glimepirid zu 5 Tagen. Eine Bestätigung der Verunreinigungen wurde von der Massenspektrometrie bereitgestellt. Die Abbaubedingungen führte zur Bildung von Natriumaddukten in einer MS für die verwandten Verbindungen B und C sowie Glimepirid, wie in den detaillierten Spektren von Peaks in der MS-TIC in18 gezeigt. Der Verdampfungslichtstreudetektor zeigte außerdem das Vorliegen eines zusätzlichen Peaks, der unmittelbar vor der verwandten Verbindung B eluiert. Eine Auswertung des Massenspektrums zeigt eine m/z = 114,1 Da, was dem Nebenprodukt, 4-Methylcyclohexylamin, entspricht, das bei der Bildung sowohl der verwandten Verbindung B als auch der verwandten Verbindung C gebildet wird. - Unter oxidativen Bedingungen wurde ein ähnliches chromatographisches Profil in einer UV beobachtet wie das unter sauren Bedingungen beobachtete, zusätzliche Peaks wurden jedoch in dem Massenspektrum beobachtet.
19 beinhaltet beispielsweise Chromatogramme von einer Analyse einer Glimepirid-Arzneimittelsubstanz nach 5 Tagen Oxidation durch AIBN. Das UV-Chromatogramm (228 nm) zeigt das Vorliegen der verwandten Verbindung B (B) und der verwandten Verbindung C (C) sowie der Arzneimittelsubstanz, Glimepirid (API). Das MS-Gesamtionenchromatogramm (MS-TIC) zeigt das Vorliegen von drei zusätzlichen Peaks, die vor der verwandten Verbindung B eluieren. Das Massenspektrum für die ersten zwei partiell getrennten Peaks zeigt eine vorherrschende m/z von 114,1, was den cis- und trans-Isomeren des in der Abbaureaktion gebildeten Nebenprodukts oder 4-Methylcyclohexylamin entspricht. Der dritte Peak ist ein Produkt der AIBN-Oxidation (m/z 177,1)-*-, wie durch die Analyse der Kontrolle belegt. Einer der unbekannten Peaks, der in der AIBN-Kontrolle vorliegt (m/z = 177,2 Da), wurde dem Reagens zugeschrieben. Wie bei der sauren Hydrolyse von Glimepirid beobachtet, wurde auch das Nebenprodukt (m/z = 114,1 Da) beobachtet. Darüber hinaus brachte der Oxidationsabbau zwei isobare Peaks hervor, wie durch die QDa-Messung bestimmt, die zu denselben m/z-Werten führt. Der Standard für 4-Methylcyclohexylamin, eine Kombination des cis- und des trans-Isomers, offenbarte ebenfalls das Vorliegen von zwei Peaks. Somit wies ein Vergleichen des Massenspektrums des Standards darauf hin, dass unter oxidativen Bedingungen beide Isomere des Nebenprodukts gebildet werden, unter sauren Hydrolysebedingungen jedoch nur ein einziges Isomer gebildet wird. - Unter basischen Hydrolysebedingungen baute die Arzneimittelsubstanz über einen Zeitraum von 1 Tag mit > 10 % Abbau schnell ab.
20 zeigt Chromatogramme von der Glimepirid-Arzneimittelsubstanz nach einer Basenhydrolyse für einen Tag. Im Gegensatz zu den zuvor beschriebenen Analysen wurden viele kleinere Verunreinigungspeaks beobachtet. Ein Peak, der der verwandten Verbindung B entsprach, lag bei einer Peakfläche von 1,83 % vor, die verwandte Verbindung C wurde jedoch auf der Basis der Retentionszeit und der erwarteten Massenspektrendaten nicht beobachtet. Zusätzliche vorherrschende Abbaupeaks wurden vorgefunden, wie in der Tabelle im Folgenden gezeigt. In einer Basenhydrolyse vorgefundene VerunreinigungspeaksVerbindung (Nr.) Retentionszeit % Fläche Basen-m/z RRT 0,07(1) 0,34 0,58 138,1 Verwandte Verbindung B 0,49 1,83 374,4 RRT 0,144(2) 0,69 0,23 461,5 RRT 0,260(3) 1,24 0,71 420,4 RRT 0,327(4) 1,57 5,13 545,3 RRT 0,372(5) 1,77 0,10 543,5 RRT 0,49(6) 2,32 0,68 543,7 RRT 0,77(7) 3,67 3,09 527,5 - Zusammenfassend wurde unter sauren Hydrolysebedingungen die Bildung von zwei zusätzlichen Peaks mittels UV beobachtet. Von diesen Peaks wurde festgestellt, dass sie über den Zeitraum zunahmen, wobei Verunreinigungen von 9,72 % zu 5 Tagen erzielt wurden (siehe
17 ). Ein ähnliches Muster wurde für die oxidativen Abbaubedingungen beobachtet, ebenfalls mit Verunreinigungen von 8,53 % zu 5 Tagen (siehe19 ). Unter basischen Hydrolysebedingungen wurde eine höhere Anzahl von Peaks mittels UV beobachtet (siehe20 ). Darüber hinaus war die Abbaurate unter einer basischen Hydrolyse wesentlich schneller als die unter einer sauren Hydrolyse oder oxidativen Bedingungen beobachtete. Unter einer basischen Hydrolyse wurde die Zielmenge an Verunreinigungen zu 1 Tag erzielt, wobei mehr als 10 % Verunreinigungen gebildet wurden. - Massenbilanzberechnungen wurden unter Verwendung der im Versuch bestimmten RRF für saure, oxidative und basische Abbaubedingungen durchgeführt. Die Ergebnisse zeigen die Auswirkung der Rückgewinnung mit und ohne Verwendung relativer Reaktionsfaktoren. Sowohl die prozentuale Verunreinigung als auch die Rückgewinnung wurden auf ähnliche Weise beeinflusst, die Auswirkungen für die prozentuale Verunreinigung waren jedoch insofern größer, dass die Verunreinigungsberichterstattungs-, -identifizierungs- und -qualifizierungsschwellen von nur 0,05 % beeinflusst werden können.
- Obwohl der Sollabbau ungefähr 10 % war, sind Werte für alle Zeitpunkte gezeigt. Alle Rückgewinnungen sind geringfügig höher, ohne dass in Bezug auf den Unterschied der relativen Reaktion der Verunreinigungen und des API justiert wird. Dies wird angesichts dessen, dass die Reaktion von sowohl der verwandten Verbindung B als auch der verwandten Verbindung C höher als für Glimepirid war.
- Unter sauren Hydrolysebedingungen nahm der Prozentanteil von Verunreinigungen mit der Zeit mit einem Abbau von 19,55 % zu Tagen zu, wie in der Tabelle im Folgenden gezeigt. Analyse des Abbaus einer Arzneimittelsubstanz unter sauren Hydrolysebedingungen
Zeit (Tage) % Verunreinigungen % Verunreinigungen mit RRF Rückgewinnung (%) Rückgewinnung (%) (mit RRF) 1 2,35 1,95 98,97 98,68 3 6,13 5,14 101,07 100,14 5 9,67 8,15 99,50 97,98 7 19,55 16,69 103,56 100,12 - Durch Berücksichtigung des Unterschieds des Reaktionsfaktors nahmen sowohl die prozentuale Verunreinigung als auch die Rückgewinnung mit dem Unterschied zu 7 Tagen um ungefähr 3 % ab. Anders ausgedrückt, die Verunreinigungen waren ohne Berücksichtigung des RRF um 3 % überrepräsentiert.
- Berechnungen für die Massenbilanz und die prozentuale Verunreinigung für die Oxidationsstudien ergaben ähnliche Ergebnisse zu den mit einer sauren Hydrolyse beobachteten, wenn auch eine geringfügig niedrigere Abbaurate im Vergleich zu der den sauren Hydrolysebedingungen, wie in der Tabelle im Folgenden gezeigt. Analyse des Abbaus einer Arzneimittelsubstanz unter oxidativen Bedingungen
Zeit (Tage) % Verunreinigungen % Verunreinigungen mit RRF Rückgewinnung (%) Rückgewinnung (%) (mit RRF) 1 1,75 1,45 101,07 100,88 3 4,83 4,05 101,75 101,05 5 7,45 6,28 98,30 97,21 7 9,95 8,42 98,39 96,88 - Über den Zeitraum von 7 Tagen nahm die Menge an Verunreinigungen zu 7 Tagen auf 9,95 % zu und eine Abnahme der Rückgewinnungen wurde zudem beobachtet. Die Verwendung von RRF führte zu niedrigeren Rückgewinnungen und prozentualen Verunreinigungen als die Annahme eines RRF von 1, wobei der Unterschied bis zu 1,5 % zu Tagen betrug.
- Basische Hydrolysebedingungen führten zu der höchsten Anzahl von Verunreinigungen sowie der höchsten Abbaurate. Der RRF für die verwandte Verbindung B und die verwandte Verbindung C hatte eine minimale Auswirkung auf die Berechnungen der prozentualen Verunreinigung und der Rückgewinnung, da der Anteil dieser Verunreinigungen zur Gesamtmenge gering war. Zu 1 Tag wurde ein Unterschied von 0,5 % beobachtet, wenn die relative Reaktion berücksichtigt wurde, wie in der Tabelle im Folgenden gezeigt. Analyse des Abbaus einer Arzneimittelsubstanz unter basischen Hydrolysebedingungen
Zeit (Tage % Verunreinigungen % Verunreinigungen mit RRF Rückgewinnung (%) Rückgewinnung (%) (mit RRF) 1 12,45 11,99 99,21 98,81 3 33,45 31,59 88,60 86,30 5 54,68 51,92 82,00 77,38 - Die Auswirkung des RRF nahm zu 5 Tagen auf 3 % zu, zu diesem Punkt war jedoch mehr als 50 % Abbau aufgetreten. Angesichts der hohen Anzahl an Verunreinigungen war die Auswirkung des Anwendens des RRF für lediglich die verwandte Verbindung B wesentlich geringer als für die saure und die oxidative Bedingung beobachtet. Ein umfangreicher Abbau führte zu wesentlich geringeren Rückgewinnungen, wahrscheinlich aufgrund der hohen Anzahl an Verunreinigungen und des RRF jeder Verbindung, sowie Produkten mit keinem Chromophor oder mittels UV nicht messbaren Produkten.
- Eine Massendetektion wurde zur Bestätigung des Abbauwegs eingesetzt und zum Abgleich von Massenbilanzunterschieden. Während der Bildung von sowohl der verwandten Verbindung B als auch der verwandten Verbindung C gibt es einen Verlust von 4-Methylcyclohexylamin (siehe
14 ). Da 4-Methylcyclohexylamin kein Chromophor enthält, ermöglichte das Vorhandensein eines Massendetektors nicht nur die Identifizierung, sondern auch die Quantifizierung des Nebenprodukts. - Die Quantifizierung von 4-Methylcyclohexylamin wurde unter Nutzung von Standards, die aus im Handel erhältlichen Reagenzien hergestellt wurden, erzielt. Arbeitsstandards wurden hergestellt, um den Bereich von 0,04 bis 10 % (0,1 bis 25 µg/mL) abzudecken. Ein Einzelionenmesskanal, der die Reaktion für m/z = 114,1 Da misst, wurde zur Quantifizierung verwendet. Der Arbeitsstandard lag als ein Gemisch von sowohl dem geometrischen cis- als auch dem geometrischen trans-Isomer vor. Diese Isomere wurden chromatographisch zum Teil getrennt, folglich wurde die Summe der Isomere für die Kalibrierkurve verwendet. Die Kalibrierkurve war quadratisch und wurde unter Verwendung einer Log-Log-Anpassung über den gewünschten Quantifizierungsbereich mit den in der folgenden Tabelle aufgeführten Parametern in eine lineare Beziehung umgewandelt. Kalibrierkurvendaten für 4-Methylcyclohexylamin mittels MS
Komponente n Anpassung Gewichtung y- Achsenabschnitt Steigung R2 Summe von cis- und trans- Isomeren 5 Log-Log, linear Keine 6,77 0,835 0,997563 - Unter Verwendung der Kalibrierkurve wurde 4-Methylcyclohexylamin in den sauren und oxidativen Abbaureaktionen über den Zeitraum von 5 Tagen quantifiziert. Die Ergebnisse, die in der Tabelle im Folgenden aufgeführt sind, zeigten eine Zunahme des Spiegels des Nebenprodukts unter Verunreinigungsbildung. Quantifizierung von 4-Methylcyclohexylamin (4-MeCHA) unter sauren Abbaubedingungen
Zeit (Tage) % Verunreinigungen (mit RRF) 4-MeCHA (µg/mL) (%) Rückgewinnung (%) (mit RRF) Rückgewinnung (%) + 4-MeCHA 1 1,95 0,36 (0,14 %) 98,68 98,82 3 5,14 0,98 (0,39%) 100,14 100,53 5 8,15 1,74 (0,70%) 97,98 98,68 - Wie in der obigen Tabelle gezeigt, nahm die Menge an 4-Methylcyclohexylamin, die unter sauren Hydrolysebedingungen gebildet wurde, über den Zeitraum zu. Die zuvor berechneten Rückgewinnungen nahmen von 0,2–1,1 % zu. Die Quantifizierung des in der Reaktion gebildeten Nebenprodukts ermöglichte eine genauere Beurteilung der Massenbilanz der Reaktion.
- Ähnliche Ergebnisse wurden unter oxidativen Bedingungen erhalten, im Gegensatz zu den sauren Bedingungen wurden jedoch beide Isomere von 4-Methylcyclohexylamin gebildet (siehe
18 ). Da Glimepirid ein trans-Isomer ist, legen die Ergebnisse eine Reihe von Möglichkeiten nahe. Die Arzneimittelsubstanz kann beispielsweise außerdem das cis-Isomer von Glimepirid oder etwas Verwandtes enthalten. Alternativ dazu kann es während der Oxidation durch den Radikalbildner AIBN eine Umwandlung von 4-Methylcyclohexylamin von dem trans-Isomer in das cis-Isomer geben. Ungeachtet dessen scheint die saure Hydrolysereaktion stereoselektiv zu sein, während die Oxidation durch den Radikalbildner dies nicht ist. - Fazit
- Die Verwendung von Multidetektion, einschließlich UV, ELSD und MS, ermöglichte zusätzliche Techniken für sowohl RRF-Bestimmungen als auch Massenbilanzberechnungen. Die Bestimmung eines RRF unter Verwendung eines UV-Detektors in Kombination mit einem massenempfindlichen Detektor, wie ELS, ermöglichte das Schätzen des RRF-Werts in einer einzigen Analyse, ohne dass eine Analyse von separaten Kalibrierproben erforderlich ist. Die Korrelation mit Werten, die unter Verwendung einer herkömmlichen Kalibrierkurventechnik erzielt wurden, ist am höchsten, wenn Verbindungen mit einer ähnlichen Reaktion in einer ELS in gleichen Mengen vorliegen, was zum Teil in der begrenzten Empfindlichkeit des ELS-Detektors begründet liegt.
- Massenbilanzbestimmungen können unter Verwendung von Multidetektionstechniken genauer sein. Das Anwenden von RRF-Werten auf erzwungene Abbauvorgänge wirkt sich auf die Massenbilanz aus, insbesondere für jene Verunreinigungen, die entweder in höheren Mengen (> 0,5 %) vorliegen oder einen deutlich unterschiedlichen Reaktionsfaktor in einer UV (< 0,8 oder > 1,2) aufweisen. Darüber hinaus kann eine MS dazu verwendet werden, nichtchromophore Verbindungen für ein umfassenderes Verständnis der Massenbilanz in erzwungenen Abbauvorgängen zu quantifizieren oder zu beurteilen.
- Äquivalente
- Beim Beschreiben von Ausführungsformen der Erfindung wird der Deutlichkeit halber eine spezifische Terminologie verwendet. Zum Zwecke der Beschreibung soll jeder spezifische Begriff mindestens alle technischen und funktionalen Äquivalente beinhalten, die auf ähnliche Weise arbeiten, um einen ähnlichen Zweck zu erfüllen. Darüber hinaus können in einigen Fällen, in denen eine bestimmte Ausführungsform der Erfindung mehrere Systemelemente oder Verfahrensschritte beinhaltet, diese Elemente oder Schritte durch ein einziges Element oder einen einzigen Schritt ersetzt werden; ebenso kann ein einziges Element oder ein einziger Schritt durch mehrere Elemente oder Schritte ersetzt werden, die demselben Zweck dienen. Obwohl diese Erfindung unter Bezugnahme auf bestimmte Ausführungsformen davon gezeigt und beschrieben wurde, werden Fachmänner darüber hinaus verstehen, dass verschiedene Substitutionen und Veränderungen der Form und der Einzelheiten daran vorgenommen werden können, ohne vom Schutzumfang der Erfindung abzuweichen; noch weiter liegen auch andere Gesichtspunkte, Funktionen und Vorteile innerhalb des Schutzumfangs der Erfindung. Noch weiter sind die im Abschnitt „Hintergrund“ identifizierten Komponenten und Verfahren wesentlich für diese Offenbarung und können in Verbindung mit oder ersetzt durch Komponenten und Verfahren, die an anderer Stelle in der Offenbarung beschrieben sind, innerhalb des Schutzumfangs der Erfindung verwendet werden.
Claims (23)
- Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren, das Folgendes umfasst: Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Probe, die eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält; Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Probe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; Durchführen einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten Probe, um eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; und Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung.
- Verfahren zur Bestimmung relativer Reaktionsfaktoren, das Folgendes umfasst: Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer ersten Probe, die eine Referenzverbindung enthält; Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten ersten Probe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung zu bestimmen; Durchführen einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten ersten Probe, um eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung zu bestimmen; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer zweiten Probe, die eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält; Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten zweiten Probe, um eine molarbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; Durchführen einer massenbasierten Detektion an der getrennten zweiten Probe, um eine massenbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; und Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und des Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung.
- Verfahren zur Bestimmung relativer Konzentrationen einer Referenzverbindung und einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen in einer Testprobe, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen unter Verwendung des Verfahrens nach Anspruch 1 oder 2; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung der Testprobe; Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Testprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine zusätzliche Verbindung auf die molarbasierte Peakfläche für die zusätzliche Verbindung, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe zu erhalten; und Bestimmen der relativen Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe auf der Basis der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung und der korrigierten molarbasierten Peakfläche für jede zusätzliche Verbindung.
- Verfahren zur Bestimmung von Konzentrationen einer Referenzverbindung und einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen in einer Testprobe, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen unter Verwendung des Verfahrens nach Anspruch 1 oder 2; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung der Testprobe; Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Testprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine zusätzliche Verbindung auf die molarbasierte Peakfläche für die zusätzliche Verbindung, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede zusätzliche Verbindung in der Testprobe zu erhalten; Bestimmen der relativen Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe auf der Basis der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung und der korrigierten molarbasierten Peakfläche für jede zusätzliche Verbindung; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Referenzprobe, die eine bekannte Konzentration der Referenzverbindung enthält; Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der Referenzprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung in der Referenzprobe zu bestimmen; und Vergleichen der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung in der Referenzprobe mit der molarbasierten Peakfläche der Referenzverbindung in der Testprobe, um Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe aus den bestimmten relativen Konzentrationen der Referenzverbindung und der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen in der Testprobe zu erhalten.
- Verfahren zur Durchführung einer Massenbilanz für eine abgebaute Probe, die einen pharmazeutischen Wirkstoff (API) und eine oder mehrere Verunreinigungen enthält, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren Verunreinigungen unter Verwendung des Verfahrens nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Referenzverbindung der API ist und die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen die eine oder die mehreren Verunreinigungen sind; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Ausgangsprobe, die nicht Abbaubedingungen unterzogen wurde; Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Ausgangsprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der Ausgangsprobe zu bestimmen; Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen auf die molarbasierte Peakfläche für die Verunreinigung, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede Verunreinigung in der Ausgangsprobe zu erhalten; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer abgebauten Testprobe, wobei die abgebaute Testprobe eine Testprobe, die den API enthält, ist, die zuvor Abbaubedingungen unterzogen wurde; Durchführen einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten abgebauten Testprobe, um eine molarbasierte Peakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen zu bestimmen; Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine Verunreinigung auf die molarbasierte Peakfläche für die Verunreinigung, um eine korrigierte molarbasierte Peakfläche für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der abgebauten Testprobe zu erhalten; und Vergleichen der Summe der korrigierten molarbasierten Peakflächen der einen oder der mehreren Verunreinigungen und der molarbasierten Peakfläche des API für die abgebaute Probe mit der Summe der korrigierten molarbasierten Peakflächen der einen oder der mehreren Verunreinigungen und der molarbasierten Peakfläche des API für die Ausgangsprobe, um eine prozentuale Rückgewinnung zu erhalten.
- Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei der relative Reaktionsfaktor für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen (RRFzus_Verb) von dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (Molare_Flächezus_Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (log(Massen-Flächezus_Verb)) dividiert durch das Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (Molare_FlächeRef-Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (log(Massen-FlächeRef-Verb)) abhängt.
- Verfahren nach Anspruch 6, wobei der relative Reaktionsfaktor für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen durch die folgende Gleichung beschrieben wird:
- Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Detektion auf der Basis der molaren Konzentration eine Absorptionsspektroskopie im ultravioletten-sichtbaren Spektralbereich ist.
- Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Detektion auf der Basis der Massenkonzentration eine Verdampfunglichtstreudetektion (ELSD) ist.
- Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die flüssigkeitschromatographische Trennung eine Hochdruckflüssigkeitschromatographie beinhaltet.
- Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die chromatographische Trennung eine Ultrahochdruckflüssigkeitschromatographie (UHPLC) beinhaltet.
- Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Referenzverbindung ein pharmazeutischer Wirkstoff (API) ist und die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen eine oder mehrere Verunreinigungen sind.
- Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die chromatographische Trennung isokratisch ist.
- Verfahren zur Bestimmung relativer Konzentrationen eines pharmazeutischen Wirkstoffs (API) und einer oder mehrerer Verunreinigungen in einer Testprobe, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren verwandten Verunreinigungen unter Verwendung des Verfahrens nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Referenzverbindung der API ist, die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen die eine oder die mehreren Verunreinigungen sind, die Detektion auf der Basis der molaren Konzentration eine extinktionsbasierte Detektion ist und die Detektion auf der Basis der Massenkonzentration eine Verdampfungslichtstreudetektion (ELSD) ist; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung der Testprobe; Durchführen einer Extinktionsdetektion an der getrennten Testprobe, um eine Extinktionspeakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren verwandten Verunreinigungen zu bestimmen; Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine Verunreinigung auf die Extinktionspeakfläche für die Verunreinigung, um eine korrigierte Extinktionspeakfläche für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der Testprobe zu erhalten; und Bestimmen der relativen Konzentrationen des API und der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der Testprobe auf der Basis des Extinktionspeaks des API und der korrigierten Extinktionspeakfläche für jede Verunreinigung.
- Verfahren zur Bestimmung von Konzentrationen eines pharmazeutischen Wirkstoffs (API) und einer oder mehrerer verwandter Verunreinigungen in einer Testprobe, wobei das Verfahren Folgendes umfasst: Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren für die eine oder die mehreren verwandten Verunreinigungen unter Verwendung des Verfahrens nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Referenzverbindung der API ist, die eine oder die mehreren zusätzlichen Verbindungen die eine oder die mehreren Verunreinigungen sind, die Detektion auf der Basis der molaren Konzentration eine extinktionsbasierte Detektion ist und die Detektion auf der Basis der Massenkonzentration eine Verdampfungslichtstreudetektion (ELSD) ist; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung der Testprobe; Durchführen einer Extinktionsdetektion an der getrennten Testprobe, um eine Extinktionspeakfläche für den API und für jede der einen oder der mehreren verwandten Verunreinigungen zu bestimmen; Anwenden des relativen Reaktionsfaktors für eine Verunreinigung auf die Extinktionspeakfläche für die Verunreinigung, um eine korrigierte Extinktionspeakfläche für jede der einen oder der mehreren Verunreinigungen in der Testprobe zu erhalten; Durchführen einer flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Referenzprobe, die eine bekannte Konzentration des API enthält; Durchführen einer Extinktionsdetektion an der Referenzprobe, um eine Extinktionspeakfläche für den API in der Referenzprobe zu bestimmen; und Vergleichen der Extinktionspeakfläche des API in der Referenzprobe mit der Extinktionspeakfläche des API in der Testprobe, um Konzentrationen des API und der einen oder der mehreren verwandten Verunreinigungen in der Testprobe aus den bestimmten relativen Konzentrationen des API und der einen oder der mehreren verwandten Verunreinigungen in der Testprobe zu erhalten.
- Nichtflüchtiges computerlesbares Medium, das computerausführbare Anweisungen zum Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren speichert, wobei die Anweisungen Anweisungen zu Folgendem beinhalten: Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für eine Referenzverbindung und für jede einer oder mehrerer zusätzlicher Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten Probe; Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten Probe; und Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen, wobei der relative Reaktionsfaktor für eine zusätzliche Verbindung auf dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung basiert.
- Nichtflüchtiges computerlesbares Medium, das computerausführbare Anweisungen zum Bestimmen relativer Reaktionsfaktoren speichert, wobei die Anweisungen Anweisungen zu Folgendem beinhalten: Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für eine Referenzverbindung aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten ersten Probe; Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten ersten Probe; Bestimmen einer molarbasierten Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der molaren Konzentration einer chromatographisch getrennten zweiten Probe; Bestimmen einer massenbasierten Peakfläche für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen aus einer Detektion auf der Basis der Massenkonzentration der chromatographisch getrennten zweiten Probe und Bestimmen eines relativen Reaktionsfaktors (RRF) für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen, wobei der relative Reaktionsfaktor für eine zusätzliche Verbindung auf dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung und dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung basiert.
- Nichtflüchtiges computerlesbares Medium nach Anspruch 16 oder 17, wobei der relative Reaktionsfaktor für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen (RRFzus_Verb) von dem Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (Molare_Flächezus_Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung (log(Massen-Flächezus_Verb)) dividiert durch das Verhältnis der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (Molare_FlächeRef-Verb) zu dem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung (log(Massen-FlächeRef-Verb)) abhängt.
- Nichtflüchtiges computerlesbares Medium nach Anspruch 18, wobei der relative Reaktionsfaktor für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen durch die folgende Gleichung beschrieben wird:
- System, das Folgendes umfasst: eine Flüssigkeitschromatographiesäule, die dazu konfiguriert ist, eine flüssigkeitschromatographischen Trennung einer Probe, die eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält, durchzuführen; einen Detektor auf der Basis der molaren Konzentration; einen Detektor auf der Basis der Massenkonzentration; ein Detektionsmodul auf der Basis der molaren Konzentration, das von einem Prozessor in einer Verarbeitungsvorrichtung ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Probe unter Verwendung des Detektors auf der Basis der molaren Konzentration durchzuführen, um eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; ein Detektionsmodul auf der Basis der Massenkonzentration, das von dem Prozessor ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten Probe unter Verwendung des Detektors auf der Basis der Massenkonzentration durchzuführen, um eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; und ein Modul für relative Reaktionsfaktoren, das von dem Prozessor ausgeführt wird und zu Folgendem konfiguriert ist: Errechnen eines ersten Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu einem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung; Errechnen eines zweiten Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu einem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung und Errechnen eines relativen Reaktionsfaktors für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des ersten Verhältnisses und des zweiten Verhältnisses.
- System nach Anspruch 20, das weiterhin Folgendes umfasst: ein Massenbilanzmodul, das von dem Prozessor ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Massenbilanz in der Probe auf der Basis der molarbasierten Peakflächen in der Probe für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen und der relativen Reaktionsfaktoren für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen.
- System, das Folgendes umfasst: ein Chromatographiesteuermodul, das von einem oder mehreren Prozessoren in einer Verarbeitungsvorrichtung ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine flüssigkeitschromatographische Trennung einer Probe, die eine Referenzverbindung und eine oder mehrere zusätzliche Verbindungen enthält, unter Verwendung einer Flüssigkeitschromatographiesäule zu steuern; ein Detektionsmodul auf der Basis der molaren Konzentration, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Detektion auf der Basis der molaren Konzentration an der getrennten Probe unter Verwendung eines Detektors auf der Basis der molaren Konzentration zu steuern, und dazu konfiguriert ist, eine molarbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; ein Detektionsmodul auf der Basis der Massenkonzentration, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Detektion auf der Basis der Massenkonzentration an der getrennten Probe unter Verwendung eines Detektors auf der Basis der Massenkonzentration zu steuern, und dazu konfiguriert ist, eine massenbasierte Peakfläche für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen; und ein Modul für relative Reaktionsfaktoren, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird und zu Folgendem konfiguriert ist: Errechnen eines ersten Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung zu einem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die zusätzliche Verbindung; Errechnen eines zweiten Verhältnisses der molarbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung zu einem Logarithmus der massenbasierten Peakfläche für die Referenzverbindung und Errechnen eines relativen Reaktionsfaktors für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen auf der Basis des ersten Verhältnisses und des zweiten Verhältnisses.
- System nach Anspruch 22, das weiterhin Folgendes umfasst: ein Massenbilanzmodul, das von dem einen oder den mehreren Prozessoren ausgeführt wird und dazu konfiguriert ist, eine Massenbilanz in der Probe auf der Basis der molarbasierten Peakflächen in der Probe für die Referenzverbindung und für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen und der relativen Reaktionsfaktoren für jede der einen oder der mehreren zusätzlichen Verbindungen zu bestimmen.
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